SK280597B6

SK280597B6 - Cyklopeptidy, spôsob ich výroby, farmaceutický pro

Info

Publication number: SK280597B6
Application number: SK1217-93A
Authority: SK
Inventors: Alfred Jonczyk; G�Nter H�Lzemann; Brunhilde Felding-Habermann; Friedrich Rippmann; Guido Melzer; Beate Diefenbach; Horst Kessler; Roland Haubner; Jochen Wermuth
Original assignee: Merck Patent Gesellschaft Mit Beschr�Nkter Haftung
Priority date: 1992-11-06
Filing date: 1993-11-02
Publication date: 2000-04-10
Also published as: PL177772B1; EP0596350A1; RU2129563C1; PL300935A1; JP3681764B2; KR940011479A; TW340849B; ES2105041T3; DE4237456A1; ATE154037T1; NO934003D0; GR3024550T3; EP0596350B1; UA43822C2; AU5039993A; CZ286170B6; NO309864B1; SK121793A3; HU215600B; AU666586B2

Description

Vynález sa týka cyklopeptidov, spôsobu ich výroby, farmaceutických prostriedkov, ktoré ich obsahujú a ich použitia ako integrínových inhibítorov na profylaxiu a ošetrovanie chorôb krvného obehu a v terapii zhubných nádorov a ostcolytických chorôb, najmä osteoporózy, angiogenézy a restenózy po angioplastii.

Doterajší stav techniky

Podobné zlúčeniny sú známe z Pharmacia 40 (8), 532-535(1985).

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu sú cyklopeptidy všeobecného vzorca (I) cyklo-(A-B-C-D-Arg) (I), v ktorom

A a B znamenajú vždy nezávisle od seba Ala. Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, íle, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr alebo Val,

C predstavuje Asp alebo Asp (O-Ci_₄alkyl) a

D znamená Gly alebo Ala, pričom aspoň dva uvedené zvyšky aminokyseliny sú v D-forme, rovnako ako ich soli.

Bolo zistené, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich soli majú veľmi cenné vlastnosti. Tieto zlúčeniny predovšetkým pôsobia ako inhibítory, pričom potlačujú predovšetkým vzájomné pôsobenie B₃-integrínových receptorov s ligandmi. Tento účinok sa môže doložiť napríklad spôsobom, ktorý uviedol J. W. Smith et al. v J. Biol. Chem. 265, 12267-12271 (1990). Okrem toho sa pri zlúčeninách vyskytujú protizápalové účinky. Všetky tieto účinky sa môžu dokázať spôsobmi známymi z literatúry.

Zlúčeniny sa môžu používať ako účinné látky pre liečivá v humánnej a veterinárnej medicíne, najmä na profylaxiu a ošetrovanie chorôb krvného obehu, trombózy, infarktu srdca, artériosklerózy, zápalov, apoplexie, angíny pectoris, zhubných nádorov a osteolytických chorôb, najmä osteoporózy, angiogenézy a restenózy po angioplastii.

V predchádzajúcom a nasledujúcom texte sa používajú ďalej uvedené skratky esterov aminokyselín pre zvyšky týchto aminokyselín: Ala alanín

Asp asparagín

Asp(OR) kyselina asparágová (-ester)

Arg arginín

Cys cysteín

Gin glutamín

Glu kyselina glutámová

Gly glycín

His histidín íle izoleucín

Leu leucín

Lys lyzín

Met metionín

Phe fenylalanín

Pro prolín

Ser serín

Thr treonín

Trp tryptofán

Tyr tyrozín

Val valín.

Ďalej sa používajú ďalšie skratky, ktoré znamenajú: BOC terc.-butoxykarbonyl

CBZ benzyloxyklarbonyl

DCCI dicyklohexylkarbodiimid

MDF dimetylformamid

EDCI hydrochlorid N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimidu

Et etyl

FMOC 9-fluórenylmetoxykarbonyl

HOBt l-hydroxybenzotriazol

Me metyl

Mtr 4-metoxy-2,3,6-trimetylfenylsulfonyl

OBut terc.-butylester

OMe metylester oEt etylester

POA fenoxyacetyl

TFA kyselina trifluóroctová.

Ak uvedené aminokyseliny môžu mať väčší počet enantiomémych foriem, tak sú vpredu aj v ďalšej časti zahrnuté všetky tieto formy a tiež och zmesi (napríklad DL-formy). napríklad ako súčasť zlúčenín všeobecného vzorca (I).

Predmetom vynálezu je ďalej spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca (I), ktorý je uvedený alebo ich solí, ktorý spočíva v tom, že sa uvoľnia zo svojho funkčného derivátu spracovaním so solvolyzačným alebo hydrolyzačným činidlom, alebo sa peptid všeobecného vzorca (II)

H-Z-OH (II), v ktorom

Z znamená A-B-C-D-Arg-,

-B-C-D-Arg-A-, -C-D-Arg-A-B-, -D-Arg-A-B-C- alebo -Arg-A-B-C-D, alebo sa reaktívny derivát takéhoto peptidu spracuje s cyklizačným činidlom a/alebo sa bázická alebo kyslá zlúčenina so všeobecným vzorcom (I) premení spracovaním s kyselinou alebo bázou na svoju soľ.

V prechádzajúcom a v nasledujúcom texte majú zvyšky A, B, C, D a Z významy uvedené vo všeobecnom vzorci (I) a (II), pokiaľ to nie je výslovne uvedené inak.

V predchádzajúcich vzorcoch Alk výhodne znamená metyl, etyl, izopropyl alebo terc.-butyl.

Skupina A je výhodne Val, najmä D-Val. B znamená výhodne Phe, najmä D-Phe. C výhodne predstavuje Asp, najmä D-Asp. D znamená výhodne Gly.

V tomto zmysle sú predmetom vynálezu predovšetkým také zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorých aspoň jeden z vymenovaných zvyškov má uvedené výhodné významy.

Výhodná skupina zlúčenín sa môže vyjadriť čiastočným vzorcom (la), ktorý inak zodpovedá všeobecnému vzorcu (I), v ktorom však A predstavuje D-Val, B znamená Phe, C predstavuje Asp a D znamená Gly alebo Ala.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a tiež východiskové zlúčeniny na ich výrobu sa obyčajne vyrábajú známymi spôsobmi, ako sú opísané v literatúre (napríklad v základných prácach ako je Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart) a síce pri reakčných podmienkach, ktoré sú známe a vhodné pre uve dené reakcie. Pritom sa môžu používať tiež známe, tu však bližšie neuvedené varianty.

Východiskové zlúčeniny môžu vznikať, ak je to žiaduce, tiež in situ, takže sa nemusia izolovať z reakčných zmesí, pokiaľ sa hneď použijú pre reakciu na zlúčeniny všeobecného vzorca (I).

Zlúčeniny všeobecného (I) sa môžu získať, keď sa uvoľnia zo svojich funkčných derivátov solvolýzou, najma hydrolýzou alebo hydrogenolýzou.

Výhodné východiskové zlúčeniny pre solvolýzu alebo hydrogenolýzu sú také zlúčeniny, ktoré na mieste jednej alebo väčšieho počtu aminoskupín a/alebo hydroxyskupín obsahujú zodpovedajúce chránené aminoskupiny a/alebo hydroxyskupiny, výhodne také, ktoré na mieste atómu vodíka spojeného s atómom dusíka nesú skupinu chrániacu aminoskupinu, napríklad také, ktoré zodpovedajú všeobecnému vzorcu (I), ale v mieste aminoskupiny obsahujú skupinu vzorca NHR', v ktorom R' znamená chrániacu skupinu, napríklad BOC alebo CBZ.

Ďalej sú výhodné východiskové zlúčeniny, ktoré na mieste atómu vodíka hydroxyskupiny obsahujú skupinu chrániacu hydroxyskupinu, napríklad také zlúčeniny, ktoré zodpovedajú všeobecnému vzorcu (1), ale namiesto hydroxyfenylovej skupiny obsahujú skupinu RO-fenylovú, kde R znamená skupinu chrániacu hydroxyskupinu.

V molekule východiskovej zlúčeniny môže byť tiež prítomných viac rovnakých alebo rozdielnych chránených aminoskupín a/alebo hydroxyskupín. V prípade, že sú prítomné chrániace skupiny vzájomne odlišné, môžu byť v mnohých prípadoch selektívne odštiepené.

Výraz skupina chrániaca aminoskupinu je všeobecne známy a vzťahuje sa na skupiny, ktoré sú vhodné na ochranu (blokovanie) aminoskupiny pred chemickými reakciami, ktoré sú však ľahko odštiepiteľné, keď je požadovaná reakcia na inom mieste molekuly vykonaná. Typické pre také skupiny sú najmä nesubstituované alebo substituované skupiny acylové, arylové, aralkoxymetylové alebo aralkylové skupiny. Pretože sa skupiny, chrániace aminoskupinu, po žiaducej reakcii (alebo po slede reakcií) odštiepia, nemá ich druh a veľkosť rozhodujúci význam. Výhodne sú však skupiny s 1 až 20 a najmä s 1 až 8 atómami uhlíka. Výraz acylová skupina sa tu vždy rozumie v najširšom slova zmysle. Zahŕňa acylové skupiny odvodené od alifatických, aralifatických, aromatických alebo heterocyklických karboxylových alebo sulfónových kyselín, najmä ide o skupiny alkoxykarbonylové, aryloxykarbonylové a predovšetkým aralkoxykarbonylové. Ako príklady takých acylových skupín sa uvádzajú skupiny alkanoylové ako acetylová, propionylová, butyrylová skupina; aralkanoylové ako fenylacetylová skupina; aroylové ako benzoylová alebo toluylová skupina; aryloxyalkanoylové ako je POA; alkoxykarbonylové skupiny, ako je skupina metoxykarbonylová, etoxykarbonylová. 2,2,2-trichlóretoxykarbonylová, BOC alebo 2-jódetoxykarbonylová; aralkoxykarbonylové skupiny ako je CBZ (karbobenzoxyskupina), 4-metoxybenzyloxykarbonylová alebo FMOC a arylsulfónové skupiny, ako je Mtr. Výhodné skupiny chrániace aminoskupinu sú BOC a Mtr, ďalej CBZ, benzylová a acetylová skupina.

Výraz skupina chrániaca hydroxyskupinu jc všeobecne známy a vzťahuje sa na skupiny, ktoré sú vhodné na ochranu hydroxyskupiny pred chemickými reakciami, ktoré sú však ľahko odštiepiteľné, keď je požadovaná reakcia na inom mieste molekuly vykonaná. Obvyklé takéto skupiny sú uvedené nesubstituované alebo substituované acylové, arylové alebo aralkylové skupiny, ďalej tiež alkylové skupiny. Povaha a veľkosť skupín chrániacich hydroxyskupinu nie je rozhodujúca, pretože sa skupina chrániace hydroxyskupinu, po požadovanej reakcii odštiepi, ale výhodné sú také skupiny, ktoré obsahujú 1 až 20 atómov uhlíka, najmä 1 až 10 atómov uhlíka. Príkladmi skupín chrániacich hydroxyskupinu sú okrem inej skupina benzylová. P-nitrobenzylová, p-toluénsulfonylová a acetylová, pričom skupina benzylová a acetylová sú mimoriadne výhodné.

Karboxyskupiny v kyseline asparágovej a kyseline glutámovej sú výhodne chránené vo forme svojho terc.-butylesteru [napríklad Asp(OBut)J.

Funkčné deriváty zlúčenín všeobecného vzorca (I), používané ako východiskové zlúčeniny sa môžu vyrobiť obvyklými spôsobmi pre syntézu aminokyselín a peptidov, ako je napríklad opísaná v základných prácach a patentových prihláškach, napríklad spôsobom vykonávaným v tuhej fáze podľa Merrifielda (B. F. Gysin a R. B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 94, 3102 anasl., 1992).

Uvoľňovanie zlúčenín všeobecného vzorca (1) z ich funkčných derivátov sa vykonáva vždy podľa použitej funkčnej skupiny, napríklad pôsobením silných kyselín, ako je najmä kyselina trifluóroctová a chloristá, ale tiež pôsobením iných silných anorganických kyselín, ako je kyselina chlorovodíková alebo sírová, silných organických karboxylových kyselín, ako je trichlóroctová kyselina alebo sulfónových kyselín, ako je kyselina benzénsulfónová alebo p-toluénsulfónová. Prítomnosť dodatkového inertného rozpúšťadla je možná, nie však vždy potrebná. Ako inertné rozpúšťadlo je vhodné hodí výhodne organické rozpúšťadlo, napríklad karboxylové kyseliny, ako je kyselina octová, étery, ako je tetrahydrofúrán (THF) alebo dioxán, amidy, ako je dimetylformamid (DMF), halogénované uhľovodíky, ako je dichlórmetán, ďalej tiež alkoholy, ako je metanol, etanol alebo izopropanol ako tiež voda. Do úvahy môžu prichádzať tiež zmesi týchto rozpúšťadiel. Kyselina trifluóroctová sa výhodne používa v nadbytku bez prísady ďalšieho rozpúšťadla, kyselina chloristá vo forme zmesi kyseliny octovej a 70 % kyseliny chloristej v pomere 9:1. Reakčná teplota pre štiepenie je účelne približne 0 až približne 50 °C, výhodne 15 až 30 °C (teplota miestnosti).

Skupina BOC, OBut a Mtr sa môže výhodne odštiepiť pôsobením kyseliny trifluóroctovej v dichlórmetáne alebo pôsobením 3- až 5-normálnej kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne pri teplote 15 až 30 °C. Skupina FMOC sa môže odštiepiť pôsobením približne 5 až 50 % roztoku dimetylamínu, dietylamínu alebo piperidínu v dimetylformamide pri teplote od 15 do 30 °C.

Hydrogenolyticky odštiepiteľné chrániace skupiny (napríklad skupiny CBZ alebo skupina benzylová) sa môžu odštiepiť napríklad spracovaním vodíkom v prítomnosti katalyzátora (napríklad katalyzátora na báze ušľachtilého kovu, ako je paládium, účelne na nosiči, ako na uhlí). Ako rozpúšťadlo sú pritom vhodné uvedené rozpúšťadlá, najmä napríklad alkoholy, ako je metanol alebo etanol alebo amidy ako je dimetylformamid. Hydrogenolýza sa zvyčajne vykonáva pri teplote približne 0 až 100 °C, za tlaku približne 0,1 až 20 MPa, výhodne pri teplote 20 až 30 °C, za tlaku približne 0,1 až 1 MPa. Hydrogenolýza CBZ skupiny sa darí napríklad dobre na 5 až 10 % paládiu na uhlí v metanole, alebo pôsobením formiátu amónneho pri teplote 20 až30°C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sa môžu získať cyklizáciou zlúčenín všeobecného vzorca (II) pri podmienkach pre syntézu peptidov. Pritom sa účelne pracuje obvyklými spôsobmi známymi pre syntézu peptidov, ako sú napríklad metódy opísané v publikácii Houben-Weyl, citovanej, zv. 15/11, str. 1 až 806 (1974).

Reakciu sa darí výhodne uskutočňovať v prítomnosti dehydratačného činidla, karbodiimidu, ako jc DCCI alebo EDCI, ďalej anhydridu kyseliny propánfosfónovej (por. Angew. Chem., 92, 129, 1980), difenylfosforylazidu alebo 2-etoxy-N-etoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolínu, v inertnom rozpúšťadle, napríklad halogénovanom uhľovodíku, ako je dichlórmetán, éteri, ako je tetrahydrofurán alebo dioxán, amide, ako je dimetylformamid alebo dimetylacetamid, nitrile, ako je acetonitril, alebo zmesi týchto rozpúšťadiel, pri teplotách od približne -10 do 40 °C, výhodne od 0 do 30 °C. Aby sa podporila intramolekuláma cyklizácia intramolekulámej peptidovej väzby, je účelné pracovať v zriedenom rozpúšťadle (zásada rozriedenia).

Namiesto zlúčenín všeobecného vzorca (II) sa môžu tiež pri reakcii používať reaktívne deriváty týchto zlúčenín, napríklad také, v ktorých sú reaktívne skupiny intermediárne blokované chrániacimi skupinami. Deriváty aminokyselín všeobecného vzorca (II) sa môžu používať napríklad vo forme svojich aktivovaných esterov, ktoré sa účelne tvoria in situ, napríklad prídavkom HOBt alebo N-hydroxysukcínimidu.

Východiskové zlúčeniny všeobecného vzorca (II) sú zvyčajne nové zlúčeniny, ktoré sa môžu vyrábať známymi spôsobmi, napríklad spôsobmi opísanými pre syntézu peptidov a odštiepením chrániacich skupín.

Zvyčajne sa predovšetkým syntetizuje chránený ester pentapeptidu so všeobecným vzorcom R'-Z-R, napríklad BOC-Z-OMe alebo BOC-Z-OEt, ktorý sa najskôr zmydelní na kyselinu všeobecného vzorca R'-Z-OH, napríklad BOC-R-OH a z tejto zlúčeniny sa odštiepi chrániaca skupina R', čím sa získajú voľné peptidy všeobecného vzorca (II)

H-Z-OH (II).

Báza všeobecného vzorca (I) sa môže premieňať reakciou s kyselinou na príslušnú adičnú soľ s kyselinou. Pre túto reakciu prichádzajú do úvahy najmä kyseliny, ktoré poskytujú fyziologicky neškodné soli. Tak sa môžu použiť anorganické kyseliny, napríklad kyselina sírová, kyselina dusičná, halogenovodíkové kyseliny, ako je kyselina chlorovodíková alebo kyselina bromovodíková, fosforečné kyseliny, ako je kyselina ortofosforečná alebo kyselina sulfámová, ďalej organické kyseliny, najmä alifatické, alicyklické, aralifatické, aromatické alebo heterocyklické jednosýtne alebo niekoľkosýtne karboxylové, sulfonové alebo sírové kyseliny, ako sú kyselina mravčia, octová, propiónová, pivalová, dietyloctová, malónová, jantárová, pimelová, fumarová, maleínová, mliečna, vínna, jablčná, benzoová, salicylová, 2-fenylpropiónová alebo 3-fenylpropiónová, citrónová, glukónová, askorbová, nikotínová, izonikotínová, metánsulfónová, etánsulfónová, etándisulfónová, 2-hydroxyetánsulfónová, benzénsulfónová, p-toluénsulfónová, naftalénmonosulfónová a naftaléndisulfónová a laurylsírová kyselina. Soli s kyselinami, ktoré nie sú fyziologicky neškodné, napríklad pikráty, sa môžu používať na izoláciu a/alebo na čistenie zlúčenín všeobecného vzorca (I)·

Na druhej strane sa kyselina všeobecného vzorca (I) môže premieňať na svoje fyziologicky vhodné soli kovové alebo amóniové reakciou s bázou. Ako soli pritom prichádzajú do úvahy soli sodné, draselné, horečnaté, vápenaté a amónne, ďalej substituované amónne soli, napríklad soľ dimetylamónna, dietylamónna alebo diizopropylamónna, monoetanolamónna, dietanolamónna a diizopropanolamónna soľ, cyklohexylamónna a dicyklohexylamónna soľ, dibenzylctyléndiamónna soľ, ďalej napríklad soli s N-mefyl-D-glukamínom alebo s arginínom, alebo lyzínom.

Nové zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich fyziologicky prijateľné soli sa môžu používať na výrobu farmaceutických prostriedkov, pokiaľ sa vo vhodnej dávkovej forme uvedú do styku s aspoň jednou nosnou látkou alebo látkou pomocnou a aspoň jednou ďalšou látkou. Takto získané prostriedky sa môžu používať v humánnej a vo veterinárnej medicíne ako liečivá. Ako nosiče prichádzajú do úvahy anorganické alebo organické látky, ktoré sú vhodné na enterálne (napríklad orálne alebo rektálne), parenterálne (napríklad intravenózne injekcie) alebo lokálne (napríklad topické, dermálne, oftalmické alebo nazálne) aplikácie alebo na použitie vo forme inhalačných sprejov a s novými zlúčeninami nereagujú, ako sú napríklad voda, vodné izotonické roztoky chloridu sodného, nižšie alkoholy, rastlinné oleje, benzylalkoholy, polyetylénglykoly, glyceríntriacetát, a iné glyceridy mastných kyselín, želatína, sójový lecitín, uhľohydráty, ako laktóza alebo škroby, stearát horečnatý, mastenec, celulóza a vazelína. Na orálne použitie sú vhodné najmä tablety, dražé, kapsuly, sirupy, šťavy alebo kvapky, pričom zaujímavé sú osobitne lakované tablety a kapsuly s povlakom odolným proti žalúdočným šťavám alebo potiahnuté kapsuly. Na rektálne podanie slúžia čapíky, na parenterálne podanie roztoky, osobitne olejové alebo vodné roztoky, ďalej suspenzie, emulzie alebo implantáty. Na topické použitie sú vhodné napríklad roztoky, ktoré sa používajú vo forme očných kvapiek, ďalej napríklad suspenzie, emulzie, masti, krémy alebo komprimáty. Na použitie ako inhalačné spreje sa môžu používať také spreje, ktoré obsahujú účinnú látku rozpustenú alebo suspendovanú vo vynášacom plyne alebo zmesi vynášacích plynov (napríklad v oxide uhličitom alebo fluórovaných a súčasne chlórovaných uhľovodíkoch). Účinná látka sa pritom účinne používa v mikronizovanej forme, pričom sa môže pridávať jedna alebo väčší počet dodatkových fyziologicky znášanlivých rozpúšťadiel, ako je napríklad etanol. Inhalačné roztoky sa môžu podávať pomocou obvyklých inhalátorov. Nové zlúčeniny sa tiež môžu lyofilizovať a získané lyofilizáty sa môžu napríklad používať na prípravu injekčných prípravkov. Injekcie sa môžu pritom podávať ako bolus alebo nepretržitá infúzia (napríklad intravenózna, intravaskuláma, subkutánna alebo intratekálna). Uvedené prostriedky' sa môžu sterilizovať a/alebo môžu obsahovať pomocné látky, ako sú konzervačné prostriedky, stabilizačné činidlá a/alebo namáčadlá, emulgátory, soli na ovplyvnenie osmotického tlaku, tlmivé roztoky, farbivá, a/alebo aromatické látky. Prostriedky môžu podľa potreby obsahovať tiež najmenej jednu ďalšiu účinnú látku, napríklad jeden alebo väčší počet vitamínov.

Látky podľa tohto vynálezu sa môžu spravidla podávať analogicky, ako známe odchodné dostupné peptidy, najmä však ako zlúčeniny opísané v americkom patentovom spise číslo US-A-4 472 305, výhodne v dávkach približne od 0,05 do 500 mg, predovšetkým od 0,5 do 100 mg na dávkovaciu jednotku. Denná dávka je výhodne približne od 0,01 do 2 mg/kg telesnej hmotnosti. Určitá dávka pre každého jednotlivého pacienta závisí od najrôznejších faktorov, napríklad od účinnosti určitej použitej zlúčeniny, od veku, telesnej hmotnosti, všeobecného zdravotného stavu, pohlavia, stravy, od okamihu a cesty podania, od rýchlosti vylučovania, od kombinácie liečiv a od závažnosti určitého ochorenia. Výhodné je orálne podávanie.

Vynález objasňujú, žiadnym spôsobom však neobmedzujú nasledujúce príklady praktickej realizácie. Teploty sa udávajú, ako je obvyklé, v stupňoch celzia. Výraz obvyklé spracovanie v nasledujúcich príkladoch praktického rozpracovania znamená: Prípadne sa pridáva voda, vykoná sa neutralizácia, extrakcia éterom alebo dichlórmetánom, oddelia sa fázy, organická fáza sa vysuší síranom sodným, filtruje, odparí a čisti sa chromatografiou na silikagéli a/alebo kryštalizáciou. RD označuje čas retencie (v minútach) pri vysoko účinnej kvapalinovej chromatografii na stĺpci naplnenom LiChrosorb RP select B (250 až 4,7 pm), elučné činidlo 0,3 % kyselina trifluóroctová vo vode, izopropanolový gradient od 0 do 80 % objemových počas 50 minút pri prietoku 1 ml/min., detekcia sa vykonáva pri vlnovej dĺžke 215 nm. M⁺ označuje molekulárny pík v hmotnostnom spektre, získaný technikou FAB (bombardovanie rýchlymi atómami).

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Roztok 30 mg cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) (ktorý sa môže získať cyklizáciou H-D-Arg(Mtr)-D-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-OH spôsobom vykonaným podľa príkladu 2) v 840 pl TFA, 170 pl dichlórmetánu a 85 pl tiofenolu sa nechá stáť pri teplote 20 °C počas 2 hodín, a potom sa odparí pri zníženom tlaku pri teplote 37°C a po zriedení vodou sa lyofílizuje. Po gélovej filtrácii pri použití Sephadexu G 10 v zmesi kyseliny octovej a vody v pomere 1:1a následnom čistení vysoko účinnou kvapalinovou chromatografiou na stĺpci naplnenom LiChrosorb RP 8 s izopropanolovým gradientom v 0,3 % TFA vo vode sa získa cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg), RD 17,9, M⁺575.

Analogickým spôsobom sa získa: zcyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg), RD 18,5, M⁺575;

z cyklo-(D-Val-D-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-L-Asp-Gly-D-Arg), RD 19,3, M⁺575;

z cyklo-(D-V al-D-Phe-D-Asp(OBut)-L-Ala-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-L-Ala-D-Arg), RD 20,3, M⁺ 589;

zcyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg), RD 21,4, M⁺ 589;

z cyklo-(D-V al-D-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-L-Asp-Gly-L-Arg);

z cyklo-(L-Val-D-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-D-Phe-D-Asp-Gly-L-Arg);

z cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp-Gly-L-Arg);

z cyklo-(L-Val-D-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-D-Phe-L-Asp-Gly-D-Arg);

z cyklo-(D-Val-L-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-V al-L-Phe-L-Asp-Gly-D-Arg);

z cyklo-(L-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-L-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg);

z cyklo-(L-Val-D-Phe-L-Asp(OBut)-D-Ala-L-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-D-Phe-L-Asp-D-Ala-L-Arg);

zcyklo-(D-Val-L-Phe-L-Asp(OBut)-D-Ala-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-L-Phe-L-Asp-D-Ala-L-Arg);

zcyklo-(L-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-D-Ala-L-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-L-Phe-D-Asp-D-Ala-L-Arg) a zcyklo-(L-Val-L-Phe-L-Asp(OBut)-D-Ala-D-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-L-Phe-L-Asp-D-Ala-D-Arg).

Príklad 2

Roztok 80 mg H-L-Arg-D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-ONa (ktorý sa môže získať odštiepením FMOC skupiny z FMOC-L-Arg-D-Val-D-Asp(OMe)-Gly-O-Wang, kde O-Wang znamená zvyšok -4-oxymetylfenoxymetyl-polystyrénu použitý pri Merrifieldovej syntéze, zosieťovaného z 1 % p-divinylbenzénu, pôsobením morfolinu a odštiepením pentapeptidu od polyméru pôsobením zmesi TFA a dichlórmetánu a uvedie do styku s 34 mg jemne práškového hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení zmesou tuhého oxidu uhličitého a acetónu sa pridá 34 pl difenylfosforylazidu. Všetko sa nechá stáť pri teplote 20 °C počas 16 hodín a potom sa oddestiluje pri teplote 37 °C dichlórmetán. Zvyšný roztok sa podrobí gélovej filtrácii (na stĺpci Sephadex G10 so zmesou izopropanolu a vody v pomere 8 : 2) a potom sa podrobí chromatografii na stĺpci polyméru (Mitsubishi MCI CNP-20P), pri použití izopropanolového gradientu vo vode. Tak sa získa cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg), 21,4, M⁺ 589.

Farmakologické testy

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu boli testované vzhľadom na svoju schopnosť inhibovať väzbu určitých ligandov na a,B_r aj^Bj-rcceptory.

Testy boli uskutočnené podľa spôsobu, ktorý opísal L W. Smith et al. v J. Biol. Chem., 265,12267-12271 (1990).

M⁺4 1 (FAB)/ RT (lún) (2PLC)	Sekvencii	Príkl. Pamakologické hodnoty IC₅₀ (μκΐ/ΐ)
Koncantr. rosmdaie

0,001 * 5 μβοί

Utri

575/18,5	cyklo-ÍD-Vel-D-Phe-D-Aap-Gly-D-Arg) 1	<0,001 5
575/19,3	cyklo- (D-Vel-D-Fhe-Aap-Gly-D-Arg) 1	0,2 5
589/20,3	cyklo-\|D-V«L-D-Phe-D-A»p-Hla-O-Arg) 1	2,5 5
589/21,4	cyklo-(D-Vel-D-Phe-D-Aep(CWe)-Gly-Arg) 2	0,02 5
575/17,9	cyklo-\|D-Vil-Phe-D~X»p-Gly-Arg) 1	0,2 5

Skratky:

RT čas retencie (HPLC)

FGN fibrinogén ajfi a^-receptor (izolovaný) a,_lbfi₃ aiibBj-receptor (izolovaný)

Výsledky testu dokladajú inhibičné účinky zlúčenín podľa tohto vynálezu na integríny. Pozorovaný účinok ukazuje, že zlúčeniny sú schopné inhibovať väzbu a^- a a^-receptorov. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú preto napríklad vhodné na inhibíciu adhézie osteoklastov ku kostiam, a preto katabolizmu kostí. Okrem toho je inhibičný účinok veľmi dôležitý pri ošetrovaní angiogenézy, trombózy, zhubných nádorov, najmä rastu nádorov a iných opísaných chorôb. Všetky tieto choroby sú podporované adhéziou určitých buniek a môžu byť ošetrované účinnou inhibíciou adhézie.

Ďalej uvedené príklady sa týkajú farmaceutických prostriedkov.

Príklad A

Injekčné fľaštičky

Roztok 100 g cyklopeptidu všeobecného vzorca (I) a 5 g hydrogenfosľorečnanu sodného sa v 3 litroch dvakrát destilovanej vody upraví 2-normálnou kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 6,5, sterilné sa filtruje, plní sa do injekčných fľaštičiek, za sterilných podmienok sa lyofílizuje a sterilné sa uzatvorí. Každá injekčná fľaštička obsahuje 5 mg účinnej látky.

Príklad B

Čapíky

Roztopí sa zmes 20 g účinnej látky všeobecného vzorca (I) so 100 g sójového lecitínu a 1400 g kakaového masla, naleje sa do foriem a nechá vychladnúť. Každý čapík obsahuje 20 mg účinnej látky.

Príklad C

Roztok

Pripraví sa roztok 1 g účinnej látky všeobecného vzorca (I), 9,38 g dihydrátu dihydrogenfosforečnanu sodného, 28,48 g dodekahydrátu hydrogenfosforečnanu dvoj sodného sa 0,1 g benzalkóniumchloridu v 940 ml dvakrát destilovanej vody. Hodnota pH sa upraví na 6,8, roztok sa doplní sa na jeden liter a sterilizuje sa ožiarením. Tento roztok sa môže použiť vo forme očných kvapiek.

Príklad D

Masť

Zmieša sa 500 mg účinnej látky všeobecného vzorca (I) s 99,5 g vazelíny za aseptických podmienok.

Príklad E

Tablety

Zmes 100 g cyklopeptidu všeobecného vzorca (I), 1 kg laktózy, 600 g mikrokryštalickej celulózy, 600 g kukuričného škrobu, 100 g polyvinylpyrolidínu, 80 g mastenca a 10 g stearátu horečnatého sa obvyklým spôsobom lisuje na tablety tak, že každá tableta obsahuje 10 mg účinnej látky.

Príklad F

Dražé

Podobne ako podľa príkladu E sa lisujú tablety, ktoré sa známym spôsobom potiahnu povlakom zo sacharózy, kukuričného škrobu, mastenca, tragantu a farbiva.

Príklad G

Kapsuly

Obvyklým spôsobom sa naplnia tvrdé želatínové kapsuly účinnou látkou všeobecného vzorca (I) tak, že každá kapsula obsahuje 5 mg účinnej látky.

Príklad H

Inhalačný sprej

Rozpustí sa 14 g účinnej látky všeobecného vzorca (I) v 10 litroch izotonického roztoku chloridu sodného a roztok sa plní do obchodne dostupných rozstrekovacích nádobiek s pumpovým mechanizmom. Roztok sa môže striekať do úst alebo do nosa. Každý vstrekovaný objem (približne 0,1 ml) zodpovedá dávke približne 0,14 mg účinnej látky.

Claims

1. Cyklopeptidy všeobecného vzorca (I) cyklo-(A-B-C-D-Arg) (I), v ktorom

A a B znamenajú vždy nezávisle od seba Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, íle, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr alebo Val,

C predstavuje Asp alebo Asp (O-C_Malkyl) a

D znamená Gly alebo Ala, pričom aspoň dva uvedené zvyšky aminokyseliny sú v D-forme rovnako ako ich soli.

2. Cyklopeptid podľa nároku 1, ktorým je cyklo-(D-

-V al-L-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg).

3. Cyklopeptid podľa nároku 1, ktorým j e cyklo-(D-V al-D-Phe-D-Asp-Gly-L-Arg).

4. Cyklopeptid podľa nároku 1, ktorým je cyklo-(D-V al-D-Phe-L-Asp-Gly-D-Arg).

5. Cyklopeptid podľanároku 1, ktorým je cyklo-(D-V al-D-Phe-D-Asp-L-Ala-D-Arg).

6. Cyklopeptid podľanároku 1, ktorým je cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg).

7. Spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca (I), podľanároku 1, kde

C predstavuje Asp alebo Asp (O-C_Malkyl) a

D znamená Gly alebo ala, alebo ich solí, vyznačujúci sa tým, že sa uvoľnia zo svojho funkčného derivátu spracovaním so solvolyzačným alebo hydrolyzačným činidlom, alebo sa peptid všeobecného vzorca (II)

H-Z-OH (II), v ktorom

Z znamená A-B-C-D-Arg-,

8. Farmaceutický prostriedok na profylaxiu a ošetrovanie chorôb krvného obehu, trombózy, srdcového infarktu, artériosklerózy, zápalov, apolexie, angíny pectoris, zhubných nádorov, osteolytických ochorení, zvlášť osteoporózy, angiogenézy a restenózy po angioplastii, vyznačujúci sa tým, že obsahuje aspoň jednu zlúčeninu všeobecného vzorca (1) podľa nárokov 1 a/alebo jej fyziologicky prijateľnú soľ.

9. Použitie zlúčenín všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 a/alebo ich fyziologicky prijateľných solí na výrobu liečiva na profylaxiu a ošetrovanie chorôb krvného obehu, trombózy, srdcového infarktu, artériosklerózy, zápalov, apolexie, angíny pectoric, zhubných nádorov, osteolytických ochorení, zvlášť osteoporózy, angiogenézy a restenózy po angioplastii.