CZ20031474A3

CZ20031474A3 - Způsob výroby derivátu taxanu

Info

Publication number: CZ20031474A3
Application number: CZ20031474A
Authority: CZ
Inventors: Alessandro Pontiroli; Ezio Bombardelli
Original assignee: Indena S. P. A.
Priority date: 2000-11-28
Filing date: 2001-11-22
Publication date: 2003-08-13
Also published as: EP1347984B1; EP1347984A2; ATE275149T1; ITMI20002553A1; NO328143B1; DE60105314D1; RU2275365C2; DK1347984T3; AU2002229563B2; HK1059778A1; PT1347984E; TR200402546T4; SK286711B6; CA2430070C; PL362392A1; NO20032401L; US20040030164A1; CZ300793B6; HUP0302765A2; WO2002044161A3

Description

Způsob výroby derivátu taxanu

Oblast techniky

Vynález se týká způsobu výroby derivátu taxanu, zejména 13- (N-Boc-p-isobutylisoserinyl) -14P-hydroxybaccatin III 1,14-karbonátu vzorce I

Sloučenina vzorce I byla popsána v dokumentu WO 01/02407. Jde o látku, která je vysoce účinná proti nádorům mléčné žlázy, plic, vaječníků, tlustého střeva, prostaty, ledvin a slinivky břišní a také proti buňkám, které jsou odolné proti známým protinádorovým látkám, jako je adriamycin, vinblastin a některé deriváty platiny. Deriváty 14p-hydroxy-l, 14-karbonátdeacetylbaccatinu III se obvykle připravují tak, že se vychází z prekursoru, 14P~hydroxydeacetylbaccatinu III. Jde o přírodní látku, kterou je možno v malém množství získat extrakcí listů Taxus wallichiana, jak je popsáno v EP 559019. Je zřejmé, že by bylo zapotřebí mít k dispozici další postupy pro snadnou a účinnou výrobu derivátů 14β-hydroxy-1,14-karbonátdeacetylbaccatinu III, zvláště sloučeniny vzorce I.

• · · · • · · ·

Podstata vynálezu

Při provádění nového způsobu podle vynálezu se využívá jako výchozí látky 10-deacetylbaccatinu III, který je možno na rozdíl od 14p-hydroxybaccatinu III snadno izolovat ve velkém množství z listů Taxus baccata.

Podstatu vynálezu tedy tvoří způsob výroby taxanového derivátu vzorce I, který spočívá v tom, že se a) chrání hydroxylové skupiny v poloze 7 a 10 ve výchozím 10-deacetylbaccatinu III

kde R a Ri, stejné nebo odlišné, se volí ze skupiny atom vodíku, Cl-ClOalkyl nebo aryl, Cl-ClOalkylkarbonyl, Cl-ClOarylkarbonyl, trichloracetyl nebo Cl-C4trialkylsilyl, přičemž v případě, že R a R_x mají totožný význam, jde s výhodou o trichloracetyl, kdežto v případě, že mají odlišný význam, znamená R s výhodou trichloracetyl a R_x znamená acetyl nebo R znamená triethyl, trimethylsilyl nebo BOC a R_x znamená acetyl,

b) uskuteční dvoustupňová oxidace na karbonylové skupině v poloze 13 a hydroxylace v poloze 14

c) provede se karbonace na sousedních hydroxylových skupinách v polohách 1 a 14 za vzniku 1,14-karbonátového derivátu

d) redukuje se karbonylová skupina v poloze 13

e) odstraní se ochranné skupiny v polohách 7 a 10

f) selektivně se acetyluje hydroxylová skupina v poloze 10

g) 14p-hydroxybaccatin-l,14-karbonát vzorce III se převede na derivát, triethylsilylovaný v poloze 7

h) sloučenina ze stupně g) se nechá reagovat s kyselinou (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-diemthoxyfenyl)-4-isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylovou

i) odstraní se triethylsilylová a dimethoxybenzylidenová ochranná skupina ze sloučeniny ze stupně h)

O i es • · ····

Způsob pro selektivní ochranu hydroxylových skupin v poloze 7 a 10 je popsán v publikaci Holton a další, Tetrahedron Letters 39, 1998, 2883-2886. Selektivní ochrana hydroxylových skupin výchozího deacetylbaccatinu III je umožněna jejich odlišnou reaktivitou. Bylo zjištěno, že zvláště reaktivita vzhledem k acylačním, alkylačním nebo silylačním činidlům se mění v pořadí C(7)-OH>C(10)-OH>C(13)-OH>C(1)-OH, takže skupiny v polohách 7 a 10 je možno selektivně chránit a současně je možno zachovat volné hydroxylové skupiny v polohách 1 a 13. Mimoto je možno změnou reakčních podmínek obrátit pořadí reaktivity hydroxylových skupin v poloze 7 a 10, takže je umožněna diferenciální substituce těchto skupin. Příklady reakčních činidel a reakčních podmínek pro ochranu hydroxylových skupin v polohách 10 a 7 je možno nalézt ve svrchu uvedené publikaci. Podobná selektivita existuje v případě, že se vychází ze 14p-hydroxybaccatin-l, 14-karbonátu.

Podle výhodného provedení se postupuje tak, že se deacetylbaccatin III nechá reagovat s trichloracetylchloridem v methylenchloridu v přítomnosti triethylaminu a rovněž v přítomnosti dimethylaminopyridinu DMAP v katalytickém množství. Použití zbytku kyseliny

4444 44 ·· 4 4

4 · trichloroctové jako ochranné skupiny je velmi výhodné z hlediska následující oxidace, karbonace a redukce ve stupních b), c) ad). Získaný 7,10-bistrichloracetátový derivát, který se získá z výchozí látky v kvantitativním výtěžku, se oxiduje a podrobí karbonaci a pak se snadno redukuje v poloze 13 za současného odstranění zbytků kyseliny trichloroctové, čímž vznikne 14-hydroxy-1,14karbonátdeacetylbaccatin III. Při použití DMAP v katalytickém množství je možno snadněji v průmyslovém měřítku uskutečnit acylaci tohoto substrátu, která byla až dosud prováděna v pyridinu, což působilo potíže s ukládáním nebo odkládáním zbývajícího rozpouštědla.

Oxidační stupeň b), prováděný na hydroxylové skupině v poloze 13 je možno uskutečnit působením oxidu manganičitého nebo oxidu vizmutu nebo ozonu v rozpouštědle ze skupiny acetonitril, aceton nebo směs ethylacetátu a methylenchloridu v poměru 9:1 za energického míchání, s výhodou se postup provádí působením ozonu nebo oxidu manganičitého v acetonitrilu nebo acetonu. Při reakci s ozonem se rychle tvoří deriváty, oxidované v poloze 13, kdežto při použití oxidu manganičitého se v krátké době vytvoří deriváty, oxidované v poloze 13, které je možno izolovat z reakčního prostředí, kdežto při další reakční době vznikají deriváty, oxidované v poloze 13 a hydroxylováné v poloze 14.

Následující karbonace ve stupni c) na hydroxylových skupinách v polohách 1 a 14 se obvykle uskuteční působením fosgenu nebo ve směsi methylenchloridu a toluenu v přítomnosti pyridinu. Výsledný 1,14-karbonátový derivát je pak možno snadno redukovat v poloze 13 za vzniku odpovídajícího 13-hydroxyderivátu ve stupni d) . Tato

4444 44 ···· 44 4444

4 · 4 4 4 44 ·

44 ·44 444

4 44 44444

4444 4 44444 44 44 redukce probíhá regioselektivně na karbonylové skupině v poloze 13, kdežto karbonylová skupina v poloze 9 zůstává zachována. Tato reakce se obvykle provádí působením hydroborátu sodného v methanolu nebo působením tetrabutylamoniumhydroborátu a poskytuje vysoké výtěžky. V následujícím stupni e) dochází k odstranění ochranných skupin z hydroxylových skupin v polohách 7 a 10, čímž vzniká 14P~hydroxy-l, 14-karbonátdeacetylbaccatin III. Podmínky a reakční složky, které je možno použít při selektivním odstranění ochranných skupin z hydroxylových skupin v polohách 7 a 10, jsou popsány v publikacích Zheng a další, Tetrahedron Lett., 1995, 36, 2001, a Datta a další, J. Org. Chem., 1995, 60, 761.

Selektivní acetylace v poloze 10 ve stupni f) se provádí při použití anhydridu kyseliny octové v přítomnosti ceru, skandia nebo ytterbia ve formě solí, s výhodou se užije CeCl₃.7H₂O. Pak se hydroxylová skupina v poloze 7 chrání silylací ve stupni g). Následující stupeň h) zahrnuje kondenzaci 14p~hydroxy-7-Tes-l,14karbonátbaccatinu III a kyseliny (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-diemthoxyfenyl) -4-isobutyl- 1-oxazolidin-5-karboxylové. Uvedená kyselina se připravuje podle dokumentu WO 01/02407. Reakce se provádí v bezvodých nepolárních organických rozpouštědlech v přítomnosti baze a kondenzačního činidla, například decyklohexylkarbodiimidu DCC.

Konečně ve stupni i) je možno odstranit triethylsilylovou skupinu působením pyridiniumfluoridu ve směsi acetonitrilu a pyridinu v dusíkové atmosféře, kdežto dimethoxybenzylidenovou skupinu je možno odstranit v methylenchloridu přidáním methanolu a pak hydrogenuhličitanu sodného.

• · ··« · ·* <·«* • ·

999

9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 99999 99 99

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava 7,10-bistrichloracetyl-10-desacetylbaccatinu III

1. postup

4,77 ml, 42,32 mmol anhydridu kyseliny trichloroctové se po kapkách přidá do roztoku 10 g, 18,4 mmol deacetylbaccatinu III ve směsi 125 ml bezvodého methylenchloridu a 42 ml pyridinu. Reakční směs se míchá 3 hodiny nebo až do ukončení reakce, která se sleduje pomocí TLC na silikagelu při použití směsi n-hexanu a ethylacetátu 1:1 jako elučního činidla. Po ukončení reakce se přidá 5 ml methanolu k rozrušení přebytku anhydridu kyseliny trichloroctové a pak se přidá voda. Organická fáze se důkladně promyje vodou, okyselenou kyselinou chlorovodíkovou k odstranění pyridinu, pak se organická fáze vysuší síranem hořečnatým a odpaří do sucha ve vakuu, čímž se získá 17 g bledě žluté pevné látky, která má po krystalizací z chloroformu optickou otáčivost [a]_D -34° (CH₂C1₂ C5,8) IR (KBr) 3517, 1771, 1728, 1240. 981, 819,

787, 657 cm'¹.

^ΧΗ NMR (200 MH):	: δ 8,11 (Bz, C), 7,46 (Bz, BB') , 6,50 (s,
H-10), 5,72	(m,	H-7 H-29), 5,02	(d, J=8 Hz, H-5)	, 4,95 (8m,
H-13), 4,37	(d,	J=8 Hz, H-20a),	4,18 (d, J=8 Hz,	H-20b),
4,02 (d, J=	6 Hz	, H-3), 2,32 (s,	4-Ac), 2,22 (s,	H-18), 1,91

(s, H-19), 1,25 a 1,11 (s, H-16, H-17), 1,94 (m, H14a), 1,89 (m, Η14β).

♦· ··*· ♦ « «···» • 9 • « ·« • · · · · · ♦ · · ••••9 «· »·· ·· ··

2. postup g, 18,38 mmol 10-DAB III se uvede do suspenze ve 120 ml methylenchloridu, přidá se 220 mg, 1,4 mmol, 0,1 ekvivalentu DMAP a směs se zchladí v ledové lázni na 0 °C. Pak se přidá 10,26 ml, 73,6 mmol, 4 ekvivalenty Et₃N a okamžitě potom ještě 4,12 mmol, 36,8 mmol, 2 ekvivalenty CI3COCI v proudu dusíku v průběhu 5 minut, přičemž teplota se udržuje na hodnotě nižší než 10 °C. Po skončeném přidávání se směs míchá na ledové lázni ještě 15 minut, pak se lázeň odstraní a směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Po 1 hodině se reakce sleduje pomocí TLC při použití směsi ethylacetátu a n-hexanu 2:3. Rf pro 10-DAB III = 0,05, Rf pro 7,10-bistrichloracetyl-10-DABIII = 0,26. Přidá se 1 ml, 0,5 ekvivalentu C1₃COC1 a směs se míchá ještě 10 minut při teplotě místnosti, pak se vlije do nádoby s obsahem 160 g drceného ledu a míchá se při teplotě místnosti až do dosažení rovnovážného stavu, přibližně 1 hodinu. Pak se vodná fáze oddělí a extrahuje se 3x4 0 ml methylenchloridu. Organické fáze se spojí, promyjí se 20 ml IN HCl a pak 2 0 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 16,5 g surového produktu. Po krystalizaci z chloroformu je IR spektrum, ^XH NMR a optická otáčivost v souladu s hodnotami pro sloučeninu, připravenou při použití pyridinu a anhydridu kyseliny trichloroctové.

Příklad 2

Oxidace v poloze 13 a hydroxylace v poloze 14 10-deacetylbaccatinu III 7,10-bistrichloracetátu • 9 9999 • 9 ·

«9 9 • · 9

9 · «

9 «

9* 9999

K roztoku 3 g 7,10-bistrichloracetátu 10-deacetylbaccatinu III ve 40 ml acetonitrilu se přidá 30 g aktivovaného oxidu manganičitého a suspenze se míchá magnetickým míchádlem při teplotě místnosti, reakce se sleduje pomocí TLC s použitím petroletheru a etheracetátu 5:5, Rf pro výchozí materiál je přibližně 0,31. Po přibližně 1 hodině je možno prokázat tvorbu

13-dehydroderivátu analýzou TLC, Rf pro 13-dehydroderivát je přibližně 0,50. Pak se směs míchá ještě přibližně 72 hodin, v průběhu této doby dochází k pomalé oxidaci 13-dehydroderivátu na 14p~hydroxyderivát, jehož Rf je přibližně 0,36. Reakční směs se zfiltruje přes vrstvu celitu a filtrační koláč se opakovaně promyje ethylacetátem. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se čistí chromatografií na sloupci s náplní 100 ml silikagelu, jako eluční činidlo se použije směs petroletheru a ethylacetátu 7:3, čímž se získá 170 mg 13-dehydroderivátu a 1,05 g 14β-hydroxy-13-dehydroderivátu.

7,10-bistrichloracetát 13-dehydro-14p-hydroxy-10-deacetylbaccatinu III je bílý prášek s teplotou tání 97 °C. IR (KBr disk): 3440, 1780, 1767, 1736, 1686, 1267, 1232, 1103, 1010. 854 cm'¹.

’-Η NMR (200 MHz, CDC1₃) : δ 8,07 (Bz AA') , 7,60 (Bz, C) ,

7,49 (Bz, BB'), 6,52 (s, H-10), 5,92 d, J=6,7 Hz, H-2), 5,70 (br t, J=8,0 Hz, H-7), 4,95 (br d, J=8,2 Hz, H-5), 4,37 (d, J=8,2 Hz, H-20a), 4,31 (d, J=8,2 Hz, H-20b), 4,17 (s, H14), 4,02 (d, J=6,7 Hz, H-3), 2,71 (m, H-6), 2,29 (s, OAc) , 2,17 (s, OAc) , 1,96 (s, H-18) , 1,27, 1,01 (s, H-16, H-17 a H-19).

·· ···· ·· ···· ·· ···· ·· · · · · ·· · • · ····· · · · • · · · · · · · ·

..... .........

Příklad 3

Oxidace v poloze 13 a hydroxylace v poloze 14

7-triethylsilylbaccatinu III

K roztoku 1,0 g 7-triethylsilylbaccatinu III v 10 ml acetonitrilu se přidá 10 g aktivovaného oxidu manganičitého a suspenze se míchá magnetickým míchadlem při teplotě místnosti, průběh reakce se sleduje pomocí TLC při použití směsi petroletheru a ethylacetátu 6:4, Rf pro výchozí látku je přibližně 0,25. Po přibližně 2 hodinách je tvorba 13-dehydroderivátu ukončena podle analýzy TLC, Rf pro 13-dehydroderivát je přibližně 0,45. Směs se dále míchá ještě přibližně 188 hodin, v průběhu této doby se přidá ještě 10 g oxidu manganičitého. Dochází k pomalé oxidaci

3-dehydroderivátu na jeho 14p~hydroxyderivát, jehož Rf je přibližně 0,38. Pak se reakční směs zfiltruje přes vrstvu celitu a filtrační koláč se promyje ethylacetátem.

Rozpouštědlo se odpaří a odparek se čistí na sloupci s náplní 40 ml silikagelu, jako eluční činidlo se použije směs petroletheru a ethylacetátu 7:3, čímž se získá 126 mg 13-dehydroderivátu, ve výtěžku 46 % se získá 479 mg 14P-hydroxy-13-dehydroderivátu a mimoto se získá 189 mg směsi těchto látek.

13-dehydro-7-triethylsilylbaccatin III je bílý prášek s teplotou tání 168 °C. Optická otáčivost [a]_D ²⁵ je -35° (CH₂C1₂, C 0,67) IR (KBr) 3488, 1726, 1711, 1676, 1373,

1269, 1244, 1230. 1105 cm'¹.

^ΧΗ NMR (200 MH CDCI3) : δ 8,07 (Bz AA' ) , 7,60 (Bz, C) , 7,49 (Bz, BB'), 6,59 (s, H-10), 5,69 (d, J=6,9 Hz, H-2), 4,92 (d, J=8,2 Hz, H-5), 4,48 (dd, J=10,6 Hz, H-7), 4,33 (d,

J=8,0 Hz, H-20a), 4,12 (d, J=8,0 Hz, H-20b), 3,91 (d, J=6,9

• · · · · • · • ···

Hz, H-3), 2,96 (d, J=20 Hz, H-14a), 2,65 (d, J= 20 Hz, H20b), 2,50 (m, Η-6α), 2,23 (s, OAc), 2,19 (s, OAc + H-18), 1,67, 1,28, 1,19 (s, H-16, H-17 a H-19), 0,19 (m, TES).

7,10-bistrichloracetát 13 -dehydro-14β-hydroxy-10 -deacetylbaccatinu III je bílý prášek s teplotou tání 153 °C a optickou otáčivostí [a] _D ²⁵ +20 (CH2C12, C 0,75), IR(KBr) 3431, 1723, 1692, 1371, 1269, 1242, 1223, 10960111^, ^XH NMR (500 MH CDC13) : δ 8,06 (Bz AA') , 7,60 (Bz, C) , 7,48 (Bz, BB'), 6,51 (s, H-10), 5,88 (d, J=6,9 Hz, Η-2), 4,90 (d, J=8,2 Hz, H-5), 4,47 (dd, J=10,6 7 Hz, H-7), 4,30 (d,

J=8 Hz), H-20a) , 4,28 (d, J=8,2 Hz, H-20b) , 4,13 (br d, J=2 Hz, H-14), 3,84 (d, J=6,9 Hz, H-3), 3,69 (br d, J=2 Hz, 14OH) , 3,62 (s, 1-OH) , 2,52 (m, H-6a), 2,24 (s, OAc), 2,21 (s, OAc), 2,11 (s, H-18), 1,92 (m, Η-6β), 1,74, 1,56, 1,28 (S, -h-16, H-17 a H-19), 0,94 (m, TES), 0,59 (m, TES).

HRNS: 714,3092 (vypočteno pro C₃7H₅oOi₂Si 714,3092).

Příklad 4

Příprava 1,14-karbonát-13-dehydro-7-TES-14β-hydroxybaccatinu III

K 1,4 ml 2 0% roztoku fosgenu v toluenu (3,4 mmol, 2 0 molárních ekvivalentů a 0,56 ml, 6,8 mmol, 20 molárních ekvivalentů v pyridinu ve 2 ml dichlormethanu se po kapkách v průběhu 5 minut přidá roztok 124 mg, 1,17 mmol 13-dehydro-14β-hydroxy-7-triethylsilylbaccatinu III v 1 ml dichlormethanu. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a pak se přebytek fosgenu rozruší přidáním nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se extrahuje dichlormethanem. Organická fáze se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu ·· ···· ·♦ ···· ·· ···· • · ···· ·· · • · ····· ·· · sodného, nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a pak se vysuší síranem sodným. Rozpouštědlo se odpaří, čímž se získá červenavý odparek, který se čistí na krátkém sloupci s obsahem přibližně 5 ml silikagelu, jako eluční činidlo se užije směs hexanu a ethylacetátu 8:2, čímž se ve výtěžku 92 % získá 118 mg karbonátu. V případě, že se reakce uskuteční při použití triethylaminu jako baze, získá se směs 1,14-karbonátu a 2-debenzoyl-1,2-karbonát-14-benzoátu v poměru přibližně 1:15.

1.4- karbonát-13-dehydro-14p-hydroxy-7-triethylsilylbaccatin III je bílý prášek s teplotou tání 153 °C. Optická otáčivost [a]_D ²⁵ +23 (CH2C12, C 0,75) IR (KBr), pásy při 1834, 1734, 1709, 1373, 1242, 1225, 1088, 1057 cm'¹, ^-NMR (200 MH CDC13) : β 7,99 (Bz AA') , 7,60 (Bz, C) , 7,48 (Bz, BB'), 6,51 (s, H-10) , 6,12 D) , J=6,9 Hz, H2), 4,90 (d, J=8,2 Hz, H-5), 4,78 (s, H-14), 4,44 (dd, J=10,7 Hz, H-7), 4,34 (d, J=8 Hz, H-20a), 4,19 (d, J=8,2 Hz, H-20b) , 3,80 (d, J=6,9 Hz, H-3), 2,50 (m, Η-6α) , 2,23 (s, OAc), 2,22 (s, OAc), 2,19 (s, H-18), 1,92 (m, Η-6β), 1,72, 1,39, 1,26 (s, -H-16, H-17 a H-19), 0,90 (m, TES),

0,56 (m, TES). HRNS: 740,2851 (vypočteno pro C38H48O13SÍ 740,2864).

1.4- karbonát-13-dehydro-14β-hydroxybaccatin III je bílý prášek s teplotou tání 240 °C. Optická otáčivost [a] _D ²⁵-2,5 (CH₂C1₂, C 0,4) IR (KBr) 3539, 1831, 1736, 1240, 1088,

1068, 1057, 1024 cm'¹, ¹H-NMR (200 MH CDCl₃): δ 7,98 (Bz

AA'), 7,61 (Bz, C), 7,50 (Bz, BB'), 6,39 (s, H-10), 6,14 (d, J=6,9 Hz, H-2), 4,98 (d, J=8,2 Hz, H-5), 4,80 (s, H14), 4,43 (dd, J=10,7 Hz, H-7), 4,35 (d, J=8 Hz, H-20a), 4,24 (d, J=8,2 Hz, H-20b), 3,80 (d, J=6,9 Hz, H-3), 2,50 ·· ···· ·· ···· ·· ···· ·· · · · · ·· · • · ····· · · · • · ·· ····· ····· · · · · · ·· ·· (m, Η-6α), 2,30 (s, OAc), 2,20 (s, OAc), 2,15 (s, H-18),

1,90 (m, Η-6β), 1,74, 1,34, 1,25 (s, H-16, H-17 a H-19), HRMS: 626,2005 (vypočteno pro C3₃H₃4O;i. 626,1999).

Příklad 5

Příprava 1,14-karbonát-7-O-triethylsilylbaccatinu III

K roztoku 50 mg 1,4-karbonát-13-dehydro-14β-hydroxy-7-triethylsilylbaccatinu III v 5 ml methanolu se po malých podílech přidá přebytek přibližně 20 mg hydroborátu sodného. Po 30 minutách se k reakční směsi přidá nasycený vodný roztok chloridu amonného, směs se extrahuje ethylacetátem, promyje se nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se čistí chromatografií na sloupci přibližně 5 ml silikagelu, jako eluční činidlo se užije směs hexanů a ethylacetátů 8:2, čímž se získá 35 mg 13a-hydroxyderivátu a 9 mg 13β-ΙιγάΓθχγάθΓίνέ^.

1,14-karbonát-14β-hydroxy-7-triethylsilylbaccatin III s optickou otáčivostí [cc] _D ²⁵ -35 (CH2C12, C 0,60) IR (KBr) 3054, 1819, 1736, 1603, 1371, 1261, 1238, 1090, 1069, cm'¹, ¹H NMR (200 MH CDC13) : δ 8,06 (Bz AA') , 7,65 (Bz, C) , 7,50 (Bz, BB'), 6,47 (s, H-10), 6,12 (d, J=6,9 Hz, H-2), 5,05 (br d, J=5,5 Hz, H-13), 4,98 (br d, J=9 Hz, H-5), 4,83 (d, J=5 Hz, H-14), 4,50, (dd, J=10,7 Hz, H-7), 4,34 (d, J=8 Hz, H-20a) , 4,23 (d, J=8 Hz, H-20b) , 3,75 (d, J=6,9 Hz, H-3), 2,56 (m, Η-6α), 2,34 (s, OAc), 2,22 (s, OAc), 1,78 (m, H6β), 1,35 (s, H-18), 1,75, 1,18, 0,95 (s, -H-16, H-17 a H19), 0,90 (m, TES), 0,62 (m, TES).

• · · · • · · ·

1,14-karbonát-14p-hydroxy-7-triethylsilyl-13-epibaccatin III je amorfní látka, s optickou otáčivostí [a]_D ²⁵ -13 (CH₂C1₂, C 0,60), IR (KBr) 3630, 1825, 1734,

1603, 1375, 1262, 1091, 1071, 1049 cm^-1, ¹H-NMR (200 MH CDC1₃) : δ 8,01 (BzAA'), 7,63 (Bz, C) , 7,48 (Bz, BB'), 6,44 (s, H-10), 6,12 (d, J=7,2 Hz, H-2), 4,90 (br d, J=9 Hz, H5), 4,81 (d, J=8 Hz, H-14), 4,48 (br, J= 8, H-13), 4,50 (dd, J=10,7 Hz, H-7), 4,41 (d, J=8 Hz, H-20a), 4,31 (d, J=8 Hz, H-20b), 3,68 (d, J=7,2 Hz, H-3), 2,60 (m, H-6 a,50 (dd, J=10,7 Hz, H-7), 4,41 (d, J=8 Hz, H-20a), 4,31 (d, J=8 Hz, H-20b), 3,68 (d, J=7,2 Hz, H-3), 2,60 (m, Η-6α), 2,32 (s,

OAc), 2,26 (s, H-18), 2,21 (s, OAc), 1,80 (m, Η-6β), 1,72, 1,43, 1,27 (s, -H-16, H-17 a H-19), 0,93 (m, TES), 0,61 (m, TES) .

Příklad 6

Příprava 1,14-karbonát-13-dehydro-14β-hydroxy-7,10-bistrichloracetylbaccatinu III

Roztok 200 mg 13-dehydro-14β-hydroxy-7,10-bistrichloracetylbaccatinu III ve 2 ml methylenchloridu se v průběhu 5 minut přidá k 3,6 ml 20% roztoku fosgenu v toluenu (20 ekvivalentů) a 1,12 ml, 20 ekvivalentů pyridinu ve 2 ml methylenchloridu. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, pak se přebytek fosgenu rozloží přidáním 3 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Směs se extrahuje methylenchloridem, organický podíl se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odpaří a odparek še čistí chromatografií na sloupci silikagelu při použití

SSSSE^SSSfflH

4 4 4 · · ···· • · · · ··· 4 4 4 • · · · 4

4 4 4 4 •44 ·« «· hexanu a ethylacetátu 9:1 jako elučního činidla, čímž se ve výtěžku 89 % získá 175 mg karbonátu.

1,14-karbonát-13-dehydro-14p-hydroxy-7,10-bistrichloracetylbaccatin III je bílá amorfní pevná látka. IR (KBr) 1834, 1771, 1735, 1709, 1232, 1103, 1010, 8540111^-1. ¹H-NMR (200 MHz, CDC1₃) : δ = 8,03 (Bz AA') , 7,60 (Bz, C) , 7,50 (Bz, BB'), 6,52 (s, H-10), 5,92 (d, J=6,7 Hz, H-2), 5,70 (br t, J=8,0 Hz, H-7), 4,95 (br d, J=8,2 Hz, H-20b), 4,77 (s, H-14), 4,02 (d, J=6,7 Hz, H-3), 2,71 (m, H-6),

2,29 (s, OAc), 1,96 (s, H-18), 1,27 až 1,01 (m, H-16, H-17, H-19).

Příklad 7

Příprava 1,14-karbonát-14β-hydroxy-10-deacetylbaccatinu III

Roztok 500 mg 1,14-karbonát-13-dehydro-14p-hydroxy7,10-bistrichloracetylbaccatinu III v 8 ml methanolu se zchladí na ledové lázni na 0 °C a v průběhu 5 minut se přidá 44 mg hydroborátu sodného. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti, pak se zchladí na 0 °C, v průběhu 5 minut se přidají 2 ml acetonu a směs se koncentruje za mírného podtlaku, pak se přidá 10 ml ethylacetátu a směs se zfiltruje přes vrstvu celitu. Čirý roztok se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Rozpouštědlo se odpaří, odparek, který je směsí C13-epimerů v poměru 4,5:1 se čistí chromatografií na sloupci silikagelu při použití směsi hexanu a ethylacetátu 1:1 jako elučního činidla, čímž se získá 251 mg výsledného produktu a 55 mg 13-epimeru karbonátu, zbaveného ochranných skupin. Celkový výtěžek je 88 %.

•4 4444

444·

4404 • · 04«· · · • 4 4 4 ··· 4 * • * ·** · 4 · 0 • · ·4·00

..... ..... ·♦

1,14-karbonát-14P-hydroxy-10-deacetylbaccarin III je bílá amorfní pevná látka. IR (KBr): 3520 (OH), 1834, 1709, 1232, 1103, 1010, 854 cm¹.

^XH NMR (200 MHz, CDC1₃) : δ = 8,03 (Bz AA') , 7,60 (Bz, C) ,

7,50 (Bz, BB'), 6,27 (s, H-10), 5,92 (d, J=6,7 Hz, H-2),

4,95 (br d, J=8,2 Hz, H-20b), 4,85 (m, H-13), 4,77 (s, H14), 4,42 (br t, J=8,0 Hz, H-7), 4,02 (d, J=6,7 Hz, H-3),

2,71 (m, H-6), 2,29 (s, OAc), 1,96 (s, H-18), 1,27-1,01 (m, H-16, H-17, H-19).

Příklad 8

Příprava 1,14-karbonát-13 -(N-Boc-P-isobutylserinyl)-14β-hydroxybaccatinu III

K roztoku 126 mg 1,14-karbonát-14p-hydroxy-10-deacetylbaccatinu III ve 3 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 7,5 mg CeCl₃.7H₂O a 0,078 ml anhydridu kyseliny octové. Reakční směs se míchá 5 hodin při teplotě místnosti, v průběhu této doby se reakční směs změní na homogenní směs. Přidá se 1,5 g ledu a směs se ještě 1 hodinu míchá. Organické rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se zředí 5 ml vody. Vzniklá sraženina se odfiltruje a suší za odsávání 18 hodin. Jako výsledný produkt se získá 135 mg bílého prášku s následujícími vlastnostmi.

^XH NMR (400 MHz, CDCl₂) , ó_ppm = 1,25, 1,11 (s, H-16 a H-17), 1,66 (s, H-19), 2,04 (s, H-18), 2,22 (s, OAc), 2,29 (s, OAc), 3,89 (d, J=0,9 Hz, H-3), 4,06 (d, J=7 Hz, C20b), 4,20 (d, J=7 Hz, 4,85 (br d, (d, J=7 Hz, (d, J=8 Hz,

H20a), 4,41 (m, H-7), 4,77 (d, J=4 Hz, H-14), J=4 Hz, H-13), 4,97 (br d, J=8 Hz, H-5·) , 5,8 H-2), 6,31 (s, H-10), 7,44 (t, J (Hz, Bz), 7,55 Bz) , 8,07 (d, J=8 Hz, Bz) .

0 mg 1,14-karbonát-14p~hydroxybaccatinu III se rozpustí ve 4 ml dimethylformamidu a přidá se 0,07 ml N-methylimidazolu. K roztoku se za energického míchání při teplotě místnosti v průběhu 1 hodiny přidá 0,042 ml triethylchlorsilanu. Směs se pak vlije za energického míchání do 10 ml vody. Vzniklá suspenze se nechá stát 18 hodin při teplotě 4 °C a vzniklá bílá sraženina se odfiltruje a promyje se 5 ml vody a pak 2 x 3 ml hexanu. Získá se 150 mg bílé pevné látky se stejnými spektroskopickými vlastnostmi, jaké má sloučenina, připravená způsobem podle příkladu V.

Do baňky s okrouhlým dnem s objemem 1 litr se vloží 10 g 14p-hydroxy-7-Tes-l,14-karbonátbaccatinu III spolu se 300 ml bezvodého toluenu. Pak se přidá 10 g kyseliny (4S, 5R) -N-Boc-2-(2,4-dimethoxyfenyl)-4-isobutyl-l-oxazolidin-5-karboxylové, 2 g N, N-dímethylaminopyridínu DMAP a 9,5 g dicyklohexylkarbodiimidu DCC v roztoku v methylenchloridu. Reakčni směs se vaří 3 hodiny pod zpětným chladičem, pak se zchladí a vysrážený produkt se oddělí. Matečný louh se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného k odstranění nezreagované kyseliny, pak se promyje zředěnou kyselinou chlorovodíkovou k ostranění DMAP a pak se dále promývá roztokem hydrogenuhličitanu sodného až do neutrální reakce.

Organická fáze se odpaří do sucha, čímž se získá 41,5 g produktu, který se užije jako takový v následujícím stupni.

g získaného produktu se zbaví ochranných skupin ve stupních. Nejprve se odstraní Tes a pak

2,4-dimethoxybenzaldehydová skupina. 40 g produktu se rozpustí ve 100 ml směsi acetonitrilu a pyridinu v poměru

80:100 pod dusíkem, směs se zchladí na 0 °C, přidá se 13 ml

0999 • · •000 0

00 0 • 0 • 0 00 ·· 0··· 9· 0

0··

9 9 0

00 pyridiniumfluoridu a směs se 24 hodin míchá. Pak se vzniklý roztok vlije do 2 litrů vody a výsledný produkt se odfiltruje a usuší ve vakuu.

Produkt se rozpustí v 60 ml methylenchloridu, roztok se energicky míchá při teplotě 0 °C a přidá se 4 0 ml 0,6 N roztoku HCl v methanolu. Pak se reakční směs míchá ještě 2 hodiny, načež se zředí 150 ml methylenchloridu a pak se míchá s roztokem hydrogenuhličitanu sodného, čímž se pH upraví na 6 až 7. Organická fáze se odpaří do sucha a odparek se nechá krystalizovat ze směsi acetonu a hexanu a krystalky se usuší, čímž se získá 16 g krystalického 1,14-karbonát-13- (N-Boc-P-isobutylserinyl) -14β-hydroxybaccatinu III s následujícími fyzikálně-chemickými a spektroskopickými vlastnostmi.

Vzorec: C₄4H₅₇NOi7

Forma: bílý prášek

Teplota tání: 245 °C

Tabulka 1: Chemický posun (ppm) v ¹H NMR v CDC1₃ roztoku (200 MHz)

H	Ppm. (Ήζ!	H Ppm.	(Hz!
2	6.09-d (7.8)	2'	4.30-dd(6.4; 3.2)
3	3.68-d(7.4)	3'	4.08-m
5	4.91-dd (9.7; 2.5)	4'a	1.21-m
6<x	2.52-ddd (14.8; 9.8; 6.9)	4b	1.43-m
όβ	1.86-m	5'	1.65-m
7	4.37-m	6'	0.96-d (6.3)
10	6.25-s	7'	0.95-d (6.3)
13	6.44-d (broad, 6.9)	4-000(¾	2.40-s
14	4.84-d (6.9)	IO-OCOCH3	2.22-s
16	1.25-s	Boc	1.35-s
17	1.32-s	o-benzoyl	8.01-m
18	1.87-d(1.6)	m-benzoyl	7.46-m
19	1.69-s	p-benzoyl	7.58-m
20α	4.27-d (8.4)	3⁽-NH	4.72-d (9.0)
20β	4.20-d (8.4)

·· 000

0 ··«!

• · 0 · · · · · • * * · ·0· 0 0 •00

0 0 00 00

Tabulka 2 : Chemický posun (ppm) v ¹³C NMR v CDC1₃ roztoku
(50,308 MHz) c	»	C ppm.
9	201.8-s	8	58.2-s
1'	172.6-s	3'	51.2-d
4-OCOCH3	170.5-s	3	44.6-d
IO-OCOCH3	170.2-s	15	41.3-s
2-COPh	164.3-s	4'	39.9-t
0=0 (Boc)	155.8-s	6	34.9-t
C=O (carbonate) 151.4-s	(CH₃)₃C Boc	27.7-q
12	139.4-s	17	25.5-q
11	133.1-s	16	22.6-q
(Me)₃C(Boc)	80.0-s	4-OCOCH3	22.0-q
5	83.8-d	IO-OCOCH3	20.2-q
1	87.7-s	5'	24,3-d
4	80.0-s ·	6'	22.7-q
2	69.0-d	7'	21.6-q
20	75.5-t	18	' 14.6-q
2'	73.3-d	19	9.8-q
7	71.2-d	q-benzoyl	127.5-s
10	74.3-d	o-benzoyl	129.5-d
13	74.1-d	m-benzoyl	128.6-d
14	79.1-d	p-benzoyl	133.7-d
Hmotové spektrum (NH₃, DEP/CI, ;	pozitivní ionty):	(m/z) 889
[(MNH₄)⁺], 832 [ (MNH₄- (CH₃) ₃C) ⁺] ,	772 [ (MNH₄-BocNH₂	Π
(NH₃) , DEP/CI, negativní ionty)	: (m/z) 871 (M‘) , :	260
(postranní řetězec)
IR spektrum	(KBr peleta): 3521,	3321, 2971, 2953,	1826,
1762, 1706,	1526, 1366, 1238, 1165, 1072, 723 cm'	1
UV spektrum	(MeOH): 231,276 a 284 nm,
-E_x% při 231	nm = 180,99
-E_x% při 276	nm = 14,094
-E_x% PŘI 284	NM = 12,182

Zastupuj e:

• 4 «44

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Způsob výroby derivátu taxanu, 13-(Ν-Βοο-β-isobutylisoserinyl)-14p~hydroxybaccatin III 1,14-karbonátu vzorce I, vyznačující se tím, že se

a) chrání hydroxylové skupiny v poloze 7 a 10 ve výchozím 10-deacetylbaccatinu III kde R a R_1; stejné nebo odlišné, se volí ze skupiny atom vodíku, Cl-ClOalkyl nebo aryl, Cl-ClOalkylkarbonyl, Cl-ClOarylkarbonyl, trichloracetyl nebo Cl-C4trialkylsilyl, přičemž v případě, že R a R_x mají totožný význam, jde s výhodou o trichloracetyl, kdežto v případě, že mají odlišný význam, znamená R s výhodou trichloracetyl a Ri znamená • · ··»· * · 4 » 4 • · 4

4 4

4444 4

44 4444

4 4 4

4 4 4 ·· ·· 4 4

4 4 · »4 4»4

4444 • 4

4 4 • 4

4 4 4

4 4 acetyl nebo R znamená triethyl, trimethylsilyl nebo BOC a Ri znamená acetyl,

b) uskuteční dvoustupňová oxidace na karbonylové skupině v poloze 13 a hydroxylace v poloze 14

c) provede se karbonace na sousedních hydroxylových skupinách v polohách 1 a 14 za vzniku 1,14-karbonátového derivátu

O ·· «··« •9 ···· • · • ··· ·· ···· • · · • · · • · · • · · · ·· ··

e) odstraní se ochranné skupiny v polohách 7 a 10

g) I4p-hydroxybaccatin-1,14-karbonát vzorce III se převede na derivát, triethylsilylovaný v poloze 7

h) sloučenina ze stupně g) se nechá reagovat s kyselinou (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-diemthoxyfenyl)-4-isobutyl-l-oxa zolidin-5-karboxylovou φφ φφφφ • φ *Φ·Φ • φ φ φ φφφφ • φ φ • φ φ • Φ φφφ »φ φφφφ φ φ φ • φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φφ \

i) odstraní se triethylsilylová a dimethoxybenzylidenová ochranná skupina ze sloučeniny ze stupně h)
2. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že R = Ri = trichloracetyl.
3. Způsob podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že R a Ri jsou odlišné, přičemž R znamená trichloracetyl a Ri znamená acetyl nebo R znamená triethyl nebo trimethylsilyl a Ri znamená acetyl.
4. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se ve stupni a) odstranění ochranné hydroxylové skupiny v polohách 7 a 10 uskuteční působením trichloracetylchloridu v methylenchloridu v přítomnosti triethylaminu a katalytického množství dimethylaminopyridinu.
5. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se ve stupni b) oxidace hydroxylové skupiny v poloze 13 a hydroxylace v poloze 14 uskuteční působením oxidu manganičitého nebo oxidu vismutu nebo ozonu v rozpouštědle ze skupiny acetonitril, aceton nebo směs ethylacetátu a methylenchloridu.
6. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se ve stupni c) karbonace hydroxylových skupin v polohách 1 a 14 provádí při použití fosgenu ve směsi methylenchloridu a toluenu v přítomnosti pyridinu.
7. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se redukce ve stupni d) na 13-hydroxyskupinu uskuteční působením hydroborátu sodného v methanolu.
8. Způsob podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že se acetylace ve stupni f) na hydroxylové skupině v poloze 10 uskuteční působením acetylchloridu.
9. Způsob podle nároku 8, vyznačuj ící se tím, že se silylace ve stupni g) uskuteční působením triethylchlorsilanu.
10. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se reakční stupeň h) uskuteční v bezvodém apolárním organickém rozpouštědle v přítomnosti baze a dicyklohexylkarbodiimidu DCC jako kondenzačního činidla.

44 ·*»·

4 4 • 4

4 4 4

4 4 • 44 4

44 44«4

4 4 «

4 4 4 4« *4 4 • 4 4

44 444

44 4444 «4 4 «44

4 4 4 4

4 4 4 4

4 4 4 4
11. Způsob podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se triethylsilylová ochranná skupina odstraní ve stupni i) působením pyridiniumfluoridu ve směsi acetonitrilu a pyridinu v atmosféře dusíku a dimethoxybenzylidenová ochranná skupina se odstraní v methylenchloridu jako rozpouštědle přidáním methanolového roztoku kyseliny chlorovodíkové a pak hydrogenuhličitanu sodného.