CZ20014213A3

CZ20014213A3 - Diaminothiazoly a jejich pouľití pro inhibici protein-kinas

Info

Publication number: CZ20014213A3
Application number: CZ20014213A
Authority: CZ
Inventors: Shao Song Chu; Larry Andrew Alegria; Steven Lee Bender; Suzanne Pritchett Benedict; Allen J. Borchardt; Robert Steven Kania; Mitchell David Nambu; Anna Marie Tempczyk-Russell; Sepehr Sarshar; Dilip Bhumralkar; Zhengwei Peng; Yi Michelle Yang
Original assignee: Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 1999-06-04
Filing date: 2000-06-02
Publication date: 2002-04-17
Also published as: IS6183A; UY26190A1; AP2001002341A0; PL352714A1; HUP0202897A3; EP1181283B1; IL146094A0; EA200101268A1; US6620828B2; MA25530A1; KR20020015333A; WO2000075120A1; HUP0202897A2; JP2003501420A; PE20010211A1; BR0011585A; OA11959A; CN1359380A; NO20015045L; YU85601A

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká diaminothiazolových sloučenin, které modulují a/nebo inhibují aktivitu některých proteinkinas, a farmaceutických prostředků obsahujících takové sloučeniny. Předkládaný vynález se také týká terapeutického a profylaktického použití takových sloučenin a prostředků a způsobů pro léčbu nádorů, stejně jako jiných onemocnění asociovaných s nežádoucí angiogenesi a/n.ebo buněčnou proliferací, pomocí podání účinných množství takových sloučenin.

Dosavadní stav techniky

Protein-kinasy jsou rodinou enzymů, které katalýzují fosforylaci hydroxylové skupiny specifických tyrosinových, serinových nebo threoninových zbytků v proteinech. Obvykle mění taková fosforylace významně funkci proteinu a proto jsou protein-kinasy zásadní v regulaci různých buněčných procesů, včetně metabolismu, proliferace buněk, diferenciace buněk a přežívání buněk. Z mnoha různých buněčných funkcí, při kterých je nutná aktivita protein-kinas, představují některé funkce atraktivní cíle pro terapeutickou intervenci při některých onemocněních. Dvěma příklady jsou angiogenese a kontrola buněčného cyklu, ve kterých hrají protein-kinasy klíčovou úlohu; tyto procesy jsou zásadní pro růst solidních nádorů, stejně jako pro jiná onemocnění.

Angiogenese je mechanismus, kterým jsou tvořeny nové kapiláry z existujících cév. Když je to nutné, má cévní systém potenciál generovat novou síť kapilár pro udržení správné

funkce tkání a orgánů. U dospělých je angiogenese značně omezena a vyskytuje se pouze při procesu hojení ran a neovaskularizace endometria během menstruace. Viz Merenmies et al., Cell Growth a Differentiation, 8,-3-10 (1997). Na druhou stranu, nežádoucí angigenese je rysem několika onemocnění, jako jsou retinopatie, psoriasa, revmatoidní artritida, makulární degenerace související s věkem (AMD) a nádory (solidní nádory). Folkman, Nátuře Med., 1: 27-31 (1995). Mezi protein-kinasy, o kterých bylo prokázáno, že se účastní angiogenese, patří tři členové rodiny tyrosin-kinasového receptorů pro růstový faktor: VEGF-R2 (receptor 2 pro vaskulární endotelový růstový faktor, též označovaný jako KDR (receptor s insercí kinasové domény) a jako FLK-1); FGF-R (receptor pro fibroblastový růstový faktor); a TEK (též známý jako Tie-2).

VEGF-R2, který je exprimován pouze na endotelových buňkách, váže silný angiogenní růstový faktor VEGF a zprostředkuje následný přenos signálu prostřednictvím aktivace intracelulární kinasové aktivity. Proto se předpokládá, že přímá inhibice kinasové aktivity VEGF-R2 povede k redukci angiogenese i za přítomnosti exogenního VEGF (viz Strawn et al., Cancer Res. 56: 3540-3545 (1996)), jak bylo prokázáno s mutantními VEGF-R2, které neprováděly přenos signálu. Millauer et al., Cancer Research 56: 1615-1620 (1996). Dále, zdá se, že VEGF-R2 nemá žádou funkci u dospělých kromě té, že zprostředkuje angiogenní aktivitu VEGF. Proto se předpokládá, že selektivní inhibitor kinasové aktivity VEGF-R2 bude mít slabou toxicitu.

Obdobně, FGF-R váže angiogenní růstové faktory aFGF a bFGF a zprostředkuje následný intracelulární přenos signálu. Nově bylo naznačeno, že růstové faktory, jako je bFGF, mohou mít

zásadní úlohu při indukci angiogenese v solidních nádorech, které dosáhly určité velikosti. Yoshiji et al., Cancer Research 57: 3924-3928 (1997). Oproti VEGF-R2 je FGF-R exprimován v těle v mnoha různých typech buněk a může nebo nemusí mít významné úlohy v jiných normálních fyziologických procesech u dospělého. Nicméně, bylo popsáno, že systémové podání malých molekul inhibujících kinasovou aktivitu FGF-R blokuje angiogenesi indukovanou bFGF u myší bez zřejmé toxicity. Mohammadi et al., EMBO Journal, 17: 5896-5904 (1998).

TEK (též Tie-2) je jinou receptorovou tyrosin kinasou exprimovanou pouze na endotelových buňkách, která má významnou úlohu v angiogenesi. Vazba faktoru angiopoetin-1 vede k autofosforylaci kinasové domény TEK a vede k přenosu signálu, který patrně zprostředkuje interakci endotelových buněk s peri-endotelovými podpůrnými buňkami, což usnadní zrání nově vytvořených cév. Naopak, zdá se, že faktor angiopoetin-2, antagonizuje účinky angiopoetinu-1 na TEK a inhibuje angiogenesi. Maisonpierre et al., Science 277, 55-60 (1997).

V důsledku výše uvedených objevů byla navržena léčba angiogenese sloučeninami inhibujícimi kinasovou aktivitu VEGFR2, FGF-R a/nebo TEK. například, WIPO Mezinárodní přihláška č. WO 97/34876 popisuje některé deriváty cinnolinu, které jsou inhibitory VEGF-R2 a které mohou být použity pro léčbu onemocnění asociovaných s abnormální angiogenesi a/nebo zvýšenou permeabilitou kapilár, jako jsou nádory, diabetes, psoriasa, revmatoidní artritida, Kaposhiho sarkom, hemangiom, akutní a chronické nefropatie, atherom, arteriální restenosa, autoimunitní onemocnění, akutní zánět a oční onemocnění s proliferací cév sítnice.

Kromě své úlohy v angiogenesi mají protein-kinasy také klíčovou úlohu v kontrole buněčného cyklu. Nekontrolovaná proliferace buněk je známkou nádorů. Buněčná proliferace na různé podněty je charakterizována deregulací cyklu buněčného dělení, což je proces, kterým se buňky množí a dělí. Nádorové buňky mají typicky poškozeny geny, které přímo nebo nepřímo regulují progresi buněčného cyklu.

Cyklin-dependentní kinasy (CDK) jsou serin-threonin protein kinasy, které mají zásadní úlohu v regulaci přechodu mezi různými fázemi buněčného cyklu. Viz například články shrnuté v Science 274: 1643-1677 (1996). Cdk komplexy jsou tvořeny asociací regulační cyklinové podjednotky (například cyklinu A, Bl, B2, Dl, D2, D3 a E) a katalytické kinasové podjednotky (například cdc2 (CDK1), CDK2, CDK4, CDK5a CDK6). Jak názivy ukazují, vykazují CDK absolutní závislost na cyklinové podjednotce pro fosforylaci cílových substrátů a různé páry kinasa/cyklin regulují progresi specifickými fázemi buněčného cyklu.

CDK4 v komplexu s D cykliny hraje klíčovou úlohu v iniciaci buněčného cyklu z klidového stadia na stadium, ve kterém se buňka začne dělit. Tato progrese podléhá různým mechanismům regulujícím růst, jak negativním, tak pozitivním. Poruchy tohoto kontrolního systému, zejména ty, které postihují funkci CDEK4, se předpokládají u přeměny buněk na buňky s vysokou proliferací charakteristickou pro malignity, zejména pro familiární melanomy, karcinomy jícnu a karcinomy pankreatu.

Viz například Kamb, Trends in Genetics, 11: 136-140 (1995); Kamb et al., Science, 264: 436-440 (1994).

Použití sloučenin jako antiproliferativních terapeutických ·· · ·* • · · · · « činidel inhibujících CKD je předmětem několika patentových přihlášek. Například, US patent č. 5621082 (Xiong et al.) popisuje nukleovou kyselinu kódující inhibitor CDK6, a Evropská patentová přihláška č. 0666270 A2 popisuje peptidy a peptidomimetika, která působí jako inhibitory CDK1 a CDK2.

WIPO Mezinárodní přihláška WO 97/16447 popisuje některé analogy chromonů, které jsou inhibitory cyklin-dependentních kinas, zejména CDK/cyklinových komplexů, jako je CDK4/cyklin Dl, které mohou být použity pro inhibici nadměrné nebo abnormální proliferace buněk a proto pro léčbu nádorů. WIPO Mezinárodní přihláška WO 99/21845popisuje 4-aminothiazolové deriváty, které jsou použitelné jako inhibitory CDK.

Stále však existuje potřeba sloučenin s malou molekulou, které mohu být snadno syntetizovány a které jsou účinné v inhibici jedné nebo více CDK nebo komplexů CDK/cyklin. Protože může CDK4 sloužit jako obecný aktivátor buněčného dělení u většiny buněk a komplexy CDK4 a cyklinů D-typu řídí časnou Gi fázi buněčného cyklu, existuje potřeba účinných inhibitorů CDK4 a jeho komplexů s cykliny D-typu, pro léčbu různých nádorů. Také zásadní úloha cyklin E/CDK2 a cyklin B/CDK1 kinas v přechodech Gi/S fáze a G2/M fáze, v příslušném pořadí, nabízí další cíle pro terapeutické intervence v potlačení deregulovaného růstu buněk při nádorech.

Jiná protein-kinasa, CHK1, hraje zásadní úlohu v tom, že je kontrolním bodem v progresi buněčného cyklu. Kontrolní body jsou kontrolní systémy, které koordinují progresi buněčného cyklu tím, že ovlivňují tvorbu, aktivaci a následnou inaktivaci cyklin-dependentních kinas. Kontrolní body brání progresi buněčného cyklu v nevhodnou dobu, udržují metabolickou rovnováhu buněk, když jsou buňky v arestovaném stavu, a v některých případech mohou indukovat apoptosu (programovanou buněčnou smrt), když nejsou požadavky kontrolního bodu splněny. Viz například 0'Connor, Cancer Surveys, 29: 151-182 (1997); Nurse, Cell, 91: 865-867 (1997); Hartwell et al., Science, 266: 1821-1828 (1994); Hartwell et al., Science, 246: 629-634 (1989).

Jedna série kontrolních bodů sleduje integritu genomu a při zjištění poškození DNA tyto kontrolní body sledující poškození DNA blokují progresi buněčného cyklu v Gi a G2 fázích a zpomalují progresi v S fázi. 0'Connor, Cancer Surveys, 29: 151182 (1997); Hartwell et al., Science, 266: 1821-1828 (1994). Tento blok umožňuje dokončení reparace DNA před replikací genomu a následnou separací tohoto genetického materiálu do dceřiných buněk. Významné je to, že nejčastěji mutovaný gen u lidských nádorů, p53 tumor-supresorový gen, produkuje kontrolní protein pro kontrolu poškození DNA, který blokuje progresi buněčného cyklu v G1 fázi a/nebo indukuje apoptosu (programovanou buněčnou smrt) po poškození DNA. Hartwell et al., Science, 266: 1821-1828 (1994). bylo také prokázáno, že p53 tumor-supresor posiluje účinky kontroly poškození DNA v G2 fázi buněčného cyklu. Viz například Bunz et al., Science 282: 1497-1501 (1998); Winters et al., Oncogene, 17: 673-684 (1998); Thompson, Oncogene, 15: 3025-3035 (1997).

Vzhledem k zásadní úloze p53 tumor-supresorové dráhy u lidských nádorů se zkoumají terapeutické intervence využívající citlivosti nádorů s defektním p53. Jednou takovou citlivostí je účinek G2 kontrolního bodu u nádorů s defektním p53. Nádorové buňky, protože nemají Gi kontrolní bod, jsou citlivé na narušení poslední zábrany, která je chrání před účinky činidel poškozujících DNA, kterou je G2 kontrolní bod.

G2 kontrolní bod je regulován kontrolním systémem, který je konzervován od kvasinek až ke člověku. V tomto konzervovaném systému má významnou úlohu kinasa, CHKl, která přenáší signály

Ί

z komplexu detekujícího poškození DNA a inhibuje aktivaci cyklin B/Cdc2 kinasy, která způsobuje vstup do mitosy. Viz například Peng et al., Science 277: 1501-1505 (1997); Sanchez et al., Science, 277: 1497-1501 (1997). Bylo prokázáno, že inaktivace CHK1 ruší G₂ arest indukovaný poškozením DNA způsobeným terapeutickými činidly i endogenně, a že vede k usmrcení buněk s defektním kontrolním bodem. Viz Nurse, Cell, 91: 865-867 (1997); Weinert, Science, 277: 1450-1451 (1997); Walworth et al., Nátuře 363: 368-371 (1993); a Al-Khodairy et al., Molec. Biol. Cell 5: 147-160 (1994).

Selektivní manipulace s kontrolními body u nádorových buněk může vést k širšímu použití protinádorových chemoterapeutických činidel a radioterapeutických režimů, a dále může využít společného znaku lidských nádorových buněk, t.j. genomové nestability, jak podkladu pro destrukci nádorových buněk. Mnoho faktorů určuje CHK1 jako prvotní cíl v kontrolním bodu pro kontrolu poškození DNA. Výzkum inhibitorů této kinasy a funkčně příbuzných kinas jako je Cdsl/CHK2, což je kinasa, o které bylo nedávno zjištěno, že kooperuje s CHK1 v regulaci progrese do S-fáze (viz Zeng et al., Nátuře 395: 507-510 (1998); Matsuoka, Science, 282: 1893-1897 (1998)), může poskytnout nové terapeutické prostředky pro léčbu nádorů.

Vazba integrinového receptoru na ECM iniciuje intracelulární signály zprostředkované FAK (focal-adhesion kinasou), které se účastní v motilitě buněk, buněčné proliferaci a přežívání buněk. U lidských nádorů se nadměrná exprese FAK předpokládá při tumorigenesi a metastazování prostřednictvím její úlohy v signální dráze zprostředkované integriny.

Tyrosin kinasy mohou být receptorové (obsahující • · · · • · «· · ·.

extracelulární, transmembránové a intracelulární domény) nebo nereceptorové (které jsou zcela intracelulární). 0 alespoň jedné nereceptorové protein tyrosin kinase, konkrétně o LCK, se soudí, že zprostředkuje v T-lymfocytech přenos signálu při interakci povrchového proteinu (CD4) se zesítěnou anti-CD4 protilátkou. Podrobnější popis nereceptorových tyrosin-kinas je uveden v Bolen, Oncogene, 8: 2025-2031 (1993), zde uvedené jako odkaz.

Kromě protein kinas identifikovaných výše se mnoho dalších protein kinas považuje za terapeutické čile a mnoho publikaci popisuje inhibitory kinasové aktivity, jak je popsáno v: McMahon et al., Oncologist, 5:-3-10 (2000); Holash et al., Oncogene 18: 5356-62 (1999); Thomas et al., J. Biol. Chem.

274: 36684-92 (1999); Cohen, Curr. Op. Chem. Biol. 3: 459-65 (1999); Klohs et al., Curr. Op. Chem. Biol. 10: 544-59 (1999); McMahon et al., Current Opinion in Drug Discovery a

Development, 1: 131-146 (1998); Strawn et al., Exp. Opin. Invest. Drugs 7: 553-573 (1998). WIPO Mezinárodni přihláška WO 00/18761 popisuje některé substituované-3-kyanchinoliny jako inhibitory protein kinas. Jak je v oboru známo, pro inhibitory kinas je důležité, aby měly jak vysokou afinitu k cílové kinase, tak vysokou selektivitu vzhledem k ostatním kinasám.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká sloučenin obecného vzorce (I), které modulují a/nebo inhibují aktivitu protein kinas, stejně jako farmaceuticky přijatelných proléčiv, farmaceuticky přijatelných metabolitů a farmaceuticky přijatelných solí takových sloučenin (takové sloučeniny, proléčiva, metabolity a soli jsou souhrnně označovány jako činidla). Vynález se také týká farmaceutických prostředků obsahujících taková činidla a jejich terapeutického použití při léčbě onemocnění zprostředkovaných kinasovou aktivitou, jako jsou nádory, stejně jako jiná onemocnění asociovaná s nežádoucí angiogenesí a/nebo buněčnou proliferací, jako je diabetická retinopatie, neovaskulární glaukom, revmatoidní artritida a psoriasa. Dále se předkládaný vynález týká způsobů pro modulování a/nebo inhibici kinasové aktivity asociované s VEGF-R, FGF-R, CDK komplexy, TEK, CHK1, LCK a FAK.

V jednom obecném aspektu se předkládaný vynález týká inhibitorů protein kinasy obecného vzorce (I):

kde

R¹ znamená vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R -CO nebo R -CS, kde R znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸znamenají každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R² znamená hydroxy, halogen, kyan nebo nitro skupinu nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, alkenyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl nebo skupinu vzorce (A)

(A)

Ra » · · • · ·« · · kde R_a znamená vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (B)

Ra (B) kde R_a znamená vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (C)

O ^Rb (C) ‘N kde Rb a R_c znamenají nezávisle vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (D)

Ra

N

II (D)

Re kde Ra znamená vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, hydroxy, alkoxy, amino, alkylamino, dialkylamino nebo acylamino; a R_e znamená vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, amino, alkylamino, dialkylamino nebo acylamino; a nebo skupinu vzorce (E)

Rf (E)

kde Rf znamená alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (F)

kde R_ga Rh znamenají nezávisle vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl, nebo skupinu vzorce (G)

R,· (G) kde Ri znamená alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo skupina vzorce (A), (B), (C), (H) nebo (I), nebo skupina vzorce (H)

^Rí kde Rj znamená vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, hydroxy, alkoxy, amino nebo skupina vzorce (A) , (B), (C) nebo (D), a Rk znamená vodík, alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo skupina vzorce (A), (B) , (C), (D), (E) nebo (F), nebo skupina vzorce (I) ftft \ _s /^R' (I) kde Ri znamená vodík, alkyl, cykloálkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo skupina vzorce (C).

nebo je R² substituovaný nebo nesubstituovaný cykloálkyl, heterocykloalkyl nebo aryl, který je fúzovaný na Q;

X znamená C nebo N; a

Q znamená divalentní radikál obsahující 2 nebo 3 atomy kruhu (v kruhu tvořeném Q společně s X, C* a N* ve vzorci I) každý nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující C, N, O, S, C-R⁵a N.R⁵, kde R⁵znamená alkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, hydroxy, halogen, kyan nebo amino, které společně s C* a N* (ve vzorci I) tvoří pěti- nebo šesti-členný aromatický nebo nearomatický kruh.

Vynález se také týká farmaceuticky přijatelných proléčiv, farmaceuticky aktivních metabolitů a farmaceuticky přijatelných solí sloučenin vzorce (I).

Ve výhodném obecném provedení se předkládaný vynález týká sloučenin obecného vzorce (II):

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo

6 6 heteroaryl, nebo skupina vzorce R -CO nebo R -CS, kde R znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloálkyl, ·

heterocykloalkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷R , kde R a R znamenají každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R² je stejný, jak byl definován výše;

X znamená C nebo N; a

Y a Z znamenají každý nezávisle C, N, S, 0, C-R⁵nebo N-R⁵, kde R⁵je stejný, jak byl definován výše; a farmaceuticky přijatelných proléčiv, farmaceuticky aktivních metabolitů a farmaceuticky přijatelných solí uvedených sloučenin. Vynález také popisuje výhodné způsoby přípravy sloučenin vzorce (II).

Výhodněji se předkládaný vynález týká sloučenin obecného vzorce (II), kde R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl nebo heteroaryl; R znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl; X a Y jsou nezávisle C nebo N; a Z znamená S nebo O. V jiném výhodném provedení sloučenin vzorce (II) jsou R¹ a R² každý nezávisle substituovaný aryl; X znamená C; Y znamená N; a Z znamená S nebo O. Výhodněji znamená R¹substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, R² znamená substituovaný aryl, X znamená C, Y znamená C nebo N a Z znamená S nebo O.

V jiném výhodném obecném provedení se předkládaný vynález týká sloučenin obecného vzorce (III):

ΙΠ • · · • · * · kde

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R³ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, aryloxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R⁴ znamená vodík, hydroxy, nižší alkyl, halogen, nižší alkoxy, amino, nitro nebo trifluormethyl; a

Y a Z znamenají každý nezávisle C, N, S, 0, C-R⁵nebo N-R⁵, kde R⁵je nesubstituovaný nebo substituovaný alkyl nebo aryl; a farmaceuticky přijatelných proléčiv, farmaceuticky přijatelných metabolitů a farmaceuticky přijatelných solí uvedených sloučenin.

kde

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená ··*♦ ίο *?··♦♦·· ·*· * 99 ·«· ·« 9999 substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, cykloalkyl, heterocykloalkyl nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R znamena substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, aryloxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

Y znamená C nebo N; a

Z znamená S nebo O; a farmaceuticky přijatelných proléčiv, farmaceuticky přijatelných metabolitů a farmaceuticky přijatelných solí uvedených sloučenin.

Výhodněji se předkládaný vynález týká sloučenin vzorce (IV) , kde R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO, kde R⁶ znamená N-R⁷R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl; R³ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, heteroaryl nebo alkoxy; R^4(a) a R^4(b) znamenají nezávisle vodík, nižší alkyl nebo halogen; Y znamená C nebo N; a Z znamená S nebo 0. Ještě lépe se předkládaný vynález týká sloučenin vzorce (IV), kde R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶CO, kde R⁶ znamená N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý o

nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl; R znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, heteroaryl nebo alkoxy; R^4(a) znamená chlor, fluor nebo methyl; R^4(b) znamená fluor; Y znamená N; a Z znamená 0.

Vynález se také týká způsobu pro modulování a/nebo inhibici

*· 99 9 9 kinasové aktivity VEGF-R, FGF-R, TEK, CDK komplexu, CHK1, TEK, LCK a/nebo FAK pomocí podání sloučeniny vzorce (I) nebo jejího farmaceuticky přijatelného proléčiva, farmaceuticky přijatelného metabolitu nebo farmaceuticky přijatelné soli. Vynález také poskytuje sloučeniny, které mají selektivní kinasovou aktivitu-t.j. mají významnou aktivitu proti jedné specifické kinase a slabou nebo minimální aktivitu proti jiné kinase. V jednom výhodném provedení vynálezu jsou sloučeninami podle předkládaného vynálezu ty sloučeniny, které mají významně vyšší účinnost proti tyrosin kinase receptoru pro VEGF než proti tyrosin kinase receptoru pro FGF-R1. Vynález se také týká způsobů pro modulování aktivity tyrosin kinasy VEGF receptoru bez významného ovlivnění aktivity tyrosin kinasy FGF receptoru.

Vynález se také týká farmaceutických prostředků, které obsahují: účinné množství činidla vybraného ze sloučenin vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelných solí, farmaceuticky aktivních metabolitů a farmaceuticky přijatelných proléčiv; a farmaceuticky přijatelný nosič nebo vehikulum pro takové činidlo. Vynález dále poskytuje způsoby léčby nádorů a jiných onemocnění asociovaných s nežádoucí angiogenesí a/nebo buněčnou proliferací, které zahrnují podání účinných množství takových činidel pacientovi, který potřebuje takovou léčbu.

Podrobný popis vynálezu a výhodných provedení

Sloučeniny vzorce (I), (II), (III) a (IV) podle předkládaného vynálezu jsou použitelné pro ovlivnění aktivity protein kinas. Přesněji, sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou použitelné jako antiangiogenní činidla a jako činidla modulující a/nebo inhibující aktivitu protein kinas, ♦ ··· což poskytuje způsob léčby nádorů nebo jiných onemocnění asociovaných s buněčnou proliferací zprostředkovanou proteinkinasami.

Termín alkyl, jak je zde použit, označuje přímé nebo rozvětvené alkylové skupiny obsahující jeden až dvanáct atomů uhlíku. Příklady alkylových skupin jsou methyl (Me), ethyl, npropyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sek-butyl, terc-butyl (tBu), pentyl, isopentyl, terc-pentyl, hexyl, isohexyl a podobně. Termín nižší alkyl označuje alkyl obsahující 1 až 8 atomů uhlíku (Ci-ealkyl) . Příklady substituovaných alkylů zahrnují fluormethyl, difluormethyl, trifluormethyl,-2fluorethyl,-3-fluorpropyl, hydroxymethyl,-2-hydroxyethyl,-3hydroxypropyl, a podobně.

Termín alkenyl označuje přímé nebo rozvětvené alkenylové skupiny obsahující od 1 do dvanácti atomů uhlíku. Příklady alkenylových skupin jsou prop-2-enyl, but-2-enyl, but-3-enyl,2-methylprop-2-enyl, hex-2-enyl a podobně.

Termín cyloalkyl označuje částečně nasycené nebo nenasycené karbocykly obsahující od tří do dvanácti atomů uhlíku, včetně bicyklických a tricyklických cykloalkylových struktur. Mezi vhodné cykloalkyly patří cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl a podobně.

Termín heterocykloalkyl označuje částečně nasycený nebo nenasycený monocyklický radikál obsahující uhlíkové atomy, výhodně 4 nebo 5uhl.íkových atomů v kruhu, a alespoň jeden heteroatom vybraný ze skupiny zahrnující dusík, kyslík a síru.

Termíny aryl (Ar) a heteroaryl označují monocyklické a polycyklické nenasycené nebo aromatické kruhové struktury, kde • ·© · aryl označuje ty, které jsou karbocykly a heteroaryl označuje ty, které jsou heterocykly. Příklady aromatických kruhových struktur jsou fenyl, naftyl, 1,2,3,4tetrahydronaftyl, furyl, thienyl, pyrrolyl, pyridyl, pyridinyl, pyrazolyl, imidazolyl, pyrazinyl, pyridazinyl,

1,2,3-triazinyl, 1,2,4-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl, 1-Htetrazol-5-yl, indolyl, chinolinyl, benzofuranyl, benzothiofenyl (thianaftenyl) a podobně. Takové skupiny m ohou být volitelně substituované jedním nebo více vhodnými substituenty, jako jsou například substituenty vybrané ze skupiny zahrnující halogen (F, Cl, Br nebo I); nižší alkyl;

OH; N0₂; CN; CO2H; O-nižší alkyl; aryl; aryl-nižší alkyl;

CO2CH3; CONH2; OCH2CONH2; NH₂; S-NH₂; OCHF₂;-CF₃; OCF₃ a podobně. Stakové skupiny mohou být také volitelně substituované fúzovanou kruhovou skupinou nebo můstkem, například OCH₂-O.

Termín alkoxy označuje radikál-O-alkyl. Příklady zahrnují methoxy, ethoxy, propoxy a podobně. Termín nižší alkoxy označuje alkoxy skupinu obsahující 1 až 8 atomů uhlíku.

Termín aryloxy označuje-O-aryl, kde aryl je stejný, jak byl definován výše.

Termín halogen označuje chlor, fluor, brom nebo jod.

Obecně, různé skupiny nebo funkční skupiny pro proměnné ve vzorci mohou být volitelně substituované jedním nebo více vhodnými substituenty. Příklady substituentů jsou halogen (F, Cl, Br nebo I), nižší alkyl, -OH, -NO2, -CN, -CO2H, -O-nižší alkyl,aryl, -aryl-nižší alkyl, -CO2CH₃, -CONH₂, -OCH2CONH₂,

-NH2,-SO2NH2, halogenalkyl (např. -CF₃, -CH2CF3) , -O-halogenalkyl (např. -OCF3,-OCHF2) a podobně.

«·«·

« • 1	»4 • · • ·	9 99 9	94	• · •
9 •	• •
•	* ·	9	•	•	•
•	94	949	«49		4944

Termín obsahující a zahrnující jsou použity v otevřeném, neomezujícím smyslu.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou definovány vzorcem (I). Ačkoliv vzorec (I) znázorňuje dvojnou vazbu mezi C* a N*, bude odborníkům v oboru jasné, že když Q společně s C* a N* tvoří 5- nebo 6-členný aromatický kruh, tak není přítomnost dvojné vazby mezi C* a N* nutná, protože existují jiné kanonické formy aromatického kruhu.Je třeba si uvědomit, že všechny možné kanonické formy aromatického kruhu tvořeného Q společně s C* a N* také spadají pod vzorec (I). Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou výhodně sloučeniny vzorce (II), lépe sloučeniny vzorce (III) a ještě lépe sloučeniny vzorce (IV).

Některé sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou existovat jako jednotlivé stereoizomery (t.j. v podstatě bez jiných stereoizomerů), racemáty a/nebo směsi enantiomerů a/nebo diastereomerů. Všechny takové stereoizomery, racemáty a jejich směsi spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Výhodně jsou ty sloučeniny podle předkládaného vynálezu, které jsou opticky aktivní, použity v opticky čisté formě.

Jak je odborníkům v oboru známo, je opticky čistou sloučeninou mající jedno chirální centrum (t.j. jeden asymetrický atom uhlíku) taková sloučenina, která se skládá v podstatě pouze z jednoho ze dvou možných enantiomerů (t.j. je enantiomericky čistá), a opticky čistou sloučeninou mající více než jedno chirální centrum je taková sloučenina, která je jak diastereomericky, tak enantiomericky čistá. Výhodně jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu použity ve formě, která je alespoň z 90% opticky čistá, to znamená ve formě, která obsahuje alespoň 90% jednoho izomeru (80% enantiomericky

9···

• 9

9 9

9

9 9

9

9· 9

9 ·

9999 nadbytek (e.e.) nebo diastereomerický nadbytek (d.e.)), lépe alespoň 95% (90% e.e. nebo d.e.), ještě lépe alespoň 97,5% (95% e.e. nebo d.e.) a nejlépe alespoň 99% (98% e.e. nebo d.e.).

Dále, uvedené vzorce zahrnují solvatované, stejně jako nesolvatované formy uvedených sloučenin. Například, vzorec (I) zahrnuje sloučeniny uvedeného vzorce v hydratovaných i nehydratovaných formách. Jinými příklady solvátů jsou uvedené sloučeniny v kombinaci s isopropanolem, ethanoiem, methanolem, DMSO, ethylacetátem, kyselinou octovou nebo ethanolaminem.

Kromě sloučenin vzorců (I), (II), (III) a (IV) vynález zahrnuje farmaceuticky přijatelná proléčiva, farmaceuticky aktivní metabolity a farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin.

Farmaceuticky přijatelné proléčivo je sloučenina, která může být přeměněna za fyziologických podmínek nebo solvolýzou na uvedenou sloučeninu nebo na farmaceuticky přijatelnou sůl takové sloučeniny.

Farmaceuticky aktivní metabolit je farmakologicky aktivní produkt produkovaný metabolismem dané sloučeniny nebo její soli v těle. Metabolity sloučenin mohou být identifikovány za použití technik běžných v oboru a jejich aktivity mohou být určeny testy popsanými dále.

Farmaceuticky přijatelná sůl je sůl, která si zachovává biologickou účinnost volných kyselin nebo baží daných sloučenin a která není biologicky nebo jinak nežádoucí. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat dostatek kyselých, bazických nebo obou skupin a tak mohou ····· ·« · ·· ··

4 4 · · ·4 · · · · • · · · 4 · · * • · · 4 4 · 4 · 4 ·

4 4 4 4 4 4 4 ··· 4 44 ·44 44 4444 reagovat s různými organickými nebo anorganickými bázemi a anorganickými a organickými kyselinami za vzniku farmaceuticky přijatelných solí. Příklady farmaceuticky přijatelných solí jsou soli připravené reakcí sloučenin podle předkládaného vynálezu s anorganickými nebo organickými kyselinami, jako jsou například sírany, pyrosírany, kyselé sírany, siřičitany, kyselé siřičitany, fosforečnany, monohydrogenfosforečnany, dihydrogenfosforečnany, metafosforečnany, pyrofosforečnany, chloridy, bromidy, jodidy, acetáty, propionáty, dekanoáty, kapryláty, akryláty, mravenčnany, isobutyráty, kaproáty, heptanoáty, propioláty, šťavelany, jablečnany, suberáty, jantarany, fumaráty, maleáty, butyn-1,4-dioáty, hexyn-1,6dioáty, benzoáty, chlorbenzoátv, methvlbenzoáty, dinitrobenzoáty, methoxybenzoáty, hydroxybenzoáty, ftaláty, sulfonáty, xylensulfonáty, fenylacetáty, fenylpropionáty, fenylbutyráty, citráty, laktáty, γ-hydroxybutyráty, glykoláty, vinany, methansulfonáty, propansulfonáty, naftalen-1sulfonáty, naftalen-2-sulfonáty a mandelany.

Pokud je sloučeninou podle předkládaného vynálezu baze, tak může být požadovaná farmaceuticky přijatelná sůl připravena jakoukoliv metodou známou v oboru, například reakcí baze s anorganickou kyselinou, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná a podobně, nebo reakcí s organickou kyselinou, jako je kyselina octová, kyselina maleinová, kyselina jantarová, kyselina mandlová, kyselina fumarová, kyselina malonová, kyselina pyrohroznová, kyselina šťavelová, kyselina glykolová, kyselina salicylová, kyselina pyranosidylová, jako je kyselina gklukuronová nebo kyselina galakturonová, α-hydroxy kyselina, jako je kyselina citrónová nebo kyselina vinná, aminokyselina, jako je kyselina asparagová nebo kyselina glutamová, aromatická kyselina, jako • · : ;

je kyselina benzoová nebo kyselina skořicová, sulfonová kyselina, jako je kyselina p-toluensulfonová nebo kyselina ethansulfonová, a podobně.

Pokud je sloučeninou podle předkládaného vynálezu kyselina, tak může být požadovaná farmaceuticky přijatelná sůl připravena jakoukoliv metodou známou v oboru, například reakcí volné kyseliny s anorganickou nebo organickou baží, jako je amin (primární, sekundární nebo terciární), hydroxid alkalického kovu nebo hydroxid kovu alkalických zemin a podobně. Ilustrativní příklady vhodných solí zahrnují organické soli odvozené od aminokyselin, jako je glycin a arginin, ammoniové soli, primární, sekundární a terciární aminy, a cyklické aminy, jako je piperidin, morfolin a piperazin, a anorganické soli odvozené od sodíku, vápníku, draslíku, hořčíku, manganu, železa, mědi, zinku, hliníku a lithia.

V případě činidel, která jsou v pevné formě, bude odborníkům v oboru jasné, že sloučeniny a jejich soli podle předkládaného vynálezu mohou existovat v různých krystalických a polymorfních formách, které všechny spadají do rozsahu předkládaného vynálezu a uvedených vzorců.

Terapeuticky účinná množství činidel podle předkládaného vynálezu mohou být použita pro léčbu onemocnění zprostředkovaných protein kinasami. Termín účinné množství označuje množství činidla, které, po podání savci potřebujícímu takovou léčbu, je dostatečné pro účinnou léčbu onemocnění zprostředkovaných aktivitou jedné nebo více protein kinas, jako jsou tyrosin kinasy. Například, terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce I, její soli, aktivního metabolitu nebo proléčiva je množství dostatečné pro • · a ·

modulování, regulování nebo inhibici aktivity jedné nebo více protein kinas tak, že je dosaženo zlepšení nebo zmírnění onemocnění zprostředkovaného takovou aktivitou. Množství činidla, které odpovídá takovému množství, bude záviset na faktorech jako je typ sloučeniny, onemocnění a jeho závažnost, identita (například hmotnost) savce vyžadujícího léčbu, a takové množství bude snadno určeno odborníkem v oboru. Léčba znamená alespoň zmírnění onemocnění u savce, jako je člověk, který je postižen - alespoň částečně - aktivitou jedné nebo více protein kinas, jako jsou tyrosin kinasy, a zahrnuje: prevenci vzniku onemocnění u savce, zejména tehdy, je-li savec predisponován k onemocnění, ale ještě u něj nebylo diagnostikováno; modulování a/nebo inhibici onemocnění; a/nebo zmírnění onemocnění.

Činidla podle předkládaného vynálezu mohou být připravena za použití reakcí a schémat syntézy uvedených dále, za použití technik dostupných v oboru využívajících výchozích materiálů, které jsou snadno dostupné.

V jednom obecném způsobu syntézy jsou sloučeniny vzorce (I) připraveny podle následujícího reakčního schématu:

····· ·· β ·· • · · ·«·· ·

·*· · ·· ··· ·« ···«

Η.

R¹-N=C=S + H₂N-CN

Roztok isothiokyanatanu, například R¹-N=C=S, a kyanamidu reaguje s 1,1 až l,5molárními ekvivalenty 1,8diazabicyklo[5.4.0]undek-7-enu (DBU) ve vhodném rozpouštědle, jako je acetonitril, při vhodné teplotě (výhodně při teplotě místnosti) po dobu přibližně 40-80 minut, za zisku meziproduktu (V). Bez izolace reaguje meziprodukt (V) se sloučeninou vzorce (VI), kde LG je vhodná odštěpitelná skupina, jako je chlor, brom nebo mesyloxy, za stejných podmínek po dobu dalších 0,5až 24 hodin, za zisku sloučeniny vzorce (VII).

V některých případech se sloučenina vzorce VII neizoluje, ale přímo se přemění na sloučeninu vzorce I reakcí při teplotě mezi teplotou místnosti a 80 °C, výhodně 50 °C, po dobu 1 až 24 hodin. Běžné zpracování a přečištění vede k zisku konečné sloučeniny I. Alternativně se sloučenina (VII) izoluje a přečistí a potom se přemění na sloučeninu vzorce (I) reakcí s vhodnou baží, jako je terc-butoxid draselný, hexamethyldisilazid lithný nebo diisopropylamid lithný, ve vhodném rozpouštědle, jako je THF, po dobu 0,5až 24 hodin při teplotě mezi-78 °C a teplotou místnosti. Jsou známé nebo dostupné různé sloučeniny vzorce (VI), jako je například-2-(chlormethyl)benzimidazol,-2-(chlormethyl)chinolin,-2picolyl-chlorid,-2-acetamido-4-(chlormethyl)thiazol, 6-(chlormethyl)-2-isopropylpyrimidin-4-ol, 4-chlormethyl-2-(4-chlorfenyl)thiazol,-3-(chlormethyl)-1,2,4-oxadiazol, -3-(chlormethyl)-5-(3,5-dimethylisoxazol-4-yl)-1,2,4-oxadiazol,3-brommethyl-6,7-dimethoxy-l-methyl-2(1H)-chinoxalinon, -2-chlormethyl-5-methoxybenzimidazol, 5-(terc-butyl)-3-(chlormethyl)-1,2,4-oxadiazol, 5-chlor-3-(chlormethyl)-1,2,4-thiadiazol,-3-(chlormethyl)-5-(3-thienyl)-1,2,4-oxadiazol, 5-[4-(chlormethyl)-1,3-thiazol-2-yl]isoxazol, 5-(chlormethyl)-3-[3,5-di(trifluormethyl)styryl]-1,2,4-oxadiazol, 5-chlor-4-(chlormethyl)-1,2,3-thiadiazol, 5- (chlormethyl)-3-(4-chlorfenyl)-1,2,4-oxadiazol,-3-chlor-2-(chlormethyl)-5-(trifluormethyl)pyridin, 5-(chlormethyl)-3-[(2

-pyridylsulfonyl)methyl]-1,2,4-oxadiazol,-3-(chlormethyl)-5-methylisoxazol,-2-chlormethyl-4,6-dimethoxypyrimidin, -3-(chlormethyl)-5-(4-chlorfenyl)-4H-1,2,4-triazol,-2-(chlormethyl)-5-(4-chlorfenyl)-1,3,4-oxadiazol, 4-chlormethyl-5-methyl-2-fenyl-oxazol,-3-(chlormethyl)-1-(3,5 -dichlorfenyl)-5-methyl-lH-pyrazol a-3-(chlormethyl)-5-(1,2,3-thiadiazol-4-yl)-1,2,4-oxadiazol. Sloučeniny vzorce (VI) mhou ·«··· ·· · · · · · • · · « · ·· · · 9 » * » 9 9 9 9 9 9 9 9 • · » · * · · · • » 9 9 9 9 99 9 99 999 9 být také připraveny způsoby známými odborníkům v oboru. Viz například Mylari et al., J. Med. Chem., 35, 457-465 (1992); Baiocchi et al., Heterocyclic Chem., 16, 1469-1474 (1979), které jsou zde uvedeny jako odkazy.

Sloučeniny vzorce (VIII) mohou být připraveny běžnou acylací-3-aminobenzonitrilu, po které následuje zahřívání při 60-100 °C s hydroxylaminem ve vhodném rozpouštědle, jako je ethanol nebo isopropanol, po dobu 1 až 24 hodin. Sloučenina vzorce (VI(a)) může být připravena reakcí sloučeniny vzorce VIII s chloracetylchloridem a vhodnou baží, jako je diispropylethylamin (DIEA), ve vhodném rozpouštědle, jako je dichlormethan. Běžné vodné zpracování vede k zisku surového meziproduktu, který se dále zahřívá při teplotě 100 °C ve vhodném rozpouštědle, jako je dioxan, po dobu 0,5až 4 hodin, za zisku - po běžné izolaci a přečištění - sloučeniny vzorce VI(a) . '

Sloučeniny vzorce (II), kde X znamená C a Y a Z znamenají nezávisle C, N nebo O, mohou být také připraveny výše popsaným obecným postupem. Do R¹-isothiokyanatanového roztoku v acetonitrilu se přidá kyanamid a potom se přidá DBU za udržování vnitřní teploty reakční směsi přibližně 15až 30 °C. Po míšení po dobu 1-2 hodin se přidají vhodné reaktanty, které umožňují cyklizaci a tvorbu sloučeniny vzorce (II) popsanou výše, za přítomnosti katalytického množství tetra27

butylammoniumjodidu. Například, reakce-3-chlormethyl-5-R²[1,2,4]-oxadiaziolu (VI(a)) se sloučeninou VII po dobu 2 hodin při teplotě přibližně 50 °C vede po přečištění k zisku cyklizované sloučeniny vzorce (II(a)).

Sloučeniny vzorce (II), (III) a (IV) podle předkládaného vynálezu mohou být také připraveny jinými způsoby, včetně obecného způsobu uvedeného v následujícím reakčním schématu.

Sloučenina vzorce (II), kde X a Y jsou C a Z je S, může být « » • ♦

připravena přidáním DBU do roztoku R¹-isothiokyanatanu a kyanamidu ve vhodném rozpouštědle při vhodné teplotě, výhodně acetonitrilu a teplotě místnosti, po dobu přibližně 40-80 minut. Do této reakční směsi se přidá brom-acetonitril a další DBU, za zisku, po běžném zpracování a přečištění, meziproduktu-2-R¹-amino-4-amino-thiazol-5-karbonitrilového meziproduktu vzorce (IX). Reakce meziproduktu (IX) s dihydrogensulfidem v triethylaminu/pyridinu při teplotě přibližně 0 °C vede k zisku meziproduktu X. Meziprodukt X se potom přemění na sloučeninu II(b) míšením roztoku sloučeniny X a-2-brom-R -ethanoátu v methanolu přes noc při teplotě místnosti. Po odstranění methanolu se surová sloučenina II(b) zpracuje za použití běžných technik izolace a přečistí se chromatografii na silikagelové koloně.

Sloučeniny vzorce II(c) mohou být také připraveny přímo ze sloučeniny X reakcí s esterem kyseliny α-brom-octové nebo abromlaktonem za podmínek stejných jako jsou podmínky použité při přípravě sloučenin (II(b)).

Reakcí sloučeniny IX s vhodným-2-amino-alkoholem a katalytickým množstvím ZnCl2 se sloučenina vzorce (II(d)) připraví po standardním zpracování kyselinou a přečištění chromatografii na silikagelu. Sloučeniny vzorce II (e) mohou být také připraveny ze sloučenin (IX) zahříváním roztoku IX, TMSN3 a katalytického množství BuaSnO při teplotě zpětného toku ve vhodném aprotickém rozpouštědle, jako je toluen. Po

zahřívání při teplotě zpětného toku se rozpouštědlo odstraní a zbytek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se vodným roztokem vhodné kyseliny a suší se přes vhodné sušící činidlo. Po odstranění rozpouštědla se zbytek trituruje v ethyletheru a sloučenina vzorce (II(e) se získá filtrací.

Π(ά) H(e)

Sloučeniny vzorce (III) mohou být také připraveny přímo ze sloučeniny (II(b)), kde R² znamená-3-nitrofenyl, redukcí nitro skupiny s vhodným redukčním činidlem za zisku aminosubstituovaného fenylu (II(f)). Výhodně se roztok sloučeniny II(b), kde R² znamená-3-nitrofenyl, a chlorid cínatý, rozpustí v dimethylformamidu (DMF) v inertní atmosféře a roztok se mísí při teplotě 40-60 °C do vzniku sloučeniny vzorce (II(f)).

Meziprodukt II (f) může reagovat s vhodnýrn acylačním činidlem za standardních acylačních podmínek za vzniku sloučeniny vzorce (III(a)). Výhodný acylační postup zahrnuje ««·*· ·« * 4 » 4 4 ·· » 4 * 4 4 4 » 4 4 » 4·· 4*4 «44 4 ·» «44 «Ρ 4 4 4 4 rozpuštění sloučeniny II(f) v DMF a tetrahydrofuranu (THF) a přidání pyridinu a vhodného chloridu kyseliny nebo acylchlorformiátu při teplotě -30 až 0 °C. Reakce se utlumí donorem protonů (například methanolem) a reakční směs se přečistí preparativní C-18 HPLC s reverzní fází za zisku sloučeniny (III(a)).

Jiné sloučeniny vzorce (I) mohou být připraveny způsoby analogickými s obecným postupem popsaným výše nebo podrobnými postupy popsanými v příkladech. Afinita sloučenin podle předkládaného vynálezu k receptoru může být zesílena připravením více kopií ligandů blízko sebe, výhodně za použití složeného nosiče. Bylo prokázáno, že takové vícevalentní sloučeniny s optimální vzdáleností mezi skupinami dramaticky zlepšují vazbu na receptor. Viz, například, Lee et al.,

Biochem 23: 4255 (1984). Multivazebnost a prostorové rozložení mohou být kontrolovány výběrem vhodného nosič nebo spojovacích skupin. Takové skupiny zahrnují molekulové nosiče, které obsahují více funkčních skupin, které mohou reagovat s funkčními skupinami na sloučeninách podle předkládaného vynálezu. Je samozřejmé, že může být použito různých nosičů, včetně proteinů jako je BSA nebo HAS, různých peptidů, včetně například pentapeptidů, dekapeptidů, pentadekapeptidů a podobně. Peptidy nebo proteiny mohou obsahovat požadovaný počet aminokyselinových zbytků obsahujících volné amino skupiny ve svých postraních řetězcích; nicméně, jiné funkční skupiny, jako jsou sulfhydrylové skupiny nebo hydroxylové skupiny, mohou být také použity pro získání stabilních vazeb.

Sloučeniny, které účinně regulují, modulují nebo inhibují protein kinasovou aktivitu asociovanou s receptory, FGF, CDK komplexy, TEK, CHK1, LCK a FAK, mimo jiné, a které inhibují angiogenesi a/nebo buněčnou proliferaci, jsou žádoucí a tvoří jedno výhodné provedení předkládaného vynálezu. Předkládaný vynález je dále zaměřen na způsoby modulování nebo inhibice aktivity protein kinasy, například v savčí tkáni, využívající podání činidel podle předkládaného vynálezu. Aktivita sloučenin podle předkládaného vynálezu jako modulátorů aktivity protein kinasy jako je aktivita kinas, může být měřena jakoukoliv metodou dostupnou v oboru, včetně testů in vitro a/nebo in vivo. Příklady vhodných testů pro měření aktivity jsou popsány v Parast C. et al., BioChemistry 3: 16788-16801 (1998); Jeffrey et al., Nátuře 376: 313-320 (July 27, 1995); WIPO Mezinárodní přihláška č. 97/34876; a WIPO Mezinárodní přihláška č. WO 96/14843. tyto vlastnosti mohou být hodnoceny, například, za použití jednoho nebo více biologických testů uvedených v příkladech provedení vynálezu.

Aktivní činidla podle předkládaného vynálezu mohou být připravena ve formě farmaceutických prostředků, jak je popsáno dále. Farmaceutické prostředky podle předkládaného vynálezu

obsahují účinné modulační, regulační nebo inhibiční množství sloučeniny vzorce I, II, III nebo IV a inertní, farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo. V jednom provedení farmaceutické prostředky obsahují činidla podle předkládaného vynálezu v množství dostatečném pro dosažení terapeutického přínosu v důsledku modulace protein kinas. Termín účinné množství označuje množství, které - minimálně - reguluje protein kinasy. Tyto prostředky jsou připraveny ve formě dávkové jednotky vhodné pro způsob podání, například pro parenterální nebo orální podání.

Činidlo podle předkládaného vynálezu je podáno v běžné dávkové formě připravené smísením terapeuticky účinného množství činidla (například sloučeniny vzorce I) jako aktivní složky s vhodnými farmaceutickými nosiči nebo ředidly, za použití běžných postupů. Mezi tyto postupy patří míšení, granulování a lisování nebo rozpuštění činidel - podle potřeby - za zisku požadovaného prostředku.

Použitý farmaceutický nosič může být pevný nebo kapalný. Příklady pevných nosičů jsou laktosa, sacharosa, talek, želatina, agar, pektin, arabská klovatina, magnesium-stearát, kyselina stearová a podobně. Příklady kapalných nosičů jsou sirup, podzemnicový olej, olivový olej, voda a podobně. Obdobně, nosič nebo ředidlo může obsahovat materiál oddalující nebo zpomalující uvolňování známý v oboru, jako je glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát, samostatně nebo s voskem, ethylcelulosou, hydroxypropylmethylcelulosou, methylmethakrylátem a podobně.

Mohou být použity různé farmaceutické formy. Pokud je použit pevný nosič, může být přípravek tabletován, plněn ve formě prášku nebo pelet do kapslí z tuhé želatiny nebo ♦ t · · » · * · · 4 » ♦ ♦ · * · t · 4 » · · · · 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4

4 49 444 44 4444 připraven ve formě pastilek nebo medicinálních oplatek.

Množství pevného nosiče se může lišit, ale obvykle bude od přibližně 25mg do přibližně 1 g. Pokud je použit kapalný nosič, může být prostředek ve formě sirupu, emulze, kapsle z měkké želatiny, sterilního injekčního roztoku nebo suspenze v ampuli nebo fiole nebo ve formě nevodné kapalné suspenze.

Pro získání stabilních forem rozpustných ve vodě se farmaceuticky přijatelná sůl sloučeniny podle předkládaného vynálezu rozpustí ve vodném roztoku organické nebo anorganické kyseliny, jako je 0,3 M roztok kyseliny jantarové nebo kyseliny citrónové. Pokud není sůl rozpustná ve vodě dostupná, může být činidlo rozpuštěno ve vhodném spolurozpouštědle nebo v kombinaci rozpouštědel. Příklady vhodných dalších rozpouštědel jsou, například, alkohol, propylenglykol, polyethylenglykol 300, polysorbát 80, glycerin a podobně, v koncentracích v rozsahu od 0 do 60% celkového objemu.

V příkladném provedení se sloučenina vzorce I rozpustí v DMSO a naředí se vodou. Prostředek může být také ve formě roztoku soli aktivní složky ve vhodném vodném vehikulu, jako je voda nebo izotonický salinický roztok nebo roztok dextrosy.

Je třeba si uvědomit, že skutečné dávky činidel použitých v prostředcích podle předkládaného vynálezu se budou lišit podle konkrétního použitého komplexu, konkrétního připraveného prostředku, způsobu podání a konkrétního léčeného místa, pacienta a onemocnění. Optimální dávky pro onemocnění mohou být určeny odborníkem v oboru za použití běžných testů pro určení dávky z dat získaných pro činidlo. Pro orální podání je příkladem obecně používané denní dávky dávka přibližně 0,001 až přibližně 1000 mg na kg tělesné hmotnosti, kdy podání takové dávky se opakuje ve vhodných intervalech. Proléčiva jsou obvykle podána v dávkách, které jsou chemicky

99 9 9 <· 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 · 9

999 9 99 ·99 999999 ekvivalentní dávkám plně aktivní formy.

Prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny způsoby známými pro přípravu farmaceutických prostředků, například za použití běžných technik jako je míšení, rozpouštění, granulování, výroba dražé, roztírání, emulgování, enkapsulace, zachycení nebo lyofilizace. Farmaceutické prostředky mohou být připraveny běžným způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky přijatelných nosičů, které mohou být vybrány z přísad a pomocných činidel, které usnadňují zpracování aktivních sloučenin do prostředků, které mohou být použity farmaceuticky.

Vlastní příprava je závislá na vybraném způsobu podání. Pro injekce mohou být sloučeniny podle předkládaného vynálezu připraveny ve vodném roztoku, výhodně ve fyziologicky přijatelných pufrech jako je Hankův roztok, Ringerův roztok nebo fyziologický salinický roztok. Pro transslizniční podání jsou v prostředku použita činidla usnadňující průnik sliznicí. Taková činidla jsou známá v oboru.

Pro orální podání mohou být sloučeniny snadno připraveny smísením aktivních sloučenin s farmaceuticky přijatelnými nosiči známými v oboru. Takové nosiče umožňují přípravu sloučenin podle předkládaného vynálezu do tablet, pilulek, dražé, kapslí, kapalin, gelů, sirupů, kaší, suspenzí a podobně, pro orální podání léčenému pacientovi. Farmaceutické prostředky pro orální použití mohou být získány za použití pevných přísad ve směsi s aktivní složkou (činidlem), volitelně rozemletím získané směsi a zpracováním směsi granulí po přidání vhodných pomocných činidel, za zisku tablet nebo jader dražé. Mezi vhodné přísady patří: plniva jako jsou cukry, včetně laktosy, sacharosy, mannitolu nebo sorbitolu; a ♦ ft ft· ♦ · ♦· • · ftft ♦ ftft ft ftftft ftft ft a a a a a a a ftft · «· • ft ·♦· ·· ·»·· celulosové přípravky, jako je například kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob, bramborový škrob, želatina, klovatina, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, karboxymethylcelulosa sodná nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je to vhodné, může být přidáno činidlo podporující rozpadavost, jako je zesítěný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselina alginová nebo její sůl, jako je natrium-alginát.

Jádra dražé jsou opatřena vhodným potahem. Pro tento účel může být použito koncentrovaných roztoků cukrů, které mohou volitelně obsahovat arabskou klovatinu, polyvinylpyrrolidon, Carbopol gel, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, lakové roztoky, a vhodná organická rozpouštědla nebo směsi rozpouštědel. K tabletám nebo dražé mohou být přidány vhodná barviva nebo pigmenty pro identifikaci nebo pro charakterizaci různých kombinací aktivních složek.

Farmaceutické prostředky, které mohou být podány orálně, zahrnují vytlačitelné kapsle vyrobené ze želatiny, stejně jako měkké, uzavřené kapsle vyrobené ze želatiny a změkčovacího činidla, jako je glycerol nebo sorbitol. Vytlačitelné kapsle mohou obsahovat aktivní složku ve směsi s plnivy jako je laktosa, pojivý jako jsou škroby a/nebo kluznými činidly jako je talek nebo magnesium-stearát, a volitelně se stabilizačními činidly. V měkkých kapslích mohou být aktivní činidla rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalinách, jako jsou mastné oleje, kapalný parafin nebo kapalné polyethylenglykoly. Dále mohou být přidána stabilizační činidla. Všechny prostředky pro orální podání by měly být v dávkách vhodných pro takové podání. Pro bukální podání může být prostředek ve formě tablet nebo pastilek připravených běžným způsobem.

Pro intranasální nebo inhalační podání mohou být sloučeniny fcfcfcfc

podle předkládaného vynálezu podány ve formě aerosolového spreje pomocí tlakované nádoby nebo nebulizátoru, za použití vhodného hnacího plynu, jako je například dichlordifluormethan, trichlorfluormethan, dichlortetrafluorethan, oxid uhličitý nebo jiný vhodný plyn.

V případě tlakovaného aerosolu může být dávková jednotka odměřena ventilem. Mohou být připraveny kapsle a želatinové patrony pro použití v inhalačním přístroji nebo insuflátoru, které obsahují práškovou směs sloučeniny a vhodné práškové baze, jako je laktosa nebo škrob.

Sloučeniny mohou být připraveny pro parenterální podání injekcí, například bolusovou injekcí nebo kontinuální infusí. Prostředky pro injekce mohou být připraveny ve formě dávkových jednotek, například ampulí nebo zásobníků obsahujících více dávek, ve kterých je přidáno konzervační činidlo. Prostředky mohou mít také formu suspenzí, roztoků nebo emulzí v olejových nebo vodných vehikulech, a mohou obsahovat další činidla, jako jsou suspendační, stabilizační a/nebo disperzní činidla.

Mezi farmaceutické prostředky pro parenterální podání patří vodné roztoky aktivních sloučenin ve formě rozpustné ve vodě. Dále, suspenze aktivních činidel mohou být připraveny jako vhodné olejové injekční suspenze. Mezi vhodná lipofilní rozpouštědla nebo vehikula patří mastné oleje jako je sezamový olej, nebo estery syntetických mastných kyselin, jako je ethyloleát nebo triglyceridy, nebo liposomy. Vodné injekční suspenze mohou obsahovat substance, které zvyšují viskozitu suspenze, jako je karboxymethylcelulosa sodná, sorbitol nebo dextran. Volitelně může suspenze také obsahovat vhodná stabilizační činidla nebo činidla, která zvyšují rozpustnost sloučenin, která umožní přípravu vysoce koncentrovaných roztoků.

• · *· ««·«

Pro podání do oka jsou sloučeniny vzorce I, III, III nebo IV podány ve farmaceuticky přijatelném oftalmologickém vehikulu tak, že sloučenina je udržována v kontaktu s povrchem oka po dostatečnou dobu, aby se dosáhlo průniku sloučeniny rohovkou a vnitřními regiony oka, včetně, například, přední komory, zadní komory, sklivce, nitroočního moku, rohovky, duhovky/corpus ciliare, čočky, cévnatky/sítnice a sklery. Farmaceuticky přijatelným oftalmologickým vehikulem může být mast, rostlinný olej nebo enkapsulační materiál. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být injikovány přímo do nitrooční kapaliny.

Alternativně může být aktivní činidlo ve formě prášku určeného pro rekonstituci vhodným vehikulem, jako je například sterilní apyrogenní voda, před použitím. Sloučeniny mohou být také připraveny ve formě rektálních prostředků, jako jsou čípky nebo retenční nálevy, které obsahují, například, běžné čípkové baze, jako je kakaové máslo nebo jiné glyceridy.

Kromě prostředků popsaných výše mohou být sloučeniny připraveny také ve formě depotních prostředků. Takové dlouhodobě působící prostředky mohou být podány implantací (například podkožní, nitrosvalovou nebo nitrooční) nebo intramuskulámí injekcí. Například mohou být sloučeniny připraveny s vhodnými polymerními nebo hydrofobními materiály (například jako emulze v přijatelném oleji) nebo jako iontoměničové pryskyřice, nebo jako špatně rozpustné deriváty, například jako špatně rozpustné soli.

Farmaceutický nosič pro hydrofobní sloučeniny je systém rozpouštědel obsahující benzylalkohol, nepolární surfaktant, organický polymer mísitelný s vodou a vodnou fázi. Systémem • fc »· • · · ♦

9 9 ·* fcfcfc· může být VPD systém. VPD je roztok 3% hmot./obj.

benzylalkoholu, 8% hmot./obj. nepolárního surfaktantu polysorbatu 80 a 65% hmot./obj. polyethylglykolu 300, a absolutního ethanolu. VPD systém rozpouštědel (VPD:5W) obsahuje VPD ředěný 1:1 s 5% dextrosou ve vodě. Tento rozpouštěcí systém dobře rozpouští hydrofobní sloučeniny a má malou toxicitu při systémovém podání. Poměry složek systému se mohou významně lišit bez narušení charakteristik rozpustnosti a toxicity systému. Dále, identita složek se může lišit: například mohou být použity jiné slabě toxické nepolární surfaktanty místo polysorbatu 80; velikost frakce polyethylenglykolu může být různá; místo polyethylenglykolu mohou být použity jiné biokompatibilní polymery, například polyvinylpyrrolidon; a místo dextrosy mohou být použity jiné cukry nebo polysacharidy.

Alternativně mohou být použity jiné systémy pro podání hydrofobních farmaceutických sloučenin. Liposomy a emulze jsou známými příklady přepravních vehikul nebo nosičů pro hydrofobní léky. Některá organická rozpouštědla, jako je dimethylsulfoxid, mhou být také použita, ale obvykle za cenu vyšší toxicity. Sloučeniny mohou být také podány za použití systému s prodlouženým uvolňováním, jako jsou semipermeabilní matrice z pevných hydrofobních polymerů obsahujících terapeutické činidlo. Různé materiály s prodlouženým uvolňováním jsou známé odborníkům v oboru. Kapsle s prodlouženým uvolňováním mohou, podle svého chemického charakteru, uvolňovat sloučeniny po dobu několika týdnů až 100 dnů. Podle chemického charakteru a biologické stability terapeutického činidla mohou být použity další strategie pro stabilizaci proteinu.

Farmaceutické prostředky mohou také obsahovat vhodné pevné »»** ♦* · ·« ♦· • · 9 ·· «··· • · · · * · ·· ·♦· »· ·<·· nebo gelové nosiče nebo přísady. Příklady takových nosičů nebo přísad jsou uhličitan vápenatý, fosforečnan vápenatý, sacharidy, škroby, deriváty celulosy, želatina a polymery, jako jsou polyethylenglykoly.

Některé sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny jako soli s farmaceuticky přijatelnými protiionty. Farmaceuticky přijatelné soli mohou být tvořeny s mnoha kyselinami, včetně kyseliny chlorovodíkové, sírové, octové, mléčné, vinné, jablečné, jantarové a podobně. Soli jsou obvykle lépe rozpustné ve vodných nebo jiných protonových rozpouštědlech než příslušné volné baze.

Příprava výhodných sloučenin podle předkládaného vynálezu je podrobně popsána v následujících příkladech, ale odborníkům v oboru bude jasné, že popsané chemické reakce mohou být snadno upraveny pro přípravu mnoha dalších inhibitorů protein kinas podle předkládaného vynálezu. Například, syntéza neuvedených sloučenin podle předkládaného vynálezu může být úspěšně provedena za použití modifikací známých odborníkům v oboru, například za použití chránících interferujících skupin, změnou za jiná vhodná reakční činidla známá v oboru, nebo změnou reakčních podmínek. Alternativně, jiné reakce známé v oboru mohou být také použity pro přípravu jiných sloučenin podle předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

V příkladech popsaných dále jsou - pokud není uvedeno jinak - všechny teploty uvedeny ve stupních Celsia a všechny podíly jsou v procentech hmotnostních. Činidla byla zakoupena od komerčních dodavatelů, jako je Aldrich Chemical Company nebo Lancaster Synthesis Ltd., a byla použita bez dalšího

přečištění, pokud není uvedeno jinak. Tetrahydrofuran (THF) a N,N-dimethylformamid (DMF) byly zakoupeny od Aldrich v Sure uzavřených nádobách a byly použity tak, jak byly zakoupeny. Všechna rozpouštědla byla přečištěna standardními způsoby známými odborníkům v oboru, pokud není uvedeno jinak.

Reakce uvedené dále byly obvykle provedeny za pozitivního tlaku dusíku nebo za použití sušící zkumavky, při teplotě místnosti (pokud není uvedeno jinak), v bezvodém rozpouštědle, a reakční baňky byly opatřeny gumovým šeptem pro přidávání substrátů a reakčních činidel stříkačkou. Skloviny byly sušeny v pícce a/nebo teplem. Analytická chromatografie na tenké vrstvě (TLC) byla provedena na skleněných silikagelových 60 F 254 plotnách Analetch (0,25mm) a eluce byla provedena vhodnými poměry rozpouštědel (obj./obj.), které jsou uvedeny. Reakční směsi byly analyzovány TLC a reakce byly ukončeny po vyčerpání výchozího materiálu.

Vizualizace vrchních stran ploten byla provedena za použití p-anisaldehydového spreje nebo kyseliny fosfomolybdenové (Aldrich Chemical 20% hmot. v ethanolu) a za aktivace teplem. Zpracování bylo obvykle provedeno zdvojením reakčního objemu reakčním rozpouštědlem nebo extrakčním rozpouštědlem a potom promytím uvedeným vodným roztokem za použití 25% obj. extrakčního objemu, pokud není uvedeno jinak. Získané roztoky se sušily přes bezvodý Na₂SO4 před filtrací a odpařením rozpouštědel za redukovaného tlaku na rotační odparce, což je popisováno jako odpaření rozpouštědel ve vakuu. Rychlá chromatografie na koloně (Still et al., J. Org. Chem., 43,

2923 (1978)) byla provedena za použití Baker grade rychlého silikagelu (47-61 pm) a poměru silikagel: surový materiál přibližně 20:1 až 50:1, pokud není uvedeno jinak.

Hydrogenolýza byla provedena při tlaku uvedeném v příkladech • **»· ·· * ·· ·· • * * ♦·*· · · · φ • · «·· φ · · • · · · · 9«k«· φ • · · · < · « φ ··* « »· ··« ·Φ ·«·· nebo při tlaku okolí.

¹H-NMR spektra byla určena na Bruker přístroji pracujícím při 300 MHz a ¹³C-NMR spektra byla určena při 75MHz. NMR spektra byla získána jako CDCI3 roztoky (v ppm), za použití chloroformu jako referenčního standardu (7,25ppm a 77,00 ppm) nebo CD3OD (3,4 a 4,8 ppm a 49,3 ppm), nebo interního tetramethylsilanu (0,00 ppm), podle potřeby. Jiná NMR rozpouštědla byla použita podle potřeby. Když jsou uvedeny multiplicity, tak jsou použity následující zkratky: s (singlet), d (dublet), t (triplet), m (multiplet), br (široký), dd (dublet dubletů), dt (dublet tripletů). Kopulační konstanty jsou, pokud jsou uvedeny, uvedeny v Hertzech (Hz).

Infračervená (IR) spektra byla určena na Perkin-Elmer FT IRS spektrometru jako čisté oleje, jako KBr pelety nebo jako CDCI3 roztoky, a jsou uvedena jako vlnové délky (cm^-1). Hmotnostní spektra byla získána za použití LSIMS nebo elektrospraye. Všechny teploty tání (t.t.) jsou nekorigované.

Příklad A(l)

4-(4'-amino-4-fenyl-[2,5’]bithiazolyl-2’-ylamino)-benzensulfonamid

Výchozí materiál se připraví za použití stupňů (i) a (ii)

	• •«4	• 4 4	44 *4
	4	4 4 4 4	4 4 4 4
	4 1
	•	• 4 4	4 4 4
4 4	*	44 »44	44 4*44

popsaných dále.

Stupeň (i): Do roztoku 4-(aminosulfonyl)fenylisothiokyanatanu (1,12 g, 5,0 mmol) a kyanamidu (0,23 g, 5,5 mmol) v acetonitrilu (50 ml) se přidá DBU (0,83 g, 5,5 mmol) a získaná směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 60 minut. Do reakční směsi se přidá brom-acetonitril (0,66 g, 5,5 mmol) a potom za 30 minut DBU (0,83 g, 5,5 mmol). Reakční směs se mísí přes noc při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní za redukovaného tlaku a zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml).

EtOAc roztok se promyje 0,1 N HCl (150 ml x 3) a solankou a suší se MgSOí a zahustí se. Zbytek se přečistí by chromatografií na silikagelu (EtOAc) za zisku 0,73 g (48 %) 2-(4-aminosulfonylfenyl)amino-4-amino-thiazol-5-karbonitrilu.

Stupeň (ii): Roztok-2-(4-aminosulfonylfenyl)amino-4-aminothiazol-5-karbonitrilu (0,59 g, 2 mmol) ve 20% triethylaminu/pyridinu (50 ml) se probublá H2S plynem v leduvodě po dobu 30 minut. Potom se reakční roztok uzavře a mísí se při teplotě místnosti přes noc. Reakčním roztokem se nechá probublávat argon po dobu 60 minut pro odstranění H2S a potom se rozpouštědla odstraní při redukovaném tlaku. Zbytek se rozpustí v EtOAc a EtOAc roztok se potom promyje 5% kyselinou citrónovou (50 ml x 3) a potom solankou. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se trituruje v Et2O. Produkt-2-(4-aminosulfonylfenyl)amino-4-amino-thiazol-5-karbothioamid se získá filtrací (0,56 g, 95%).

Pro přípravu titulní sloučeniny se roztok-2-(4-aminosulfonylfenyl)amino-4-amino-thiazol-5-karbothioamidu (164 mg, 0,5 mmol) a a-bromoacetofenonu (110 mg, 0,55 mmol) v MeOH (20 ml) mísí při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v EtOAc (50 ml).

	·»*· ©	©· © • « ··	·· ·© © · · ·
	• 4
	•	« · ©	• · ·
© ·	•	·* ···	©· ····

EtOAc roztok se promyje nasyceným roztokem NaHCO₃ (10 ml) a potom solankou. Po přečištění zbytku chromatografii na silikagelu se získá 4-(4'-amino-4-fenyl-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-benzensulfonamid. T.t. 233-235°C (rozklad.). ¹H NMR (CD₃OD): δ 7,96 (s, 1H), 7,82 (s, 4H), 7,44-7,25 (m, 4H), ESIMS (MH⁺) : 430; (M-H) : 428 .

Analýza vypočtena pro C18H15N5O2S3: C, 50, 33; H, 3,52; N, 16,30; S, 22,39. Zjištěno: C, 50,62; H, 3,54; N, 16,03; S, 22,12.

Způsobem podobným způsobu použitém v příkladu A(l) byly připraveny následující Příklady A(2) až A(71).

Příklad A(2)

4-[4’-amino-4-(4-methoxy-fenyl)-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamin-benzensulfonamid

T.t. 195-198 °C. ^ΧΗ NMR (CD3OD) : δ 7,78 (d, J = 8,80 Hz, 2H), 7,75 (s, 4H), 7,13 (s, 1H), 6,88 (d, J = 8,86 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H) , FABMS (MH⁺) : 460.

Analýza vypočtena pro C18H15N5O2S3: C, 50,33; H, 3,52; N, 16,30; S, 22,39. Zjištěno: C, 50,62; H, 3,54; N, 16,03; S, 22,12.

Příklad A(3)

4-[4'-amino-4-(2-methoxy-fenyl)-[2,5']bithiazolyl-2' -ylamino]benzensulfonamid

t.t. 231-235°C (rozklad). R_f (75% EtOAc/Hex) = 0,56, ^XH NMR (CD3OD): δ 8,10 (dd, J = 7,79, 1,73 Hz, 1H), 7,79-7,70 (m, 4H) , 7,57 (s, 1H), 7,25-7,19 (m, 1H), 7,03-6,93 (m, 2H), 3,84 (s,

3H) , FABMS (MH⁺) : 460.

Příklad A(4)

4- [ 4'-amino-4- (2,4-difluor-fenyl) -[2,5'] bithiazolyl-2 ' -ylamino] -benzensulfonamid

t.t. 233-238 °C. ^XH NMR (CD3OD) : δ 8,26-8,21 (m, 1H), 7,88 (s, 4H), 7,47 (s, 1H), 7,14-7,07 (m, 2H) , ESIMS (MH⁺) : 466; [M-H-]:

464 .

Analýza vypočtena pro C18H13F2N5O2S3: C, 45,73; H, 2,94; N,

14,82; S, 20,35. Zjištěno: C, 45,82; H, 2,78; N, 14,77; S,

20,38.

··· ····

··	• ·· •	·· • · • ·	·· •
• •	• •
•	•	•	• ·	•
• fc		···	··	···

Příklad A(5)

4- [4'-amino-4-(4-fluor-fenyl)-[2,5']bithiazolyl-2' -ylamino]-benzensulfonamid

t.t. 254-257 °C. ²Η NMR (CD₃OD) : δ 8,01-7,91 (m, 2H) , 7,88-7,76 (m, 4H), 7,35 (s, 1H), 7,20-7,09 (m, 2H),

Analýza vypočtena pro ⁰ C18H14FN5O2S3: C, 48,31; H, 3,15; N,

15,65; S, 21,49. Zjištěno: C, 48,40; H, 3,26; N, 15,44; S, 21,68.

Příklad A(6)

4- [4'-amino-4- (2,4-dichlor-fenyl) -[2,5' ] bithiazolyl-2'-ylamino] -benzensulfonamid

t.t. 173-175°C (rozklad). NMR (CD3OD) : δ 7,97-7,93 (m, 1H) ,

7,87-7,81 (m, 4H), 7,67-7,59 (m, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,45-7,39 (m, 1H), FABMS (MH⁺) : 498 .

Analýza vypočtena pro C18H13CI2N5O2S3: C, 43,38; H, 2,63; N,

14,05; S, 19,30. Zjištěno: C, 43,32; H, 2,78; N, 13,84; S, 19,06%.

Příklad A(7)

4-[4'-amino-4-(3-chlor-5-fluor-4-methyl-fenyl)-[2,5' ] -bithiazolyl-2'-yl amino] benzensulfonamid

t.t. 208-212 °C. ²Η NMR (DMSO-dg): δ 10,63 (s, NH), 7,95 (t, J = 8,42 Hz, 1H), 7,73 (q, J = 9,00 Hz, 4H), 7,55 (d, J = 2,32 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,55 Hz, 1H), 7,17 (s, NH₂) , 6,96 (s, NH₂) , 2,28 (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 496.

Analýza vypočtena pro Ci9Hi5ClFN5O₂S3: C, 46,01; H, 3,05; N, 14,12; S, 19,12. Zjištěno: C, 45,93; H, 3,23; N, 13,86; S, 19,47.

Příklad A(8)

4-[4'-amino-4-(4-hydroxy-fenyl)-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino] -benzensulfonamid

t.t. 168-170 °C (rozklad). ²H NMR (CD₃OD) : δ 7,83 (s, 4H) , 7,7947

7,76 (d, J= 8,59 Hz, 2H), 7,16 (s,lH), 6,85-6,82 (d, J = 8,46 Hz, 2H), FABMS (MH⁺) : 446.

Analýza vypočtena pro C18H15N5O3S3.0,5 H2O: C, 47,56; H, 3,55; N, 15,41; S, 21,16. Zjištěno: C, 47,87; H, 3,59; N, 15,09; S, 21,11.

Příklad A(9)

4-(2,4-difluor-fenyl)-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-[2,5']-bithiazolyl-2', 4'-diamin

t.t. 180-183 °C (rozklad). ^XH NMR (CD3OD) : δ 8,26-8,23 (m, ÍH) , 7,41 (d, J = 2,2 Hz, ÍH), 7,13-7,05 (m, 2H), 7,02 (s, 2H),

3,90 (s, 6H), 3,78 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 476.

Analýza vypočtena pro C21H18F2N4O3S2: C, 52, 93; H, 3,81; N,

11,76; S, 13,46. Zjištěno: C, 52,81; H, 3,72; N, 11,58; S, 13,45.

Příklad A(10)

4-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenol

OH

t.t. 129-133 °C (rozklad). ^XH NMR (CD3OD): δ 7,80 (d, J= 8,09 Hz, 2H), 7,16 (s, 1H), 7,02 (s, 2H), 6,86 (d, J = 8,09 Hz,

2H) , 3,90 (s, 6H) , 3,78 (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 457; (M-H): 455. Analýza vypočtena pro C21H20N4O4S2: C, 56,58; H, 5,70; N, 10,56; S, 12,08. Zjištěno: C, 56,27; H, 5,48; N, 10,69; S, 12,00.

Příklad A(ll)

Ethylester kyseliny 4-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-benzoové

COOCHj

t.t. 240-245 °C (rozklad). ³Η NMR (CD3OD); 8,46 Hz, 2H), 8,09-8,06 (d, J = 8,09 Hz, 4,38 (q, J = 7,35 Hz, 2H), 3,85 (s, 6H) , 1,37 (t, J=6,99 Hz, 3H), FABMS(MH⁺): 513. Analýza vypočtena pro C22H2oN40sS2.0,3 Et2O

N, 10,48; S, 11,86.

11,99. Zjištěno: C, 56,24; H, δ 8,18-8,16 (d, J = 2H) , 7,06 (s, 1H), 3,68 (s,3H), 1,41: C, 56, 59; H, 5,09;

4,83; N,

10,26; S,

Příklad A(12)

4-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yll-benzen-1,2-diol

• * • 9 ·· • · · · • · ·

t.t. 132-137 °C (rozklad). ^ΧΗ NMR (CD₃OD): δ 7,42-7,41 (d, J = 2,20 Hz, 1H), 7,32-7,28 (dd, J = 7,65, 1, 84 Hz, 1H) , 7,11 (s, 1H), 7,07 (s, 2H), 6, 85-6, 82 (d, J = 8,45 Hz, 1H) , 3,90 (s, 6H), 3,78 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 473.

Příklad A(13)

4-[4'-amino-2'-(3, 4,5-trimethoxy-fenylamino) — [2,5'] — bithiazolyl-4-yl]-2-methoxy-fenol

t.t. 202-203 °C. ³H NMR (CD3OD) : δ 7,42 (s, 1H) , 7,39 (d, J = 2,11 Hz, 1H), 7,15 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 6,97 (d, J = 2,10 Hz, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,88 (s, 6H), 3,76 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 487 .

Analýza vypočtena pro C22H22N4O5S2: C, 54,31; H, 4,56; N, 11,51; S, 13,18. Zjištěno: C, 54,52; H, 4, 70; N, 11,26; S, 13,32.

Příklad A(14)

4-[4'-amino-4-(4-fluor-fenyl)-5-methyl-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino]benzensulfonamid

t.t. 145-148 °C (rozklad). NMR (CD3OD) ; δ 7,90-7,82 (m, 4H) ,

7,76-7,70 (m, 2H), 7,22-7,17 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), HRFABMS: Vypočteno pro C19H16FN5O2S3 (MH⁺) : 461,0450. Zjištěno: 461, 0466.

Příklad A(15)

4-[4'-amino-5-(4-fluor-benzyl)-4-methyl-[2,5']bithiazolyl-2’-ylamino]benzensulfonamid

t.t. 130-135°C (rozklad). ²H NMR (CD3OD) : δ 7,76-7,68 (m, 4H) , 7,17-7,12 (m, 2H), 6,97-6,90 (m, 2H), 3,97 (s, 2H), 2,23 (s,

3H) ,

Analýza vypočtena pro C20H18FN5O2S3: C, 50,51; H, 3,81; N, 14,73; S, 20,23. Zjištěno: C, 50,40; H, 3,73; N, 14,64; S, 20,37.

Příklad A(16)

4-[4'-amino-4-(3-hydroxy-fenyl)-[2,5’]bithiazolyl-2' -ylamino] -benzensulfonamid

t.t. 205-209 °C (rozklad). ⁴H NMR (CD3OD) : δ 7,94-7,81 (m, 4H) ,

7,43-7,39 (m, 2H), 7,33 (s,lH), 7,24 (t, J= 8,17 Hz, 1H),

6, 80-6,75 (m, 1H), FABMS (MH⁺) : 445.

Analýza vypočtena pro C18H15N5O3S3: C, 48,53; H, 3,39; N, 15,72;

· '» ·

S, 21,59. Zjištěno: C, 48,74; H, 3,47; N, 15,44; S, 21,31.

Příklad A(17)

3—[4^z-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5' ] -bithiazolyl-4-yi]fenol '

t.t.226-230 °C. ⁷Η NMR(CD₃0D): δ 7,43-7,41 (m,2H), 7,31 (s,

1H), 7,28-7,23(m, 1H), 7,02 (s, 2H), 6,80-6,77 (m, 1H), 3,90 (s, 6H), 3,78 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 456.

Analýza vypočtena pro C21H20N4O4S2: C, 55,25; H, 4,42; N, 12,27; S, 14,05. Zjištěno: C, 55,39; Ή, 4,56; N, 12,07; S, 14,05.

Příklad A(18)

5- [4' -amino-2' -(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5']bithiazolyl-4-yl]-benzen-1,3-diol

t.t.	198-202 °C. ^XH	NMR(CD₃OD) :	δ 7,21 (s,	1H) ,	, 6,99 (s,	2H)
6,91	(d, J=2,06 Hz,	2H), 6,27	(t, J= 2,03	Hz,	1H), 3,88	(s
6H) ,	3,77 (s, 3H),	FABMS (MH⁺)	: 473.

Analýza vypočtena pro C21H20N4O5S2.0,5 H2O: C, 52,38; H, 4,40; N, 11,63; S, 13,32. Zjištěno: C, 52,53; H, 4,44; N, 11,83; S, 13,47.

Příklad A(19)

3- [4' -amino-2' -(3,4, 5-trimethoxy-fenylami.no) -[2,5']bithiazolyl-4-yl]-5-methoxy-fenol

t.t.	208-210 °C. ^XH	NMR	(CD3OD) : δ	7,14 (s, 1H),	6,	89-6,	8 6 (m,
2H) ,	6,85 (s, 2H),	6,23	(t, J = 2,	06 Hz, 1H), 3,	75	(s,	6H) ,
3, 69	(s, 3H), 3,63	(s,	3H), FABMS	(MH⁺) : 486.

Analýza vypočtena pro C22H22N4O5S2 · 0,5 H2O : C, 54,20; H, 4,57; N, 11,49; S, 13,16. Zjištěno: C, 54,02; H, 4,71; N, 11,09; S, 13,56.

Příklad A(20)

4-[4’-amino-4-(4-hydroxy-fenyl)-[2,5’]bithiazolyl-2¹-ylamino] -benzensulfonamid

• · ·«* ·

t.t. 200-203°C (rozklad). ^XH NMR (CD₃OD) : δ 7,30 (s, 1H) , 6,98 (s, 2H), 6,83 (d, J = 2,93 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 2,93 Hz, 1H), 3,88 (s, 6H), 3,81 {s, 3H), 3, 76 (s, 3H); FABMS (MH⁺) : 565/567.

Analýza vypočtena pro C22H2iBrN40sS2.0,5 H2O: C, 46, 00; H, 3,86; N, 9,75; S, 11,16. Zjištěno: C, 46,26; H, 3,69; N, 9,55; S, 11,09.

Příklad A(21)

Kyselina-3-[4' -amino-2'-(4-sulfamoyl-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-benzoová

COOH ³Η NMR (DMSO-de) : δ 10,94 (s, OH), 8,46 (s, 1H) , 8,18 (d, J = 7,80 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 7,80 Hz, 1H), 7,78 (m, 4H), 7,56 (t, J = 7,80 Hz, 1H) , 7,22 (brd, NH₂) , 7,04 (brd, NH₂) .

Analýza vypočtena pro C19H15N5O4S3.0,3 EtOAc: C, 48,52; H, 3,51; N, 14,01; S, 19,24. Zjištěno: C, 48,37; H, 3,67; N, 13,97; S, 19,24.

Příklad A(22)

5-[4'-amino 2’-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-2-chlor-fenol

Cl

t.t. 235-238°C. ^XH NMR (CD₃OD) : δ 7,61 (d, J = 1,92 Hz, 1H) , 7,47-7,39 (m, 2H), 7,37 (s, 1H), 7,05 (s, 2H), 3,94 (s, 6H), 3,82 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 490.

Analýza vypočtena pro C21H19CIN4O4S2: C, 51,37; H, 3,90; N, 11,41; S, 13,06. Zjištěno: C, 51,38; H, 3,95; N, 11,32; S, 12,72.

Příklad A(23)

2- [4-amino-2'- (3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenol

t.t. 186-190 °C (rozklad). ¹H NMR (CD3OD) : δ 7,88 (dd, J = 7,99, 1,61 Hz, 1H,), 7,62 (s, 1H), 7,27-7,20 (m, 1H), 7,04 (s, 2H), 6,98-6,91 (m, 2H), 3,92 (s, 6H) , 3,80 (s, 3H), FABMS (MH⁺) :

457.

Analýza vypočtena pro C21H20N4O4S2: C, 55,25; H, 4,42; N, 12,27; S, 14,05. Zjištěno: C, 55,28; H, 4,62; N, 11,96; S, 13,72.

Příklad A(24)

4-(4'-amino-4-p-tolyl-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-benzensulfonamid

^XH NMR (DMSO): δ 7,92-7,84 (m, 4H), 7,32 (m, 3H), 2,39 (s, 3H) , FABMS (M⁺) : 443; (MNa⁺) : 466.

Příklad A(25)

2- (4 ' -amino-2'- (3,4,5-trimethoxy-fenylamino) -[2,5 -4-yl]-benzen-1,4-diol

7,11 (s, 2H),

']bithiazolyl-

t.t. 208-212 °C (rozklad). ³Η NMR (CD₃OD) : δ 7,56 (d, J = 2,80 Ηζ,ΙΗ), 7,00 (s, 2H), 6, 77 (d, J = 6,68 (dd, J = 8, 72, 2,87 Hz, 1H), 3,89 (s, 6H) , ESIMS (MH⁺) : 473.

Analýza vypočtena pro C21H20N4O5S2. 0,4 5 H2O: C, 52 N, 11,66; S, 13,34. Zjištěno: C, 52,77; H, 4,48; 12,98.

Příklad A(26)

3- [4/ -amino-2 '-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) -[2,5 bithiazolyl-4-yl]-4-brom-fenol (s, 1H), 7,31 8,69 Hz, 1H) , 3,77 (s, 3H), .47; H, 4,38; N, 11,23; S,

Bt • · · »

t.t. 214-216 °C. ^XH NMR (CD3OD): δ 7,47 (d, 1= 8,67 7,38 {s, 1H), 7,26 (d, 1= 3,02, 1H), 7,07 (s, 2H) , = 8,69, 3,07 Hz, 1H), 3,89 (s, 6H), 3,76 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 535/537.

Analýza vypočtena pro C2iHi9BrN4O4S2: C, 47,11; H, 3,58; N, 10,46; S, 11,85. Zjištěno: C, 47,31; H, 3,65; N, 10,26; S,

11,85.

Příklad A(27)

2- (4 '-amino-4-benzo[b]thiofen-3-yl-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)benzensulfonamid

Hz, 1H), 6,72 (dd, J

t.t. 155-160 °C (rozklad). ^XH NMR (CD3OD): δ 8,39 (d, J = 7,94 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,96 (d, J = 7,72 Hz, 1H), 7,86 (s, 4H), 7,50-7,39 (m, 3H), FABMS (MH⁺) : 485.

Příklad A(28)

4— {4 '-amino-4-[4-(2,4-dichlor-fenyl)-furan-2-yl]-[2,5']-bithiazolyl-2'-ylamino}-benzensulfonamid

• · · * ··· ’ *..·

t.t. 225-230 °C (rozklad). ^XH NMR (CD₃OD) : δ 8,00 (d, J = 8,62, 1H), 7,86 (s, 4H) , 7,58 (d, J = 2,10, 1H), 7,45 (dd, J = 8,60, 2,12 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,29 (d, J = 3,61 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 3,59, 1H) , FABMS (MH⁺) : 564/566.

Příklad A(29)

3- (4 ' -amino-2'-propylamino- [2,5'] bithiazolyl-4-yl) - fenol

^XH NMR (CD3COCD3) : δ 8,43 (s, 1H) , 7,50 (d, 1H) , 7,43 (d, 1H) , 7,30-7,20 (m, 3H), 6,55 (s, 2H), 3,40 (t, 2H), 1,69 (sextet, 2H), 0,97 (t, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 333; (MNa⁺) : 355; (MH⁺) : 331.

Příklad A(30)

3- (4 ¹ -amino-2'-methylamino- [2,5'] bithiazolyl-4-yl) -fenol

^ΧΗ NMR (CD3COCD3) : δ 8,40 (s, 1H) , 7,50 (d, 1H) , 7,43 (d, 1H) , 7,31-7,15 (m, 3H), 6,63 (s, 2H), 3,00 (d, 3H), ESIMS (MH⁺) : 305; (M-H); 303.

Příklad A(31)

3—[4’-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5]bithiazol• · «

-yl-4-benzamid

ESMS (MH⁺) :

Analýza vypočtena pro C30H29N5O4S2: C, 61,31; H, 4,97; N, 11,92; S, 10,91. Zjištěno: C, 61,02; H, 4,86; N, 11,72; S, 10,83.

Příklad A(32)

3- [4'-amlno-2'- (3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5'] bithiazolyl-4-yl]-N-benzyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 574.

Příklad A(33)

3- [4 '-amino-2'- (3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5'] bithiazolyl-4-yl]-N-fenyl-benzamid

···· • · • ·· ♦ * * « φ

ESMS (ΜΗ⁺) : 560

Analýza vypočtena pro C28H25N5O4S2- 0,8 Η2Ο: C, 58,58; Η, 4,67; Ν, 12,20; S, 11,17. Zjištěno: C, 58,68; Η, 4,49; Ν, 12,23; S,

11,33.

Příklad Α(34)

3- [4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl4- yl]-N-(4-isopropyl-3-methyl-fenyl)-benzamid

ESMS (MH⁺) : 616.

Analýza vypočtena pro C32H33N5O4S2.0,4 H2O: C, 61,69; H, 5,47; N, 11,24; S, 10,29. Zjištěno: C, 61,76; H, 5,26; N, 11,08; S, 10,18.

Příklad A(35)

3- [4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-N-(2-methyl-chinolin-6-yl)-benzamid

ESMS (MH⁺) : 625.

Analýza vypočtena pro C32H25N6O4S2.0,2 H2O: C, 58,41; H, 4,36; N,

12,65; S, 9,66. Zjištěno: C, 58,40; H, 4,31; N, 12,28; S,

9,54.

♦ · · · •99

Příklad A(36)

Benzylester kyseliny [3-(4'-amino-2'-p-tolylamino-[2,5']-bithiazolyl-4-yl)-fenyl]-karbanové

NMR (CD3COCD3) : δ 8,85 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 7,70-7,25 (m, 14H), 6,52 (s, 2H), 5,30 (s, 2H), 2,41 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 514; (MH) : 512.

Příklad A(37)

N-{ 3- [4'-amino-2 ' - (3-diethylamino-propylamino) -[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}benzamid

^XH NMR (DMSO-Dg): δ 10,39 (s, 1H) , 9,12 (s, 1H), 8,35 (s, 2H), 7,96 (m, 3H), 7,79 (m, 1H), 7,69-7,39 (m, 6H), 3,36 (m, 2H), 3,12 (m, 6H), 2,93 (m, 2H) , 1,20 (m, 6H) , ESIMS (MH⁺) : 507.

Příklad A(38)

N- [3- (4'-amino-2'-fenethylamino- [2,5']bithiazolyl-4-yl)-fenyl] «·«·

^XH NMR (DMSO-De) : δ 10,39 (s, 1H) , 8,42-7,15 (m, 16H) , 6,85 (s, 1H), 5,20 (široký s, 2H), 2,90 (m, 2H), 3,50 (m, 2H) , ESIMS (MH⁺) : 498.

Příklad A(39)

Methylester kyseiiny-3-[4'-amino-4-(3-benzoylaminofenyl)[2,5'] bithiazolyl-2 ’ -ylamino]benzoové

NMR (DMSO-De) : δ 10,39 (s, 1H), 10,38 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 8,18 (d, 1H) , 7,98 (d, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,65-7,39 (m, 8H), 7,10 (široký s,

2H) , 3,89 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 528; (MNa⁺) : 550; (MH) : 526.

Příklad A(40)

Ethylester kyseliny-3- [4'-amino-4- (3-benzoylaminofenyl) -[2,5'] bithiazolyl-2' -ylaminoj -benzoové

¹H NMR (DMSO-Dg) : δ 10,80 (s, ÍH) , 10,38 (s, ÍH), 8,37 (S, 1H), 8,16 (S, ÍH), 8,15 (d, 2H), 8,00 (d, 2H), 7,88 (d, 1H>, 7,757,40 (m, 8H), 7,10 (široký s, ÍH), 4,38 (kvartet, 2H), 1,39 (t, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 542; (MNa⁺) : 564.

Příklad A(41)

N-{3-[4'-amino-2'-(benzo[1,3]dioxol-5-ylamino) -[2,5']bithiazolyl-4-yl]fenyl}-benzamid

¹H-NMR (DMSO-De): δ 10,41 (m, 2H) , 8,35 (s, ÍH) , 8,00-6,88 (m, 14H), 6,10 (s, 2H),

ESIMS (MH⁺) : 514; (MH^-) : 512.

Příklad A(42)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,5-dimethylfenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenylJbenzamid *«··

^XH NMR (CD3OD): δ 8,36-6,79 (m, 16H), 6,68 (s, 1H) 2,28 (s, 6H), ESIMS (MH⁺)*: 993; (MNa+)*: 1015.

Příklad A(43)

N-{3-[4' -amino-2’-(indan-5-ylamino)-[2,5’]bithiazolyl-2’-ylamino]-fenyl]benzamid

’ή NMR (CD3OD): δ 8,50-7,15 (m, 17H), 2,95 (m, 4H), 2,15 (m, 2H) , ESIMS (MH⁺) : 510; (MNa⁺) : 532; (MH) : 508.

Příklad A(44) [3-(4’-amino-2’-m-tolylamino-[2,5¹]bithiazolyl-4-yl)-fenyl]benzamid

• ••fc ²Η NMR (CD3OD) : δ 8,25-6,81 (m, 18H) , 2,29 (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 484; (MNa⁺) : 506.

Příklad A(45)

N-{3-[4'-amino-2'-(2,3-dihydro-benzo[l,4]dioxin-6-ylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]fenyl}-benzamid

¹H NMR (CD3OD): δ 8,42-6,83, (m, 17H), 4,29 (m, 4H), ESIMS (MH⁺) : 528; (MNa⁺) : 550.

Příklad A(46)

N-{3-[4'-amino-2·-(3-methylsulfanyl-fenylamino)-[2,5' ]bithiazolyl-4-yl]fenyl}-benzamid

^τΗ NMR (DMSO-De: S 10,39 (s, 1H), 8,89 (d, 2H), 8,51-6,91 (m, 18H), ESIMS (MH⁺)*: 1029.

Příklad A(47)

N-{3- [4' -amino-2' - (3,4-dimethoxy-fenylamino) -[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}benzamid ♦ »·♦

^ΧΗ NMR (CD3OD) : δ 8,32 (s, 1Η) , 7,98 (d, 2H) , 7,78-6,91 (m, 14H) , 3,88 (s, 3H) , 3,81 (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 530; (MNa⁺) : 552.

Příklad A(48)

N-{3-[-2'- (3-acetylamino-4-methyl-fenylamino)-4'-amino-[2,5']bithiazolyl-4-yl]fenyl}-benzamid

²Η NMR (CD3OD): δ 8,32 (s, 1H), 7,98 (d, 2H), 7,72-7,15 (m, 15H), 2,22 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 541; (MNa⁺) : 563; (MK⁺) : 579; (MH⁺) : 539.

Příklad A(49)

N-{3-[4'-amino-2'-(1,4-dioxo-l,2,3,4-tetrahydro-ftalazin-6-ylamino)[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-benzamid

^ΤΗ NMR (DMSO-De): δ 11,11 (s, 1H), 10,39 (s, 1H) , 8,35-7,10 (m,

17H) , ESIMS (MNa⁺) : 576; (MH^-) : 552.

Příklad A(50)

Kyselina-3-[4'-amino-4-(3-benzoylamino-fenyl)-[2,5'jbithiazolyl-2'-ylamino}benzoová

^ΧΗ NMR (DMSO-De): δ 10,79 (s, 1H) , 10,39 (s, 1H) , 8,35 (s, 1H) , 8,18-7,34 (m, 16H) , ESIMS (MH⁺) : 514; (MNa⁺) : 536; (MH ) : 512.

Příklad A(51)

4-(4'-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5' ]bithiazolyl-2' -ylamino)-ethylbenzoát

³Η NMR (De-DMSO): δ 1,2 (t, 3H), 4,3 (q, 2H), 7,4 (t, 1H), 7,58,0 (m, 14H), 8,35 (s br, 1H), 10,4 (s, 1H), 10,95 (s, 1H),

ESIMS (MH⁺) : 542; (M-H) : 540.

*000 ··

000 «·

0 0 0 » 0 0 0 0

000 •0 »0 0 0 0 0 0

0000

Příklad A(52) — (4 '-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-methoxyfenyl

^ΧΗ NMR (CD₃OD) : δ 2,6 (s, 3H) , 7,2-7,8 (m, 11H) , 8,35 (s br, 1H), 7,9 (d, 2H), 8,2 (s br, 1H) , ESIMS (MH⁺) : 500; (M+Na⁺) : 522; (M+K⁺) : 538.

Příklad A(53)

3-(4'-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5']bithiazolyl-2’ -ylamino)-pyridin

⁴Η NMR (De-DMSO) : δ 7,1 7H), 7,85 (m, 1H), 8,0 10,4 (s, 1H), 10,95 (s, (s br, 1H), 7,4 (t, 1H), 7,5-7,7 (m, (m, 2H), 8,25-8,4 (m, 3H), 9,0 (d, 1H), 1H), ESIMS (M+Na⁺) : 493; (M-H): 469.

Příklad A(54)

Methylester kyseliny-2-(4'-amino-4-(3-benzamidofenyl)[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)thiofen-karboxylové • ·

7,5-7,7 (m, 6H) , 7,85 (m, 1H), 8,0 (m, 3H), 8,15 (d, 1H), 8,35 (m, 1H) , 10,4 (m, 1H) , ESIMS (MH⁺) : 534; (M+Na⁺) : 556; (M-H) :

532.

Příklad A(55)

4-(4'-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5’]bithiazolyl-2'-ylamino)fenylsulfonylpiperidin

^XH NMR (dg-DMSO): S 1,2-1,6 (m, 6H), 3,1 (m, 4H), 7,3-8,5 (m, 14H), 8,9 (d, 1H), 10,4 (s, 1H), 10,5 (s, 1H), 11,2 (s, 1H), ESIMS (MH⁺) : 617; (M-H)': 615.

Příklad A(56)

4- (4 ' -amino-4- (3-benzamidofenyl) -[2,5' ]bithiazolyl-2' -ylamino)-nitrofenyl • · · · · · • · ··· ·

^ΧΗ NMR (dg-DMSO): δ 10,3 (s, 1H), 11,2

7,2-7,9 (m, 13H), 8,2 (d, 2H), 8,3 (s, 1H), (s, 1H), ESIMS (MH⁺) : 515; (M-H)~: 513.

Příklad A(57)

4-(4-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5']bithiazolyl-2’-ylamino)-trans-benzoyl-DL-homoserinlakton

NHj ^ΧΗ NMR (dg-DMSO): δ 2,5 (m, 1H) , 2, 7 (m, 1H) , 4,35 (m, 1H) ,

4,5 (m, 1H), 4,8 (m, 1H), 7,2 (m, 1H), 1,45 (m, 3H), 7,55 (m, 4H), 7,75 (m, 5H), 7,85 (m, 3H), 8,0 (m, 3H), 8,35 (m, 1H), ESIMS (MH⁺) : 597; (M+Na⁺) : 619.

Příklad A(58)

4-(4'-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5']bithiazolyl-2’-ylamino)-acetofenon

• · • · ··· · ¹H NMR (de-DMSO): δ 2,5 (s, 3H), 7,1 (s br, 1H), 7,42 (t, 1H), 7,5-7,7 (m, 6H), 7,8 (m, 4H), 8,0 (m, 5H), 8,35 (t br, 1H), ESIMS (MH⁺) 512; (M+Na⁺) : 534; (M-H) : 510.

Příklad A(59) (4'-amino-4- (3-benzamidofenyl) -[2,5'] bithiazolyl-2' -ylamino) -cyklohexan

^XH NMR (CDCI3) : δ 1,0-2,0 (m, 1OH) , 3,2 (m br, 1H) , 5,2 (s, 2H), 7,0 (d, 1H), 7,4-8,0 (m, 11H),

ESIMS (MH⁺) : 506; (M-H): 504.

Příklad A(60)

3-(4’-amino-4-(3-benzamidofenyl)-[2,5']bithiazolyl-2’ylamino)-methoxypropan

¹H NMR (CDCI3) : δ 1,5 (m, 1H) , 1,8 (m, 1H) , 2,0 (m, 2H) , 3,1 n

··

···· (s, 3H) , 3,3 (m, 2H), 5,0 (s, 2H), 7,2-7,4 (m, 12H) , ESIMS (MH⁺) : 496; (M-H): 494.

Příklad A(61)

4-[4'-amino-4-(3-benzyloxy-5-hydroxy-fenyl)-[2,5]bithiazolyl-2 ' -ylamino]benzensulfonamid

t.t. 185-187 °C (rozklad). ^ΧΗ NMR (CD₃OD): δ 7,88 (s, 4H), 7,567,32 (m, 6H), 7,10-7,03 (m, 2H), 6,45 (t, J = 2,23 Hz, 1H),

5,13 (s, 2H) , ESIMS (MH⁺) : 552; (MH) : 550.

Analýza vypočtena pro C25H21N5O4S3.0,3 EtOAc: C, 54,43; H, 4,08; N, 12,12; S, 16,64. Zjištěno: C, 54,54; H, 4,00; N, 12,06; S, 16,5.

Příklad A(62)

4-[4-(3-allyloxy-5-hydroxyfenyl)-4’-amino-[2,5']bithiazolyl-2 ' —ylamino]benzensulfonamid

t.t. 200-202 °C. ¹H NMR (CD3OD) : δ 11,12 (s, NH) , 9,81 (s, NH2,

8,07-8,00 (m, 4H), 7,86 (s, NH2) , 7,48 (s, 1H) , 7,30 7,23 (m,

2H), 6,57 (s, 1H), 6,34-6,23 (m, 1H), 5,68-5,52 (m, 2H), 5,325,28 (m, 2H), ESIMS (MH⁺) : 502; (M-H) : 501.

·· • fc • · · · · · · • · · fcfcfc • · fcfc • · fcfcfc • > · · ··· í ·· · • fc fcfc fc fcfc· • fcfc •fc ····

Analýza vypočtena pro C21H19N5O4S3: C, 50,29; H, 3,82; N, 13,96; S, 19,18. Zjištěno: C, 50,31; H. 3,93; N, 13,74; S, 19,05.

Příklad A(63)

4-(4'-amino-4-styryl-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-benzensulfonamid

t.t. 140-143 °C (rozklad). ^XH NMR (CD3OD): δ 7,80-7,72 (m, 4H) , 7,50-7,46 (m, 1H), 7,38-7,06 (m, 6H), 6,95 (s, 1H), FABMS vypočteno pro C20H17N5O2S3: 455,0544.

Zjištěno 455,0529.

Příklad A(64}

4-{4'-amino-4-[2-(4-hydroxy-fenyl)-vinyl]-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino}benzensulfonamid

(q, J= 15,32 Hz, 4H), 7,36 (d, J= 8,75 Hz, 2H) , 7,22 (d, J= 15,80 Hz, 1H), 7,18 (s, NH₂) , 7,06 (s, 1H), 6,90 (d, J = 16,1 Hz, 1H), 6,84 (s, NH₂) , 6,70 (d, J = 8,62, 2H), FABMS vypočteno pro C20H17N5O3S3: 471,0494. Zjištěno: 471,0502.

Příklad A(65)

—{4’-amino-4-[2-(3-hydroxy-4-methoxy-fenyl)-ethenyl]-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino}-benzensulfonamid

t.t. 190-193 °C (rozklad). NMR (CD₃OD) : δ 10,71 (s, NH₂, 9,83 (s, NH₂), 7,63 (q, 1= 15,40, 4H), 7,10-7,03 (m, 2H), 6,98 (s, 1H), 6,86 (s, NH₂, 6,83-6,72 (m, 3H, NH₂, 3,60 (s, 3H) , ESIMS (MNa⁺) : 524.

Analýza vypočtena pro C21H19N5O4S3.0, 4 EtOAc: C, 50,56; H, 4,17; N, 13,05; S, 17,92. Zjištěno: C, 50,50; H, 4,35; N, 12,75; S, 17,88.

Příklad A(66)

4-[4'-amino-4-(4-fenyl-buta-1,3-dienyl)-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino]-benzensulf onamid

t.t. 193-195 °C (rozklad). ^XH NMR (CD3OD) : δ 10,92 (s, NH) , 7,82 (q, 1 = 15,92, 4H), 7,53 (d, J = 7,42, 2H) , 7,36 (t, J = 7,41 Hz, 2H), 7,28 7,06 (m, 2H, 2NH₂, 6,77 (m, 2H), ESIMS (MH⁺) : 482.

Příklad A(67)

4-(4'-amino-4-benzoyl-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-benzensulfonamid

t.t. 255-260 °C (rozklad). ²H NMR (CD₃OD): δ 10,99 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,04-8,02 (m, 2H), 7,78 (q, J = 12,1 Hz, 4H), 7,72 7,66 (m, 1H) , 7, 60-7,55 (m, 2H) , 7,26 (s, NH₂, 7,05 (br, NH₂) . ESIMS (MNa⁺) : 480; (M-H^-) : 456.

Příklad A(68)

Ethyl-4’-amino-2'-(4-sulfamoyl-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-karboxylát

^XH NMR (DMSO-Ds) : δ 11,0 (s, NH) , 8,12 (S, Η) , 7,80 (m, 4H) , 7,32 (s, NH₂) , 7,08 (br, NH₂, 4,35 (q, J= 8,7 Hz, 2H) , 1,30 (t, J = 8,7 Hz, 3H) , FABMS vypočteno pro C15HSN5O4S3 (MH⁺) : 426,0364. Zjištěno: 426,0356.

Příklad A(69)

4-[4'-amino-4-(4-chlor-3-hydroxy-fenyl)-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino]benzensulfonamid

« · · · ’ή NMR (CD3OD) : δ 7,97 (s, 4Η) , 7,63 (s, 1Η) , 7,58-7,46 (m, 3H) , FABMS (MH⁺) : 480.

Příklad A(70)

4- (4 ’ -amino-4-bifenyl-4-yl-[2,5’]bithiazolyl-2 ' -ylamino) -benzensulfonamid

¹H NMR (CD3OD): δ 8,09-8,00 (m, ÍH), 7,88 (s, 4H), 7,72-7,63 (m, 3H), 7,51-7,40 (m, 3H), 7,38 7,29 (m, ÍH), EIMS (M-H^-) : 504.

Analýza vypočtena pro C24H19N5O2S3: C, 57,01; H, 3,79; N, 13,85; S, 19,02. Zjištěno: C, 56,87; H, 3,81; N, 13,57; S, 19,16.

Příklad A(71): 4-(4'-amino-4-benzoyl-[2,5’]bithiazolyl-2'-ylamino)-N-(2-dimethylaminoethyl)benzensulfonamid

^ΧΗ NMR (CD3OD) : δ 7,88 (s, ÍH) , 7,84 (m, 5H), 7,40-7,34 (m, 2H), 2,63 (t, (t, J = 6,60 Hz, 2H) , 1,84 (s, 6H) ,

7,78 (m, 2H), 7,69-7,47 J = 6,70 Hz, 2H), 2,06

FABMS vypočteno pro

C23H24N6O3S3: 529, 1150. Zjištěno: 529, 1158.

Příklad A(72):

4-[4-amino-4- (3-amino-benzoyl)-[2,5']bithiazoyl-2'-ylamino]-benzensulfonamid

¹H NMR (DMSO): δ 10,91 (s, 1H) , 7,99 (s, 1H) , 7,86-7,84 (m,

4H), 7,27 (s, 2H), 7,23-7,06 (m, 5H), 6,81-6,90 (m, 1H), 5,38 (s, 2H), HRFABMS (M+Na⁺) : Vypočteno: 495,0344. Zjištěno: 495,0330.

Příklad A(73):

Ethylester kyseliny 4¹-amino-5-benzyl-2'-(4-sulfamoyl-fenylamino) [2,5' ] bithiazolyl-4-karboxylové h₂n

^XH NMR (CD3OD) : δ 7,76 (s, 4H) ,

7,18 (m, 5H), 4,40 (s, 2H),

4,30 (q, J= 1,26 (t, J=7,8 Hz, 3Hj,

Příklad B(l)

Terc-butylester kyseliny (3—{5—(4-amino-2-(trityl-amino)-thiazol-5-yl] -[1,2,4] oxadiazol-3-yl}-fenyl) karbamové

Výchozí materiály pro použití v přípravě titulní sloučeniny se připravily podle následujících stupňů (i) a (ii).

Stupeň (i): Do roztoku 3,15 g (26,7 mmol, 1,0 ekv.)-3-aminobenzonitrilu v 10 ml CH2CI2 se přidá a roztok 6,4 g (29,4 mmol, 1,1 ekv.) di-terc-butyldikarbonátu v 10 ml CH2CI2 a potom 320 mg (2,7 mmol, 0,1 ekv.) DMAP a 8 ml (80,1 mmol, 3,0 ekv.) pyridinu. Uvolní se CO2 a reakce se sleduje TLC do dokončení. Rozpouštědlo se odčerpá, zbytek se odebere v EtOAc a promyje se IN HCI a solankou. Organická vrstva se suší přes Na2SO4 a rozpouštědlo se odstraní. Surový produkt se přečistí na SÍO2 (2% Et2O-CH2Cl2 eluens) za zisku 5,4 g-3-(terc-butoxykarbamoyl)benzonitrilu (výtěžek 93%). Rf= 0,9 (10% Et2OCH2CI2. ^XH NMR (CDCI3: δ 1,5 (s, 9H) , 6,6 (s br, 1H) ,

7,35 (m, 2H), 7,55 (m, 1H), 7,82 (m, 1H),

Stupeň (ii): Do roztoku 2 g (9,17 mmol, 1,0 ekv.)-3-(terč -butoxykarbamoyl)benzonitrilu v 25 ml EtOH se přidá 0,84 ml (13,76 mmol, 1,5 ekv.) 50% vodného roztoku NH2OH. Reakční směs se vloží do olejové lázně o teplotě 85 °C na dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a residuální voda se odstraní azeotropováním zbytku s THF-toluenem. Bez přečištění se surový hydroxyamidin (Rf = 0,1 v 10% Et2O-CH2Cl2 rozpustí ve 45 ml DMF a přidá se 2,1 ml (12 mmol, 1,3 ekv.) diisopropylethylaminu a 110 mg (0,92 mmol, 0,1 ekv.) DMAP.

Směs se ochladí na -50 °C a po kapkách se v atmosféře argonu přidá se roztok 0,88 ml (11 mmol, 1,2 ekv.) chloracetylchloridu v 15 ml CH2CI2 (nebo DMF) . Reakční směs se mísí při teplotě -50 °C po dobu 1 hodiny a potom se vnese do EtOAc a promyje se IN HCI a solankou. Organická vrstva se suší přes Na2SO4 a rozpouštědlo se odstraní. Zbytek se odebere v 50 ml dioxanu a vloží se do olejové lázně o teplotě 110 °C na dobu přibližně 1 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se přečistí na SÍO2 (Et20-hexan eluens) za zisku 2 g 5-chlormethyl-3-(3-(t-butoxy-karbamoyl)fenyl)-[1,2,4]-oxadiazolu ve formě bílého pevného materiálu (70% celkový výtěžek pro tři stupně) . Rf = 0,9 (10% Et2O-CH2Cl2) . ¹H NMR (CDCI3: δ 1,5 (s, 9H), 4,75 (s, 2H), 6,62 (s br, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,62 (d br, 1H), 7,75 (m, 1H), 8,05 (m, 1H),

Titulní sloučenina se připraví následujícím způsobem. Do roztoku tritylisothiokyanatanu (5,0 mmol) a kyanamidu (5,5 mmol) rozpuštěných v bezvodém THF (10 ml) se přidá 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undek-7-en (5,5 mmol). Po míšení po dobu 2 hodin se reakční směs naředí acetonitrilem (15 ml) a potom se zpracuje 5-chlormethyl-3-(3-(terc-butoxy-karbamoyl)fenyl)- [1,2,4]-oxadiazolem (2,5 mmol) a 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undek-7-enem (2,75 mmol). Produkt se izoluje po 1 hodině zahuštěním surové reakční směsi ve vakuu a chromatografováním získaného oleje (gradientová eluce, 20% EtOAc/hexan až 40% EtOAc/hexan), za zisku 1,30 g produktu (84% výtěžek) .

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,79 (1H, s), 7,60 (2H, m) , 7,24 (16H, m) , 6,91 (1H, s), 6,48 (1H, s), 5,77 (2H, s), 1,52 (3H, s), 1,46 (6H, s) . ESIMS (MH⁺) : 617.

Následující sloučeniny příkladů B(2) až B(36) se připravily podobně jako sloučenina příkladu B(l).

Příklad B(2)

3-(3-terc-butyloxykarboxy-aminofenyl)-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

³Η NMR (de-aceton): δ 1,5 (s, 9H) , 3,7 (s, 3H), 3,85 (s, 6H), 7,0 (s br, 2H), 7,05 (s, 2H), 7,4 (t. 1H), 7,75 (d, 2H), 8,35 (S, 1H), 8,6 (s br, 1H) , 9,7 (s br. 1H), ESIMS (MH⁺) : 541; (ΜΗ) : 539.

Analýza vypočtena pro C25H28N6O6S: C, 55,54; H, 5,22; N, 15,55; S, 5,93. Zjištěno: C, 56,45; H, 5,67; N, 14,88; S, 5,58.

Příklad B(3)

5-[3-(4-terc-butyl-fenyl)-[1,2,4]oxadiazol-5-yi]-N²- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z Vypočteno: 481. Analýza vypočtená: C, 59,86; H, Zjištěno: C, 58,36; H, 5,53; N,

Zjištěno 481.

5,65; N, 14,54; S, 6,66. 13,95; S, 6,36.

Příklad B(4)

5-[3-(3-methoxymethoxy-fenyl)-[1,2,4]oxadiazol-5-yl]-N²- (3,4,5-trimethoxyfenyl)-thiazol-2, 4-diamin ····

• · · • • ♦ 4	99	9 9 9 9	• · 9 9 9 9	99 9 ♦ 9
9 9	9 9
•	9	9	•	9 9	9
9	9 9		♦··	9 9	9999

¹H NMR (300 MHz, DMSO-de) : δ 3,41 (s, 3H) , 3,64 (s, 3H) , 3,81 (s, 6H), 5,29 (s, 2H), 7,01 (s, 2H), 7,22 (m, 1H), 7,34 (brs, 2H), 7,47 (m, 1H), 7,70 (m, 2H), 10,76 (s, 1H) ,

Analýza vypočtena pro C22H23N5O6S*H2O: C, 52,48; H, 5,00; N, 13,91. Zjištěno: C, 52,47; H, 4,98; N, 13,75.

Příklad B(5):

3-(3-(terc-butyloxykarboxyamino)-6-fluor-fenyl)-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazoi

^XH NMR (CDCI3) : δ 1,5 (s, 9H) , 3,7 (s, 3H) , 3,85 (s, 6H) , 6,6 (s br, 2H), 6,7 (s br, 1H), 7,05 (t, 1H), 7,55 (m, br, 1H), 7,85 (m, 1H), ESIMS [MH]⁺: 559.

Příklad B(6):

3-(2-methyl-5-(terc-butyloxykarboxyamino)-fenyl)-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl) -amino] -4-am.ino-5-thiaz.olyl] -1, 2,4-oxadiazol ·♦··

³Η NMR (CDCI3) : δ 1,5 (s, 9Η) , 2,55 (s, 3Η) , 3,85 (s, 3Η) , 3,87 (s, 6Η), 6,65 (s br, 2H), 7,22 (d br, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,55 (d br, 1H), 7,85 (m br, 1H), ESIMS [MH]⁺: 555.

Příklad B(7):

3-[3-[(3-methoxybenzoyl)amino]-6-methyl-fenyl]-5-[2-[4-(N,N-dimethylaminofenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

¹H NMR (de-DMSO): δ 2,55 (s, 3H), 2,9 (s, 6H) , 3,85 (s, 3H),
6,75	(m, 2H), 7,18	(m, 3H), 7,35-7,6	(m, 6H) ,	7,95	(dd, 1H),
8,35	(d, 1H), 10,3	(s br, 1H), 10,4	(s br, 1H)	, ESIMS [MH]⁺:
542,	[M+Na]⁺: 564.

Analýza vypočtena pro C28H27N7O3S: C, 58,22; H, 5,41, N, 16,97; S, 5,55. Zjištěno: C, 58,01; H, 5,54, N, 16,13; S, 5,22.

Příklad B(8):

3-[3-[(l-ethyl-3-methyl-lH-pyrazol-5-karboxy)-amino]-6-methyl-fenyl]-5-[2-(3-hydroxymethylfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

NMR (MeOD) 2H) , 4, 65 (s, 7,55 (m, 1H), ESIMS [MH]⁺:

: Ó 1,4 (t, 3H), 2,3 (s 2H) , 6,75 (s,lH), 7,1 7,65 (m br, 1H), 7,8

531.

, 3H), 2,6 (s, 3H) , 4 (cl br, 1H) , 7,35 (m, (dd, 1H), 8,25 (d, 1H) ,5 (q, 2H) ,

Příklad B(9):

3-[3-[(l-ethyl-3-methyl-lH-pyrazol-5-karboxy)-amino]-6-methyl-fenyl]-5-[2-(3-methylpyrrolidinfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

¹H NMR (MeOD): δ 1,4 (t, 3H), 1,8 (m br, 4H), 2,3 (s, 3H), 2,6 (s br, 7H), 3,7 (s, 2H), 4,5 (q, 2H), 6,75 (s, 1H), 7,18 (m, 3H), 7,35 (m, 2H), 7,55 (m br, 1H), 7,65 (s br, 1H) , 7,8 (dd, 1H), 8,28 (d, 1H), ESIMS [MH]⁺: 584.

Příklad B(10):

3-[3-[(l-ethyl-3-methyl-lH-pyrazol-5-karboxy)-amino]-6-methylfenyl]-5-[2-(4-methylpyrrolidinfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

²Η NMR (de-DMSO) : δ 1,32 (t, 3H) , 1,7 (m br, 4H), 2,2 (s, 3H),

2,6 (s, 3H), 3,3 (m, 4H), 3,6 (s, 2H), 4,45 (q, 2H), 6,85 (s, 1H), 7,3 (m, 5H), 7,6 (d, 2H), 7,92 (dd, 1H), 8,28 (d, 1H), 10,25 (s, 1H), 10,8 (s br, 1H), ESIMS [MH]⁺: 584.

Analýza vypočtena pro C30H33N9O2S: C, 61,73; H, 5,70, N, 21,60; S, 5,49. Zjištěno: C, 61,52; H, 5,61, N, 21,52; S, 5,46.

Příklad B(11):

(R,S)-3-[3-(2-hydroxy-4-methyl-pentanoyl)amino]-6-methyl -fenyl]-5-[2-(3-methylpyrrolidinfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

^XH NMR (MeOD) : δ 1,0 (dd, 6H) , 1,65 (m, 3H) , 1,9 (m, 4H) , 2,6 (s, 3H), 2,8 (m br, 4H), 3,85 (s, 2H), 4,2 (dd, 1H), 7,13 (d br, 1H), 7,35 (m, 3H), 7,56 (m br, 1H), 7,72 (m br, 2H), 8,28 (d, 1H),

Příklad B(12)N: terc-butyl ester kyseliny (3—{5—[4-amino-2(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl][1,2,4]oxadiazoyl}-4-chlor-fenyl)-karbamové «» »

9

¹H-NMR (d6+~aceton) : δ 9, 71 (s, 1H) , 8, 71 (s, 1H) , 8,20 (m, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,52 (m, 1H), 7,06 (s, 2H), 6,95 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), 1,50 (s, 9H), ESIMS: (MH)⁺: 575 (100%), 577 (30%) .

Příklad B(13) :

Terc-butylester kyseliny (5-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-2,4-difluoro-fenyl)-karbamové

^XH-NMR (d6-aceton) δ 9,71 (s, 1H), 8,68 (m, 1H), 8,24 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,04 (s, 2H), 6,99 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), 1,51 (s, 9H), ESIMS (MH)⁺: 577.

Příklad B(14): Terc-butylester kyseliny (5-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-4-chlor-2-fluor-fenyl)-karbamové

¹H-NMR (ch-aceton) : δ 9, 72 (s, 1H) , 8,68 (m, 1H) , 7,49 (m,

1H), 7,07 (s, 2H), 6,97(s, 2H) , 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), 1,51 (s, 9H), ESIMS (MH)⁺: 593 (100%), 595 (30%).

Příklad B(15): Terc-butylester kyseliny (5-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}2,4-dichloro-fenyl)-karbamové

¹H-NMR (d6-aceton): δ 9,73 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,07 (s, 2H), 6,98 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), 1,52 (s, 9H), ESIMS(MH)⁺: 609 (100%), 611 (60%).

Příklad B(16):

Terc-butylester kyseliny N-(3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-methylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl}-karbamové

¹H-NMR (d6~aceton): δ 8,48 (s, 1H), 8,20 (m, 1H), 7,69(m, 1H),

7,55 (m, 1H), 7,28 (m, 1H), 6,77 (s, 2H), 3,02 (d, 3H), 2,55 ···· (s, 3H), 1,55 (s, 9H), ESIMS: (MH) ⁺ : 403, (MNa)⁺: 425,

Příklad B (17):

N-(3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-methylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl}-3-methoxy-benzamid

¹H-NMR (de-dmso): δ 10,33 (s, 1H), 8,59 (m, 1H), 8,35 (m, 1H),

7,95 (m, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,45 (m, 2H), 7,36 (m, 1H), 7,19 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 2,91 (m, 3H), 2,50 (s, 3H), ESIMS: {MH)⁺: 437, (MNa)⁺: 459.

Příklad B (18) :

N-(5-{5-[4-amino-2-(6-morfolin-4-yl-pyridin-3-ylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]-oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxv-benzamid

¹H-NMR (ds-DMSO) : δ 10,62 (s, 1H) , 10,27 (s, 1H) , 8,39 (m, 1H) , 8,33 (m, 1H), 7,85 (m, 1H), 7,63 (m, 3H), 7,48 (m, 1H), 7,30 (s, 2H) , 7,20 (m, 1H), 6,88 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,70 (m,

4H) , 3,42 (m, 4H), ESIMS: (MH)⁺: 607 .

♦ · ·*··

Příklad Β(19):

Ν-{5-[5-(4-amino-2-isopropylamino-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamid

(d6-aceton) : δ 9,37 (s, 1H) , 8,70 (m, 1H) , 7,65-7,60 (m, 3H), 7,45 (m, 1H), 7,34 (m, 1H) , 7,18 (m, 1H) , 6,78 (s, 2H) ,

3,96 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 1,30 (d, 6H), ESIMS: (MH)⁺: 487.

Příklad B(20):

N-(5-{5-[4-amino-2-(pyridin-3-ylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid; TFA sůl

¹H-NMR (dg-aceton a	dg-dmso)	: δ 11	λ 07	(s, 1H), 9,94 (s, 1H),
8,98	(m, 1H),	8,54	(m, 1H),	8,30	(m,	2H), 7,64 (m, 3H), 7,48
7,36	(m, 4H),	7,18	(m, 2H),	3,89	(s,	3H), ESIMS: (MH)⁺: 522.

Příklad B(21):

Terc-butylester kyseliny {5-[5-(4-amino-2-isopropylamino-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-2,4-difluor-fenyl}karbamové ·*♦·

^-NMR (dg-aceton): δ 8,42 (s, 1H) , 8,18 (m, 1H) , 7,70 (m, 1H) , 7,67 (m, 1H), 7,26 (m, 1H), 6,73 (s, 2H), 3,97 (m, 1H), 2,54 (s, 3H) , 1,50 (s, 9H), 1,29 (d, 6H), ESIMS: (MH) ⁺ : 431.

Příklad B(22):

N-{3-[5-(4-amino-2-isopropylamino-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl}-3-methoxy-benzamid

¹H-NMR (dg-aceton): δ 9,59 (s, 1H), 8,42 (m, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,57(m, 2H), 7,43-7,7,37 (m, 3H), 7,14 (m, 1H), 6,73 (s, 2H),

3,97 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 2,60 (s, 3H), 1,29 (d, 6H), ESIMS: (MH)⁺: 465.

Příklad B(23):

Terc-butylester kyseliny {3—[5—(4—amino-2—fenyl-thiazol—5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl}-karbamové

9999 ¹H-NMR (d6-aceton): 6 9,78 (s, 1H), 8,44 (s, 1H), 7,72 (m, 3H),

7,42 (m, 2H), 7,39 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 6,91 (s, 2H), 2,57 (s, 3H), 1,51 (s, 9H), ESIMS: (MH)⁺: 465.

Příklad B(24):

Terc-butylester kyseliny (3-{5-[4-amino—2-(lH-benzoimidazol-5-yl)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl)-karbamové

Příklad B(25):

Terc-butylester kyseliny (3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]-oxadiazol-3-yl}-4-methyl-fenyl)-

¹H-NMR (d6-aceton): δ 9,62 (s,lH), 8,23 (m, 1H), 8,09 (m, 1H), 7,15-7,05 (m, 2H) , 7,39 (m, 3H), 6,82 (s, 2H), 6,91 (s, 2H), 4,07-3,85 (s, 9H), 3, 76 (s, 3H), 1,49 (s, 9H), ESIMS: (MH)⁺: 571.

Příklad B(26):

2-ethyl-5-methyl-2H-pyrazole-3-karboxylová kyselina {3-[5—(4— -amino-2-fenyl-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl}-amid ···· ·· • · • · ·· ·· ···· • · · • · · · • · · ·· ····

¹H-NMR (de-aceton) : δ 10,75 (s, 1H) , 9,42 (m, 1H) , 8,38 (m,

1H) ,	7,99	(m,	1H) ,	7,20	(m, 2H), 7,45-7,35 (m, 3H), 7,12 (m,
1H) ,	6, 90	(s,	2H) ,	6,74	(s, 1H), 4,55 (kvartet, 2H), 2,62 (s
3H) ,	2,21	(s,	3H) ,	1,39	(t, 3H), ESIMS: (MH)⁺: 500, (MNa)⁺:

523.

Příklad B(27):

2-methyl-5-methyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina [3-(5-{4-amino-2-[6-(4-methyl-piperazin-l-yl)-pyridin-3-yl]-thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-4-methyl-fenyl]-amid

^-NMR (CDgOD) : δ 8,37 (m, 1H) , 8,25 (m, 1H) , 7,89 (m, 1H) , 7,77 (m, 1H), 7,34 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 6,73 (m, 1H), 4,51 (kvartet, 2H), 3,58 (m, 4H), 2,72 (m, 4H), 2,58 (s, 3H) , 2,46 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,42 (t, 3H), ESIMS: (MH)⁺: 600.

Příklad B (28) :

N-[5-(5-{4-amino-2-[6-(4-methyl-piperazin-l-yl)-pyridin-3-yl] -thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-2-chlor-4-methyl-fenyl]-3-methoxy-benzamid

¹H-NMR (d6~aceton a d6-dmso) : δ 10,51 (s,	1H), 9,89 (s, 1H),
8,47 (m, 2H),	7,91	(m,	1H) ,	7,70-7,51 (m,	3H), 7,45 (m, 1H),
7,20-7,14 (m,	3H) ,	6,89 (m,	1H), 3,91 (s,	3H), 3,58 (m, 4H),
2,67 (s, 3H),	2,58	(m,	4H) ,	2,36 (s, 3H),	ESIMS: (MH)⁺: 632.

Příklad Β (29) :

2-hydroxy-4-methyl-pentanoová kyselina [3-(5-{4-amino-2-[6-(4-methylpiperazin-l-yl)-pyridin-3-yl]-thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-4-methyl-fenyl]-amid

¹H-NMR (CD₃OD) : δ 8,47 (m, 1H) , 8,28 (m, 1H) , 8,01 (m, 1H) ,

7,68 (m, 1H), 7,32 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,413,31 (m, 7h), 2,99 (m, 4H), 2,59 (s, 3H), 1,93 (m, 1H), 1,65 (m, 2H), 1,10 (d, 6H), ESIMS: (MH)⁺: 578.

Příklad B(30):

2-ethyl-5-methyl-2H-pyrazol-3-karboxylová kyselina (3—{5—[4— -amino-2-(4-hydroxy-fenyl)-thiazol-5-yl]-[1,2,4] -oxadiazol-3-yl}-4-methyl-fenyl-amid

Η I

¹H-NMR (de-aceton) :	δ 9	,77
7,98 (m, 1H), 7,66	(m,	2H)
6,75 (s, 1H), 4,64	(m,	2H)
2,61 (s, 3H), 2,20	(s,	3H)

Příklad Β(31):

(Z)-2-methyl-but-2-enoová kyselina [3-(5-{4-amino-2-[4-(4-methylpiperazin-l-yl)-fenyl]-thiazol-5-yl}—[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-4-methyl-fenyl]-amid

¹H-NMR (de-aceton): δ 10,55 (s, 1H), 9,92 (s, 1H), 8,60 (m, 1H), 8,24 (m, 1H), 7,81 (m, 2H), 7,31 (m, 1H), 7,22 (s, 2H), 6,87 (m, 1H), 5,61 (m, 1H), 3,45 (m, 4H) , 2,50 (s, 3H) , 2,40 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,92 (s, 3H), 1,72 (d, 3H), ESIMS:

(MH)

546.

Příklad B(32):

(Z)-2-methyl-but-2-enoová kyselina (3-{5-[4-amino-2-(3-pyrrolidin-l-ylmethyl-fenyl)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-4-methyl-fenyl) -amid

¹H-NMR (CD3OD) : δ 8,31 (m, 1H) , 7,80 (m, 2H) , 7,68 (m, 1H) ,

7,50 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 5,70 (m, 1H) , 4,33 (s, 2H) , 2,59 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (m, 4H), 1,99 (m, 4H), 1,80 (m, 3H), ESIMS: (MH)⁺: 530.

Příklad B(33):

Terc-butylester kyseliny (3-[5-[4-amino-2-(3-pyrrolidin-l-ylmethyl-fenyl)-thiazol-5-yl][1,2,4]oxadiazol-3-yl}-4-methyl-fenyl)-karbamové

^XH-NMR (d6-aceton): δ 10,48 (s, 1H), 8,61 (m, 1H), 8,47 (m, 1H), 8,23 (m, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,63 (m, 1H), 7,38-7,28 (m, 5H), 4,33 (s, 2H), 3,47 (m, 4H), 2,80 (m, 4H), 2,58 (s, 3H), 1,51 (s, 9H), ESIMS: (MH)⁺: 548.

Příklad B(34):

Isobutylester kyseliny (3-{5-[4-amino-2-(3-pyrrolidin-l-ylmethyl-fenyl)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-4-methyl-fenyl)-karbamové

¹H-NMR (d6-aceton) : δ 10,46
1H) ,	8,26 (m,	1H) ,	7,74 (m
3H) ,	7,22 (s,	2H) ,	4,29 (s
3,09	(m, 4H),	2,57	(s, 3H)

(ΜΗ)⁺:548.

s, 1H), 8,75 (m, 1H), 8,52 (m,

1H), 7,63 (m, 1H), 7,36-7,27 (m, 2H), 3,92 (d, 2H), 3,22 (m, 4H), 1.98 (m, 1H), 0,97 (d, 6H), ESIMS:

^XH-NMR (d6-aceton): δ 9,79 (s,lH), 8,45 (s, 1H), 8,11 8,15 (m, 2H), 7,71 (m, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,39 (m, 1H), 7,29 (m, 1H), 6,79 (s, 2H), 2,57 (s, 3H), 1,51 (s, 9H), ESIMS: (MH)⁺: 505.

Příklad B(35):

3-[3-[(3-methoxybenzoyl)amino]-6-methyl-fenyl]-5-(2 -fenylamino)-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

				95			♦ • • • · ·	• • • 0	>00 • 0 0 ·· 000
^XH NMR (de-DMSO) :	δ 2,	55	(s,	3H) ,	3,85	(s, 3H),	7,1	(m,	1H) ,
7,18 (m, 1H), 7,2	(s	br,	2H)	, 7,4	(m,	2H), 7,45	(m,	2H)	, 7,55
(m, 2H), 7,7 (dd,	2H)	, 7	, 95	(dd,	1H) ,	8,35 (d,	1H) ,	10,	35 (s
br, 1H), 10,85 (s	br,	1H	), ESIMS	[MH] ⁺	: 499.

»· 0 0 0 0

Analýza vypočtena pro: C26 H22 N6 03 S: C, 62,64; H, 4,45, N, 16,86; S, 6,43. Zjištěno: C, 62,41; H, 4,54, N, 16,72; S, 6,30.

Příklad B(36):-3-[3-[(3-methoxybenzoyl)amino]-6-methyl-fenyl] -5-[2-[3-amino-6-(4-morfolinyl)-pyridinyl]-4-amino-5-thiazolyl-1,2,4-oxadiazol

NMR (de-DMSO): δ 2,55 (s, 3H), 3,4 (m, 4H), 3,7 (m, 4H),

3,85 (s, 3H), 6,9 (d, 1H), 7,15 (m, 1H), 7,22 (s br, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,85 (dd, 1H), 7,95 (dd, 1H), 8,4 (dd, 2H), 9,75 (s br, 1H), 10,35 (s br, 1H), 10,7 (s br, 1H), ESIMS [MH]⁺: 585.

Příklad B(37): 5-(3-[3-(5-methyl-2H-[l,2,4]triazol-3-yl)-fenyl]-[1,2,4-oxadiazol-5-yl }-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

• · · · · · (A) Do 1 (6,0 g, 37,5 mmol) ve 120 ml EtOH se po kapkách přidá hydrazin (6,24 ml, 200 mmol, 5,3 ekv.). Získaný roztok se vloží do 90 °C olejové lázně. Reakční směs se mísí do té doby, než sloučenina 1 nevymizí podle TLC (přibližně 2 hodiny). Reakční směs se nechá vychladnout, rozpouštědlo se redukuje na 50 ml na rotační odparce a sloučenina 2 se vysráží ve formě bílého pevného materiálu. Pevný materiál se získá filtrací. Objem filtrátu se dále redukuje na přibližně 20 ml a naředí se etherem (10 ml) pro umožnění získání druhé frakce sloučeniny 2. Dvě frakce se kombinují poté, co se podle ¹H NMR prokáže, že mají stejnou čistotu (výtěžek: 5,07 g, 83%). Rf 1 = 0,8 (25% CH₂C1-EtOAc) , Rf 2= 0,2 (25% CH₂Cl-EtOAc).

2: ¹H-NMR (d6~dmso): δ 9,98 (s, ÍH), 8,21 (m, ÍH), 8,14 (m,

1H), 8,00 (m, ÍH), 7,71 (m, ÍH), 4-60 (s, 2H).

(B) Do roztoku acetamidinu.HC1 (2,3 g, 24,6 mmol, 1 ekv.) ve 20 ml bezvodého ethanolu se pod atmosférou argonu přidá NaOEt (24,6 ml, IM v EtOH, 1 ekv.). Po 30 minutách se kalný roztok přefiltruje přes nálevku s fritou naplněnou celitem. Do získaného čirého roztoku se přidá 2. Po přidání 2 se reakční směs opět stane žlutou a kalnou. Roztok se projasní po 5 minutách míšení a potom vznikne sraženina. Reakční směs se mísí do vymizení sloučeniny 2 podle TLC 3 hodiny). Rf 2 = 0,75 (30% EtOH:30% CHCI3:40%Et0Ac), Rf necyklizovaného meziproduktu = 0,2 (30%EtOH:30% CHCl3:40% EtOAc). Reakční směs se mísí na ledu po dobu 30 minut a potom se přefiltruje za zisku bílého pevného materiálu (2,125 g, 85%). 2,07 g tohoto meziproduktu »· ·· · · se rozpustí v 10 ml xylenů a 0,52 ml 1-oktanolu a vloží se do olejové lázně o teplotě 150 °C. Po přibližně 15 hodinách dojde podle TLC k úplné konverzi na 3 a vysráží se bílé krystaly. Reakční směs se vloží do lázně led-MeOH na dobu 15 minut a potom se přefiltruje. Krystaly se promyjí chladnými xyleny a potom se suší za zisku 1,636 g sloučeniny 3 (83%). Rf3 - 0,6 (30%EtOH: 30%CHCl₃: 40%Et0Ac). 3: ¹H-NMR (d₆-dmso): δ 13,89 (s, 1H), 8,27 (m, 2H), 7,86 (m, 1H), 7,67 (m, 1H), 2,43 (s, 3H).

Sloučenina 3 dále reaguje způsobem podle postupu B(l) za zisku sloučeniny příkladu B(37). ¹H-NMR (d6 aceton): δ 8,85 (m, 1H), 8,26 (m, 1H), 8,15 (m, 1H), 7,63(m, 1H), 7,09 (s, 2H), 7,01 (s, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), 2,49 (s, 3H) , ESIMS: (MH)⁺: 507.

Sloučeniny příkladů B(38) a B(39) se připraví podobně jako sloučenina popsaná v příkladu B(37).

Příklad B(38):

5-{3-[3-(5-isopropyl-2H-[1,2,4]triazol-3-yl)-fenyl]-[1,2,4]oxadiazol-5-yl}-N2-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

¹H-NMR (d6~aceton): δ 13,79 (s,	1H), 10,78	(s, 1H), 8,63	(m,
1H), 8,15 (m, 2H), 7,63 (m, 1H)	, 7,36 (s,	2H), 7,02 (s,	2H) ,
3,81 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), 3,13 (septet,	1H), 1,33 (d,	6H) ,
ESIMS: (MH)⁺: 535.

Příklad B(39): 5-(3-{5-[5-isobutyl-2H-[1,2,4]triazol-3-yl)-fenyl-[1,2,4]oxadiazol-5-yl)-N2-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)98 • · · · · · · · ·

-thiazol-2,4-diamin

^XH-NMR (de-aceton):	δ 12	,75	(s, 1H), 9,68	(s, 1H), 8,	81	(m,
1H), 8,23 (m,	1H) ,	8,11	(m,	1H), 7,58 (m,	1H), 7,02	(s,	2H) ,
6,93 (s, 2H),	3, 77	(s,	6H)	, 3,67 (s, 3H)	, 2,51 (d,
2,01 (m, 1H),	0,98	(d,	6H) ,	ESIMS: (MH)⁺:	549.
Příklad B(40)

p

· ·· ·· • · · · »4 ·

Příklad C(l)

4- (3-aminofenyl) -N²- (3, 4,5-trimethoxyfenyl) - [2,5'] bithiazolyl-2', 4'-diamin

Roztok (3-nitrofenyl) -N²'-trimethoxyfenyl-[2,5' ]bithiazolyl-2', 4'-diaminu (1 mmol), připraveného způsobem podle příkladu A(l), chloridu cínatého (3 mmol) v DMF (3 ml), pod atmosférou argonu, se mísí při teplotě 50 °C (vnitřní teplota) po dobu

2,5 hodiny. Získaný tmavě hnědý roztok se naředí ethylacetátem (10 ml) a NaHC03 (10 ml) , což způsobí vznik sraženiny, která se odebere filtrací a promývá se 50% DMF/ethylacetatem (20 ml) do té doby, než je filtrát téměř bezbarvý. Filtrát se potom promyje NaHCO₃ (30 ml), solankou (30 ml), suší se přes MgSOo přefiltruje se, odstraní se rozpouštědlo a zbytek se přečistí rychlou chromatografii (gradientová eluce, 10% aceton/CH2Cl2 až 40% aceton/CH2Cl2) za zisku 4-(3-aminofenyl)-N²-(3,4,5-trimethoxyfenyl)-[2,5']bithiazolyl-2',4 '-diaminu.

T.t. 205-210 °C (rozklad). ²H NMR (DMSO-de: 5 10,35 (br d, NH₂) ,

7,41 (s, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,07 (d, 1H, J = 4,82 Hz, 1H),

7,00 (s, 2H), 6,95 (s, 1H), 6,57-6,52 (m, 1H), 5,13 (br d, íoo : : · · · • · · · ··· · ·· ·

ΝΗ₂) , 3,80 (s, 6H) , 3,65 (s, 3H), FABMS (MH⁺) : 456.

Analýza vypočtena pro C21H21N5O3S2: C, 55,37; H, 4,65; N, 15,37; S, 14,08. Zjištěno: C, 55,59; H, 4,72; N, 15,11; S, 13,92.

Příklad C(2)

3-[3-aminofenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

Roztok 267 mg (0,49 mmol) of-3-(3-terc-butyloxykarboxy-aminofenyl)5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino 5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazolu (připravenéhop podle příkladu B(2)) ve 3 ml 50% kyseliny trifluoroctové v dichlormethanu se mísí po dobu 60 minut při teplotě místnosti a potom se nalije na led. Po kapkách se přidává 3N NaOH dokud není roztok alkalický a směs se potom extrahuje EtOAc. Organická vrstva se promyje NaHCO3 a solankou a suší se přes Na₂SO4. Rozpouštědlo se odstraní za zisku 204 mg (95% výtěžek) titulní sloučeniny ve formě světle žlutého pevného materiálu.

¹H NMR (d6~aceton): δ 3,6 (s, 3H), 3, 75 (s, 6H), 4,8 (s br,

2H), 6, 75 (m, 1H), 6,85 (s br, 2H), 6,95 (s, 2H), 7,1 (t,

1H), 7,25 (m, 1H), 7,35 (m, 1H), 9,6 (s br, 1H). ESIMS (MH⁺) : 441; (M-H): 439.

Analýza vypočtena pro C20H20N6O4S: C, 54,53; H, 4,58; N, 19,08; S, 7,28. Zjištěno: C, 54, 79; H, 4,59; N, 18,81; S, 7,09.

• · · ·

4

101 ·· ··♦

Příklad C(3)

4-[4'-amino-4-(3-amino-fenyl)-[bithiazolyl-2'-ylamino]-benzensulfonamid

Způsobem podobným způsobu popsanému výše pro příklady C(l) a C{2) se připraví následující titulní sloučenina.

¹H NMR (CD3OD) : δ 7,88 (s, 4H), 7,42 (s, 1H), 7,40 7,29 (m, 2H), 7,25-7,18 (m, 1H), 6, 80-6,72 (m, 1H), FABMS (MH⁺) : 445.

Příklad C(4):

3-[3-amino-6-fluorfenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

^ΧΗ NMR (CDCl3-MeOD 10:1): δ 3,85 (m, 2H), 7,1 (m, 2H), 7,7 (s br (s, 3H), 3,95 (s, 6H), 6,75 1H), ESIMS [MH]⁺: 459.

Příklad C(5):

3-[2-fluor-4-methoxy-5-aminofenyl]-5-[2-[{3,4,5

-trimethoxyfenyl)amino]-4—amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

102

^XH NMR (CÍ6-DMSO) : δ 3,6 (s, 3H) , 3,8 (s, 6H) , 4,0 (s, 3H) , 6,95 (s br, 2H), 7,2 (m, 3H), 8,65 (d, 1H), 9,05 (s br, 1H), ESIMS [MH]⁺: 489.

Příklad C(6):

3-(3-amino-6-methyl-fenyl)-5-[2-[{3,4,5-trimethoxyfenyl)-amino]-4-amino-5-thiazolylJ-1,2,4-oxadiazol

^XH NMR (CDCls) : δ 2,05 (s, 3H) , 3,8 (s, 9H) , 6,2 (s br, 2H) ,

6,6 (s br, 2H), 6,8 (m br, 1H), 7,05 (m br, 1H), 7,45 (s br, 1H), ESIMS [MH]⁺: 455.

Příklad C{7): 5-[3-{5-amino-2-chlor-fenyl)-[1,2,4]oxadiazol-5-yl]-N2-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

’ή-ΝΜΗ (d6~aceton) : δ 9,58 (s, 1H) , 7,13 (m, 2H) , 6,92 (s, 2H) , »««· « · ιυο ?········· ··· : ·..· .:.

6,78 (s, 2Η) , 6,70 (m, 1Η), 4,91 (s, 2H), 3,78 (s, 6H), 3,58 (s, 3H) , ESIMS:(MH)⁺: 475 (100%), 477 (30%).

Příklad C(8) :

5-[3-(5-amino-2,4-difluor-fenyl)-[1,2,4]oxadiazol-5-yl]-2-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

1H-NMR (de-aceton): δ 9,72 (s, 1H), 7,63 (m, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,05 (s, 2H), 6,94 (s, 2H), 4,83 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), ESIMS (MH)⁺: 477.

Příklad C(9): 5-[3-(5-amino-2-chlor-4-fluor-fenyl)-[1,2,4]oxadiazol-5-yl]-N-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

¹H-NMR (d6^-dmso) δ 10,76 (s, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,18 (s, 2H), 6,93 (s, 2H), 5,60 (s, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,73 (s, 3H), ESIMS (MH)⁺ 493 (100%), 495 (30%).

Příklad D(l)

N-{3-[4'-amino-2'- (3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5']bithiazolyl-4-yl] -fenyl}acetamid

104 »» • 9 · • ·

9 9

999

99 • 9 · « • · 9

9 9 •9 9999

Anhydrid kyseliny octové (21,3 μΐ, 0,2250 mmol) se přidá do roztoku 4- (3-aminofenyl) -N²’- (3,4,5-trimethoxyfenyl) - [2,5'] bithiazolyl-2', 4'-diaminu (50,0 mg, 0,1125 mmol), připraveného způsobem popsaným v příkladu C(l), rozpuštěného v pyridinu (28,5 μΐ, 0,352 mmol), DMF (70 μΐ) a THF (700 μΐ) při teplotě -15°C (teplota lázně). Po 30 minutách se reakce utlumí MeOH (0,5 ml), reakční směs se zahustí a přečistí se preparativní HPLC s reverzní fází na C-18 koloně (gradientová eluce, 95% H20/0,l% TFA/CH3CN až 5% H2O/0,l% TFA/CH3CN) , za zisku 46 mg (82% výtěžek) N-[3-[4'-amino 2(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyljacetamidu.

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,97 (s, 1H) , 7,56 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,27 (s, 1H), .7,19 (s, 1H) , 6,55 (s, 2H) , 5,90-6,10 (bs, 1H) , 3,82 (s, 6H) , 3,78 (s, 3H), 2,14 (s, 3H) . ESIMS (MH⁺) : 498.

Analýza vypočtena pro: C23H23N5O4S2· (0, 5 H2O, 0,5 aceton): C, 54,93; H, 5,08; N, 13,08; S, 11,97. Zjištěno: C, 54,73; H, 4,80; N, 13,21; S, 11,98.

Sloučeniny podle příkladů způsobem analogickým způsobu

D(2) až D(57) se připravily podle příkladu D(l).

Příklad D(2)

N-{3- [4'-amino-2'- (3,4,5-trimethoxy-fenylamino) -[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-C-fenyl-methansulfonamid

9··4

^ΧΗ NMR (CDCI3) : δ 7,61 (s, 1Η) , 7,55 (d, J = 7,9 Hz, 1H) , 7,32 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,26-7,16 (m, 5H), 7,03 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,51 (s, 2H), 6,42 (s, 1H), 5,90-6,00 (bs, 2H), 4,26 (s, 2H), 3,78 (s, 6H), 3,74 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 610.

Analýza vypočtena pro: C28H27N5O5S3*0,3 H2O: C, 54,67; H, 4,52;

N, 11,39. Zjištěno: C, 54, 70; H, 4,52; N, 11,04.

Příklad D(3)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5*]bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-methansulfonamid

’Ή NMR (CDCI3) : δ 7,81 (s, 1H),.7,69 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,45 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 6, 73 (bs, 1H), 6, 70 (s, 2H), 3,92 (s, 6H), 3,89 (s, 3H), 3,12 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 534.

Analýza vypočtena pro: C22H23N5OsS3^eO, 9 TFA: C, 44,92; H, 3,79; N, 11,01; S, 15,12. Zjištěno: C. 44,94; H, 3,87; N, 11,12.

Příklad D(4)

Fenylester kyseliny {3-[4’-amino-2’-(3,4,5-trímethoxy-fenylamino)(2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-karbamové

106 • · · · · · * ·· · · • · · · · ···« • · · · · « A • · · · · · • · · ·· ·· ····

¹H NMR (CDCI3) : δ 8,04 (s, ÍH) , 7,64 (t. J = 7,2 Hz, ÍH), 7,467,38 (m, 5H), 7,28-7,18 (m, 4H), 7,14 (s, ÍH) , 7,05 (s, ÍH), 6,64 (s, 2H) , 6,09 (bs, ÍH), 3,91 (s, 6H), 3,87 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 576.

Analýza vypočtena pro: C28H₂5N5O5S₂*0,3 DMF: C, 58,08; H, 4,57;

N, 12,42; S, 10,73. Zjištěno: C, 58,33; H, 4,39; N, 11,53; S, 10,68.

Příklad D(5)

N-{3-[4' -amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-2-fenyl-acetamid

²Η NMR (CDCI3) :	δ 7	,89	(s,	ÍH), 7,64	(d,	J =	7,4	Hz, 1H), 7,47-
7,32 (m, 7H), 7	,14	(s,	ÍH)	, 7,10 (s,	ÍH)	, 6,	64	(s, 2H) , 6,06
(bs, 2H), 3,91	(s,	6H)	, 3,	87 (s, 3H)	, 3,	79	(s,	2H). ESIMS
(MH⁺) : 57 4 .
Analýza vypočte	na	pro:	C29H27N5O4S2: C,	, 60	,71;	H,	4,74; N, 12,21;

S, 11,18. Zjištěno: C, 60,88; H, 4, 78; N, 12,00; S, 11,14.

Příklad D(6)

Methylester kyseliny {3-[4'-amino-2’-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}karbamové

107

^XH NMR (CDCI3) : δ 8,14 (m, 3H), 7,34 (s, 1H), (bs, 1H), 4,12 (s, 6H) (MH⁺) : 514 .

(s, 1H), 7,82 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,59 6,90 (s, 1H), 6,85 (s, 2H), 6,40-6,20 , 3,78 (s, 3H), 2,14 (s, 3H). ESIMS

Analýza vypočtena pro C₂3H₂3N5O5S₂*0,35 H₂O: C, 53,13; H, 4,60;

N, 13,47; S, 12,34. Zjištěno: C, 53,10; H, 4,58; N, 13,34; S,

12,11.

Příklad D(7)

1-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-methyl-močovina

¹H NMR (CDCI3) : δ 8,63 (bs, 1H) , 7,90 (s, 1H) , 7,61 (s, 1H) , 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 6,75 (s, 2H), 6,00-6,10 (bs, 1H), 5,35 (bs, 1H), 3,87 (s, 6H), 3,81 (s, 3H), 2,80 (d, J = 4,3 Hz, 3H), ESIMS (MH⁺) : 513.

Analýza vypočtena pro: C₂3H24N6O4S₂*0, 4 H₂0: C, 53,14; H, 4,81;

N, 16,17; S, 12,34. Zjištěno: C, 53,15; H, 4,75; N, 16,12; S,

12,46.

108 • · » · ··· ·

Příklad D(8)

N-{3-[4'-amino-2' - (3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-propionamid

¹H NMR (CDCI3) : 58,27 (s, 1H), 7,85 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,59 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 6,84 (s, 2H), 6,20-6,35 (bs, 1H), 4,11 (s, 6H) , 4,07 (s, 3H), 2,64 (q, J = 7,6 Hz, 2H), 1,50 (t, J - 7,5 Hz,

3H) . ESIMS (MH⁺) : 512.

Analýza vypočtena pro: C24H25N5O4S2: C, 56,34; H, 4,93; N, 13,69; S, 12,54. Zjištěno: C, 56,22; H, 5,01; N, 13,48; S, 12,73.

Příklad D(9)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-isobutyramid

¹H NMR (CDCI3) : δ 9,16 (s, 1H) , 8,54 (s, 1H) , 8,06 (s, 1H) ,

7,57 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 7,53 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,27 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,77 (s, 2H), 6,00-6,20 (bs, 1H),

3,81 (s, 6H), 3,75 (s, 3H), 2,18 (m, 3H), 0,95 (d, J= 6,3 Hz,

109

6H) , ESIMS (MH⁺) : 540.

Analýza vypočtena pro C26H29NsO4S2*0,5 H2O: C, 56,91; H, 5,51; N, 12,76; S, 11,69. Zjištěno: C, 57,33; H, 5,57; N, 12,28; S, 11,64.

Příklad D(1O)

Isopropylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5'] bithiazolyl-4-yl] -fenyl}karbamové

^XH NMR (CDCI3)	: δ 7,93	(s,	1H) ,	7,60	(d,	J = 6,9 Hz	, 1H), 7,40
(m, 3H) , 7,13	(s, 1H),	6,	65 (s,	2H) ,	6,	62 (s, 1H) ,	6,08 (bs,
2H) , 5,06 (m,	J = 6,4	Hz,	1H) ,	3,92	(s,	6H), 3,87	(s, 3H),

1,33 (d, J = 6,4 Hz, 6H), ESIMS (MH⁺) : 542.

Analýza vypočtena pro C25H27N5O5S2: C, 55,44; H, 5,02; N, 12,93; S, 11,84. Zjištěno: C, 55,15; H, 5,14; N, 12,46; S, 11,75.

Příklad D(ll)

Kyselina 4-chlor-pyridin-2-karboxylová {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

O

110

HRFABMS: Vypočteno pro C27H23CIN6O4S2 (MH⁺) : 594,0911. Zjištěno: 594,0927. Analýza vypočtena pro C27H23CIN6O4S2: C, 54,94; H, 3,90; N, 14,12; S, 10,78. Zjištěno: C, 54,43; H, 3,87; N, 14,01; S, 10,92.

Příklad D(12)

Benzylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-karbamové

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,93 (s, 1H) , 7,61 (d, J = 7,0 Hz, 1H) , 7,40 (m, 7H), 7,12 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,64 (s, 2H), 6,07 (bs, 2H), 5,25 (s, 2H), 3,91 (s, 6H), 3,87 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 590.

Analýza vypočtena pro C29H27N5O5S2: C, 59, 07; H, 4,62; N, 11,88; S, 10,88. Zjištěno: C, 58,84; H, 4,64; N, 11,71; S, 11,07.

Příklad D(13)

N-{3-[4'-amino-2’-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-2,2,2-trifluoracetamid

^XH NMR (CDCI3) : S 8,14 (s, .lH), 7,96 (bs, 1H), 7,79 (d, J = 6,4

Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 6,65 (s, 2H) ,

111 • ···· ·· » «· ··

4 4 4 · 4 4 4 4*4

4 444 44 * *4 444 4 4 · ··· 4 ·· ·44 ·· «444

6,05 (bs, 2H), 3,92 (s, 6H), 3,87 (s, 3H) . ESIMS (MH⁺) : 552. HRMS (FAB), m/z Vypočteno pro C23H20F3N5O4S2 (MH⁺) : 552,0987. Zjištěno: 552,0981.

Příklad D(14)

N-{3- [4' -amino-2 '-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) -[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-2,2-difluor-acetamid

¹H NMR (CDCI3) : δ 8,15 (s, 1H), 7,98 (bs, 1H), 7,75 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,61 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,46 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 6,66 (s, 2H), 6,08 (bs, 2H), 3,93 (s, 6H), 3,89 (s, 3H), 3,52 (s, 1H), ESIMS (MH⁺) : 534.

HRMS (FAB), m/z Vypočteno pro C23H21F2N5O4S2 (M+Cs⁺) : 666,0057. Zjištěno: 666,0032.

Příklad D(15)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-2-fenoxy-acetamid

¹H NMR (CDCI3) : δ 8,27 (s, 1H) , 8,06 (s, 1H) , 7,63 (d, J - 7,8

112 ί

« · ·

Hz, 1Η), 7,51 (d, J= 8,0 Hz, 6,56 (s, 2H) , 6,01 (bs, 2H) , (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 590.

1H), 7,32 (m, 4,58 (s, 2H),

4H), 7,07 (s, 1H), 3,82 (s, 6H) , 3,78

Analýza vypočtena pro: C29H27N5O5S2· (0,7 H2O,

0,2 EtOAc): C,

57,73; H, 4,88; N, 11,30; S, 15,74. Zjištěno: C, 57,97; H, 4,59; N, 11,08; S, 10,33.

Příklad D(16)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-fenyl-propionamid

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,97 (s, 1H) , 7,63 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,40 (m, 3H), 7,12 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 6,64 (s, 2H), 6,07 (bs, 1H), 3,91 (s, 6H), 3,87 (s, 3H), 3,11 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 2, 72 (t, J = 7,5 Hz, 2H) . ESIMS (MH⁺) : 588. Analýza vypočtena pro: C3QH29N5O5S2: C, 61,31; H, 4,97; N, 11,92; S, 10,91. Zjištěno: C, 60,67; H, 5,09; N, 11,77; S,

10,69.

Příklad D(17)

Benzylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(2,4-dimethoxy-fenylamino)-[2,5' ]bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-karbamové

113

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,65 (s, 1H) , 7,48 (d, J = 9,4 Hz, 1H) , 7,37 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,16 (m, 7H), 6,85 (s, 1H), 6,54 (s, 1H) , 6,31 (m, 3H) , 6, 00-5,70 (bs, 2H), 5,00 (s, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,60 (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 560.

Analýza vypočtena pro C28H25NsO4S2*0,7 H2O: C, 59,14; H, 4,61; N, 12,32; S, 11,28. Zjištěno: C, 59,51; H, 4,41; N, 11,82; S, 10,90.

Příklad D(18)

Benzylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(2,5-dimethoxy-fenylamino)-[2,5'3bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-karbamové

^:H NMR (CDCI3) : δ 7,91 (s, 1H) , 7,65 (d, J = 9,4 Hz, 1H) , 7,37 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,16 (m, 7H), 6,85 (s, 1H), 6,54 (s, 1H) , 6,31 (m, 3H), 6,00-5,70 (bs, 2H), 5,00 (s, 2H), 3,65 (s, 6H), 3,60 (s, 3H) , ESIMS (MH⁺) : 560.

Analýza vypočtena pro C28H25N5O4S2: C, 60, 09; H, 4,50; N, 12,51;

S, 11,46. Zjištěno: C, 60,52; H, 4,64; N, 12,00; S, 10,96.

Příklad D(19)

114 • 44·· 4 · · »· · · ·· 4 4 · 44 · · · · • · 4·· · » · ··♦ 4 ·4 «44 ·· 4444

Benzylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(4-fenoxy-fenylamino)-[2,5' ]bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-karbamové

¹H NMR(CDC1₃): δ 7,90 (s, 1H) , 7,61 (d, J=7,4 Hz, 1H) , 7,46 (m, 10H), 7,11 (m, 8H) , 6,81 (s, 1H), 6,08 (bs, 2H), 5,25 (s, 2H), ESIMS (MH⁺) : 592.

Analýza vypočtena pro C32H25N5O3S2: C, 64,96 H, 4,26; N, 11,84; S, 10,84. Zjištěno: C, 64,68; H, 4,36; N, 11,58; S, 10,65.

Příklad D(20)

Benzylester kyseliny-3-(4’-amino-2'-fenylamino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)-fenyl]-karbamové

²Η NMR (CDCI3) : δ 7,81 (s, 1H) , 7,55 (d, J = 7,3 Hz, 1H) , 7,30 (m, 12H), 7,10 (m, 1H), 7,02 (s, 1H) , 6,68 (s, 1H) , 6,10-5,90 (bs, 2H), 5,15 (s, 2H), ESIMS (MH⁺) : 500.

HRMS (FAB), m/z Vypočteno pro C26H21N5O2S2 (MH⁺) : 500,1215.

Zjištěno: 500,1232.

Příklad D(21)

Kyselina benzofuran-2-karboxylová {3-[4'-amino-2’-(3,4,5115

Analýza vypočtena pro C30H25N5O5S2: C, 58,76; H, 4,36; N, 11,42; S, 10,46. Zjištěno: C, 58,74; H, 4,08; N, 11,46; S, 10,41.

Příklad D(22)

Naftalen-l-ylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}karbamové

Analýza vypočtena pro C32H27NsO5S2^e0,7 H2O: C, 60,21; H, 4,48; N, 10,97; S, 10,05. Zjištěno: C, 60,24; H, 4,31; N, 10,72; S, 10,03.

Příklad D(23)

1-R-fenyl-ethylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}karbamové

·-» · «

116

ESMS (MH⁺) : 604.

Analýza vypočtena pro C3oH29N50sS2*0,4 H2O: C, 58,98; H, 4,92; N, 11,46; S, 10,50. Zjištěno: C, 58,93; H, 4,90; N, 11,41; S, 10,27.

Příklad D(24)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-benzamid

ESMS (MH⁺) : 560.

Analýza vypočtena pro C28H25N5O4S2: C, 60, 09; H, 4,50; N, 12,51; S, 11,46. Zjištěno: C, 60,07; H, 4,54; N, 12,45; S, 11,42.

Příklad D(25)

Benzylester kyseliny {3-[4'-amino-2'-(4-sulfamoyl-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenylj-karbamové

Příklad D(26)

Methylester kyseliny 4-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) - [2,5'] bithiazolyl-4-yl] fenylkarbamoyloxymethyl} -benzoové

117

ESMS (MH⁺) : 648.

Analýza vypočtena pro C31H29N5O7S2: C, 57,48; H, 4,51; N, 10,81; S, 9,90. Zjištěno: C, 57,66; H, 4,52; N, 10,64; S, 10,08.

Příklad D(27)

N-{3-[4' -amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-isopropyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 602.

Analýza vypočtena pro C31H31N5O4S2: C, 61,88; H, 5,19; N, 11,64; S, 10,66. Zjištěno: C, 61,45; H, 5,38; N, 11,30; S, 10,38.

Příklad D(28)

N-{3-[4'-amino-2’-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-4-fluor-benzamid

···»

118 ♦ · ·· φ · « · • · · · · ♦ • · · · · · >

• · · 9 · ·

9 9 99 9 9 99 9 9

ESMS (ΜΗ⁺) : 57 8.

Analýza vypočtena pro C28H24NsO4S2*0, 3 H2O: C, 57,68; H, 4,25; N, 12,01; S, 11,00. Zjištěno: C, 57,64; H, 4,32; N, 11,79; S,

10,97.

Příklad D(29)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-brom-benzamid

ESMS (MH⁺) : 638/640.

Analýza vypočtena pro C28H24BrNsO4S2: C, 52,67; H, 3,79; N, 10,97; S, 10,04. Zjištěno: C, 52,49; H, 3,99; N, 10,36; S, 9,71.

Příklad D(30)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-4-chlor-3-methyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 608/610.

Analýza vypočtena pro C29H.26ClN5O4S2^e0, 6 H2O: C, 56,27; H, 4,43;

119 • ·*Φ ·· · ·· ·· * · · φφ φ φ · · • · · φ · · φ • * · · ···· · • · · · · · · • ·· φ · φ · · ··· ·

Ν, 11,32; S, 10,36. Zjištěno: C, 56,36; Η,4,38; Ν, 11,14; S, 10,14.

Příklad D(31)

Ν-{3-[4'-amino-2’-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']-bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3,4-dimethyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 588.

Příklad D(32)

N-{3-[4'-amino-2'-{3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-methoxy-4-methyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 604.

Analýza vypočtena pro C3oH29N504S2^eO, 6 H2O: C, 58,52; H, 5,07; N, 11,08; S, 10,14. Zjištěno: C, 58,48; H, 5,03; N, 10,75; S, 9,95.

Příklad D(33)

Kyselina 2,4-dimethyl-thiazol-5-karboxylová {3-[4'-amino-2'120

-(3, 4,5-trímethoxyfenylamino)-[2,5'Jbithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

ESMS (MH⁺) : 595.

Analýza vypočtena pro C27H26N6O4S2*0,2 H2O: C, 54,22; H, 4, 77; N, 13,08; S, 14,97. Zjištěno: C, 54,59; H, 4,89; N, 12,61; S, 14,73.

Přiklad D(34)

Kyselina 5-methyl-thiofen-2-karboxylová {3—[4 *-amino-2'-(3,4,5-trimethoxyfenylamino)-[2,5’]bíthiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

ESMS (MH⁺) : 580.

Analýza vypočtena pro C27H25N5O4S3: C, 55,94; H, 4,35; N, 12,08; S, 16,59. Zjištěno: C, 55,78; H, 4,26; N, 11,80; S, 16,58.

Příklad D(35)

Kyselina 5-chlor-thiofen-2-karboxylová {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxyfenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid ···· *· · ·· «· • · ·· · · · · • · · · · 4

ESMS (ΜΗ): 600/602.

Analýza vypočtena pro C26H22CIN5O4S2: C, 52,03; H, 3,69; N,

11,67; S, 16,03. Zjištěno: C, 51,61; H, 3,82; N, 11,46; S,

16,01.

Příklad D(36)

Kyselina 5-bromo-thiofen-2-karboxylová {3-[4’-amino-2’~(3,4,5-trimethoxyfenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

ESMS (MH⁺) : 644/646.

Analýza vypočtena pro C26H22BrN5O4S₃*0, 8 H2O: C, 47,39; H, 3,61; N, 10,63; S, 14,60. Zjištěno: C, 47,31; H, 3,51; N, 10,57; S, 14,70.

Příklad D(37)

Kyselina 5-brom-furan-2-karboxylová {3-[4'-amino-2’-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)[2,5’]bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

4·«· • · · · * · ·· ··· 4· ·»··

ESMS (ΜΗ⁺) : 628/630.

Analýza vypočtena pro C26H.22BrN5C>5S2^e0,5 H2O: C, 48,98; H, 3,64; N, 10,99; S, 10,06. Zjištěno: C, 48,98; H, 3,43; N, 10,79; S, 9,80.

Příklad D(38)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) [2,5' ] bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-methyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 574.

Analýza vypočtena pro C29H27N5O4S2»0,5 Η2θ·0,5 CH2CI2: C, 56, 67; H, 4,68; N, 11,20; S, 10,26. Zjištěno: C, 56,76;H, 4,39; N, 11,04; S, 10,12.

Příklad D{39)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)—[2,5’}— bithiazolyl-4-yl]-f enyl}-3-ethyl-benzamid

ESMS (MH⁺) : 588 • •«fc

123 • · ··· fcfc· ·*· * ·· ··· ·· ····

Analýza vypočtena pro C3oH29Ns04S2*0,4 H2O : C, 60,56; H, 5,05;

N, 11,77; S, 10,78. Zjištěno: C, 60,63; H, 4,87; N, 11,57; S,

10,65.

Příklad D(40)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl} -3-chlor-benzamid

ESMS (MH⁺) : 594/596.

Analýza vypočtena pro C28H24ClN5O4S₂*0,5 Η₂Ο·0,3 CH2C12: C, 54,07; H, 4,11; N, 11,14; S, 10,20. Zjištěno: C, 54,16; H, 3,88; N, 10,95; S, 10,10.

Příklad D(41)

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl} -3-methoxy-benzamid

ESMS (MH⁺) : 590.

Analýza vypočtena pro C29H₂7N5O5S2*O, 85 H2O : C, 57,57; H, 4,78;

N, 11,58; S, 10,60. Zjištěno: C, 57,62; H, 4,58; N, 11,40; S,

10,53.

···· ·· • · • ·

124 «

• *· • « ·* ·· «· ♦ 9 9 9

9 ·

9 9 9

9 9

9999

Příklad D(42)

Kyselina 5-methyl-thiazol-2-karboxylová {3-[4'-amino-2'(3,4,5-trimethoxyfenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

Analýza vypočtena pro C26H24N6O4S3: C, 53,78; H, 4,17; N, 14,47; S, 16,57. Zjištěno: C, 53,57; H, 4,24; N, 14,23; S, 16,47.

Příklad D(43)

Terc-butylester kyseliny [3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-f enyl amino)-[2,5' ]bithiazolyl-4-yl]-fenyl) karbamové

ESMS (MH⁺) : 556.

Analýza vypočtena pro C26H29NsO2S2*0,4 H2O: C, 55, 48; H, 35,34; N, 12,44; S, 11,39. Zjištěno: C, 55,33; H, 5,28; N, 12,55; S, 11,12.

Příklad D(44)

3-[3-benzyloxykarboxy-aminofenyl]-5-[2-[(3,4, 5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

^ΧΗ NMR (d6~aceton) : δ 3,7 (s, 3H) , 3,85 (s, 6H), 5,2 (s, 2H) , 6,95 (s br, 2H), 7,05 (s, 2H), 7,4 (m, 6H), 7,8 (d, 2H), 8,35 (s, ÍH), 8,95 (s br, ÍH), 9,7 (s br, ÍH) . ESIMS (MH⁺) : 575; (ΜΗ) : 573.

Příklad D(45)

3-[3-acetamidofenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino] -4-amino-5-thiazolyl]-l, 2,4-oxadiazol

¹H NMR (de-DMSO): δ 2,0 (s, 3H), 3,6 (s, 3H), 3,75 (s, 6H), 6,95 (s, 2H), 7,25 (s br, 2H), 7,4 (t, ÍH), 7,75 (m, 2H), 8,2 (s, ÍH), 10,1 (s br, ÍH), 10,7 (s br, ÍH), ESIMS (M+Na⁺) : 505; (M-H): 481.

Příklad D(46)

2H), 7,05 (s, 2H) , 7,6 (m, 4H) , 7,9 (m, 1H) , 8,05 (m, 2H) , 8,1

126

Ul fc · · · • · · · ·· ··· (m, 1H), 8,6 (m br, 1H) , 9,75 (s br, 1H) , ESIMS (MH⁺) : 545; (M+Na⁺) : 567; (M-H-) : 543.

Příklad D(47)

6,75 (s br, 2H), 6,85 (s, 2H), 7,2 <d, 2H), 7,3 (t, 1H), 7,65 (m, 3H), 7,95 (d, 1H), 8,35 (s br, 1H), 9,5 (s br, 2H), ESIMS (MH⁺) : 559; (M+Na⁺) : 581; (M-H) : 557 .

Analýza vypočtena pro C28H26N6O5S: C, 60,20; H, 4,69; N, 15,04; S, 5,74. Zjištěno: C, 60,34; H, 4,82; N, 14,39; S, 5,50.

Příklad D(48)

7,0 (s br, 2H), 7,1 (s, 2H), 7,15 (m, 1H), 7,45 (t, 1H), 7,55 (t, 1H), 7,65 (m, 2H), 7,9 (m, 1H) , 8,15 (m, 1H), 8,6 (m, 1H) ,

9,7 (d br, 2H) , ESIMS <MH⁺) : 575; (M+Na⁺) : 597; (M-H^_) : 573.

127 i

Analýza vypočtena pro C28H26N6O6S: C, 58,53; H, 4,56; N, 14,63; S, 5,58. Zjištěno: C, 58,89; H, 4,78; N, 13,88; S, 5,35.

Příklad D(49)

3-[3-(3-trifluormethylbenzamido)fenyl]-5-[2-[(3,4,5trimethoxyfenyl) amino]-4-amino-5-thiazolyl] -1,2, 4-oxadiazol

¹H NMR (d6~DMSO): δ 3,65 (s, 3H), 3,85 (s, 6H), 7,0 (s, 2H), 7,25 (s br, 2H), 7,55 (t, 1H), 7,8 (m, 2H), 8,0 (d, 1H), 8,1 (d, 1H), 8,32 (d, 1H), 8,35 (d, 1H), 8,45 (s br, 1H), 10,7 (s, 1H), 10,8 (s, 1H) . ESIMS (MH⁺): 613; (M+Na⁺) ; 635; (M-H): 611. Analýza vypočtena pro C28H23E3N6O5S: C, 54,90; H, 3,78; F, 9,30; N, 13,72; S, 5,23. Zjištěno: C, 53,55; H, 3,95; N, 12,24; S, 4,67.

Příklad D(50)

3-[3-(3-chlorbenzamido)fenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

128

• · · 9 • · · · ¹H NMR (d6-aceton) : δ 3,6 (s, 3H), 3, 75 (s, 6H) , 6,85 (s br, 2H), 6,95 (s, 2H), 7,45 (m, 3H), 7,75 (d, 1H), 7,9 (d, 1H), 8,0 (m, 2H), 8,45 (s, 1H), 9,6 (s br, 1H), 9,7 (s br, 1H), ESIMS (MH⁺) : 579/581; (M-H) : 577/579.

Analýza vypočtena pro C27H23CIN6O5S: C, 56,01; H, 4,00; Cl, 6,12; N, 14,51; S, 5,54. Zjištěno: C, 55,53; H, 4,23; Cl, 6,31; N, 14,00; S, 5,33.

Příklad D(51)

3-[3-(2-karboxy-5-methyl-thiazolyl)-aminofenyl]—5—[2—[(3,4,5 -trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

Ml NMR (dg-DMSO) : δ 2,6 (s, 3H) , 3,65 (s, 3H) , 3,85 (s, 6H) ,

7,0 (s, 2H), 7,38 (s br, 2H), 7,55 (t, 1H), 7,85 (m, 2H), 8,05 (m, 1H), 8,65 (m, 1H), 10,75 <s, (M+Na⁺) : 588; (M-H'): 564.

Analýza vypočtena pro C25H23N7O5S2: S, 11,34. Zjištěno: C, 50,46; H,

1H), 10,95 (s, 1H), ESIMS

C, 53,09; H, 4,10; N, 17,33; 4,39; N, 16,10; S, 10,47.

Příklad D(52)

3-[3-(3-chlorbenzamido)fenyl]-5-[2-(3-aminopyridyl)-4-amino-5-thiazolyl]-!, 2,4-oxadiazol

^τΗ NMR (de-DMSO) : δ 7,42 (m, 3H) , 7,57 (m, 2H) , 7,7 (m, 1H) ,

129

7,85 (m, 1H), 7,98 (m, 1H), 8,07 (m, 2H), 8,2 (m, 1H), 8,3 (m, 1H), 8,48 (m, 1H), 8,88 (d br, 1H) , 10,6 (s br, 1H) , 11,1 (s br, 1H) , ESIMS (MH⁺) : 490/492; (M-H^-) : 577/579.

Analýza vypočtena pro C23H16CIN2O2S: C, 56,38; H, 3,29; N,

20,01; S, 6,54. Zjištěno: C, 53,07; H, 3,41; N, 18,01; S,

5,90.

Příklad D(53)

Kyselina-2-methyl-thiazol-5-karboxylová {3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)- [2 ', 5 ' ]bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

ESMS (MH⁺) : 581.

Analýza vypočtena pro C26H24N6O4S3*0,5 H2O: C, 52,95; H, 4,27; N, 14,25; S, 16,31. Zjištěno: C, 52,99; H, 4,27; N, 14,21; S, 16,39.

Příklad D(54)

Kyselina 6-chlor-pyridin-2-karboxylová {3-[4'-amino 2'-(3,4,5-trimethoxyfenylamino)- [2 ' ,5 ' ]bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

ESMS (MH⁺) : 595/597.

Analýza vypočtena pro C27H23CIN6O4S2· (0,5 H2O, 0,5 CH2CI2) : C,

51,08; H, 3,90; N, 13,00; S, 9,92. Zjištěno: C, 51,04; H

130 . :

• · · · · « ·· ··· ·· ····

3,65; Ν, 12,54; S, 9,63.

Příklad D(55)

N-{3-[4’-amino-2'-{3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-2-chlor-isonikotinamid

HRFABMS: Vypočteno pro C27H23CIN6O4S2 (MNa⁺) : 617,0808. Zjištěno: 617,0832. Analýza vypočtena pro C27H23ClN₆O4S2*0,6 H2O; C, 53,52; H, 4,03; N, 13,87; S, 10,58. Zjištěno: C, 53,53; H, 3,85; N, 13,39; S, 10,42.

Příklad D(56)

N- (3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4 ]oxadiazol-3—yl}-fenyl)-3,5-dimethyl-benzamid, trifluoracetatová sůl

^TH NMR (CD3COCD3) : δ 9,65 (s, 1H) , 8,56 (s, 1H) , 8,13 (d, 1H) , 7,88 (d, 1H), 7,67 (s, 2H), 7,53 (m, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,07 (s, 3H), 3,86 (s, 6H), 3,75 (s, 3H), 2,39 (s, 6H), ESIMS:

(MH⁺) : 573; (MNa⁺) : 595; (MH~) : 571.

Příklad D(57)

N-(3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5• · · • ·

131 • · · · · 9

999 9 9 99 9 9 yl] -[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-fenyl)-2-methyl-benzamid, trifluoracetatováý sůl

^XH NMR (CD3COCD3: δ 9,58 (s, 1H) , 8,60 (s, 1H) , 8,08 (d, 1H) , 7,89 (d, 1H), 7,67 (s, 2H), 7,56 (m, 2H), 7,36 (m, 3H) , 7,07 (s, 3H), 3,86 (s, 6H), 3,73 (s, 3H), 2,49 (s, 3H). ESIMS: (MH⁺) : 559; (MNa⁺) : 581; (MH^-) : 557.

Příklad D(58):

N-{3-[4' -amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-4-hydroxy-3,5-dimethyl-benzamid

OMe

Roztok 4- (3-aminofenyl) -N²'- (3,4,5-trimethoxyfenyl) -[2,5']bithiazolyl-2',4'-diaminu (100 mg, 0,2195 mmol) z příkladu C(l), kysliny 4-hydroxy-3,5-dimethylbenzoové (38,3 mg, 0,2305 mmol), triethylaminu (64 μΐ, 0,4609 mmol) a DMF (1,0 ml) se zpracuje HATU (O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'tetramethyluroniumhexafluorfosfátem) (87,6 mg, 0,2305 mmol) a © · • · · · · · · ·· ·« • · · · · · · · * • · · · · · © • · · · · · · · ·

QO · · · · · ··· ljZ ··© * ·· ··· ·· ©··© směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Surový produkt se přečistí preparativní C-18 HPLC s reverzní fází (gradientově eluce, 95% H2O/0,l% TFA/CH3CN až 5% H2O/0,l% TFA/CH3CN), za zisku 33 mg (25% výtěžek) titulní sloučeniny ve formě žlutého prášku.

Analýza vypočtena pro C3oH29Ns05S2*0,5 H2O: C, 58,81; H, 4,94; N, 11,43 S, 14,36. Zjištěno: C, 58,81; H, 4,87; N, 11,50; S,

10,50. ESIMS (Mna⁺) : 626.

Následující příklady D(59) až D(61) se provedly analogicky jako příklad D(58).

Příklad D(59):

N-{3-[4'-amino-2'-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-[2,5' ]bithiazolyl-4-yl)-2-fenyl}-2-bicyklo[2.2. l]hept-2-yl-acetamid

Analýza vypočtena pro C3oH33N504S2«0,8 H2O: C, 59, 44; H, 5,75; N, 11,55; S, 10,58. Zjištěno: C, 59,43; H, 5,55; N, 11,40; S, 10,54. ESIMS (MH⁺) : 592.

Příklad D(60)

Kyselina chinolin-3-karboxylová {3-[4'-amino-2'-(3,4,5trimethoxy-f enylamino) -[2,5' ]bithiazolyl-4-yl]-f enyl}amid

O

133 ···· · * · ·· ·· « · · · · * · · • A · · · ··· ·«· · ·· ··· Μ ···»

Analýza vypočtena pro C3iH26N6O4S2»0,3 H2O: C, 60,43; H, 4,35; N, 13,64; S, 10,41. Zjištěno: C, 60,49; H, 4,36; N, 13,77; S, 10,40. ESIMS (MH⁺) : 611.

Příklad D(61):

Kyselina 5-fenyl-oxazol-4-karboxylová {3-[4'-amino-2'-(3,4,5 -trimethoxy-fenylamino)-{2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

OMe

ESIMS (MH^T) : 627.

Způsobem analogickým způsobu podle příkladu D(l) se připraví sloučeniny následujících příkladů D(62) až D(77).

Příklad D(62):

Kyselina hex-5-ynoová (3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxyfenylamino) thiazol-5-yl]- [1,2,4 ] oxadiazol-3-yl}-fenyl) -amid

^ΧΗ NMR (dg-aceton) : δ 9,72 (s, 1H) , 9,35 (s,lH), 8,39 (m, 1H),

7,92	(m, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,46 (m,	1H) ,	7,06 (s,	2H), 6,98
(s,	2H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H) ,	2,57	(s, 2H),	2,33 (t,
2H) ,	1,93 (m, 3H), ESIMS: (MH)⁺: 535.	(MH)	: 533.

Příklad D(63):

134

* · · · · · · • ·· ··· · · ····

Ν-[3-(5-{4-amino-2-[3-(2H-tetrazol-5-yl)-fenylamino]-thiazol—

5-yl]-[1,2,4]-oxadiazol-3-yl)fenyl]-3-chlorbenzamid

¹H-NMR (Dg-DMSO): δ 11,04 (s, 1H), 10,59 (s, 1H) , 8,46(s, 1H) , 8,17 (m, 1H), 8,11 (m, 2H), 7,98 (m, 1H), 7,83 (m, 2H), 7,69 (m, 2H), 7,56 (m, 3H), 7,42 (m, 3H), ESIMS: (MH)⁺: 557 (100%); 559 (30%) .

Příklad D(64):

N-(3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5yl]2,4]oxadiazol-3-yl}-4-chlor-fenyl)-3-chlorbenzamid

¹H-NMR (de-DMSO): δ 10,79 (s, 1H), 10,66 (s, 1H), 8,39 (m, 1H), 8,06 (m, 3H), 7,68 (m, 1H), 7,65 (m,2H), 7,33 (s, 2H), 7,02 (s, 2H), 3,81 (s, 6H), 3,65 (s, 3Ή), ESIMS: (MH)⁺: 613 (100%); 615 (60%).

Příklad D(65):

N-(3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5yi]-[1,2,4] oxadiazyl}-4-chlor-fenyl) -3-methoxy-benzamid i

a

·· 44

4 4 4

135

9· *·· ¹H-NMR (dg-DMSO) : δ 10,79 (s, 1Η) , 10,53 (s, 1H) , 8,40 (m, 1H) , 8,07 (m, 1H), 7,66 (m, 1H) , 7,55 (m, 3H), 7,33 (s, 2H) , 7,19 (m, 1H), 6,96 (s, 2H), 3,85 (s, 3H), 3,81 (s, 6H), 3,65 (s,

3H), ESIMS: (MH)⁺: 609 (100%), 611 (30%).

Příklad D(66): N- (5—{5— [4-amino-2-(3,4,5-trimethoxyfenylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4 ]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-chlor-benzamid

¹H-NMR (de-aceton) δ 9,73 (s, 1H) , 9,58 (s, 1H) , 8,73 (m, 1H), 8,07 (m, 1H), 8,02 (m, 1H), 7,65 (m, 2H), 7,42 (m, 1H), 7,06 (s, 2H), 6,98 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H).

ESIMS: (MH)⁺: 615 (100%), 617 (30%).

Příklad D(67):

N-(5-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenyl-l-amino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

136 • · · ·

¹H-NMR (dg- aceton): δ 9,71 (s, 1H) , 9,41 (s,lH), 8,73 (m, 1H) , 7,61 (m, 2H), 7,47 (m, 1H), 7,37 (m, 1H), 7,21 (m, 1H), 7,06 (s, 2H), 6,98 (s, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H), ESIMS: (MH)⁺: 611.

Příklad D(68):

N- (3 - {5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino) [1,2,4]oxadiazol-3-yl}-fenyl)-yl}-fenyl)-3-kyan-benzamid

^-NMR (dg-aceton) : δ 9,91 (s, 1H) , 9,73 (s, 1H) , 8,55 (m, 1H) , 8,45 (m, 1H), 8,38 (m, 1H), 8,13 (m, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,80 (m, 1H), 7,56(m, 1H), 7,07 (s, 2H), 7,00 (s,

2H), 3,86 (s, 6H), 3,73 (s, 3H). ESIMS: (MH)⁺: 570.

Příklad D(69):

N-(5—{5—[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl][1,2,4]oxadiazol-3-yl}-4-chlor-2-fluor-fenyl)-3-chlor-henzamid

¹H-NMR (dg-aceton): 59,73 (s, 1H), 9,63 (s, 1H), 8,74 (m, 1H), 8,07 (m, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,63 (m, 1H), 7,07 (s, 2H), 6,98 (s, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,73 (s, 3H).

ESIMS: (MH)⁺: 631 (100%), 633 (60%), 635 (10%).

Příklad D(70):

N-(5-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5137

-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-4-chlor-2-fluor-fenyl)-3-methoxybenzamid, TFA sůl

^-NMR (de-aceton) : δ 9,74 (s, 1H) , 9,45 (s, 1H) , 8,74 (m, 1H) , 7,61 (m, 2H), 1,46 (m, 1H), 7,19 (m, 1H), 7,06 (s, 3H) , 6,97 (s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,85 (s, 6H), 3,72 (s, 3H).

ESIMS: (MH)⁺: 627 (100%), 629 (30%).

Příklad D(71): N-(3—[5—[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxyfenylamino) -thiazol-5-yl] [1,2,4] oxadiazol-3-yl-fenyl) -3-karboxyimido-benzamid

¹H-NMR (de-aceton): δ 9,91 (s, 1H) , 9,73 (s, 1H) , 8,58 (m, 2H) , 8,21 (m, 1H), 8,15 (m, 2H), 7,85 (m, 1H), 7,66 (m, 2H), 7,57 (m, 1H), 7,06 (s, 2H),7,00 (s, 2H), 3,85 (s, 6H) , 3,72 (s,

3Ή), ESIMS: (MH)⁺: 588.

Příklad D (72) :

3-[2-fluor-5-[(3-methoxybenzoyl)amino]-fenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

O

138 ♦ ♦·· ·· « ·· ·· φ · · ·Φ φ « · φ

Φ · · · Φ · 9 • »· 99 9 99 99 9 9 ^ΧΗ NMR (de-DMSO): δ 3,7 (s, 3Η), 3,85 (s, 6Η), 3,9 (s, 3Η),

7,05 (s, 2Η) , 7,25 (rn, 1Η) , 7,6 (m, 6Η), 8,15 (m, 1Η) , 8,55 (m, 1Η), 10,5 (s, 1Η), 10,85 (s, 1Η). ESIMS [ΜΗ]⁺: 593. Analýza vypočtená: C, 56,75; Η, 4,25; F, 3,21, Ν, 14,18; S,

5,41. Zjištěno: C, 56,55; H, 4,48, N, 13,20; S, 5,39.

Příklad D(73):

3-[3-(3-chlorbenzoyl)amino)-6-fluor-fenyl]-5-[2-[(3,4,5 -trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

^XH NMR (de-DMSO) : δ 3,7 (s, 3H) , 3,85 (s, 6H), 6,95 (s, 2H), 7,05 (s, 2H), 7,35 (t, 1H), 7,6 (m, 2H), 8,0 (m,2H), 8,15 (m, 1H), 8,55 (m, 1H), 9,7 (s br, 1H), 9,85 (s br, 1H). ESIMS [MH]⁺: 597, 599.

Příklad D(74):

3-[3-[(3-methoxybenzoyl)amino]-6-methyl-fenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

O *··· *· · 9 9 99 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 ·

9 9 9 9 9 9 9 9 9 130 · · 9 9 9 9 9 9

U·? 999 9 99 999 99 9999 ²Η NMR (MeOD): δ 2,6 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,85 (s, 6H) , 3,9 (s, 3H), 7,0 (s, 2H), 7,15 (m, 1H) , 7,35 (d, 1H) , 7,45 (t,

1H), 7,55 (m, 2H), 7,8 (m, 1H), 8,35 (d, 1H) , ESIMS [MH]⁺: 589. Analýza vypočtena pro CssHžsNgOeS: C, 59,17; H, 4,79, N, 14,28;

S, 5,45. Zjištěno: C, 60,07; H, 5,30, N, 13,69; S, 5,07.

Příklad D(75):

3-[3-[(3-chlorbenzoyl)amino]-6-methyl-fenyl]-5-[2-[(3,4,5

-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

^ΧΗ NMR (MeOD): δ 2,6 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,85 (s, 6H) , 7,0 (s, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,57 (m, 2H), 7,8 (m, 1H), 7,9 (m, 1H), 8,0 (m, 1H), 8,35 (d, 1H), ESIMS [MH]⁺: 593, 595.

Analýza vypočtena pro C28H25CIN6O5S: C, 56,71; H, 4,25, N,

14,17; S, 5,41. Zjištěno: C, 56,66; H, 4,38, N, 13,54; S,

4,89.

Příklad D(76):

3- [3- [ (4-morfolinylmethyl) benzoyl]amino]fenyl]-5-[2-[ (3,4,5-trimethoxyfenyl) amino]-4-amino-5-thiazolyl]-l,2, 4-oxadiazol

O

• 4 ·· ·· • · « ·

4 4

140

4 4

4444 ^ΧΗ NMR (de-aceton): δ 2,6 (m, 4Η), 3,7 (s, 2Η), 3,8 (m, 4Η), 3,9 (s, 3Η), 4,0 (s, 6Η), 7,1 (s, 2H), 7,2 (s, 2H) , 7,65 (m, 3H), 8,0 (d br, ÍH), 8,15 (d, 2H) , 8,3 (d br, ÍH), 9,8

Příklad D(77):

3- [3- [4—[ (4-methyl-l-piperazinyl)methyl]-benzoyl]amino]fenyl]-5-[2-[(3,4,5-trimethoxyfenyl)amino]-4-amino-5-thiazolyl]-1,2,4-oxadiazol

H NMR (d6-aceton): δ 2,6 (m br, 8H)	, 3,5 (s br,	2H) , 3,6 (s
3H), 3,7 (s, 6H), 6,8 (s, 2H) , 6,9	(s, 2H) , 7,4	(m, 3H), 7,'
(m, ÍH), 7,9 (d, 2H), 8,0 (m, ÍH),	8,4 (m, ÍH),	9,55 (s br,
ÍH), 9,65 {s br, 1H). ESIMS [MH]⁺:	657.

Příklad D(78)

Příklad E(1)

Terc-butylester kyseliny {3-[5-(2,4-diaminothiazol-5-yl)141

Roztok 1,3 mmol terc-butylesteru kyseliny (3-{5-[4-amino-2-(trityl-amino)-thiazol-5-yl][l,2,4]oxadiazol-3-yl}-fenyl)-karbamové, připraveného způsobem popsaným v přikladu B(l), rozpuštěného v 8 ml směs 1:1 kyselina mravenčí/diethylether, se misí při teplotě místnosti do vyčerpání výchozího materiálu podle TLC (obvykle 5 hodin). Ze získaného světle žlutého roztoku se odstraní všechno rozpouštědlo ve vakuu a materiál se opatrně zahřívá ve vysokém vakuu pro odstranění zbytkové kyseliny mravenčí a potom se rekrystalizuje z methylenchloridu, za zisku 255 mg titulní sloučeniny (53% výtěžek) ve formě světle žlutého prášku.

¹H NMR (DMSO-de) : δ 9,54	(s, 1H), 8,177 (s, 1H),	8,07	(S,	2H) ,
7,65-7,59 (m, 3H), 7,39	(t, 1H), 7,12 (bs, 2H),	1,49	(s,	9H) ,
ESMS (MH)⁺: 375.
Analýza vypočtena pro C19H15CI6O2S3: C, 46,48; H,	3,08;	N,	17,12;

S, 19,59. Zjištěno: C, 46,47; H, 3,21; N, 17,10; S, 19,43.

Příklad E(2)

N- [3- (-2', 4 ' -diamino- [2,5 ' ]bithiazolyl-4-yl) -fenyl] benzamid

Roztok amidu kyseliny 4-amino-2-(trityl-amino)-thiazol-5-karbothioové (304 mg, 0,73 mmol) a N-(3-bromoacetyl-fehyl)-benzamidu (300 mg, 0,94 mmol) v MeOH (30 ml) se mísí při

4444 ·· · « · ·· 4*44 • 4 444 44 4

4 444 *444 4

142 · · 444 444

444 4 ·· 444 44 4444 teplotě m ístnosti přes noc. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v EtOAc (100 ml). EtOAc roztok se promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (3 x 25ml). Organická vrstva se separuje, suší se přes MgSOí a zahustí se. Přečištění zbytku se provede chromatografií na silikagelu (75% EtOAc/DCM) za zisku N-[3-(2',4'-diamino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)-fenyl]-benzamidu (110 mg, 39% výtěžek).

T.t. 159-163 °C (rozklad). ¹H NMR (CD₃OD) : δ 8,33 (s, 1H) ,

8,00-7,97 (m, 2H), 7,75-7,71 (m, 2H), 7,64-7,52 (m, 3H), 7,43 (t, J = 7,74 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H). FABMS vypočteno pro C19H15N5OS2: 394,0796. Zjištěno: 394,0802.

Příklad E(3)

N- [3—]—2',4'-diamino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)fenyl]-5-ehlorthiofen-2-karboxamid

(ii) ·

Stupeň (i): Oxalylchloride (4,9 ml, 56,00 mmol) se přidá do roztoku kyseliny 5-chlor-thiofen-2-karboxylové (4,78 g, 29,40 mmol), DMF (0,25 ml) a CH2CI2 (50 ml) při teplotě mnístnosti.

Po míšení přes noc se reakční směs zbaví rozpouštědla a nezreagovaného oxalylchoridu ve vakuu za zisku bezbarvého oleje. Olej se rozpustí v CH2CI2 (50 ml) a zpracuje se 3-aminoacetofenonem (3,78 g, 28,00 mmol) a triethylaminem (4,68 ml, 33,60 mmol). Po míšení po dobu 1 hodiny se směs naředi 800 mi ethylacetátu, extrahuje se IN HCl, IN NaHCO3, solankou a suší se přes MgSO4. Získaný roztok se zahustíve vakuu na objem fcfc 4 fc · · • · fc

143 * fcfcfc • ·· fcfc fcfc fc • · * fc • fcfc fcfc fcfcfcfc

100 ml, za zisku kyseliny 5-chlor-thiofen-2-karboxylové (3-acetylfenyl)-amidu ve formě bílého prášku, který se odebere filtrací a suší se ve vysokém vakuu (8,12 g, 81 % výtěžek).

Stupeň (ii): Roztok 5-chlor-thiofen-2-karboxylové kyseliny (3-acetyl-5-fenyl)-amidu (2,0 g, 7,17 mmol) a CuBr2 (3,19 g,

14,34 mmol) v EtOAc (100 ml) se zahřeje na teplotu zpětného toku. Pokračování reakce se sleduje každých 30 minut TLC. Po

2,5 hodinách je výchozí materiál stále ještě přítomen, proto se přidá další CuBr2 (0,75 g). Po 1,5 hodině TLC ukáže, že všechen výchozí materiál je spotřebován. Objem reakční směsi se sníží na 50% ve vakuu, směs se naředí CH2CI2 (50 ml) , přefiltruje se přes vrstvu oxidu křemičitého, která se vypláchne 40% ethylacetátem/CH2Cl2 (300 ml). Získaný roztok se zahustí ve vakuu za zisku bezbarvého oleje, který se odebere v CH2CI2 (2 mlú a vysráží se diethyletherem (10 ml) za zisku 5chlor-thiofen-2-karboxylové kyseliny (3-bromacetyl-fenyl)amidu (2,06 g, 80% výtěžek) ve formě bílého prášku.

Titulní sloučenina se připraví následujícím způsobem. DO roztoku 1,07 g (3,0 mmol) amidu kyseliny 4-amino-2-(trityl-amino)-thiazol-5-karbothioové (připraveného analogicky jako výchozí materiál ve stuppni (ii) příkladu A(I) rozpuštěného v DMF (12 ml), se přidá-5-chlor-thiofene-2-karboxylová kyselina (3-bromoacetylfenyl)-amid. Po 15 minutách se reakční směs naředí MeOH (12 ml), zpracuje se TFA (4 ml) a mísí se přes noc. Získaný roztok se zahustí ve vakuu, naředí se ethylacetátem, extrahuje se 1M NaHCO3, solankou, suší se přes MgSOí, zahustí se a přečistí se rychlou chromatografií (gradientová eluce: 5% CH3CN/CH2CI2 až 30% CH3CN/CH2CI2) , za zisku 0,47 g (36% výtěžek) N-[3-(2’,4'-diamino[2,5' ]bithiazolyl-4-yl)fenyl]-5-chlorthiofen-2-karboxamidu.

144 ··*· ·* · «» ·« • · · ·* · » · • · * · · · « · ·*· * 99 ··« «» «··· ^XH NMR (DMSO-de) : δ 10,41 (s, 1H) , 8,23 (s, 1H) , 7,95 (d, J = 4,1 Hz, 2H), 7,73-7,65 (m, 4H), 7,48 (s, 1H), 7,41 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 6,90 (s, 2H),

Příklad E(4) (2',4’-diamino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)-fenyl-methanon

Titulní sloučenina se připraví způsobem analogickým s příkladem E(3).

³H NMR (CDsOD) : δ 8,02-7,99 (m, 2H) , 7,94 (s, 1H), 7,76 (s, NHJ, 7,70-7,64 (m, 1H) , 7,57-7,52 (m, 2H), 6,85 (bs, NH₂) . FABMS (MH⁺) : 303. FABMS vypočteno pro C13H10N4OS2 (MNa+) : 325,0194. Zjištěno: 325,0182.

Příklad F(l)

Kyselina 5-chlor-thiofen-2-karboxylová [-3-[4'-amino-2'-(3-methyl-ureido)[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-amid

Roztok N-[3-(2',4'-diamino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)fenyl]-5-chlor-thiofen-2-karboxamidu (0,2307 mmol) (připraveného způsobem podle příkladu E(3), rozpuštěného v bezvodém THF (5,0 ml) a bezvodém N-methylpyrolidinonu (1,0 ml) při -78°C, se zpracuje fenyllithiem (0,2307 mmol) a potom methylisokyanatanem (0,3461 mmol). Po 5 minutách se pomalu • fcfcfcfc fc· fc

9 9 • 9

99 • 9 9 9

9 9

145 • ·

99» 9

9

9» fcfcfcfc přidá druhý podíl fenyllithia (0,2307 mmol). Po míšení po dobu dalších 15 minut se reakce utlumí kyselinou octovou (0,6921 mmol) a methanolem (0,5 ml), zahustí se a přečistí se HPLC s reverzní fází. Hlavní složka se odebere, rozpustí se v ethylacetátu, extrahuje se NaHCCb, solankou, suší se přes MgSC>4, zahustí se do vzniku sraženiny a přefiltruje se. Hmotnost získaného světle žlutého prášku po sušení ve vysokém vakuu je 46 mg (41 % výtěžek).

ESMS (MH⁺) : 491/493.

Analýza vypočítána pro C19H15CIN6O2S3: C, 46,48; H, 3,08; N, 17,12; S, 19,59. Zjištěno: C, 46,47; H, 3,21; N, 17,10; S, 19,43.

Analogicky s příkladem F(l) se provedly následující příklady F(2) až F(15).

Příklad F(2)

N-[3-(2’-acetylamino-4'-amino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)fenyl]-5chlor-thiofen-2-karboxamid

ESMS (MH⁺) : 476/478.

Analýza vypočtena pro C19H14N5O2S3: C, 47, 94; H, 2,96; N, 14,17; S, 19,46. Zjištěno: C, 47,66; H, 3,39; N, 13,87; S, 19,21.

Příklad F(3)

Methylester kyseliny (4'-amino-4-{-3-[(5-chlor-thiofen-2- karbonyl) -amino]-fenyl}- [2,5' ] bithiazolyl-2 ' -yl) -karbamové

O

146

• «···		··
·· ·	•	•	··	•	•	• ·
• ·	•	•	•	>	•
• ·	•	•	•	•	•	•
··· ·		»·	···		·*	··*·

ESMS (MH⁺) : 492/494.

Příklad F(4)

N-{3-[5- (2-acetylamino-4-amino-thiazol-5-yl) -[1,2,4]oxadiazol-3yl]-fenyl}-3-chlor-benzamid .NH.

Η N—

^XH NMR (CD₃COCD/DMSO-d₆: δ 10,55 (s, 1H) , 8,60 (m, 1H) , 8,20 (m, 2H), 8,15 (m, 1H), 8,19 (m, 1H), 7,66-7,50 (m, 4H) , 7,12 (s,

2H) , 2,22 (s, 3H) , ESIMS: (MNa⁺) : 477; (MH) : 453.

Příklad F(5)

Kyselina thiofen-2-karboxylová (4-amino-5-{-3-[3-(3-chlor-benzoylamino)-fenyl][1,2,4 ] oxadiazol-5-yl}-thiazol-2-yl)-amid

O ^XH NMR (DMSO-de) : δ 13,19 (s, 1H) , 10,60 (s, 1H) , 8,52 (s, 1H) , 8,32 (m, 1H), 8,09 7,88 (m, SH) , 7,72-7,56 (m, 3H) , 7,29 (m, 1H) , 7,22 (s, 2H) , ESIMS: (MH⁺) : 523; (MNa⁺) : 545; (MH^-} : 521.

Příklad F(6)

N-{3-[-5-(4-amino-2-propionylamino-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-fenyl}-3-chlor-benzamid _Λ y^NH2

147

^ΧΗ NMR (DMSO-de) : δ	(m,	1H), 7,85	(m,	1H), 7,70	(m,	1H) ,	7,67-
7,55 (m, 2H), 7,15	(s,	2H), 2,46	(g.	2H), 1,09	(t,	3H) .	ESIMS:
(Mna⁺) : 4 91; (MH) :	467

Příklad F(7)

N-{3-[-5-(4-amino-2-benzoylamino-thiazol-5-yl>—[1,2,4]— oxadiazol-3-yl]-fenyl}-3-chlor-benzamid

³H NMR (DMSO-de) : δ 13,08 (s, 1H) , 10,57 (s, 1H), 8,50 (s, 1H) , 8,43-8,10 (m, 4H), 8,07 (m, 1H), 7,97 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 7,71-7,52 (m, 6H), 7,14 (s, 2H), ESIMS: (MH⁺) : 517; (MNa⁺) :

539; (MH“) : 515.

Příklad F(8)

N-(3-{-5-[4-amino-2-(3-methyl-ureido)-thiazol-5-yl][1,2,4]oxadiazol-3-yl}-fenyl)-3-methyl-benzamid

Analýza vypočtena pro C21H19N7O3S: C, 56,11; H, 4,26; N, 21,81;

S, 7,13. Zjištěno: C, 55,97; H, 4,39; N, 21,54; S, 6;89.

148

Příklad F(9)

N- [3- (-2'-acetylamino-4'-amino-[2,5']bithiazolyl-4-yl)-fenyl] benzamid

^τΗ NMR (CD₃OD) : δ 8,27-8,24 (m, 1H), 7,89-7,85 (m, 2H) , 7,677,61 (m, 2H), 7,51-7,31 (m, SH), 2,14 (s, 3H), ESIMS (MH⁺) : 436; (M-H): 434.

Příklad F(10): N-{3-[4'-amino-2'-(3-methyl-ureido)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-chlor-benzamid

Analýza vypočtena pro C2iHi7ClN6O3S2*l, 0 H2O: C, 50,14; H, 3,81; N, 16,71; S, 12,75. Zjištěno: C, 51,12; H, 3,64; N, 16,96; S, 12,87. ESIMS (MH⁺) : 485/487.

Příklad F(11):

N- {-3- [4 ' -amino-2 ' - (3-methyl-ureido) -[2,5'] bithiazolyl-4-yl] -fenyl}-3-methoxy-benzamid • · · ·

Analýza vypočtena pro: C₂2H₂oN603S₂*0,7 H₂0: C, 53,58; H, 4,37; N, 17,04; S, 13,00. Zjištěno: C, 53,60; H, 4,34; N, 17,04; S, 12,93. ESIMS (MH^-) : 479.

Příklad F(12):

N-(3-{5-[4-amino-2-(3-fenyl-ureido)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-fenyl)-3-methyl-benzamid

Analýza vypočtena pro: C26H21N7O3S: C, 61,04; H, 4,14; N, 19,17; S, 6,27. Zjištěno: C, 60,78; H, 4,18; N, 19,05; S, 6,08. ESIMS (MH⁺) : 512.

Příklad F(13):

N-(3-{5-[4-amino-2-(3-isopropyl-ureido)-thiazol-5-yl]—[1,2,4]— oxadiazol-3-yl}-fenyl)-3-methyl-benzamid

Analýza vypočtena pro: C23H23N7O3S: C, 57,85; H, 4,85; N, 20,53;

/

150

S, 6,71. Zjištěno: C, 57,65; H, 4,97; N, 20,47; S, 6,64. ESIMS (MH⁺) : 478 .

Příklad F(14):

N- (3-{5-[4-amino-2-(3-benzyl-ureido)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-fenyl)-3-methyl-benzamid

Analýza vypočtena pro: C27H23N7O3S*0,9 H2O: C, 59, 85; H, 4,61; N, 18,10; S, 5,92. Zjištěno: C, 59,86; H. 4,55; N, 17,86; S,

5,78. ESIMS (MH⁺) : 526.

Příklad F(15):

N-{-3-[5-(4-amino-2-methansulfonylamino-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-fenyl·}-3-methyl-benzamid

Příklad F(16):

N- { 4'-amino-4-benzoyl- [2,5'] bithiazolyl-2' -yl) -acetamid

151 • · · ^ΧΗ NMR (CD3OD) : δ 6,81-6,69 (m, 2Η) , 6,41-6,18 (m, 3Η) , 6,075,91 (m, 1Η) , 0,93 (s, 3H) .

FABMS vypočteno pro CisHizNíOsSžNa: 367, 0299. Zjištěno: 367,0991.

Příklad G(l)

5-pyridin-2-yl-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

3,4,5-trimethoxyfenylisothiokynatan (250 mg, 1,11 mmol, 1 ekv.) a kyanamid (56 mg, 1,33 mmol, 1,2 ekv.) se odeberou v acetonitrilu-terc-butanolu (1:1, 10 ml) při teplotě 23 °C. Do této směsi se přidá KO-terc-Bu (286 mg, 2,55 mmol, 2,3 ekv.) a 2-chlormethylpyridin, hydrochlorid (182 mg, 1,11 mmol, 1,00 ekv.). Reakční směs se mísí po dobu 1,5 hodiny při teplotě 23 °C. Směs se naředí vodou (20 ml) a bílý pevný materiál se přefiltruje, promyje se etherem a suší se (257 mg). Suchý zbytek (60 mg, 0,167 mmol, 1,00 ekv.) se rozpustí v THF (3 ml), ochladí se na teplotu-78 °C a zpracuje se n-butyllithiem (0,261 ml, 1,6 M, 2,5 ekv.). Směs se potom nechá zahřát na teplotu 23 °C, reakce se utlumí nasyceným hydrogenuhličitanem sodným a organický materiál se extrahuje do ethylacetátu. Koncentrovaný zbytek se přečistí chromatografií na silikagelu (ethylacetat/hexan: 1:1, 48,3 mg, 80%).

MS (FAB) [m+]/z Vypočteno: 359. Zjištěno: 359. MS (FAB) [m-]/z Vypočteno: 357. Zjištěno: 357.

Analýza vypočtena: C, 56,97; H, 5,06; N, 15,63; S, 8,95. Zjištěno: C, 56,18; H, 5,10; N, 15,31; S, 8,68.

Následující příklady G(2) až G(9) se provedly podobně jako

152 i

příklad G(l).

Příklad G(2)

N²-fenyl-5-pyridin-2-yl-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 269. Zjištěno: 269.

Analýza vypočtená: C, 62,66; H, 4,51; N, 20,88; S, 11,95. Zjištěno: C, 62,71 ; H, 4,46; N, 20,76; S, 11,91.

Příklad G(3)

N²-(2,3-dihydro-benzo[1,4]dioxin-6-yl)-5-pyridin-2-yl-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 327. Analýza vypočtená: C, 58,88; H, Zjištěno: C, 59,00; H, 4,29; N,

Zjištěno: 327.

4,32; N, 17,17; S, 9,82. 16,92; S, 9,58.

Příklad G(4)

N²-(3,4-dimethoxy-fenyl)-5-pyridin-2-yl-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 329. Zjištěno: 329.

• · 0 ·

0 00 00 00 0 0*00 0 0 00 • 0 000 00 · • ί *·· ·*··»* 153 ··· ♦ ·· ··· ·· ····

Analýza vypočtená: C, 58,52; H, 4,91; N, 17,06; S, 9,76.

Zjištěno: C, 58,43; H, 4,89; N, 17,03; S, 9,67.

Příklad G(5)

5-chinolin-2-yl-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 408. Analýza vypočtená: C, 61,75; H,

Zjištěno: 408.

4,94; N, 13,72; S, 7,85.

Zjištěno: C, 61,96; H, 4,80; N,

13,05; S, 7,54.

Příklad G(6)

³H NMR (300 Mhz, CDCla) : δ 7,35 (t, 1H), 6,98 (d, 1H) , 6,76 (d, 1H), 6,62 (s, 2H), 3,85 (s, 6H), 3,82 (s, 3H). MS (FAB) [m+H]/z vypočteno: 437. Zjištěno: 438.

Analýza vypočtená: C, 46,69; H. 3,92; N, 12,81; S, 7,33. Zjištěno: C, 46,66; H, 3,84; N, 12,68; S, 7,25.

Příklad G(7)

5-(5-thiofen-3-yl-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-N-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 431. Analýza vypočtená: C, 50,10; H, Zjištěno: C, 50,45; H. 3,96; N,

Zjištěno: 431. 3,97; N, 16,23; S, 15,31; S, 14,46.

14,86.

Příklad G(8)

4-{4-amino-5-[1-(4-chlor-benzyl)-lH-imidazol-2-yl]-thiazol-2-ylamino}-benzensulfonamid

Příklad G(9)

NMR (DMSO-dg) : δ 8,35 (s, 1H) , 8,02 (d, J = 6,5 Hz, 1H) , 7,90 (d, J= 6,5 Hz, 1H), 7,72 (m, 4H), 7,64 (br, 1H), 7,22 (br, NH₂) .

Příklad H(l)

4-(4'-amino-4-hydroxy-{2,5']bithiazolyl-2'-ylamiňó benzensulfonamid

O O

OH • · 4 4 ·« 4 44 4.4

4 4444 · 4 4 4

4 4·· · · 4

1« * · » k · ·

155 ··· * «· ··· ·· ····

Titulní sloučenina tohoto příkladu a příkladů H(2) až H(6) se připraví podobně jako sloučenina připravená v příkladu A(l) z 2-arylamino-4-amino-thiazol-5-karbothioamidů a a-bromesterů, a-bromlaktonů nebo a-bromnitrilů.

²Η NMR {DMSO-de: δ 7,88 (s, 4H), 7,39 (s, 1H), ESIMS (MH⁺) : 370; (M-H): 368.

Příklad H(2)

4-(4'-amino-4-hydroxy-5-(4-hydroxy-fenyl)-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-benzensulfonamid

H NMR (DMSO-de): δ 9,52 (s, 1H) , 7,83 (m, 4H) , 7,32, (s, 2H) ,

7,06 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,42 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 5,38 (s, 1H) , ESIMS (MH⁺) : 462.

Analýza vypočtena pro Ci8Hi5N5O₄S₃»0,2 Η₂0·0,2 Et₂O: C, 47,04; H, 3,65; N, 14,59; S, 20,04. Zjištěno: C, 46,78; H, 3,59; N, 14,36; S, 20,73.

Příklad H(3)

4'-amino-2'-(4-dimethylamino-fenylamino)-5-(2-hydroxy-fenyl)[2,5']bithiazoly-4-ol

H

156

^ΧΗ NMR (DMSO-de): δ 7,30 (m, 2H) , 7,04 (m, 2H) , 6,68 (m, 4H) , 2,88 (s, 6H) . ESIMS (MH⁺) : 426; (M-H): 424.

Příklad H(4)

4-[4'-amino-4-hydroxy-5-(2-hydroxy-fenyl)-[2,5']bithiazoly-2'ylamino]-benzensulfonamid

^XH NMR (CD₃OD) : δ 7,82 (m, 4H) , 7,02 (m, 2H) , 6,62 (m, 2H) . ESIMS (MH⁺) : 462; (M-H): 460.

Příklad H(5)

4- [4' -amino-4-hydroxy-5- (2-hydroxy-ethyl) -3'H-l'- [2,5]bithiazolyl-2’-ylamino]benzensulfonamid

^XH NMR (DMSO-de): δ 7,83 (s, 4H) , 4,72 (m, 1H), 4,26 (m, 1H) , 3,52 (m, 2H) , 2,30 (m, 1H), 1,78 (m, 1H) . ESIMS (MH⁺) : 414; (ΜΗ)’: 412.

Analýza vypočtena pro C14H15N5O4S3: C, 40, 67; H, 3,66; N, 16,94; S, 23,26. Zjištěno: C, 40,81; H, 3,76; N, 16,76; S, 23,02.

Příklad H(6)

4-(4,4'-diamino-[2,5']bithiazolyl-2'-ylamino)-benzensulfonamid

157 « * • » · ♦ » ····

^ΧΗ NMR (DMSO-de) : δ 11,0 (s, NH) , 8,12 (s, Η) , 7,80 (m, 4H) , 7,32 (s, NH₂), 7,08 (br s, NH₂) , 7,02 (s, NH₂) . ESIMS (MH⁺) : 369; (M-H): 367.

Příklad 1(1)

S-5-(4-benzyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N²-(3,4,5-trimethoxylfenyl)-thiazol-2,4-diamin

Směs 4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5karbonitrilu (153 mg, 0,5 mmol), 2(S)-amino-3-fenyl-propan-1olu (84 mg, 0,55 mmol) a katalytického množství suchého ZnCl₂ v chlorbenzenu (15ml) se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 4 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za redukovaného tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje se 0,1 N HC1, solankou a suší se MgSOí. Produkt (53 mg) se získá po přečištění chromatografií na oxidu křemičitém (hexany/ethylacetát = 1/1).

^ΧΗ NMR (CDC1₃) : δ 7,33-7,22 (m, 5H) , 6,58	(s, 2H), 4,50 (	m,
ÍH), 4,24 (t,	J = 9,0 Hz, ÍH),	4,01	(t, J	= 9,0 Hz, ÍH) ,	3,86
(8, 6H), 3,82	(s, 3H), 3,11 (m,	1H) ,	2,70	(m, ÍH). ESIMS	(MH⁺) :

441; (M-H): 439.

· 4 * »·4 4 4 4 4

4 4 · 4

158

4 4 4 4 «4 · 4 4 44 4444

Následující příklady 1(1) až 1(19 se provedly podobným způsobem.

Příklad 1(2)

R-5- (4-benzyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl) -N²- (3,4,5-trimethoxylfenyl)-thiazol-2,4-diamin

³Η NMR	(CDCI3) : δ	7,83-7,22 (m, 5H),	6,58	(s, 2H), 4,50	(m,
1H), 4,	24 (t, J =	9,0 Hz, 1H), 4,01	(t, J	= 9,0 Hz,	1H)	, 3,86
(s, 6H)	, 3,82 (s,	3H), 3,11 (m, 1H),	2,70	(m, 1H) .
Analýza	vypočtena	pro C22H24N4O4S: C,	59, 98	; H, 5,49;	N,	12,72;

S, 7,28. Zjištěno: C, 59,88; H, 5,54; N, 12,67; S, 7,21.

Příklad I(3)

S-5-(4-sobutyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N²-(3,4,5-trimethoxyl-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

^XH NMR (CDC1₃) δ 6,57 (s, 2H) ,

5,71 (brd, NH2) ,

4,36 (m, 1H) ,

4,26 (m, 1H), 3,85-3,80 (m, 1OH), 1,80 (m, 1H), 1,62 (m, 1H) φ ·· ·

159

1,35 (m, 1Η), 0,95 (m, 6Η) , ESIMS (ΜΗ⁺) : 407.

Příklad 1(4)

5-{(4R)-[(IR)-benzyloxy-ethyl]-4,5-dihydro-oxazol-2-yl}-Ν²-(3,4,5-trimethoxylfenyl)-thiazol-2,4-diamin

OCH,

'’Ή NMR (CDCI3) : δ 7,35-7,25 (m, 5H) , 6,58 (s, 2H) , 5,70 (brd, NH₂), 4,70-4,59 (m, 2H), 4,48 (m, 1H), 4,25 (m, 2H) , 3,86 (s, 6H), 3,83 (s, 3H), 3,77 (m, 1H), 1,14 (m, 3H), ESIMS {MH⁺) : 485.

Příklad 1(5)

S-4-[4-amino-5-(4-fenyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-thiazol-2-ylamino]benzensulfonamid

³Η NMR (CD3OD) : δ 7,82 (m, 4H) , 7,34 (m, 5H) , 5,26 (t, J = 8 Hz, 1H), 4,72 (t, J = 7,80 Hz, 1H), 4,16 (t, J = 7,80 Hz, 1H), Analýza vypočtena pro CisHivNsC^^O, 5 Et₂O: C, 53,08; H, 4,90;

N, 15,48; S, 14,17. Zjištěno: C, 53,36; H, 4,79; N, 15,66, S, 14,33.

160 ««·♦· ·· » ·9 · · • · · » · · · · » « · • · » · ♦ 9 9 * • » · · · « · · ··· φ ·· ♦·» 99 ··♦·

Příklad 1(6)

S-5- (4-fenyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl) -N²- (3,4,5-trimethoxyfenyl)-thiazol-2,4-diamin

^ΧΗ NMR (CDC1₃) : δ 7,37-7,26 (m, 5H) , 6,59 (s, 2H) , 5,80 (brd, NH₂), 5,32 (t, J= 7,80 Hz, 1H), 4,65 (t, J = 7,80 Hz, 1H), 4,09 (t, J = 7,80 Hz, 1H) . FABMS (MH⁺) : 427.

Příklad 1(7)

R-5-(4-fenyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N²-(3,4,5-trimethoxyfenyl) -thiazol-2, 4-diamin

^XH NMR (CDCI3) : δ 7,37-7,26 (m, 5H), 6,59 (s, 2H), 5,80 (brd, NH₂), 5,32 (t, J = 7,80 Hz, 1H) , 4,65 (t, J = 7,80 Hz, 1H) ,

4,09 (t, J - 7,80 Hz, 1H) . FABMS (MH⁺) : 427.

Příklad 1(8)

S-5-([4-(3-benzyloxy-fenyl)-4,5-dihydro-oxazol-2-yl]-N²- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

161

³H NMR (300 MHz, CDCI3) : δ 3,83 (s, 3H), 3,87 (s, 6H), 4,08 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 4,62 (dd, J= 8,10 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H), 5,30 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 5,80 (s, 2H), 6,59 (s, 2H), 6,90 (ra, 3H) , 7,33 (m, 6H) , HRMS (FAB) (MH⁺) Vypočteno: 533,1859. Zjištěno: 533,18477.

Příklad 1(9)

S-3-{2-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl]4,5-dihydro-oxazol-4-yl}-fenol

QMe

Do roztoku S-5-[4-(3-benzyloxyfenyl)-4,5-dihydro-oxazo-2-yl] -N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diaminu (připraveného způsobem popsaným v příkladu 1(8) (20 mg, 0,038 mmol) v DMF (0,5 ml) se přidá Pd black (10 mg) a mravenčnan amonný (10 mg, 0,14 mmol). Reakční směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 42 hodin. Reakční směs se naředí CH2CI2 (5 ml) a přefiltruje se přes Celit. Produkt (4 mg) se získá po odstranění rozpouštědla.

^XH NMR (300 MHz, CD3OD) : δ 3,74 (s, 3H), 3,85 (s, 6H), 4,28 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 4,84 (m, 1H), 5,20 (dd, J = 8,9 Hz, 1H), 6,74 (m, 3H), 6,93 (s, 2H), 7,18 (dd, J = 8,8 Hz, 1H). HRMS (FAB) (MH⁺) Vypočteno: 443,1389. Zjištěno: 443,1377.

162

Příklad I(10)

S-5-[4-(3-benzyloxy-fenyl)-4,5-dihydro-oxazol-2-yl]-N²- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

NMR (300 MHz, CDC1₃) : δ 3,82 (br s, 9H), 4,06 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 9,9 Hz, 1H), 5,05 (s, 2H) , 5,26 (dd, J = 9, 9 Hz, 1H), 5,89 (br s, 2H) , 6,58 (s, 2H), 6,94 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,20 (J = 9 Hz, 2H), 7,39 (m, 5H). HRMS (FAB) (MH⁺) Vypočteno: 533,1859. Zjištěno: 533,1876.

Příklad 1(11)

S-4-{-2-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)thiazol-5-yl]4,5-dihydrooxazol-4-yl}-fenol

Titulní sloučenina se připraví ze sloučeniny příkladu 1(10) způsobem podobným způsobu popsanému v příkladu 1(9).

³Η NMR (300 MHZ, CD3OD): δ 3,73 (s, 3H), 3,80 (s, 6H), 4,12 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 4,70 (dd, J= 9,9 Hz, 1H), 5,16 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8 Hz, 2H), 6,92 (s, 2H), 7,12 (d, J = 8 Hz, 2H). HRMS (FAB) (MH⁺) Vypočteno: 443,1389. Zjištěno: 443,1377.

163

Příklad I(12) (R/S)-5-[4-(4-brom-fenyl)-4,5-dihydro-oxazol-2-yl]-N²- (3,4,5— -trimetoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+H]/z Vypočteno: 505. Zjištěno: 505.

Analýza vypočtená: C, 49,91; H, 4,19; N, 11,09; S, 6,34. Zjištěno: C, 49,32; H, 4,02; N, 10,59; S, 6,05.

Příklad 1(13) (R/S)-5-[4-(2-brom-fenyl)-4,5-dihydro-oxazol-2-yl]-N²- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+H]/z Vypočteno: 505. Zjištěno: 505.

Příklad 1(14) (R/S)-5-[4-(3-brom-fenyl)-4,5-dihydro-oxazol-2-yl]-N²- (3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

H,

Hji

164 fc fcfcfcfc fcfc · fcfc fcfc fcfc fc fcfcfcfc fcfcfcfc fcfc · · · fc·· • fcfc fc fcfc fcfcfc fcfc fcfcfcfc

MS (FAB) [m+H]/z Vypočteno: 505. Zjištěno: 505.

Analýza vypočtená: C, 49,91; H, 4,19; N, 11,09; S, 6,34. Zjištěno: C, 50,16; H, 4,41; N, 9,64; S, 5,4.

Příklad I(15) (R/S)-5-(4-methyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N-(3,4,5trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

Η»

Hj

MS (FAB) [m+]/z Vypočteno: 364.

Zjištěno: 364.

Analýza vypočtená: C, 52,73; H, Zjištěno: C, 50,58; H, 5,36; N,

5,53; N, 15,37; S, 8,8. 13,92; S, 7,84.

Příklad 1(16)

5-(4-methyl-5-fenyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+H)/z Vypočteno: 441. Zjištěno: 441.

Analýza vypočtená: C, 59,98; H, 5,49; N, 12, 72; S, 7,28. Zjištěno: C, 59,38; H, 5,49; N, 12,50; S, 7,16.

Příklad 1(17) (R/S)-5-(4-isopropyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

165 • 9999 ·* · ·· 9φ

9 9 9 9· · 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 999 99 9999

MS (FAB) [m+H)/z Vypočteno: 393. Zjištěno: 393.

Analýza vypočtená: C, 55,08; H, 6,16; N, 14,28; S, 8,17. Zjištěno: C, 55,62; H, 6,33; N, 13,07; S, 7,73.

Příklad 1(18)

5-(4(R)-methy1-5(S)-fenyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N-(3,4,5trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+H]/z Vypočteno: 441. Zjištěno: 441.

Analýza vypočtená: C, 59,98; H, 5,49; N, 12,72; S, 7,28. Zjištěno: C, 59,38; H, 5,49; N, 12,50; S, 7,16.

Příklad 1(19) (R/S)-5-(5-methyl-4,5-dihydro-oxazol-2-yl)-N²- (3, 4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+H]/z Vypočteno: 365. Zjištěno: 365.

Analýza vypočtená: C, 52,73; H, 5,53; N, 15,37; S, 8,8. Zjištěno: C, 50,91; H, 5,27; N, 14,03; S, 8,09.

166 • «·«· ·· · ·© ©· ·· · · · ©♦ · · · · • · · * · ·· © • · · · · · · · · © ©· ·©· ··· *·© © ·♦ *·« ©· ····

Příklad 1(20)

Příklad J(l)

5-(2H-tetrazol-5-yl)-N-(3,4,5-trimethoxyl)-thiazol-2,4-diamin

Roztok 4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5 -karbonitrilu (110 mg, 0,35 mmol), TMSN3 (115 mg, 1,0 mmol) a katalytického množství Bu2SnO v toluenu se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 4 dnů (další množství TMSN3 a Bu2SnO se přidá během reakce). Rozpouštědlo se odstraní za redukovaného tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje se 0,1 N HC1, solankou a suší se MgSC>4. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se trituruje v ethyletheru. Konečný produkt (30 mg) se získá filtrací:

³H NMR (CD3OD) : δ 6,99 (s, 2H) , 3,89 (s, 6H), 3,77 (s, 3H) .

167 fc · · · · • fc · fcfc · ·· fcfc • ·· · fc · · • · fc · « fc • fc fcfcfc • fc fcfcfc fcfc fcfcfc·

ESIMS (MH⁺) : 350; (M-H) : 348.

Následující příklad se provedl podobným způsobem.

Příklad J(2)

N-(4-dimethylamino-fenyl)-5-(2H-tetrazol-5-yl)-thiazol-2,4-diamin

^XH NMR (CD₃OD) Hz, 2H), 2,95 δ 7,38 (d, J = 5,40 Hz, 2H), 6,85 (d, J (s, 6H), ESIMS (MH⁺) : 302; (M-H^-): 301.

5,40

Příklad K(l)

3-{-5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5yl}fenol

Do roztoku 200 mg (0,412 mmol) 5-[3-(3-methoxymethoxy-fenyl)[1,2,4]oxadiazol-5-yl]-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diaminu (připraveného v příkladu B(4) v 8 ml 50% vodného dioxanu se přidá kyselina trifluoroctová (8 ml) za chlazení ve vodní lázni o teplotě 15°C. Po 2 hodinách při teplotě místnosti se přidá toluen a roztok se zahustí ve vakuu ve vodní lázni o teplotě 22 °C. S 5 ml rozpouštědla se roztok nalije do chladného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Tento roztok se extrahuje dvěma díly dichlormethanu, a potom se promyje solankou a suší se přes síran sodný. Po

168 radiální chromatografií na oxidu křemičitém za eluce směsí 5 10% methanol/dichlormethan se získá 3-{5-[4-amino-2-(3,4,5-trimethoxy-fenylamino)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl} fenol [60 mg) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

^XH NMR (300 MHz, DMSO-d₆: δ 3,64 (m, 3H), 7,34 (m, 2H), 7,49 (m, 1H) .

Analýza vypočtena pro C20H19N5O5: Zjištěno: C, 54,40; H, 4,40; N,

Příklad L(l) (s, 3H), 3,81 (s, 6H) , 6,95 2H), 9,76 (s, 1H), 10,76 (s,

C, 54,41; H, 4,34; N, 15,86. 15,86.

5-{6-(furan-2-yl)-pyridin-2-yl}-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

Do roztoku 5-(6-brom-pyridin-2-yl-2-N-(3,4,5-trimethoxyfenyl) -thiazol-2, 4-diaminu (připraveného podle příkladu G(6) (60 mg, 0,137 mmol, 1,0 ekv.) v DMF (0,7 ml) se přidá 2-furantributylcín (130 μΐ. 0,411 mmol, 3,0 ekv), triethylamin (95 μΐ, 0,685 mmol, 5,0 ekv.) a dichlorbis(trifenylfosfin)palladium (19 mg, 0,027 mmol, 0,2 ekv.). Reakční směs se zahřívá při teplotě 85°C po dobu 18 hodin, ochladí se a rozdělí se mezi ethylacetát a hydrogenuhličitan sodný. Organická vrstva se suší přes síran sodný, dekantuje se a zahustí se. Materiál se přečistí chromatografií na silikagelu (1:1 ethylacetát/hexan) za zisku 5-{6-(furan-2-yl)pyridin-2yl}-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diaminu (30,5 mg, 53% výtěžek).

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 424. Zjištěno: 424.

»«w· • 99 ** *» • · *

169

9 9 99 99 9

Analýza vypočtená: C, 59,42; H, 4,75; N, 13,20; S, 7,55. Zjištěno: C, 59,56; H, 4,71; N, 13,10; S, 7,44.

Následující příklady L(2) a L(3) byly provedeny stejně jako příklad L(1).

Příklad L(2)

5-(6-thiofen-2-yl-pyridin-2-yl)-N-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+H]/z vypočteno: 441. Zjištěno: 441.

Analýza vypočtená: C, 57,25;.11, 4,58; N, 12,72; 5, 14,56. Zjištěno: C, 56,57; H, 4,60; N, 12,47; S, 14,33.

Příklad L(3)

5-(6-thiofen-3-yl-pyridin-2-yl)-N²-(3,4,5-trimethoxy-fenyl)-thiazol-2,4-diamin

MS (FAB) [m+]/z vypočteno: 440; Analýza vypočtená: C, 57,25; H, Zjištěno: C, 56,57; H, 4,60; N,

Zjištěno: 440. 4,58; N, 12, 72; 12,47; S, 14,33.

5,

14,56.

Příklad M(l)

4-benzylsulfanylmethyl-N-(4-isopropyl-fenyl)—[2,5’]— ····

170 • · · • · ·· 9 «

• · ·

9999

-bithiazolyl-2', 4'-diamin

Roztok 204 mg (0,7 mmol) 4-amino-2-(4-isopropylfenylamino)thiazol-5-karbothioamidu (připraveného podle příkladu A(l), stupeň (ii)) a 1,3-dibromoacetonu (154 mg, 0,72 mmol) se mísí v MeOH (10 ml) při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Získaná reakční směs se potom naředí ethyletherem (150 ml). Žluto-hnědý pevný materiál se odfiltruje, vypláchne se ethyletherem a suší se ve vakuu za zisku surového meziproduktu ve formě hnědé pevné látky (298 mg, 91% výtěžek). Bez dalšího přečištění se výše uvedený meziprodukt (50 mg, 0,12 mmol) rozpustí v DMF (10 ml) s DIEA (17 mg, 0,14 mmol). Potom se přidá benzylmerkapten (17 mg, 0,14 mmol). Získaná směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za redukovaného tlaku a zbytek se znovu rozpustí v ethylacetátu (100 ml). Organický roztok se extrahuje nasyceným NaHCO3 (3 x 20 ml) a potom solankou. Organická vrstva se suší přes síran hořečnatý a zahustí se za zisku hnědé pevné látky. Konečný produkt se potom přečistí preparativní HPLC za zisku 4-benzylsulfanylmethyl-N-(4-isopropyl-f enyl) - [2,5' ] bithiazolyl-2 ’ 4'~diaminu (9 mg, 18% výtěžek). ^XH NMR (DMSO-de): δ 7,91 (s, 1H) , 7,20 7,38 (m, 9H) , 6,65 (s, 1H), 5,98 (s, 2H), 3,73 (s, 1H), 3,63 (s, 2H), 2,9 (heptet, J = 6,9 Hz, 1H), 1,22-1,24 (d, J=6,9 Hz, 6H). FABMS (M+) : 452; FABMS (MNa+): 475.

Příklad Ν(1):

171 i :

··· * • · ··· · · ····

Kyselina 4'-amino-2'- (4-methanesulfonyl-fenylamino) - [2,5' ] bithiazoyl-4-karboxylová, trifluoracetat

Titulní sloučenina se připraví následujícím způsobem: do roztoku amidu kyseliny 4-amino-2-(4-sulfamoyl-fenylamino)-thiazol-5-karbothioové (164 mg, 0,5 mmol) v DMF se přidá kyselina bromopyrohroznová (125 mg, 0,75 mmol) a získaná směs se mísí při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Po odstranění rozpouštědla se zbytek rozpustí v ethylacetátu a promyje se vodou a solankou a potom se suší MgSOí. Přečištěním zbytku preparativní HPLC se získá titulní sloučenina ve formě žlutého prášku se ziskem 34%.

²H NMR (DMSO): δδ 10,08 (s, 1H) , 8,04 (s, 1H), 7,88-7,78 (m,

4H) , 7,31 (s, 4H) . HRFABMS (MH⁺) : Vypočteno: 398,0051.

Zjištěno: 398,0059.

Příklad N(2):

(2-dimethylamino-ethyl)-amid kyseliny 4-amino-2’-(4-sulfamoyl-fenylamino)-[2,5']-bithiazoyl-4-karboxylové

Titulní sloučenina se připraví následujícím způsobem: směs kyseliny 4'-amino-2'-(4-methanesulfonyl-fenylamino)172

Z

- [2,5']bithiazoyl-4-karboxylové (64 mg, 0,13 mmol), PyBop (81 mg, 0,16 mmol), N,N-dimethylethylenediaminu (28 μΐ, 0,25 mmol) a DIEA (65 μΐ, 0,38 mmol) v DMF se mísí při teplotě místnosti po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo se odstraní za redukovaného tlaku a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Ethylacetátový roztok se extrahuje nasyceným roztokem NaHCO3 a potom solankou a suší se MgSO₄ . Přečištěním zbytku preparativní HPLC se získá titulní sloučenina ve formě žlutého prášku s výtěžkem 17%.

^XH NMR (DMSO): δδ 10,91 (s, 1H), 8, 72 (t, 1H, J=12,3), 7,80 (dd, 4H, J=27,l), 7, 73 (s, 1H), 7,28 (s, 2H), 7,20 (s, 2H), 2,61-2,51 (in. 4H), 2,25 (s, 6H).

HRFABMS (MH⁺) : Vypočteno: 468,0946. Zjištěno: 468,0955.

Podobným způsobem jako v příkladu N(2) se provedou následující příklady N(3) a N(4).

Příklad N(3):

Methoxy-methylamid kyseliny 4'-amino-2(4-sulfamoyl-fenylamino)-[2,5']bithiazolyl-4-karboxylové

t.t. 195-198 °C; ¹H NMR (CD₃OD): δ 9,80 (s, NH), 7,80-7,65 (m, 4H), 7,54 (s, 1H), 6,60 (s, NH~. 6,32 (s, NH~. 3,61 (s, 3H), 3,22 (s, 3H).

FABMS (MH⁺) : 441.

173

Příklad N(4):

Fenylamid kyseliny 4^,-amino-2'-(4-sulfamoyl-fenylamino)-[2, 5']bithiazo)yl-4 karboxylové

NMR (CDaOD): δ 7,91 (s, 1H), 7,88-7,71 (m, 4H), 7,40-7,22 (m, 4H) , 7,17-7,09 (m, 1H).

FABMS vypočteno C19H16N6O3S3: 473,0524. Zjištěno: 473, 0540.

Příklad 0(1):

N-[5-(5-{4-amino-2-[3-(2-morfolin-4-yl-ethyl)-ureido]-thiazol5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-2,4-difluor-fenyl]-3-methoxy-benzamid

Stupeň (i): Roztok aktivovaného karbamátu (připraveného v stupni (ii)), aminu a DMF (0,60 ml) se mísí při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Získaný roztok se zahustí ve vakuu a potom se přečistí Chromatatron radiální chromatografií (10% methanol/methylenchlorid), za zisku 35 mg (72% výtěžek) titulní sloučeniny ve formě bílé pevné látky.

• · · · · · · • · · ···· · · « · • · · · · · · f

Analýza vypočtena pro: C26H26F2N8O5S»1,2 H2O: C, 50,19; H, 4,60; N, 18,01; S, 5,15. Zjištěno: C, 50,16; H, 4,35; N, 17,95; S, 5,22. ESIMS (MH⁺) : 601.

Stupeň (ii): Příprava aktivovaného karbamátu (methylesteru kyseliny 4-{4-amino-5-[3-(2,4-difluor-5-{[1-(3-methoxy-fenyl)-methanoyl]-amino}-fenyl)-[1,2,4]oxadiazol-5-yl]-thiazol-2-ylkarbamoyloxy}-benzoové). Roztok N-{-5-[5-(2,4-diamino-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamidu (533 mg, 1,20 mmol) (připraveného analogicky s příkladem E(l), rozpuštěného v bezvodém THF (20,0 ml) a bezvodém N-methylpyrolidinonu (1,0 ml) při teplotě -78 °C, se zpracuje fenyllithiem (0,660 ml, 01,20 mmol) a potom pkarboxymethylchlorformiatem (772 mg, 3,60 mmol) rozpuštěným v bezvodém THF (5,0 ml), v jednom podíle (zvýšení vnitřní teploty na -55°C). Po 5 minutách se pomalu přidá druhý podíl fenyllithia (0,660 ml, 1,20 mmol). Po míšení po dobu dalších 15 minut se reakce utlumí přidáním kyseliny octové (0,30 ml), reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti, naředí se ethylacetátem, extrahuje se 1:1 směsí solanky a roztoku hydrogenuhličitanu sodného, suší se přes síran hořečnatý a přefiltruje se. Získaný roztok se zahustí ve vakuu na obsah přibližně 50 ml rozpouštědla a vytvoří se bílá sraženina. Bílá sraženina se odebere filtrací za zisku 446 mg (60% výtěžek) aktivovaného karbamátu. ESIMS (Mna⁺) : 645.

Následující příklady 0(2) až 0(32) se provedly analogicky s příkladem 0(1).

Příklad 0(2):

N-{5-[5-(4-amino-2-{3-[3-(2-oxo-pyrrolidin-l-yl)-propyl]-ureido}-thiazol-5-yl)-[1,2,4 ]oxadiazol-3-yl]-2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamid

175 «

Analýza vypočtená pro C27H26F2N8O5S*1,5 H2O: C, 5,0,07; H, 4,57; N, 17,52; S, 5,01. Zjištěno: C, 50,60; H, 4,58; N, 17,42; S, 5,17. ESIMS (MH⁺) : 613.

Příklad 0(3):

N-(5—{5—[4-amino-2-(3-karbamoylmethyl-ureido)-thiazol-5-yl ][1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená pro C22Hi8F2N8OsS*0, 6 H2O: C, 47,8 6; H, 4,05; N, 20,09; S, 5,11. Zjištěno: C, 47,92; H, 3,95; N, 20,01; S, 5,44. ESIMS (Mna⁺) : 567.

Příklad 0(4):

N-{5-{5-[4-amino-2-(3-methyl-ureido)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

O‘

176 • · i :

·»» · • · · ·

• · · · · · • · ··· ·» 4>··

Analýza vypočtená pro C21H17F2N7O4S· (0, 9 DMF, 0,5 H₂O) : C, 49,47; H, 4,10; N, 19,23; S, 5,57. Zjištěno: C, 49,58; H, 4,24; N, 19,33; S, 5,63, ESIMS (M-H^-): 500.

Příklad 0(5):

N-[5-(5-{4-amino-2-[3-(tetrahydro-furan-2-ylmethyl)-ureido]-thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-2,4-difluor-fenyl]-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C25H₂3F₂N7O₅S«0,5 H₂O: C, 51,72; H, 4,17; N, 16,89; S, 5,52. Zjištěno: C, 51,61; H, 4,09; N, 16,87; S, 5,57. ESIMS (MNa⁺) : 594.

Příklad 0(6):

N-{5-[5-{4-amino-2-{3-[2-(2-hydroxy-ethoxy)-ethyl]-ureido}-thiazol-5-yl)-[1,2,4]oxadiazol-3-yl]-2,4-difluor-fenyl}-3-

Analýza vypočtena pro: C₂4H23F₂N7O₆S·!, 0 H₂O: C, 4 8,56; H, 4,25;

• ·

I ft

N, 16,52; S, 5,40. Zjištěno: C, 48,67; H, 4,04; N, 16,63; S, 5,50. ESIMS (M-H) : 574.

Příklad 0(7):

N-{5-{5-[4-amino-2-(3-isobutyl-ureido)-thiazol-5-yl]-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C24H23F₂N₇O4S»0,6 H₂O: C, 52, 00; H, 4,40; N, 17,69; S, 5,78. Zjištěno: C, 52,02; H, 4,29; N, 17,87; S, 5,85. ESIMS (MH⁺) : 544.

Příklad 0(8):

N-(5-{5-[4-amino-2-(3-pyridin-2-ylmethyl-ureido)-thiazol-5-yl[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro C26H₂oF₂N₈04S·!, 0 H₂O: C, 52,34; H, 3,72; N, 18,78; S, 5,37. Zjištěno: C, 52,24; H, 3,75; N, 18,74; S, 5,32. ESIMS (MH⁺) : 579.

Příklad 0(9):

N-(5-{5-[4-amino-2-(3-pyridin-3-ylmethyl-ureido)-thiazol-5··

178

-yl][1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená pro C₂6H₂oF2N₈04S*0,8 H₂0: C, 52,66; H, 3,67;

N, 18,90; S, 5,41. Zjištěno: C, 52,57; H, 3,99; N, 18,92; S, 5,16. ESIMS (MH⁺) : 579.

Příklad 0(10) :

N-[5-(5-{4-amino-2-[3-(2-hydroxy-ethyl)-ureido]-thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená pro C22H19F2N7O5S: C, 49,72; H, 3,6; N, 18,45; S, 6,03. Zjištěno: C, 49,45; H, 3,80; N, 18,30; S, 5,97. ESIMS (M-H) : 530.

Příklad 0(11):

N-[5-(5-{4-amino-2-[3-{trans-4-hydroxy-cyklohexyl)-ureido]thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3methoxy-benzamid

179

Analýza vypočtena pro: C26H25F2N₇O₅S»2,8 H₂O: C, 49,10; H, 4,85; N, 15,42; S, 5,04. Zjištěno: C, 49,06; H, 4,71; N, 15,39; S, 4,79. ESIMS (M-H) : 584.

Příklad 0 (12) :

N-[3-(5-{4-amino-2-[3-(3-morfolin-4-yl-propyl)-ureido]thiazol-5-yl}-[1,2,4]oxadiazol-3-yl)-fenyl]-3-methyl-benzamid

Analýza vypočtena pro C27H3oN₈0₄S·!, 5 H₂O: C, 54,99; H, 5,64; N, 19,00; S, 5,44. Zjištěno: C, 54,83; H, 45,49; N, 18,50; S, 15,30. ESIMS (MH⁺) : 563.

Příklad 0(13):

N-{5-[4'-amino-2'-(3-benzyl-ureido)-[2,5’]bithiazolyl-4-yl]2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamid

0'

180

Analýza vypočtena pro: C28H22F2N6O3S2: C, 56, 75; H, 3,74; N, 14,18; S, 10,82. Zjištěno: C, 56,70; H, 3,85; N, 14,09; S, 10,70. ESIMS (MH⁺) : 593.

Příklad 0(14) :

N-(5-{4'-amino-2'-[3-(2-methoxy-l-methyl-ethyl)-ureido][2,5']bithiazolyl-4-yl]-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C25H24F2N6O4S2: C, 52,25; H, 4,21; N, 14,63; S, 11,16. Zjištěno: C, 52,06; H, 4,21; N, 14,55; S, 11,09. MALDIFTMS (MH⁺) : 575,1341. Zjištěno 575, 1342.

Příklad 0(15) :

N-[5-(4'-amino-2'-{3-[3-(2-oxo-pyrrolidin-l-yl)-propyl]-ureido} [2,5'] bithiazolyl-4-yl) -2,4-difluorfenyl] -3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C28H₂7F2N₇O4S2·!, 1 H2O: C, 51,94; H, 4,55;

··♦·

N, 15,14; S, 9,90. Zjištěno: C, 52,38; H, 4,79; N, 14,64; S, 9,48. MALDI FTMS (MNa⁺) : 650, 1426. Zjištěno 650,1394.

Příklad 0(16):

N-{5-[4'-amino-2'-(3-pyridin-2-ylmethyl-ureido)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-2,4-difluoro-fenyl}-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C27H21F2N7O3S2: C, 54,63; H, 3,57; N, 16,52; S, 10,80. Zjištěno: C, 54,44; H, 3,68; N, 16,33; S, 10,60. MAIDIFTMS (MH⁺) : 594,1188. Zjištěno 594,1191.

Příklad 0(17) :

N-{5-[4'-amino-2'-(3-pyridin-3-ylmethyl-ureido)-[2,5']bithiazolyl-4-yl]-2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamid

Příklad 0(18):

Analýza vypočtena pro: C27H2iF₂N7O3S2*0,5 H₂O: C, 53,81; H, 3,68;

N, 16,27; S, 10,64. Zjištěno: C, 53,95; H, 3,78; N, 16,21; S,

10,68. MALDI FTMS (MH⁺) : 594,1188. Zjištěno 594,1185.

• · * * * *

182

9 · 9 · ·· *·· » * 999 9

N-{5-[4'-amino-2'-(3-pyridin-4-ylmethyl-ureido)-[2,5'] bithiazolyl-4-yl]-2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená pro C27H2iF2N₇O3S2*0,5 H₂0: C, 53,81; H, 3,68; N, 16,27; S, 10,64. Zjištěno: C, 53,83; H, 3,60; N, 16,33; S, 10,80. MALDIFTMS (MH⁺) : 594,1188. Zjištěno 594,1198 .

Příklad 0 (19) :

N-(5-{4'-amino-2’-[3-((R)-2-hydroxy-propyl)-ureido]

-[2,5']bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C2H22F2N6O4S2: C, 51,42; H, 3,96; N, 14,99; S, 11,44. Zjištěno: C, 50,95; H, 4,12; N, 14,97; S, 11,22. MALDIFTMS (MH⁺) : 561,1185. Zjištěno 561,1212.

Příklad 0(20) :

N-(5-{4'-amino-2'-[3-((S)-2-hydroxy-propyl)-ureido][2,5']bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

183

Analýza vypočtena pro: C24H22F₂N₆O4S₂·!, 0 H₂0: C, 49, 82; H, 4,18; N, 14,53; S, 11,08. Zjištěno: C, 49,77; H, 3,92; N, 14,74; S, 10,96. ESIMS (MNa⁺) : 583.

Příklad 0(21):

N-(5-{4’-amino-2'-[3-((R)-1-hydroxymethyl-propyl)-ureido][2,5']bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená pro C₂5H₂4F2N₆O4S2^e0,5 H2O: C, 51,45; H, 4,32; N, 14,40; S, 10,99. Zjištěno: C, 51,32; H, 4,30; N, 14,53; S, 11,06. ESIMS (MNa⁺) : 597.

Příklad 0 (22) :

N-(5-(4'-amino-2'-[3-((S)-1-hydroxymethyl-propyl)-ureido][2,5']bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

184 ·

*···

Analýza vypočtená pro C25H24F2N6C>4S2^e0,5 H2O: C, 51,45; H, 4,32; N, 14,40; S, 10,99. Zjištěno: C, 51,49; H, 4,26; N, 14,66; S, 11,16. ESIMS (MNa⁺) : 597.

Příklad 0(23):

N-[5-(4'-amino-2'-{3-[(S)-1-(tetrahydro-furan-2-yl)methyl]-ureido}[2,5']bithiazolyl-4-yl)-2,4-difluorfenyl]-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená. C₂6H24F₂N₆O4S2*0,5 H₂O: C, 52,43; H, 4,23; N, 14,11; S, 10,77. Zjištěno: C, 52,55; H, 4,29; N, 14,44; S, 19,53. ESIMS (M-H^-): 585.

Příklad 0(24): N-[5-(4'-amino-2'-{3-[(R)-1-(tetrahydro-furan-2-yl)methyl] -ureido}- [2, 5']bithiazolyl-4-yl) -2,4-difluor-fenyl]-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C26H₂4F2N_eO4S2«0, 6 H2O: C, 52,27; H, 4,25;

Φ Φ ♦ φ φ

185

Φ· «φ • · φ φ φ · *

Ν, 14,07; S, 10,73. Zjištěno: C, 52,29; Η, 4,33; Ν, 14,33; S, 10,55. ESIMS (Μ-Η^-) : 585.

Příklad 0(25) :

Ν-{5-[4'-amino-2'-(3-cyklohexylmethyl-ureido)-[2,5']bithiazoyl]-2,4-difluor-fenyl}-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtená pro C28H₂8F₂N6O3S2^e0, 5 H₂O: C, 55,34; H, 4,81; N, 13,83; S, 10,55. Zjištěno: C, 55,26; H, 4,78; N, 14,00; S, 10,56. MALDIFTMS (MH⁺) : 599, 1705. Zjištěno 621,1525.

Příklad 0(26) :

N-(5-{4¹-amino-2'-[3-(2-morfolin-4-yl-ethyl)-ureido][2,5’]bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C27H27F2N7O4S2*1,0 H₂O: C, 51,17; H, 4,61; N, 15,47; S, 10,12. Zjištěno: C, 51,00; H, 4,39; N, 15,12; S, 9,75. MALDIFTMS (MH⁺) : 616, 1607 . Zjištěno 616,1597.

4» * · « » * · «

9t · · · » · ♦ ♦ · > * 9 «

186

Příklad O (27) :

N-(5-{4-amino-2'-[3-(2-pyrrolidin-l-yl-ethyl)-ureido]-[2,5']bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluorfenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro C27H27F2N7O3S2: C, 54,08; H, 4,54; N, 16,35; S, 10,69. Zjištěno: C, 53,93; H, 4,66; N, 16,11; S, 10,51. MALDI FTMS (MH⁺) : 600,1658. Zjištěno 600,1640.

Příklad 0(28):

N-[5-(4'-amino-2'-{3-[2-(2-hydroxy-ethoxy)-ethyl]ureido}[2,5'] bithiazolyl-4-yl)-2,4-difluor-fenyl]-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro C25H24F2N6O5S2*1,0 H2O: C, 4 9,33; H, 4,31; N, 13,81; S, 10,54. Zjištěno: C, 49,47; H, 4,08; N, 13,87; S, 10,49. MALDI FTMS (MH⁺) : 591,1290. Zjištěno 591,1276.

Příklad 0(29):

N-[5-(4'-amino-2’-[3-(2-pyridin-2-yl-ethyl)ureido][2,5']bithiazolyl-4-yl)-2,4-difluor-fenyl]-3-methoxy-benzamid

187 • · «fcfc ♦ * · · · • · · fc · · · · • fcfc fc ·· fcfcfc fcfc fcfcfcfc

Analýza vypočtená pro C28H₂3F2N7O3S2*1,8 H₂0: C, 52,54; H, 4,19; N, 15,32; S, 10,02. Zjištěno: C, 52,56; H, 4,07; N, 15,54; S, 10,03. MA1DI FTMS (MH⁺) : 608,1345. Zjištěno 608,1346.

Příklad 0 (30) :

N-(5-{4’-amino-2'-[3-(2-pyridin-4-yl-ethyl)-ureido]—[2,5']— bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro: C28H23F2N7O3S2·!, 0 Η₂Ο: C, 53,75; H, 4,03; N, 15,67; S, 10,25. Zjištěno: C, 53,32; H, 4,01; N, 15,50; S, 9,90. MALDI FTMS (MH⁺) : 608,1345. Zjištěno 608,1327.

Příklad 0(31) :

N-{3- [4 ’ -amino-5-methyl-2 ' - (3-methyl-ureido) -[2,5']bithiazolyl-4-yl]-fenyl}-3-methoxy-benzamid

'0'

O

4 4 4

188 ♦ 4 4 4444 4 4 ·· • 4 444 <4 * • · 444 «444 4

444 444

444 4 44 444 44 4444

Prekursor - (N-[3-(2',4'-diamino-5-methyl[2,5']bithiazolyl-4-yl)-fenyl]-3-methoxy-benzamid) - pro aktivovaný karbamát z tohoto příkladu se připraví analogicky s příkladem E{3), za použití 3-aminopropiofenonu místo 3-aminoacetofenonu.

Analýza vypočtena pro C₂3H22N6O3S₂*0, 6 H₂0: C. 54,66; H, 4,63; N, 16,63; S, 12,69. Zjištěno: C, 54,50; H, 4,48; N, 16,77; S, 12,70. ESIMS (MH⁺) : 495.

Příklad 0(32) :

N-(5-{4'-amino-2'-[3-(2-pyridin-3-yl-ethyl)-ureido]-[2,5']bithiazolyl-4-yl}-2,4-difluor-fenyl)-3-methoxy-benzamid

Analýza vypočtena pro C28H23N7O3S2»0, 5 H₂O: C, 54,53; H, 3,92; N, 15,90; S, 10,40. Zjištěno: C, 54,35; H, 4,02; N, 16,05; S, 10,30. ESIMS (MH⁺) : 608.

Sloučeniny popsané výše mohou být testovány na svou aktivitu způsobem popsaným dále.

φφφφ

189 ·♦ · φφφφ φφφφ • φ φ·· φφ φ • φ φ φ φ φ φ φ φ φ • φ φφφ φφφ •φφ · φφ φφφ φφ φφφφ

Biologické testy: Enzymové testy

Stimulace buněčné proliferace růstovými faktory jako je VEGF, FGF a jiné, je závislé na jejich indukci autofosforylace příslušných receptorových tyrosin kinas. Proto schopnost inhibitoru protein kinasy blokovat buněčnou proliferaci indukovanou těmito faktory přímo koreluje s jejich schopností blokovat autofosforylaci receptoru. Pro měření aktivity sloučenin v inhibici protein kinas byly navrženy následující konstrukty.

VEGF-R2 konstrukt pro test: Tento konstrukt určuje schopnost testované sloučeniny inhibovat aktivitu tyrosin kinasy. Konstrukt (VEGF-R2Á50) cytosolové domény receptoru 2 lidského cévního endotelového růstového faktoru (VEGF-R2) bez 50 centrálních zbytků 68 zbytků kinasové insertní domény byl exprimován v systému bakulovirus/hmyzí buňky. Z 1356 zbytků VEGF-R2 obsahuje VEGF-R2A50 zbytky 806-939 a 990-1171 a také jednu bodovou mutaci (E990V) v kinasové insertní doméně vzhledem k přirozenému VEGF-R2. Autofosforylace přečištěného konstruktu byla provedena inkubací enzymu v koncentraci 4 μΜ za přítomnosti 3 mM ATP a 40 mM MgCl2 v 100 mM HEPES, pH 7,5 obsahujícím 5% glycerol a 5 mM DTT, při 4 °C po dobu 2 hodin.

Po autofosforylaci bylo prokázáno, že tento konstrukt má katalytickou aktivitu v podstatě stejnou jako je aktivita autofosforylované kinasové domény. Viz Parast et al., Biochemistry, 37: 16788-16801 (1998).

FGF-R1 konstrukt pro test. Intracelulární kinasová doména lidského FGF-Rl byla exprimována za použití bakulovirového expresního systému od endogenního methioninového zbytku 456 do glutamátu 766, podle číslování zbytků popsaného v Mohammadi et al., Mol. Cell Biol. 16: 977-989 (1996). Dále konstrukt • ♦ · · < · · ··«· • · »·« « · * 190 · · · * · ··· ··· · ·· **· «· 9999 obsahoval následující 3 aminokyselinové substituce: L547V,

C488A a C584S.

LCK konstrukt pro test. LCK tyrosin kinasa byla exprimována ve hmyzích buňkách jako forma s N-koncovou delecí od aminokyselinového zbytku 223 do konce proteinu ve zbytku 509, s následujícími dvěma aminokyselinovými substitucemi na Nkonci: P233M a C224D.

CHK-1 konstrukt pro test. Kompletní lidská CHK1 s His koncovkou na C-konci (FL-CHK1) byla exprimována za použití systému bakulovirus/hmyzí buňky. Obsahovala 6 histidinových zbytků (6xHis koncovku) na C-konci 476 aminokyselin lidské CHK1. Protein byl přečištěn běžnými chromatografickými technikami.

CD2/cyklin A konstrukt pro test. CDK2 byla přečištěna za použití publikované techniky (Rosenblatt et al., J. Mol. Biol. 230: 1317-1319 (1993)) z hmyzích buněk, které byly infikovány bakulovirovým expresním vektorem. Cyklin A byl přečištěn z E. coli buněk exprimujících kompletní rekombinantní cyklin A a konstrukt zkráceného cyklinu A byl připraven limitovanou proteolýzou a byl přečištěn způsobem popsaným dříve (Jeffrey et al., Nátuře 376, 313-320 (July 27, 1995)).

CDK4/cyklin D konstrukt pro test. Komplex lidské CDK4 a cyklinu D3, nebo komplex cyklinu Dl a fúzního proteinu lidské CDK4 a glutathion-S-transferasy (GST-CDK4) byl přečištěn za použití tradičních biochemických chromatografických technik ze hmyzích buněk, které byly infikovány příslušnými bakulovirovými expresními vektory.

FAK konstrukt pro test. Katalytická doména lidské FAK

191 • ·«·« ·* · ·· ·· • 4 · · · · · · a · · • · · » · a· a a · · a · · a a · · «· a a a a a a a·· a aa ·«· aa ·♦*· (FAKcd409) byla exprimována za použití bakulovirového expresního systému. Exprimovaná 280 aminokyselinová doména obsahovala zbytky methionin 409 až glutamát 689. Byla přítomna jedna aminokyselinová substituce (P410T) vzhledem k sekvenci přírůstkové číslo L13616 publikovaná v Whithey, G.S. et al., DNA Cell Biol. 9: 823-830, 1993. Protein byl přečištěn za použití klasických chromatografických technik.

VEGF-R2 test

Spojený spektrofotometrický (FLVK-P) test

Produkce ADP z ATP, která je spojena s přenosem fosforylového zbytku, byla spřažena s oxidací NADH za použití fosfoenolpyruvátového systému (PEP) a systému obsahujícího pyruvát-kinasu (PK) a laktát dehydrogenasu (LDH). Oxidace NAHD byla sledována podle snížení absorbance při 340 nm (e34o = 6,22 cm^mM'¹) za použití Beckman DU 650 spektrofotometru. Testovací podmínky pro fosforylovaný VEGF-R2Á50 (v následujících tabulkách uváděný jako FLVK-P) byly následující: 1 mM PEP; 250 μΜ NADH; 50 jednotek LDH/ml; 20 jednotek PK/ml; 5 mM DTT; 5,1 mM poly(E4Yi); 1 mM ATP; a 25 mM MgCl2 ve 200 ml HEPES, pH 7,5. Testovací podmínky pro nefosforylovaný VEGF-R2A50 (v následujících tabulkách uváděný jako FLVK) byly následující: 1 mM PEP; 250 μΜ NADH; 50 jednotek LDH/ml; 20 jednotek PK/ml; 5 mM DTT; 20 mM póly (E4Y1) ; 3 mM ATP; a 60 mM MgCl2 a 2 mM MnCl2 ve 200 ml HEPES, pH 7,5. Testy byly zahájeny 5 až 40 nM enzymu. Hodnoty Ki byly určeny měřením enzymové aktivity za přítomnosti různých koncentrací testovaných sloučenin. Data byla analyzována za použití Enzyme Kinetics a Kaleidagraph softwaru.

ELISA test

192 • · ·· 4« · **· · ·· ·

Tvorba fosfogastrinu byla sledována za použití biotinylovaného gastrinového peptidů (1-17) jako substrátu. Biotinylovaný fosfogastrin byl imobilizován za použití streptavidinen potažených 96-jamkových mikrotitračních ploten a detekce byla provedena za použití anti-fosfotyrosinové protilátky konjugované s křenovou peroxidasou. Aktivita křenové peroxidasy byla sledována za použití 2,2'-azino-di-[3ethylbenzathiazolin-sulfonatu(6)], diammoniové soli (ABTS). Typické testovací roztoky obsahovaly: 2 μΜ biotinylovaného gastrinového peptidů; 5 mM DTT; 20 μΜ ATP; 26 mM MgCl2; a 2 mM MnCl2 ve 200 mM Hepes, pH 7,5. Test byl iniciován 0,8 nM fosforylovaného VEGF-R2Á50. Aktivita křenové peroxidasy byla testována za použití ABTS, 10 mM. Reakce křenové peroxidasy byla utlumena přidáním kyseliny (H2SO4) a potom se provedl odečet absorbance při 4 05 nm. Hodnoty Ki byly určeny měřením enzymové aktivity za přítomnosti různých koncentrací testovaných sloučenin. Data byla analyzována za použití Enzyme Kinetics a Kaleidagraph softwaru.

FGF-R test

Spektrofotometrický test se provedl způsobem popsaným výše pro VEGF-R2, s výjimkou následujících změn v koncentracích: FGF-R = 50 nM, ATP = 2 mM a poly(E₄Yi) = 15 mM.

LCK test

Spektrofotometrický test se provedl způsobem popsaným výše pro VEGF-R2, s výjimkou následujících změn v koncentracích: LCK = 60 nM, MgCl2 = 0 mM a poly(E₄Yi) = 20 mM.

CHK-1 test

193

* · *··	·<> *	·<·	M
♦ 9 9	•	•	• ·	•	•	• 4
• ·	•	•		•	9	9
• ·	•		•	•	9	•
« · · ·		··		« ·		··«·

Produkce ADP z ATP, která je spojena s přenosem fosforylového zbytku na syntetický substrátový peptid Syntide2 (PLARTLSVAGLPGKK) byla spřažena s oxidací NADH za použití fosfoenolpyruvátového systému (PEP) a systému obsahujícího pyruvát-kinasu (PK) a laktát dehydrogenasu (LDH). Oxidace NAHD byla sledována podle snížení absorbance při 340 nm (ε340 = 6,22 cm~¹mM~¹) za použití HP8452 spektrofotometru. Typické reakční roztoky obsahovaly: 4 mM PEP; 0,15 mM NADH; 28 jednotek LDH/ml; 16 jednotek PK/ml; 3 mM DTT; 0,125 mM Syntide-2; 0,15 mM ATP; 25 mM MgCl2 v 50 ml Tris, pH 7,5; a 400 mM NaCl. Testy byly zahájeny 10 nM FL-CHK-1. Hodnoty Ki byly určeny měřením počáteční enzymové aktivity za přítomnosti různých koncentrací testovaných sloučenin. Data byla analyzována za použití Enzyme Kinetics a Kaleidagraph softwaru.

CDK2/cyklin A a CDK4/cyklin D testy

Cyklin-dependentní kinasová aktivita byla měřena kvantifikováním enzymem katalyzované, časově závislé inkorporace radioaktivního fosfátu z [³²P]ATP do rekombinantního fragmentu retinoblastomového proteinu. Pokud není uvedeno jinak, byly testy provedeny v 96-jamkových plotnách v celkovém objemu 50 μΐ, za přítomnosti 10 mM HEPES (kyseliny N-[2-hydroxyethyl] piperazin-Ν'-[2-ethansulfonové] ) (pH 7,4), 10 mM MgCl2, 25 μΜ adenosintrifosfátu (ATP), 1 mg/ml ovalbuminu, 5 μg/ml leupeptinu, 1 mM dithiothreitolu, 10 mM βglycerofosfátu, 0,1 mM vanadatanu sodného, 1 mM fluoridu sodného, 2,5 mM kyseliny ethylenglykol-bis(β-aminoethylether)Ν,Ν,Ν',Ν'-tetraoctové (EGTA), 2% (obj./obj.) dimethylsulfoxidu a 0,03-0,2 μθί [³²P]ATP. Substrátem (0,3-0,5 μg) byl přečištěný fragment rekombinantního retinoblastomového proteinu (Rb) (zbytky 386-928 přirozeného retinoblastomového proteinu; 62,3

194

9	• «44	98 *	99	99
98		• 4	4 4	8	9	9 «
9	•	9 9	•	9	9	4
9	•	• 9	•	9	9	•
44 «	4	98	444	98		4444

kDa, obsahující většinu fosforylačních míst přirozeného 106 kDa proteinu, stejně jako koncovku tvořenou šesti histidinovými zbytky pro usnadnění přečištění). Reakce byly zahájeny CDK2 (150 nM komplexu CDK2/cyklin A) nebo CDK4 (50 nM komplexu CDK4/cyklin D3), za inkubace při 30 °C, a byly ukončeny za 20 minut přidáním kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA) v koncentraci 250 mM.

Fosforylovaný substrát byl potom zachycen na nitrocelulosové membráně za použití 96-jamkového filtračního zařízení a neinkorporované radioaktivita byla odstraněna opakovaným promytím 0,85% kyselinou fosforečnou. Radioaktivita byla kvantifikována exponováním vysušených nitrocelulosových membrán na fosfoimageru. Zřetelné hodnoty K± byly určeny měřením aktivity enzymu za přítomnosti různých koncentrací sloučeniny a odečtením radioaktivity pozadí měřené za nepřítomnosti enzymu. Kinetické parametry (kcat, Km pro ATP) byly měřeny pro každý enzym za obvyklých testovacích podmínek určením závislosti počátečních rychlostí na koncentraci ATP. Data byla upravena pro rovnici pro kompetitivní inhibici za použití Kaleidagraph (Synergy Software), nebo byla upravena pro rovnici pro kompetitivní inhibici těsnou vazbou za použití softwaru KineTic BioKin, Ltd.). Změřené hodnoty Ki pro známé inhibitory CDK4 a CDK2 odpovídají publikovaným hodnotám IC50. Specifická aktivita CDK4 byla stejná, když byla v komplexu s kompletním cyklinem D3 nebo se zkráceným cyklinem D3; oba komplexy také dávaly podobné Ki hodnoty pro vybrané inhibitory.

FAK test

FAK HTS využívá fluorescenčního polarizačního testu od LJL

Bíosystems. Kinasová reakční směs obsahovala: lOOmM Hepes pH

7,5, 10 MgCl₂, 1 mM DTT, 1 mM ATP a 1 mg/ml póly Glu-Tyr (4:1).

Reakce byla zahájena přidáním 5 nM FAKcd409. Reakce byla

195

• ····	·· ·	··	··
·· ·	• ·	··	• ·	• «
• ·	• ·	•	• ·
• ·	• ·	•	• ·	•
··· ·	··	···	··	····

ukončena přidáním EDTA a potom se přidal fluorem značený peptid a anti-fosfotyrosinová protilátka, oboje od LJL Biosystems. Výsledky inhibice byly odečteny na Analyst (LJL) detektoru.

Test proliferace HUVEC

Tento test určuje schopnost testované sloučeniny inhibovat proliferací lidských endotelových buněk pupečníkové žíly (HUVEC) stimulovanou růstovým faktorem. HUVEC buňky (pasáže 3-4, Clonetic Corp.) se rozmrazily na EGM2 kultivačním mediu (Clonetic Corp.) v T75 zkumavkách. Čerstvé EGM2 medium se přidalo do zkumavek o 24 hodin později. Za 4 nebo 5 dnů se přidalo jiné kultivační medium (F12K medium doplněné 10% fetálním telecím sérem (FBS), 60 pg/ml růstového doplňku pro endotelové buňky (ECGS) a 0,1 mg/ml heparinu). Exponenciálně rostoucí HUVEC buňky byly použity v pokusech. 10000-12000 HUVEC buněk se umístilo v 96-jamkových plotnách ve 100 μΐ kultivačního media (popsaného výše). Buňky se nechaly navázat na toto medium během 24 hodin. Medium se potom odstranilo aspirací a do každé jamky se přidalo 105 μΐ základního media (F12K+1% FBS). Po 24 hodinách se 15 μΐ testovaného činidla rozpuštěného v 1% DMSO v základním mediu nebo toto medium samotné přidalo do každé jamky; konečná koncentrace DMSO byla 0,1%. O jednu hodinu později se 30 μΐ VEGF (30 ng/ml) v základním mediu přidalo do všech jamek s výjimkou neošetřených kontrol; konečná koncentrace VEGF byla 6 ng/ml. Proliferace buněk se kvantifikovala za 72 hodin podle redukce MTT barviva a v tuto dobu byly buňky vystaveny působení MTT na 4 hodiny (Promega Corp.). Redukce barviva se ukončila přidáním stop roztoku (Promega Corp.) a absorbance pro λ - 595 se určila na spektrofotometrické čtečce 96-jamkových ploten.

• · · · ·

196

Hodnoty IC50 se vypočetly přípravou křivky odpovědi A⁵⁹⁵ na různé koncentrace testovaného činidla; obvykle se použilo 7 koncentrací po 0,5 log, s třemi jamkami pro každou koncentraci. Pro skríning knihovny sloučenin se použily jedna nebo dvě koncentrace (jedna jamka na koncentraci) a procento inhibice se vypočetlo podle následujícího vzorce:

% inhibice = (kontrola - test)/(kontrola-základ) kde

595 kontrola = A za přítomnosti VEGF bez přítomnosti testovaného činidla 595 v z test = A za přítomnosti VEGF za přítomnosti testovaného činidla

595 základ = A za nepřítomnosti VEGF a nepřítomnosti testovaného činidla

Test proliferace nádorových buněk (MV522)

Pro stanovení toho, zda je inhibitor protein kinasy použitelný při léčbě nádorů je významné dokázání schopnosti inhibitoru blokovat proliferaci buněk v odpovědi na růstové faktory, které se účastní na vzniku proliferativních onemocnění. Protokol pro hodnocení proliferace nádorových buněk je podobný protokolu použitému pro hodnocení HUVEC buněk. 2000 buněk karcinomu plic (linie MV522, z American Tissue Cultural Collection) se vloží do kultivačního media (RPMI 1640 medium doplněné 2 mM glutaminu a 10% FBS). Proliferace buněk se kvantifikuje testem redukce MTT barviva 72 hodin po expozici testovanému činidlu. Celková doba testu je 4 dny oproti 5 dnům pro HUVEC buňky, protože MV522 nejsou vystaveny působení základního media.

197 ····· ·· · ·· ··

··· d ·· ··· ·· ····

In vivo test vývoje cév v sítnici novorozených krys

Vývoj cév v sítnici u krys probíhá od dne 1 po narození do dne 14 po narození (P1-P14). tento proces je závislý na aktivitě VEGF (J. Stone et al., J. Neurosci., 15: 4738 (1995)). Dřívější práce také prokázaly, že VEGF také působí jako faktor napomáhající přežívání cév sítnice během časného vývoje cév (Alon et al., Nat. Med. 1: 1024 (1995)). Pro hodnocení schopnosti specifických sloučenin inhibovat aktivitu VEGF in vivo byly sloučeniny připraveny ve vhodném vehikulu, obvykle v 50% polyethylenglykolu s průměrnou molekulovou hmotností 400 daltonů, a 50% roztoku 300 mM sacharosy v deionizované vodě. Obvykle byly 2 μΐ roztoku léku injikovány do sklivce oka krys v den 8 nebo 9 narození. 6 dnů po intravitreální injekci se zvířata utratila a sítnice se vyřízly z oka. Izolované sítnice se potom zpracovaly histochemickým barvením, které specificky barví endotelové buňky (Lutty and McLeod, Arch. Opthalmology, 110: 267 (1992)), které ukázalo rozsah vaskularizace ve vzorku tkáně. Jednotlivé sítnice se potom připevnily na sklíčka a vyšetřily se pro stanoveni rozsahu vaskularizace. Účinné sloučeniny inhibovaly další vývoj vaskulatury sítnice a indukovaly regresi všech kromě největších cév v sítnici. Úroveň regrese cév byla použita pro hodnocení relativní účinnosti sloučenin po podání in vivo. Regrese cév byla hodnocena subjektivně v rozsahu 3 stupňů, kde jeden stupeň je regrese v rozsahu přibližně 25% nebo méně, dva stupně je regrese v rozsahu přibližně 25-75% a tři stupně je téměř úplná regrese (přibližně 75% nebo vyšší).

V tomto modelu byla sloučenina příkladu B(30) jednou z dosud nejúčinnějších testovaných sloučenin a byla hodnocena jako dva stupně (++) při podání v dávce 2 μΐ 5 mg/ml koncentrace léku.

• · :

198

In vivo test vývoje vaskulatury sítnice v modelu retinopatie nedonošenců na novorozených krysách

Druhý model VEGF-dependentní neovaskularizace sítnice byl použit pro hodnocení aktivity této série sloučenin. V tomto modelu (Fenn et al., Invest. Opthalmol. Vis. Sci. 36: 2063 (1995)) se krysí mláďata (n=16) se svou matkou umístí do počítačem kontrolovaného boxu, ve kterém je regulována koncentrace kyslíku. Zvířata se vystaví na 24 hodin 50% koncentraci kyslíku a potom na 24 hodin 10% koncentraci kyslíku. Tento střídavý cyklus hyperoxie a hypoxie se opakuje

7-krát a potom se zvířata přesunou do boxu obsahujícího normální vzduch (P14). Sloučeniny se aplikují intravitreální injekcí po přesunu do boxu s normálním vzduchem a utratí se o 6 dnů později (P20). Potom se izolují sítnice, barví se a analyzují se způsobem popsaným výše. Účinnost sloučenin se také hodnotí způsobem popsaným výše. Sloučenina příkladu D(74) je nejúčinnější sloučeninou dosud testovanou v tomto modelu (++) ·

• · • · 4» ·

199 ·· ····

A(47)	7.9	·»	260	>10
A(48)	3.1		350	>10
A(49)	49% @ 1
A(50)	8.9		>700	>10
A(51)	38% @ 1
A(52)	75% @ 1
A(53)	24		370	>10
A(54)	1%@ 1
A(55)	14% @ 1
A(56)	84
A(57)	6.7
A(58)	65% @ 1 μΜ
A(59)	NI @ 5
A(60)	11% @ 5
B(2)	16.5		>700	3.65
Cd)	300*
D(l)	46
D(10)	56*
D(ll)	1.9
D(I2)	2	2.6	160	>10
D(13)	120*
D(14)	120*
D(15)	240*
Dd6)	11.8
D(17)	33% @5
D(18)	55% @5
D(19)	38% @ 5
D(2)	98
D(20)	3.7		990	>10
D(21)	60*		200	>10
D(22)	89*
D(23)	150		130	>10
D(24)	1.8	2	110	>10
D(25)	1		745	>10
D(26)	38% @ 5 μΜ
D(27)	1.8		82	>10
D(28)	6
D(29)	1.4		32	>10
D(3)	63		>700	>10
D(3O)	2.9		48	>10
D(31)	4.8
D(32)	3.9		59	>10
D(33)	3.8	3.6	120	>10
D(34)	0.85		89	9
P(35)	1.8		42	>10
D(36)	2		43	>10

• l

200 • · • · • 4 • 4 4 »

D(37)	3.4			150	>10
D(38)	0.93			40	>10
D(39)	1.4			62	>10
D(4)	7.6*			240	>10
D(40)	1.1	1.4		39	>10
D(41)	1.9			37	>10
D(42)	0.34	0.77		53	>10
D(43)	2.9			241	>10
D(44)	5.4	2.1		373	>10
1X45)	43% @1 μΜ			235	0.65
D(46)	17.1			123	>10
1X47)	1.1	0.34		13	>10
D(48)	4.1			40	>10
D(49)	1.6			15	>10
D(5)	63*
D(50)	1.4			17	>10
1X51)	32*	0.62		40	>10
D(52)	27% @ 50
D(53)	23
D(54)	63
D(55)	63
D(56)	0.81
D(57)	18
D(6)	38% @ 5; 25*
D(7)	120*
D(8)	29*
D(9)	47*
E(2)	390	38
F(l)	0.91	1.4		29
F(2)	3.9	4.7		86
F(3)	80
F(4)	33% @ 50
F(5)	31% @ 50
F(6)	34% @ 50
F(7)	114
F(8)	1.9			22
F(9)	7.8	9.6	12% at 1 μΜ	21	>10

Poznámky: * - určeno ELISA testem místo spektrofotometrickým testem *♦· ·

201 ·· ·* • · * 4 • · ·»4 ·

Tabulka 2

Příklad	FLVK-P Κ(μΜ)	LCK Κι(μΜ)	CHK-1 Kj(gM)	FGF-R Κ (μΜ)	CDK2 Κί(μΜ)	CDK4 K> (μΜ)	HUVEC ICso (μΜ)	MV522 ICso (μΜ)
A(l)	1.4*		NI @20			4.6
A(10)	0.028			45% @ 5	13.4	9.1
A(ll)	NI @ 1000				NI@ 100	33% @ 100
A(12)	0.034			190	6.7	2.7
A(13)	0.81*		11% @ 5
A(14)	1.9*				3.1	7.0
A(15)	25*				2.7	7.8
A(16)	0.022*				0.22	0.98
A(17)	0.003	21% @ 1		2.4	2.1	29	>1.0	>10
A(18)				38% @ 5
A(19)	0.004		0J9
A(2)	2.9*				1.8	7.3
A(2O)	0.007	. 24% @ 5		420	0.71	66	0.58	0.49
A(21)	8.8*				8.2	45
A(22)	0.021		54% @ 5
A(23)	0.039	34% @ 5		47% @ 5
A(24)	5.5*				3.4	64% @ 10
A(25)	0.10*		0.29
A(26)	0.014			52% @ 5			>1.0	7.5
A(27)	38% @ 100*				3.2	31
A(28)	131*				13	24
A(29)	0.078	10% @ 5			6.4	13	>1	>10
A(3)	64*				2.5	8.4
A(30)	0.11				4.8	22
A(31)	31% @ 5
A(32)	21% @ 5
A(33)	22% @ 5
A(34)	43% @

202

	5
A(35)	390*
A(4)				57% @ 10	42% @ 10
A(5)				27% @ 10	30% @ 10
A(6)				36% @ 10	54% @ 10
A(61)	24% @ 1			2.7
A(62)				0.53	4.4
A(63)				2.0	20
A(64)				0.52
A(65)				0.15	2.1
A(66)				1.1	NI @ 1
A(67)	0.11			0.015	0.67
A(68)				0.13	4.5
A(69)				4	7.2
A(7) ·				25% @ 10	28% @ 10
A(70)				NI @ 100	NI@ 100
A(71)				29	190
A(72)				0.16	48% @ 5μΜ
A(73)				36% @ ΙΟΟμΜ	NI @ ΙΟΟμΜ
A(8)	0.058*			0.80	0.42
A(9)	1.9*			29% @ 100	NI @ 100
B(3)	NI @ 300
B(4)	0.2
G(9)
C(2)	49% @ 1
C(3)				2.7	4.6
D(2)	98
D(3)	0.063
E(4)				8.8	21
G(l)	57*				50
G(2)	18% @ 100*				5.7
G(3)	13% @ 20*		-		6.2
G(4)	42% @ 300*	NI@ 100			11.4
G(5)	NI @ 1000*

• »

203

G(6)	NI @ 300 μΜ					100
G(7)	1.6*				21% @ 10	NI @ 10
G(8)					18	31% @ 100
H(l)	3.6*				0.65	3.8
H(2)					10.4	11
H(3)	6.1*				8.8\| 1.7
H(4)					2.6	2.1
H(5)					29% @ 100	NI @ 100
H(6)					0.2	1.2
1(1)	>100						61
1(10)	15% @ 5
1(11)	0.53
1(12)	71% @ 20
1(13)	1.25*
1(14)	1.17*
1(15)	73*
K16)	178*
1(17)	35*
1(18)	2.7*
1(19)	34*
1(20)	46% @ 100 μΜ
1(2)	NI @ 600*					Nl@ 100
1(3)	40% @ 300*					NI @ 100
1(4)	NI @ 100*					NI @ 100
1(5)	0.77*		NI @40			47% @ 100
K6)	0.1		NI @ 40	22
1(7)	5.2*
1(8)	12% @ 5
K9)	0.083
J(l)	64*					NI @ 100
1(2)	53*					29% @ 100
K(l)	0.006	42% @ 1			0.62	6.7	0.95	5.4
1/1)	NI @ 1000*

• · • 9 ·♦© ·

U3)	NI@ 300 μΜ
L(2)	NI @ 300*
M(l)		Nl@ 100	Nl@ 100

Poznámky: * = určeno ELISA testem místo spektrofotometrickým testem

Tabulka 3

Příklad	FLVK-P Ki (nM)	FLVK Ki (nM)	LCK Kj(nM) (%inh @ 1 uM)	CHK1 Ki(nM)	FGF-P Kj(nM) (%inh @ 1 uM)	CDK2 Ki (nM)	CDK4 Ki (nM)	HUVEC IC» (nM)	MV522 IC» (μΜ)
D(67)		pomalá vazba	1		13			4.1	>10
D(70)	91% @ 50 nM	35	61		59			5.4	>10
B(9)		036	91		78
B(34)		88% @ 50 nM
B(8)		0.1
B(27)		0.3
B(10)		0.13
B(ll)		0.7
B(30)		0.085
B(29)		0.9
B(28)		3
B(32)		1.8
B(31)		5.1
B(33)		82%
B(26)		2.8
0(31)		0.23

i

205 ·· ·· * · · · » · ♦ • · • * 9·9 9

N(l)	24% @ ΙμΜ			NI @25 μΜ		2700
N(2)						120	1300
N(3)						100	1100
N(4)						58	480
D(66)		1	15		55			4.2	>10
04	87% @ 50 nM	0.19	3		9			0.64
0(10)		94						6.7
0(3)		0.57
0(2)		0.33	7		28			0.58,1.9
0(1)		0.28
0(5)		0.22
0(6)		0.15
0(7)		0.16						5.2
0(8)		0.21
0(9)		0.42						4.3
0(11)		0.45						14
0(14)		pomalá vazba	0		10			16
0(24)		22% @ 50 nM
0(23)		29% @ 50 nM
0(22)		1.5
0(21)	61% @ 50 nM	1.1
0(20)		pomalá vazba
0(19)		pomalá vazba
0(18)		pomalá vazba
0(17)		pomalá vazba

I

206

0(16)		11% Φ 50 uM
0(15)		05	2		28
0(13)		pomalá vazba						140
0(30)		39% @ 50 nM
0(29)		pomalá vazba
0(32)		pomalá vazba
0(28)		0.29
0(27)		1.7
0(26)		1.4
0(25)		28% @ 50 nM
D(65)		1	95 91		37			4.3	2.1
D(73)		1J	41		56			6	4.45
D(72)		0.9	35	NI	49	NI	NI	4.7	>10
D(74)	91% @ 50 nM	pomalá vazba	92		61			5.2	2.9/13
B(36)		0.56	72		23
B(35)		0.26	34		39
B(7)		61% @ 50 nM
D(63)		51% @ 50 nM						>10000
D(64)		1.4	3.2 9.4		84			10-100	2
D(75)		pomalá vazba	1.1 97		64			7.8	0.75/2.0
1X76)		2.7						>1000
F(10)		0.14	42		47			8.5	0.27/ 0.74
B(14)	13% @ 50 nM	0.76	10		46			11	>10
B(12)		1.6	29		52			15	. 3.6
D(69)		05	79		78			15	25

i

Hi ,t is ·· · · • ♦

207 ««·*

F(ll)		0.26-	15		25		12	9.6/>10
B(16)		3%@ 50 nM
B(18)		0.9	NI		8%		10	1.9
B(20)		80%
0(12)		0.19	21		33		45	4.4
F(13)		0.25	29		25		16
F(14)		0.36					150
F(12)		2.2					>300
B(6)		0.61					56
θ(61)	pomalá vazba	4		9		165	>10
D(77)		2.6
D(78)	9%@ 1 μΜ
D(59)		2.8	44		54		>100	3.1
D(60)		1.4	11		10		>100
D(68)		0.69					>100
D(71)		4.1
D(58)		1.4	29		23		>100	>10
B(17)		3.4					63	1.3
B(23)		1.7
B(24)		2.1
B(21)		10% @ 50 nM
B(22)		54% @ 50 nM					>1000
B(19)		36% @ 50 nM
B(25)		29
B(39)		6.3					>100

• ·

208

B(40)	31% @ 1 μΜ
B(41)		0%@ 50 nM
B(42)		12% @ 50 nM
B(43)		11% @ 50 nM
B(37)		36% @ 50 nM			>1000
B(38)		13% @ 50 nM			>700
C(8)		21% @ 50 nM			>700
C(7)		17			300
B(13)		13			300
B(15)		1.7			100
C(5)		15% @ 50 nM
D(62)		20% @ 50 nM			500
C(6)		33			300
C(9)		8			300
C(4)		3%@ 50 nM
B(5)		2.3
F(15)		5%@ 50 nM
F(16)			480	35% @ 5μΜ

-s ( Výsledky CHK1 vysoúěinného skríningu jsou uvedeny v tabulce 4

Tabulka 4

Příklad ¹	% i inhibice @ 20 uM
A4	-10.2
A4	17.9
A5	-16.1

Ji ·♦ • 9

209 ·♦·«

A5	25r3
A6	-10.2
A6	25.4
A7	-16.6
A7	19.3
A8	-6.2
A8	57.4
H3	16.9
H3	10.3
H4	0.9
H2	-1.7
A16	35.4
A21	-7.2
H5	13.4
A70	3.8
G8	-4
G8	-4.8
G8	-3
G8	-3
C3	-3.7
C3	2.9
C3	-3.7
C3	-3.7
A69	4.8
A69	2.7
A69	3.8
A69	3.8
A63	3.8
A63	5.4
A63	9.8
A64	1.1
A64	7.2
A64	8.3
A66	3.6
A66	6.6
A66	9.1
A68	-0.7
A68	-4.4
A68	6.1
A62	7.4
A62	12.2
H6	17.4
H6	15.2
H6	6.5
A67	15.3

i t

• 0 « 000 * »0 ·♦ · · *

0 *

0 ·

0 0

0 00 0 0

2ΐθ

Α67	6.9^-
Α67	4.2
Α65	3.2
Α65	2.5
Α65	8.2
Ε4	5
Ε4	6.4
Β5	10.7
Β5	1
Β5	9.7
F16	' 4.3
F16	7.6
Α73	14.3
Α73	14.4
Α73	7.3
Ν3	5.2
Ν3	2
Ν3	5.8
J2	16 ·
J1	20.8
Ι3	20.1
14	19.4
12	16.1
15	3.3
16	9.6
Α24	13.3
17	4.1
17	-3.1
112	5.3
112	-0.6
Α1	36.6
Α1	49.8
Α2	2.6
Α2	7.6
Α3	2.8
Α3	-1.9
Α15	-4.1
Α15	-1.2
113	11.3
114	11.9
115	-1.5
115	14.8
119	-1.3
119	-2.7
116	13.7

φφφφ φ φ • φ

211 φφ

• φ ·♦ φφ φφφφ * · ϊ · • φ φ I · φφφ

999 ΦΦ ·ΦΦ·

··

212

9999

L fc fcfcfc

213 « ·♦·· fct * • fc • · • · • fcfc · fcfc· • fc fcfcfc • fcfc fcfc «fcfcfc

D31	Ο.β'
D31	8.8
D32	1.7
D32	13.8
A38	9.1
A38	9.8
A39	2.2
A40	1
A41	3.8
A53	4
A56	-2.9
A58	-7.2
A55	0.1
A52	2
A42	-0.1
A43	-3
A44	-7.1
A45	-1
A46	0.9
A57	-6.1
A48	1.3
D33	-0.3
P34	-0.3
D35	4.5
D36	2.5
D37	4.2
D38	8.4
D39	-1.4
D40	17.7
D41	12.6
F9	15.3
A49	14.1
D42	1.8
A50	30.1
B2	5.9
D44	0
D45	2.4
D46	3.9
D47	1
D48	8.5
D49	4.9
D50	5.6
D51	3.8
D52	25.9
B40	8

• ftftft

214 • ft « ft ♦ ··

♦ · • * ·

215 • ···« ·· · • 9 99

Λ 9 9 9

9 9

9 9 • 9 9999

Β41	7.3^
Β41	12.9
C5	4.7
C5	2
C5	3.7
F13	9
F13	11.3
F13	12.9
Β14	8
Β14	1.5
Β14	2.8
C9	14.8
C9	5.5
C9	16.5
F14	14
F14	10.2
F14	18.1
Β15	9
Β15	4.1
Β15	9.1
Β6	4.6
Β6	-2.1
Β6	-1.3
C6	24.5
C6	5.4
C6	4.4
D74	11.3
D74	3.1
D74	14.3
D75	9.3
D75	4.9
D75	18.8
Β42	4.7
Β42	0.4
Β42	9.5
Β43	8.1
Β43	2.8
Β43	11.8
Β16	82.8
Β16	78.9
Β16	55.4
Β16	38.6
Β16	29.1
Β16	77.5
Β16	82

····

999

216

03	17rt
03	24.5
B21	4.5
B21	20.6
B35	4.4
B35	14.1
B36	6.2
B36	15.1
B25	3
B25	10.3
B26	7.5
B26	13.3
B27	-1.4
B27	1.3

Výsledky FAK vysoúčinného skríningu jsou uvedeny v tabulce 5

Tabulka 5

Inhibice FAK při 10 μΜ sloučeniny
v HTS Delphia testu	inhibice FAK
i Příklad	%
A4	6
A5	10
A6	0
A7	2
A8	17
H3	19
H4	6
H2	18
A16	36
A21	26
H5	42
H5	17
H5	3
H5	3
A70	11
J2	-7
J1	-4
I3	3
I4	-5
I2	-6

4444

211

15		-2
16	12
A24	7
17	-1
112	-3
Á1	5
A2	8
A3	-9
A15	0
115	3
I 19	57
119	7
119	5
A28	4
I20	-2
A27	2
A9.	4
ΑΤΟ	-4
A11	15
A12	8
A17	-2
A23	4
C1	-2
A18	29
D1	-3
D2	26
D3	20
A20	20
D4	17
D5	7
D6	23
A13	12
A19	37
D7	23
D8	8
D9	22
D1O	4
D12	29
D13	12
D14	23
D15	17
D16	17
A22	13
A25	57
A25	90

218

444 4 • ·· 4 · • 4 ·· • 4 4 * ·· * »4 4444

Α25		88
Α25	88
Α26	17
D17	24
D18	14
D19	7
D20	25
Α31	27
Ι8	12
Ι8	12
Ι9	26
111	-18
Α32	-3
Α33	-17
Α34	-13
Α35	-10
D21	-1
D22	2
D23	-12
D24	-4
K1	17
Β4	49
Β4	36
Β4	11
Β4	46
84	32
Α29	-8
D25	6
D26	51
D26	19
Α30	-16
Α36	-6
Α37	-2
Α38	83
Α38	23
Α38	12
Α39	-10
Α40	-6
Α41	97
Α41	18
Α41	12
Α53	-10
Α56	-7
Α58	-9
Α55	59

.ύϊ.Άήέ*.·'*.

,χΐ

219 ·· «

·· · ···· ·· 9 • ft • ftft • · · <

ft · · *· ftvft • ft • ft ftft ft ft · ft · • · • ftftft

A55		11
A55	16
A52	9
A42	-15
A43	-19
A44	-15
A45	-13
A46	-14
A57	-18
A48	-2
D33	-7
D34	-9
D35	-19
D36	1
D37	-6
D38	-14
D39	-21
D40	-6
D41	-19
F9	-13
A49	-13
D42	-5
A50	-14
B2	-17
D44	-9
D45	-9
D46	-14
D47	-19

í Přiklaď	% inhibice
A4	-7
A4	-10
A5	-8
A5	-10
A6	-15
A6	-16
A7	-10
A7	-9
A8	-12

i ····

220 ·· *· • · · · • · * • · * • · · ·· ····

A8	44
H3	-11
H3	-9
H4	-2
H4	1
H2	0
H2	5
A16	94
A16	96
A21	4
A21	4
H5	4
H5	2
A70	-11
A70	2
G8	-16
G8	-30
C3	-19
C3	0
A69	40
A69	15
A63	-6
A63	-24
A63	-22
A63	-23
A64	Ί O CM 1
A64	-34
A66	1 ω 00 i 1_
A66	-39
A68	-18
A68	-18

221

A62	7
A62	6
H6	-13
H6	-30
A67	-29
A67	-33
A65	-31
A65	-39
E4	9
E4	17
B5	-4
B5	-13
F16	-13
F16	-16
Α73	-23
Α73	-30
Ν3	-12
Ν3	-17
J2	-2
J2	-10
J1	-8
J1	-13
I3	4
I3	-5
14	11
14	-1
12	19
12	6
15	6
15	0
16	6

222

»· · · · · • · « • · « • · · « • · « • ·· • * 99··

16	J5
A24	-4
A24	-13
B3	30
B3	26
17	9
17	19
112	-7
112	-7
A1	-4
Α1·	82
A2	-9
A2	5
A3	•9
A3	3
A15	-9
A15	-7
113	-2
113	-7
114	-24
114	-23
115	-7
115	-11
119	-5
119	4
116	-3
116	-1
A28	-14
A28	-8
I20	9
I20	7

I

223

·· ····

A27	-44
A27	-11
J18	3
J18	-8
A9	-6
A9	-5
A10	-2
A10	-5
A11	-8
A11	-10
A12	-16
A12	-16
A17	33
A17	9
A23	-5
A23	-6
C1	8
C1	11
A18	25
A18	32
D1	2
D1	13
D2	-3
D2	7
D3	-4
D3	0
A20	46
A20	56
D4	-3
D4	-5
D5	-1

• »· · * ·

224 ·»

····

D5	47
D6	-2
D6	-3
A13	7
A13	27
A19	76
A19	86
D7	-6
D7	-1
D8	-5
D8	12
D9	*8
D9	-10
D10	-5
D10	5
D12	-7
D12	-10
D13	-8
D13	-1
D14	-9
D14	-10
D15	-3
D15	-6
D16	-2
D16	4
A22	35
A22	38
A25	60
A25	47
A26	72
A26	72

f

I ř

f

I

225

• fcfcfc·	fc ·	fc	fc· A»
• ·	• ·	fc ·	fc fcfcfc
• ·	• «	•	fcfcfc
fcfc «	·»	• fcfc	• fc ··’ ·

D17	-40
D17	-10
D18	-6
D18	-9
D19	-4
D19	-10
D20	-6
D20	-10
A31	-6
A31	-7
110	8
110	-1
I8	9
I8	-1
19	45
19	35
1 11	30
111	25
A32	8
A32	11
A33	2
A33	4
A34	-3
A34	-8
A35	'5
A35	-9
D21	0
D21	¹⁰ ·
D22	-6
D22	24
D23	-6

226

D23	-1
D24	-4
D24	-7
K1	92
K1	96
B4	56
B4	43
A29	-6
A29	-11
D25	-9
D25	1
D26	-2
D26	0
A30	-3
A30	9
A36	-11
A36	-15
A37	34
A37	37
D27	79
D27	86
D28	-15
D28	-7
D29	-2
D29	-9
D30	-24
D30	-18
D31	-11
D31	0
D32	-20
D32	-13

• ·

227

H3	-6
H3	-9
A39	2
A39	7
A40	-6
A40	-6
A41	-6
A41	-9
A53	-8
A53	-10
A56	8
A56	3
A58	6
A58	0
A55	-3
A55	-7
A52	1
A52	-6
A42	-1
A42	-8
A43	6
A43	-2
A44	-5
A44	-10
A45	-4
A45	-6
A46	-2
A46	-9
A57	2
A57	-7
A48	-8

'Si !s

228

A48	-8
D33	-3
D33	-7
D34	-1
D34	-5
D35	8
D35	4
D36	19
D36	6
D37	-5
D37	-8
D38	2
D38	-7
D39	22
D39	8
D40	-2
D40	-10
D41	0
D41	-7
F9	24
F9	14
A49	-7
A49	-10
D42	1
D42	-10
A50	8
A50	2
B2	13
B2	2
D44	58
D44	56

•sp·.' ?»··« '

····

229

D45	47
D45	10
D46	27
D46	19
D47	51
D47	46
D48	22
D48	24
D49	75
D50	42
D50	44
D51	16
D52	-26
D52	-13
B40	-26
B40	-29
D78	-22
D78	-15
F2	-18
F2	-15
F1	19
F1	25
F4	-10
F4	-15
F5	-16
F5	-10
F6	-14
F6	1
D53	-15
D53	-2
F8	81

· ]

···· • ·

230

F8	82
D56	73
D56 '	71
F7	-2
F7	-21
D55	-14
D55	-35
D11	-25
D11	-41
B5	34
B5	33
C4	-5
C4	9
D72	65
D72	69
D73	69
D73	73
D63	-130
D63	-126
B12	43
B12	44
C7	⁵⁵
C7	57
D64	92
D64	93
D65	94
D65	93
B13	30
B13	36
C8	33
C8	35

231 ·· · ·

• · · ₉ ·· ·· · ·

D66	79
D67	73
D67'	75
D58	-14
D58	-12
C9	-19
C9	-16
C60	-11
C60	-9
C68	*8
C68	-7
F12	-9
F12	-14
B41	00
B41	-26
C5	-6
C5	-11
F13	54
F13	56
B14	-11
B14	-17
C9	19
C9	18
F14	2
F14	-2
B.15	5
B15	-2
B6	11
B6	10
G6	¹⁹
C6	11

232

D74	96
D74	94
D75	92
D75	91
B42	-7
B42	-11
B43	-16
B43	-17
03	31
03	42
B21	-3
B21	2
B35	96
B36	91
B36	93
B25	•6
B25	0
B26	76
B27	91
B27	94

Protokol syntézy pro kombinatoriální příklady v tabulkách A-D

Čtyři stavební bloky pro knihovnu - 2—(4— aminosulfonylfenyl)amino,4-aminothiazol-5-karbothioamid, 2- (4dimethylaminofenyl)amino,4-aminothiazol-5-karbothioamid, 2(3,4,5-trimethoxylaminosulfonylfenylamino,4-aminothiazol-5karbothioamid a 2-(4-isopropylfenyl)amino,4-aminothiazol-5karbothioamid - se syntetizovaly podobným způsobem jako je stupeň (i) a (ii) v příkladu A.

·· · · • ♦ · * • * * « · ♦ • · · ·»··

233

Všechny sloučeniny v tabulkách A-D se syntetizovaly stejně jako v příkladu A() s výjimkou: zásobní roztok odpovídajících 4 karbothioamidů v 10% DMF/methanolu se distribuoval do 96jamkové plotny tak, že každá jamka obsahovala 5 μιηοΐ materiálu. Potom se 5 gmol 63 α-halogenidketonů přidalo do jednotlivých jamek každé plotny. Potom se reakční plotny třepaly při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a pak se do každé jamky přidalo přibližně 10 mg Merrifieldovy pryskyřice a 10 mg N-(2merkaptoethyl)aminomethyl polystyrénové pryskyřice. Reakční plotny se třepaly po dobu dalších 2 hodin. Reakční směs se potom přefiltrovala filtráty každé reakční jamky se přenesly jednotlivě do nové 96-jamkové plotny. Sloučeniny se získaly po odstranění rozpouštědla.

Tabulka A

Příklady	VEGF°	CHKl^b	CDK2^e	CDK4^d
	34	47.7	-10.3	65.4
	3	9.2	11.6	-1
	57	•46.3	7.3	33.1
	26	32	-0.2	18.3
	24	49.5	-4.8	35.1

«· · · ··

234

	38	23	12.4	31.3
	-2	20	-3.5	-5.1
	19	3.7	-2.1	1.9
Γ	-5	9.9	4.9	-19.9
/£/φτ	18	11.2	0.1	-6.9
c££[	3	6.1	12.2	17
ž£j£p	41	15.3	-13	3
τ£ρ'ρ>ρ	27	2.7	23.2	-4
£λ£ο	25	36.6	1.9	11.6
</* £	*8	15.2	-14.4	-5.6
o£ď^£	3	11.7	-4.4	-17.8
	-2	18.7	20.4	-4.7

« ·

235 z

fc fcfcfcfc fcfc * fc · : * • · · * fcfc «» • fcfc * fcfc* fcfc· • fc · fcfc ···»

	18	10.3	15.6	-0.3
	32	31.3	3.8	23.7
	26	17.9	13.6	19.5
^U^/50	22	32.9	5.4	-16
	53	48.3	35	32.3
	-4	22.3	14.6	2.2
	53	31.3	14.3	24.5
	26	16.5	-5	-27.6
	-6	8.8	6.6	-14.9
H^X^T^e	1	12.1	^7,3 ,	-31.7
oSzQ/^	66	48.3	3	17.5
	38	27.9	28.4	.7.8
o£zQ?£	50	48.8	10.3	32.3
o£zQr2	47	12	1.2	-7.3

V í

ě' .1¼.

ifc to

236

« 9 ♦··

	59	41.9	26.7	26.4
CČ·	22	23.9	-12.3	-14.7
cál^yO	23	21.1	-0.2	-40.1
f*' P ? Μ Η-/⁴ Υι⁴	49	. 56	11.8	36.4
	34	34.1	19	13.7
AArŤ	56	48.7	7.3	37.1
	38	29.4	1.7	11.7
	52	38.1	12	31
SM/íS.	17	22.4	4.2	-3.4
CáLtAyO^	-1	8.5	13.9	-17.7
A, ”,O. a'-	20	31.9	-7.8	-14.6
	37	0.5	4.6	-21.1
	-3	10.4	13.8	-9

:

« · ♦ ·

J

237 φ· φ

• φ • · · · · s ·:

	η	21.6	-2.7	20.2
	16	4.7	23.1	-24
	-π	25.3	5.3	-0.1
ο£ζφο	46	14.1	-1	-18.7
	34	21.2	-0.4	-48.1
	35	41.4	4.4	22.8
:/£ζφΧ	51	48.3	19.8	50.6
	14	2.7	11.2	-19.9
íCáLcQróC	27	30.9	-7.5	8.2
	-3	0.9	17.5	-10.4
sAtčjyc/'	-13	8.9	11.3	-34.4
OW<r9	50	-7.4	1.6	-8.4

··>,

····

238 »· *» ► · · ' ♦ , ····

	26	26.2	-6	4.7
	60	32.5	-12.1	28.7
	-5	1-3	6.3	-4.5
	41	13.2	9.1	11.5
	15	6.4	3.9	29.3
	3	25.4	-6	-Ó.5
íOX^yÓ	19	13.5	15.6	-10.5

•Μ φ· φ

239 *· · · φφ *· φ · * • * « φ φ φ φ* φφφφ

Tabulka Β

Příklady;	VEGF®	CHKl^b	CDK2^C	CDK4^d
_Λ Ή X >>	49	28.5	55.9	57.2
	12	7.8	25.5	-8.9
AWýJÓ	34	26.6	68.2	59.6
VW° I- Br	6	7.9	60.5	56.4
^OU^yOCj-	-2	13.1	17.6	-28.2
z~*^	-2	3.3	21.4	25
	21	18.7	18.9	16

240 *« * * * « « * • * · ·« 99

	33	-2.1	20.5	-9.6
	3	-3.9	12.5	-1.2
	27	4.4	18.5	10.9
	8	-2.3	28.4	41.2
	48	6.9	10.7	9.3
	3	1.1	29.8	-13
“-W/o	47	25.6	55.4	57.8
Ήκχ	3	11	27.7	-16.3
XxíqA	2	15.9	8.3	-28
	-3	12.3	11.2	-11.3
	13	3.7	13.3	16.3
	32	14.7	63	79.2
	-2	2.9	-4.5	-3.9

t , í ! : i ) í >F

i

Jí

	29	20.1	21.4	31.8
	43	33.7	74.7	61.2
-of.,'/'	8	4.4	20.7	-27
	13	13.6	14.6	39.7
	38	17.5	12.4	-5.3
'W^Oy	30	10.8	17.8	-28.6
	9	11.7	1.3	-3.1
	56	18.7	57.9	51.3
	25	13.4	40.7	46
	11	19.8	66.8	58
ς ' oV^i Cý	50	0.2	19.6	-13.5
	11	11.3	51.6	65
	43	6.8	37.2	-1.9

í

I i

) í

	23	11.2	8.2	-33.4
	29	25.6	69.5	62.5
	* 18	18.3	45.7	57.5
	23	28.4	67	59.9
	11	10.7	54.2	40.9
	19	9.7	56	70.6
-»A<	-2	13.1	35.9	31.8
	2	4.2	4.5	-3.6
Χχζ^χσ⁰	7	15.3	56.6	42.2
	9	-1.6	29	2.3
':+.^i;	-2	1.3	14.1	-3.5
	3	9.7	61.4	53.4
	3	5.6	9.2	-0.3

·· ·♦ » * « <

243 ··©·

	-9	17.5	25	17
	34	12.3	60.8	43.3
	23	15.2	5.9	-4.2
^Λ;Ά?	9	11.4	52.6	53.3
	33	29	77.2	64.1
'^ou^_ro_X)	-1	-1.2	12	-0.5
~W_rA	5	21.1	68	75
	-5	0.5	16.1	-31.3
‘^α^_Γα^/Γ	-13	10.8	-9.9	-7.2
'⁵W_a^,	33	-7.3	25.4	-4.8
	9	21.7	53.9	58
^ζφτ	40	21.6	74.1	58.2
	10	ό.Ι	34.8	29.3

··

244 »·

9» · · ·

9

9999

'XX	10	0.4	48.9	44.1
	' -4	3.3	23.2	14
•Vk/’ /-\	-4	13.6	16.6	-15
	15	16.4	17.6	-0.3

Tabulka C '•'*5

-¾

Příklady ,	VEGF®	CHKl^b	CDK2^e	CDK4^d
	28	31.6	23.8	62.7
	-2	10.7	17.2	51.2
	50	27.4	17.5	76.5
	25	9.2	26	84.7

i • 9 ·· • 9

245

9*

Μ 9· » · · ¹

99··

* 0’	7	23.5	14.2	71.5
	3	-7.9	15.1	49.7
-/.A	-13	15.6	6.3	53.3
	-2	0.8	14.2	55.9
	-10	1.8	-22.6	38.2
	-2	-0.2	10.8	53.1
’ ^ÓO\	12	-5.2	12.2	79.4
'VcqX	19	4.7	27.8	60.9
	9	-5.7	15	28.7
	16	32.2	17.7	63
	-4	6	17.8	35.6
	-7	9	11.7	9.1
	-9	3.2	9.6	0.7

·· ··*· ♦

246 *

» ···

	7	7.1	5.9	58.4
	23	21.4	25.7	81.4
	5	-0.9	Π.1	49.8
	14	23.8	22	50.6
	48	39.8	16.1	80.7
'Éui^	-4	7.5	7.3	45.9
‘’'ί.;ί_;,Λ	22	17.6	19	53.3
	5	10.9	21.2	39.5
T‘	-2	7.2	24,7	35.3
	-4	0.3	10.4	-7.9
	49	25	10.5	77
	45	5.1	14.1	74.6
•W O	30	19.3	12.5	72.7

• 9 » 9 9 ’

247 ····

0· • 0 9999

	14 ·	-2.5	23.3	50
	33	13	21.8	61.8
o⁴·	S	8.8	21.7	48
	-4	4	23.3	-42.5
°>l	51	38.9	31.8	72.8
	39	18.9	-4.3	75.5
	47	32.3	38.6	79.6
r· s· j	12	14.2	38.3	79
	42	17.8	31	79.9
	19	11.6	5.2	74.4
	-4	3.7	8.7	48.3
	21	20.9	29.1	59.5
	7	-4.2	4.8	56.1

fcfcfc*

248 fc fc·· ·· ·· i fc ♦ * i · * » · · •fc ··»·

•W<jcg	13	6.5	6.2	61.4
	15	14.1	26	85.1
*w?	5	-4.7	4	2.4
	-6	7.9	20.9	46.8
	22	0.2	18.5	59.4
	10	3.8	16	49.3
	26	26	29.2	81.6
	59	34.9.	39.9	84.7
	13	-4.7	2.4	50.4
	18	22.8	28.2	88.6
	-5	-9	18.5	-26.5
	-14	0.7	3.6	10.3
	14	-12.8	6.6	44.3

«·

249 • *·*» • 9 · • * • · • · «·· 9 •9 • · •99 • 9

9 · *

9 ·

9···

	31	14.8	26	86.2
	46	19.7	30.6	91.5
	9	-5.3	12.2	73
	25	-4.3	9.3	72
	-3	0.7	10,1	37.8
''ÁtyP'	-n	3.4	17	33.2
	5	12	14.6	48.1

Tabulka D

Příklady	VEGP³	CHKl^b	CDK2^c	CDK4^d
	34	46.5	16.8	53
	5	19.6	26.9	45.5
	32	43.9	24	64.1
	18	22.8	17.6	69.1

ii’ í&‘.

·. !w

I

250 ♦··:

I · ·· ·· «* • · · s • · · · • · · • ·· ····

”^:,··Α·χ	-2	16	4.1	59.8
	5	-7.6	17.7	35.6
	0	14.8	-6.4	8.7
	16	15.2	17.7	61.6
Χχ·	1	3.1	6.7	35.4
'Wcr©'	10	2.5	11.2 ·	36.5
	13	14.1	15.6	68.7
'^;-,.;'·γ''^?	13	2.7	6.1	19.1
	9	-4.5	13.4	33.7
	17	39.5	8.3	46.2
	8	17.8	22.1	50.4
XáRÁ	2	16.6	11.7	15.2
	-12	5	14.5	-12.6

251 ·· · ·

	n	8.2	14.3	36.4
''WoY	19	26.9	17.3	76.1
-Wí%	25	8.1	8.3	59.8
	16	40.8	5	56.5
	41	41.7	34.8	56
-w<X	-4	5.5	8.7	49.4
Χ.ΧΛ	28	32.5	31.7	63.6
	8	4.2	3.3	8.1
'WjA-	6	13.8	17.1	27
	0	5.1	9.2	-6.5
	46	47.1	26.6	66.8
ÚXrgA	24	27.2	29.8	52.4
	35	41.4	33.3	64.4

φ φ

252

Φ

I* •Φ ····

	21	-0.9	16.1	23.3
	28	38.1	6.3	69.4
-Wcrgi.	16	23.3	0.6	57.5
	17	13.1	17.2	-48.3
	36	41.1	24.1	69.3
	27	29.3	38.3	63.5
	31	41.9	17.1	64.3
^:'·.<,·λ	23	34.8	29.8	83
	29	26.8	37.3	65.1
'2ν-χ(ν	18	32.9	3.1	74.4
	5	13.1	33.4	60.3
	20	32.7	-2.5	43.7
•w	23	9.8	27.1	48.5

253 • * • · • · • · ·

··· · • 9 ··

''εκ	H£ 'X.	17	18.8	20.5	70.9
J*	'^S)^ST^,,'‘L -	14	26	24.6	81.8
*<ΓΧ j	►n EZa	26	3.2	23.3	12.1
	*v\>% Wr	6	37.1	18.3	73.2
	?v	30	17.5	19.7	65.1
--v-x.	10	7.8	16.3	-20.3
«/\A	25	38.5	19.8	45.9
	*% j 1	33	37	33.9	62.7
	5	0.8	24	29.6
P*· ^Cu	F	9	27	8.2	76.5
r*	>Λ-'^;	1	-2.8	12.6	-17.5
	-3	9.5	-6	36.2
0>	24	-4.6	27.8	48.5

ί ►

φ • · ·

254 • * »· ····

	26	37.5	29.1	82.6
	34	25.2	20.3	64.3
5χ<ςΧ	16	17.4	14.6	57.8
	22	12.6	23.5	57.7
-WX	3	5.2	36.7	45.2
'^^u^KCk	-3	7.6	16.9	29.6
	17	14.2	29	30.1

_α, 4 % inhibice při 20 μΜ
b. ’ % inhibice pro 20 μΜ j
C. j % inhibice při 1,0 μΜ
d. % inhibice pro 1,0 μΜ

I

255

Kombinatoriální postup pro syntézu močovinou funkcionalizovaných thiazolových derivátů a inhibice proliferace HUVEC

r-nh₂

DMF, Et₃N, 24h

Rs _N__rNH₂ “Ar

Roztoky 263 aminů (1,5 μιηοΐ) a Et3N (0,1393 μΐ, 1,0 μιηοΐ) rozpuštěné v DMF (15 μΐ) se rozdělí do jamek 96-jamkové plotny. V případě, že amin je použit ve formě hydrochloridové soli, se přidá další Et3N (0,4179 μΐ, 3,0 μταοί) pro uvolnění volné baze. Každá z jamek se zpracuje roztokem p-karboxyfenolkarbamátu (0,53 95 mg, 1,0 μιηοΐ) rozpuštěného v DMF (302 μΐ) a potom se provede třepání po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Surové reakční směsi se zahustí za použití GeneVac^(tm> přístroje a potom se naředí DMSO na konečnou koncentraci 10 mM, za zisku sloučenin uvedených v tabulce E.

»·

256

Tabulka Ε

Inhibice proliferace HUVEC
vzorec molekuly	%inhibice © 10 nM	%inhibice @ 50 nM
	28	62
	7	126
	-5	33
	CO co 1	39
AvřoA\y	-13	29
	-3	3
	19	83
	25	18
crA^íťrAr^y	46	87
	28	123

257

259

260

		14	3
	-5	62
	-7	45
	ťl °χτ	12	25
	Ol	-1	-23
*^y£<A\y	35	97
Y> ⁰ N—<	Γη °	38	No data
AíQr	w	19	23
yMr	kli j íQT	42	23
	Ayy	-15	15
ων^ήγ	-29	108
MVřůAv	12	28

r t

• · · ·

261

• ·

262

»4 4 4

263 *4 44 · 4 *

• 44

4 ·· 4 4

··♦· ·· · 99 99

9 9 99 9 9 9 9 • · · · · 9 9 9 •99 9 »· ··« φ» 9999

264

111

I

105

265 «· ·· • · « · ·· ·«♦·

• 9·· • · ·» ·· • « · • · • · ,ϊ. ϊ *·.* ·Σ· *·** ·*··

266

267

«ι«φ

4« ·· » 4 4 » ·

268 »· 44« * 4 44t 4

100

110

269 φφφφ

··

φφ φ

• · φ φ · φ φ • φ • · · *« ·Φ··

q^VSA

θ'

100 ····

270

4·	··	·· v •	9 9	·€ •
• •	• •
•	•		9	9	•
»«		···	99		···

·<»·-

4 4 4 4 4 4 4 44 44

4 4 * 4 4 · · ·

271

444 4 44 444 44 4444

i • . · · >

» · ·

9 9 99

272

Inhibice proliferace HUVEC vzorec molekuly %inhibice ® 50 nM

273

F,

104

o—π

J> 61

A*

• · · ·

ť

• ·

• · · · • · ·

ϊ

276 • · · ·

*

^οΛα

277

·· * '0 0 00 • · 0 · ····

218

«· ř

HO.

0,._A° HO'

o¹ ř

• · · ·

279 ·· «φ : : · j

280

Kombinatoriální postup pro příklady uvedené v tabulce I

0,1 M roztoky kyseliny, aminového templátu, o-(7-azabenztriazol-l-yl) -N, N, Ν', N'-tetramethyluroniumhexafluorfosfatu a triethylaminu se připraví samostatně v DMF. Do každé zkumavky v sestavě 8x11 kultivačních zkumavek (10x75 mm) se přidá 110 μΐ (0,011 mmol) jiné kyseliny. Do této směsi se přidá 100 μΐ (0,01 mmol) roztoku aminu, 110 μΐ (0,011 mmol) roztoku triethylaminu a potom 110 μΐ (0,011 mmol) roztoku o-(7-azabenztriazol-l-yl) -Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyluroniumhexafluorfosfatu. Reakční směsi se mísí za teploty 60 °C po dobu 6 hodin. Reakční směsi se přenesou do 1 ml 96-jamkové plotny za použití zařízení pro přenos kapaliny. Rozpouštědla se odstraní za použití Speedvac^tm přístroje a surové reakční směsi se rozpustí v DMSO za zisku konečné teoretické koncentrace 10 mM. Výsledky skríningu jsou uvedeny v tabulce

I.

281

Tabulka I %inhibice

150 nM vzorec molekuly

• fcfc fcfc fc • fc :* i

282 • fcfcfc • fc fc fc fcfcfc fc· • fcfcfc

f

283

4

284 • 44 4 4

4 • 44 44

4444

4 4 4

4 · 4 4

4 4 · ·4· 44 4444

285 • ·· · ·♦ ·· ·« • · ♦ ·

9 9

9999

286 • · ·· · ·· « ·· ·« ·· · » · ·· · · t · • · · * · ·· · • · · · · * * · · 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9· 9 9 999 9

287

0 000 ·· 0 00 00 00 0 00 00 0000

0·· 000 000 · 00 000 00 0000

288 • ···· ·· · fcfc ·« • fc · fc · fcfc ···· • fc fc·· ··· *·· · fcfc fcfcfc fcfc fcfcfc·

• · • · ·

289 • Φ φφφ • Φ φφ φ φ φ φ • φ · φφ φφφφ

η

o,

291

« «fcfcfc fcfc · fcfc fcfc fc® fc fcfc fcfc · fc * fc • · fc·· ·· fc • fc fcfcfc fcfcfc ··· · fc· fcfcfc »· fcfcfcfc

H0<|

A

292

• ···· • ·	·· • ·	fc • fc	•	fc·	•fc • · ·
• ·	• ·	fc	•		•	•
fcfc ·	• fc	• ufc		»·		• fcfc ·

• · · · ·

293

• · • · *

• · · • ·

Ci

O^;

294 ····· ·· · · · ·· ·· · · · · · ♦ · · • · · · · · · · · · · · · · · · I · «·· ··· ··· · ·· ··· ·· ···

o • · • ·

295

4 4 4 4 · · 4 4 4 4 • · · · 4 4 4 ♦

4 4 4 · 4 · · .4 4 · · · · · · · •49 4 44 444 44 4444

Q,

296

φ φ ····

II

297

00 • · * 0 »

Σ .*

0000

298

9 9 9 9 9 9 9 99 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 · · ♦ • · · · · · · · · 9

9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 999 99 9999

Ί3

O

300

9 9 9 9 9 9 * 9 9 9 ·

9 · t 9 9 9 9 φ í : ’ : : : · : ι .· •99 9 99 ··· 99 9999

301 • · · • · ft

Cl

s

304 • · · · Φ · * « 9 4 ·’* • Φ « · Φ « · 4 9 4 · 4 4 4 4 · .

··· ♦ ·· ··· ·* 444

305 • · · · · * · · 9 9 9 9

9 9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 · ··· · ·· ·9· 99 9999

Η

306 • · ·· ·4· ·· ·»··

··>!

308

• 9999 • 9	9 9	9 ΦΦ	99 •	•	ΦΦ Φ Φ
9	9
• Φ	9 9	9	Φ	Φ ·	Φ	Φ
• Φ	Φ	9		Φ	«	Φ
9 9 ·	9 9		Φ φ 9	ΦΦ		ΦΦΦΦ

309

··»· 99 9 99 99

9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 • 99 9 99 999 ·· 9999

Bt

* · · · · · 9

9 9 9 9

310

9 9 9 9

999 ♦ 99 999

s<

o

312 • »999 99 » 9« 99

V 9999 9999 »9 999 999 • 99 9 99 999 99 9999

•7

V ·*·» ·· •· · · « · *· »· • 4

313 ·«· · ·« ···

• Ο • 4

4» 44

4 4 4

314 • 4444 β

• ·

444 » • · · 44 ···

4 4

4444

316

• · · ·

317

Kombinatoriální postup pro příklady uvedené v tabulce II

0,1 M roztoky kyseliny, aminového templátu, o-(7-azabenztriazol-l-yl) -Ν,Ν, Ν',Ν'-tetramethyluroniumhexaf luorfosfatu a triethylaminu se připraví samostatně v DMF. Do každé zkumavky v sestavě 8x11 kultivačních zkumavek (10x75 mm) se přidá 105 μΐ (0,0105 mmol) jiné kyseliny. Do této směsi se přidá 100 μΐ (0,01 mmol) roztoku aminu, 105 μΐ (0,0105 mmol) roztoku triethylaminu a potom 105 μΐ (0,0105 mmol) roztoku o- (7-azabenztriazol-l-yl) -Ν,Ν,Ν',Ν'-tetramethyluroniumhexafluorfosfatu. Reakční směsi se mísí za teploty 50 °C po dobu 3 hodin. Reakční směsi se přenesou do 1 ml 96-jamkové plotny za použití zařízení pro přenos kapaliny. Rozpouštědla se odstraní za použití Speedvac^¹¹ přístroje a surové reakční směsi se rozpustí v DMSO za zisku konečné teoretické koncentrace 10 mM. Výsledky skríningu jsou uvedeny v tabulce II.

318

• · a · · ····

Tabulka II

Vzorec '	< %inhibicei @ 10 nM	o %inhibice @ 1 nM
yT yr OČ	-40	-8
O ^z~f	-14	-5

• ·

319

* γά X	-33	183
/ Hp O	93	0
CH, yi f^y-N ýO σ	-26	1

320

• ·

321

HR N Ps	* 2	-3
.CKj ChiraJ N Λ° A Κ Ps ςτ <γΝ HďY^'*CH CH	2	-4
pipiiral O Ij^o 0	-14	1

• ·

322

• ·

323

324

325 • ••fc fc· • fc fcfc » fcfc 4 • fc »fc fcfcfcfc

326 • fcfcfc fcfc fc fc • fc fcfc • ·-· · • fc · • fcfc • fcfc • fc fcfcfcfc

327 ·' ·· • · « 9 • · · ·· 9999

328

ΦΦ · * ř * « * • Φ φφφφ

• · · ·

• 9

330

9*9 9

9« ·

9 9

9

9 ·

9

99

9 9 9

9 ·

9 9

9 9 ·« 9999

331

4·· •4 4444

·· • · φ φ φ φ φ φ • Φ

332 • ΦΦΦ • Φ φ φ φ φ φ φ · φ φ φ φ φ φ φφ φφφφ

333 ·**» *· • · · · ř * · ·· • » · · • « »

n •

·· ·

334 • ••fc • a ·· fc · · · « · * ··· • fcfc *· ····

336

• ·

338 t · · • * ·· ·

339 • · • φ φ φ · • φ φ ·

I® · · · ř · · ••φ * ·· ι .·

340 • ·

φ *

342 φ

Φ· Φ·

44 ·«

4 4 · · *

4 4 « ' * · 4 4 •44 44 4444

343 • ·· · · «· * • 9 : :

• 44 4 ··

9 9 ·· ·· • · · · 9 9 9

344

9 99 9

9

9 i :

999 9

9 9 9 ·9 · 9· 9 9 99 9 9

345 * · ϊ

• 9 9

γΓ“ ΗΡ--Ο-13 0¾	29	32
CH, γΛ Η^γ-Ν π ⁸ γ^Ν Λ) Ηρ-ίΛ)/^⁰ 0	-4	21
CHphiral γΛ Ι^γΝ Λ*	71	7

» · • 9 ···

346

·· • 9 9

9

9«

348

f

9 Vzorec	%inhibice @ 10 nM	%inhibice @ 1 nM
CH,	111	25
β f“⁴ V'·' hn-/V^N <γΝ Λ	4	-4

349 * ·

♦ · f ♦ · »1

350 • · 9 · *99 *9 9 9 • » ♦ · • · *

9 9 « * • · 99 99

444·

444

351

4 44 44 • · 4 4 4 4 4 · 4 · · ·· 4

44» »444 4 • 4 4 4 4 4 • 4 ·4» ♦♦ 44 44

352

9999 99 9 99 99

9 9 9 99 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

999 · 99 ·9· 99 9999

·*·· ♦

♦

353 φφ φ φφ ·· φφφφ φφφφ φ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ φ φ φ φ ΦΦΦ •Φ ΦΦΦ φφ φφφφ

····

φφ φφ

355

999«

9

356

9»

99

9 · ·

9 ·

99*

9 9 <9 9999

fc· fc fcfc ·· • fcfc* · · · · « · · fcfc * fc fc · fcfcfc fcfc fcfcfc fcfc fcfcfcfc

357

358 ^Η£ • *»44 4 *4 · » ·

Φ

444 4

9

4 4 • 4 « 4

4

A,

44 • 4 4 ·

4 4

4444 γ<V

χΝ

«,

ΜΧ φκ, Ϊ’Χ

Ιη

364 «Φ··

359 ·· φ • φ • · • · ··* · ·* • · φ · • · • · φφ •

4 4 • 4

Φ 4 Φ • 444

• · · ·

361

362

363 ti»» ··

• 9 · · * ·

364

999 9 ·· *99

365 ·· · <

• · · · · · · • · · · · · »

,CHf

<2

v

H,C HP '<*»

«3

P* /

Y%

Ύ

368

• · • · 99··

• · · ·· ·· • · · * · · ·

369 ·· ··· ·· ·· · ·

370

371

9 9

9999

372 • fcfcfcfc fcfc · »· fcfc • fc · fcfcfcfc fcfcfcfc • 9 fcfcfc fcfc · • · fcfcfc fc fcfcfc fc • fc fcfcfc fcfcfc fcfcfc · fcfc fcfcfc fcfc ····

« · «*· ** « ·· ·· • · « · · · · · · · ·

373 • · · · · · · · ··· · ·· ··· «· ····

* «·«< »9 <* 99 »9 • 9 9 99 9« 9999

374

9 <99 9 9 9 9 9

999 9 9 9

999 9 9 e 9 ·9 «9 9 9 99

	* *··9	*9	»		·»	9·
_r	·· 9	•	•	9®	•	•	• ·
	• 9	•	•	•	•	•	9
	9 9		«	9	9	•	9
	··· a	99	»*·		9«	• «•9

375

376

·· ·

377 ····· ·· · ·· ·· ·· · · · · · ·«··

A ys AA CH, ξ	11	10
Ά %	20	7

Sloučeniny uvedené výše mohou být připraveny do farmaceutických prostředků podle následujících obecných příkladů.

Příklad 1: Parenterální prostředek

Pro přípravu parenterálního prostředku vhodného pro podání injekcí se 100 mg soli sloučeniny vzorce (I) rozpustné ve vodě rozpustí v DMSO a potom se smísí s 10 ml 0,9% sterilního salinického roztoku. Směs se plní do dávkových jednotek vhodných pro injekční podání.

Příklad 2: Orální prostředek

Pro přípravu farmaceutického prostředku vhodného pro orální podání se lOOmg sloučeniny vzorce (I) smísí s 750 mg laktosy. Směs se vloží do orální dávkové jednotky, jako je kapsle z tuhé želatiny, která je vhodná pro orální podání.

Příklad 3: Nitrooční prostředek • ··· ·· · ·· · ·

Pro přípravu farmaceutického prostředku se zpomaleným uvolňováním vhodného pro nitrooční podání se sloučenina vzorce (I) suspenduje v neutrálním, izotonickém roztoku kyseliny hyaluronové (koncentrace 1,5%) ve fosfátovém pufru (pH 7,4) za zisku 1% suspenze.

Je třeba si uvědomit, že uvedený popis je příkladný a ilustruje předkládaný vynález a jeho výhodná provedení.

Běžnými pokusy je odborník schopen zjistit modifikace a variace vynálezu, které se neodchylují od jeho rozsahu.

Vynález je tedy definován ne výše uvedeným popisem, ale následujícími patentovými nároky a jejich ekvivalenty.

Claims

Patentové nároky

1. Sloučenina obecného vzorce (I) kde

R¹ znamená vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸znamenají každý nezávisle vodík, substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R² znamená hydroxy, halogen, kyan nebo nitro skupinu nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, alkenyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl nebo skupinu vzorce (A)

O kde R_a znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (B)

O

II

c.

Ra

380 kde R_a znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (C)

O

II x^/C\_N^^Rb (C)

Rc kde Rb a R_c znamenají nezávisle vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (D)

N

M (D) kde Ra znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, hydroxy, alkoxy, amino, alkyiamino, dialkylamino nebo acylamino; a R_e znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, amino, alkyiamino, dialkylamino nebo acylamino; a nebo skupinu vzorce (E)

O

II

S-Rf (E)

381 kde Rf znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl; nebo skupinu vzorce (F) (F) kde R_g a Rh znamenají nezávisle vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl nebo heteroaryl, nebo skupinu vzorce (G) (θ) kde Ri znamená alkyl nebo substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo skupina vzorce (A), (B), (C), (H) nebo (I), nebo skupina vzorce (H) (H) ^Ri kde Rj znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, hydroxy, alkoxy, amino nebo skupina vzorce (A), (B), (C) nebo (D) , a Rk znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo skupina vzorce (A), (B), (C) , (D), (E) nebo (F), nebo skupina vzorce (I)

382 kde Ri znamená vodík nebo substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl nebo skupina vzorce (C).

nebo je R² substituovaný nebo nesubstituovaný cykloalkyl, heterocykloalkyl nebo aryl, který je fúzovaný na Q;

X znamená C nebo N; a

Q znamená divalentní radikál obsahující 2 nebo 3 atomy kruhu každý nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující C, N, 0, S, C-R⁵a N-R⁵, kde R⁵ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, hydroxy, halogen, kyan nebo amino, které společně s C* a N* tvoří pěti- nebo šesti-členný aromatický nebo nearomatícký kruh;

a její farmaceuticky přijatelná proléčiva, farmaceuticky aktivní metabolity a farmaceuticky přijatelné soli.
2. Sloučenina obecného vzorce (II):

H

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CC) nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, substituovaný

383 nebo nesubstituovaný alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R² je stejný, jak byl definován v nároku 1;

X znamená C nebo N; a

Y a Z znamenají každý nezávisle C, N, S, 0, C-R⁵nebo N-R⁵, kde

R⁵ je stejný, jak byl definován v nároku 1; nebo její farmaceuticky přijatelné proléčivo, farmaceuticky aktivní metabolit a farmaceuticky přijatelná sůl.
3. Sloučenina, farmaceuticky přijatelné proléčivo, farmaceuticky aktivní metabolit nebo farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 3, kde:

R¹a R² jsou každý nezávisle substituovaný aryl;

X znamená C;

Y znamená C nebo N; a Z znamená S nebo O.

kde

R¹ znamená substituovaný nébo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-C0 nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R³ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, aryloxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle

384 vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R⁴ znamená vodík, hydroxy, nižší alkyl, halogen, nižší alkoxy, amino, nitro nebo trifluormethyl; a Y a Z znamenají každý nezávisle C, N, S, O, C-R⁵nebo N-R⁵, kde

R⁵ je nesubstituovaný nebo substituovaný alkyl nebo aryl; nebo její farmaceuticky přijatelné proléčivo, farmaceuticky přijatelný metabolit nebo farmaceuticky přijatelná sůl.
6. Sloučenina vzorce (IV):

kde

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO nebo R⁶-CS, kde R⁶ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, alkenyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, cykloalkyl, heterocykloalkyl nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R³ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, cykloalkyl, heterocykloalkyl, aryl, heteroaryl, alkoxy, aryloxy nebo N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl;

R⁴ znamená vodík, hydroxy, nižší alkyl, halogen, nižší alkoxy, amino, nitro nebo trifluormethyl; a

Y znamená C nebo N; a

Z znamená S nebo 0; a nebo její farmaceuticky přijatelné proléčivo, farmaceuticky přijatelný metabolit nebo farmaceuticky přijatelná sůl.

385 • 9 «·

9 9 ·

9 9 ·

9 9 φ • · ····
7. Sloučenina, farmaceuticky přijatelné proléčivo, farmaceuticky aktivní metabolit nebo farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 6, kde:

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO, kde R⁶ znamená N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl; R³ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, heteroaryl nebo alkoxy; R^4<a> a R^4<b) znamenají nezávisle vodík, nižší alkyl nebo halogen; Y znamená C nebo N; a Z znamená S nebo O.
8. Sloučenina, farmaceuticky přijatelné proléčivo, farmaceuticky aktivní metabolit nebo farmaceuticky přijatelná sůl podle nároku 7, kde:

R¹ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný aryl nebo heteroaryl, nebo skupina vzorce R⁶-CO, kde R⁶ znamená N-R⁷-R⁸, kde R⁷ a R⁸ znamenají každý nezávisle vodík, alkyl, aryl nebo heteroaryl; R³ znamená substituovaný nebo nesubstituovaný alkyl, aryl, heteroaryl nebo alkoxy; R^4<a) znamená chlor, fluor nebo methyl; R^4(b) znamená fluor; Y znamená N; a Z znamená 0.
9. Farmaceutické prostředek vyznačující se tím, že obsahuje:

(a) terapeuticky účinné množství sloučeniny, jejího farmaceuticky přijatelného proléčiva, farmaceuticky aktivního metabolitů nebo farmaceuticky přijatelné soli podle nároku 1;

a (b) farmaceuticky přijatelný nosič, ředidlo, vehikulum nebo přísadu.
10. Způsob léčby onemocnění u savce zprostředkovaného aktivitou protein kinasy vyznačující se tím, že zahrnuje podání terapeuticky účinné množství sloučeniny,

386 jejího farmaceuticky přijatelného proléčiva, farmaceuticky aktivního metabolitu nebo farmaceuticky přijatelné soli podle nároku 1 uvedenému savci.
11. Způsob podle nároku 10 vyznačující se tím, že uvedené onemocnění u savce je asociované s nádorovým růstem, proliferací buněk nebo angiogenesí.
12. Způsob pro modulování aktivity receptorové protein kinasy vyznačující se tím, že zahrnuje kontaktování receptorové kinasy s účinným množstvím sloučeniny, jejího farmaceuticky přijatelného proléčiva, farmaceuticky aktivního metabolitu nebo farmaceuticky přijatelné soli podle nároku 1.
13. Způsob podle nároku 12 vyznačující se tím, že receptorové protein kinasa je kinasa VEGF receptorů.