CZ286170B6

CZ286170B6 - Cyklopeptidy

Info

Publication number: CZ286170B6
Application number: CZ19932352A
Authority: CZ
Inventors: Alfred Jonczyk; Günter Hölzemann; Brunhilde Felding-Habermann; Friedrich Rippmann; Guido Melzer; Beate Diefenbach; Horst Kessler; Roland Haubner; Jochen Wernuth
Original assignee: MERCK Patent Gesellschaft mit beschränkter Haftung
Priority date: 1992-11-06
Filing date: 1993-11-04
Publication date: 2000-02-16
Also published as: ES2105041T3; MX9306885A; TW340849B; CN1038751C; CA2102447A1; JP3681764B2; NO934003D0; GR3024550T3; HU215600B; NO934003L; JPH0892282A; RU2129563C1; DE4237456A1; NO309864B1; KR100238894B1; DE59306654D1; DK0596350T3; HUT68321A; PL300935A1; SK280597B6

Abstract

Nové cyklopeptidy obecného vzorce I cyklo-(A-B-C-D-Arg) (I), ve kterém A a B znamenají vždy nezávisle na sobě Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr nebo Val, C představuje Asp nebo Asp(O-C.sub. 1-4.n.-alkyl) a D znamená Gly nebo Ala, přičemž alespoň dva uvedené zbytky aminokyseliny jsou v D-formě, stejně jako jejich solí, způsobů jejich výroby, farmaceutických prostředků a použití. Tyto sloučeniny působí jako integrinové inhibitory a mohou se používat zvláště k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu a v terapii zhoubných nádorů.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká určitých nových cyklopeptidů dále uvedeného obecného vzorce I, stejně jako jejich solí, způsobů jejich výroby, farmaceutických prostředků a použití. Tyto sloučeniny působí jako integrinové inhibitory a mohou se používat zvláště k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu a v terapii zhoubných nádorů.

Dosavadní stav techniky

Podobné sloučeniny jsou známy z Pharmazie 40 (8), 532-535 /1985/.

Úkolem vynálezu je najít nové sloučeniny s cennými vlastnostmi, zvláště takové, které se mohou použít k výrobě léčiv.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu jsou cyklopeptidy obecného vzorce I cyklo-(A-B-C-D-Arg) (I), ve kterém

A a B znamenají vždy nezávisle na sobě Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe,

Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr nebo Val,

C představuje Asp nebo Asp(O-Ci_4-alkyl) a

D znamená Gly nebo Ala, přičemž alespoň dva uvedené zbytky aminokyseliny jsou v D-formě, stejně jako jejich soli.

Zvláště výhodně jde o sloučeniny vzorce cyklo-(D-V al-L-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg), cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-Gíy-L-Arg), cyklo-(D-V al-D-Phe-L-Asp-Gly-D-Arg), cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-L-Ala-D-Arg) a cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg).

Předmětem tohoto vynálezu je dále farmaceutický prostředek k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu, trombózy, srdečního infarktu, arteriosklerózy, zánětů, apolexie, anginy pectoris, 50 zhoubných nádorů, osteolytických onemocnění, zvláště osteoporózy, angiogenesy a restenosy po angioplastii, který obsahuje alespoň jednu sloučeninu výše uvedeného obecného vzorce I a/nebo její fyziologicky přijatelnou sůl.

-1 CZ 286170 B6

Konečně předmětem tohoto vynálezu je také použití sloučenin výše uvedeného obecného vzorce I a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí k výrobě léčiva k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu, trombózy, srdečního infarktu, arteriosklerózy, zánětů, apolexie, angíny pectoris, zhoubných nádorů, osteolytických onemocnění, zvláště osteoporózy, angiogenesy a restenosy po 5 angioplastii.

Je tedy zřejmé, že bylo nalezeno, že sloučeniny obecného vzorce I a jejich soli mají velmi cenné vlastnosti. Tyto sloučeniny především působí jako inhibitory integrinu, přičemž potlačují zvláště vzájemné působení p₃-integrinových receptorů s ligandy. Tento účinek se může doložit například 10 způsobem, který uvedl J. W. Smith a kol. v J. Biol. Chem. 265. 12267-12271 /1990/. Kromě toho se u sloučenin vyskytují protizánětlivé účinky. Všechny tyto účinky se mohou dokázat způsoby známými z literatury.

Sloučeniny se mohou používat jako účinné látky pro léčiva v humánním a veterinárním lékařství, 15 zvláště k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu, trombózy, srdečního infarktu, arteriosklerózy, zánětů, apolexie, angíny pectoris, zhoubných nádorů, osteolytických onemocnění, zvláště osteoporózy, angiogenesy a restenosy po angioplastii.

V předcházejícím i následujícím textu se používají dále uvedené zkratky pro zbytky těchto 20 aminokyselin:

Ala alanin

Asp asparagin

Asp (OR) kyselina asparagová (β-ester)

Arg arginin

Cys cystein

Gin glutamin

Glu kyselina glutamová

Gly glycin

His histidin

Ile isoleucin

Leu leucin

Lys lysin

Met methionin

Phe fenylalanin

Pro prolin

Ser serin

Thr threonin

Trp tryptofan

Tyr tyrosin

Val valin.

Dále se také používají další zkratky, které znamenají:

BOC CBZ DCCI MDF EDCI

Et

FMOC HOBt Me terč -butoxykarbonyl benzyloxykarbonyl dicyklohexylkarbodiimid d imethylformamid hydrochlorid N-ethyl-N’-(3-dimethylaminopropyl) karbodiimidu ethyl

9-fluorenylmethoxykarbonyl

1-hydroxybenzotriazol methyl

-2CZ 286170 B6

Mtr 4-methoxy-2, 3, 6-trimethylfenylsulfonyl

OBut terč.-buty lester

OMe methylester

OEt ethylester

POA fenoxyacetyl

TFA kyselina trifluorocotová.

Pokud u svrchu uvedených aminokyselin se může vyskytovat větší počet enantiomemích forem, tak jsou vpředu i v další části zahrnuty všechny tyto formy a také jejich směsi (například DL-formy), například jako součást sloučenin obecného vzorce I.

Předmětem tohoto vynálezu je dále způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I uvedeného výše nebo její soli, který spočívá vtom, že se uvolní ze svého funkčního derivátu zpracováním se solvolyzačním nebo hydrogenolyzačním činidlem nebo se peptid obecného vzorce II

H-Z-OH (II), ve kterém

Z znamená A-B-C-D-Arg-, —B—C—D—Arg—A—,

-C-D-Arg-A-B-D-Arg-A-B-C- nebo

-Arg-A-B-C-D-, nebo se reaktivní derivát takového peptidů zpracuje s cyklizačním činidlem a/nebo se bazická nebo kyselá sloučenina obecného vzorce I převede zpracováním s kyselinou nebo bází na svou sůl.

V předcházejícím i v následujícím textu mají zbytky A, B, C, D a Z významy uvedené u obecného vzorce I a II, pokud není výslovně uvedeno jinak.

V předcházejících vzorcích alk- s výhodou znamená methyl, ethyl, isopropyl nebo terc.-butyl.

Skupina A je s výhodou Val, zvláště D-Val. B znamená s výhodou Phe, zvláště D-Phe. C s výhodou představuje Asp, obzvláště D-Asp. D znamená výhodně Gly.

V tomto smyslu jsou předmětem vynálezu zvláště takové sloučeniny obecného vzorce I, ve kterých alespoň jeden ze jmenovaných zbytků má výše uvedené výhodné významy.

Výhodná skupina sloučenin se může vyjádřit částečným vzorcem Ia, který jinak odpovídá obecnému vzorci I, ve kterém však

A představuje D-Val,

B znamená Phe,

C představuje Asp a

D znamená Gly nebo Ala.

-3CZ 286170 B6

Sloučeniny obecného vzorce I a také výchozí sloučeniny pro jejich výrobu se obvykle vyrábějí známými způsoby, jako jsou popsány v literatuře (například v základních pracech, jako je Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart) a sice za reakčních podmínek, které jsou známé a vhodné pro uvedené reakce. Přitom se může používat 5 též známých, zde však blíže neuvedených variant.

Výchozí sloučeniny mohou vznikat, jestliže je to žádoucí, také in šitu, takže se nemusí izolovat z reakční směsi, pokud se hned dále použijí k reakci na sloučeniny obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou získat, když se uvolní ze svých funkčních derivátů solvolýzou, zvláště hydrolýzou, nebo hydrogenolýzou.

Výhodné výchozí sloučeniny pro solvolýzu nebo hydrogenolýzu jsou takové sloučeniny, které v místě jedné nebo většího počtu aminoskupin a/nebo hydroxyskupin obsahují odpovídající 15 chráněné aminoskupiny a/nebo hydroxyskupiny, s výhodou takové, které na místě atomu vodíku spojeného s atomem dusíku nesou skupinu chránící aminoskupinu, například takové, které odpovídají obecnému vzorci I, avšak v místě aminoskupiny obsahují skupinu vzorce NHR', ve kterém R' znamená chránící skupinu, například BOC nebo CBZ.

Dále jsou výhodné výchozí sloučeniny, které na místě atomu vodíku hydroxyskupiny obsahují skupinu chránící hydroxyskupinu, například takové sloučeniny, které odpovídají obecnému vzorce I, avšak místo hydroxyfenylové skupiny obsahují skupinu RO-fenylovou, kde R znamená skupinu chránící hydroxyskupinu.

V molekule výchozí sloučeniny může být také přítomno více stejných nebo rozdílných chráněných aminoskupin a/nebo hydroxyskupin. V případě, že přítomné chránící skupiny jsou navzájem odlišné, mohou být v řadě případů selektivně odštěpeny.

Výraz skupina chránící aminoskupinu je obecně znám a vztahuje se na skupiny, které chrání 30 (blokují) aminoskupinu před chemickou reakcí, a které jsou lehce odštěpitelné, poté co se provedla požadovaná chemická reakce v jiných místech molekuly. Typickými takovými skupinami jsou obzvláště nesubstituované nebo substituované acylové, arylové, aralkoxymethylové nebo aralkylové skupiny. Protože se skupina chránící aminoskupinu po požadované reakci (nebo reakčním sledu) odštěpí, její druh a velikost obecně není rozhodující, avšak výhodně se používají 35 takové skupiny, které obsahují 1 až 20 atomů uhlíku, zvláště 1 až 8 atomů uhlíku. Výraz acylová skupina se má chápat v souvislosti s předloženým způsobem v nejširším smyslu. Tento výraz zahrnuje acylové skupiny odvozené od alifatických, aralifatických, aromatických nebo heterocyklických karboxylových kyselin nebo sulfonových kyselin, zvláště pak jde o alkoxykarbonylové, aryloxykarbonylové a především aralkoxykarbonylové skupiny. Příklady takových 40 acylových skupin jsou alkanoylové skupiny, jako je acetyl, propionyl nebo butyryl, aralkanoylové skupiny, jako je fenylacetyl, aroylové skupiny, jako je benzoyl nebo toluyl, aryloxyalkanoylové skupiny, jako je POA, alkoxykarbonylové skupiny, jako je methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl, BOC nebo 2-jodethoxykarbonyl, aralkoxykarbonylové skupiny, jako je CBZ (karbobenzoxyskupina), 4-methoxybenzyloxy45 karbonyl nebo FMOC a arylsulfonylové skupiny, jako je Mtr. Výhodné skupiny chránící aminoskupinu jsou BOC a Mtr, dále CBZ, FMOC, benzyl a acetyl.

Výraz skupina chránící hydroxyskupinu je rovněž obecně známý a vztahuje se na skupiny, které jsou výhodné k ochraně hydroxyskupiny před chemickou reakcí, které se však lehce 50 odštěpují, poté co proběhla chemická reakce na jiném místě molekuly. Obvyklé takové skupiny jsou svrchu uvedené nesubstituované nebo substituované arylové, aralkylové nebo acylové skupiny, dále také alkylové skupiny. Povaha a velikost skupin chránících hydroxyskupinu není rozhodující, protože se skupina chránící hydroxyskupinu po požadované reakci nebo reakčním sledu znovu odštěpí, avšak výhodné jsou takové skupiny, které obsahují 1 až 20 atomů uhlíku,

-4CZ 286170 B6 zvláště 1 až 10 atomů uhlíku. Příklady skupin chránících hydroxyskupinu jsou mimo jiné benzyl, p-nitrobenzyl, p-toluensulfonyl a acetyl, přičemž benzyl a acetyl jsou obzvláště výhodné.

Karboxyskupiny v kyselině aspargové a kyselině glutamové jsou s výhodou chráněny ve formě svého terc.-butylesteru (například Asp(OBut)).

Funkční deriváty sloučenin obecného vzorce I, používané jako výchozí sloučeniny, se mohou vyrobit obvyklými způsoby pro syntézu aminokyselin a peptidů, jako například je popsáno v základních pracech a patentových přihláškách, například způsobem prováděným v tuhé fázi podle Merrifíelda (B. F. Gysin a R. B. Merrifíeld, J. Am. Chem. Soc. 94, 3102 a násl. /1972/).

Uvolnění sloučenin obecného vzorce I z jejich funkčních derivátů se provádí, vždy podle použité funkční skupiny, například působením silných kyselin, účelně kyseliny trifluoroctové nebo kyseliny chloristé, avšak také působením jiných silných anorganických kyselin, jako kyseliny chlorovodíkové nebo kyseliny sírové, silných organických karboxylových kyselin, jako kyseliny trichloroctové nebo sulfonových kyselin, jako kyseliny benzensulfonové nebo kyseliny ptoluensulfonové. Přítomnost dodatkového inertního rozpouštědla je možná, avšak není vždy potřebná. Jako inertní rozpouštědlo se hodí s výhodou organické rozpouštědlo, například karboxylové kyseliny, jako je kyselina octová, ethery, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, amidy, jako je dimethylformamid, halogenované uhlovodíky, jako je dichlormethan, dále také alkoholy, jako methanol, ethanol nebo isopropanol, stejně jako voda. Dále přicházejí v úvahu směsi uvedených rozpouštědel. Kyselina trifluoroctová se s výhodou používá v přebytku bez přídavku dalšího rozpouštědla, kyselina chloristá ve formě směsi sestávající z kyseliny octové a 70 % kyseliny chloristé v poměru 9:1. Reakční teploty pro štěpení jsou účelně od přibližně 0 do zhruba 50 °C, s výhodou se pracuje za teploty od 15 do 30 °C (teplota místnosti).

Skupiny BOC, OBut aMtr se mohou s výhodou odštěpit působením kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu nebo působením 3- až 5-normální kyseliny chlorovodíkové v dioxanu za teploty od 15 do 30 °C. FMOC skupina se může odštěpit působením přibližně 5 až 50 % roztoku dimethylaminu, diethylaminu nebo piperidinu v dimethylformamidu za teploty od 15 do 30 °C.

Hydrogenolyticky odštěpitelné chránící skupiny (například CBZ nebo benzyl) se mohou odštěpit zpracováním s vodíkem v přítomnosti katalyzátoru (například katalyzátoru na bázi drahých kovů, jako je palladium, účelně na nosiči, jako na uhlí). Jako rozpouštědlo se přitom hodí svrchu uvedená rozpouštědla, zvláště například alkoholy, jako je methanol nebo ethanol, nebo amidy, jako je dimethylformamid. Hydrogenolýza se zpravidla provádí za teplot přibližně od 0 do 100 °C a tlaku zhruba od 100 kPa do 20 MPa, s výhodou za teploty od 20 do 30 °C a tlaku od 100 kPa do 1 MPa. Hydrogenolýza CBZ skupiny se dobře daří například na 5% až 10% palladiu na uhlí v methanolu nebo působením formiátu amonného za teploty od 20 do 30 °C.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou získat cyklizací sloučenin obecného vzorce II za podmínek pro syntézu peptidů. Přitom se účelně pracuje obvyklými způsoby známými pro syntézu peptidů, jako jsou například popsány v publikaci Houben-Weyl, citováno výše, sv. 15/Π, str. 1 až 806/1974/.

Reakci se daří s výhodou provádět v přítomnosti dehydratačního činidla, například karbodiimidu, jako je DCCI nebo EDCI, dále anhydridu kyseliny propanfosfonové (srov. Angew. Chem. 92, 129 /1980/), difenylfosforylazidu nebo 2-ethoxy-N-ethoxykarbonyl-l,2-dihydrochinolinu, v inertním rozpouštědle, například halogenovaném uhlovodíku, jako je dichlormethan, etheru, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, amidu, jako je dimethylformamid nebo dimethylacetamid, nitrilu, jako je acetonitril, nebo směsi těchto rozpouštědel, za teplot od přibližně -10 do 40 °C, s výhodou od 0 do 30 °C. Aby se podpořila intramolekulámí cyklizace intramolekulámí peptidové vazby, je účelné pracovat ve zředěném rozpouštědle (zásada rozředění).

-5 CZ 286170 B6

Místo sloučenin obecného vzorce II se mohou také při reakci používat reaktivní deriváty těchto sloučenin, například takové, ve kterých jsou reaktivní skupiny intermediámě blokovány chránícími skupinami. Deriváty aminokyselin obecného vzorce II se mohou používat například ve formě svých aktivovaných esterů, které se účelně tvoři in šitu, například přídavkem HOBt nebo N-hydroxysukcinimidu.

Výchozí sloučeniny obecného vzorce II jsou zpravidla nové sloučeniny, které se mohou vyrábět známými způsoby, například způsoby popsanými výše pro syntézu peptidů a odštěpením chránících skupin.

Zpravidla se především syntetizuje chráněný ester pentapeptidu obecného vzorce R-Z-OR, například BOC-Z-OMe bnebo BOC-Z-OEt, který se nejprve zmýdelní na kyseliny obecného vzorce R-Z-OH, například BOC-Z-OH a z této sloučeniny se odštěpí chránící skupina R', čímž se dostanou volné peptidy obecného vzorce II

H-Z-OH (Π).

Báze obecného vzorce I se může převést reakcí s kyselinou na příslušnou adiční sůl s kyselinou. Pro tuto reakci přicházejí v úvahu zvláště kyseliny, které poskytují fyziologicky nezávadné soli. Tak se mohou použít anorganické kyseliny, například kyselina sírová, kyselina dusičná, halogenovodíkové kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková nebo kyselina bromovodíková, kyseliny fosforečné, jako je kyselina orthofosforečná, nebo kyselina sulfamová, dále organické kyseliny, zvláště alifatické, alicyklické, aralifatické, aromatické nebo hetrocyklické jednosytné nebo vícesytné karboxylové, sulfonové nebo sírové kyseliny, například kyselina mravenčí, kyselina octová, kyselina propionová, kyselina pivalová, kyselina diethyloctová, kyselina malonová, kyselina jantarová, kyselina pimelová, kyselina fumarová, kyselina maleinová, kyselina mléčná, kyselina vinná, kyselina jablečná, kyselina benzoová, kyselina salicylová, kyselina 2- nebo 3-fenylpropionová, kyselina citrónová, kyselina glukonová, kyselina askorbová, kyselina nikotinová, kyselina isonikotinová, kyselina methansulfonové, kyselina ethansulfonová, kyselina ethandisulfonová, kyselina 2-hydroxyethansulfonová, kyselina benzensulfonová, kyselina p-toluensulfonová, kyselina nafitalenmonosulfonová, kyselina naftalendisulfonová a kyselina laurylsírová. Soli s fyziologicky nepřijatelnými kyselinami, například pikráty, se mohou používat k izolaci a/nebo přečištění sloučenin obecného vzorce I.

Na druhé straně se kyselina obecného vzorce I převede reakcí sbází na svou fyziologicky přijatelnou sůl s kovem nebo sůl amonnou. Jako soli přitom přicházejí v úvahu zvláště soli sodné, draselné, hořečnaté, vápenaté a amonné, dále substituované amonné soli, například dimethylamonná, diethylamonná nebo diisopropylamonná sůl, monoethanolamonná, diethanolamonná nebo triethanolamonná sůl, cyklohexylamonná a dicyklohexylamonná sůl, dibenzylethylendiamonná sůl, dále například soli s N-methyl-D-glukaminem nebo s argininem nebo lysinem.

Nové sloučeniny obecného vzorce I ajejich fyziologicky přijatelné soli se mohou používat pro výrobu farmaceutických prostředků, pokud se ve vhodné dávkové formě uvedou do styku dohromady s alespoň jednou nosnou látkou nebo látkou pomocnou a podle potřeby také dohromady s alespoň jednou další účinnou látkou. Takto získané prostředky se mohou používat v humánní a veterinární medicíně jako léčiva. Jako nosné látky přicházejí v úvahu organické nebo anorganické látky, které jsou vhodné pro enterální (například orální nebo rektální), parenterální (například intravenózní injekce) nebo lokální (například topické, dermální, oftalmické nebo nasální) aplikace nebo pro použití ve formě inhalačních sprejů a s novými sloučeninami nereagují, jako je například voda, vodné isotonické roztoky chloridu sodného, nižší alkoholy, rostlinné oleje, benzylalkohol, polyethylenglykoly, triacetát glycerinu a jiné glyceridy mastných kyselin, želatina, sojový lecithin, uhlohydráty, jako laktóza nebo škroby, stearát hořečnatý, mastek, celulóza a vazelína. Pro perorální podání slouží zvláště tablety, dražé, kapsle,

-6CZ 286170 B6 sirupy, šťávy nebo kapky, přičemž zajímavé jsou zvláštní lakované tablety a kapsle s povlakem odolným proti žaludečním šťávám nebo povlečené kapsle. K rektálnímu použití slouží čípky, k parenterální aplikaci roztoky, s výhodou olivové nebo vodné roztoky, dále suspenze, emulze nebo implantáty. K topickému použití se hodí například roztoky, které se používají ve formě očních kapek, dále například suspenze, emulze, krémy, masti nebo komprimáty. Pro použití jako inhalační spreje se mohou používat takové spreje, které obsahují účinnou látku rozpuštěnou nebo suspendovanou ve vynášecím plynu nebo směsi vynášecích plynů (například v oxidu uhličitém nebo fluorovaných a současně chlorovaných uhlovodících). Účinná látka se účelně přitom používá v mikronizováné formě, přičemž se může přidávat jedna nebo větší počet dodatkových fyziologicky snášenlivých rozpouštědel, jako je například ethanol. Inhalační roztoky se mohou podávat pomocí obvyklých inhalátorů. Nové sloučeniny se mohou také lyofilizovat a získané lyofxlizáty se mohou použít například pro přípravu injekčních přípravků. Injekce se mohou přitom podávat jako bolus nebo jako nepřetržitá infuze (například intravenózní, intravaskulámí, subkutánní nebo intratekální). Uvedené prostředky se mohou sterilizovat a/nebo mohou obsahovat pomocné látky, jako konzervační prostředky, stabilizátory a/nebo smáčecí prostředky, emulgační činidla, soli k ovlivnění osmotického tlaku, pufry, barviva a/nebo aromatické látky. Prostředky mohou podle potřeby obsahovat také nejméně jednu další účinnou látku, například jeden nebo větší počet vitaminů.

Látky podle tohoto vynálezu se mohou zpravidla podávat analogicky, jako známé v obchodě dostupné peptidy, zvláště však sloučeniny popsané v US patentu č. 4 472 305, s výhodou v dávce přibližně od 0,05 do 500 mg, obzvláště od 0,5 do 100 mg na dávkovou jednotku. Denní dávka je s výhodou od přibližně 0,01 do 2 mg/kg tělesné hmotnosti. Zvláštní dávka pro každého určitého pacienta však závisí na různých okolnostech, například na účinnosti použité zvláštní sloučeniny, stáří, tělesné hmotnosti, obecném zdravotním stavu, pohlaví, ceně, době a cestě podání, rychlosti vylučování, kombinaci léčiv a obtížnosti příslušného onemocnění, kterého se týká terapie. Parenterální aplikace je výhodná.

Příklady provedení vynálezu

V předcházejícím i následujícím textu se teploty uvádějí, jak je obvyklé, ve stupních celsia.

V dále uvedených příkladech se za způsob obvyklého zpracování pokládá, když se podle potřeby přidá vody, provede neutralizace, extrakce etherem nebo dichlormethanem, oddělení fází, vysušení organické fáze síranem sodným, filtrace, odpaření a čistění chromatografií na silikagelu a/nebo krystalizací. RD označuje dobu retence (v minutách) při vysoko účinné kapalinové chromafografii na sloupci naplněném LiChrosorb RP selecí B (250 až 4,7 pm), eluční činidlo: 0,3 % kyselina trifluoroctová ve vodě, isopropanolový gradient od 0 do 80 % objemových za dobu 50 minut při průtoku 1 ml/min, detekce se provádí při vlnové délce 215 nm. NT označuje molekulární pík v hmotnostním spektru, získaný technikou bombardování rychlými atomy.

Příklad 1

Roztok 30 mg cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) (který se může získat cyklizací H-D-Arg(Mtr)-D-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-OH způsobem provedeným podle příkladu 2) v 840 μΐ TFA, 170 μΐ dichlormethanu a 85 μΐ thiofenolu se nechá stát za teploty 20 °C po dobu 2 hodin, a poté se odpaří za sníženého tlaku při teplotě 37 °C a po zředění vodou lyofilizuje. Po gelové fitraci za Sephadexu G 10 ve směsi kyseliny octové a vody v poměru 1:1 a následujícím čistění vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na sloupci naplněném LiChrosorb RP 8 s isopropanolovým gradientem v 0,3 % TFA ve vodě se dostane cyklo-(DVal-L-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg), RD 17,9, M* 575.

-7CZ 286170 B6

Analogickým způsobem se získá:

z cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-GlyD-Arg), RD 18,5, Nf 575, z cyklo-(D-Val-D-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-L-Asp-GlyD-Arg), RD 19,3, M* 575, zcyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OBut)-L-Ala-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-LAla-D-Arg), RD 20, 3, M⁺ 589, z cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-D-Phe-DAsp(OMe)-Gly-L-Arg), RD 21, 4, M⁺ 589, z cyklo-(D-V al-E>-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-V al-D-Phe-L-Asp-GlyL-Arg), z cyklo-(L-V al-D-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(L-V al-D-Phe-D-Asp-GlyL-Arg), z cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp-GlyL-Arg), z cyklo-(L-V al-D-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(L-V al-D-Phe-L-Asp-G lyD-Arg), z cyklo-(D-V al-L-Phe-L-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(D-V al-L-Phe-L-Asp-GlyD-Arg), z cyklo-(L-V al-L-Phe-D-Asp(OBut)-Gly-D-Arg(Mtr)) cyklo-(L-V al-L-Phe-D-Asp-GlyD-Arg), zcyklo-(L-Val-D-Phe-L-Asp(OBut)-D-Ala-L-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-D-Phe-L-Asp-DAla-L-Arg), z cyklo-(D-Val-L-Phe-L-Asp(OBut)-D-Ala-L-Arg(Mtr)) cyklo-(D-Val-L-Phe-L-Asp-DAla-L-Arg), z cyklo-(L-Val-L-Phe-D-Asp(OBut)-D-Ala-L-Arg(Mtr)) cyklo-(L-Val-L-Phe-D-Asp-DAla-L-Arg) a z cyklo-(L-V al-L-Phe-L-Asp(OBut)-D-Ala-D-Arg(Mtr)) cyklo-(L-V al-L-Phe-L-Asp-DAla-D-Arg).

Příklad 2

Roztok 80 mg H-L-Arg-D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-ONa (který se může získat odštěpením FMOC skupiny z FMOC-L-Arg-D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-O-Wang, kde OWang znamená zbytek —4-oxymethylfenoxymethyl-polysterenu použitý při Merrfieldově syntéze, zesíťováného z 1 % p-divinylbenzenem, působením morfolinu a odštěpením pentapeptidu od polymeru působením směsi TFA a dichlormethanu v poměru 1:1) v 8 ml DMF se zředí 72 ml dichlormethanu a uvede do styku s 34 mg jemně práškového hydrogenuhličitanu

-8CZ 286170 B6 sodného. Po vysušení směsí tuhého oxidu uhličitého a acetonu se přidá 34 μΐ difenylfosforylazidu. Vše se nechá stát za teploty 20 °C po dobu 16 hodin a poté se oddestiluje za teploty 37 °C dichlormethan. Zbývající roztok se podrobí gelové filtraci (na sloupci Sephadex G10 se směsí isopropanolu a vody v poměru 8:2) a poté se podrobí chromatografíi na sloupci polymeru (Mitsubishi MCI CHP-20P), za použití isopropanolového gradientu ve vodě. Tak se získá cyklo(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg), RD 21,4, NT 589.

Dále uvedené příklady se týkají farmaceutických prostředků.

Příklad A: Injekční lahvičky

Roztok 100 g cyklopeptidu obecného vzorce I a 5 g hydrogenfosforečnanu sodného ve 3 litrech dvakrát destilované vody se upraví 2-normální kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu pH 6,5, sterilně filtruje, plní do injekčních lahviček, lyofilizuje za sterilních podmínek a sterilně uzavře. Každá injekční lahvička obsahuje 5 mg účinné látky.

Příklad B: Čípky

Směs 20 g účinné látky obecného vzorce I se roztaví se 100 g sojového lecithinu a 1400 g kakaového másla, nalije do forem a nechá vychladnout. Každý čípek obsahuje 20 mg účinné látky.

Příklad C: Roztok

Připraví se roztok z 1 g účinné látky obecného vzorce I, 9,38 g dihydrátu dihydrogenfosforečnanu sodného, 28,48 g dodekahydrátu hydrogenfosforečnanu dvojsodného a0,lg benzalkoniumchloridu v 940 ml dvakrát destilované vody. Hodnota pH se upraví na 6,8, roztok se doplní na 1 litr a sterilizuje působením záření. Tento roztok se může použít ve formě očních kapek.

Příklad D: Mast

500 mg účinné látky obecného vzorce I se smíchá s 99,5 g vazelíny za aseptických podmínek.

Příklad E: Tablety

Směs 100 g cyklopeptidu obecného vzorce I, 1 kg laktózy, 600 g mikrokrystalické celulózy, 600 g kukuřičného škrobu, 100 g polyvinylpyrrolidonu, 80 g mastku a 10 g stearátu hořečnatého se obvyklým způsobem slisuje na tablety tak, že každá tableta obsahuje 10 mg účinné látky.

Příklad F: Dražé

Vylisují se tablety jako je uvedeno v příkladu E a poté se povléknou obvyklým způsobem povlakem ze sacharózy, kukuřičného škrobu, mastku, tragantu a barviva.

-9CZ 286170 B6

Příklad G: Kapsle

Obvyklým způsobem se naplní tvrdé želatinové kapsle účinnou látkou obecného vzorce I tak, že každá kapsle obsahuje 5 mg účinné látky.

Příklad H: Inhalační sprej g účinné látky obecného vzorce I se rozpustí v 10 litrech isotonického roztoku chloridu sodného a roztok se plní do obchodně dostupných rozstřikovacích nádobek opatřených čerpacím mechanizmem. Roztok se může rozstřikovat do úst nebo do nosu. Rozstřikovaný objem (přibližně 0,1 ml) odpovídá dávce přibližně 0,14 mg účinné látky.

Farmakologické testy

Sloučeniny podle tohoto vynálezu byly testovány s ohledem na jejich schopnost inhibovat vázání určitých ligandů na a_vp₃- a anbP₃-receptory.

Testy byly prováděny metodou, kterou popsal J. W. Smith a kol. v J. Biol. Chem. 265, 1226712271 /1990/. Byly dosaženy tyto výsledky:

M⁺+l (FAB) /RD (min) (HPLC)	Sekvence	Příklad	Farmakologické hodnoty IC₅₀ (pmol/l)
			koncentrační rozmezí 0,001 až 5 gmol FGN: a_vp₃ a_nbp₃
575/18,5	cyklo-(DV al-DPhe-DAsp-Gly-DArg)	1	méně než 0,001 5
575/19,3	cyklo-(DV al-DPhe-Asp-Gly-DArg)	1	0,2 5
589/20,3	cyklo-(DV al-DPhe-DAsp-Ala-DArg)	1	2,5 5
589/21,4	cyklo-(DV al-DPhe-DAsp(OMe)-Gly-Arg)	1	0,02 5
575/17,9	cyklo-(DV al-Phe-DAsp-Gly-DArg)	1	0,2 5

Vysvětlení zkratek:

RD doba retence (v minutách)

HPLC vysoko účinná kapalinová chromafografíe, obdobné podmínky jako jsou uvedeny pod příklady provedení vynálezu

FGN fibrinogen a_vp₃ receptor (izolován) anb33 receptor (izolován)

Výsledky testu dokládají integrinový inhibiční účinek sloučenin podle tohoto vynálezu. Zjištěný účinek ukazuje, že tyto sloučeniny jsou schopny inhibovat a_vp₃- a a_1Ibp₃- receptory. Proto sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou například vhodné k inhibici osteoklastů na kosti a proto

- 10CZ 286170 B6 katabolismu kostí. Kromě toho je inhibiční účinek velmi důležitý pro léčbu angiogenese, trombózy, zhoubných nádorů a jiných onemocnění, která se podle údajů uvedených v popisu výše dají s jejich pomocí ošetřovat. Všechny tyto nemoci jsou spojeny s adhezí určitých buněk a mohou se léčit účinnou inhibici takové adheze.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Cyklopeptid obecného vzorce I cyklo-(A-B-C-D-Arg) (I), ve kterém

AaB znamenají vždy nezávisle na sobě Ala, Asn, Asp, Arg,

Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe,

Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr nebo Val,

C představuje Asp nebo Asp(O-Ci_4-alkyl) a

D znamená Gly nebo Ala, přičemž alespoň dva uvedené zbytky aminokyseliny jsou v D-formě, stejně jako jejich soli.
2. Cyklo-(D-Val-L-Phe-D-Asp-Gly-D-Arg).
3. Cyklo-(I>-Val-D-Phe-D-Asp-Gly-L-Arg).
4. Cyklo-(D-Val-D-Phe-L-Asp-Gly-D-Arg).
5. Cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp-L-Ala-D-Arg).
6. Cyklo-(D-Val-D-Phe-D-Asp(OMe)-Gly-L-Arg).
7. Způsob výroby cyklopeptidu obecného vzorce I podle nároku 1 nebo jeho soli, vyznačující se tím, že se uvolní ze svého funkčního derivátu zpracováním se solvolyzačním nebo hydrogenolyzačním činidlem nebo se peptid obecného vzorce Π

H-Z-OH (Π), ve kterém

Z znamená A-B-C-D-Arg-,

-B-C-D-Arg-A-C-D-Arg-A-B-,

- 11 CZ 286170 B6

-D-Arg-A-B-C- nebo

-Arg-A-B-C—D-, nebo reaktivní derivát takového peptidu zpracuje s cyklizačním činidlem a/nebo se bazická nebo kyselá sloučenina obecného vzorce I převede zpracováním s kyselinou nebo bází na svou sůl.
8. Farmaceutický prostředek k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu, trombózy, srdečního infarktu, arteriosklerózy, zánětů, apolexie, angíny pectoris, zhoubných nádorů, osteolytických onemocnění, zvláště osteoporózy, angiogenesy arestenosy po angioplastii, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden cyklopeptid obecného vzorce I podle nároku 1 a/nebo její fyziologicky přijatelnou sůl.
9. Použití cyklopeptidu obecného vzorce I podle nároku 1 a/nebo jejich fyziologicky přijatelných solí k výrobě léčiva k profylaxi a ošetřování nemocí krevního oběhu, trombózy, srdečního infarktu, arteriosklerózy, zánětů, apolexie, angíny pectoris, zhoubných nádorů, osteolytických onemocnění, zvláště osteoporózy, angiogenesy a restenosy po angioplastii.