CN1278791A - 制造氮杂环烷基烷酰基假四肽的方法 - Google Patents

制造氮杂环烷基烷酰基假四肽的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及制备式Ⅰ的假四肽或其盐或前药的方法,其中(Ⅱ)是任选地氮保护的氮杂杂环基;(a)是单键或双键;q是1－5;B是烷基,环烷基,环烷基烷基,烷基环烷基,烷基环烷基烷基,芳基,芳烷基,烷基芳基,或烷基芳烷基;Q2是H或羧酸保护基;J是－H,烷基,环烷基,环烷基烷基,烷基环烷基,烷基环烷基烷基,芳基,取代的芳基,芳烷基或取代的芳烷基;L是OR1,或NR1R2,其中R1和R2独立地是－H,烷基,环烷基,环烷基烷基,烷基环烷基,烷基环烷基烷基,芳基,芳烷基,烷基芳基,或烷基芳烷基;和p是1或2,该方法包括两种二肽或假肽的偶联。

Description

制备氮杂环烷基烷酰基假四肽的方法
发明领域
本发明涉及会聚制备氮杂环烷酰基假四肽的方法，包括二肽与假二肽偶联。本发明也涉及中间体和制备用于制备假四肽的中间体的方法。
发明背景
氮杂环烷基烷酰基假四肽，例如N-[N-[N-(4-哌啶-4基)丁酰基)-N-乙基甘氨酰基]-(L)-天冬氨酰基]-(L)-β-环己基-丙氨酸酰胺，具有抗血栓形成活性，包括在哺乳动物体内抑制血小板聚集和血栓形成，并可用于预防和治疗与诸如心肌梗塞，中风，外周动脉疾病和弥散性血管内血凝固的病症有关的血栓形成。参见PCT专利申请公开WO95／10295。
这些假四肽迄今已经通过顺序合成从C-端氨基酸用标准的固相或溶液相肽合成工艺制备。但是，氨基酸的顺序偶联对于批量药物的生产不太理想，因为其强制生产为线性程序。
因此，需要其它制备假四肽的途径。这类途径应大大增加生产多面性和效率。会聚的途径通过在一个合成子上而不是整个假四肽上实施特定的化学提供假四肽的专门修饰，并将提供同时制备许多假四肽类似物。
发明提要
本发明涉及制备式Ⅰ的假四肽或其盐或前药的方法其中是任选地N-保护的氮杂杂环基；…是单键或双键；q是1-5；B是烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；Q2是H或羧酸保护基；J是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基或取代的芳烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；和p是1或2，该方法包括(a)下式的氮杂杂环基假二肽或其盐，其中K是OH或酰基活化基团，与下式的羧酸取代的二肽或其盐偶联，(b)任选地地除去氮保护基或羧酸保护基，制备假四肽，和(c)任选地将假四肽转化为盐或前药。
发明详述
术语定义
除非另外说明，如上面所用的并贯穿整个说明书的下列术语将被理解具有如下意义：
“氮杂杂环基”指4-8员饱和，不饱和，或芳香碳环系，其中一个不是部分的碳原子被氮原子代替。当氮原子通过两个单键被掺入环系时，它任选地地被氮保护基P1取代。代表性的氮杂杂环基包括哌啶基，N-叔丁氧羰基哌啶基，N-苄氧羰基哌啶基，吡咯烷基，N-叔丁氧羰基吡咯烷基，N-苄氧羰基吡咯烷基，吡咯基，吡啶基(pyridinyl)等等。优选的氮杂杂环基有吡啶基(pyridyl)，N-叔丁氧羰基哌啶-4-基和N-苄氧羰基哌啶-4-基。
“烷基”指饱和脂肪烃基，可以是直链或支链的，在链中具有约1至约20个碳原子。支链指低级烷基如甲基，乙基或丙基连接在直链烷基上。优选的直链或支链烷基有“低级烷基”基团，它们是具有1至约10个碳原子的烷基。更优选的低级烷基具有1至约6个碳原子。
“环烷基”指具有一个或多个环并具有约3至约10个碳原子的饱和碳环基团。优选的环烷基包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基，和十氢萘基。
“环烷基烷基”指被环烷基取代的烷基。优选的环烷基烷基包括环戊基甲基，环己基甲基，环己基乙基，十氢萘-1-基甲基和十氢萘-2-基甲基。
“烷基环烷基”指被烷基取代的环烷基。烷基环烷基的例子包括1-，2-，3-，或4-甲基或乙基环己基。
“烷基环烷基烷基”指被烷基环烷基取代的烷基。烷基环烷基的例子包括1-，2-，3-，或4-甲基或乙基环己基甲基或1-，2-，3-，或4-甲基或乙基环己基乙基。
“芳基”指苯基或萘基。
“取代的芳基”指被一个或多个芳基取代基取代的苯基或萘基，这些取代基可以相同或不同，其中“芳基取代基”包括烷基，链烯基，炔基，芳基，芳烷基，羟基，烷氧基，芳氧基，芳烷氧基，羟基烷基，酰基，甲酰基，羧基，链烯酰基，芳酰基，卤素，硝基，三卤甲基，氰基，烷氧羰基，芳氧羰基，芳烷氧羰基，酰基氨基，芳酰氨基，氨基甲酰基，烷基氨基甲酰基，二烷基氨基甲酰基，芳基氨基甲酰基，芳烷基氨基甲酰基，烷基磺酰基，烷基亚磺酰基，芳基磺酰基，芳基亚磺酰基，芳烷基磺酰基，芳烷基亚磺酰基，或-NRaRb其中Ra和Rb独立地是氢，烷基，芳基，或芳烷基。优选的芳基取代基是烷基，羟基，烷氧基，卤素和三卤甲基。
“芳烷基”指被芳基取代的烷基。优选的芳烷基包括苄基，萘-1-基甲基，萘-2-基甲基，和苯乙基。
“取代的芳烷基”指在芳基部分被一个或多个芳基取代基取代的芳烷基。
“醇”指被一个或多个羟基取代的1至约10个碳原子的如本文定义的烷基。术语“低级醇”指被单个羟基取代的1至约4个碳原子的醇。代表性的低级醇包括甲醇，乙醇，2-丙醇，1-丁醇，等等。“甘醇”指被两个或多个羟基取代的烷基。代表性的甘醇包括乙二醇，丙二醇，等等。
术语“醚”指式R-O-R’的化合物，其中R和R’是低级烷基。R和R’可以通过一个或多个亚甲基基团原子或通过另外的氧原子连接。代表性的醚包括二乙醚，甲基叔丁基醚，四氢呋喃，二噁烷，等等。
“极性非质子性”指不含有羟基但具有相当高偶极矩的溶剂。代表性的极性非质子性溶剂包括乙腈，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亚砜(DMSO)，1，1-二甲氧基乙烷(DME)，六甲基磷酰三胺(HMPA)，等等。
“醇盐”指式M-OH的碱，其中M是选自钠，钙，锂和钾的碱金属。
“碳酸盐”指式M2CO3的碱，其中M选自镁，钠，钙，锂和钾。
“碳酸氢盐”指式MHCO3的碱，其中M选自钠，钙，锂和钾。
“天然氨基酸”指在羧基的α-位具有氨基的羧酸，即式H2N-CHR-CO2H的化合物，其中R是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基，取代的芳烷基，或其中Q如本文定义的-CH2CO2Q。优选的天然氨基酸是其中R是环己基甲基的氨基酸。优选的氨基酸在α-碳位具有L立体化学。
“肽”和“多肽”指其中单体是通过酰胺键连接在一起的天然或非天然氨基酸残基的聚合物。“肽骨架”指连接氨基残基的系列酰胺键。
“氨基酸残基”指掺入本发明肽中的单个氨基酸单位。
“假肽”指一个或多个非天然氨基酸单体被掺入肽骨架中的肽。代表性的非氨基酸单体包括1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸和4-吡啶丁酸。
“非天然氨基酸”指在非羧基的α-位具有氨基的羧酸。本文优选的非天然氨基酸包括下式化合物其中
Figure 9881098300202
是氮杂杂环基。代表性的优选非天然氨基酸包括4-哌啶丁酸，3-(4-哌啶基亚甲基)丙酸和4-吡啶丁酸。
“N-保护基”和“氮保护基”指本专业已知用于保护氨基防止在合成工艺中发生不需要的反应并被选择性脱除的易脱除基团。N-保护基用于在合成工艺中保护基团使其不发生不需要的反应在本专业是已知的，许多这类保护基是已知的，参见，例如，T．H．Greene and P．G．M．Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2nd Edition，JohnWiley&Sons，New York(1991)，引作本文参考。优选的N-保护基有酰基，包括甲酰基，乙酰基，氯代乙酰基，三氯乙酰基，o-硝基苯基乙酰基，o-硝基苯氧基乙酰基，三氟乙酰基，乙酰乙酰基，4-氯丁酰基，异丁酰基，o-硝基肉桂酰基，吡啶甲酰基，酰基异硫氰酸酯，氨基己酰基，苯甲酰基等等，酰氧基包括甲氧羰基，9-芴基甲氧羰基，2，2，2-三氟乙氧羰基，2-三甲基甲硅烷基乙氧羰基，乙烯氧羰基，烯丙氧羰基，叔丁氧羰基(BOC)，1，1-二甲基丙炔氧羰基，苄氧羰基(CBZ)，对硝基苄氧羰基，2，4-二氯苄氧羰基，烯丙氧羰基(Alloc)，等等。
“酸不稳定的N-保护基”和“酸不稳定的氮保护基”指容易通过用酸处理脱除而对其它试剂保持相对稳定的如上定义的N-保护基。优选的酸不稳定N-保护基是叔丁氧羰基(BOC)。
“氢化不稳定N-保护基”和“氢不稳定氮保护基”指容易通过氢化脱除，而对其它试剂保持相对稳定的如上定义的N-保护基。优选的氢化不稳定N-保护基是苄氧羰基(CBZ)。
“金属不稳定氮保护基”指容易通过金属脱除的如上定义的氮保护基。优选的金属不稳定氮保护基是烯丙基，它通过用钯(O)处理脱除。
“N-保护试剂”指用于将N-保护基引入分子实体的试剂。这类保护基一般通过将要被保护的亲核氮原子从N-保护试剂置换离去基而引入。代表性的N-保护试剂包括酰基和芳基卤化物包括乙酰氯和苯甲酰氯，等等；酰基和芳基酐包括乙酸酐，三氟乙酸酐和苯甲酸酐，等等；甲酸酯包括氯甲酸苄基酯；和碳酸酯如重碳酸二叔丁基酯和碳酸苄基-N-丁二酰亚胺基酯。
“羧酸保护基”和“酸保护基”指本专业已知用于保护羧酸基(-CO2H)防止在合成工艺中发生不需要的反应并被选择性脱除的易脱除基团。羧酸保护基的用途在本专业是已知的，许多这类保护基是已知的，参见，例如，T．H．Greene and P．G．M．Wuts，Protective Groupsin Organic Synthesis，2nd Edition，John Wiley&Sons，New York(1991)，引作本文参考。羧酸保护基的例子包括酯如甲氧基甲基，甲硫基甲基，四氢吡喃基，苄氧基甲基，取代和未取代的苯甲酰甲基，2，2，2-三氯乙基，叔丁基，肉桂基，取代或未取代的苄基，三甲基甲硅烷基，烯丙基，等等，和酰胺和酰肼包括N，N-二甲基，7-硝基吲哚基，酰肼，N-苯基酰肼，等等。特别优选的羧酸保护基是叔丁基和苄基。
“氢化不稳定的羧酸保护基”和“氢化不稳定的酸保护基”指容易通过氢化脱除而对其它试剂保持相对稳定的如上定义的酸保护基。优选的氢化不稳定酸保护基是苄基。
“酸不稳定的羧酸保护基”和“酸不稳定的酸保护基”指容易通过用酸处理脱除而对其它试剂保持相对稳定的如上定义的酸保护基。优选的酸不稳定保护基是叔丁基。
“金属不稳定羧酸保护基”指容易通过用金属处理脱除的如上定义的羧酸保护基。优选的金属不稳定羧酸保护基是苯甲酰甲基和烯丙基，它通过用Zn或Pd(O)处理脱除。
“酰基活化基”指当该基团取代羧酸的羟基时，使羰基更容易被亲核进攻，从而促进羟基被亲核试剂置换的基团。代表性的酰基活化基团包括卤素(即酰卤)；羧酸与羟基苯并三唑，N-羟基丁二酰亚胺，五氟苯酚，对硝基苯酚等等的酯；不对称酸酐；例如通过羧酸与氯甲酸异丙基酯，氯甲酸乙酯，氯甲酸异丁基酯等等反应制备的不对称酸酐；N-羧酸酐；由羧酸与碳二亚胺如二环己基-，二异丙基，和N，N-二甲基丙基乙基碳二亚胺反应产生的产物；和由羧酸与(苯并三唑-1-基氧基)三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐，(苯并三唑-1-基氧基)三-(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(tetramethyluronium)四氟硼酸盐，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(tetramethyluronium)六氟磷酸盐和diphenylphosphorazidate反应产生的衍生物。
本文用于与假四肽，假二肽和二肽关联的“盐”包括酸和碱加成盐。
当假四肽，假二肽和二肽用碱性部分取代时，任选地地形成酸加成盐，并可以是更适用的形式。可以用于制备酸加成盐的酸优选地包括当与游离碱结合时产生药用盐的酸，即，其阴离子在盐的药物剂型中对患者无毒，游离碱固有的有利作用不被阴离子的副作用破坏。虽然所说的碱性化合物的药用盐是优选的，但所有的酸加成盐都可以用作游离碱形式的来源，即使特定的盐本身仅被需要用作中间体产物，例如，当该盐形成仅用于纯化，和鉴定，或当其用作通过例子交换工艺制备药用盐的中间体时。本发明范围的药用盐是从下列酸衍生的：无机酸如盐酸，硫酸，磷酸和氨基磺酸；和有机酸如乙酸，柠檬酸，乳酸，酒石酸，丙二酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，对甲苯磺酸，环己基氨基磺酸，奎尼酸，等等。相应的酸加成盐包括下列：氢卤化物，例如盐酸盐和氢溴酸盐，硫酸盐，磷酸盐，硝酸盐，氨基磺酸盐，乙酸盐，三氟乙酸盐，柠檬酸盐，乳酸盐，酒石酸盐，丙二酸盐，草酸盐，水杨酸盐，丙酸盐，丁二酸盐，富马酸盐，马来酸盐，亚甲基-双-β-羟基萘甲酸盐，2，5-二羟基苯甲酸盐，甲磺酸盐，羟基乙磺酸盐和二-甲苯酰基酒石酸盐甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐，环己基氨基磺酸盐和奎尼酸盐。
根据本发明另一特征，假四肽，假二肽或二肽的酸加成盐通过应用或适应已知方法，使游离碱与适当的酸反应而制备。例如，本发明肽的酸加成盐既可以通过将游离碱溶于含有适当的酸的水溶液或水-醇溶液，或其它合适的含水溶剂混合物，并通过蒸发溶液而分离盐来制备，又可以通过使游离碱和酸在有机溶剂中反应，在该情况下，盐被直接分离出来，或者可以通过浓缩溶液而获得。
假四肽，假二肽或二肽可以通过应用或适应已知方法，从盐再生。例如假四肽，假二肽或二肽可以通过用碱，例如碳酸氢钠水溶液或氨水溶液处理从其酸加成盐再生。
当假四肽，假二肽或二肽被酸性部分取代时，可以形成碱加成盐，并可以是更便于使用的形式。可以用于制备碱加成盐的碱优选地包括当与游离酸结合时产生药用盐的碱，即，其阳离子在盐的药物剂型中对患者无毒，游离酸固有的有利作用不被阳离子的副作用破坏。药用盐，包括例如碱金属和碱土金属盐或胺盐，在本发明范围内是从下列碱衍生的：氢化钠，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化钙，氢氧化铝，氢氧化锂，氢氧化镁，氢氧化锌，氨，三甲胺，三乙胺，乙二胺，n-甲基-葡糖胺，赖氨酸，精氨酸，鸟氨酸，胆碱，N，N’-二苄基乙二胺，氯代普鲁卡因，二乙醇胺，普鲁卡因，n-苄基苯乙基胺，二乙胺，二环己基胺，哌嗪，三(羟甲基)氨基甲烷，氢氧化四甲基铵，等等。
假四肽，假二肽或二肽的金属盐可以通过使所选定金属的氢化物，氢氧化物，碳酸盐或类似的反应活性化合物在含水溶剂或有机溶剂中与假四肽，假二肽或二肽的游离酸形式接触而获得。所用的含水溶剂可以是水或者是水与有机溶剂，优选醇如甲醇或乙醇，酮如丙酮，脂族醚如四氢呋喃，或酯如乙酸乙酯的混合物。这类反应一般在室温进行，但是，如果需要，也可以在加热或冷却下进行。
胺盐可以通过使胺在含水溶剂或有机溶剂中与假四肽，假二肽或二肽的游离酸形式接触而获得。合适的含水溶剂包括水或水与醇如甲醇或乙醇，醚如四氢呋喃，腈类如乙腈，或酮如丙酮。氨基酸盐也可以类似地制备。
假四肽，假二肽或二肽可以通过应用或适应已知方法，例如通过用酸，例如盐酸处理从其碱加成盐再生。
假四肽，假二肽或二肽的盐也可以用于纯化假四肽，假二肽或二肽，例如通过本专业已知的技术利用盐与母体肽，副产物和／或原料之间的溶解度不同而实现。
“药用酯”指在体内水解的酯，并包括在人体内易于裂解而产生母体氮杂环烷基烷酰基假四肽或其盐的酯。合适的酯基包括，例如，从药用脂肪羧酸，尤其是烷酸，链烯酸，环烷酸和烷二酸衍生的酯，其中各个烷基或链烯基部分最好具有不多于6个碳原子。具体的酯包括甲酸酯，乙酸酯，丙酸酯，丁酸酯，丙烯酸酯和乙基丁二酸酯。
“药用前药”指在合理的医学判断范围内适合在患者体内医用，并且没有毒性，刺激性，过敏反应，等等的肽，并且对于其用途有效，包括本发明肽的药用酯，以及可能的话，两性离子形式。术语“前药”指在体内例如通过在血液中水解迅速转化产生母体肽的肽。根据本发明的药用前药在T．Higuchi and V．Stella，Prodrug as NovelDelivery Systems，Vol．14 of the A．C．S．Symposium Series，andin Edward B．Roche，ed．，Bioreversible Carriers in Drugs Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中描述，两篇文献都引作本文参考。
假四肽，假二肽或二肽除了在肽骨架中的手性中心之外，可以含有不对称中心。这些不对称中心可以独立地为R或S构型。对本专业技术人员显而易见的是，某些式Ⅰ的肽可以存在几何异构。几何异构体包括具有链烯基部分的顺式和反式型的本发明的肽。本发明包括单个几何异构体和立体异构体和其混合物的制备。
这类异构体可以通过应用或适应已知方法，例如层析技术和重结晶技术，从其混合物分离出来，或者例如通过应用或适应本文所述的方法，从其中间体的适当异构体分开制备。优选的方案
用本发明方法制备的优选的假四肽是式Ⅱ化合物
Figure 9881098300251
其中P1是氮保护基；B是烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基；Q2是H或羧酸保护基P2；J是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，或烷基环烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；m是3；而n是3或4。
更优选的用本发明方法制备的假四肽是这样的式Ⅱ化合物：其中B是烷基；J是烷基，环烷基或环烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，或烷基环烷基烷基；m是3；n是3或4；而p是1。
还更优选的用本发明方法制备的假四肽是式Ⅲ化合物其中P1是氮保护基；B是烷基；Q2是H或羧酸保护基P2；J是烷基，环烷基，或环烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，或烷基环烷基烷基。
最优选的根据本发明制备的化合物是这样的式Ⅲ化合物：其中B是烷基；J是环烷基烷基；L是NR1R2，其中R1和R2独立地是H或烷基。
另一方面，本发明涉及其中Q2是羧酸保护基的方法。
另一方面，本发明涉及其中P1是苄氧羰基而Q2是苄基的方法。
另一方面，本发明涉及其中P1是苄氧羰基而Q2是H的方法。
另一方面，本发明涉及其中P1是苄氧羰基，Q2是苄基，而L是NR1R2的方法。
另一方面，本发明涉及其中P1是苄氧羰基，Q2是H，而L是NR1R2的方法。
另一方面，本发明涉及其中氮杂杂环基假二肽的盐与羧酸取代的二肽的盐偶联的方法。
另一方面，本发明涉及其中氮杂杂环基假二肽的碱加成盐与羧酸二肽的酸加成盐偶联的方法。
另一方面，本发明涉及其中氮杂杂环基假二肽的二环己基胺盐与羧酸二肽的三氟乙酸盐偶联的方法。
另一方面，本发明涉及如下方法，该方法包括(a)下式的氮杂杂环基假二肽
Figure 9881098300271
或其碱加成盐，其中P1是氮保护基而B是烷基，与下式的羧酸取代的二肽或其酸加成盐偶联，其中Q2是H或羧酸保护基；J是烷基，环烷基，或环烷基烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基或芳烷基，制备下式的假四肽(b)任选地地除去氮保护基或羧酸保护基，和(c)任选地将假四肽转化为其盐或前药。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基而Q2是苄基。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基而Q2是H。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基，Q2是苄基；B是乙基；J是环己基甲基；而L是NH2。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基，Q2是H；B是乙基；J是环己基甲基；而L是NH2。
另一方面，本发明涉及制备下式的环己基甲基取代的二肽的方法其中Q2是H或羧酸保护基，Q3是H或氮保护基，该方法包括(a)还原下式的苯甲基取代的肽和(b)任选地地脱除氮保护基或羧酸保护基。
上述方法的另一方面，还原是通过催化氢化进行的。
上述方法的另一方面，催化氢化用铂催化剂进行。
上述方法的另一方面，铂催化剂是载于氧化铝上的氧化铂或铂。
另一方面，本发明涉及制备下式酰氨二肽的方法其中Q2是H或碱加成盐，或羧酸保护基，Q3是H或氮保护基，该方法包括使下式的肽酯酰胺化
Figure 9881098300291
其中R3是低级烷基。
上述方法的另一方面，酰胺化用醇中的氨进行。
上述方法的另一方面，醇是低级醇。
上述方法的另一方面，酰胺化用在低级醇-甘醇溶剂混合物中的氨进行。
上述方法的另一方面，低级醇-甘醇溶剂混合物包括甲醇和乙二醇。
另一方面，本发明涉及制备下式保护的天冬甜素化合物的方法
Figure 9881098300292
其中Q2是H或羧酸保护基；Q3是氮保护基，R3是低级烷基；该方法包括将N-保护基引入下式的天冬甜素化合物
Figure 9881098300293
上述方法的另一方面，Q3是苄氧羰基或叔丁氧羰基。上述方法的另一方面，Q2是H。另一方面，本发明涉及制备下式酰氨基二肽的方法
Figure 9881098300301
其中Q3是氮保护基而Q2是H，该方法包括(a)将碱和N-保护试剂加入天冬甜素在溶剂中的溶液中，形成下式化合物的溶液
Figure 9881098300302
其中Q2是H或碱加成盐，和(b)将氨加入步骤(a)产生的溶液中。
上述方法的另一方面，Q3是叔丁氧羰基或苄氧羰基。
上述方法的另一方面，Q3是叔丁氧羰基。
上述方法的另一方面，溶剂是醇。
上述方法的另一方面，醇是低级醇或低级醇-甘醇混合物。
上述方法的另一方面，醇是甲醇或甲醇-乙二醇混合物。
另一方面，本发明涉及制备下式环己基甲基取代的二肽或其酸加成盐的方法
Figure 9881098300303
该方法包括(a)制备催化剂和下式苯甲基取代的二肽在溶剂中的混合物，
Figure 9881098300311
其中Q3是叔丁氧羰基，(b)用氢处理混合物，(c)从混合物中除去催化剂，和(d)将气体HCl通入混合物中。
上述方法的另一方面，溶剂是乙酸。
另一方面，本发明涉及制备下式氮杂杂环基取代的酸化合物的方法其中R4是H或低级烷基，而P1是氮保护基，该方法包括(a)使下式的2-吡啶基乙基-二-(低级烷基)丙二酸酯脱羧基
Figure 9881098300313
其中R5是低级烷基，制备下式的吡啶基酸：
Figure 9881098300314
(b)用氢在催化剂存在下氢化吡啶基酸，制备下式的哌啶酸
Figure 9881098300321
(c)任选地地除去催化剂；(d)使哌啶酸N-保护，制备下式N-保护的哌啶酸(e)使氮保护的哌啶酸与下式N-乙基甘氨酸化合物偶联，
Figure 9881098300323
制备氮杂杂环基取代的酸化合物；并(f)任选地使其中R4是低级烷基的氮杂杂环基取代的化合物脱酯化。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基，R4是H。
上述方法的另一方面，脱羧基通过将2-吡啶乙基-二-(低级烷基)丙二酸酯在酸水溶液中加热而进行。
上述方法的另一方面，酸水溶液是盐酸水溶液。
上述方法的另一方面，氢化在酸水溶液中进行。
上述方法的另一方面，酸水溶液是盐酸水溶液。
上述方法的另一方面，N-保护在碱水溶液中进行。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基。
上述方法的另一方面：(a)2-吡啶乙基-二-(低级烷基)丙二酸酯在酸水溶液中的溶液被加热，制备吡啶基酸在酸水溶液中的溶液；(b)将催化剂加入吡啶基酸的溶液中，混合物用氢处理，形成催化剂和哌啶酸的混合物；(c)从混合物中分出催化剂，制备哌啶酸的水溶液；和(d)将碱和N-保护试剂加入水溶液中制备N-保护的哌啶酸。
上述方法的另一方面，酸水溶液是盐酸水溶液。
上述方法的另一方面，R4是H。
上述方法的另一方面，P1是苄氧羰基。
另一方面，本发明涉及制备下式假四肽或其盐或前药的方法其中m是3；n是2-6；B是烷基；p是1或2；J是环己基甲基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，该方法包括(a)还原下式化合物
Figure 9881098300332
其中
Figure 9881098300341
是吡啶基或 其中m是3，P1是H或氮保护基；Q2是H或羧酸保护基；J是苯甲基；(b)任选地地脱除氮保护基或羧酸保护基；和(c)任选地地将假四肽转化为盐或前药。
上述方法的另一方面，还原通过催化氢化进行。
上述方法的另一方面，
Figure 9881098300343
是 其中m是3，P1是氮保护基；n是3；p是1；Q2是羧酸保护基。
上述方法的另一方面，P1是氢化不稳定的氮保护基；Q2是氢化不稳定的羧酸保护基。
上述方法的另一方面，催化还原同时还原并脱除P1和Q2。上述方法的另一方面，是吡啶基，Q2是羧酸保护基。
上述方法的另一方面，Q2是氢化不稳定的羧酸保护基。
上述方法的另一方面，催化还原同时还原并脱除Q2。
另一方面，本发明涉及下式的假四肽或其盐或前药
Figure 9881098300346
其中
是吡啶基或
Figure 9881098300352
其中m是3；P1是
H或氮保护基；n是2-6；B是烷基；p是1或2；Q2是H或羧酸保护基；J是苯甲基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基。
另一方面，本发明涉及如上定义的假四肽，其中
Figure 9881098300353
是 其中m是3，P1是氮保护基；n是3；p是1；Q2是羧酸保护基。
另一方面，本发明涉及如上定义的假四肽，其中P1是氢化不稳定的氮保护基，Q2是氢化不稳定的羧酸保护基。
另一方面，本发明涉及如上定义的假四肽，或其盐，
Figure 9881098300355
其中P1是H或氮保护基；B是烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基或烷基芳烷基；R4是H或低级烷基。
另一方面，本发明涉及如上定义的假四肽，其中P1是氮保护基；B是烷基且R4是H。
另一方面，本发明涉及如上定义的假四肽，P1是苄氧羰基而B是乙基。
本发明通过下列图解和证明性实施例举例说明，这些图解和实施例仅用于举例说明，而不限制本发明的范围。
下面所用的如下缩写将被理解为具有如下意义：BOC(叔丁氧羰基)，CBZ或Z(苄氧羰基)，Gly(甘氨酸)，Asp(天冬氨酸)，Obzl(苄氧基)，TFA(三氟乙酸)，Cha(β-环己基丙氨酸)，EtOAc(乙酸乙酯)，DMF(二甲基甲酰胺)，DCC(二环己基碳二亚胺)，HOBT(羟基苯并三唑)，TBTU((2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐)，DI(去离子水)，PNP(对硝基苯酚)，PFP(五氟苯酚)，DCU(二环己基脲)，NMM(N-甲基吗啉)和MTBE(甲基叔丁基醚)。
如图解1所示，本发明包括式Ⅳ的氮杂杂环基假四肽与式Ⅴ的羧酸取代的二肽偶联形成式Ⅰ的假四肽。在图解1中理解B，J，K，L，m，p，q和Q2如上定义。
在制备式Ⅰ的氮杂杂环基假四肽或其中间体时，需要或必需防止在天然或假氨基酸或肽中存在的化学活性取代基之间的交叉反应。这些取代基可以用标准保护基保护，随后根据需要通过已知方法脱除或保留，给出所需的产物或中间体(参见，例如，Green，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，Wiley，New York，1981)。选择性保护或脱保护也可以是必需或需要的，使存在的取代基转化或脱除，或使随后的反应给出最终产物。图解1
Figure 9881098300361
如上所述式Ⅳ的氮杂杂环基假四肽与式Ⅴ的羧酸取代的二肽偶联在诸如N-甲基吗啉，二异丙基乙胺或三乙胺的有机碱存在下完成。用于偶联反应的合适溶剂包括二氯甲烷，甲苯，N，N-二甲基甲酰胺，乙酸乙酯，乙腈，二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮和水，和其混合物。偶联时间范围为约30分钟至约24小时，取决于被偶联的二肽和假二肽，活化剂，溶剂和温度。偶联在约-10℃至约50℃，优选地在大约室温完成。式Ⅳ的羧酸部分优选地用适当的活化剂活化。代表性的活化剂包括在N-甲基哌啶存在下的氯甲酸异丙基酯，在1-羟基苯并三唑(HOBT)存在下的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，在三乙胺存在下的双(2-氧代-3-噁唑烷基)-膦酰氯(BOP-C1)，在二异丙基乙基胺存在下的(2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)，在N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)存在下的N-羟基丁二酰亚胺，等等。该活化优选地在约0℃至约10℃的温度下，以约5分钟至约5小时完成。
在其中酰基-活化的部分稳定的情况下，它可以在用于偶联反应之前被制备和分离。适于制备其中K是酰基活化基团的式Ⅳ的可分离的假二肽的酰基活化基团包括与羟基苯并三唑，N-羟基丁二酰亚胺，五氟苯酚，对硝基苯酚，不对称酸酐，酰卤等等的酯。
在上述其中K是OH的偶联反应中，式Ⅳ的氮杂杂环基假四肽可被用作游离羧酸或用作羧酸的碱加成盐。优选的碱加成盐包括与诸如二环己基胺和三乙胺的胺的盐，和与诸如钠和钾的金属的盐。与二环己基胺的碱加成盐是特别优选的。当碱加成盐被应用时，游离酸通过在偶联之前与合适的酸反应而就地释放。
同样地，二肽Ⅴ可以用作游离碱，酸加成盐，或碱加成盐。酸加成盐是优选的。合适的酸加成盐包括盐酸盐，氢溴酸盐，三氟乙酸盐，乙酸盐和甲苯磺酸盐。特别优选的酸加成盐包括盐酸盐和三氟乙酸盐。
使用酸和碱加成盐是特别有利的，因为这使得可以通过酸-碱萃取技术以及盐的重结晶纯化结构单元氮杂杂环基假二肽和羧酸取代的二肽Ⅳ和Ⅴ，从而不需要通过，例如，层析纯化，并使中间体可以以水溶液使用，从而使得分立的中间体不需要分离。
在偶联反应特别优选的方面，Q2是H。出人意料地发现，完全不保护侧链羧酸部分的偶联过程对于工艺具有几个优点。步骤总数减少了，因为消除了保护和脱保护反应，而且，未保护的酸使二肽Ⅴ和偶联产物Ⅰ可以通过如上所述的酸-碱萃取技术或碱加成盐的重结晶而分离和纯化。
其中环A不饱和的式Ⅰ的假四肽可以通过环双键的选择性还原，例如通过应氧化铂催化氢化而转化为饱和的衍生物。在假四肽Ⅰ中存在的任何氮保护基P1和羧酸保护基P2也可以如下所述除去。
式Ⅱ化合物优选地如图解2所示制备。在图解2中，m，n，B，K，J和L具有如上定义的值；P1是酸不稳定的N-保护基如叔丁氧羰基或氢化不稳定的N-保护基如苄氧羰基；而Q2是H，酸不稳定的羧酸保护基如叔丁基，碱不稳定的羧酸保护基如甲基或乙基，氢化不稳定的羧酸保护基如苄基或容易被金属如Zn或Pd(O)裂解的羧酸保护基，例如苯甲酰甲基。图解2
Figure 9881098300381
根据上述图解2，假二肽Ⅵ与二肽Ⅴ如图解1所述偶联。偶联产物Ⅱ通过在有机溶剂或有机溶剂的混合物，优选乙酸乙酯-庚烷中重结晶，或通过沉淀碱加成盐而纯化。优选的碱加成盐是二环己基胺盐。盐形成典型地在约室温至约75℃的温度进行。对于盐形成合适的溶剂包括醇类，醚类，酯类和极性非质子性溶剂，与或不与水混合。对于盐形成优选的溶剂体系是乙腈-水。
Ⅵ和Ⅴ偶联制备Ⅱ之后，氮保护基P1，和如果存在，羧酸保护基P2随后被脱除，或单步操作生产四肽或假肽Ⅶ。酸不稳定的保护基优选地应三氟乙酸脱除。氢化不稳定的保护基优选地通过在Pd／C上氢化而脱除。金属不稳定的保护基通过用Zn或Pd(O)处理而脱除。用于氢化反应的溶剂优选地是低级醇如甲醇，乙醇或丙醇，或醇-水混合物如乙醇-水或丙醇-水。假四肽Ⅶ通过用低级醇或低级醇-水混合物，优选甲醇或乙醇或甲醇和水或乙醇和水的混合物重结晶而纯化。
式Ⅲ的假四肽根据本发明方法的制备概括在图解3中。在图解3中，P1是氢化不稳定的N-保护基；Q2是H或氢化不稳定的羧酸保护基；B是烷基；J是烷基，环烷基，或环烷基烷基；而L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，或烷基环烷基烷基。图解3
根据上面的图解3，假二肽Ⅷ被活化并如上述图解1中与二肽Ⅸ偶联。优选的活化剂包括在二异丙基乙基胺存在下的(2-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)和在N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)存在下的N-羟基丁二酰亚胺。活化优选地在约0℃至约10℃进行约5分钟至约5小时完成。
在上面图解3中所述的偶联反应中，假二肽Ⅷ优选地用作碱加成盐。优选的碱加成盐包括与胺如二环己基胺和三乙胺的盐，和与金属如钠和钾的盐。与二环己基胺的碱加成盐是特别优选的。
二肽Ⅸ优选地用作酸加成盐。合适的酸加成盐包括盐酸盐，氢溴酸盐，三氟乙酸盐，乙酸盐和甲苯磺酸盐。特别优选的酸加成盐是盐酸盐和三氟乙酸盐。
偶联产物Ⅲ通过在有机溶剂或有机溶剂的混合物，优选乙酸乙酯-庚烷中重结晶，或通过沉淀碱加成盐而纯化。优选的碱加成盐是二环己基胺盐。盐形成典型地在约室温至约75℃的温度下进行。对于盐形成合适的溶剂包括与水混合或不与水混合的醇类，醚类，酯类和极性非质子性溶剂。对于盐形成优选的溶剂体系是乙腈-水。
在图解3的偶联反应特别优选的方面，Q2是H。
假二肽Ⅷ和二肽Ⅸ偶联制备Ⅲ之后，氢化不稳定的保护基P1和Q2通过在Pd／C上氢化单步操作被脱除。用于氢化反应的溶剂优选地是醇如甲醇或乙醇，或醇-水混合物如乙醇-水。四肽或假肽Ⅹ通过用低级醇或低级醇-水混合物，优选甲醇或乙醇或甲醇和水或乙醇和水的混合物重结晶而纯化。
其中P1是苄氧羰基而B是乙基的代表性的假二肽的制备概括在图解4中。应理解，在图解4中所述的合成方法容易延伸到其中P1和B分别不是苄氧羰基和乙基的式Ⅷ假二肽。图解4
Figure 9881098300411
根据上述图解4，2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯(Ⅺ，例如，通过丙二酸二乙酯与4-乙烯基吡啶缩合而制备)通过在酸水溶液中加热而脱羧基，给出4-(4-吡啶基)丁酸Ⅻ。然后，催化加氢还原该吡啶环给出4-(哌啶-4-基)丁酸Ⅷ。铂催化剂如Pt／C，氧化铂和Pt／氧化铝是优选的。Pt／氧化铝是特别优选的，因为该催化剂可以容易地再生。氢化在醇，醇水溶液或水中，在约大气压至约5bar的氢气压下，在室温至约70℃的温度下进行。如果氢气压力增加，可以使用更低的温度。然后，哌啶基N原子例如通过ⅩⅢ与碱水溶液和氯甲酸苄基酯或苄基-N-丁二酰亚胺基碳酸酯反应形成ⅩⅣ而保护。ⅩⅣ与N-乙基甘氨酸或N-乙基甘氨酸乙酯偶联，接着用醇盐水溶液皂化该酯产生Ⅷ。偶联优选地通过转化为酰氯而将ⅩⅣ的羧酸部分活化，接着在碱存在下加入N-乙基甘氨酸或N-乙基甘氨酸乙酯而完成。酸加成盐，优选N-乙基甘氨酸或N-乙基甘氨酸乙酯的三氟乙酸盐也可以被使用。合适的碱包括胺如二异丙基乙基胺或醇盐水溶液。
在Ⅷ特别优选的制备中，2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯被溶于酸水溶液，优选盐酸水溶液，并通过回流加热而脱羧基。然后将如上所述的催化剂加入产生的4-(4-吡啶基)丁酸ⅩⅢ溶液，混合物被催化氢化给出4-(4-哌啶基)丁酸ⅩⅣ水溶液。然后滤出催化剂，ⅩⅣ的酸性溶液用醇盐水溶液调成碱性，并如上所述引入苄氧羰基保护基。然后将1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸萃取到有机溶剂中，并与N-乙基甘氨酸如上所述缩合，给出Ⅷ。
上述方法是特别有用的，因为它避免了中间体的分离，仅包括单步纯化步骤。各个中间体以水溶液或有机溶液推进，从而降低了成本并增加了生产效率。
其中Q2是H，J是环己基甲基，L是NH2的式Ⅸ二肽的制备概括在图解5中。图解5中所述的方法的关键特征包括此前未披露的天冬甜素用酸不稳定或氢化不稳定保护基Q3保护，接着用氨温和地酰胺化，该过程保留立体化学。当反应在甲醇-乙二醇溶剂混合物中进行时，酰胺化反应出人意料地被加速。图解5
Figure 9881098300421
根据上述图解5，天冬甜素用酸不稳定N-保护基，优选叔丁氧羰基，或氢化不稳定保护基，优选苄氧羰基保护。叔丁氧羰基保护基通过天冬甜素在胺，优选三乙胺，醇盐，优选氢氧化锂，或碳酸盐存在下与二叔丁基重碳酸酯反应而引入。保护优选地在约室温至约50℃的温度下，在低级醇溶剂如甲醇或低级醇-甘醇溶剂混合物如甲醇-乙二醇中进行。
被保护的天冬甜素通过用在醇中的氨气处理被保护的天冬甜素溶液而酰胺化，给出ⅩⅥ。适合于酰胺化的醇包括低级醇，甘醇，或其混合物。优选的醇是甲醇，乙二醇和甲醇-乙二醇混合物。酰胺化优选地在室温至约65℃的温度下进行约6小时至约2天。被保护的天冬甜素可以在酰胺化之前分离和纯化，或优选地通过将氨气通入保护步骤的反应混合物而酰胺化。
然后通过将ⅩⅥ的苯环催化氢化给出ⅩⅦ。铂催化剂如氧化铂(Ⅳ)和Pt／氧化铝是优选的。Pt／氧化铝是特别优选的，因为该催化剂可以容易地再生。氢化在低级醇，优选丁醇，或C1-C10饱和有机酸，优选乙酸中进行。氢化在约2至约5bar的氢气压下，在约40℃至约80℃的温度下完成。如果氢气压力增加，可以使用更低的温度。
当Q3是氢化不稳定保护基时，脱保护给出Ⅸ同时还原上述苯环。当Q3是酸不稳定保护基如叔丁氧羰基时，脱保护优选地通过用气体氯化氢处理ⅩⅦ的溶液而完成。在特别优选的方面，酸不稳定保护基通过将气体氯化氢引入氢化步骤的反应混合物而脱除。
本专业技术人员很容易理解，本发明与本发明的目的非常适应，并达到了所述的以及本文固有的目标和优点。本文所述的化合物，组合物和方法以代表性的优选实施方案描述，或者是例举性的，不限制本发明的范围。实施例1制备N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺方法A：步骤1：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯
在机械搅拌下，0-5℃，往25．9g(66．4mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸在70ml二甲基甲酰胺的溶液中加入20．9g(65mmol)2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐，接着滴加17．6g(130mmol)二异丙基乙基胺。搅拌下，在0-5℃，将产生的均匀溶液倒入31．8g(65mmol)(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯三氟乙酸盐在30ml二甲基甲酰胺中的混合物中。加入二异丙基乙基胺得到中性至微碱性pH。将产生的混合物从冷浴上移走，并在23℃搅拌过夜。混合物用水稀释并用4批乙酸乙酯萃取。合并的乙酸乙酯萃取液用0．5N柠檬酸水溶液(3X)，盐水，饱和碳酸氢钠水溶液(3X)和盐水(2X)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩给出油状物，放置固化为浅褐色固体(50．97g，纯度90．9％)。将36g固体用乙酸乙酯／庚烷重结晶，给出标题化合物(24g，分析纯度95％)。MS(FAB)m／z 748，(M+Na)+，771。步骤2：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺
将步骤1制备的N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯溶于甲醇，加入10％Pd／C。混合物在氢气氛中于50psi振动18小时。将混合物滤过硅藻土垫，滤液真空蒸发给出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺。Ms(FAB)m／z 524(M+H)+．NMR(300 MHz，D2O)δ8．4(1H，d)．8．1(1H，d)，4．2(2H，q)，4．1(1H，s)，3．9(4H，q)，3．4(2H，q)．3．3(4H，d)，2．8-3．0(6H，m)，2．4．(2H，t)，2．2(1H，m)．1．8(4H，d)，1．4-1．7(7H，m)．0．7-1．3(10H，m)．方法B：步骤1：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺在约30℃，在2300升气体连续反应器中，往N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸二环己基胺(112．5kg)在甲苯(550kg)和水(570kg)的悬浮液中加入硫酸水溶液(210kg)。倾析后，将甲苯溶液用硫酸水溶液(210kg)和水(390kg)洗涤。将混合物倾析，有机相用水(390kg)洗并通过蒸馏干燥，直至水含量低于0．5％。将乙腈(220kg)和N-羟基丁二酰亚胺(27kg)加入甲苯溶液中。产生的悬浮液在氮气中冷却至约5℃，在1小时内加入二环己基碳二亚胺(45kg)的甲苯(35kg)溶液，反应混合物被再搅拌5-6小时。将(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺盐酸盐(75kg)和三乙胺(80kg)加入混合物中，继续搅拌2小时。反应混合物用水(370kg)稀释。将产生的浆状物过滤，滤饼用水(30kg)洗涤，合并的滤液被转移到2300升不锈钢反应器中。将乙酸乙酯(347kg)加入溶液中。倾析有机相后，水相用盐酸(515kg)酸化，并用乙酸乙酯(347kg)萃取。有机相用20％氯化铵(109kg)洗涤两次并真空浓缩。加入乙腈(1560kg)和水(45kg)，溶液被加热至约75℃，并在1小时内加入二环己基胺(35kg)。溶液用N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺作为晶种并在75℃保持1小时。然后将悬浮液在6小时内冷却至20℃，过滤。滤饼用乙腈(100kg)洗涤3次，减压下约40℃干燥给出标题化合物(125kg)二环己基胺盐。步骤2：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺
氢化器氮气充分清洗后，将N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺二环己基胺(124kg)和湿Pd／C(2kg，50％，湿度5％)在绝对乙醇(440kg)和纯化水(42kg)混合物中的悬浮液在约25℃，在2bar的氢气压下氢化1小时。氮气清洗后，滤出催化剂，并用绝对乙醇(65kg)和纯化水(5kg)的混合物洗涤。滤液被加热至约60℃，加入丙酮(425kg)，混合物用N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺(1．1kg)作为晶种。将悬浮液冷却至20℃，并在搅拌的过滤干燥器上过滤。滤饼用绝对乙醇(100kg)洗涤并在约40℃真空干燥，给出标题化合物(61kg)白色晶状固体。方法C步骤1：N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯
在1L烧瓶中，氮气中制备15．1g(0．06mol)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸在200ml二氯甲烷中的溶液并冷却至1℃。制备6．95ml(0．055mol)氯甲酸叔丁基酯在25ml二氯甲烷中的溶液，冷却至1℃，并在45分钟内滴加，保持反应混合物温度为1℃。将混合物在1℃搅拌3小时。在分开的800容器中，将20g(0．0498mol)L-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酰胺苯甲基酯一(盐酸盐)溶于200ml二氯甲烷，混合物通过滴加15．8ml(0．11mol)三乙胺处理，给出溶液，该溶液在1℃，1小时内被加入上述制备的酸酐中。将混合物在-2℃搅拌1小时，然后用250ml水，250ml饱和碳酸氢钠水溶液，250ml 0．14M盐酸水溶液洗涤，然后用250ml水洗涤。有机相用HPLC检测未反应原料的存在，重复洗涤循环，直至在相应的HPLC峰上没有进一步还原被观察到。有机层用硫酸镁干燥，过滤，然后真空浓缩，残余的油状物在真空放置以尽可能除去溶剂，给出23．5g(79．3％产率；96．8％分析纯度)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯。步骤2：N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺
往76mg N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯(0．126mmol)在1ml 9∶1异丙醇／水的溶液中加入6mg Pt2O-H2O(79-84％Pt)，然后加入1．6μl 1N盐酸水溶液。将混合物搅拌并在4bar和23℃暴露于氢气中5小时40分分钟，然后在60℃暴露1小时45分钟。将混合物过滤，滤液用HPLC分析，显示原料已100％消耗，给出N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺，和痕量N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺环己基甲基酯。方法D步骤1：N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯
往11．1g(28．4mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸在44ml乙酸乙酯的溶液中加入6．13g(28．7mmol)固体二环己基碳二亚胺，保持温度在25℃至33℃之间，在此期间形成沉淀(二环己基脲)。
在分开的容器中，将10．97g(27mmol)L-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯一(盐酸盐)在88ml乙酸乙酯中的悬浮液用4．2ml(29．7mmol)三乙胺处理。将混合物搅拌15分钟，同时溶解二肽和沉淀三乙胺盐酸盐。将该悬浮液加入上述制备的活化的N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸的悬浮液中，保持温度在27℃至29℃之间。将混合物搅拌1小时，在此期间悬浮液变稠。再加入100ml乙酸乙酯，混合物再搅拌1小时。分批加入60ml水，给出两个易搅拌的液相和悬浮的固体二环己基脲，将其过滤。滤液用60ml饱和碳酸氢钠水溶液，60ml 1N盐酸水溶液，和60ml饱和氯化钠水溶液洗涤，然后将有机相用硫酸钠干燥。将混合物过滤并真空浓缩，残余物在1mm Hg加热至50℃，给出17．6g N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯。将400mg样品装载在预洗过的(2N盐酸水溶液，水，然后1∶1水／乙醇)Dowex 50WX2(10g)，并通过用50ml 70／30乙醇／水洗脱而收集，然后装载在预洗过的(2N氢氧化钠，水，然后1∶1乙醇／水)Amberlyst A26(10g)上，用50ml 70∶30乙醇／水洗脱。将含产物的洗脱液真空浓缩，接着于50℃真空(5mmHg)进一步除去溶剂，给出350mg N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯。步骤2：N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺
在2ml干燥的蓝宝石NMR管中放入25mg(0．03mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯，12mg PtO2-H2O(79-84％Pt)和1ml 85／12 v／v乙酸／2N盐酸水溶液。混合物在4bar的氢气中于室温搅动5小时。然后将混合物用微孔Milex过滤器过滤。滤液的HPLC分析显示得到100％N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺。方法E
在100ml装有磁力搅拌器的烧瓶中放入1．12g(1．51mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯丙氨酸酰胺苯甲基酯，107mg 5％Pd／C，和10ml 9∶1 2-丙醇／水。将容器在40℃用氩气清洗，然后将混合物在剧烈搅拌下加热至50℃，将容器用氢气清洗几次。混合物在1bar氢气压力下于50℃搅拌5小时，然后冷却至室温，过滤，将滤液真空浓缩，给出713mg(90％产率)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺。将50mg的一份与50mgRh／Al2O3(Engelhard)和1ml乙酸一起放入玻璃安瓿中，混合物在4bar的氢气压力下于80℃搅拌17小时。HPLC分析显示100％面积的N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺。方法F
用上面方法A制备N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺，只是用N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亚甲基]丙基]甘氨酸代替N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酸。实施例2制备N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸步骤1：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯
搅拌下，于5℃往N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸(0．858g，1．5mmol)在4g二甲基甲酰胺中的悬浮液一次加入2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐(0．482g，1．5mmol)，然后将混合物在5℃搅拌3分钟。加入二异丙基乙基胺(0．482g，1．5mmol)，将产生的不均匀混合物经Pasteur移液管加入0．775g(1．5mmol)(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯一(盐酸盐)在4g二甲基甲酰胺中的溶液。再加入1g二甲基甲酰胺用于冲洗，再加入0．16g(0．5mmol)二异丙基乙基胺使混合物成微碱性。撤去冷浴并在室温下搅拌该悬浮液20小时。将产生的橙色，不均匀混合物分配在甲基叔丁基醚和水之间。水相用甲基叔丁基醚萃取。合并的有机相依次用1N盐酸，水，饱和碳酸氢钠水溶液，和盐水洗涤，硫酸镁干燥，真空浓缩给出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯(1．21g)琥珀色树脂。MS(离子喷雾)m／z839(M+H)+。步骤2：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸
将10．23g(12．2mmol)N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯在200ml 90％v／v 2-丙醇／水中的溶液倒入在500ml Parr Shaker瓶中的2g 5％Pd／C(Degussa型E101 NO／W，50％重量的水)上。将混合物在40-50 psi氢气中摇动过夜，然后过滤。将滤液浓缩给出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸(6．47g)玻璃状固体。MS(离子喷雾)m／z 525(M+H)+。实施例3制备N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸步骤1：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯
磁力搅拌下，于0-5℃往26．38g(44．4mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸在70ml二甲基甲酰胺中的溶液中加入15．7g(48．8mmol)2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐，接着滴加12．9g(99．6mmol)二异丙基乙基胺。将产生溶液在0-5℃倒入19g(48．4mmol)(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯一(盐酸盐)在20ml二甲基甲酰胺中的溶液。将产生的混合物从冷浴上移走，并在23℃放置过夜，给出一均匀的溶液。将混合物用水稀释，分出橙色油状物。加入甲基叔丁基醚和水，分出有机层，水层用甲基叔丁基醚萃取两次。合并的有机相用1N盐酸洗涤两次，1N氢氧化钠水溶液洗涤两次，和盐水洗涤两次，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩给出油状物，将其在高真空放置两天。油状物(33．4g)通过硅胶(80％乙酸乙酯-庚烷)纯化，给出N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯(27．8g，73％)。
步骤2：N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-哌啶基)丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸
将1．2g(1．4mmol)步骤1制备的N-[N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯甲氧基)羰基]-4-哌啶基]丁基]甘氨酰基-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯在12ml二噁烷中的溶液倒入在5ml水和3ml二噁烷中含有83mg 10％Pd／C的500ml Parr Shaker瓶中。反应混合物在45psi氢气压力下于室温(约23℃)搅拌过夜。将混合物在中等烧结的玻璃漏斗上滤过硅藻土垫，滤饼用二噁烷和水的混合物洗涤。将溶液冻干，产生的松散的白色固体溶于最少量的水，再次冻干给出标题化合物松散的白色固体(710mg，93％)。MS(FAB)m／z539，561(M+Na)+。实施例4制备N-乙基甘氨酸乙酯三氟乙酸盐步骤1：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸乙酯
在3℃，往86g(423mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸，21．4g(465mmol)乙醇和5．17g(42．3mmol)4-二甲基氨基吡啶在600ml二氯甲烷的溶液中加入47g(46．2mmol)三乙胺，接着分批加入89．1g(46．5mmol)3-N，N-二甲基氨基丙基乙基碳二亚胺盐酸盐。将搅拌的混合物温热至室温并搅拌过夜。反应混合物用水，饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸乙酯(88g)油状物。MS(FAB)232(M+H)+。步骤2：N-乙基甘氨酸乙酯三氟乙酸盐
搅拌下，于3℃将30．8g(113mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-N-乙基甘氨酸乙酯在50ml二氯甲烷中的溶液用200ml 1∶1(体积／体积)三氟乙酸∶二氯甲烷处理。将反应混合物搅拌2小时，同时温热至室温。将反应混合物真空浓缩，并将高流动性的油状物置于高真空，给出所需的化合物(55．2g)，不经进一步纯化直接使用。实施例5制备N-乙基甘氨酸
在5℃，氮气中，往250升玻璃连续反应器中的乙胺(25kg)和异丙醇(100kg)的混合物中于2-3小时内加入二羟乙酸(25kg)的丙醇(25kg)溶液，并将溶液在50mbar的氢气中用Pd／C(50％，湿度5％，2．5kg)氢化3小时。然后将反应混合物过滤，将滤液浓缩。将异丙醇(80kg)加入浆状物中，滤出固体，用异丙醇(7kg)洗涤两次，在约40℃真空干燥，给出N-乙基甘氨酸(21kg)白色晶状固体。实施例6制备N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸方法A步骤1：1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸
在25℃，20分钟内往100g(622mmol)丙二酸二乙酯中加入88g(272mmol)21％(W／W)乙醇钠的乙醇溶液，同时保持温度在23-25℃。将混合物搅拌10分钟，加入26．18g(248mmol)4-乙烯基吡啶。将混合物加热至85℃并搅拌3小时，然后在室温搅拌15小时。将混合物在44℃浓缩除去乙醇，产生的黄色油状物被置于高真空除去残余的溶剂。将油状物分配在甲基叔丁基醚和2．2N盐酸之间。水相用2N氢氧化钠水溶液调节至pH6。分开各层，有机相用盐水洗涤两次。然后将有机相用2．2N盐酸(3X)萃取。合并的含水萃取液被加热回流过夜。将产生的溶液(225ml，推测为248mmol)倒入在500ml Parr Shaker瓶中的2．5g氧化铂水合物上，在47-55psi的氢气中摇动过夜。将混合物过滤，滤液冷却至10℃，并用417ml氢氧化钠水溶液处理，同时保持反应温度低于10℃，使ph达到14(大约需要40分钟)。搅拌下往混合物中加入100ml四氢呋喃，接着在30分钟内加入在150ml四氢呋喃中的68g(273mmol)苄基-N-丁二酰亚胺基碳酸酯，碳酸保持温度为8℃。将混合物温热至室温并搅拌过夜。混合物用甲基叔丁基醚(3X)，乙酸乙酯，甲基叔丁基醚，乙酸乙酯，和甲基叔丁基醚萃取。将水相冷却至5℃，通过慢慢加入27ml浓盐酸酸化至pH1．9，并用甲基叔丁基醚(3X)萃取。从萃取液得到的合并的有机层用盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩给出1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸(42g，以乙烯基吡啶计算产率为55％)。MS(FAB)m／z 306。步骤2：N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸乙酯
在3℃，搅拌下，往40．7g(133．3mmol)1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸于667ml二氯甲烷中的溶液加入0．5ml二甲基甲酰胺，并滴加66．8ml 2M草酰氯的二氯甲烷溶液。在加入时，使反应混合物的温度保持在3-4℃，然后在该温度搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩。产生的蜂蜜色油状物和133．3mmol N-乙基甘氨酸乙酯三氟乙酸盐在3℃被溶于250ml二氯甲烷。往搅拌下的混合物中加入52．84g(408mmol)二异丙基乙基胺。搅拌2小时使混合物温热至室温，此时HPLC显示完全反应。将反应混合物真空浓缩，产生的油状物溶于甲基叔丁基醚。将甲基叔丁基醚溶液用水(2X)洗涤，合并的水层用甲基叔丁基醚萃取。合并的有机溶液用1N氢氧化钠水溶液(3X)，盐水(2X)洗涤，硫酸镁干燥并真空浓缩，给出N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸乙酯(46．69g)，不经进一步纯化直接使用。MS(FAB)m／z 419(M+H)+。步骤3：N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸
在室温下往46．7g(112mmol)N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸乙酯的四氢呋喃溶液中加入200ml 1N氢氧化钠水溶液，将该不均匀的混合物剧烈搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，残余的含水混合物用水稀释，并用甲基叔丁基醚(3X)萃取。水层用硫酸氢钠酸化至pH 3，产生油状物。混合物用甲基叔丁基醚(3X)萃取。合并的有机层用盐水(2X)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩。产生的油状物置于高真空，给出N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸(35．5g)。MS(FAB)m／z 391(M+H)+。方法B
在0℃，往2．1g(6．88mmol)1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸在36ml二氯甲烷的溶液加入3．6ml 2M草酰氯的二氯甲烷溶液和0．25ml二甲基甲酰胺。将反应混合物在0℃搅拌2．5小时。将反应混合物真空浓缩，残余物与甲苯共沸两次。
将2．06g(19．9mmol)N-乙基甘氨酸在18．7ml水中的水溶液冷却至5℃，并分批加入3．78g(35mmol)固体碳酸钠，接着加入6．88mmol(粗，假定)1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酰氯在8ml四氢呋喃中的溶液。将混合物温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯(3X)萃取。水相用硫酸氢钾酸化至pH 2，并用甲基叔丁基醚萃取。将有机层真空浓缩给出2．21g油状物(MS与所需的产物相符)。将油状物用制备性逆相HPLC(C-18．2’X250cm，15μ颗粒大小，300埃孔径)，用掺有0．1％v／v三氟乙酸的含水乙腈纯化，梯度为36-45％乙腈。将含有产物的部分合并，将溶液冷冻并冻干。产生的油状物溶于乙酸乙酯，将溶液真空浓缩，产生的油状物置于高真空，给出N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸(1．01g，36％产率)。MS(FAB)m／z 391(M+H)+。方法C步骤1：2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯盐酸盐
在氮气中，将20％乙醇钠的乙醇溶液(263．2kg)和丙二酸二乙酯(703kg)的混合物在1600升玻璃连续反应器中于大气压下蒸馏至108℃。在3小时内加入4-乙烯基吡啶(80．5kg)，将反应混合物搅拌4小时。然后使反应混合物冷却至室温，在1小时内加入水(358kg)。用33％盐酸水溶液调节pH至4．5，水层用甲基叔丁基醚(216kg)萃取。然后加入水(357．5kg)，两相混合物用16．5％盐酸水溶液(29．6kg)酸化至pH1。分开各层，2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯盐酸盐的水溶液就此使用。步骤2：4-(4-吡啶基)丁酸盐酸盐
将步骤1制备的2-(4-吡啶基)乙基丙二酸二乙酯盐酸盐的水溶液大气压下蒸馏至105℃，除去甲基叔丁基醚和乙醇，在50分钟内加入33％盐酸水溶液(67kg)。反应混合物在约105℃搅拌约6小时，然后浓缩得到约530kg馏出物。将混合物冷却至60℃，并加入乙酸(591kg)。在减压下(10mmHg)继续蒸馏，得到在反应混合物中6．6％的水。往浆状物中加入丙酮(374kg)，使悬浮液在3小时内冷却至15℃。浆状物在15℃搅拌1小时，滤出沉淀，用丙酮(94kg)洗涤两次，在40℃真空干燥，给出4-(4-吡啶基)丁酸盐酸盐(126kg)。然后将固体溶于水(300kg)，给出30％w／w水溶液，将其用于步骤3。步骤3：4-(4-哌啶基)丁酸盐酸盐
往步骤2制备的30％4-(4-吡啶基)丁酸盐酸盐水溶液(208．9kg)和水(145kg)中加入Pt／C(50％湿度，5％，2．52kg)。使混合物在大气压下氢化15小时，然后冷却至室温。滤出催化剂，并用水(20kg)洗涤。产生的4-哌啶丁酸盐酸盐的16％水溶液被用于步骤4。步骤4：1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸
或者将固体4-(4-哌啶基)丁酸盐酸盐(124kg)溶于水(600kg)，或者是在步骤3制备的4-(4-哌啶基)丁酸盐酸盐的16％水溶液(777kg)用氢氧化钠水溶液(289kg)在冷却至5℃的1600升玻璃连续反应器中稀释。在2-3小时内加入氯甲酸苄基酯，将溶液加热至约25℃。反应混合物用甲基叔丁基醚(476kg)萃取。然后将水层用盐酸(187kg)酸化，并用甲苯(450kg)萃取。有机层用水(240kg)洗涤，并通过在大气压下在氮气中共沸蒸馏而干燥。产生的1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸的甲苯溶液用于步骤5。在溶液中产物的重量：179kg。质量：在甲苯中约35％。步骤5：N-乙基-N-[1-氧代-4-[1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶基)丁基]甘氨酸二环己基胺
在氮气中，往步骤4制备的1-[(苯基甲氧基)羰基]-4-哌啶丁酸的甲苯溶液(253kg)中加入亚硫酰氯(42kg)。反应混合物用甲基叔丁基醚(85kg)稀释，并在约15℃，于630升玻璃连续反应器中搅拌约24小时。将此溶液在4-5小时加入水(177kg)，30％氢氧化钠水溶液(227kg)，N-乙基甘氨酸(36kg)和甲基叔丁基醚(65kg)在1600升玻璃连续反应器中的两相混合物中，将混合物搅拌约30分钟。然后将两相混合物用水(100kg)稀释并用盐酸酸化至ph 6．5。水相用甲基叔丁基醚(65kg)洗涤，并将乙酸乙酯(157kg)加入水相。两相混合物用盐酸(84kg)酸化至pH 4。分开各层，将乙酸乙酯(385kg)加入有机相。有机相被加热至约60℃，并加入二环己基胺(63kg)的乙酸乙酯(230kg)溶液。混合物中加入晶种并冷却至约10℃。滤出固体，用乙酸乙酯(150kg)洗涤两次，在约40℃真空干燥，给出标题化合物(139kg)白色晶状固体。实施例7制备N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸步骤1：N-乙基甘氨酸苯甲基酯一(盐酸盐)
在0．5小时内，往250ml 2M乙基胺的四氢呋喃溶液中加入在50ml四氢呋喃中的47．2g(0．2mol)溴乙酸苄基酯，同时保持温度为22℃至26℃。然后将反应混合物冷却至2℃，此时乙基胺氢溴酸盐结晶，通过过滤收集。将滤液在30℃真空浓缩，给出39．4g黄色残余物。将残余物在搅拌下用350ml 2-丙醇处理，给出白色固体，过滤收集。在强搅拌下往滤液中加入59ml 3．6N盐酸的2-丙醇溶液，将混合物搅拌，通过过滤收集产生的白色固体。残余物被干燥给出32．5g固体。此物质用100ml四氢呋喃研制，然后用100ml 2-丙醇研制，干燥给出30g(0．13mol，65％产率，87％分析纯度)N-乙基甘氨酸苯甲基酯一(盐酸盐)。步骤2：N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸苯甲基酯
在氮气中，将32．5g(0．16mol)4-吡啶丁酸和17．53ml(0．174mol)N-甲基吗啉在300ml二氯甲烷中的溶液冷却至0℃，在0．5小时内加入预冷的(0℃)18．75ml(0．152mol)新戊酰氯在100ml二氯甲烷中的溶液，同时保持反应温度在0℃。在分开的500ml烧瓶中，将33．5g(0．145mol)N-乙基甘氨酸苯甲基酯一(盐酸盐)溶于400ml二氯甲烷，并加入35ml(0．48mol)N-甲基吗啉。在-0．5℃，2小时内将此混合物加入活化的吡啶丁酸溶液中。1小时后，混合物用水稀释，搅拌，分开各层。有机相用饱和碳酸氢钠水溶液，0．1M盐酸水溶液和水洗涤，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，给出46．2g(0．135mol，93％产率)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸苯甲基酯黄色油状物。步骤3：N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸
将46g(0．135mol)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸苯甲基酯在300ml甲醇中的溶液加入1L高压釜中的4g 10％Pd／C(50％重量的水)中。将容器朝氮气开口真空抽空三次，然后朝大气压的氢气开口再抽空三次。将容器密封，并在搅拌下于25℃加热2小时。混合物在氮气中过滤，给出浅黄色滤液，将其在40℃真空浓缩直至开始出现白色固体。加入150ml 2-丙醇，引起产物的迅速结晶。将混合物搅拌0．5小时，然后过滤收集产物。固体用240ml 2-异丙醇洗涤，然后干燥给出19g产物。将母液浓缩，残余物用2-丙醇处理，形成白色固体。将混合物搅拌0．5小时，然后过滤，固体用2-丙醇洗涤，然后干燥给出5g产物，总产量24g(0．095mol；70％产率；99A％纯度)N-乙基-N-[1-氧代-4-(4-吡啶基)丁基]甘氨酸。实施例8制备(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯三氟乙酸盐步骤1：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯
在18℃，磁力搅拌下，往37．5g(116mmol)BOC-β-苄基-天冬氨酸在270ml乙酸乙酯中的溶液中加入17．75g(116mmol)羟基苯并三唑水合物在25ml二甲基甲酰胺中的溶液。然后在30分钟内加入24．5g(119mmol)二环己基碳二亚胺在50ml乙酸乙酯中的溶液，用水浴保持反应温度低于25℃。将反应混合物搅拌1小时，然后在23℃加入33g(116mmol)3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺酯一(三氟乙酸盐)在25ml二甲基甲酰胺中的浆状物，接着在2分钟内滴加净N-甲基吗啉。在加入N-甲基吗啉时使反应混合物温热至30℃。反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物以除去环己基脲，滤液用乙酸乙酯稀释，用水洗涤两次，盐水洗涤1次，饱和碳酸氢钠洗涤两次，1∶1 0．5N柠檬酸／盐水洗涤1次。有机相用硫酸镁干燥，过滤并用庚烷稀释。将混合物放置过夜，过滤收集产生的晶体，用庚烷洗涤两次，真空干燥给出第一茬37．5g和第二茬9．5g。两茬都显示可接受的HPLC纯度，将其物理合并给出47g N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯(85产率)。MS(FAB)m／7 476(M+H)+。步骤2：(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯三氟乙酸盐
在20℃，机械搅拌下，15分钟内，往45．4g(95．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯在350ml二氯甲烷的溶液中加入67g(590mmol)三氟乙酸。将反应混合物搅拌2小时。反应混合物真空浓缩给出橙黄色油状物，将其与二氯甲烷共沸，然后置于高真空进一步使残余溶剂变为最少。将油状浓缩物用1∶1甲基叔丁基醚／庚烷研制给出白色固体。混合物在甲基叔丁基醚中搅拌2小时，然后放置2天。过滤收集晶体，真空干燥给出(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺苯甲基酯一(三氟乙酸盐)(43g，92％产率)。MS(FAB)m／z 376(M+H)+。实施例9制备(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯三氟乙酸盐步骤1：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯
将30g(107．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-高苯基丙氨酸和2ml乙酸在100ml甲醇中的溶液倒入在500ml Parr shaker瓶中的3g 5％铑／氧化铝上。在46-47 psi的氢气中摇动过夜，然后在氮气掩盖下在烧结的玻璃漏斗上滤过硅藻土545。将硅藻土垫用甲醇洗涤。滤液在30℃真空浓缩。产生的油状物溶于甲基叔丁基醚，用水洗涤两次，盐水洗涤一次，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩。将残余物(估计107．5mmol)溶于250ml二氯甲烷，该溶液用12g(118．5mmol)三乙胺处理，接着用18．4g(107．5mmol)氯甲酸苄基酯处理，此时形成白色沉淀。在加入氯甲酸苄基酯后，一次加入1．3g(10．75mmol)4-二甲基氨基吡啶。将混合物在0℃搅拌2小时。然后将混合物真空浓缩，残余物溶于乙酸乙酯，溶液用水洗涤两次，1N盐酸洗涤两次，1N氢氧化钠洗涤两次，盐水洗涤一次，硫酸镁干燥，过滤并浓缩给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯(33．8g)油状物。MS(FAB)m／z 748(M+H)+。步骤2：4-环己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯一(三氟乙酸盐)
30分钟内，往33g(88mmol) N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯在136ml二氯甲烷的溶液中加入136ml三氟乙酸。使反应温度保持低于23℃。将混合物在室温下搅拌3小时，然后真空浓缩。残余物再溶于二氯甲烷并再浓缩。产生的流动性油状物溶于50ml甲基叔丁基醚和350ml庚烷，在溶液中加入晶种，然后在-10℃冷却24小时。过滤收集第一批，庚烷洗涤，真空干燥(20．1g)。将母液真空浓缩，然后再溶于12ml甲基叔丁基醚和84ml庚烷。加入晶种并冷却至-10℃，给出第二批5．2g。两批具有相似的HPLC纯度，将其物理混合给出4-环己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯一(三氟乙酸盐)(25．7g，75％产率)。MS(FAB)276(M+H)+。步骤3：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸双苯甲基酯
在18℃，机械搅拌下，将20．4g(63mmol)BOC-β-苄基-(L)-天冬氨酸在154ml乙酸乙酯中的溶液加入9．65g(63mmol)羟基苯并三唑水合物在12ml二甲基甲酰胺中的溶液中。在15分钟内加入13．3g(64．5mmol)二环己基碳二亚胺在25ml乙酸乙酯中的溶液，同时保持反应混合物的温度低于25℃。将反应混合物搅拌1小时，然后在18℃加入24．5g(63mmol)4-环己基-2-(L)-氨基丁酸苯甲基酯三氟乙酸盐在15ml二甲基甲酰胺中的糖浆，接着在5分钟内滴加N-甲基吗啉。反应混合物在加入N-甲基吗啉时被温热至25℃。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物过滤除去二环己基脲，滤液用水洗涤两次，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，0．5N柠檬酸水溶液洗涤两次，盐水洗涤一次，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩。产生的蜡状固体在50℃溶于甲基叔丁基醚，将溶液热过滤除去少量细白不溶物，然后在50℃用庚烷稀释。使溶液冷却至室温，并放入冰箱在10℃过夜。过滤收集产生的固体，庚烷洗涤，真空干燥给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸双苯甲基酯(29．8g，81％产率)。MS(FAB)m／z 581。步骤4：(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯一(三氟乙酸盐)
在20℃，机械搅拌下，30分钟内往28．8g(49．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯在300ml二氯甲烷的溶液中加入222g(1．94mol)三氟乙酸，并将反应混合物搅拌3小时。反应混合物真空浓缩给出油状物，将其再溶于二氯甲烷并再浓缩。残余物用1∶1甲基叔丁基醚／庚烷研制，给出白色固体。过滤收集固体并真空干燥给出(L)-α-天冬氨酰基-4-环己基-2-(L)-氨基丁酸联苯甲基酯三氟乙酸盐(27．4g，46mmol，92．9％产率)。mp 143-144℃。实施例10制备(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯盐酸盐步骤1：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯
搅拌下，将25．6g(94．6mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-环己基-(L)-丙氨酸，11．2g(104mmol)苄基醇，和1．15g(9．45mmol)4-二甲基氨基吡啶在2l0ml二甲基甲酰胺和150ml二氯甲烷混合物中的乳状溶液冷却至5℃，并在5分钟内加入19．2g 3-N，N-二甲基氨基丙基乙基碳二亚胺盐酸盐。然后将混合物温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物过滤除去细沉淀，并将滤液真空浓缩。残余物溶于水并用乙酸乙酯(3X)萃取。合并的有机溶液用0．5N柠檬酸水溶液洗涤，并用水洗涤两次，硫酸镁干燥，过滤，并真空浓缩。产生的油状物置于高真空使挥发物变为最少，给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯(35．3g)。MS(离子喷雾)m／z 362(M+H)+。步骤2：3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯一(三氟乙酸盐)
在17℃，搅拌下，15分钟内，往35．3g(94．5mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯在100ml二氯甲烷中的溶液加入100ml三氟乙酸，同时使反应混合物的温度升至21℃。将反应混合物搅拌过夜，然后真空浓缩。残余物与二氯甲烷，甲苯和甲基叔丁基醚共沸。产生的油状物置于高真空给出3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯三氟乙酸盐(32．6g)。MS(离子喷雾)m／z 262(M+H)+。步骤3：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯
在机械搅拌下，往27．6g(85．5mmol)BOC-β-苄基(L)-天冬氨酸在110ml乙酸乙酯的溶液中加入13．1g(85．5mmol)羟基苯并三唑水合物在21．4ml二甲基甲酰胺中的溶液。在15分钟内加入18．15g(88mmol)二环己基碳二亚胺在80ml乙酸乙酯中的溶液，同时保持反应混合物的温度低于25℃。将反应混合物搅拌1小时，在20℃加入32g(85．5mmol)3-环己基-(L)-丙氨酸苯甲基酯三氟乙酸盐在120ml乙酸乙酯中的溶液，接着在5分钟内滴加14．6g N-甲基吗啉(最终pH 4-5)。在加入N-甲基吗啉时使反应混合物温热至25℃。将反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤反应混合物除去二环己基脲，滤液用水洗涤两次，用0．5N柠檬酸水溶液洗涤一次，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。产生的油状物溶于甲基叔丁基醚，将溶液过滤除去少量细白色不溶物。滤液真空浓缩，产生的油状物置于高真空，给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯(32．9g)。MS(离子喷雾)m／z566(M+H)-，584(M+Na)+。步骤4：(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯一(盐酸盐)
在0℃，磁力搅拌下，将盐酸通入17g(30mmol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯在60g乙酸乙酯中的溶液大约5分钟。在此期间溶液温度从5℃升至20℃，然后开始冷却回去。移走冰浴，溶液在室温下搅拌90分钟。通过将氮气通入整个溶液驱除过量的HCl，混合物固化。加入乙酸乙酯(100g)促进搅拌(触变)，再将氮气通入混合物3分钟。在布氏漏斗上过滤分离固体物质。滤饼用乙酸乙酯清洗，真空(20mbar)干燥过夜除去N2，给出(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸联苯甲基酯一盐酸盐(10．7g)白色固体。MS(离子喷雾)m／z 467(M+H)+。实施例11制备N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺方法A
在38℃，机械搅拌下，往乙二醇(140g)和甲醇(35g)的混合物中加入重碳酸二叔丁基酯(45g)和天冬甜素(5g)。然后通过注射器以0．2ml／min的速度加入三乙胺(17．5g)。然后在12分钟的间隔内分9批加入天冬甜素(5g)。反应温度保持在约38℃30分钟。反应混合物在真空脱气，直至没有气体选出被观察到(大约20分钟)。然后在混合物的表面下经浸入管在45分钟内加入氨(19g)，反应混合物在约60℃加热过夜。反应混合物用水(280g)稀释，并将反应温度调节至约45℃。加入乙酸(55g)将pH调节至约5．9。混合物被冷却至40℃，此时开始形成固体。将混合物在2小时冷却至20℃，并加入乙酸(250g)将pH调节至约为5，并将混合物搅拌0．5小时。将固体过滤，用水(3X)洗涤，在50℃真空干燥，给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺(53g)白色晶状固体。方法B
将天冬甜素(25kg)和重碳酸二叔丁基酯在甲醇(250kg)中的混合物在400升玻璃连续反应器中加热至约30℃，并在30分钟内加入氢氧化锂(3．6kg)。将悬浮液搅拌约4小时，在氮气保护下加入氨气(39kg)。浆状物搅拌2天，然后真空浓缩消除氨和甲醇。将水(170kg)和乙酸(8kg)加入产生的悬浮液中，滤出沉淀，滤饼用水(25kg)洗涤两次，在约40℃真空干燥，给出N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺(29kg)白色晶状固体。实施例12制备(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺一(盐酸盐)
将N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-3-苯基-(L)-丙氨酸酰胺(129kg)和氧化铂(Ⅳ)(5kg)或Pt／氧化铝(湿50％，5％，12kg)在混合物在1600升玻璃连续反应器中，于乙酸(700kg)中在约60℃和4bar的氢气中氢化3-5小时。滤出催化剂并用乙酸(20kg)洗涤。在氮气中，1-2小时内，将氯化氢气体(7．8kg)加入400升玻璃连续反应器内的215kg乙酸溶液中。将悬浮液搅拌1小时并过滤。滤饼用乙酸(20kg)洗涤两次，丙酮(20kg)洗涤两次，并在约40℃真空干燥给出(L)-α-天冬氨酰基-3-环己基-(L)-丙氨酸酰胺一(盐酸盐)(30kg)白色晶状固体。实施例13制备(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯一(盐酸盐)步骤1：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺甲基酯一钠盐
在6L烧瓶内装入294．4g(0．68mol)天冬甜素，2000ml乙醇，2000ml水，和192．96g(0．88mol)重碳酸二叔丁基酯，混合物被冷却至0℃。在15分钟内加入氢氧化钠水溶液(10N，68．6ml)，同时保持温度在0℃和4℃之间。停止冷却，使混合物温热至室温并搅拌2天。将该清亮的溶液真空浓缩给出油状物，将其溶于500ml乙酸乙酯并再浓缩，给出297g油状物。在48℃将其溶于1L乙酸乙酯，给出清亮的溶液。将溶液冷却至室温过夜。过滤收集结晶的产物，用400ml乙酸乙酯洗涤，在真空炉中干燥，给出165g(0．42mol，62％产率)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺甲基酯一钠盐。将母液体积减少，又得到95．4g(0．24mol)固体产物。(总产率97％)步骤2：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺一钠盐
将氨(255g，15mol)在4L烧瓶中冷凝。在另一容器中制备260g(0．659mol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺甲基酯一钠盐在1300ml甲醇中的溶液，将其在-32℃至-5℃之间，0．5小时内加入氨中。混合物在3小时内温热至室温，然后再搅拌2小时。在40℃真空除去甲醇，给出501g糊状物。将其用1L乙酸乙酯处理，产物结晶。混合物用2L乙酸乙酯稀释并过滤。将固体在室温下真空干燥过夜，然后在50℃真空干燥1．5小时，给出243．5g(0．645mol，98％产率)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺一钠盐。步骤3：N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯
在氮气中，往1L圆底烧瓶中加入241g(0．635mol)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺一钠盐h2500ml二甲基甲酰胺，将混合物搅拌直至得到溶液。在23-26℃，5分钟内加入净溴化苄，75．4g(0．635mol)。混合物在室温下搅拌21．5小时，然后慢慢用2500ml水稀释，使温度上升至32℃。将混合物搅拌1小时，同时冷却至室温，此时固体结晶。过滤收集固体，用3批1L水洗涤，并在50℃干燥2天，给出232g(0．495mmol，78％产率)N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯。步骤4：(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯一(盐酸盐)
将N-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯在4N氯化氢／乙酸乙酯中的溶液在室温下搅拌1小时。然后将混合物浓缩，残余物溶于1．1L乙酸乙酯并搅拌过夜。过滤收集产生的固体并溶于3L水。溶液用3500ml二氯甲烷洗涤。在55℃将水溶液部分地通过旋转蒸发。将溶液冷却。固体结晶出来，通过过滤收集两批(113．6g和34．1g)，给出最终产量147．7g(0．364mol，79％产率)的(L)-α-天冬氨酰基-(L)-苯基丙氨酸酰胺苯甲基酯一(盐酸盐)。实施例14制备N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亚甲基]丙基]甘氨酸步骤1：1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮
将40kg N-苄氧羰基丁二酰亚胺和26kg(175mol)4-哌啶酮盐酸盐水合物在38．8kg水和88kg四氢呋喃中的混合物在约15℃搅拌，直至完全溶解(～15分钟)。搅拌下往混合物中加入N-甲基吗啉(22．8kg)(放热)，同时保持温度在或低于20℃。将反应混合物在约20℃搅拌约2．5小时，此时HPLC指示反应完全。将混合物用115．2kg甲基叔丁基醚和38．8kg水稀释，并在约20℃搅拌5分钟。停止搅拌，使其分层，将水层(下层)分出并丢弃。有机层用129．6kg水洗涤两次(搅拌5分钟，分相，除去／丢弃水(下层)相)。有机层用在46．8kg水中的5．2kg氯化钠洗涤(搅拌5分钟，分相，除去／丢弃水(下层)层)。有机层用11．5kg硫酸镁处理，搅拌1小时然后将混合物过滤。反应器用8kg甲基叔丁基醚清洗(过滤，与主滤液合并：总的滤液水含量：0．52％)。在30℃减压使滤液体积减少一半。真空对氮气开口，残余物被冷却至20℃(釜内残余的水含量：0．43％)。残余物用57．6kg甲基叔丁基醚稀释，然后再在30℃真空蒸馏使滤液体积减少一半。将真空对氮气开放，混合物冷却至20℃(釜内残余的水含量：0．25％)。将此操作再重复5次。最终的釜内残余物用28．8kg甲基叔丁基醚稀释并混合5分钟，然后分析水含量和1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮的含量(水：0．05％；wt／wt分析1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮：22．66wt％，35．36kg，155mol，88．6％产率)。步骤2：3-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基亚甲基)丙酸
在14℃，25分钟内，往82g 3-羧丙基三苯基溴化鏻在407ml 1，2-二乙氧基乙烷中的悬浮液加入220g 20wt％叔丁醇钾的四氢呋喃溶液，同时保持反应混合物的温度为24-28℃。将混合物搅拌1小时，冷却至10℃，在30分钟内加入52．5g 1-苯基甲氧羰基-4-哌啶酮在246ml甲基叔丁基醚中的溶液，同时保持冷却。加完后，将混合物在12℃搅拌10分钟，然后温热至20℃，并再搅拌30分钟。反应混合物用410ml 1N盐酸水溶液处理10分钟，用328ml甲基叔丁基醚稀释，然后分开各相。有机相用205ml水洗涤，然后用210ml 1N氢氧化钠水溶液洗涤。分离收集含有产物的氢氧化钠层，用三批189g乙酸乙酯洗涤，用浓盐酸酸化至pH 3．48，然后用189ml乙酸乙酯萃取。分出乙酸乙酯层，用211ml水洗涤，然后用10g硫酸镁干燥30分钟，过滤，真空浓缩。油状残余物(50．7g)在甲苯／庚烷中结晶，给出总共29．46g(51％产率)3-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基亚甲基)丙酸。质谱：Mcolc．303，M+1obsvd304．1H NMR：(δvs TMS，CDCl3)2．2，t(2H)：2．25，t(2H)；2．35，m(4H)：3．45．m(4H)，5．15．s(2H)：5．2，m(1H)；7．33，2(5H)．13C NMR(δvs TMS．CDCl3)22．43，28．2，34．26．35．66，44．88，45．74，67．20，122．02，127．83，127．95，128．45．128．69，128．90，136．17，136．72，155．34，178．39步骤3：N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亚甲基]丙基]甘氨酸
用实施例6的方法制备N-乙基-N-[1-氧代-3-[1-(苯基甲氧羰基)-4-哌啶基亚甲基]丙基]甘氨酸，只是用3-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基亚甲基)丙酸代替4-(1-苯基甲氧羰基-4-哌啶基)丁酸。

Claims (62)

1．制备下式假四肽化合物或其盐或前药的方法其中是任选地氮保护的氮杂杂环基；是单键或双键；q是1-5；B是烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；Q2是H或羧酸保护基；J是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，取代的芳基，芳烷基或取代的芳烷基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基，或烷基芳烷基；和p是1或2，该方法包括(a)下式的氮杂杂环基假四肽或其盐，其中K是OH或酰基活化基团，与下式的羧酸取代的二肽或其盐偶联，
Figure 9881098300031
(b)任选地地除去氮保护基或羧酸保护基，和(c)任选地将假四肽转化为盐或前药。
2．权利要求1的方法，其中
Figure 9881098300032
其中m是1至5；n是2-6；和P1是但保护基。
3．权利要求2的方法，其中Q2是羧酸保护基。
4．权利要求2的方法，其中B是烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，或烷基环烷基烷基，J是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，或烷基环烷基烷基，m是3，而n是3或4。
5．权利要求2的方法，其中B是烷基；J是烷基，环烷基或环烷基烷基；R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基或芳烷基，m是3；n是3或4；而p是1。
6．权利要求3的方法，其中P1是苄氧羰基而Q2是苄基。
7．权利要求2的方法，其中P1是苄氧羰基而Q2是H。
8．权利要求6的方法，其中L是NR1R2。
9．权利要求7的方法，其中L是NR1R2。
10．权利要求1的方法，其中氮杂杂环基假二肽与羧酸取代的二肽的盐偶联。
11．权利要求10的方法，其中氮杂杂环基假二肽的碱加成盐与羧酸的二肽的酸加成盐偶联。
12．权利要求11的方法，其中氮杂杂环基假二肽的二环己基胺盐与羧酸的二肽的三氟乙酸盐偶联。
13．权利要求1的方法，该方法包括(a)下式的氮杂杂环基假二肽或其碱加成盐，其中P1是氮保护基；而B是烷基，与下式的羧酸取代的二肽或其酸加成盐偶联，其中Q2是H或羧酸保护基；J是烷基，环烷基，或环烷基烷基；和L是OR1或NR1R2，其中R1和R2独立地是H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基或芳烷基，制备下式的假四肽
Figure 9881098300053
(b)任选地地除去氮保护基或羧酸保护基，和(c)任选地将假四肽转化为其盐或前药。
14．权利要求13的方法，其中P1是苄氧羰基而Q2是苄基。
15．权利要求13的方法，其中P1是苄氧羰基而Q2是H。
16．权利要求14的方法，其中B是乙基；J是环己基甲基；而L是NH2。
17．权利要求15的方法，其中B是乙基；J是环己基甲基；而L是NH2。
18．制备下式的环己基甲基取代的肽的方法
Figure 9881098300061
其中Q2是H或羧酸保护基；和Q3是H或氮保护；该方法包括(b)任选地地脱除氮保护基或羧酸保护基。
19．权利要求18的方法，其中还原是通过催化氢化进行的。
20．权利要求19的方法，其中催化氢化用铂催化剂进行。
21．权利要求20的方法，其中铂催化剂是氧化铂或铂／氧化铝。
Figure 9881098300063
其中Q2是H或碱加成盐，或羧酸保护基；Q3是H或氮保护基；该方法包括使下式的肽酯酰胺化其中R3是低级烷基。
23．权利要求22的方法，其中酰胺化用醇中的氨进行。
24．权利要求23的方法，其中醇是低级醇。
25．权利要求23的方法，其中酰胺化用在低级醇-甘醇溶剂混合物中的氨进行。
26．权利要求25的方法，其中低级醇-甘醇溶剂混合物包括甲醇和乙二醇。
27．制备下式保护的天冬甜素化合物的方法
Figure 9881098300072
其中Q2是羧酸保护基；Q3是H或氮保护基；和R3是低级烷基；该方法包括将N-保护基引入下式的天冬甜素
Figure 9881098300081
28．权利要求27的方法，其中Q3是苄氧羰基或叔丁氧羰基。
29．权利要求28的方法，其中Q2是H。
30．制备下式酰氨基二肽的方法
Figure 9881098300082
其中Q3是氮保护基；而Q2是H，该方法包括(a)将碱和N-保护试剂加入天冬甜素在溶剂中的溶液中，形成下式化合物的溶液
Figure 9881098300083
其中Q2是H或碱加成盐，和(b)将氨加入步骤(a)产生的溶液中。
31．权利要求30的方法，其中Q3是叔丁氧羰基或苄氧羰基。
32．权利要求31的方法，其中Q3是叔丁氧羰基。
33．权利要求32的方法，其中溶剂是醇。
34．权利要求33的方法，其中醇是低级醇或低级醇-甘醇混合物。
35．权利要求34的方法，其中醇是甲醇或甲醇-乙二醇混合物。
36．制备下式环己基甲基取代的二肽或其酸加成盐的方法
Figure 9881098300091
该方法包括(a)制备催化剂和下式苯甲基取代的肽在溶剂中的混合物，其中Q3是叔丁氧羰基，(b)用氢处理混合物，(c)从混合物中除去催化剂，和(d)将气体HCl通入混合物中。
37．权利要求36的方法，其中溶剂是乙酸。
38．制备下式氮杂杂环基取代的酸化合物的方法
Figure 9881098300101
其中R4是H或低级烷基，而P1是氮保护基，该方法包括(a)使下式的2-吡啶基乙基-二-(低级烷基)丙二酸酯脱羧基其中R5是低级烷基，制备下式的吡啶基酸：(b)用氢在催化剂存在下氢化吡啶基酸，制备下式的哌啶酸(c)任选地地除去催化剂；(d)使哌啶酸N-保护，制备下式N-保护的哌啶酸
Figure 9881098300112
(e)使氮保护的哌啶酸与下式的N-乙基甘氨酸化合物偶联，
Figure 9881098300113
制备氮杂杂环基取代的酸化合物；并(f)任选地使其中R4是低级烷基的氮杂杂环基取代的化合物脱酯化。
39．权利要求38的方法，其中P1是苄氧羰基，R4是H。
40．权利要求39的方法，其中脱羧基通过将2-吡啶基乙基-二-(低级烷基)丙二酸酯在酸水溶液中加热而进行。
41．权利要求40的方法，其中酸水溶液是盐酸。
42．权利要求39的方法，其中氢化在酸水溶液中进行。
43．权利要求42的方法，其中酸水溶液是盐酸。
44．权利要求39的方法，其中N-保护在碱水溶液中进行。
45．权利要求44的方法，其中P1是苄氧羰基。
46．权利要求39的方法，其中：(a)2-吡啶乙基-二-(低级烷基)丙二酸酯在酸水溶液中的溶液被加热，制备吡啶基酸在酸水溶液中的溶液；(b)将催化剂加入吡啶基酸的溶液中，混合物用氢处理，形成催化剂和哌啶酸的混合物；(c)从混合物中分出催化剂，制备哌啶酸的水溶液；和(d)将碱和N-保护试剂加入水溶液中制备N-保护的哌啶酸。
47．权利要求46的方法，其中酸水溶液是盐酸。
48．权利要求47的方法，其中R4是H。
49．权利要求48的方法，其中P1是苄氧羰基。
50．制备下式假四肽或其盐或前药的方法
Figure 9881098300121
其中m是3；n是2-6；B是烷基；p是1或2；J是环己基甲基；L是OR1，或NR1R2，其中R1和R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，该方法包括(a)还原下式假四肽化合物
Figure 9881098300131
其中
Figure 9881098300132
是吡啶基或
Figure 9881098300133
其中m是3，P1是H或氮保护基；Q2是H或羧酸保护基；J是苯甲基；(b)任选地地脱除氮保护基或羧酸保护基；和(c)任选地地将假四肽转化为盐或前药。
51．权利要求50的方法，其中还原通过催化氢化进行。
52．权利要求51的方法，其中是其中m是3，P1是氮保护基；n是3；p是1；Q2是羧酸保护基。
53．权利要求52的方法，其中P1是氢化不稳定的氮保护基；Q2是氢化不稳定的羧酸保护基。
54．权利要求53的方法，其中催化还原同时还原并脱除P1和Q2。
55．权利要求51的方法，其中是吡啶基；Q2是羧酸保护基。
56．权利要求55的方法，其中Q2是氢化不稳定的羧酸保护基。
57．权利要求56的方法，其中催化还原同时还原并脱除Q2。
58．下式的假四肽或其盐或前药
Figure 9881098300142
其中
Figure 9881098300143
是吡啶基或
Figure 9881098300144
m是3，P1是H或氮保护基；n是2-6；B是烷基；P是1或2；Q2是H或羧酸保护基；J是苯甲基；而L是OR1或NR1R2独立地是-H，烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基。
59．权利要求58的假四肽化合物，其中
Figure 9881098300151
其中m是3，P1是氮保护基；n是3；P是1；而Q2是羧酸保护基。
60．权利要求59的假四肽，其中P1是氢化不稳定的氮保护基，而Q2是氢化不稳定的羧酸保护基。
61．下式的假二肽或其盐
Figure 9881098300152
其中P1是H或氮保护基；B是烷基，环烷基，环烷基烷基，烷基环烷基，烷基环烷基烷基，芳基，芳烷基，烷基芳基或烷基芳烷基；和R4是H或低级烷基。
62．权利要求61的假二肽，其中P1是氮保护基，B是烷基，而R4是H。
63．权利要求62的假二肽，其中P1是苄氧羰基，而B是乙基。
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