CZ279523B6 - Mikrobiologický způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové - Google Patents

Mikrobiologický způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové Download PDF

Info

Publication number
CZ279523B6
CZ279523B6 CZ93763A CZ76393A CZ279523B6 CZ 279523 B6 CZ279523 B6 CZ 279523B6 CZ 93763 A CZ93763 A CZ 93763A CZ 76393 A CZ76393 A CZ 76393A CZ 279523 B6 CZ279523 B6 CZ 279523B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
malonyl
formula
microorganisms
soluble salts
aminocephalosporanic acid
Prior art date
Application number
CZ93763A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ76393A3 (en
Inventor
Sabine Dipl. Biol. Schurr
Andreas Dr. Tschech
Original Assignee
Lonza A.G.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lonza A.G. filed Critical Lonza A.G.
Publication of CZ76393A3 publication Critical patent/CZ76393A3/cs
Publication of CZ279523B6 publication Critical patent/CZ279523B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D505/00—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D505/10—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
    • C07D505/12—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 substituted in position 7
    • C07D505/14—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 substituted in position 7 with hetero atoms directly attached in position 7
    • C07D505/16—Nitrogen atoms
    • C07D505/18—Nitrogen atoms further acylated by radicals derived from carboxylic acids or by nitrogen or sulfur analogues thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Nové mikroorganismy, které se podrobí selekci tak, že jsou schopné zužitkovat lakton nebo jeho rozpustné soli vzorce I jako jediný zdroj uhlíku, dusíku a energie přes malonyl-lakton nebo jeho rozpustné soli vzorce II a posledně jmenové sloučeniny nekatabolizovat. Dále je popsán mikrobiologický způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové nebo jejich rozpustných solí obecného vzorce III s těmito mikroorganismy z derivátů cefalosporinu C nebo jejich rozpustných solí obecného vzorce IV. Dále je popsán nový způsob přípravy derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové obecného vzroce V z derviátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové.ŕ

Description

(57) Anotace:
Nové mikroorganismy Spingomonas sp. FBI DSM 7007 se získají selekcí tak, že jsou schopné zužitkovat lakton nebo jeho rozpustné soli vzorce I jako jediný zdroj uhlíku, dusíku a energie přes malonyl-lakton nebo jeho rozpustné soli vzorce II a posledně jmenové sloučeniny nekatabolizovat. Deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové nebo jejich rozpustné soli obecného vzorce III se připraví pomocí těchto mikroorganismů z derivátů cefalosporinu C nebo jejich rozpustných solí obecného vzorce IV. Deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové jsou meziprodukty pro výrobu cefalosporinových antibiotik.
HOOC—CH--(CH,),·
NH,
0‘
(Π) (ΠΓ) (IV)
Mikroorganismy Sphingomonas sp. FBI, deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové a způsob jejich přípravy
Oblast techniky
Vynález se týká nových derivátů kyseliny malonyl-7-amino-cefalosporanové nebo jejich rozpustných solí obecného vzorce III
(III) kde R znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo acetoxyskupinu, nového způsobu jejich přípravy z odpovídajících derivátů cefasporinu C, jakož i nových mikroorganismů, vhodných pro tento způsob.
V následujícím textu se pod pojmy deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové (vzorec III), deriváty cefálosporinu C (vzorec IV), malonyl-lakton vzorce II a lakton vzorce I rozumějí také jejich rozpustné soli, jako například jejich amonné nebo alkalické soli.
Dosavadní stav techniky
Deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové mohou například sloužit jako výchozí materiál pro přípravu derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové, které jsou zase důležité výchozí sloučeniny pro přípravu cefalosporinových antibiotik podle J. Bacteriol., 1987, sv. 169, č. 12, str. 5815-5820.
Až dosud nebyly známé ani chemické, ani mikrobiologické způsoby přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové. Je známo více mikrobiologických způsobů přípravy kyseliny
7-aminocefalosporanové z cefálosporinu C, jako je například popsáno v JP-A 62 48380. Nedostatek všech těchto způsobů však spočívá v tom, že nejsou použitelné v průmyslovém měřítku.
Podstata vynálezu
Úkolem vynálezu je poskytnout pomocí nových mikroorganismů nový, jednoduchý a ekonomický mikrobiologický způsob přípravy nových derivátů kyseliny malonyl 1-7-aminocefalosporanové.
Tento úkol se podle vynálezu řeší pomocí nových mikroorganismů podle patentového nároku 1, pomocí nového způsobu podle patentového nároku 2 a pomocí nových derivátů kyseliny malony 1-7-aminocefalosporanové podle patentového nároku 7.
Mikroorganismy podle vynálezu se vyberou selekcí tak, že jsou schopné zužitkovat lakton vzorce I
-1CZ 279523 B6 (I)
jako jediný zdroj uhlíku, dusíku a energie přes malonyl-lakton vzorce II
a posledně jmenovaný nekatabolizovat.
Tyto mikroorganismy jsou vybrány selekcí s laktonem vzorce I pomocí tradičních mikrobiologických technik, například z různých půdních vzorků. Jestliže se tedy pěstují mikroorganismy z půdních vzorků jako inokulum s laktonem vzorce I, získají se mikroorganismy, které jsou schopné s ním růst jako s jediným zdrojem uhlíku, dusíku a energie. Z těchto mikroorganismů se pak vyberou selekčními metodami, běžnými v oboru takové, které přeměňují laktonvzorce I na malonyl-lakton vzorce II a také ho nekatabolizují.
Pro selekci důležitý lakton vzorce I lze získat z komerčního desacetylcefalosporinu C. K tomu se desacetylcefalosporin C nejprve známým způsobem laktonizuje na odpovídající lakton podle Jefferay a spol., Biochem.J., 1961, 81, str. 591. Pro tvorbu požadovaného laktonu s rozštěpeným laktamovým kruhem vzorce I se pak laktamový kruh štěpí metodami, užívanými v oboru, například pomocí penicilinázy.
V zásadě jsou vhodné všechny mikroorganismy, které se získají takovým selekčním postupem. Tyto mikroorganismy nejsou v literatuře popsány a jsou součástí vynálezu. Selekcí se účelně získají mikroorganismy s označením FBI (DSM 7007), jakož i jejich mutanty á descendenty. Tyto mikroorganismy byly uloženy 25. 3. 1992 u Německé sbírky mikroorganismů a buněčných kultur GmbH, Mascheroderweg lb, D-3300 Braunschweig.
Po prioritě této přihlášky byly mikroorganismy identifikovány 16 S RNA-analýzou jako mikroorganismy, náležející k Sphingomonas sp.
-2CZ 279523 B6
Λ
r.
Vědecký popis Sphingomonas sp. FBI (DSM 7007):
buněčná forma šířka μιη délka μπι pohyblivost mrskání drobné tyčinky
0,4-0,6
0,8-1,5 +
polárně 1
Gram-reakce lyže 3 %ním KOH+ aminop.eptidáza (Cerny)+ spory oxidáza+ kataláza+ hlavní chinonová složka: ubichinon Q10 složení bází DNA podle HPLC-rychlé metody: 63 mol % G+C.
Selekce a růst se obvykle provádí v médiu, obsahujícím minerální soli, účelně v médiu, obsahujícím minerální soli, jehož složení je uvedeno v tabulce I (a a b). Pro pěstování mikroorganismů po uskutečněné selekci jsou však použitelná rovněž jiná média, jako například komerčně běžně užívaná plná média.
Po pěstování a selekci se účelně přidá lakton vzorce I v množství od 0,2 do 1 % hmot., výhodně od 0,3 do 0,6 % hmotn. do média, obsahujícího minerální soli.
Během selekce a pěstování je teplota účelně mezi 0 a 60 °C, výhodně mezi 20 a 40 °C.
Selekce a pěstování se účelně uskutečňují při pH od 5 do 9, výhodně od 6 do 8.
Jestliže se dosáhne účelné optické hustoty při 650 nm (OD650) od 0,1 do 1, lze mikroorganismy sklízet v oboru běžnými metodami a použít pro způsob podle vynálezu.
Mikroorganismy, získané touto selekcí, se podle vynálezu použijí ve způsobu podle vynálezu pro přeměnu derivátů cefalosporinu C obecného vzorce IV
kde R znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo acetoxyskupinu, jako substrátu na deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové obecného vzorce III
-3CZ 279523 B6 (III)
kde R má uvedený význam.
Způsob se účelně provádí s mikroorganismy Sphingomoňas sp. FBI (DSM 7007), získanými selekcí, nebo jejich descendenty a mutanty, které jsou uloženy, jak již bylo popsáno.
Obvykle se způsob provádí v oboru běžným způsobem s nerostoucími buňkami.
Jako substráty slouží deriváty cefalosporinu C obecného vzorce IV, kde R má uvedený význam. Jako substrát účelně slouží celofasporin C (R znamená acetoxyskupinu v obecném vzorci IV).
Substrát se pro způsob může přidávat jednorázově nebo kontinuálně. Přidání substrátu se účelně provádí tak, aby koncentrace substrátu v kultivačním médiu nepřesáhla 20 % hmotn., výhodně 4 % hmotn.
Pro způsob lze použít média, běžně užívaná v oboru. Výhodně se způsob provádí v nízkomolárním HEPES-pufru (kyselina 4—(2— -hydroxyetyl)piperazin-l-etan-sulfonová).
Způsob se obvykle provádí se suspenzí mikroorganismů a optické hustotě OD 650 od 1 do 100, výhodně od 2 do 50.
Způsob se účelně provádí při teplotě od 0 do 60 °C, výhodně od 20 do 40 °C a při hodnotě pH od 5 do 9, výhodně od 6 do 8.
Po obvyklé reakční době od 1 do 24 h se pak mohou dosud nepopsané deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové obecného vzorce III izolovat obvyklým způsobem. Jako výhodný zástupce derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové se izoluje kyselina malonyl-7-aminocefalosporanové (R znamená acetoxyskupinu v obecném vzorci III).
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Izolace mikroorganismů .
Ke 100 ml média s minerálními solemi (tabulka 1), pH 7,0, obsahujícího 5 mmolární lakton (0,5 mmol/100 ml) s rozštěpeným laktamovým kruhem (vzorec I) se přidají různé vzorky půdy z okolí Visp ve Švýcarsku jako inokulum. Kultury se inkubují při 25 °C na třepacím zařízení při 140 otáčkách za min. Tyto kultury se 4krát
-4CZ 279523 B6 přeočkují na čerstvé médium, obsahující minerální soli a pak se testují na uvedenou laktonovou reakci pomocí analytické vysokotlaké kapalné chromatografie HPLC.
Tyto kultury se pak inkubují na agarových destičkách s médiem, obsahujícím minerální soli, 5 mmolární lakton (vzorec I), při 25 °C. Pak se izoluje bakteriální kmen Sphingomonas sp. FBI (DSM 7007), který během růstu z tohoto laktonu tvoří malonyllakton vzorce II a ten úplně neodbourává.
Příklad 2
Tvorba kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové (vzorec III)
Mikroorganismy Sphingomonas sp. FBI (DSM 7007) se pěstují v médiu s minerálními solemi, pH 7,0 (tabulka lb), obsahujícím 5 mmolární lakton (vzorec I) až k OD650 = 0,44 během 4 dnů. (Po prvních 2 dnech se ještě jednou přidá tento lakton, takže celková koncentrace je 1 mmol laktonu na 100 ml média). Pak se buňky odstředí a buněčná peleta se resuspenduje ve 20 ml 10 mmolárního HEPES-pufru, pH 7,0, přičemž se nastaví OD650 na hodnotu 2,2. K této buněčné suspenzi se přidá 0,4 mmol cefalosporinu C (vzorec IV). Buněčná suspenze se inkubuje na třepačce (140 otáček za min.) při 25 °C.
Po 30 min, 2,25 h, 5,0 a 24 h se pokaždé vzorek testuje pomocí HPLC-analýzy.
Rychlost tvorby kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové je při 2,25 h: 410 mg/l/h/OD650.
Po 5 h se analyticky prokázalo 14 2 mg kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové, což odpovídá 99 %ní reakci cefalosporinu
C. Kyselina malonyl-7-aminocefalosporanové se izoluje preparativní chromatografií HPLC ve 40 %ním výtěžku.
Příklad 3
Identifikace kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové (vzorec III)
Pro identifikaci produktu (vzorec III) se smísí 500 ml média s minerálními solemi (tabulka 1), pH 7,0, se roztokem laktonu vzorce I tak, aby byla konečně koncentrace 5 mmolární. Pak se tento roztok inokuluje při 25 °C a 140 otáčkách za min s předkulturou, jejíž hodnota OD650 je 0,5. Po jednom dni se ještě jednou přidá 5 mmol laktonu (vzorec I) na 500 ml média. Když se dosáhne hodnoty OD650 0/5, buňky se sklízejí. Pak se buněčná peleta resuspenduje v 30 ml 10 mmolárního HEPES-pufru, pH 7,0, obsahujícím 0,6 mmol cefalosporinu C (vzorec IV). Po pětihodinové inkubaci při 25 ’C, 140 otáčkách za min se buňky odstředí a ze supernatantu se vyčistí kyselina malonyl-7-aminocefalosporanová pomocí preparativni chromatografie HPLC. Vyčištěné vzorky se přes noc lyofilizuji a lyofilizát se analyzuje pomocí NMR (1H a 13C).
-5CZ 279523 B6
Srovnáním s chemicky připravenou referenční látkou (připravená z kyseliny 7-aminocefalosporanové podle Bull. Soc. Chem. Belg., 1977, 86, str. 991-1002) se prokázala tvorba kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové.
Sodná sůl kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové (chem. standard) 13C-NMR (DMSO, 100,5 MHz, δ v ppm):
20,s;25,s;40,m;58,d;64,s;112,s;134,s;164,d;170,t.
Kyselina malonyl-7-aminocefalosporanové (podle vynálezu) 13C-NMR (DMSO, 100,5 MHz, δ v ppm):
, s ; 25 , s,; 40 ,m; 58 ,d; 64 , s; 112 , s; 134 , s ; 164 ,d; 170 , t.
1H-NMR (chem. standard, DSMO, 400 MHz, δ v ppm): 20,s;2,5,s;3,0,t;3,5,m;4,8,d;5,0,d;5,6,d.
1H-NMR (podle vynálezu):
2,0 , s; 2,5, s; 3,0 , t; 3,5 , m; 4,8 , d; 5,0 , d; 5,6 , d.
Příklad 4
Laktonizace desacetylcefalosporinu
Lakton desacetylcefalosporinu C se připraví z desacetylcefalosporinu C (Ciba-Geigy AG, Basel) následujícím způsobem:
100 g desacetylcefalosporinu C se rozpustí v 1 1 20 mmolárním natriumfosfátovém pufru, pH 7,0. K tomuto roztoku se přidá iontoměnič (DOWEX 50X8 (Fluka) (H+-forma)), až se dosáhne hodnoty pH
2,5. Po 10 min míchání (250 otáček/min, teplota místnosti) se iontoměníčová pryskyřice odfiltruje a pH roztoku se upraví koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 0,8. Po 1 hod. míchání (teplota místnosti, 250 otáček/min) se do reakčního roztoku přidá DOWEX 1X8 (acetátová forma) (Fluka), až se dosáhne hodnota pH od 3,0-3,2.
Pak se míchá při teplotě místnosti další 1,5 h při 250 otáčkách/min a pak se iontoměníčová pryskyřice odfiltruje. Pak se znova přidá DOWEX 1X8 (acetátová forma), až se dosáhne hodnota pH od 3,3-3,5, 1 h míchá (teplota místnosti, 250 otáček/min) a pak se iontoměníčová pryskyřice odfiltruje. Reakční roztok se zahustí do sucha na rotačním odpařovacim zařízení (3kPa, 30 °C). K odstranění vzniklé kyseliny octové se produkt po odpaření rozpustí ve vodě, až se získá 35%ní roztok a pak se upraví pH koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 1,5.
Takto získaný roztok se 2x extrahuje etylacetátem (stejný objem jako má roztok). Vodné fáze se spojí a upraví se pH 3 molárním roztokem KOH na hodnotu 3,5 a zahustí se na rotačním odpařovacim zařízení (3kPa, 30 °C). Produkt se pak ještě úplně vysuší v sušičce při vakuu (3kPa, 20 °C).
Celkový výtěžek je 60 g, což odpovídá 60 %nímu výtěžku ze 100 g desacetylcefalosporinu C.
-6CZ 279523 B6
Příklad 5
Příprava laktonu s rozštěpeným laktamovým kruhem (vzorec I)
K přípravě laktonu (vzorec I) se lakton desacetylcefalosporinu C v zásobním roztoku 6 (tabulka la) nechá reagovat s B-laktamázou, penicilinázou E.C.3.5.2.6.(Sigma). Reakce začne hned po přidání penicilinázy. Během reakce se udržuje hodnota pH na 7,0 přidáním 1 normálního roztoku NaOH. Reakce je ukončena, jakmile se dosáhne konstantní hodnoty pH 7,0 bez přidání NaOH. Po skončení reakce (cca 2 h) se roztok sterilně filtruje (0,2 μιη filtr) se uskladňuje při -80 °C.
Tabulka 1
a) Zásobní roztoky médií s minerálními solemi
Zásobní roztok 1:
NaH2P04>2H20 nh4ci k2so4 156,0 g 10,0 g 1,2 g
destilovaná voda 500,0 ml
Zásadní roztok 2:
kyselina p-aminobenzoová 8,0 mg
D-biotin 2,0 mg
kyselina nikotinová 20,0 mg
D-panthothenát vápenatý 10,0 mg
pyridoxalhydrochlorid 30,0 mg
thiamindichlorid 20,0 mg
kyanokobalamin 10,0 mg
destilovaná voda 100,0 ml
sterilně filtrovat
Zásobní roztok 3:
HCL (37 %)
FeCl2.4H20
ZnCl2
MnCl2.4H2O
H3BO3
CoCl2.6H20
CUC12.7H20
NÍC12.6H2O
Na2Mo04.2H20
7,0 ml
1,5 g
0,07 g
0,1 g
0,006 g
0,19 g
0,002 g
0,024 g
0,036 g destilovaná voda
1000,0 ml, autoklávovat,
121 °C, 20 min
-7CZ 279523 B6
Zásobní roztok 4:
NaOH Ν3-2*-*θ0β · 51^0 Na2WO4.2H2O 0/5 g 0,003 g 0,004 g
destilovaná voda 1000,0 ml, autoklávovat, 121 °C, 20 min
Zásobní roztok 5:
MgCl2.6H2O 40,0 g
CaCl2.2H2O 5,0 g
destilovaná voda 200,0 ml, autoklávovat, 121 °C, 20 min
Zásobní roztok 6:
lakton desacetylcefalosporinu C 3,55 g
destilovaná voda 60,0 ml
penicilináza (EC 3.5.2.6) (Sigma p0389) 1,0 mg (25 0000 jednotek)
pH upravit s NaOH na 7,0
doplnit deštil, vodou na 100,0 ml
b) příprava média s minerálními solemi
Zásobní roztok 1: 25,0 ml
pH upravit s KOH na 7,0 pak deštil, vodou doplnit na 950,0 ml, autoklávovat, 121 °C, 20 min
Po sterilizaci se přidá:
roztok 2 0,5 ml
roztok 3 1,0 ml
roztok 4 1,0 ml
roztok 5 roztok získaný 0,5 ml
z příkladu 5 50,0 ml
Průmyslová využitelnost
Deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové mohou
například sloužit jako výchozí materiál pro přípravu derivátů
kyseliny 7-aminocefalosporanové, které jsou zase důležité výchozí sloučeniny pro přípravu cefalosporinových antibiotik.

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Mikroorganismy Sphinqomonas sp. FBI (DSM 7007), které se získají selekcí tak, že jsou schopné zužitkovat lakton nebo jeho rozpustné soli vzorce I jako jediný zdroj uhlíku, dusíku a energie přes malonyllakton nebo jeho rozpustné soli vzorce II a posledně jmenované sloučeniny nekatabolizovat.
  2. 2. Způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové nebo jejich rozpustných solí obecného vzorce III (III) kde R znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo acetoxyskupinu, vyznačující se tím, že se deriváty cefalosporinu C nebo jejich rozpustné soli obecného vzorce IV
    CH2—R (IV)
    -9CZ 279523 B6 kde R má uvedený význam, přemění jako substrát pomocí mikroorganismů rodu Sphinuomonas, získaných selekcí podle nároku 1, na produkt vzorce III:
  3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se přeměna provádí pomoci mikroorganismů Sphinqomonas sp. FBI (DSM 7007) a/nebo jejich spontánních mutantů.
  4. 4. Způsob podle alespoň jednoho z nároků 2a3, vyznačující se tím, že se jako substrát použije cefalosporin C.
  5. 5. Způsob podle alespoň jednoho z nároků 2 až 4, vyznačuj í c i s e tím, že se přeměna provádí při jednorázovém nebo kontinuálním přidání substrátu tak, že koncentrace substrátu v kultivačním médiu nepřesáhne 20 % hmotnostních.
  6. 6. Způsob podle alespoň jednoho z nároků 2 až 5, vyznačující se tím, že se přeměna provádí při teplotě od 0 do 6 0 0 C a při pH od 5 do 9.
  7. 7. Deriváty kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové nebo jejich rozpustné soli obecného vzorce III kde R znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo acetoxyskupinu.
  8. 8. Kyselina malonyl-7-aminocefaloporanová podle nároku 7.
CZ93763A 1992-04-29 1993-04-28 Mikrobiologický způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové CZ279523B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH138192 1992-04-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ76393A3 CZ76393A3 (en) 1993-12-15
CZ279523B6 true CZ279523B6 (cs) 1995-05-17

Family

ID=4209103

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ93763A CZ279523B6 (cs) 1992-04-29 1993-04-28 Mikrobiologický způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové
CZ942264A CZ280145B6 (cs) 1992-04-29 1993-04-28 Způsob přípravy derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové a použití mikroorganismu Pseudomonas k hydrolýze těchto derivátů

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ942264A CZ280145B6 (cs) 1992-04-29 1993-04-28 Způsob přípravy derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové a použití mikroorganismu Pseudomonas k hydrolýze těchto derivátů

Country Status (11)

Country Link
US (1) US5338667A (cs)
EP (1) EP0568004A2 (cs)
JP (1) JPH0646835A (cs)
KR (1) KR930021796A (cs)
CN (1) CN1077989A (cs)
CA (1) CA2095166A1 (cs)
CZ (2) CZ279523B6 (cs)
LT (1) LT3122B (cs)
LV (1) LV10315B (cs)
MX (1) MX9302238A (cs)
TW (1) TW241265B (cs)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1065278C (zh) * 1994-08-27 2001-05-02 中国科学院上海植物生理研究所 一步两酶法制造7－氨基头孢烷酸
CA2431314C (en) 2000-12-11 2010-04-20 United States Filter Corporation Activated carbon for odor control and method for making same

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5170884A (en) * 1974-12-12 1976-06-18 Toyo Jozo Kk 77 amino sefuemukagobutsuno seizohoho
DK158316C (da) * 1974-01-23 1990-10-08 Toyo Jozo Kk Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substituerede 7-amino-3-cephem-4-carboxylsyrederivater
FR2434169A2 (fr) * 1978-06-22 1980-03-21 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Nouveaux derives reactifs de l'acide penicillanique et de l'acide cephalosporanique et procede pour leur preparation
JPS6248380A (ja) * 1985-08-28 1987-03-03 Asahi Chem Ind Co Ltd セフアロスポリンｃアシラ−ゼの製造法
JPH06248380A (ja) 1993-02-23 1994-09-06 Mitsubishi Heavy Ind Ltd 積層型熱交換器及びその製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
MX9302238A (es) 1993-10-01
US5338667A (en) 1994-08-16
CZ76393A3 (en) 1993-12-15
JPH0646835A (ja) 1994-02-22
LV10315A (lv) 1994-10-20
LT3122B (en) 1994-12-27
CZ226494A3 (en) 1995-02-15
LV10315B (en) 1995-06-20
CN1077989A (zh) 1993-11-03
CZ280145B6 (cs) 1995-11-15
CA2095166A1 (en) 1993-10-30
TW241265B (cs) 1995-02-21
LTIP499A (en) 1994-07-15
EP0568004A2 (de) 1993-11-03
EP0568004A3 (cs) 1994-03-23
KR930021796A (ko) 1993-11-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4474882A (en) Microbiological process for the preparation of unsaturated dicarboxylic acids
US5173412A (en) Microbiological process for the production of hydroxylated pyrazine derivatives
JPH0569514B2 (cs)
US4764606A (en) 7-formylaminocephalosporin compounds
CZ279492B6 (cs) Mikrobiologický způsob výroby kyseliny 6-hydroxypikolinové
CZ282939B6 (cs) Mikrobiologický způsob hydroxylace dusíkatých heterocyklických karboxylových kyselin
CZ279523B6 (cs) Mikrobiologický způsob přípravy derivátů kyseliny malonyl-7-aminocefalosporanové
JPS62190092A (ja) コニフエリルアルデヒドの製法及びそのための微生物
RU2094461C1 (ru) Способ получения 5-гидроксипиразинкарбоновой кислоты и/или ее солей
JP3153365B2 (ja) 芳香族複素環式ヒドロキシカルボン酸の微生物学的製造方法
US5238829A (en) Microbiological process for the production of 6-hydroxypyrazinecarboxylic acid
US2695261A (en) Production of polymyxins a, b, and e
US5124479A (en) Process for the preparation of hydroxyterephthalic acid
WO2000020418A1 (fr) Antibiotiques a base de xanthobaccines
JPH08332094A (ja) アルカリゲネス属の微生物を利用してヘテロ芳香族カルボン酸を製造する微生物学的方法
CZ279769B6 (cs) Mikrobiologický způsob přípravy 5-hydroxypyrazinkarboxylové kyseliny
JPH07188A (ja) 新規微生物及びそれを用いるｄ−リンゴ酸の製造法
JPH01242590A (ja) ３−メトキシメチルセファロスポラン酸誘導体とその製造方法および７−アミノ−３−アルコキシメチルセファロスポラン酸の製造法
CZ279298B6 (cs) Mikroorganismy Alcaligenes faecalis DSM 6335 a způsob mikrobiologické výroby kyseliny 6-hydroxypikolinové
JPH0759591A (ja) デアセチルセファロスポラン酸誘導体の製造法
JPH05276968A (ja) ピリジンメタノール誘導体の製造法
JPH05317071A (ja) 微生物を用いた３−メチル−７−アルキルキサンチンの製造法