CZ282296B6 - Nové antibiotikum, Balhimycin, způsob jeho výroby a jeho použití jako léčiva - Google Patents
Nové antibiotikum, Balhimycin, způsob jeho výroby a jeho použití jako léčiva Download PDFInfo
- Publication number
- CZ282296B6 CZ282296B6 CS912334A CS233491A CZ282296B6 CZ 282296 B6 CZ282296 B6 CZ 282296B6 CS 912334 A CS912334 A CS 912334A CS 233491 A CS233491 A CS 233491A CZ 282296 B6 CZ282296 B6 CZ 282296B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- balhimycin
- dsm
- fermentation
- carried out
- culture
- Prior art date
Links
- WKNFBFHAYANQHF-UHFFFAOYSA-N bahlmycin Natural products C=1C2=CC=C(O)C=1C1=C(O)C=C(O)C=C1C(C(O)=O)NC(=O)C1NC(=O)C2NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC(C=3OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)=CC2=CC=3OC(C(=C2)Cl)=CC=C2C1OC1CC(C)(N)C(=O)C(C)O1 WKNFBFHAYANQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 40
- 108700008956 balhimycin Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- WKNFBFHAYANQHF-QITLWLKTSA-N balhimycin Chemical compound O([C@H]1C2=CC=C(C(=C2)Cl)OC=2C=C3C=C(C=2O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)OC2=CC=C(C=C2Cl)[C@H](O)[C@@H](C(N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]2C(=O)N[C@@H]1C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@@H]1C[C@@](C)(N)C(=O)[C@H](C)O1 WKNFBFHAYANQHF-QITLWLKTSA-N 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 15
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 claims description 5
- VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N ethyl (2s,5s)-5-methylpyrrolidine-2-carboxylate;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.CCOC(=O)[C@@H]1CC[C@H](C)N1 VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 4
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 abstract description 6
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 abstract description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003820 Medium-pressure liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 4
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical class [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010053950 Teicoplanin Proteins 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N chembl2367892 Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(O)C=C(C=4)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@H](CC=4C=C(Cl)C(O5)=CC=4)C(=O)N3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1Cl)=CC=C1OC1=C(O[C@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O3)NC(C)=O)C5=CC2=C1 DDTDNCYHLGRFBM-YZEKDTGTSA-N 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 229960001608 teicoplanin Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 1
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- AQIXAKUUQRKLND-UHFFFAOYSA-N cimetidine Chemical compound N#C/N=C(/NC)NCCSCC=1N=CNC=1C AQIXAKUUQRKLND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920006026 co-polymeric resin Polymers 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000004185 countercurrent chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hcl hcl Chemical compound Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical class [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229920003053 polystyrene-divinylbenzene Polymers 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N propan-2-one;hydrate Chemical compound O.CC(C)=O OVARTBFNCCXQKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- -1 reverse phase silica Chemical compound 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K4/00—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof
- C07K4/04—Peptides having up to 20 amino acids in an undefined or only partially defined sequence; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/04—Actinomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
Nové glykopeptidové antibiotikum nazvané Balhimycin molekulového vzorce C.sub.66.n.H.sub.73.n.Cl.sub.2.n.N.sub.9.n.O.sub.24 .sub..n.produkované mikroorganismem Actinomycete species Y-86, 21 022 /DSM 5908/, způsob jeho přípravy a léčiv, která jej obsahují.ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká nového glykopeptidového antibiotika, nazvaného Balhimycin, získatelného z aktinomycetové kultury Hoechst India Limited Y-86,21022. Balhimycin může být popsán jako antibakteriální antibiotikum, náležící do třídy glykopeptidů. Vynález se rovněž týká způsobu přípravy Balhimycinu, farmaceutického prostředku, obsahujícího tento Balhimycin jako účinnou složku, použití Balhimycinu jako antibiotika a rovněž nové aktinomycetové kultury Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908).
Dosavadní stav techniky
Glykopeptidová antibiotika jsou úzkospektrální antibiotika, působící hlavně proti Grampozitivním bakteriím. Jejich účinnost vůči S. aureus (MRSA) kmenům, rezistentním na methicillin, z něho učinila hodnotné léčivo při léčení infekcí, vyvolaných, MRSA. Tato glykopeptidová antibiotika jsou také užitečná jako promotory růstu ve veterinární oblasti. Glykopeptidová antibiotika jsou popsána v publikacích: Topics in Antibiotic Chemistry, Vol. 5, strana 119 (1980), Joumal of Antibiotics, Vol. 38, str. 561 (1985), Joumal of Antibiotics, Vol. 40, str. 924 (1987), Joumal of Organic Chemistry, Vol. 54, str. 983 (1989).
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří Balhimycin, což je sloučenina sumárního molekulového vzorce
C66H73CI2N9O24 a strukturního vzorce:
HO + h2o
A
- H,0
- 1 CZ 282296 B6
jehož trifluoracetátová sůl má teplotu tání > 300 °C (za rozkladu), index lomu [cc]D -23,2 ± 2°(C=5, H2O) a UVmax (H2O) 208,285 nm, a který je získatelný produkčním mikroorganizmem Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908) a následnou izolací a čištěním z kultivačního prostředí, a rovněž farmaceuticky přijatelné soli této sloučeniny.
Podstata postupu výroby Balhimycinu podle vynálezu spočívá v tom, že Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908) mutanty a/nebo variety se kultivují za aerobních podmínek v živném médiu, obsahujícím zdroje uhlíku a dusíku, anorganické živné soli a stopové prvky, a takto získaná sloučenina se izoluje a čistí od kultivačního prostředí obvyklým způsobem.
Kultivace se ve výhodném provedení postupu podle vynálezu provádí při teplotě v rozmezí od 28 °C do 32 °C a při hodnotě pH v rozmezí od 6 do 8, nejvýhodněji při teplotě asi 29 °C ± 1 °C a hodnotě pH 7.
Výhodně se fermentace provádí po dobu v rozmezí 68 až 72 hodin, přičemž je rovněž výhodné tuto fermentaci provádět jako submerzní fermentaci.
Do rozsahu předmětného vynálezu náleží rovněž farmaceutický prostředek s antibiotickými účinky, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje uvedený Balhimycin v kombinaci s farmaceuticky přijatelnou nosičovou látkou a/nebo vehikulem nebo vehikuly.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží použití uvedeného Balhimycinu pro přípravu léčiva s antibiotickými účinky.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží nový mikroorganizmus Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908).
Balhimycin, který je zde popsán, se liší od všech známých glykopeptidových antibiotik svým molekulovým vzorcem. Navíc on-line rešerše v Chemical Abstracts, provedená na klíčová rešeršní hesla, týkající se molekulové hmotnosti a molekulového vzorce, potvrzují novost této sloučeniny.
-2 CZ 282296 B6
Mikroorganizmus, kultura č. Hoechst India Limited, Y-86,21022, uváděná v popisu předmětného vynálezu jako Y-86,21022, použitá pro produkci Balhimycinu, byla izolována z půdního vzorku, sebraného v Thamu forest, Himalaya, India. Mikroorganizmus Y-86,21022 náleží do řádu Actinomycetales. Mikroorganizmus Y-86,21022 je uložen v Deutsche Sammlung von Mikroorganismen za podmínek Budapešťské smlouvy, od 6. dubna 1990, pod číslem DSM 5908.
Dalším aspektem tohoto vynálezu je postup výroby nového antibiotika Balhimycin z kultury č. Hoechst India Limited Y-86,21022, jejích mutantů a variet. Uvedený způsob zahrnuje kultivaci kultury Y-86,21022, jejích mutantů a variet za aerobních podmínek v živném médiu, obsahujícím zdroje uhlíku a dusíku, živné anorganické soli a stopové prvky, a izolaci a čištění tohoto antibiotika z kultivačního prostředí. Zdroji uhlíku mohou být škrob, glukóza, sacharóza, dextrin, fruktóza, melasa, glycerol, laktóza nebo galaktóza. Výhodným zdrojem uhlíku je glycerol. Zdroje dusíku mohou být sojová moučka, moučka z podzemnice olejně, kvasnicový extrakt, hovězí extrakt, pepton, sladový extrakt, kukuřičný výluh, želatina nebo kasaminové kyseliny. Výhodným zdrojem dusíku je sojová moučka. Živnými anorganickými solemi mohou být hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, chlorid vápenatý, uhličitan vápenatý, dusičnan draselný, síran amonný nebo síran hořečnatý. Stopovými prvky mohou být soli železa, manganu, mědi, zinku nebo kobaltu nebo jiných těžkých kovů.
Kultivace kultury č. Y-86,21022 se výhodně provádí při teplotách mezi 28 až 32 °C a při hodnotách pH v rozmezí 6,0 až 8,0. Zejména se kultura č. Y-86,21022 kultivuje při teplotě asi 29 °C (± 1 °C) a pH asi 7,0.
Fermentace se provádí výhodně pod dobu 60 až 72 hodin, kdy se získá optimální výtěžek antibiotika podle tohoto vynálezu. Fermentace se zejména provádí po dobu 68 až 72 hodin za podmínek submerzní fermentace v třepacích baňkách, stejně jako v laboratorních fermentorech. V případě potřeby je možno použít ve fermentoru odpěňovací prostředek, jako je DesmophenR (Polyoly Bayer-AG Leverkusen, SRN). Postup fermentace a tvorbu sloučeniny podle tohoto vynálezu je možno sledovat vysokotlakou kapalinovou chromatografii (HPLC) a měřením bioaktivity kultivačního prostředí vůči druhům Staphylococcus, běžně známou testovací metodou na mikrobiální difúzi na agarové plotně. Výhodnou kulturou je v tomto případě Staphylococcus aureus 3066, která je rezistentní vůči methicillinu, což je beta-laktamové antibiotikum, popsané v literatuře.
Balhimycin může být například izolován z kultivačního bujónu přímou adsorpcí na vhodných adsorbentech, jako je aktivované uhlí, Diaion HP-20 (vysokoporézní pryskyřice na bázi polystyren-divinylbenzenového kopolymeru, Mitsubishi Chemical Industries, Japonsko) nebo Amberlite XAD (porézní pryskyřice na bázi polystyrenu a esteru kyseliny akrylové, Rohm and Haas Co., U.S.A). Výhodným adsorbentem je diaion HP-20. Balhimycin může být vyeluován z těchto adsorbentů pomocí mobilních fází, jako je voda, methanol, aceton, acetonitril nebo jejich vhodné kombinace. Výhodné eluenty jsou vodný methanol nebo aceton.
Výše zmíněné aktivní eluáty, obsahující Balhimycin, mohou být koncentrovány a potom dále čištěny různými způsoby. Například readsorpčními a elučními postupy s aktivovaným uhlím, Amberlitem XAD-4 a 7, Diaionem HP-20; gelovou filtrací se Sephadexem LH-20 nebo za pomoci G-série gelů (Pharmacia Fine Chemicals AB, Švédsko) za použití vody methanolu, acetonu nebo vhodných kombinací těchto látek jak eluentů; iontovýměnnou chromatografii s IRC-50 (IT) při rozmezí pH 6,5 až 8,5 za použití 0,1 N HCl jako eluentu; nebo střednětlakou kapalinovou chromatografii (MPLC) na vhodných adsorbentech, jako je například oxid křemičitý, modifikovaný oxid křemičitý, jako oxid křemičitý s reverzními fázemi, například oktadecyldimethylsilylovaný oxid křemičitý (RP-18) a neutrální oxid hlinitý. Dále je možno aplikovat protiproudou chromatografii s daným mnohosložkovým rozpouštědlovým systémem, která rovněž může být použita pro daný účel. Výhodný způsob čištění zahrnuje opakovanou
-3 CZ 282296 B6
MPLC na RP-18 za použití vodného methanolu nebo acetonitrilu, obsahujícího vhodné aditivum, jako například sůl nebo kyselinu, jako eluentu.
Balhimycin může být převeden na svou farmakologicky přijatelnou sůl, například reakcí s organickými nebo anorganickými kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková HCI, kyselina sírová H2SO4, kyselina citrónová, kyselina mléčná, kyselina jantarová, kyselina octová, kyselina trifluoroctová, což se provede běžně známým způsobem.
Fyzikálně chemické a spektrální vlastnosti Balhimycinu jsou uvedeny v tabulce 1, která následuje.
Tabulka 1
Fyzikálně-chemické a spektrální vlastnosti Balhimycinu (ve formě trifluoracetátové soli).
| vzhled chemický typ | : bílý prášek : bázický glykopeptid : vankomycinové třídy |
| rozpustnost teplota tání Mn22 | : voda, dimethylsulfoxid : 300 °C (rozklad) : -23,2 ± 2° (C=5, H2O) |
vysokotlaká kapalinová chromatografie (HPLC):
| retenční doba | : 4,2 min, 4 x (250 + 30) mm 10 μ ODS Hypersil kolona; eluent 18 % acetonitril ve vodě, obsahující 0,1 % TFA, průtok 2 ml/min, detekce 220 nm, rychlost posunu 10 mm/min, obr. 1 přiložených výkresů |
| molekulový vzorec | : C66H73CI2N9O24 určený vysokorozlišovací FAB hmotnostní spektrometrií (M + FT naměřeno: m/z 1446, 4204, vypočteno: m/z 1446, 4205 pro Có6 H74 CI2 N9 Ο24 |
| UVmax(H2O) *H NMR (400MHz D2O, 300K) | : 208, 285 nm : obr. 2 přiložených výkresů. |
Příklady provedení vynálezu
Předložený vynález je dále charakterizován následujícími příklady provedení a obsahem patentových nároků.
-4 CZ 282296 B6
Příklad 1
Izolace kultury Y-86,21022 z půdy /a/ složení živného izolačního média
| kukuřičný škrob kasein peptol kvasnicový extrakt K2HPO4 agarový prášek demineralizovaná voda pH | 10,0 g 1,0 g 1,0 g 1,0 g 0,5 g 13,0 g 1,0 1 7,5 |
/b/ ředění a izolace půdy g půdy, sebrané zThamu Forest, Himalaya, Indie, bylo přidáno do 90 ml sterilizované demineralizované vody ve 250 ml Erlenmeyerově bance, která byla třepána po dobu 2 hodin na rotační třepačce /220 otáček/min/. Výše uvedená suspenze půdy pak byla postupně ředěna v 10 násobných stupních až na/10'5/. Z posledního zředění byl 1 ml suspenze uložen do středu sterilní skleněné Petriho misky /15 cm v průměru/, do které bylo pak nalito přibližně 50 ml výše uvedeného izolačního média, doplněného 25 mcg/ml amphotericinu B jako protiplísňového prostředku a ochlazeno na 45 °C a miska byla důkladně provířena. Směs suspenze půdy a média byla ponechána usadit a byla inkubována při 28 °C /± 1 °C/ po dobu 7 dní. Petriho miska pak byla periodicky sledována a kultura č. Y-86,21022 byla izolována z rostoucích mikroorganizmů.
Příklad 2
Udržování kultury Y-86,21022
Složení udržovacího média
Kultura č. Y-86,21022 byla udržována na následujícím médiu
| sladový extrakt kvasnicový extrakt glukóza agarový prášek demineralizovaná voda pH | 10,0 g 4,0 g 4,0 g 13,0 g 1,01 7,0 |
Po úplném rozpuštění složek zahřátím bylo médium distribuováno do zkumavek a pak sterilizováno při 121 °C po dobu 20 minut. Zkumavky byly ochlazeny a ponechány ztuhnout v šikmé poloze. Šikmé agary byly naočkovány výpěstkem kultury č. Y-86,21022 drátěnou kličkou a inkubovány při 28 °C /± 1 °C/, dokud nebyl zjištěn dobrý nárůst. Náležitě vypěstované kultury byly uskladněny v chladničce při teplotě + 8 °C.
Příklad 3
Fermentace kultury Y-86,21022 v třepacích baňkách
-5 CZ 282296 B6
Složení očkovacího média
| glukóza sojová mouka kukuřičný výluh CaCO3 demineralizovaná voda pH | 15,0 g 15,0 g 5,0 g 2,0 g 1000 ml 7,0 |
Výše uvedené očkovací médium bylo rozděleno v 80 ml množstvích do 500 ml Erlenmeyerových baněk a autoklávováno po dobu 20 minut. Baňky byly ochlazeny na teplotu místnosti a každá baňka pak byla naočkována kličkou výše uvedenou vypěstovanou kulturou z příkladu 2 a třepána v rotační třepačce po dobu 72 minut při 240 otáčkách za minutu při teplotě 29 °C /± 1 °C/, čímž se získala očkovací kultura.
Složení produkčního média
| glycerol sojová mouka CaCO3 NaCl COC12 demineralizovaná voda PH | 15,0 g 10,0 g 1,0 g 5,0 g 0,001 g 1000 ml 7,0 |
Produkční médium bylo rozděleno po 60 ml množstvích do 500 ml Erlenmeyerových baněk a udržováno v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 20 minut. Baňky byly ochlazeny a pak naočkovány výše uvedenou očkovací kulturou /1% obj/obj./. Fermentace byla prováděna na rotační třepačce při 240 otáčkách za minutu a při teplotě 29 °C /± 1 °C/ po dobu 60 hodin.
Produkce antibiotika byla určována vysokotlakou kapalinovou chromatografií a testováním bioaktivity vůči S. aureus 3066 za použití hloubkově difuzní metody známým způsobem. Po získání byl kultivační bujón odstředěn a Balhimycin izolován z filtrátu kultury a vyčištěn, jak je popsáno v příkladu 4.
Příklad 4
Kultivace kultury č. Y-86,21022 ve fermentorech
Příprava očkovací kultury v třepacích baňkách
Očkovací médium z příkladu 3 bylo rozděleno po 160 ml množstvích do 1 litrových Erlenmeyerových baněk a autoklávováno po dobu 20 minut. Očkovací kultura byla pěstována v těchto baňkách, jak je popsáno v příkladu 3.
Provozní fermentace
Složení produkčního média
| glycerol sojová mouka CaCO3 NaCl | 15,0 g 10,0 g 1,0 g 5,0 g |
-6 CZ 282296 B6 demineralizovaná voda pH
1000 g
6,8
100 litrů produkčního média ve 150 litrovém Marubishi fermentoru spolu s 30 ml Desmophenu jako odpěňovadla bylo sterilizováno in šitu po dobu 24 minut při teplotě 121 °C, ochlazeno na 29 °C ± 1 °C a naočkováno 3 1 očkovací kultury, jak byla výše uvedena.
Fermentace probíhala za následujících podmínek:
teplota míchání aerace doba pěstování °C ± 0,5 °C
110 až 120 otáček/min až 100 epm až 72 hodin
Produkce antibiotika byla kontrolována bioaktivitou vůči S. auerus 3066. Když byla fermentace zastavena, pH kultivačního bujónu bylo 6,0 až 7,0. Kultivační bujón byl odstředěn, po harvestování a antibiotikum Balhimycin bylo izolováno a vyčištěno od kultivačního filtrátu, jak je dále popsáno.
Izolace a čištění Balhimycinu
Přibližně 100 1 získaného bujónu, jak je uvedeno v příkladu 4, bylo odděleno od mycelia odstředěním. Výsledný bujónový filtrát /80 1/,/pH 6,5/, prošel kolonou 5 litrů 1 Diaionu HP- 20 ve vodě. Kolona byla promyta 40 litry demineralizované vody, načež výplachy byly bezbarvé. Kolona pak byla promyta 8 litry 1M vodného roztoku NaCl, načež byla promyta 10 1 demineralizované vody. Tento proces byl ještě jednou opakován. Kolona pak byla promyta 10 litry 30 %ního MeOH ve vodě a nakonec eluována 51 1 75%ního MeOH ve vodě, sebraného ve frakcích o velikosti 1 litru. Přítomnost Balhimycinu v těchto eluátech byla kontrolována aktivitou vůči Staphylococcus aureus 3066, což je organizmus, rezistentní vůči methicillinu. Shromážděné aktivní eluáty byly koncentrovány za vakua při teplotě 40 až 45 °C na přibližně 1 1, který pak byl lyofilizován, čímž se získalo 30 gramů surového Balhimycinu jako prášku.
Výše uvedený surový Balhimycin pak byl podroben ve 3 dávkách po 10 g střednětlaké kapalinové chromatografií /MPLC/ na RP-18, naplněného v 6,5 x 55 cm skleněné koloně, mající objem vrstvy 1,2 1. Kolona byla eluována 2 1 vody, obsahující 0,1 % trifluoroctové kyseliny /TFA/, načež následovala eluce 5%ním acetonitrilem / 4 1/, 7,5%ním acetonitrilem, 9 a 10 %ním acetonitrilem /24,5 1/ ve vodě, obsahující 0,1 % TFA. Balhimycin byl vyeluován v 10 %ních acetonitrilových eluátech, které byly sloučeny do frakcí po 500 ml a kontrolovány in vitro antibiotickou aktivitou.
Sloučené aktivní eluáty byly koncentrovány za vysokého vakua při 40 °C a pak lyofilizovány, čímž se získalo 2,1 g Balhimycinu jako světležlutého prášku. 3 takovéto postupy daly celkem 6,3 g poločistého Balhimycinu z 30 g surového materiálu.
6,3 g takto získaného poločistého Balhimycinu bylo nakonec vyčištěno ve 3 dávkách po 2,1 g střednětlakou kapalinovou chromatografií na RP-18 v 6 x 45 mm skleněné koloně s objemem vrstvy 500 ml. Kolona byla promyta jedním litrem vody, obsahujícím 0,1 % TFA, načež byla promyta 2 litry a 1,5 1 5 %ního a 7,5 %ního acetonitrilu ve vodě, obsahující 0,1 % TFA. Vyeluovaný Balhimycin v 10%ním acetonitrilu ve vodě, obsahující 0,1 % TFA, byl kontrolován po 250 ml frakcích UV detektorem, pracujícím při 220 nm a antibiotickými zkouškami. Celkem 8 1 aktivních eluátů bylo koncentrováno za vysokého vakua při 40 °C, načež násl?dov?.la lyofilizace, čímž se získalo 600 mg Balhimycinu ve formě trifluoroctanové soli jako bílý prášek. Z 6,3 g poločistého Balhimycinu bylo vyrobeno 1,8 g čistého Balhimycinu.
-7 CZ 282296 B6
Biologické vlastnosti Balhimycinu
Antibakteriáiní účinnost Balhimycinu v hodnotách minimální inhibiční koncentrace /MIC/, vyžadovaných k inhibici růstu různých bakterií, je uvedena v tabulce 2.
Tabulka 2
Minimální inhibiční koncentrace /MIC/ Balhimycintrifluor acetátu zkoušený organizmus MIC /pg/ml/
S. aureus 209 P 0,39
S. aureus /MethR/ 0,39
| S. aureus 3066 /MethR/ | 0,78 |
| S. aureus E 690 /MethR/ | 0,39 |
| Streptococcus faecalis ATCC 29212 | 1,56 |
| S. faecD2177 | 0,78 |
| S. faec D Endococcen | 0,78 |
| S. faecium D-59 | 1,56 |
| S. faecium D-65 | 0,78 |
| Staph. epidermidis 178 | 1,56 |
| S. epi. 825 | 3,12 |
| S. epi. 823 /TeicoplaninR/ | 12,5 |
| Stap. haemolyticus 712 | 1,56 |
| S. haemo. 809 /TeicoplaninR/ | 6,25 |
| E. coli 9632 | > 100 |
| P. vulgaris | > 100 |
| Ps. aeruginosa | > 100 |
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Balhimycin sumárního molekulového vzorce C66H73C12N9O24 a strukturního vzorce:- H,0 ''Λ- H->0-9 CZ 282296 B6 jehož trifluoracetátová sůl má teplotu tání > 300 °C za rozkladu, index lomu [a]D 22 -23,2 ± 2° (C=5, H2O) a UVmax (H2O) 208,285 nm, a který je získatelný produkčním mikroorganizmem Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908) a následnou izolací a čištěním z kultivačního 0, prostředí, a rovněž farmaceuticky přijatelné soli této sloučeniny.
- 2. Způsob výroby Balhimycinu podle nároku 1, vyznačující se tím, že Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908) mutanty a/nebo variety se kultivují za aerobních spodmínek v živném médiu, obsahujícím zdroje uhlíku a dusíku, anorganické živné soli a stopové prvky, a takto získaná sloučenina se izoluje a čistí od kultivačního prostředí obvyklým způsobem.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se kultivace provádí při teplotě v rozmezí od 28 °C do 32 °C a při hodnotě pH v rozmezí od 6 do 8.
- 4. Způsob podle nároků 2 nebo 3, vyznačující se tím, že se kultivace provádí při teplotě 29 °C ± 1 °C a hodnotě pH 7.
- 5. Způsob podle některého z nároků 2 až 4, vyznačující se t í m , že se fermentace provádí po dobu v rozmezí 68 až 72 hodin.
- 6. Způsob podle některého z nároků 2 až 5, vyznačující se t í m , že se fermentace provádí jako submerzní fermentace.
- 7. Farmaceutický prostředek s antibiotickými účinky, vyznačující se tím, že obsahuje Balhimycin, sloučeninu podle nároku 1, v kombinaci s farmaceuticky přijatelnou nosičovou látkou a/nebo vehikulem nebo vehikuly.
- 8. Balhimycin podle nároku 1 pro přípravu léčiva s antibiotickými účinky.
- 9. Actinomycete species Y-86,21022 (DSM 5908).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP90114471 | 1990-07-27 | ||
| EP90119883 | 1990-10-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS233491A3 CS233491A3 (en) | 1992-03-18 |
| CZ282296B6 true CZ282296B6 (cs) | 1997-06-11 |
Family
ID=26125378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS912334A CZ282296B6 (cs) | 1990-07-27 | 1991-07-25 | Nové antibiotikum, Balhimycin, způsob jeho výroby a jeho použití jako léčiva |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0468504B1 (cs) |
| JP (1) | JP3119680B2 (cs) |
| KR (1) | KR100221687B1 (cs) |
| AT (1) | ATE159261T1 (cs) |
| AU (1) | AU648570B2 (cs) |
| CA (1) | CA2047997C (cs) |
| CY (1) | CY2114B1 (cs) |
| CZ (1) | CZ282296B6 (cs) |
| DE (1) | DE69127935T2 (cs) |
| DK (1) | DK0468504T3 (cs) |
| ES (1) | ES2108022T3 (cs) |
| FI (1) | FI101402B (cs) |
| GR (1) | GR3025433T3 (cs) |
| HR (1) | HRP940710B1 (cs) |
| HU (1) | HU215146B (cs) |
| IE (1) | IE912643A1 (cs) |
| IL (1) | IL98958A0 (cs) |
| IN (1) | IN171883B (cs) |
| NO (1) | NO305132B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ239130A (cs) |
| PT (1) | PT98444B (cs) |
| RU (1) | RU2043418C1 (cs) |
| YU (1) | YU48601B (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW213468B (cs) * | 1991-06-29 | 1993-09-21 | Hoechst Ag | |
| US5721208A (en) * | 1991-06-29 | 1998-02-24 | Hoechst Aktiengesellschaft | Glycopeptides a process for their preparation and their use |
| DE19523394A1 (de) * | 1995-06-28 | 1997-01-09 | Hoechst Ag | Verwendung von Balhimycin zur Leistungssteigerung bei Tieren sowie leistungssteigernde Mittel |
| JP2003515311A (ja) | 1999-02-03 | 2003-05-07 | ビオガル ジョジセルジャール アール テー． | 微生物学的方法によるシュードモン酸ａ抗生物質の調製方法 |
| DE19926770A1 (de) | 1999-06-11 | 2000-12-14 | Basf Ag | Nukleinsäurefragment und Vektor, enthaltend eine Halogenase, sowie ein Verfahren zur Halogenierung chemischer Verbindungen |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3067099A (en) * | 1955-09-16 | 1962-12-04 | Lilly Co Eli | Vancomycin and method for its preparation |
-
1989
- 1989-12-22 IN IN353/BOM/89A patent/IN171883B/en unknown
-
1991
- 1991-07-22 YU YU128491A patent/YU48601B/sh unknown
- 1991-07-25 DK DK91112517.7T patent/DK0468504T3/da active
- 1991-07-25 EP EP91112517A patent/EP0468504B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-25 RU SU5001142/13A patent/RU2043418C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1991-07-25 ES ES91112517T patent/ES2108022T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-07-25 NZ NZ239130A patent/NZ239130A/xx unknown
- 1991-07-25 DE DE69127935T patent/DE69127935T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-25 FI FI913569A patent/FI101402B/fi active
- 1991-07-25 IL IL98958A patent/IL98958A0/xx unknown
- 1991-07-25 PT PT98444A patent/PT98444B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-07-25 AT AT91112517T patent/ATE159261T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-07-25 KR KR1019910012751A patent/KR100221687B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-25 CZ CS912334A patent/CZ282296B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1991-07-26 CA CA002047997A patent/CA2047997C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-07-26 AU AU81453/91A patent/AU648570B2/en not_active Ceased
- 1991-07-26 NO NO912931A patent/NO305132B1/no unknown
- 1991-07-26 HU HU516/91A patent/HU215146B/hu not_active IP Right Cessation
- 1991-07-26 IE IE264391A patent/IE912643A1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-07-26 JP JP03186782A patent/JP3119680B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-10-20 HR HRP-1284/91 patent/HRP940710B1/xx not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-11-19 GR GR970403078T patent/GR3025433T3/el unknown
-
1998
- 1998-09-29 CY CY9800031A patent/CY2114B1/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0819155B2 (ja) | 脱マンノシルテイコプラニン誘導体 | |
| US5112806A (en) | Antibiotic, mersacidin, a process for the preparation thereof and the use thereof as a pharmaceutical | |
| EP0451957A2 (en) | Cyclohexapeptide compound | |
| CZ282296B6 (cs) | Nové antibiotikum, Balhimycin, způsob jeho výroby a jeho použití jako léčiva | |
| JPH0763387B2 (ja) | テイコプラニン‐様誘導体 | |
| EP1129208B1 (en) | Vancoresmycin, a process for its production and its use as a pharmaceutical | |
| US5451570A (en) | Antibiotic, balhimycin, a process for its production and its use as pharmaceutical | |
| US4293546A (en) | Anthracycline antibiotics produced by Streptosporangium fragilis Shearer sp. nov. ATCC 31519 | |
| JPH0213392A (ja) | ペプチド抗生物質 | |
| KR0172949B1 (ko) | 항생제 데옥시물룬도칸딘, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 약제 | |
| EP0818464B1 (en) | Methylsulfomycin l, a process for its production and its use | |
| EP0574857B1 (en) | Polycyclic compounds 31668P and 31668U, a process for their production and their use as antibiotic or antitumor agents | |
| JPH07114704B2 (ja) | 抗生物質ａ４２８６７およびその付加塩 | |
| JPH01242598A (ja) | 抗生物質ａ４２８６７誘導体 | |
| KR0141322B1 (ko) | 항생물질 키모렉신- 에이(kimorexin - a) 및 그 제조법 | |
| WO2003046192A1 (en) | Antibiotics ge 81112 factors a, b, b1, pharmaceutically acceptable salts and compositions, and use thereof | |
| EP0786471A1 (en) | Arthrichitin, a process for its production and its use | |
| NO322565B1 (no) | Amycomycin, en fremgangsmate for dens fremstilling og dens anvendelse som farmasoytisk middel, og farmasoytisk sammensetning |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20030725 |