CZ261693A3

CZ261693A3 - The use of purified surface modifiers for preventing aggregation of particles during sterilization

Info

Publication number: CZ261693A3
Application number: CZ932616A
Authority: CZ
Inventors: Robert Kenneth Hollister; David L Ladd; Gregory L Mcintire; George C Na; Natarajan Rajagopalan; Barbara O-Ching Yuan
Original assignee: Sterling Winthrop Inc
Priority date: 1992-12-16
Filing date: 1993-12-02
Publication date: 1994-07-13
Also published as: EP0605024A2; IL107518A0; SK141693A3; RU2114612C1; NO934271D0; FI935306A; CA2102356A1; AU663010B2; NO934271L; EP0605024A3; TW438606B; JPH06211647A; PH30282A; NZ250116A; US5352459A; KR940013541A; HU9303604D0; FI935306A0; HUT65783A; MY110452A

Description

Použití vyčištěných povrchových modifikátorů k zamezení agregace částic během sterilizace

Oblast techniky

Tento vynález se týká terapeutických nebo diagnostických přípravků s upraveným bodem zákalu a způsobu jejich výroby.

Dosavadní stav techniky

Nanočástice, popsané v US patentu č. 5 145 684, jsou částice sestávající z omezeně rozpustného terapeutického nebo diagnostického přípravku, na kterém je absorbován nezesítěný povrchový modifikátor, a které mají průměrnou velikost částic menší než asi 400 nm (nanometrů).

Výsledkem jejich malé velikosti je, že sterilizace terapeutických nebo diagnostických přípravků v nanopartikulární formě, stabilizovaných povrchovým modifikátorem (povrchově aktivní látkou), je obtížná. Filtrace za použití filtru o velikosti pórů 0,22 μιη je dostačující k odstranění většiny bakterií a virů, ale nanočástice se většinou nemohou sterilně filtrovat v důsledku jejich velikosti. Obvyklé autoklávování (teplem páry) při teplotě 121 “C bude způsobovat agregaci a/nebo podstatný růst velikosti částic, co skýtá nepoužitelné výsledné částice.

Agregace nanočástic po zahřátí je v přímém vztahu k srážení a/nebo oddělování fáze povrchového modifikátoru (povrchově aktivní látky) při teplotě nad bodem zákalu povrchově aktivní látky, kde vázané molekuly povrchově aktivní látky jsou pravděpodobně disociovány z nanočástic a sráženy a/nebo fázově odděleny, čímž nechávají nanočástice nechráněné. Tyto nechráněné nanočástice se mohou potom agregovat do shluků částic. Po ochlazení se povrchově aktivní látka znovu rozpouští v roztoku, který potom povléká agregované částice a zabraňuje jim disociovat na menší částice.

Tento vynález je zaměřen na nové prostředky, které umožňují autoklávovat nanočástice při sníženém růstu velikosti částic nebo bez tohoto růstu. Tyto prostředky dovolují upravit povrchově aktivní látku adsorbovanou na nanočásticích tak, že nanočástice neaglomerují během autoklávování. Tento vynález je také zaměřen na způsob výroby takových prostředků.

Podstata vynálezu

Podle tohoto vynálezu se dostává prostředek obsahující nanočástice, které mají na svém povrchu adsorbovánu vyčištěnou polymerní povrchově aktivní látku jako povrchový modifikátor a s ním spojený modifikátor bodu zákalu, přičemž modifikátor bodu zákalu je přítomen v množství dostatečném ke zvýšení bodu zákalu povrchového modifikátoru. Při výhodném provedení bod zákalu povrchového modifikátoru se zvyšuje nad teplotu pro sterilizaci nanočástic, jako nad teplotu používanou při autoklávování, aby se zabránilo aglomeraci nanočástic.

Další znak tohoto vynálezu se týká způsobu výroby nanočástic, které mají svém povrchu adsorbovánu vyčištěnou polymerní povrchově aktivní látku jako povrchový modifikátor a s ním spojený modifikátor bodu zákalu, přičemž způsob spočívá v tom, že se nanočástice uvedou do styku s modifikátorem bodu zákalu na dobu a za podmínek, které dostačují ke zvýšení bodu zákalu povrchového modifikátoru.

Přehled výkresů na obrázcích

Obr. 1 až 3 ukazují rozložení velikosti částic ethyl-(3,5-diacetamido-2,4,6-trijodbenzoátu) (EEDA), obsahujících povrchový modifikátor T-908 a modifikátor bodu zákalu PEG-400, před a po autoklávování, při čistotě T-908 odpovídající 88, 92 a 99 %.

Obr. 4 ukazuje rozložení velikosti částic ethyl-(3,5-diacetamido-2,4,6-trijodbenzoátu), obsahujících povrchový modifikátor T-908 o čistotě T-908 odpovídající 88, 92 a 99 % a modifikátor bodu zákalu PEG-400, po autoklávování za teploty 121 °C během 20 minut.

Obr. 5 ukazuje rozložení velikosti částic ethyl-(3,5-diacetamido-2,4,6-trijodbenzoátu), obsahujících povrchový modifikátor T-908 při čistotě odpovídající 88, 92 a 99 % a modifikátor bodu zákalu PEG-400, po autoklávování za teploty 110 °C během 90 minut.

Obr. 6 ukazuje rozložení velikosti částic ethyl-(3,5-diacetamido-2,4,6-trijodbenzoátu), obsahujících povrchový modifikátor T-908 při čistotě odpovídající 88, 92 a 99 % a modifikátor bodu zákalu PEG-400, před autoklávováním.

Nyní se uvádí detailní popis vynálezu.

Nanočástice vhodné při provedení tohoto vynálezu obsahují povrchový modifikátor. Přitom zde používané povrchové modifikátory fyzikálně ulpívají na povrchu terapeutického nebo diagnostického přípravku v nanočásticové formě, ale nereagují chemicky s tímto přípravkem nebo samy o sobě. U jednotlivých adsorbovaných molekul povrchového modifikátoru se v podstatě nevyskytuje intramolekulární zesítění. Vhodné povrchové modifikátory podle tohoto vynálezu jsou vyčištěné polymerní povrchově aktivní látky.

Polymerní povrchově aktivní látkou je povrchově aktivní látka, která sestává ze dvou nebo většího počtu opakujících se monomerních jednotek. Příkladem polymerních povrchově aktivních látek je.Tetronic 908 (T-908) a Tetronic 1508 (T-1508), které patří do souboru polyalkylenoxidem substituovaných ethylendiaminových povrchově aktivních látek, které mají idealizovanou strukturu vyjádřenou obecným vzorcem

CH;

H-(O-CH₂-CH₂)_x-(O-CH-CH₂)y pH₃

H-(O-CH₂-CH₂)x-(O-CH-CH₂)_y.

pH₃ n-ch₂-ch₂-CH-CHo)yZ

PH₃ (CH₂-CH-O)y-(CH₂-CH₂-O)x-H |CH₃ (CH₂-CH-O)y_(CH₂-CH₂-O)x-H

Tyto povrchově aktivní látky se liší v tom, že T-908 má číselnou střední molární hmotnost přibližně 25 000, zatímco T-1508 má číselnou střední molární hmotnost přibližně 30 000. Jak bylo stanoveno, tyto povrchové aktivní látky obsahují různé nečistoty, u nichž byly zjištěny struktury odpovídající obecným vzorcům

CH₃

CH₂=CH-CH₂-O-(CH₂-Lh-O)y-(CH₂-CH₂-O)x-H ch₃

CH₂=CH-O-(CH₂-Jh-O)y-(CH₂-CH2-O)x-H fHa

CH₃-CH=CH-O-(CH₂-CH-O)y-(CH₂-CH₂-O)x-H ch₃ ch₃ ch₃

H-(O-CH₂-CH₂)x-(O-CH-CH₂)y-CH-CH₂-(CH₂-CH-O)y-(CH₂-CH₂-O)x;-H

Analýza vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií (SEC-HPLC, size exclusion high performance liqiud chromatography) ukazuje na celkový obsah polymerních nečistot ve vzorcích komerčně dostupných látek T-908 a T-1508 v rozmezí od přibližně 10 do více než 30 %. I když nepolymerní nečistoty by se daly odstranit docela snadno, pokusy o odstranění těchto polymerních nečistot obvyklým promýváním rozpouštědly a rekrystalizačními postupy vedou pouze ke mírnému snížení nečistot, maximálně o polovinu počátečního obsahu.

Jiným příkladem povrchově aktivní látky, která byla vyčištěna, je tyloxapol.

Vyčištěnou polymerní povrchově aktivní látkou je polymerní povrchově aktivní látka, která je v podstatě zbavena nečistot způsobem podle tohoto vynálezu. Tento způsob zahrnuje použití extensivní vodné diafiltrace, jak zde bude rozebráno jinde, extrakce nevodnými rozpouštědly nebo zpracování s hydrofilními pryskyřicemi, iontoměničovými pryskyřicemi a podobně.

Výraz v podstatě zbavený polymerních nečistot, jak se zde používá, znamená, že takové nečistoty jsou přítomny ve vyčištěné polymerní povrchově aktivní látce, používané podle tohoto vynálezu, na množství menší než přibližně 15 %. Výhodně jsou takové nečistoty přítomny v množství menším než asi 10 % a zvláště výhodně v množství menším než přibližně 1 %.

Podle jiného provedení, množství polymerních nečistot v počátečním vzorku polymerní povrchově aktivní látky může být sníženo na hodnotu vyjádřenou koeficientem okolo 50 %. Výhodně se takové snížení úrovně polymerních nečistot vyjádří koeficientem okolo 90 % a obzvláště výhodně okolo 95 %. Polymerní povrchově aktivní látky jsou obchodně a průmyslově dostupné a/nebo se mohou vyrobit technickými způsoby známými v oboru.

Nanočástice vhodné při provedení tohoto vynálezu se mohou vyrobit podle způsobů popsaných v US patentu č.

145 684. V krátkosti shrnuto, nanočástice se připravují dispergováním omezeně rozpustného terapeutického nebo diagnostického přípravku v kapalném dispergačním prostředí a mletím přípravku na mokro v přítomnosti mlecího prostředí, ke snížení velikosti částic kontrastního činidla na účinnou průměrnou velikost částic menší než přibližně 400 nm.

Velikost částic se může zmenšit v přítomnosti povrchového modifikátoru, například během procesu mletí na mokro.

Obecný způsob výroby částic vhodných při provedení tohoto vynálezu je tento:

Zvolený terapeutický nebo diagnostický přípravek se dostane na trhu a/nebo vyrobí technickým způsobem, který je znám v oboru, jak je popsáno výše, v obvyklé hrubozrnné formě. Je výhodné, avšak nikoli nutné, aby velikost částic hrubozmného zvolené terapeutického nebo diagnostického přípravku byla menší než asi 100 um, podle stanovení sítovou analýzou. Pokud velikost hrubozrnných částic takového přípravku je větší než přibližně 100 um, potom je výhodné, aby se velikost hrubozrnných částic terapeutického nebo diagnostického přípravku snížila na velikost menší než 100 Um za použití obvyklého způsobu mletí, jako založeného na použití vzduchové trysky nebo fragmentačního mletí.

Hrubozrnný zvolený terapeutický nebo diagnostický přípravek se může potom přidat ke kapalnému prostředí, ve kterém je v podstatě nerozpustný, za vzniku premixu. Koncentrace terapeutického nebo diagnostického přípravku v kapalném prostředí se může měnit od přibližně 0,1 do 60 % hmotnostních, výhodně od 5 do 30 % hmotnostních. Je výhodné, avšak nikoli nutné, když je v premixu přítomen povrchový modif ikátor·. Koncentrace povrchového modif ikátoru se může měnit v rozmezí od přibližně 0,1 do 90 % hmotnostních, výhodně od 1 do 75 % hmostnostních, výhodněji od 10 do 60 % hmotnostních a obzvláště výhodně od 10 do 30 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost kombinace účinné látky a povrchového modifikátoru. Zdánlivá viskozita suspenze premixu je výhodně menší než přibližně 1000 mPa.s.

Premix se může použít přímo při mletí na mokro ke snížení průměrné velikosti částic v disperzi na méně než 400 nm. Je výhodné, pokud se premix použije přímo, když se k roztírání použije kulového mlýna. Při jiném provedení se terapeutický nebo diagnostický přípravek a popřípadě povrchový modifikátor mohou dispergovat v kapalném prostředí za použití vhodného způsobu promíchávání, například pomocí válcového mlýna nebo mixeru typu Cowles, dokud se nezjistí homogenní disperze, ve které nejsou pouhým okem patrné velké aglomeráty. Je výhodné, když se premix podrobí takovému stupni předběžného rozemletí disperze, pokud se pro roztírání použije mlýnu s recirkulujícím prostředím.

Mletí na mokro se může provádět v libovolném vhodném dispergačním mlecím zařízení, včetně například kulového mlýna, roztíracího mlýna, vibračního mlýna a mlýna obsahujícího prostředí, jako je pískový mlýn a kuličkový mlýn. Prostředí ve mlýnu je výhodné v důsledku relativně kratších doby mletí, která je vyžadována pro dosažení zamýšleného výsledku, to znamená zmenšení velikosti částic. Pro mletí v prostředí je zdánlivá viskozita premixu výhodně od přibližně 100 do zhruba 1000 mPa.s. Pro mletí v kuličkovém mlýnu je zdánlivá viskozita premixu výhodně od přibližně 1 až do zhruba 100 mPa.s. Takové rozmezí má sklon dosáhnout optimální vyváženosti mezi účinnou fragmentací částic a erozí prostředí.

Mlecí prostředí použité pro stupeň snižování velikosti částic se může zvolit z tuhých prostředí, s výhodou sférických nebo partikulárních (částicových), ve formě, která má průměrnou velikost menší než asi 3 mm a výhodněji menší než přibližně 1 mm. Takové prostředí může výhodně poskytnout částice podle vynálezu při zkrácené době zpracování a může docházet k menšímu vydření mlecího vybaveni. Výběr materiálu pro mlecí prostředí se nezdá rozhodující. Avšak výhodné prostředí má specifickou hmotnost větší než přibližně 3 g/cm³. Oxid zirkoničitý, jako je 95% oxid zirkoničitý stabilizovaný oxidem hořečnatým, orthokřemičitan zirkoničitý a sklo jako mlecí prostředí poskytují částice, které mají úroveň kontaminace, která je pokládána za přijatelnou pro výrobu terapeutických nebo diagnostických přípravků. Existuje však domněnka, že také vhodná jsou jiná prostředí, jako je nerezavějící ocel, oxid titaničitý, oxid hlinitý a 95% oxid zirkoničitý stabilizovaný yttriem.

Doba roztírání se může široce měnit a závisí především na zvláštním vybraném mlýnu pro mletí na mokro. Pro válcové mlýny může se vyžadovat doba zpracování až do 5 dnů nebo delší. Naproti tomu doba zpracování kratší než 1 den (doba setrvání od přibližně 1 minuty až do několika hodin) poskytuje požadované výsledky za použití mlýnů s vysokým střihem v prostředí.

U částic se musí snižovat velikost při teplotě, která nezpůsobuje významnou degradaci terapeutického nebo diagnostického přípravku. Obecně výhodné jsou provozní teploty nižší než přibližně 30 až 40 C. Pokud je žádoucí, výrobní zařízení se může chladit obvyklým chladicím zařízením Způsob se běžně provádí za podmínek teploty místnosti a za provozního tlaku, který je bezpečný a účinný pro proces mletí. Například provozní tlak odpovídající okolí je obvyklý u kulových mlýnů, roztíracích mlýnů a vibračních mlýnů. Provozní tlaky až do přibližně 140 kPa jsou typické pro mletí v prostředí. Povrchový modifikátor, pokud není přítomen v premixu, musí být přidáván k disperzi po rozetření v množství jaké je předepsáno pro premix. Poté se disperze může míchat, například intenzivním protřepáváním. Podle potřeby se disperze může podrobit stupni, ve kterém se působí ultrazvukem, například při použití dodávané ultrazvukové energie. Disperze se může například podrobit působení ultrazvukové energie, která má frekvenci od 20 do 80 kHz, po dobu od přibližně 1 do 120 sekund.

Relativní množství terapeutického nebo diagnostického přípravku a povrchového modifikátoru se může široce měnit a optimální množství povrchového modifikátoru může záviset například na jednotlivém terapeutickém nebo diagnostickém přípravku a zvoleném povrchovém modifikátoru, kritické koncentraci micel povrchového modifikátoru, pokud je ve formě micel, hydrofilně lipofilní rovnováze (HLB) stabilizátoru, teplotě tání stabilizátoru, jeho rozpustnosti ve vodě, povrchovém napětí vodných roztoků stabilizátoru a podobně. Povrchový modifikátor je s výhodou přítomen v množství od přibližně 0,1 do 10 mg/m² plochy povrchu terapeutického nebo diagnostického přípravku. Povrchový modifikátor může být přítomen v množství od 0,1 do 90 % hmotnostních, výhodně od 1 do 75 % hmostnostnich, výhodněji od 10 do 60 % hmotnostních a obzvláště výhodně od 10 do 30 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost suchých částic.

Terapeutické nebo diagnostické přípravky vhodné v prostředku podle tohoto vynálezu obsahují přípravky popsané v US patentu č. 5 145 684 a v publikované evropské patentové přihlášce ó. 0 498 482A. Výhodným diagnostickým prostředkem je zobrazovací činidlo pro rentgenové záření, tvořené ethyl-(3,5-diacetamido-2,4,6-trijodbenzoátem) (EEDA), ethylesterem kyseliny diatrizoové.

Pokud se zde používá velikosti částic, ta se vztahuje k průměrné velikosti částic, která se stanovuje obvyklým technickým způsobem měření velikosti částic, který je dobře znám pracovníkovi v oboru, jako sedimentační frakcionací tokem v poli, fotonovou korelační spektroskopií nebo diskovým odstředováním. Výraz účinná průměrná velikost částic menší než asi 400 nm znamená, že alespoň 90 % částic má hmotnostní průměrnou velikost částic menší než přibližně 400 nm, pokud se měří shora zmíněnými technickými způsoby. Při výhodném provedení tohoto vynálezu je účinná průměrná velikost částic menší než zhruba 300 nm a výhodněji menší než přibližně 250 nm. Při některých provedeních vynálezu se dosahuje účinné průměrné velikosti částic menší než zhruba 200 nm. V souvislosti s účinnou průměrnou velikostí částic je výhodné, když alespoň 95 % a výhodněji alespoň 99 % částic má velikost menší než je účinný průměr, například 400 nm. Při zvláště výhodných provedeních v podstatě všechny částice mají velikost menší než 400 nm. V určitých případech v podstatě všechny částice mají velikost menší než 250 nm.

Způsob výroby nanočásticového prostředku podle tohoto vynálezu zahrnuje stupně zavedení terapeutického nebo diagnostického přípravku, kapalného prostředí, mlecího prostředí a popřípadě povrchového modifikátoru do mlecí nádoby, mletí na mokro, ke snížení velikosti částic terapeutického nebo diagnostického přípravku na méně než přibližně 400 nm, a oddělení částic a popřípadě kapalného prostředí z mlecí nádoby od mlecího prostředí, například odsátím, filtrací nebo odpařením. Pokud povrchový modifikátor není přítomen během mletí na mokro, může se s částicemi smíchat po provedení těchto stupňů. Kapalné prostředí, nejčastěji voda, může sloužit jako farmaceuticky přijatelná nosná látka. Způsob se s výhodou provádí za aseptických podmínek. Poté se nanočásticový prostředek s výhodou podrobuje sterilizačnímu procesu.

Pokud je zde kdekoli zmíněna sterilní filtrace, ta velmi často neskýtá odpovídající sterilizaci pro nanočástice. Proto se vyžadují jiné způsoby sterilizace. Například se může používat sterilizace párou nebo teplem ve vlhkém prostředí za teploty okolo 121 °C po dobu přibližně 15 minut. V madmořských výškách blízkých úrovni mořské hladiny se takové podmínky dosahují při použití páry o tlaku přibližně 100 kPa nad atmosférickým tlakem.

Sterilizace suchým teplem se může také provádět, třebaže pro sterilizaci suchým teplem je obvykle používanou teplotou 160 °C během časového období od 1 do 2 hodin.

Bod zákalu je teplota, při které se povrchový modifikátor (povrchově aktivní látka) vysráží z roztoku, jak je popsáno výše. Výraz modifikátor bodu zákalu označuje sloučeninu, která ovlivňuje bod zákalu povrchových modifikátorů. Zejména modifikátory bodu zákalu používané podle tohoto vynálezu zvyšují bod zákalu povrchových modifikátoru adsorbovaných na nanočásticích. Tímto způsobem se dosahuje, že povrchové modifikátory nedisociují z povrchu nanočástic při teplotách používaných při autoklávování. Proto nanočástice takto upravené neaglomerují během sterilizačního procesu a tak zachovávají svou účinnou průměrnou velikost částic menší než asi 400 nm po sterilizaci.

Příklady modifikátorů bodu zákalu zahrnují neiontové sloučeniny, jako jsou polyethylenglykoly, například PEG 400, který je dostupný u firmy J. T. Baker Chemical Co., propylenglykol, cyklodextrin a ethanol, anionické povrchově aktivní látky, jako je dodecylsulfonát sodný a dioktylsulfosukcinát sodný, kationické povrchově aktivní látky, jako je cetrimid, mastné kyseliny, jako je kyselina kaprylová a kyselina kaprinová, a fosfolipidy s nábojem, jako je dimyristoylfosfa12 tidylglycerol, kardiolipin a dimyristoylfosfatidylserin. Výhodným modifikátorem bodu zákalu je polyethylenglykol.

Modifikátor bodu zákalu může být přítomen v prostředcích podle tohoto vynálezu v množství dostačujícím ke zvýšení bodu zákalu vyčištěné polymerní povrchově aktivní látky. Výhodné' množství modifikátoru povrchově aktivní látky je od 0,01 do 20 % hmotnostně objemových, přičemž výhodnější množství modifikátoru bodu zákalu je od 0,05 do 10 % hmotnostně objemových.

Tento vynález je dále založen na zjištění způsobu výroby nanočástic, které mají adsorbovánu na svém povrchu polymerní povrchově aktivní látku a s ním spojený neiontový modifikátor bodu zákalu.

Tento způsob spočívá ve výrobě nanočástic terapeutického nebo diagnostického přípravku, o kterém je zde kdekoli zmínka, a spočívá v tom, že se tyto nanočástice uvedou do styku s modifikátorem bodu zákalu, přičemž uvádění do styku se může provést smícháním suspenze nanočástic s roztokem modifikátoru bodu zákalu, a poté se suspenze nanočástic sterilizuje za teploty a po dobu dostačující k účinné sterilizaci nanočásticové suspenze.

Příklady provedeni vynálezu

Vynález bude nyní ilustrován v souvislosti s dále uvedenými příklady, které v žádném případě nejsou zamýšleny jako jeho omezení.

Příklad 1

Způsob čištění T-908

2% roztok T-908 o čistotě 88 %, jak se stanoví vylučo vací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií (SEC-HPLC) se zjištěním indexu lomu ve vodě, se vyrobí podle těchto diafil tračních pokusů:

(1) Přibližně 50 ml 2% roztoku T-908 se umístí do míchaných buněk Amicon o objemu 50 ml s membránou YM-5 a diafiltruje proti vodě. Zachytí se tyto diafiltrátové frakce:

Frakce Množství

LDD-988-128-1-A	43	ml
1-B	44	ml
1-C	17	ml
1-D	45	ml
celkem	145	ml

Dialyzovaný roztok se označí jako LDD-988-128-1 (přibližně má objem 50 ml). Jeho čistota je 88 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií.

(2) Přibližně 50 ml 2% roztoku T-908 se umístí do míchaných buněk Amicon o objemu 50 ml s membránou YM-10 a diafiltruje proti vodě. Zachytí se tyto diafiltrátové frakce:

Frakce Množství

LDD-988-128-2-A 32 ml

2-B 44 ml

2-C 35 ml

2-D 44 ml celkem

155 ml

Dialyzovaný roztok se označí jako LDD-988-128-2 (přibližně má objem 50 ml). Jeho čistota je 93 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatograflí. Diafiltrace tohoto dialyzovaného roztoku proti vodě pokračuje.

Z počátku se tento roztok ultrafiltruje na přibližně 20 ml a potom diafiltruje, dokud se nezachytí celkově přibližně 150 ml ultrafiltrátu a diafiltrátu, které se označí jako LDD-988-128-2F. Dialyzovaný roztok se označí jako

LDD-988-128-2R (přibližně má objem 20 ml), jeho čistota odpovídá 97 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatograflí.

Zbytek 2% roztoku T-908 (o objemu 330 ml) se umístí do míchaných buněk Amicon o objemu 400 ml s membránou YM-10. Tento zbytek se potom ulfrafiltruje na objem přibližně 130 ml a poté diafiltruje proti vodě, dokud se nezachytí přibližně 1500 ml ultrafiltrátu a diafiltrátu, které se označí jako LDD-988-129F. Dialyzovaný roztok se označí jako LDD-988-129R. Tento roztok má čistotu 96 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatograflí.

Diafiltrace tohoto dialyzovaného roztoku proti vodě pokračuje, dokud se nezachytí přibližně 1250 ml diafiltrátu. Dialyzovaný roztok (o objemu přibližně 105 ml) se označí jako LDD-988-129R1. Jeho čistota odpovídá 98 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatograflí.

LDD-988-129F se zahustí v míchané buňce s membránou YM-3 a poté vysuší za sníženého tlaku. Dostane se 0,488 g bílé tuhé látky, která se označí jako LDD-988-129X.

Pro LDD-988-129X se vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatograflí stanoví obsah 74 % nečistoty nebo nečistot o nízké molekulové hmostnosti (MW) a 26 % složek o vysoké molekulové hmostnosti. NMR spektrální analýza této látky ukazuje, že obsahuje tři olefinické sloučeniny:

1) vinylether: CH₂=CH-0-polymer,

2) propenylether: CH₃CH=CH-0-polymer a

3) allylether: CH2=CHCH₂-0-polymer.

Příklad 2

5% roztok T-908 (šarže WPMM-562B, o čistotě 87 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií) se připraví rozpuštěním 50,0 g T-908 v 950 ml vody. 320 ml tohoto 5% roztoku T-908 se umístí do míchaných buněk Amicon o objemu 400 ml s membránou YM-10 a diafiltruje proti vodě. Diafiltrace se zastaví po zachycení 5760 ml (18 objemů) diafiltrátu. Dialyzovaný roztok (o objemu 305 ml) se filtruje (nylon, velikost pórů 0,2 μιη) a poskytne LDD-988-150 o čistotě 97 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií. 100 ml tohoto roztoku se lyofilizuje a tak se získá 4,55 g bílé tuhé látky, která se označí jako LDD-988-150A.

Zbývajících 350 ml 5% roztoku T-908 se umístí do míchaných buněk Amicon o objemu 400 ml s membránou YM-10 a diafiltruje proti vodě, dokud se nezachytí 8175 ml diafiltrátu. Diafiltrát se ultrafiltruje na objem přibližně 250 ml, filtruje a lyofilizuje. Dostane se 15,27 g bílé tuhé látky, která se označí jako LDD-988-151. Tato látka má čistotu 95 %, stanoveno vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografii.

Příklad 3

Vzorek komerčně dostupné povrchově aktivní látky

T-908 (od firmy BASF, šarže WPMM-562B) se extensivně diafiltruje za tlaku při použití spirálově vinuté diafiltrační membrány Osmonics 52X-OPS-S2. Hladina polymerních nečistot, stanovená vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií, se sníží z počáteční hodnoty 12,7 na 2,4 % po 10 obratech diafiltrace a dodatečně na nestanovitelnou úroveň po obratech diafiltrace.

Příklad 4

Vyčištěné povrchově aktivní látky se použijí pro přípravu nanočásticových disperzí kontrastního činidla pro rentgenové záření s polyethylenglykolem jako modifikátorem bodu zákalu způsobem podle tohoto vynálezu a vyvolají stabilitu proti agregaci za podmínek potřebných pro autoklávování (teplota 121 °C po dobu 20 minut), přičemž této stability se nedosáhne bez čištění. Dosažené hodnoty jsou uvedeny v tabulce 1 a na obr. 1 až 6.

Tabulka 1

Vzorek Čistota Průměrná velikost částic (nm)

šarže č.	T-908	Počáteční	A*	B**
111200	88 %	265	435	349
GLP Tox	92 %	242	326	291
030600	99 %	264	267	288

* **

Autoklávováno za teploty

121 °C po dobu 20 minut. 110 C po dobu 90 minut.

Příklad 5

Způsob čištění T-1508

T-1508 (o čistotě 67,9 zjištěné měřením indexu lomu a vylučovací vysoko účinnou kapalinovou chromatografií) se diafiltruje za použití polysulfonové membrány (Osmonics 192T-HN02, rozmezí molekulové hmostnosti od 15 000 do 25 000, dostupná u firmy Osmonics, lne.), dokud se nedosáhne čistoty 92 %. Stabilizované nanočástice s obsahem vyčištěného T-1508 se tepelně sterilizují na mnohem menší velikost částic než se .surovým T-1508.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Prostředek, vyznačující se tím, že sestává z nanočástic, které mají na svém povrchu adsorbovánu vyčištěnou polymerní povrchově aktivní látku jako povrchový modifikátor a modifikátor bodu zákalu s ním spojený, přičemž modifikátor bodu zákalu je přítomen v množství dostačujícím ke zvýšení bodu zákalu povrchového modifikátoru.
2. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se t í m, že nanočástice obsahují diagnostický nebo terapeutický přípravek.
3. Prostředek podle nároku 2, vyznačující se t í m, že diagnostickým prostředekem je ethylester kyseliny diatrizoové.
4. Prostředek podle nároku 2, vyznačující se t i m, že vyčištěnou polymerní povrchově aktivní látkou je vyčištěná polyalkylenoxidem substituovaná ethylendiaminová povrchově aktivní látka.
5. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se t í m, že modifikátorem bodu zákalu je polyethylenglykol .
6. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, modifikátor bodu zákalu zvyšuje bod zákalu povrchového modifikátoru nad sterilizační teplotu nanočástic.
7. Způsob výroby nanočástic, které mají adsorbovánu na svém povrchu vyčištěnou polymerní povrchově aktivní látku jako povrchový modifikátor a s ním spojený modifikátor bodu zákalu, vyznačující se tím, že se nanočásti19 ce uvádějí do styku s modifikátorem bodu zákalu po dobu a podmínek dostačujících ke zvýšení bodu zákalu povrchového modifikátoru.
8. Způsob podle nároku 7, vyznačuj ící tím, že dále zahrnuje stupeň sterilizace nanočástic.

za
9. Způsob podle nároku 9, vyznačující tím, že se sterilizuje autoklávováním horkou parou.