CZ20003297A3 - Činidlo pro prevenci a léčbu zánětlivého onemocnění střeva obsahující aktivní složku antagonistu IL-6 - Google Patents
Činidlo pro prevenci a léčbu zánětlivého onemocnění střeva obsahující aktivní složku antagonistu IL-6 Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20003297A3 CZ20003297A3 CZ20003297A CZ20003297A CZ20003297A3 CZ 20003297 A3 CZ20003297 A3 CZ 20003297A3 CZ 20003297 A CZ20003297 A CZ 20003297A CZ 20003297 A CZ20003297 A CZ 20003297A CZ 20003297 A3 CZ20003297 A3 CZ 20003297A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antibody
- receptor
- cells
- antibodies
- inflammatory bowel
- Prior art date
Links
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 title claims abstract description 120
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 title description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 title description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims abstract description 119
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims abstract description 113
- 102000010781 Interleukin-6 Receptors Human genes 0.000 claims abstract description 106
- 108010038501 Interleukin-6 Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 105
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims abstract description 64
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 31
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 27
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 17
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 75
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 48
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 48
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 claims description 14
- 101001076408 Homo sapiens Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 13
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 13
- 102000052611 human IL6 Human genes 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 6
- 101001076414 Mus musculus Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 claims description 3
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 150
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 50
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 46
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 20
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 18
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 14
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 11
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 7
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 5
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031648 Body Weight Changes Diseases 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- 102000011632 Caseins Human genes 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100026018 Interleukin-1 receptor antagonist protein Human genes 0.000 description 2
- 101710144554 Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 2
- 108010025815 Kanamycin Kinase Proteins 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 102000006646 aminoglycoside phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000004579 body weight change Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N octadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCO GLDOVTGHNKAZLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- -1 Ι1_β Proteins 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 101100136076 Aspergillus oryzae (strain ATCC 42149 / RIB 40) pel1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241001241365 Gehyra xenopus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100286713 Homo sapiens IL6 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150101999 IL6 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 108010033737 Pokeweed Mitogens Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 101100068489 Vicia faba AGPC gene Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000001785 acacia senegal l. willd gum Substances 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000008993 bowel inflammation Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 210000001731 descending colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000021004 dietary regimen Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 229940105990 diglycerin Drugs 0.000 description 1
- GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N diglycerol Chemical compound OCC(O)COCC(O)CO GPLRAVKSCUXZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- GPGMRSSBVJNWRA-UHFFFAOYSA-N hydrochloride hydrofluoride Chemical compound F.Cl GPGMRSSBVJNWRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000019189 interleukin-1 beta production Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N n-heptadecyl alcohol Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCO GOQYKNQRPGWPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 101150040383 pel2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050446 pelB gene Proteins 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 102000014187 peptide receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010011903 peptide receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008180 pharmaceutical surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001495 poly(sodium acrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229940093430 polyethylene glycol 1500 Drugs 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 1
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 235000021247 β-casein Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oblast techniky
Současný vynález se týká činidla pro prevenci a léčbu zánětlivého onemocnění střeva, které obsahuje aktivní složku interleukin-6 (IL-6). Současný vynález se také týká činidla pro prevenci a léčbu Crohnovy choroby nebo ulcerózní kolitity, k které obsahuje aktivní složku interleukin-6 (IL-6).
Dosavadní stav techniky
IL-6 je cytokin, který se rovněž nazývá B buňky stimulující faktor 2 (BSF2) nebo interferon β2. IL-6 byl objeven jakožto diferenciační faktor, který se účastní aktivace B-lymfocytických buněk (Hirano, T a kol., Nátuře (1986) 324, 73 až 76). Potom se zjistilo, že je multifunkčním cytokinem, který ovlivňuje řadu buněčných funkcí (Akira, S. a kol., Adv. in Immunology maturation of T-lymphocytic celíš (Loz, M. a kol., J. Exp.
Med. (1988) 167, 1253 až 1258).
IL-6 přenáší svůj biologický signál na buňku přes dva proteiny. Jedním z nich je receptor IL-6, protein vážící IL-6 s molekulovou hmotností 80 kD (Taga, T. a kol., J.
Exp. Med. (1987) 166, 967 až 981; Yamasaki, K. a kol., Science (1987) 241, 825 až 828). Receptor IL-6 se nevyskytuje pouze ve formě vázané na membránu s transmembránovou doménou exprimovanou na buněčném povrchu, ale také jako rozpustný receptor IL-6 obsahující převážně mimobuněčnou část.
Druhý protein je protein vázaný na membránu gp130 o molekulové hmotnosti 130 kD, který se účastní v neligandové vazebné transdukce signálu. IL-6 a receptor IL-6 vytváří komplex IL-6 / receptor IL-6, který po navázání na gp130 přenáší svůj biologický signál na buňku (Taga a kol., Cell (1989) 58, 573 až 581).
Antagonisté IL-6 jsou látky, které inhibují transdukci biologické aktivity IL-6. Jako antagonisté IL-6 jsou doposud známy protilátky proti IL-6 (anti- IL-6 protilátky), protilátky proti receptoru IL-6 (anti- IL-6 receptorové protilátky) a protilátky proti gp130 (anti-gp130 protilátky), alterovaný IL-6, jednotlivé peptidy IL-6 nebo receptoru IL-6 apod.
• · • · · « • · · ·
Protilátky proti IL-6 receptoru jsou popsány v několika pracích (Novick D. a kol., Hybridoma (1991) 10, 137 až 146, Huang, Y. W. a kol., Hybridoma (1993) 12, 621 až 630, International Patent Publication WO 95/09873, French Patent Application FR 2694767, United States Patent US 521628). O humanizované PM-1 protilátce se ví, že byla získána navázáním části determinující komplementaritu (CDR) myší protilátky PM-1 (Hirata, Y. a kol., J. Imunology (1989) 143, 2900 až 2906) s lidskou vzorovou protilátkou (the International Patent Publication WO 92-19759).
Zánětlivé onemocnění střeva (IBD - inflammatory bowel disease) jsou nespecifické záněty, mezi které patří ulcerózní kolitida a Crohnova nemoc. Na počátku onemocnění se vyskytují imunologické poruchy, ale ty nevedly k objasnění příčiny tohoto onemocnění. Má se za to, že monocyty a lymfocyty které se shlukují v postiženém místě, se podílejí na poškození sliznice a mediátory zánětu zvláště cytokiny (jako je například Ι1_β, TNFa a IL-6) si zaslouží zvláštní pozornost.
Z mediátorů zánětu se upírá pozornost ke vlivu IL-6 na stádium onemocnění nebo zda-li by IL-6 mohl být specifickým ukazatelem pro zánětlivá onemocnění střev. Sérové hladiny IL-6 se zvyšují jak u Crohnovy choroby tak i u ulcerózní kolitidy a hladiny korelují se stavem onemocnění (Holtkamp, W. a kol., J. Clin. Gastroenterology (1995) 20, 123 až 126, Niederau, C. a kol., Hepatogastroenterology (1997) 44, 90 až 107). Stanovení množství mRNA IL-6 ve tkáni pomocí PCR (polymerázové řetězové reakce) odhalilo, že dobře koreluje se stádiem onemocnění c (Stevens, C. a kol., Dig. Dis. Sci. (1992) 37, 818 až 826). Byl zkoumán mechanismus zvýšení tvorby IL-6 během aktivní fáze zánětlivého onemocnění střeva a bylo zjištěno, že množství produkce, pokud jsou mononukleární buňky ve vrstvě lamina propria stimulovány mitogenem Pokeweed, dobře koreluje s klinickým stavem onemocnění (Reinicker, H. - C. a kol., Clin. Exp. Imunol. (1993) 94, 174 až 181).
Proto byla studována korelace mezi produkcí IL-6 a klinickým stavem onemocnění v kultuře mononukleárních buněk získaných z vrstvy lamina propria a ve tkáňové kultuře sliznice pacientů. U předchozího případu bylo také prokázáno, že se také ve slízniční tkáni zvyšuje počet buněk, které produkují IL-6. Makrofágy jsou nejdůležitějšími buňkami mezi mononukleárními buňkami, které produkují IL-6. Bylo potvrzeno, že se vyskytuje velký počet CD 68 pozitivních makrofágů, které intenzivně produkují IL-6 • fc • fcfcfc • fcfc · • · · · • · · · • · · · • · fcfc v lamina propria u pacientů s chronickým zánětlivým onemocněním střeva, kteří jsou v aktivním stádiu choroby. (Kusugami, K. a kol., Dig. Dis. Sci. (1995), 40, 949 až 959).
Bylo také zjištěno, že produkce IL-6 koreluje s endoskopickým nálezem u pacientů s Crohnovou chorobou (Reimund, J. - M. a kol., Gut (1996) 39, 684 až 689). Dále existují některé práce, že nejenom IL-6, ale i sérové koncentrace IL-6 receptoru dobře korelují s klinickým stádiem onemocnění (Mitsuyama, K. a kol., Gut (1995), 36, 45 až 49).
Co se týká jiných mediátorů zánětu než IL-6, je známo, že množství produkce IL-1 β koreluje také s klinickým stádiem onemocnění. Na druhé straně, toto neplatí vždy pro TNF-α, kde množství produkce má tendenci se zvyšovat u klinického stádia s nízkou aktivitou onemocnění. (Reinecker, H. - C. a kol., Clin. Exp. Immunol. (1993) 94, 174 až 181, Reimund, J. -M. a kol., Gut (1996) 39, 684 až 689).
Současný způsob léčby zánětlivého onemocnění střeva zahrnuje kombinaci dietního režimu a předepsaného léčiva, které obsahuje salazosulfapyridin, glukokortikoidy apod. Avšak i u těchto léků jsou však pacienti, kteří je netolerují, pro jejich vedlejší účinky a proto se vyskytují problémy s dlouhodobým podáváním.
Na druhé straně probíhají klinické studie, u kterých je použit nový druh léčby zánětlivého onemocnění střeva, u kterého se projevy onemocnění zmírňují inhibici cytokinové aktivity. Hlavním cílem jsou IL-1 a TNF-α (Van Deventer, S. J. H. Gut (1997) 40, 443 až 448); pro IL-1 je to antagonista IL-1 receptoru (Cominelli F. a kol., Gastroenterology (1992) 103, 65 až 71) a inhibitor IL-1, CGP47969A (Casini-Raggi a kol., Gastoenterology (1995) 109, 812 až 818) apod. jsou právě sledovány na úrovni klinického nebo experimentálního pokusu na zvířatech. Pro TNF-α se pacientům s Crohnovou chorobou podávala specifická monoklonální protilátka, u které byla pozorována snížená aktivita a vyléčené vředové léze. (Van Dullemen, Η. M. a kol., Gastroenterology (1995) 109, 129 až 135). Není však známo, zda-li antagonista IL-6 může léčit zánětlivé onemocnění střeva tím, že specificky potlačí biologickou aktivitu IL-6.
• · · · · · · ···· ·· · · · · · ·
4« · · · ······ • · · · · · · · ···· · ··· ··· ·· ··
Podstata vynálezu
Je předmětem tohoto současného vynálezu poskytnout preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivá onemocnění střev a zmíněné činidlo nebude mít výše uvedené nevýhody.
Proto současný vynález poskytuje (1) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu antagonistu IL-6.
Současný vynález také poskytuje (2) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu protilátku proti IL-6 receptorů.
Současný vynález také poskytuje (3) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu monoklonální protilátku proti IL-6 receptorů.
Současný vynález také poskytuje (4) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu monoklonální protilátku proti lidskému IL-6 receptorů. Monoklonální protilátkou proti lidskému IL-6 receptorů je s výhodou PM-1 protilátka.
Současný vynález také poskytuje (5) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu monoklonální protilátku proti myšímu IL-6 receptorů. Monoklonální protilátka proti myšímu IL-6 receptorů je s výhodou protilátka MR16-1.
Současný vynález také poskytuje (6) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu rekombinantní protilátku proti IL-6 receptorů. Rekombinantní protilátka proti IL-6 receptorů obsahuje s výhodou konstantní oblast (oblast C) lidské protilátky.
Současný vynález také poskytuje (7) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu chimérovou nebo humanizovanou protilátku proti IL-6 receptorů.
Současný vynález také poskytuje (8) preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střeva, které obsahuje jakožto aktivní přísadu humanizovanou protilátku PM-1.
• · • · • · · * • 9 9 ·
9 9 · • · · 9
9 99
Současný vynález také poskytuje (9) preventivní nebo terapeutické činidlo pro Crohnovu nemoc nebo ulcerózní kolitidu, které obsahuje jakožto aktivní přísadu antagonistu IL-6 jak je výše uvedeno od (1) do (8).
Současný vynález také poskytuje (10) činidlo k potlačování úbytku hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva. Zmíněné činidlo obsahuje jakožto aktivní přísadu antagonistu IL-6, jek je výše uvedeno (1) až (8).
Současný vynález také poskytuje (11) činidlo k potlačování úbytku hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva. Zmíněné činidlo obsahuje jakožto aktivní přísadu antagonistu IL-6, jek je výše uvedeno (3) až (8).
Podrobný popis vynálezu
Antagonisté IL-6, které jsou použity v tomto vynálezu, mohou být jakéhokoliv původu, jakéhokoliv druhu a jakékoliv formy, pokud mají preventivní nebo terapeutický účinek na zánětlivé onemocnění střeva nebo účinek na potlačování úbytku hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva.
Antagonisté IL-6 blokují signální transdukci IL-6 a tím inhibují biologickou aktivitu IL-6. Jakožto antagonisté IL-6, se s výhodou uvádějí protilátky anti-IL-6, protilátky proti IL-6 receptoru, anti-gp130 protilátky, alterovaný IL-6, alterovaný rozpustný IL-6 receptor, parciální peptid IL-6 nebo peptid IL-6 receptoru látky s nízkou molekulovou hmotností, které mají stejnou aktivitu jako tyto látky.
Protilátky anti-IL-6, které jsou použity v tomto vynálezu, se mohou získat známým způsobem jako polyklonální nebo monoklonátní protilátky. Jako protilátky anti-IL-6, které jsou použity v tomto vynálezu, jsou upřednostňovány jejich monoklonální protilátky, zvláště savčího původu. Mezi monoklonální protilátky savčího původu patří ty, které se vyrábějí pomocí hybridomů a rekombinantní protilátky, které jsou produkovány hostitelskou buňkou, která je transformována pomocí expresního vektoru obsahujícího geneticky upravené protiiátkové geny. Tyto protilátky, přes vazbu na IL-6, blokují navázání IL-6 na receptor IL-6 a tím blokují signální transdukci biologické aktivity IL-6 na buňku.
······ 9 · · · · · « · · ·· tt 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9
9999 9 ··· 999 99 99
Mezi takovéto protilátky patří například MH166 (Matsuda a kol., Eur. J. Immunol. (1988) 18, 951 až 956) a protilátky SK2 (Sáto, K. a kol., The 21 st Nihon Mennekigakkai Soukai (General Meeting of the Japan Immunology Society), Academie record (1991) 21, 166) apod.
Hybridom produkující protilátky anti-IL-6 může být v podstatě vytvořen známým postupem jak je popsáno níže. IL-6 se může proto použít jako senzibilizační antigen běžným způsobem imunizace. Imunizované buňky takto získané se spojují se známými mateřskými buňkami konvenčním způsobem buněčné fúze. Pro přípravu požadovaného hybridomu se potom buňky, které produkují monoklonální protilátky, zachycují běžným sereeningovým způsobem.
Zvláště protilátky anti-IL-6 se mohou získávat následujícím způsobem. Například lidský IL-6 pro použití jakožto senzibilizující antigen k získání protilátky se získává použitím sekvence aminokyselin genu IL-6, popsané v Eur. J. Biochem (1987) 168, 543 až 550, J. Immuno. (1988) 140, 1534 až 1541 nebo v Agr. Biol. Chem. (1990) 54, 2685 až 2688.
Poté, co je vhodná hostitelská buňka transformována vložením sekvence genu IL6 do známého vektoru genové exprese, se protein IL-6 se purifikuje z hostitelské buňky nebo z tkáňového supernatantu. Purifikovaný protein IL-6 se může použít jako senzibilizující antigen. Alternativně se může použít jako senzibilizující antigen protein vytvořený fúzí proteinu IL-6 s jiným proteinem.
Protilátky proti IL-6 receptoru pro použití v tomto vynálezu se mohou získat známým způsobem jakožto polyklonální nebo monoklonální protilátky. Jako protilátky anti-IL-6 pro použití v tomto vynálezu jsou upřednostňovány monoklonální protilátky zejména savčího původu. Mezi monoklonální protilátky zejména savčího původu patří ty, které jsou produkovány hybridomy a ty, které jsou produkovány hostitelskou buňkou, která byla transformována pomocí expresního vektoru, který obsahuje geneticky upravené geny protilátek. Protilátky přes navázání na IL-6 receptor inhibují vazbu IL-6 na IL-6 receptor a tím blokují přenos biologické aktivity IL-6 do buňky.
Mezi příklady takovýchto protilátek patří MR16-1 protilátky (Tamura, T., a kol., Froc. Nati. Acad. Sci. USA (1993) 90, 11924 až 11928), PM-1 protilátky (Hirata a kol., J. Immunology (1989) 143, 2900 až 2906), nebo AUK12-20 protilátky, AUK64-7 protilátky • · ··· ·
nebo AUK146-15 protilátky (International Patent Publication WO 92 až 19759) apod.
Z nich jsou nejvíce upřednostňovány protilátky PM-1.
Hybridomová buněčná linie, která produkuje protilátky PM-1 byla mezinárodně uložena podle dohody Budapest Treatyjako PM-1 dne 10. července, 1990 u National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industruial Science and Technology, 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki pref., Japan jako FERM BP-2298. Hybridomová buněčná linie, která produkuje protilátky MR16-1 byla mezinárodně uložena podle dohody Budapest Treaty MR16-1 dne 13. března, 1997 u National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industruial Science and Technology, 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki pref., Japan jako FERM BP-5875.
Hybridomy, které produkují monoklonální protilátky proti IL-6 receptorů mohou být v podstatě vytvořeny použitím známého postupu, jak je popsáno níže. Proto se používá běžným způsobem imunizace jako senzibilizující antigen receptor IL-6. Takto získané imunizované buňky se nechají fúzovat se známými mateřskými buňkami běžným způsobem buněčné fúze a potom se pro přípravu požadovaného hybridomu buňky zjišťují běžnou screeningovou metodou.
Protilátky proti IL-6 receptorů se mohou připravovat následujícím způsobem. Například jako senzibilizující antigen se použije lidský IL-6 receptor pro získání protilátky, která se získá za použití genové sekvence receptorů IL-6 / aminokyselinové sekvence popsané v patentové žádosti European Patent Application EP 325474 a myší IL-6 receptor může být získán tak, jak je to popsáno v Japanese Unexamined Patnet Publication (Kokai) 3 (1991) - 155795.
Existují dva druhy proteinů IL-4 receptorů: IL-6 receptor exprimovaný na buněčné membráně a IL-6 receptor izolovaný z buněčné membrány (solubilní IL-6 receptor) (Yasukawa, K. a kol., J. Biochem. (1990) 108, 673 až 676). Protilátky proti solubilnímu IL-6 receptorů se v podstatě skládají z mimobuněčné oblasti IL-6 receptorů navázaného na buněčnou membránu a tím se odlišují od IL-6 receptorů navázaného na buněčnou membránu tak, že ten druhý neobsahuje transbuněčnou oblast anebo jak transbuněčnou oblast tak i nitrobuněčnou oblast. Jako protein IL-6 receptorů se může *»···· · · · · ·· • · · · · ·· · · · · • 0 · · · · · ♦
8·· · · ······ • · · · ···· ···· · ··· «·· ·· ·· použít jakýkoliv IL-6 receptor, pokud se může použít jako senzibilizující antigen pro tvorbu protilátek proti IL-6 receptorů pro použití v tomto vynálezu.
Poté se co se genová sekvence vloží do známého expresního vektorového systému, aby došlo k přeměně příslušné hostitelské buňky, požadovaný protein IL-6 receptorů se purifikuje známým způsobem buď z hostitelských buněk nebo ze supernatantu jejich kultury. Takto purifikovaný protein IL-6 receptorů se může použít jako senzibilizující antigen. Jinak se také mohou jako senzibilizující antigeny použít buňky, které mají exprimovaný IL-6 receptor nebo protein vzniklý fúzí proteinu IL-6 receptorů s jiným proteinem.
E. coli, která obsahuje plasmid plBIBSF2R, který obsahuje cDNA kódující lidský IL-6 receptor byla mezinárodně uložena podle dohody Budapest Treaty jako HB101plBIBSF2R dne 9. ledna, 1989 u National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industruial Science and Technology, 1-3, Higashi 1-chome,
Tsukuba-shi, Ibaraki pref., Japan jako FERM BP-2232.
Protilátky anti-gp130, které se používají v tomto vynálezu, se mohou získávat jako známým způsobem jako monoklonální nebo polyklonální. Jako protilátky anti-gp130, které se používají v tomto vynálezu, jsou upřednostňovány jako monoklonální protilátky zvláště savčího původu. Mezi monoklonální protilátky savčího původu patří ty, které jsou produkovány hybridomy a ty, které jsou produkovány hostitelskou buňkou, která byla transformována pomocí expresního genu, který obsahuje geneticky upravené geny protilátek. Protilátky inhibují přes navázání na gp130 vazbu navázání gp130 na komplex IL-6/IL-6 receptor a tím blokují přenos biologické aktivity IL-6 do buňky.
Mezi takovéto protilátky patří například protilátky AM64 (Japanese Unexamined Patnet Publication (Kokai) 3 (1991) - 219894), protilátky 4B11 a protilátky 2H4 (US 5571513), protilátky B-S12 a protilátky B-P8 ( Japanese Unexamined Patnet Publication (Kokai) 3 (1991 )-291199).
Hybridomy, které produkují monoklonální protilátky se mohou vytvořit v podstatě při použití známého postupu, jak je popsáno níže. Antigen gp130 se může použít jako senzibilizující antigen a používá se pro imunizaci v běžným způsobu imunizace. Takto získané imunizované buňky se nechají fúzovat se známými mateřskými buňkami podle běžného postupu buněčné fúze a hybridomy, které produkují monoklonální protilátky se zachycují běžnou screeningovou metodou pro přípravu požadovaného hybridomu.
Zvláště monoklonální protilátky mohou být získány následujícím způsobem.
Například gp130, který se používá jako senzibilizující antigen pro produkci protilátek, se získává z genové sekvence gp130 popsané v European Patent Application EP 411946.
Poté, co se genová sekvence gp130 vloží do známého expresního vektorového systému, je vhodná hostitelská buňka tímto vektorovým systémem transformována a protein gp130 se purifikuje z hostitelské buňky nebo ze supernatantu jejich kultury.
Purifikovaný protein gp130 receptoru se může použít jako senzibilizující antigen. Jinak se může jako senzibilizující antigen použít protein gp130 proteinu fúzovaný s jiným proteinem.
I když neexistuje zvláštní omezení, kteří savci mohou být imunizováni pomocí senzibilizujícího antigenu, při výběru pro buněčnou fúzi jsou upřednostňovány druhy s ohledem na jejich kompatibilitu s mateřskou buňkou. Mezi takovéto druhy například patří hlodavci, jako například myši, krysy, křečci apod.
Imunizace zvířat pomocí senzibilizujícího antigenu se provádí známou metodou. Mezi obecné metody například patří nitrobřišní nebo podkožní podání senzibilizujícího antigenu savcům. Senzibilizující antigen, který se naředí a suspenduje v příslušném množství fyziologického roztoku pufrovaného fosfátovým pufrem (PBS) nebo ve fyziologickém roztoku atd., se podle potřeby míchá a příslušným množstvím běžného adjuvancia, například Freundova kompletního adjuvancia. Po emulgaci se přednostně podává savcům několikrát každé 4 až 21 dnů. Alternativně se může při imunizaci použít spolu se senzibilizujícím antigenem vhodný nosič.
Po imunizaci a potvrzení vzestupu titru požadovaných protilátek v séru, se ze savce odstraní imunizované buňky a použijí se k buněčné fúzi. Mezi imunizované buňky, které jsou upřednostňovány, patří zvláště buňky sleziny.
Savčího myelomové buňky stejně jako další mateřské buňky, které se používají při buněčné fúzi výše uvedených imunitních buněk, s výhodou patří mezi různorodé známé buněčné linie jako například P3X63Ag8.653) (Kearney, J. F. a kol. J. Immunol. (1979) 123: 1548 až 1550), P3X63Ag8U.1 (Current Topics in Microbiology and Immunology), (1978) 81 „ 1 až 7), NS-1 (Kohler, G. a Milstein, C., Eur. J. Immunol. (1976) 6: 511 až 519), MPC-11 (Margulies, D. H. a kol., Cell (1976) 8: 405 až 415), SP2/0 (Shulman, M. a kol., Nátuře (1978) 276: 269 až 270), FO (de St. Groth, S. F. a kol., J. Immunol.
• A Α ·Α ·
I ···· ·
Methods (1980) 35 1 až 21. S194 (Trpwbridge, I.S., J. Exp. Med. (1978) 148: 313 až 323), R210 (Galfre, G. a kol., Nátuře (1979) 277: 131 až 133) apod.
Buněčná fúze mezi výše uvedenými imunizovanými buňkami a myelomovými buňkami se provádí podle známé metody, kterou popisuje Milstein a kol., (Kohler, G. a Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73: 3 až 46) apod.
Speciálněji se buněčná fúze provádí v běžném živném bujónu za přítomnosti například urychlovače buněčné fúze. Jako urychlovač buněčné fúze se může použít například polyethylenglykol (PEG), Sendai virus (HVJ) apod. Navíc se pro zvýšení účinnosti buněčné fúze může přidat adjuvant jako například dimethylsulfoxid.
Poměr imunizovaných buněk ku myelomovým buňkám je s výhodou například takový, že je 1 až 10-krát více imunizovaných buněk než myelomových buněk. Mezi kultivační média, která se používají pro výše uvedenou buněčnou fúzi patří například médium RPMI1640 a kultivační médium MEM, která jsou vhodná pro růst výše uvedených myelomových buněčných linií, dále běžné kultivační médium používané pro tento druh buněčné fúze a náhrada séra jako je například fetální telecí sérum (FCS).
Při buněčné fúzi plánované množství výše uvedených imunizovaných buněk a myelomových buněk se dobře promíchá ve výše uvedeném kultivačním médiu, ke kterému se přidá roztok PEG, který se před tím zahřeje na teplotu 37 °C, například roztok PEG s průměrnou molekulovou hmotností 1000 až 6000, který se přidá v koncentraci 30 až 60 % (hmotnost/objem) a smíchá se tak, aby byly získány požadované fúzované buňky (hybridomy). Poté se opakuje přidávání vhodného kultivačního média a centrifugace, aby se odstranil supernatant, činidla buněčné fúze apod., které jsou nežádoucí pro růst hybridomů.
Zmíněné hybridomy jsou vybrány z běžného výběrového média, například HAT médium (kultivační médium obsahující hypoxantin, aminopterin a thymidin). Kultivace v HAT médiu pokračuje obecně po dobu, která je dostačující k účinnému usmrcení jiných buněk, než jsou požadované hybridomy (nefúzující buňky). Obecně je tato doba několik dní až několik týdnů. Provádí se běžná metodika limitního ředění tak, že hybridomy produkují požadované protilátky a ty jsou zachycovány a klonovány.
Další možností získat výše uvedené hybridomy imunizací zvířete jiným než lidským antigenem je možnost senzibilizovat lidské lymfocyty ve zkumavce pomocí požadovaného antigenu nebo pomocí buněk exprimujících požadovaný antigen.
A* ·· » A A I » · · <
ft A A I ► A · «
A A A A • * toto··
to ·· ·· toto · ·* · • * · · · to ·· to· · to · · · · • ··· «· toto
Výsledné senzibilizované B lymfocyty se nechají fúzovat s lidskými myelomovými buňkami, například U266, aby se získala požadovaná lidská protilátka, která se vyznačuje schopností navázat se na požadovaný nebo na buňky exprimující požadovaný antigen (viz Japanese Post-examined Patent Publication (Kokoku) 1 (1989)
- 59878). Mimo to transgenní zvíře, které má repertoár všech genů pro lidské protilátky, se nechá imunizovat pomocí antigenu nebo pomocí buněk exprimujících antigen, aby se získala požadovaná lidská protilátka výše popsanou metodou (viz International Patent Publication WO 93/12227, WO 92/03918, WO 94/02602, WO 94/25585, WO 96/34096 a WO 96/33735.
Hybridomy produkující monoklonální protilátky takto vytvořené se mohou nechat kultivovat v běžném kultivačním médiu nebo se mohou uchovat po delší časové období v tekutém dusíku.
Aby se ze zmíněného hybridomu získaly monoklonální protilátky, používá se metoda, při které se zmíněný hybridom nechal kultivovat běžným způsobem a protilátka se získá ze supernatantu. Nebo se používá metoda, při které se nechá hybridom růst v těle savce, který je kompatibilní se zmíněným hybridomem a protilátka se získá z ascitické tekutiny. Ta dříve uvedená metoda je vhodná pro zisk vysoce čisté protilátky, zatímco ta druhá je vhodná pro tvorbu protilátek širokého rozsahu.
Specificky se hybridom produkující protilátky proti IL-6 receptorů mohou připravovat za použití metody, která je popsána v Japanese Unexamined Patent Publication (Kokaki) 3 (1989) - 139293. Tato příprava se může provádět způsobem, podle kterého se hybridom produkující PM-1 protilátky, který byl mezinárodně uložen podle dohody Budapest Treaty jako FERM BP-2998 dne 10. července, 1990 u National Institute of Bioscience and Human Technology, Agency of Industruial Science and Technology, 1-3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki pref., Japan, injekčně vpraví do nitrobřišní dutiny myši BALB/c, aby se získal ascites, ze kterého se purifikuje PM-1 protilátka. Nebo se provádí způsobem, při kterém se nechá zmíněný hybridom kultivovat ve vhodném kultivačním médiu, jako je například RPMI1640 médium, které obsahuje 10% fetální hovězí sérum a 5% BM-Condimed (vyráběný firmou Boehringer Mannheim), médium SFM (vyráběné firmou GIBCO-BRL), médium PFHM-II (vyráběné firmou GIBCO-BRL), apod. Protilátka PM-1 se purifikuje ze supernatantu.
• Φ φφφφ « · φ* ·· • · · φφ φφ φφφφ • · · 9 φφφφ • Φ Φ Φ ΦΦΦΦΦ* φ Φ « Φ ΦΦΦΦ
ΦΦΦΦ Φ ΦΦΦ ΦΦΦ €· ΦΦ
Rekombinantní protilátka, která byla vytvořena genovou rekombinační technologií, u které se gen protilátky klonuje z hybridomu a začleňuje do vhodného vektoru, který transformuje hostitelské buňky, se může použít v tomto vynález jako monoklonální protilátka, (viz například Borrebaeck C. A. K, a Larrick J.W. Therapeutic Monoclonal Antibodies, publikováno ve Spojeném království firmou Macmillan Publishers, ltd. 1990).
Specificky mRNA kódující variabilní oblast (V) požadované protilátky se izoluje z buněk produkujících protilátky jako je hybridom. Izolace mRNA se provádí tak, že se připraví celková RNA, za použití například známé metody jako je guanidinová ultracentrifugační metoda (Chirgwin, J. M. a kol., Biochemistry (1979) 18, 5294 až 5299), metoda AGPC ( Chomczynski, P. a kol., Anal. Biochem. (1987) 162, 156 až 159). Potom se mRNA purifikuje z celkové RNA za použití mRNA purifikační soupravy (vyráběné firmou Pharmacia) apod. Alternativně se může mRNA připravit přímo za použití purifikační soupravy Quick Prep mRNA Purrification Kit (vyráběné firmou Pharmacia).
cDNA oblasti V protilátky se může syntetizovat z mRNA za použití reverzní transkriptázy. cDNA se může nechat syntetizovat za použití testovací soupravy AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Syntesis Kit apod. Alternativně se pro syntézu a amplifikaci cDNA používá 5'-Ampli FINDER RACE Kit (vyráběný firmou Clontech) a metoda 5'-RACE (Frohman, M. A. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA (1988) 85, 8998 až 9002; Belyavsky, A. a kol., Nucleic Acid Res. (1989) 17, 2919 až 2932), která zahrnuje polymerázovou řetězovou reakci (PCR). Požadovaný fragment DNA se purifikuje ze získaného výsledného PCR produktu a může být navázán na vektorovou DNA. Navíc rekombinantní vektor se z ní připravuje a transformuje do E. coli atd., z něhož se vyberou kolonie pro přípravu požadovaného rekombinantního vektoru. Sekvence nukleotidů požadované DNA se potvrdí známou metodou jako je například dideoxy metoda.
Jakmile se jednou získá DNA kódující V oblast požadované protilátky, může se navázat na DNA kódující konstantní oblast (C oblast) požadované protilátky, která se potom integruje do expresního vektoru. Alternativně se může DNA kódující V oblast protilátky integrovat do expresního vektoru, který již obsahuje DNA kódující C oblast protilátky.
• 0 · 0 • · • · · · · · · ·
Pro přípravu protilátky pro použití v tomto vynálezu se gen protilátky integruje jak je níže popsáno do expresního vektoru tak, že je kontrolované exprimován exprimační regulační oblastí, například pomocí posilovače a/nebo promotéru. Následně se expresní vektor může transformovat do hostitelské buňky a tam potom může být protilátka exprimována.
V souladu s tímto vynálezem se používají uměle alterované rekombinantní protilátky jako jsou například chimérické protilátky a humanizované protilátky za účelem snižování heterologní antigenicity proti člověku. Tyto alterované protilátky se připravují známými způsoby.
Chimérické protilátky se získávají navázáním takto vzniklé DNA kódující V oblast protilátky na DNA kódující C oblast lidské protilátky, která se integruje do expresního vektoru a transformuje do hostitelských buněk, aby se v nich tvořily protilátky (viz European Patent Application EP 125023, a International Patent Publication WO 92/19759). Za použití této známé metody se může získat chimérická protilátka užitečná pro tento vynález.
Například plasmid, který obsahuje DNA kódující L řetězec V oblasti nebo H řetězec V oblasti chimérické PM-1 protilátky byl navržen jako pPM-k3 nebo pPM-hl.
E. coli obsahující plasmid, který byl mezinárodně uložen podle dohody Budapest Treaty jako NCIMB 40366 a NCIMB 40362 dne 11. února, 1991 u National Collections of Industrial and Marině Bacteria Limited.
Humanizovaná protilátka, která se také nazývá přeformovaná lidská protilátka, se připravuje transplantováním komplementaritu určujících oblastí (CDR) protilátky savce jiného než člověka, například myší protilátky na CDR lidské protilátky. Obecná rekombinantní DNA technologie pro přípravu takovýchto protilátek je také známa (viz European Patent Application EP 125023 a International Patent Publication WO 92-19759).
Specificky sekvence DNA, která byla navržena pro navázání CDR s myší protilátkou se strukturálními oblastmi lidské protilátky, se syntetizuje z několika oddělených oligonukleotidů, které mají na svých koncích části překrývající se s jinými. Takto získaná DNA se naváže na DNA kódující C oblast lidské protilátky a potom se začlení do expresního vektoru, který se transformuje do hostitelských buněk, aby se
4 «
vytvářely protilátky (viz European Application EP 239400 a International
PatentPublication WO 92-19759).
Pro strukturální oblasti FR lidské protilátky navázané na CDR se vybírá CDR, který utváří strukturu vážící příhodný antigen. Když je to žádoucí, mohou se aminokyseliny ve strukturální oblasti variabilní části protilátky nahradit tak, že CDR přeměněné lidské protilátky může vytvářet strukturu vážící příslušný antigen (Sáto, K. a kol., Cancer Res. (1993) 53, 851 až 856.
Například pro chimérickou nebo humanizovanou protilátku se používá C oblast lidské protilátky. Jako C oblast lidské protilátky stojí za zmínku Cy, může se například použít Cy1, Cy2, Cy3 a Cy4. C oblast lidské protilátky může být modifikována, aby se zlepšila stabilita protilátky nebo její produkce.
Chimérická protilátka se skládá z variabilní oblasti protilátky odvozené od savce jiného než člověk, zatímco humanizovaná protilátka se skládá z komplementaritu určující oblasti protilátky, odvozené od savce jiného než člověk a ze strukturálních oblastí a z C oblasti protilátky odvozené od lidské protilátky. Díky tomu byla tedy jejich antigenicita v lidském těle snížena tak, že se mohou používat jako protilátky pro použití v tomto vynálezu.
Upřednostňovaná složka humanizované protilátky pro použití v tomto vynálezu obsahuje humanizovanou PM-1 protilátku (viz International Patent Publication WO 9219759).
Geny protilátek vytvořené tak, jak je výše popsáno mohou být exprimovány a výsledný produkt se získá známými způsoby. V případě savčích buněk může být exprese genu doprovázena použitím vektoru, který obsahuje tradičně používaný užitečný promotér, gen protilátky, který má být exprimován a DNA, u které póly A signál je navázán na 3' konec po směru nebo vektor, který obsahuje zmíněnou DNA. Mezi příklady promotéru/enhanceru patří lidský cytomegalovirový bezprostřední časný promotér/enhancer.
Navíc se v tomto vynálezu může použít promotér/enhancer, který se používá k expresi protilátky. Mezi takové patří například virové promotéry/enhancery jako jsou například retrovirus, polyoma virus, adenovirus a simian virus 40 (SV 40) a promotéry/enhancery odvozené od savčích buněk jako například lidský elongační faktor 1a(HEF1a).
• · · · • · · ·· · · ···· • fc · · fc··» ·········· η S ······ ····· ······ ·· ··
Exprese může být například snadno dosaženo metodou podle Mulligana a kol. pokud se používá SV40 promotéru/enhanceru (Mulligan, R. C. a kolk., Nátuře (1979)
277, 108 až 114) nebo metodou podle Mizushima a kol. (Mizushima, S. a Nagata, S.
Nucleic Acid Res. (1990) 18, 5332), pokud se používá promotéru/enhanceru HEF1a.
V případě E. coli se exprese provádí vazbou běžného promotéru, signální sekvenci pro sekreci protilátek, na gen protilátky, který má být exprimován s následnou jejich expresí.
Jako promotér se může použít například lacz promotér a araB promotér. Tato metoda podle Warda a kol. (Ward, E. S. a kol., Nátuře (1989) 341, 544 až 546; Ward E.S. a kol., FASEB J. (1992) 6, 2422 až 2427) se používá, když se použije lacz promotér a metoda podle Bettera a kol. (Better, M. a kol., Science (1988) 240, 1041 až 1043) se používá, když se použije araB promotér.
Jako signální sekvence pro sekreci protilátek, když jsou produkovány v periplasmě E. coli, se může použít signální sekvence pelB (Lei, S. P. a kol., J Bacteriol. (1987) 169,
4379 až 4383). Po oddělení protilátek nahromaděných v periplasmě, se znovu před použitím upraví jejich struktura, (viz například WO 96/30394).
Jako počátek replikace mohou být použity ty, které jsou odvozené od SV40, polyoma viru, adenoviru, hovězího papillomaviru (BPV) apod. Dále k amplifikací počtu genových kopií v hostitelském buněčném systému mohou expresní vektory obsahovat jako volitelné markéry gen aminoglykosidfosfotransferázy (APH), gen thymidinkinázy (TK) gen xantinguanidinfosforibosyltransferázy E. coli (Ecogpt), gen dihydrofolátreduktázy (dhfr) apod.
K produkci protilátky pro použití v tomto vynálezu se požívá jakéhokoliv produkčního systému. Produkční systém přípravy protilátek zahrnuje produkční systém v organismu (in vivo) nebo ve zkumavce (in vitro). Jako produkční systém přípravy protilátek ve zkumavce (in vitro) stojí za zmínku produkční systém, ve kterém se používají eukaryotické buňky a produkční systém, ve kterém se používají prokaryotické buňky.
Pokud se používají eukaryotické buňky, používá se produkční systém, který zahrnuje živočišné buňky, rostlinné buňky a buňky hub. Mezi známé živočišné buňky patří (1) savčí buňky jako jsou například buňky CHO, buňky COS, myelomové buňky, buňky ledviny mláděte křečka (BHK), HeLa buňky a Věro buňky, (2) buňky obojživelníků » · « » ·· jako jsou například vajíčka Xenopus nebo (3) buňky hmyzu jako jsou například sf9, sf21 a Tn5. Mezi známé rostlinné buňky patří například ty, které jsou odvozeny od Nicotiana tabacum. Mezi známé buňky hub patří kvasnice jako je například rod Saccharomyces, specifičtěji Saccharomyces cereviceae nebo vláknité houby jako je například rod Aspergillus, specifičtěji Aspergillus niger.
Pokud se používají prokaryotické buňky, používá se produkční systém, který zahrnuje bakteriální buňky. Mezi známé bakteriální buňky patří Escherichia coli (E. coli) a Bacillus subtilis.
Protilátky se získávají transformací genu pro požadovanou protilátku do buněk a následnou kultivací transformovaných buněk ve zkumavce. Kultivace se provádí známým způsobem. Jako kultivační médium se například se používá DMEM, MEM, RPMI1640 a IMDM a mohou se kombinovat se sérovými náhradami, jako je například fetální telecí sérum (FCS). Kromě toho se mohou protilátky tvořit v organizmu (in vivo) pomocí injekce buněk transformovaných genem protilátky do dutiny břišní zvířete apod.
Jako produkční systémy přípravy protilátek v organismu (in vivo) stojí za zmínku ty, u kterých se používají živočichové a rostliny. Pokud se používají živočichové, produkční systémy obsahují savce a hmyz.
Jako savci se mohou používat kozy, prasata, ovce, myši a skot (Vičky Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993). Jako hmyz se mohou použít housenky bource morušového.
Pokud se používají rostliny, může se například použít tabák.
Geny protilátek jsou transformovány do těchto živočichů nebo rostlin a v nich se tvoří se protilátky, které se pak znovu získají. Pro přípravu fúzovaných genů se vloží například gen protilátky doprostřed genu kódujícího protein, který se vrozeně tvoří v mléce jako je např. kozí β kasein. Fragmenty DNA, které obsahují fúzovaný gen, do kterého byl začleněn gen protilátky, se injekčně vpraví do kozího embrya a embryo se zavede do kozí samičky. Požadovaná protilátka se získává z mléka, které produkuje transgenická koza narozená koze, které bylo embryo potomka zavedeno. Aby se zvýšilo množství tvorby mléka obsahujícího požadovanou protilátku, které produkuje transgenická koza, podávají sejí příslušné hormony. (Ebert, K. M, a kol.,
Bio/Technology (1994) 12, 699 až 702).
9 · 9 9 4 4 4 · « 4 ·· · 4 4444 . —t *··· »44444 ·* >44444 11 44444 444444 44 «4
Pokud se používají housenky bource morušového, nechají se infikovat baculovirem, do kterého byl vložen gen požadované protilátky, a požadovaná protilátka se získá z tělesné tekutiny housenky bource morušového (Maeda, S. a kol., Nátuře (1985) 315, 592 až 594. Pokud se navíc použije tabák, gen požadované protilátky se vloží do expresního genu rostlin, například pMON 530 a tímto vektorem je infikována baktérie jako je například Agrobacterium tumefaciens. Potom se baktérií infikuje tabák, aby se z listů tabáku získaly požadované protilátky. (Julian, K.-C. Ma a kol. Eur. J.
Immunol. (1994) 24, 131 až 138).
Pokud se protilátky produkují v produkční systému v organismu (in vivo) nebo ve zkumavce (in vitro), jak je uvedeno výše, DNA kódující těžké řetězce (H řetězce) nebo lehké řetězce (L řetězce) protilátek se odděleně začlení do každého expresního vektoru a hostitelé jsou transformováni současně. Nebo DNA kódující těžké řetězce (H řetězce) nebo lehké řetězce (L řetězce) může být začleněna do jednotlivého expresního vektoru a hostitel je jím transformován (viz International Patent Publication WO 94-11529).
Protilátky pro použití v tomto vynálezu mohou být buď fragmenty protilátek nebo modifikované jejich verze, pokud jsou vhodné k použití. Jako fragmenty protilátek stojí za zmínku například Fab, F(ab')2, Fv nebo jednoduchý řetězec Fv (ScFv), u kterého jsou Fv těžkého nebo lehkého řetězce spojeny pomocí vhodného linkeru.
Protilátky jsou specificky upravovány pomocí enzymů, například papainu nebo pepsinu, aby produkovaly fragmenty protilátek. Nebo jsou geny kódující fragmenty protilátek vytvořeny a potom začleněny do expresního vektoru, který je exprimován na vhodné hostitelské buňce (viz například Co, M. S. a kol., J. Immunol. (1994) 152, 2968 až 2976; Better, M. a Horwitz, A. H., Methods in Enzymology (1989) 178, 476 až 496; Plueckthun, A. a Skerra, A., Methods in Enzymology (1989) 178, 476 až 496; Lamoyi,
E., Methods in Enzymology (1986) 121, 652 až 663; Rousseaux, J. a kol., Methods in Enzymology (1986) 121,663 až 669; Bird, R. E. a kol., TIBTECH (1991) 9, 132 až 137).
ScFv se může získat spojením V oblasti těžkého řetězce a V oblasti lehkého řetězce protilátky. V případě scFv, V oblast těžkého řetězce a V oblast lehkého řetězce jsou s výhodou spojeny přes spojku, s výhodou je to peptidová spojka (Huston, J. S. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA (1988) 85, 5879 až 5883). V oblast těžkého řetězce a V oblast lehkého řetězce u scFv mohou být odvozeny od kterékoliv výše uvedené fc· · · protilátky. Jako peptidová spojka pro spojení V oblastí se může použít jakýkoliv peptid s jednoduchým řetězcem, která obsahuje například 12 až 19 aminokyselinových zbytků.
DNA kódující scFv se může získat, za použití DNA kódující H řetězec nebo H řetězec V oblasti výše uvedené protilátky a DNA kódující L řetězec nebo L řetězec V oblasti výše uvedené protilátky, jako šablona amplifikací části DNA kódující požadovanou sekvenci aminokyselin z výše uvedených sekvencí pomocí techniky PCR s párem primerů, kteří specifikují oba jejich konce a další amplifikací kombinace DNA kódující část peptidové spojky a páru primerů, který určuje oba konce zmíněné DNA napojené na těžké a lehké řetězce.
Jakmile je jednou vytvořena DNA kódující scFv, může se běžnými způsoby získat hostitel transformovaný zmíněným expresním vektorem, který tuto DNA obsahuje a scFv se může získat běžným způsobem za použití transformovaného hostitele.
Tyto fragmenty protilátek mohou být vytvořeny, pokud se získá jejich gen podobným způsobem jaký je uveden výše a pokud je umožněno, aby byl gen exprimován u hostitele. Pojem „protilátka“, jak je uvedeno v patentovém nároku této patentové žádosti, zahrnuje tyto fragmenty protilátek.
Jako modifikované protilátky se mohou použít protilátky spojené s různorodými molekulami, jako je například polyethylenglykol (PEG). Pojem „protilátka“, jak je uvedeno v patentovém nároku této patentové žádosti, zahrnuje tyto modifikované protilátky. Tyto modifikované protilátky se mohou získávat chemickou modifikací takto získaných protilátek. Tyto metody už jsou v daném oboru zavedeny.
Protilátky produkované a exprimované, jak je výše uvedeno se separují z vnitřku nebo z vnějšku hostitelské buňky a potom se purifikují, aby se dosáhlo jejich homogenicity. Separace a purifikace protilátek pro použití v tomto vynálezu se provádí afinitní chromatografii. Jako sloupce pro použití v této afinitní chromatografii se může použít sloupec proteinu A a sloupec proteinu G. Mezi nosiče použité u sloupce proteinu A patří například Hyper D, POROS, Sepharose F. F. apod. Mohou být použity i další alternativní metody separace a purifikace protilátek bez jakéhokoliv omezení. Separace a purifikace protilátek pro použití v tomto vynálezu se může dosáhnout kombinací chromatografíe jiné než výše zmíněné afinitní chromatografíe, filtrace, ultrafiltrace, vysolování, dialýzy apod. Chromatografíe zahrnuje například iontoměničovou chromatografii, hydrofóbní chromatografii, gelovou filtraci, apod. Tyto chromatografíe • · · · mohou být aplikovány technikou HPLC. Alternativně se může použít HPLC s reverzní fází.
Koncentrace protilátek získaných výše uvedeným způsobem se určuje měřením absorbance nebo pomocí metody ELISA apod. Pokud se použije měření absorbance, vzorek se vhodně naředí pomocí PBS (-) a absorbance se měří při vlnové délce 280 nm s následným výpočtem při použití absorpčního koeficientu 1,35 OD při 1 mg/ml. Pokud se použije metoda ELISA, měření se provádí tak, jak je níže uvedeno. 100 μΙ kozího antihumánního IgG (vyráběné firmou TÁGO) se naředí na 1 pg/ml v 0,1 M hydrogenuhličitanovém pufru, pH 9,6, a přidá se do 96-jamkové plotny (vyráběné firmou Nunc) a nechá se inkubovat přes noc při teplotě +4 °C, aby se protilátky imobilizovaly. Po navázání se přidá 100 μΙ každé příslušně naředěné protilátky tohoto vynálezu nebo vzorku obsahujícího protilátku, nebo 100 μΙ lidského IgG (vyráběného firmou CAPPEL) jakožto standardu a nechá se inkubovat při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny.
Pro promytí se přidá 100 μΙ 5000x naředěné antihumánní protilátky značené alkalickou fosfatázou (vyráběné firmou BIO SOURCE) a nechá se inkubovat při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Po promytí se přidá roztok substrátu a nechá se inkubovat a následně se měří absorbance při vlnové délce 405 nm za použití spektrofotometru MICROPLATE READER Model 3550 (vyráběné firmou Bio-Rad), aby se mohla spočítat koncentrace požadované protilátky.
Pozměněný IL-6 pro použití v tomto vynálezu má schopnost navázat se na IL-6 receptor, ale nepřenáší biologickou aktivitu IL-6. Proto pozměněný IL-6, který soutěží s IL-6 o vazbu na IL-6 receptor a nepřenáší biologickou aktivitu, blokuje transdukci signálu IL-6.
Pozměněný IL-6 vzniká provedením mutace tak, že se sekvence aminokyselin IL-6 nahradí zbytky aminokyselin. IL-6, zdroj modifikovaného IL-6, může být jakéhokoliv původu, ale pokud se rozhoduje o antigenicitě, používá se s výhodou lidský IL-6.
Sekundární struktura IL-6 se předpovídá pomocí známého programu pro molekulární modelování sekvence aminokyselin, například WHATIF (Vriend a kol., J. Mol. Graphics (1990) 8, 52 až 56), a hodnotí se celkové účinky zbytků aminokyselin, které mají být nahrazeny. Poté, co se určí příslušný zbytek aminokyseliny, provede se mutace běžně používanou metodou polymerázové řetězové reakce (PCR) s použitím vektoru, který obsahuje sekvenci nukleotidů kódující lidský IL-6 gen. Takto se získá gen ♦ « · « • · kódující pozměněný IL-6. Ten se potom začlení dle požadavku do příslušného expresního vektoru, ze kterého se získá pozměněný IL-6 podle exprese, produkce a purifikace zmíněné rekombinantní protilátky.
Specifické příklady pozměněného IL-6 popisuje Brakenhoff a kol., J. Biol. Chem. (1994) 269, 86 až 93, a Savino a kol, EMBO J. (1994) 13, 1357 až 1367, WO 96-18648 a WO 96-17869.
Parciální peptidy IL-6 nebo receptorů IL-6 pro použití v tomto vynálezu mají schopnost navázat se na IL-6 receptor nebo na IL-6, ale nepřenášejí biologickou aktivitu IL-6. Proto se parciální peptidy IL-6 nebo receptorů IL-6 navážou na IL-6 receptor nebo na IL-6 a tím ho obsadí. To vede k tomu, že nedochází k přenosu biologické aktivity IL-6 a blokuje se transdukce signálu IL-6.
Parciální peptidy IL-6 nebo receptorů IL-6 jsou peptidy, které obsahují některé nebo všechny sekvence aminokyselin oblasti, které se uplatňují při vazbě na IL-6 nebo receptor IL-6. Takovéto peptidy obecně obsahují 10 až 80 aminokyselinových zbytků, s výhodou 20 až 50, ještě výhodněji 20 až 40.
Parciální peptidy IL-6 nebo receptorů IL-6 se tvoří tak, že se specifikuje oblast sekvence aminokyselin IL-6 a IL-6 receptorů, která se uplatňuje při vazbě IL-6 a IL-6 receptor. Potom následuje produkce některých nebo všech sekvencí aminokyselin běžnou metodou jako je technologie genového inženýrství nebo metoda peptidové syntézy.
Aby se vytvořily parciální peptidy IL-6 nebo receptorů IL-6 technologií genového inženýrství, DNA sekvence kódující požadovaný peptid se začlení do expresního vektoru, ze kterého se získává peptid pomocí exprese, produkce a purifikace zmíněné rekombinantní protilátky.
Produkce parciálního peptidu IL-6 nebo receptorů IL-6 pomocí metody peptidové syntézy se provádí za použití běžně užívané peptidové syntézy, jako je například syntéza na pevné fázi nebo syntéza v tekuté fázi.
Zvláště je vhodné použít metodu, kterou popisuje Zoku-lyakuhinno Kaithatsu (Sequel to Development of Pharmaceuticals), Vol. 14, Peputido Gousei (Peptide Synthesis), vydáno Haruaki Yajima, Hirokawa Shoten, 1991. Použitá metoda syntézy v pevné fázi zahrnuje například reakci, při které se spojují aminokyseliny odpovídajícími C-konci peptidu, který má být syntetizován, na nosič, který je nerozpustný v organických • · · * · * · · * * « » « · · · · · · _ « · « · «·«··« · · · · ♦··· *“ * «···· ···»«» ·» ·» rozpouštědlech. Potom se aminokyselina, která má α-amino skupinu nebo funkční skupinu na bočním řetězci, chráněnou pomocí příslušné protektivní skupiny, nechá zkondenzovat do jedné aminokyseliny najednou ve směru od C konce k N konci.
Reakce, při které se zmíněná protektivní skupina α-amino skupiny aminokyseliny nebo peptidu spojuje s pryskyřicí se buď vypustí nebo se opakuje tak, aby se prodloužil peptidový řetězec. Metody peptidové syntézy pevné fáze se dělí na metodu Boc a metodu Fmoc v závislosti na druhu použité protektivní skupiny.
Po dokončení syntézy požadovaného peptidu se provádí reakce, kdy se peptidový řetězec zbaví protektivní skupiny a nosiče. Pro odštěpení nosiče od peptidového řetězce se běžně používá fluorovodík nebo kyselina trifluormetansulfonová v případě metody Boc a TFA u metody Fmoc. U metody Boc se například výše zmíněná peptidová pryskyřice upravuje ve fluorovodíku za přítomnosti anizolu. Následně se odstraní protektivní skupina a peptid se obnoví tím, že se odštěpí nosič. Jeho lyofilizací se získá surový peptid. Na druhé straně u metody Fmoc se používá například TFA podobným způsobem, který je výše uveden, aby se provedlo odstranění protektivní skupiny a odštěpení nosiče od peptidu.
Takto získaný surový peptid se metodou HPLC separuje a purifikuje. Jeho promývání se provádí ve vodném acetonitrilovém rozpouštěcím systému, který se běžně používá k purifikaci proteinů za optimálních podmínek. Získaná frakce, která odpovídá vrcholu profilu, se shromáždí a lyofilizuje. Takto purifikovaná peptidová frakce se identifikuje pomocí stanovení molekulové hmotnosti na hmotnostním spektroskopu, pomocí analýzy skladby jednotlivých aminokyselin a analýzy sekvence aminokyselin, apod.
Specifické příklady parciálního peptidu IL-6 nebo receptorů IL-6 jsou popsány v Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) 2 (1990) -188600, Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) 7 (1995) - 324097, Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) 8 (1996) - 311098 a United States Patent US 5210075.
Aktivita antagonisty IL-6 pro použití v tomto vynálezu se stanoví za použití běžně známé metody. Zvláště se kultivuje buňka MH60.BSF2 závislá na IL-6, ke které se přidá IL-6 a aktivita se stanoví tak, že se začlení do buňky závislé na IL-6 3H-thymidin za současné přítomnosti antagonisty IL-6. Alternativně se stanovení provádí kultivací U266, buňky exprimující IL-6 receptor tak, že se k ní přidá současně IL-6 značený • · · · • · ·
9 9
9 9 • · • · · · pomocí 125l a antagonista. Potom se určí IL-6 označený pomocí 125l navázaný na buňku exprimující IL-6 receptor. U výše uvedeného testovacího systému se navíc ke skupině obsahující antagonistu IL-6 připraví negativní kontrolní skupina, která neobsahuje žádného antagonistu IL-6. Výsledky získané z těchto skupin se potom porovnávají, aby se stanovila inhibiční aktivita antagonisty IL-6 receptoru.
Aby se potvrdily účinky, kterých bylo v tomto vynálezu dosaženo, antagonista IL-6 použitý v tomto vynálezu se podává zvířatům, u kterých se vyvinulo zánětlivé onemocnění střeva pomocí injekce CD4-pozitivních a CD45RB-silně pozitivních buněk (CD4+CD45RBhl9h celíš) a hodnotí se účinnost při potlačování úbytku hmotnosti a zlepšení skóre zánětlivého onemocnění střeva. Další účinky tohoto vynálezu jsou snížené nechutenství, zmírnění bolestí břicha, zlepšení průjmů a prevence opětovného výskytu zánětlivého onemocnění střeva.
Buňky CD4+CD45RBhl9h, které se přenesou do zvířat pomocí antagonisty IL-6, se izolují například pomocí metody uvedené níže v příkladech. Zvířata, ze kterých buňky CD4+CD45RBhl9h pocházejí, jsou běžně používaná zvířata v experimentálních pokusech, jako jsou například myši nebo krysy.
Jak je popsáno u příkladu níže, u živočichů, u kterých dojde k rozvoji zánětlivého onemocnění střev, podání protilátky proti IL-6 receptoru k potlačení úbytku hmotnosti a zlepšení skóre zánětlivého onemocnění střev. Tím bylo zjištěno, že antagonisté IL-6, jako jsou například protilátky proti IL-6 receptoru se podílí na terapeutickém účinku u zánětlivého onemocnění střev.
Jedinci, kteří byli určeni pro léčbu v tomto vynálezu, jsou savci. S výhodou byl vybrán člověk, jako jedince určený k léčbě.
Preventivní nebo terapeutická činidla tohoto vynálezu se podávají bud ústy nebo parenterálně, celkově nebo lokálně. Používá se například nitrožilní injekce, jako je například podání infúze, nitrosvalová injekce, nitrobřišní injekce, podkožní injekce, čípky, proplachování střev,střevní potahované tablety pro podávání ústy apod. a způsob podání se vybírá podle věku a stavu nemocného. Účinná jednotlivá dávka se vybírá z rozmezí od 0,001 mg do 100 mg na kg tělesné hmotnosti. Alternativně se pohybuje jednotlivá dávka v rozmezí od 0 do 1000 mg, s výhodou od 5 do 50 mg.
Preventivní nebo terapeutická činidla pro zánětlivá onemocnění střev tohoto vynálezu mohou obsahovat farmaceuticky přijatelné nosiče nebo přísady v závislosti na < ·· ·· • · · fc · ·· fcfc·· • · · · fcfc·· • fc · · fcfcfc··· · · · ···· způsobu podání. Mezi takovéto nosiče nebo přísady například patří voda, farmaceuticky přijatelné organické rozpouštědlo, kolagen, polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon, polymer karboxyvinylu, sodná sůl karboxymethylcelulózy, sodná sůl polyakrylátů, sodná sůl alginátu, dextran rozpustný ve vodě, sodná sůl karboxymethylového škrobu, pektin, methylcelulóza, ethylcelulóza, xantanová pryskyřice, arabská pryskyřice, kasein, želatina, agar, diglycerin, propylenglykol, polyethylenglykol, vazelína, parafín, stearyl alkohol, kyselina stearová, lidský sérový albumin (HSA), manitol, sorbitol, laktóza, farmaceuticky přijatelný surfaktant, apod. Přísady se vybírají bez omezení z výše uvedených látek nebo jejich kombinací v závislosti na podávané formě.
Onemocněním určeným k léčbě tohoto vynálezu je zánětlivé onemocnění střev. Zánětlivé onemocnění střev zahrnuje ulcerózní kolitidu a Crohnovo onemocnění. Tato onemocnění se nejčastěji vyskytují u mladých lidí ve věku okolo 20 let a i v dnešní době je známo velmi málo o příčinných antigenech nebo o mechanismu zánětlivé patologie. Nicméně probíhá rozsáhlý výzkum různých buněk a cytokinů k jejich objasnění.
V průběhu posledních několika let byl zaznamenán pokrok v analýze buněk, které způsobují zánětlivé onemocnění střev. Je zřejmé, že se může vytvořit živočišný model zánětlivého onemocnění střev pomocí přesunu purifikovaných CD4-pozitivních buněk, buněk CD45RB-silně pozitivních (CD4+CD45RBh’9h) na imunodeficientní myš (SCID myš) (Morrissey, P. J. a kol., J. Exp. Med. (1993) 178, 237 až 244; Leach, M. W. a kol.,
Am. J. Pathol. (1996) 148, 1503 až 1515; Aranda, R. a kol., J. Imunol. (1997) 158, 3464 až 3473).
Na druhé straně se ukazuje, že CD4-pozitivní buňky, buňky CD45RB-slabě pozitivní (CD4+CD45RB|OW) nevyvolávají zánětlivé onemocnění střev a poněkud potlačují vyvolání zánětlivého onemocnění střev vyvolané pomocí CD4-pozitivních buněk, buněk CD45RB-silně pozitivních (Powrie, F. R. a kol., J. Exp. Med. (1994) 179,
589 až 600). Je známo, že množství exprese CD45RB na jednu buňku koreluje s produkcí cytokinů. Proto se má za to, že CD4-pozitivní buňky, buňky CD45RB-silně pozitivní, jsou pomocné buňky typu 1 (T helper celíš - Th1), obdobně jako buňky, které produkují IFN-ot a TNF-α, zatímco CD4-pozitivní buňky , buňky CD45RB-slabě pozitivní jsou pomocné buňky typu 2 (T helper celíš - Th2), obdobně jako buňky, které produkují IL-4,. IL-10 apod. (Lee, W. a kol., J. Immunol. (1990) 144, 3288 až 3295).
• · · ·
Proto se má za to, že vzplanutí zánětlivého onemocnění střev nejpravděpodobněji souvisí porušením rovnováhy Th1 a Th2, a to potvrzuje i skutečnost, že chronický zánět střeva, který je obdobný lidské ulcerózní kolitidě, vzniká u myší s deficitem IL-10, vytvořeným pomocí genové metody. (Kuhn, R. a kol., Cell (1993) 75, 263 až 274).
Modelová zvířata, která se používají v příkladech, jsou v histologickém obraze tlustého střeva velmi podobná pacientům s ulcerózní kolitidou a Crohnovou chorobou. (Leach, M. W. a kol., Am. J. Pethol. (1996) 148, 1503 až 1515). V případě ulcerózní kolitidy se efekty pozorují často ve velkém rozsahu v konečníku a slizniční epitelie jsou specificky poškozené. U tohoto modelu jsou klinické patologie velmi obdobné v tom, že poškozená místa postihují rozsáhlé oblasti, i když jsou převážně lokalizovány v tlustém střevě s rozsahem do krypt.
Na druhé straně je Crohnovo onemocnění chorobou, kdy zánět postihuje celou tloušťku stěny, není lokalizován ve sliznici a může se šířit kdekoliv a trávicí trubici od dutiny ústní až po konečník. Histologický se popisuje jako granulomatózní nekaseifikující zánět, tento model je velmi podobný Crohnově chorobě v tom, že zánět není lokalizován pouze ve slizniční vrstvě, kde se nacházejí makrofágy, lymfocyty a shluky mnohojaderných obrovských buněk, často má formu granulomů a pouze zřídka se objevují abscesy v kryptách.
Proto jsou v klinickém výzkumu uváděny i případy, které měly současně charakteristické projevy ulcerózní kolitidy a Crohnova onemocnění (Tanaka, M. a kol., Hepatogastroenetrology (1990) 37, 18 až 31). U zánětlivého onemocnění střev byla zjištěna v epitelu zesílená exprese hlavního histokompatibilního komplexu třídy II (Trejdosiewicz, L. K. a kol., Dig. Dis. Sci. (1989) 34, 1449 až 1456) a toto bylo potvrzeno i u tohoto modelu. U tohoto modelu se objevuje charakterické ztluštění epiteliální tkáně, které zřejmě souvisí se zvýšeným buněčným růstem, který byl zjištěn u pacientů s ulcerózní kolitidou (Serafíni, Ε. P. a kol., Gut (1981) 22, 648 až 652).
Tento současný model je velmi podobný klinickému zánětlivému onemocnění střev a může vyvolat pokles hmotnosti u těžkých případů. V pokusu, který tento model používá, se histologická poškození významně zlepšila a nebyl zjištěn pokles hmotnosti, což svědčí pro to, že antagonisté IL-6 se vyznačují terapeutickým účinkem u zánětlivého onemocnění střev jako je ulcerózní kolitida a Crohnovo onemocnění.
a » a a a · a a a
Příklady provedení vynálezu
Tento vynález bude nyní vysvětlen podrobněji s odkazem na pracovní příklady, referenční příklady a experimentální příklady. Avšak je třeba zdůraznit, že není omezen pouze na tyto příklady.
Příklad 1
Slezina se za aseptických podmínek odstraní ze samčí myši BALB/c a po homogenizaci se připravila suspenze jednotlivých buněk. Potom, aby se odstranily červené krvinky, byly shluky buněk upravovány pomocí lyzačního roztoku (směs 0,16 M NH4CI a 0,17 M Tris pufru s pH 7,2 v poměru 9 :1) a dále se dvakrát promyly pomocí fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem. Takto se získaly myší slezinné buňky.
Promyté myší slezinné buňky se suspendovaly v médiu RPM11640, které obsahuje 2 % FCS. Po spočítání buněk se uzpůsobily na 1,1 x 108/ml. Pak se přidaly proti-myší CD4 protilátky (L3T4 Microbeads, vyráběné firmou Miltenyi Biotech) v objemu 1/9 a ty se na buňky vázaly na ledu po dobu 15 minut (při buněčné hustotě 1 x 108/ml). Dále se frakce CD4 pozitivních buněk oddělovala pomocí separačního sytému Mini MACS (vyráběného firmou Miltenyi Biotech). Po spočítání buněk se suspendovaly ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem s přídavkem 2 % FCS, aby se upravila buněčná hustota na 4 x 107/ml.
K suspenzi CD4 pozitivních buněk se přidá 1/100 objemu králičích proti-myších CD4 (L3T4) protilátek značených pomocí LE (0,2 mg/ml, klon RM4-5, vyráběné firmou Pharmingen) a 1/100 objemu králičích proti-myších CD45RB protilátek značených pomocí FITC (0,5 mg/ml, klon 16A, vyráběné firmou Pharmingen). Dále se směs nechá stát na ledu po dobu 20 minut, aby se mohly protilátky navázat. K označeným buňkám se přidá médium RPMI1640 s přídavkem 2 % FCS, dále se promyje centrifugací a resuspenduje ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem s přídavkem 2 % FCS a uskladní se na tmavém chladném místě.
• * · ·· ·· ··«· • « · · ·♦♦· « 9 9 · ······
OO · · * · ···· zb ···· · ··* ♦·» ·· ··
Z označených CD4 pozitivních buněk se vyberou CD4 pozitivní buňky a buňky CD45RB silně pozitivní (CD4+CD45RBhigh) za použití průtokového cytometru (FACS Vantage, vyráběný firmou Becton Dickinson). Tato buněčná skupina odpovídá horním 50 % buněk, které mají exprimován CD45RB, z CD4 a CD45RB pozitivních buněk.
Takto získané buňky se po centrifugaci suspendují ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem na koncentraci 4 x 106/ml. Čistota buněk byla 97 % jakožto CD45RB pozitivních buněk jejich koeficient přežívání byl 98 %.
Tyto vysoce purifikované buňky se injekčně vpravily do dutiny břišní v koncentraci 4 x 105/ml (100 μΙ obsahuje 4 x 106/ml) myším C.B-17 scid, aby se připravil model zánětlivého onemocnění střev (Leach, M. W. a kol., Am. J. Pathol. (1996) 148, 1503 až 1515, Aranda, R. a kol., J. Immunol. (1997) 158, 3464 až 3473). Experiment byl prováděn u tří následujících skupin podle způsobu léčby: (1) skupina s přenosem buněk, s žádným podáváním protilátky proti IL-6 receptorů, 5 myší; (2) skupina s přenosem buněk, s podáváním protilátky proti IL-6 receptorů, 3 myši; (3) skupina bez přenosu buněk, 3 myši.
Protilátka proti IL-6 receptorů MR16-1 byla podávána následovně. Nejprve byla upravena na 20 mg/ml ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem. Každé myši bylo podáno 100 μΙ do dutiny břišní 15 až 30 minut před injekčním podáním výše uvedených buněk. O týden později byla protilátka upravena na 10 mg/ml ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfátem a každé myši bylo podáno do dutiny břišní 100 μΙ. Tento postup se opakoval každý týden až do 8. týdne od přenosu buněk. Skupina, které se protilátka nepodávala, dostávala podobným způsobem fyziologický roztok pufrovaný fosfátem.
8. až 9. týden po přenosu buněk se myši vážily a tkáň tlustého střeva (sestupné části tlustého střeva) se odstranila a ponořila do látky OCT. Vzorky se zamrazily při teplotě - 80 °C. Za použití kryostatu se bločky vzorků, které se fixovaly 10 % roztokem formalínu, krájely na tenké plátky o tloušťce 6 pm. Tyto zmražené řezy se pro histologické zkoumání obarvily dvojitou metodou pomocí hematoxylin-eozinu. Bylo provedeno zhodnocení účinnosti léku tak, že se stanovovaly přesné změny tělesné hmotnosti (poměr před a po přenosu buněk) a provádělo se histologické vyšetření před vyvoláním zánětlivého onemocnění střev pomocí přenosu buněk a 8 až 9 týdnů pro přenosu buněk. Pro histologické vyšetření tkáň každé myši byla hodnocena na základě následujícího skóre o 4 stupních zánětlivého onemocnění střev (dále zde • to totototo « · « · toto····
O 7 · · · · ····
Z/ ···· · ··· ··· toto toto označovaného jako skóre zánětlivého onemocnění střev) (Ito, H. a kol., J. autoimmunity (1997) 10, 455 až 459).
Skóre zánětlivého onemocnění střev:
Stupeň 0 (žádný): neodlišitelný od normální BALB/c myši;
Stupeň 1 (minimální): zjištěna mírná hypertrofie epiteliálních tkání;
Stupeň 2 ( střední): mezi stupni 1 a 3
Stupeň 3 (těžký): významná hypertrofie epiteliální tkáně doprovázená rozsáhlým rozsevem infiltrace zánětlivými buňkami a chybění pohárkových buněk.
Výsledky změn tělesné hmotnosti a skóre zánětlivého onemocnění střev jsou znázorněny na obrázku 1.
U myší, kterým byly implantovány CD4 pozitivní a CD45RB silně pozitivní buňky, došlo k rozvoji zánětlivého onemocnění střev a také histologicky byl zjištěn významný zánět. Také se u nich projevila tělesná slabost související se vzplanutím onemocnění a v průměru 11 % pokles tělesné hmotnosti. Na druhé straně u skupiny, které byla podávána protilátka proti IL-6 receptorů, byl zjištěn statisticky významný pokles tělesné hmotnosti bylo dosaženo téměř stejné tělesné hmotnosti jako před přenosem buněk.
Stejně ta došlo i ke zlepšení histologického skóre zánětlivého onemocnění střev. Pro statistické hodnocení změn tělesné hmotnosti, byla nejprve provedena ANOVA (Analysis of variance, SPSS for Windows ver. 6. SPSS lne.) k potvrzení významnosti a následně bylo provedeno mnohočetné srovnání metodou Bonferroni, u které byla zjištěna významnost s 5% hladinou významnosti.
Tento model je velmi obdobný lidskému zánětlivému onemocnění střev, a proto se na něm demonstrovalo, že protilátka proti IL-6 receptorů je účinná jakožto preventivní nebo terapeutické činidlo pro zánětlivé onemocnění střev jako je například uleerózní kolitida a Crohnovo onemocnění.
• 0 ·· 00 • · · · 0 · · ·
0 0 · 0 0
0 0 0 0 0 «
0 0 0 0 #
00« 00« «0 ·· ····
Tabulka 1; Potlačení poklesu tělesné hmotnosti a zhoršování zánětlivého onemocnění střev pomocí protilátky proti IL-6 receptorů
| Vstřikovaná buňka | Léčba | Počet zvířat | Změny tělesné hmotnosti (%) | Skóre zánětlivého onemocnění střev |
| CD4+CD45RBhlgh | Fyziologický roztok pufrovaný fosfátem | 5 | 88,8 + 6,7 | 2,4 |
| CD4+CD45RBh'9h | Protilátka proti IL-6 receptorů | 3 | 100,9 + 4,5 | 1,0 |
| Žádná | Fyziologický roztok pufrovaný fosfátem | 3 | 107,7 + 0,9 | 0,3 |
Změny tělesné hmotnosti jsou vyjádřeny jako průměr ± standardní odchylka skupiny.
Skóre zánětlivého onemocnění střev je vyjádřeno jako průměr skupiny.
Referenční příklad 1. Příprava lidského rozpustného receptorů IL-6
Rozpustný IL-6 receptor se připravuje metodou PCR za použití plasmidu pBSF2R.236, který obsahuje cDNA, která kóduje IL-6 receptor získaný metodou podle Ymasaki a kol., (Ymasaki, K. a kol., Science (1988) 241, 825 až 828). Plasmid pBSF2R.236 byl rozštěpen pomocí restrikčního enzymu Sph I, aby se získala cDNA IL-6 receptorů, která byla potom začleněna do mp18 (vyráběné firmou Amersham). Bylo použito syntetického oligoprimeru navrženého pro vložení zastavovacího kodónu do cDNA IL-6 receptorů, mutace proběhla v cDNA IL-6 receptorů pomocí metody PCR za
0* ·«*· • 0 ··
0 · • 0 0 • · · 0 0· 00 použití mutagenního systému Mutagenesis Systém (vyráběného firmou Amersham). Proces vedl k vložení zastavovacího kodónu do aminokyseliny na pozici 345 a byla získána cDNA kódující rozpustný IL-6 receptor.
Aby došlo k exprimaci cDNA solubilního IL-6 receptoru na CHO buňkách, byl navázán plasmid pSV (vyráběný firmou Pharmacia), aby se získal plasmid pSVL344. cDNA solubilního IL-6 receptoru, která byla odštěpena pomocí Hind lll-Sal I, byla vložena do plasmidu pECEdhfr obsahujícího cDNA dfhr. Tím se získal plasmid pECEdhfr344, který je exprimován na CHO buňkách.
Potom bylo 10 pg plasmidu pECEdhfr344 přeneseno na dhfr-CHO buněčnou linii DXB-11 (Urland a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA (1980) 77, 4216 až 4220) pomocí precipitační metody s fosfátem vápenatým (Chen C. a kol., Mol. Cell. Biol. /1987) 7, 2745 až 2751). Buňky CHO byly kultivovány po dobu 3 týdnů v α MEM selekčním médiu bez nukleosidů, které obsahuje 1 mmol glutaminu, 10 % dialyzovaného FCS,
100 U/ml penicilinu a 100 pg/ml streptomycinu.
Vybrané CHO buňky byly filtrovány pomocí limitní diluční metody, aby se získal jednoduchý buněčný klon CHO. Buněčný klon CHO byl amplifikován ve 20 až 200 nmol methotrexátu (MTX), aby se získala buněčná linie CHO 5E27, která produkuje lidský rozpustný IL-6 receptor. Buněčná linie CHO 5E27 byla kultivována v Dulbeccově médiu modifikovaném podle Iscova (IMDM, vyráběném firmou Gibco), které obsahuje 5 % FBS. Sbíral se supernatant kultury a stanovovala se koncentrace solubilního IL-6 receptoru v supernatantu kultury pomocí ELISA. Výsledek potvrdil, že solubilní IL-6 receptor je v supernatantu kultury přítomen.
Referenční příklad 2. Příprava lidské IL-6 protilátky
Pomocí 10 pg rekombinantního IL-6 (Hirano a kol., Immunol. Lett., 17:41, 1988) dohromady s kompletní Freundovou přísadou byly imunizovány myši BALB/c. Toto se opakovalo každý týden dokud se nepodařilo v séru zachytit protilátky proti IL-6. Imunitní buňky byly vyjmuty z lokální lymfatické uzliny a potom se nechaly fúzovat s myelomovými buňkami linie P301 za použití polyethylenglykolu 1500. Hybridomy se vybíraly metodou podle Oi a kol. (Selective Methods in Cellular Immunology, W. H.
• fcfcfc fc II 9 · 9 9 fc • · · · fcfc fcfc
Freeman a Co., San Francisco, 351, 1980), ve které se používá HAT médium a byly ustanoveny hybridomy, které produkují lidskou protilátku proti IL-6.
Hybridomy, které produkují lidské IL-6 protilátky se podrobily níže uvedené analýze. Mikrotitrační plotna s 96 jamkami, vyrobena z pružného polyvinylu (vyrobena firmou Dynatech Laboratories, lne. Alexandria, VA) byla potahována 100 μΙ kozích proti-myších protilátek IgG (10 μΙ/ml, vyrobených firmou Cooper Biomedical, lne.,
Malvern, PA) přes noc při teplotě 4 °C. Následně se nechal působit PBS obsahující 1 % hovězího sérového albuminu (BSA) po dobu 2 hodin při teplotě místnosti.
Po vymytí PBS se do každé plotny přidá 100 μΙ supernatantu kultury hybridomu a nechá se inkubovat přes noc při teplotě 4 °C. Plotna se promyje, do každé jamky se přidá rekombinantní IL-6 značený pomocí 125l v koncentraci 2000 cpm / 0,5 ng / jamku a stanovuje se radioaktivita každé jamky po promytí pomocí gamma počítačky (Beckman Gamma 9000, Beckman Instruments, Fullerton, CA). Z 216 hybridních klonů bylo 32 pozitivních v tomto testu vazby IL-6. Z těchto klonů byl nakonec získán stabilní MH166.BSF2. Protilátky anti-IL-6 MH166 produkované výše uvedeným hybridomem měly subtyp lgG1 k.
Dále se použil myší IL-6 dependentní hybridní klon MH60.BSF2, aby se zjistila neutralizační aktivita z hlediska růstu hybridomu pomocí protilátky MH166. Buňky MH60.BSF2 se rozdělily do 1 χ 104 / 200 μ I / jamku a k nim se přidají vzorky obsahující protilátky MH166, dále se nechají kultivovat po dobu 48 hodin, přidá se 3H-thymidin 0,5 pCi / jamku (New England Nuclear, Boston, MA) a dále se nechá kultivovat po dobu dalších 6 hodin. Buňky se potom dají na skleněný filtrační papír a nechají se pomnožit pomocí automatického pomnožovače (Labo Mash Science Co., Tokyo,
Japonsko). Jakožto kontrola se používají králičí protilátky proti IL-6.
Výsledně protilátky MH166 inhibují v závislosti na dávce začlenění 3H-thymidinu do buněk MH60.BSF2 indukované pomocí IL-6. To odhaluje skutečnost, že protilátky MH166 neutralizují aktivitu IL-6.
Referenční příklad 3. Příprava lidské protilátky proti IL-6 receptorů • 4 • 4 4444
4 4 44 • · 4 • 4 4 4
4 4
4444 4 444
4
4
4 • 4
Protilátky proti IL-6 receptoru MT18, které se připravují metodou podle Hiraty a kol. (Hirata, Y. a kol., J. Immunol., 143, 2900 až 2906, 1989), se vážou na sefarózu 4B aktivovanou pomocí CNBr (vyráběnou firmou Pharmacia Fine Chemicals, Piscataway, NJ) podle připojeného režimu a purifikuje se receptor IL-6 (Ymasaki, K. a kol., Science (1988),241, 825 až 828). Buněčná linie lidského myelomu U266 se rozpouští pomocí 1 mM p-para-aminofenylmethansulfonylfluoridhydrochloridu (vyráběného firmou Wako Chemicals), 10 mM triethanolamin (pH 7,8) a 0,15 M NaCl (digitoninový pufr) a smíchá se s protilátkou MT18 vázanou na kuličky se sefarózou 4B. Kuličky se potom šestkrát promyjí digitoninovým pufrem a tak je připraven částečně purifikovaný IL-6 receptor.
Myši BALB/c se imunizovaly čtyřikrát každých deset dní pomocí částečně purifikovaného IL-6 receptoru získaného z 3 x 109 U266 buněk a hybridom se potom připravuje pomocí standardní metody. Supernatant kultury hybridomů z jamek z pozitivním růstem se testoval na aktivitu vazby na IL-6 receptor pomocí metody níže uvedené. Buňky 5 x 107 U266 se označily pomocí 35S-methioninu (2,5 mCi) a rozpustily se pomocí výše uvedeného digitoninového pufru. Rozpuštěné buňky U266 se smíchaly s 0,04 ml protilátky MT18 vázanými na kuličky se sefarózou 4B. Potom se šestkrát promyly pomocí digitoninového pufru. IL-6 receptor značený pomocí 35S-methioninu se louhoval pomocí 0,25 ml digitoninového pufru (pH 3,4) a neutralizoval se v 0,025 ml IMTris (pH 7,4).
0,05 ml supernatantu kultury hybridomů se smíchalo s 0,01 ml protein G sefarózy (vyráběné firmou Pharmacia). Po promývání se sefaróza nechala inkubovat s 0,005 ml roztoku IL-6 receptoru značeného pomocí ^S, jak je výše popsáno. Imunoprecipitát se potom analyzoval pomocí SDS-PAGE, aby se nalezl supernatantu kultury hybridomů, který reaguje s IL-6 receptorem. Výsledkem je založení pozitivního klonu hybridomů PM-1. Protilátky produkované hybridomem PM-1 měly subtyp lgG1 k.
Byla sledována inhibični aktivita protilátek produkovaných hybridomem PM-1 proti vazbě IL-6 na lidský IL-6 receptor za použití buněčné linie lidského myelomu U266. Lidský rekombinantní IL-6 se připravuje z E. coli (Hirano a kol., Immunol. Lett., 17: 41 až 45, 1988) a označuje se pomocí 125l za použití Bolton-Humterovy reagencie (New England Nuclear, Boston, MA) (Taga, T. a kol., J. Exp. Med. (1987) 166, 967 až 981).
x 105 buněk U266 se nechalo kultivovat se 70% (v/v) supernatantu kultury hybridomů PM-1 spolu se 10,000 cpm IL-6 značeného 125l po dobu jedné hodiny při teplotě «· ···· t · • · ···· · ·· »·· • ·· *· • V ♦ · · * • · · · · ·> · · · · · • · · · · »·· ·· ·· místnosti. 70 μΙ vzorku se navrstvilo na 300 μΙ FCS do mikrocentrifugační polyethylénové zkumavky o objemu 400 μΙ. Po centrifugaci se stanovovala radioaktivita buněk.
Výsledek odhaluje skutečnost, že protilátky produkované hybridomem PM-1 inhibují vazbu II-6 na IL-6 receptor.
Referenční příklad 4. Příprava myších protilátek proti IL-6 receptoru
Monoklonální protilátka proti myšímu IL-6 receptoru se připravuje metodou kterou popisuje Saito a kol., J. Immunol. (1993) 147, 168 až 173.
Buňky CHO, které produkují myší solubilní IL-6 receptor, se nechají kultivovat v médiu IMDM, které obsahuje 10 % FCS. Ze supernatantu kultury se purifikuje myší solubilní IL-6 receptor za použití protilátky proti solubilnímu IL-6 receptoru RS12 (viz Saito, a kol.) a afinitní sloupec se fixoval na Affigel 10 gel (vyráběn firmou Biorad).
Myší solubilní IL-6 receptor (50 pg) se smíchal s Freundovou kompletní přísadou, a pak se injekčně vpravil do dutiny břišní krys Wistar. Po 2 týdnech po podání byla zvířatům podána Freundova nekompletní přísada. 45. den se krysy usmrtily a slezinné buňky v množství 2 x 108 se nechaly fúzovat s 1 x 107 buňkami myších myelomových buněk P3U1 za použití 50% PEG1500 (Boehringer Mannhein) běžným způsobem, a potom se zachycovaly pomocí kultivačního média HAT.
Poté, co se supernatant z kultur hybridomů přidal na plotnu potaženou králičí proti-myší protilátkou IgG (vyráběnou firmou Cappel) přidá se myší solubilní IL-6 receptor. Následně za použití králičí protilátky proti myšímu IL-6 receptoru a alkalickou fosfatázou značené ovčí proti-králičí protilátky, hybridomy produkující protilátku proti myšímu solubilnímu IL-6 receptoru se stanovovaly pomocí ELISA. Po té, co se prokázala produkce požadované protilátky, hybridní klony se stanovovaly dvakrát, aby se získal jednoduchý hybridní klon. Klon byl označen jako MR16-1.
Neutralizační aktivita protilátky produkované hybridomem signální transdukce myšího IL-6 byla měřena pomocí začleněného 3H-thymidinu, s použitím buněk MH60.BSF2 (Matsuda, T. a kol., J. Immunol. (1988) 18, 951 až 956). Buňky MH60.BSF2 se připravují v koncentraci 1 x 104 buněk / 200 μΙ / jamku na mikrotitrační • · desce o 96 jamkách. Do každé jamky se přidá 10 pg / ml myšího IL-6 a protilátky
MR16-1 nebo protilátky RS12 v koncentraci 12,3 až 1000 ng / ml a nechá se kultivovat při teplotě 37 °C po dobu 44 hodin v prostředí s 5 % CO2. Potom se přidá 1 pVi /jamku 3H-thymidinu. Po 4 hodinách se měří začleněný 3H-thymidin. Výsledkem je, že protilátka MR16-1 potlačuje začlenění 3H-thymidin u buněk MH60.BSF2.
Tím bylo prokázáno, že protilátky produkované hybridomem MR16-1 inhibují vazbu IL-6 na IL-6 receptor.
Průmyslová využitelnost
V souladu s tímto vynálezem bylo prokázáno, že antagonista IL-6 jako je například protilátka proti IL-6 receptorů má terapeutický účinek na zánětlivé onemocnění střev. Tím bylo prokázáno, že antagonista IL-6 je užitečný jako terapeutické činidlo pro léčbu ulcerózní kolitidy a Crohnovy nemoci.
Claims (39)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Preventivní nebo terapeutické činidlo pro léčbu zánětlivého onemocnění střeva vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní přísadu antagonistu interleukinu-6 (IL-6).
- 2. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 1 vyznačující se tím, že antagonistou IL-6 receptoru je protilátka proti IL-6 receptoru.
- 3. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 2 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptoru je monoklonální protilátka proti IL-6 receptoru.
- 4. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 3 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptoru je monoklonální protilátka proti lidskému IL-6 receptoru.
- 5. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 3 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptoru je monoklonální protilátka proti myšímu IL-6 receptoru.
- 6. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároků 2 až 5 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptoru je rekombinantní protilátka.
- 7. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 4 vyznačující se tím, že monoklonální protilátkou proti lidskému IL-6 receptoru je PM-1 protilátka.
- 8. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 5 vyznačující se tím, že monoklonální protilátkou proti myšímu IL-6 receptoru je MR16-1 protilátka.
- 9. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároků 2 až 4 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptoru je chimérická nebo humanizovaná protilátka proti IL-6 receptoru.
- 10. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle nároku 9 vyznačující se tím, že humanizovanou protilátkou proti IL-6 receptoru je humanizovaná PM-1 protilátka.
- 11. Preventivní nebo terapeutické činidlo podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10 vyznačující se tím, že zánětlivým onemocněním střeva je ulcerózní kolitida nebo Crohnova nemoc.
- 12. Činidlo pro potlačování úbytku tělesné hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní přísadu antagonistu IL-6.9 9 ·
- 13. Činidlo pro potlačování úbytku tělesné hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní přísadu protilátku proti IL-6 receptorů.
- 14. Způsob prevence nebo léčby zánětlivého onemocnění střeva vyznačující se tím, že obsahuje podávání antagonisty interleukinu-6 (IL-6).
- 15. Způsob podle nároku 14 vyznačující se tím, že antagonistou IL-6 je protilátka proti IL-6 receptorů.
- 16. Způsob podle nároku 15 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptorů je monoklonální protilátka proti IL-6 receptorů.
- 17. Způsob podle nároku 16 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptorů je monoklonální protilátka proti lidskému IL-6 receptorů.
- 18. Způsob podle nároku 16 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptorů je monoklonální protilátka proti myšímu IL-6 receptorů.
- 19. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 15 až 18 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptorů je rekombinantní protilátka .
- 20. Způsob podle nároku 17 vyznačující se tím, že monoklonální protilátkou protilidskému IL-6 receptorů je PM-1 protilátka.
- 21. Způsob podle nároku 18 vyznačující se tím, že monoklonální protilátkou proti myšímu IL-6 receptorů je MR16-1 protilátka.
- 22. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 15 až 17 vyznačující se tím, že protilátkou proti IL-6 receptorů je chimérická nebo humanizovaná protilátka proti IL-6 receptorů.
- 23. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že humanizovanou protilátkou proti IL-6 receptorů je humanizovaná protilátka PM-1.
- 24. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až 23 vyznačující se tím, že zánětlivým onemocněním střeva je ulcerózní kolitida nebo Crohnova nemoc.
- 25. Způsob potlačování úbytku tělesné hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva vyznačující se tím, že zahrnuje podávání antagonisty IL-6.
- 26. Způsob potlačování úbytku tělesné hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva vyznačující se tím, že zahrnuje podávání protilátky proti IL-6 receptorů.
- 27. Použití antagonisty interleukinu-6 (IL-6) pro přípravu preventivního nebo terapeutického činidla u zánětlivého onemocnění střeva.444444 4 · ·* · · «4 · · · 4 4 4 4 4 4 ·*·*· ϊ : · t ί • 4 · * 4444 • 444 4 444 444 44 4 4
- 28. Použití podle nároku 27, kde IL-6 antagonistou je protilátka proti IL-6 receptoru.
- 29. Použití podle nároku 28, kde antagonistou proti IL-6 receptoru je monoklonální protilátka proti IL-6 receptoru.
- 30. Použití podle nároku 29, kde protilátkou proti IL-6 receptoru je monoklonální protilátka proti lidskému IL-6 receptoru.
- 31. Použití podle nároku 29, kde protilátkou proti IL-6 receptoru je monoklonální protilátka proti myšímu IL-6 receptoru.
- 32. Použití podle kteréhokoliv z nároků 28 až 31, kde protilátkou proti IL-6 receptoru je rekombinantní protilátka.
- 33. Použití podle nároku 30, kde monoklonální protilátkou proti IL-6 receptoru je PM-1 protilátka.
- 34. Použití podle nároku 31, kde monoklonální protilátkou proti myšímu IL-6 receptoru je MR16-1 protilátka.
- 35. Použití podle kteréhokoliv z nároků 28 až 30, kde protilátkou proti IL-6 receptoru je chimérická nebo humanizovaná protilátka proti IL-6 receptoru.
- 36. Použití podle nároku 35, kde humanizovanou protilátkou proti IL-6 receptoru je humanizovaná PM-1 protilátka.
- 37. Použití podle kteréhokoliv z nároků 27 až 36, kde zánětlivým onemocněním střeva je ulcerózní kolitida nebo Crohnova nemoc.
- 38. Použití antagonisty IL-6 pro přípravu činidla pro potlačování úbytku tělesné hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva.
- 39. Použití protilátky proti IL-6 receptoru pro přípravu činidla pro potlačování úbytku tělesné hmotnosti u zánětlivého onemocnění střeva.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6725098 | 1998-03-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20003297A3 true CZ20003297A3 (cs) | 2001-02-14 |
| CZ297083B6 CZ297083B6 (cs) | 2006-09-13 |
Family
ID=13339502
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20003297A CZ297083B6 (cs) | 1998-03-17 | 1999-03-16 | Cinidlo pro prevenci a lécbu zánetlivého onemocnení streva obsahující aktivní slozku antagonistu IL-6 |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6723319B1 (cs) |
| EP (1) | EP1074268B1 (cs) |
| JP (1) | JP4124573B2 (cs) |
| KR (1) | KR100407811B1 (cs) |
| CN (2) | CN101239185A (cs) |
| AT (1) | ATE383875T1 (cs) |
| AU (1) | AU754006B2 (cs) |
| CA (1) | CA2324115C (cs) |
| CZ (1) | CZ297083B6 (cs) |
| DE (1) | DE69937994T2 (cs) |
| DK (1) | DK1074268T3 (cs) |
| ES (1) | ES2299241T3 (cs) |
| HK (2) | HK1033911A1 (cs) |
| HU (1) | HU225539B1 (cs) |
| NO (1) | NO327718B1 (cs) |
| PL (1) | PL201461B1 (cs) |
| PT (1) | PT1074268E (cs) |
| RU (1) | RU2195960C2 (cs) |
| WO (1) | WO1999047170A1 (cs) |
Families Citing this family (109)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8017121B2 (en) * | 1994-06-30 | 2011-09-13 | Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha | Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component |
| WO1996012503A1 (fr) * | 1994-10-21 | 1996-05-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6 |
| ES2382488T3 (es) | 1997-03-21 | 2012-06-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Un agente preventivo o terapéutico para enfermedades mediadas por células t sensibilizadas que comprende un antagonista de il-6 como ingrediente activo |
| US20020187150A1 (en) * | 1997-08-15 | 2002-12-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient |
| CN101239185A (zh) * | 1998-03-17 | 2008-08-13 | 中外制药株式会社 | 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂 |
| EP1085906B1 (en) * | 1998-06-10 | 2008-08-13 | Ophidian Pharmaceuticals, Inc. | Anti il6 antibodies in the prevention and treatment of inflammatory bowel disease |
| JP4889187B2 (ja) * | 2000-10-27 | 2012-03-07 | 中外製薬株式会社 | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する血中ｍｍｐ−３濃度低下剤 |
| UA80091C2 (en) | 2001-04-02 | 2007-08-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist |
| US20050118163A1 (en) * | 2002-02-14 | 2005-06-02 | Hidefumi Mizushima | Antibody-containing solution pharmaceuticals |
| WO2004020633A1 (ja) * | 2002-08-30 | 2004-03-11 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | ヒト抗ヒトインターロイキン−６抗体及び該抗体フラグメント |
| GB2401040A (en) * | 2003-04-28 | 2004-11-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for treating interleukin-6 related diseases |
| EP1673396A1 (en) * | 2003-09-22 | 2006-06-28 | BioVation GmbH & Co.KG. | Use of antibodies for reducing the biological effectiveness of il-6 |
| SI1690550T1 (sl) * | 2003-10-17 | 2012-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Terapevtska sredstva za mezoteliom |
| US8617550B2 (en) * | 2003-12-19 | 2013-12-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist |
| EP3736295A1 (en) * | 2004-03-24 | 2020-11-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor |
| AR048335A1 (es) * | 2004-03-24 | 2006-04-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agentes terapeuticos para trastornos del oido interno que contienen un antagonista de il- 6 como un ingrediente activo |
| EP3623473A1 (en) * | 2005-03-31 | 2020-03-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for production of polypeptide by regulation of assembly |
| WO2007043641A1 (ja) * | 2005-10-14 | 2007-04-19 | Fukuoka University | 膵島移植における移植膵島障害抑制剤 |
| RU2450830C2 (ru) * | 2005-10-21 | 2012-05-20 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | Средства для лечения кардиопатии |
| AR057582A1 (es) * | 2005-11-15 | 2007-12-05 | Nat Hospital Organization | Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos |
| KR20080084818A (ko) * | 2005-11-25 | 2008-09-19 | 각고호우징 게이오기주크 | 전립선암 치료제 |
| CA2637917C (en) | 2006-01-27 | 2015-11-24 | Keio University | Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization |
| JP5624276B2 (ja) | 2006-03-31 | 2014-11-12 | 中外製薬株式会社 | 抗体の血中動態を制御する方法 |
| US9670269B2 (en) | 2006-03-31 | 2017-06-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods of modifying antibodies for purification of bispecific antibodies |
| JP5754875B2 (ja) * | 2006-04-07 | 2015-07-29 | 国立大学法人大阪大学 | 筋再生促進剤 |
| CN102585002A (zh) | 2006-06-02 | 2012-07-18 | 瑞泽恩制药公司 | 人il-6受体的高亲和力抗体 |
| US8080248B2 (en) | 2006-06-02 | 2011-12-20 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating rheumatoid arthritis with an IL-6R antibody |
| CA2657763C (en) | 2006-08-03 | 2016-05-31 | Vaccinex Inc. | Anti-il-6 monoclonal antibodies and uses thereof |
| CN101528778A (zh) * | 2006-08-18 | 2009-09-09 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 用于治疗与il-6-介导的信号传导相关的疾病和病症的针对il-6r的氨基酸序列以及包括其的多肽 |
| CA2670583A1 (en) * | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Medimmune, Llc | Antibodies specific for the complex of interleukin-6 and the interleukin-6 receptor |
| JP2010095445A (ja) * | 2006-12-27 | 2010-04-30 | Tokyo Medical & Dental Univ | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤 |
| CL2008000188A1 (es) | 2007-01-23 | 2008-07-18 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agente para suprimir la reaccion de rechazo cronica que comprende como ingrediente activo un inhibidor de il-6; y uso del inhibidor de il-6. |
| PL2118074T3 (pl) | 2007-02-01 | 2014-06-30 | Resverlogix Corp | Związki chemiczne do celów profilaktyki i leczenia chorób układu sercowo-naczyniowego |
| US8404235B2 (en) * | 2007-05-21 | 2013-03-26 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP |
| CA2688146C (en) * | 2007-05-21 | 2018-03-06 | Alder Biopharmaceuticals, Inc. | Antibodies to il-6 and use thereof |
| US9701747B2 (en) | 2007-05-21 | 2017-07-11 | Alderbio Holdings Llc | Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration |
| US8178101B2 (en) | 2007-05-21 | 2012-05-15 | Alderbio Holdings Inc. | Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia |
| NZ601583A (en) * | 2007-05-21 | 2013-08-30 | Bristol Myers Squibb Co | Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies |
| US8062864B2 (en) * | 2007-05-21 | 2011-11-22 | Alderbio Holdings Llc | Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies |
| US20090238825A1 (en) * | 2007-05-21 | 2009-09-24 | Kovacevich Brian R | Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies |
| US7906117B2 (en) * | 2007-05-21 | 2011-03-15 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever |
| US8252286B2 (en) | 2007-05-21 | 2012-08-28 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis |
| EP3689912A1 (en) | 2007-09-26 | 2020-08-05 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in cdr |
| EP2206775B1 (en) * | 2007-09-26 | 2016-06-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-il-6 receptor antibody |
| ES2566957T3 (es) | 2007-09-26 | 2016-04-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Región constante de anticuerpo modificado |
| EP2236604B1 (en) * | 2007-12-05 | 2016-07-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anti-nr10 antibody and use thereof |
| PE20091174A1 (es) | 2007-12-27 | 2009-08-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo |
| TWI564021B (zh) | 2008-04-11 | 2017-01-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Repeated binding of antigen to antigen binding molecules |
| EP2297202B1 (en) | 2008-05-13 | 2016-01-13 | NovImmune SA | Anti-il-6/il-6r antibodies and methods of use thereof |
| EP2305306B1 (en) * | 2008-06-05 | 2016-02-10 | National Cancer Center | Neuroinvasion inhibitor |
| US8188235B2 (en) | 2008-06-18 | 2012-05-29 | Pfizer Inc. | Antibodies to IL-6 and their uses |
| TWI440469B (zh) * | 2008-09-26 | 2014-06-11 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Improved antibody molecules |
| US9212223B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-12-15 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis |
| US8992920B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-03-31 | Alderbio Holdings Llc | Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis |
| US9452227B2 (en) * | 2008-11-25 | 2016-09-27 | Alderbio Holdings Llc | Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments |
| US8337847B2 (en) | 2008-11-25 | 2012-12-25 | Alderbio Holdings Llc | Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies |
| US8420089B2 (en) | 2008-11-25 | 2013-04-16 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP |
| US8323649B2 (en) | 2008-11-25 | 2012-12-04 | Alderbio Holdings Llc | Antibodies to IL-6 and use thereof |
| RU2011135422A (ru) * | 2009-01-29 | 2013-03-10 | Медиммун, Ллк | Человеческие анти-il-6 антитела с пролонгированным периодом выведения in vivo и их применение при лечении онкологических, аутоиммунных заболеваний и воспалительных заболеваний |
| US9238640B2 (en) | 2009-03-18 | 2016-01-19 | Resverlogix Corp. | Anti-inflammatory agents |
| TWI682995B (zh) | 2009-03-19 | 2020-01-21 | 日商中外製藥股份有限公司 | 抗體恆定區域改變體 |
| JP5717624B2 (ja) | 2009-03-19 | 2015-05-13 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
| NZ596117A (en) | 2009-04-22 | 2014-10-31 | Resverlogix Corp | Novel anti-inflammatory agents |
| MX2011012136A (es) | 2009-05-15 | 2012-04-10 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anticuerpo anti-axl. |
| JP5837821B2 (ja) | 2009-09-24 | 2015-12-24 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
| JO3244B1 (ar) * | 2009-10-26 | 2018-03-08 | Amgen Inc | بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية |
| PL2493922T3 (pl) | 2009-10-26 | 2017-07-31 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Sposób wytwarzania glikozylowanych immunoglobulin |
| US9775921B2 (en) | 2009-11-24 | 2017-10-03 | Alderbio Holdings Llc | Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody |
| EP2504031A4 (en) | 2009-11-24 | 2013-06-26 | Alderbio Holdings Llc | ANTI-IL-6 ANTIBODIES AND THEIR USE |
| JO3417B1 (ar) | 2010-01-08 | 2019-10-20 | Regeneron Pharma | الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r |
| JP5889181B2 (ja) | 2010-03-04 | 2016-03-22 | 中外製薬株式会社 | 抗体定常領域改変体 |
| JP5904552B2 (ja) | 2010-05-28 | 2016-04-13 | 国立研究開発法人国立がん研究センター | 膵癌治療剤 |
| EP2578231B1 (en) | 2010-05-28 | 2022-10-26 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antitumor t cell response enhancer |
| EP4029881A1 (en) | 2010-11-08 | 2022-07-20 | F. Hoffmann-La Roche AG | Subcutaneously administered anti-il-6 receptor antibody |
| CA2818814A1 (en) | 2010-11-23 | 2012-05-31 | Alder Biopharmaceuticals, Inc. | Anti-il-6 antibodies for the treatment of anemia |
| MX365235B (es) | 2010-11-30 | 2019-05-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Molécula de unión a antígeno capaz de unir repetidamente a la pluralidad de moléculas de antígeno. |
| EP2520292A1 (en) | 2011-05-06 | 2012-11-07 | Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH | Use of spirangiens for the treatment or prevention of IL-8 or IL-6 mediated disorders |
| MD480Z5 (ro) * | 2011-07-07 | 2012-09-30 | Эльвира АНДОН | Metodă de tratament al colitei ulceroase nespecifice acute |
| AR087305A1 (es) | 2011-07-28 | 2014-03-12 | Regeneron Pharma | Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit |
| TWI589299B (zh) | 2011-10-11 | 2017-07-01 | 再生元醫藥公司 | 用於治療類風濕性關節炎之組成物及其使用方法 |
| NZ627859A (en) | 2012-01-23 | 2015-09-25 | Regeneron Pharma | Stabilized formulations containing anti-ang2 antibodies |
| WO2013176471A1 (ko) | 2012-05-21 | 2013-11-28 | 한국생명공학연구원 | 곰보배추의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, stat3 매개 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| CN104797132B (zh) * | 2012-09-13 | 2017-06-30 | 中外制药株式会社 | 基因敲入非人动物 |
| EP3009518B1 (en) | 2013-06-11 | 2020-08-12 | National Center of Neurology and Psychiatry | Method for predicting post-therapy prognosis of relapsing-remitting multiple sclerosis (rrms) patient, and method for determining applicability of novel therapy |
| BR112015032960B1 (pt) | 2013-07-04 | 2021-01-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | imunoensaio suprimido por interferência para detectar anticorpos anti-fármaco em amostras de soro |
| DK3050896T3 (da) | 2013-09-27 | 2021-07-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Fremgangsmåde til fremstilling af en polypeptid-heteromultimer |
| US9017678B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-04-28 | Kymab Limited | Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R |
| DE202014010499U1 (de) | 2013-12-17 | 2015-10-20 | Kymab Limited | Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung |
| WO2015116852A1 (en) | 2014-01-29 | 2015-08-06 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating rheumatoid arthritis by administering an il-6r antibody |
| KR101892883B1 (ko) | 2015-02-27 | 2018-10-05 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | Il-6 관련 질환 치료용 조성물 |
| CN114984016A (zh) | 2015-03-13 | 2022-09-02 | 雷斯韦洛吉克斯公司 | 用于治疗补体相关疾病之组合物及治疗方法 |
| WO2016159213A1 (ja) | 2015-04-01 | 2016-10-06 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
| JP6875683B2 (ja) | 2015-05-19 | 2021-05-26 | 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター | 多発性硬化症（ｍｓ）患者の新規治療適用判断方法 |
| WO2016195088A1 (ja) | 2015-06-04 | 2016-12-08 | 国立研究開発法人 国立精神・神経医療研究センター | Ｉｌ－６阻害剤を有効成分とする精神疾患治療剤 |
| KR20180034672A (ko) | 2015-08-18 | 2018-04-04 | 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. | 지단백질 분리반출술을 경험하고 있는 고지혈증을 갖는 환자를 치료하기 위한 항-pcsk9 억제성 항체 |
| JP7219005B2 (ja) | 2015-12-28 | 2023-02-07 | 中外製薬株式会社 | Ｆｃ領域含有ポリペプチドの精製を効率化するための方法 |
| US11484591B2 (en) | 2016-02-22 | 2022-11-01 | Ohio State Innovation Foundation | Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin A analogues or metabolites, and estradiol metabolites |
| SG10201607778XA (en) | 2016-09-16 | 2018-04-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use |
| BR112019014921A2 (pt) | 2017-01-27 | 2020-03-31 | StemRIM Inc. | Agente terapêutico para miocardiopatia, infarto antigo do miocárdio e insuficiência cardíaca crônica |
| KR20200012823A (ko) | 2017-02-01 | 2020-02-05 | 예일 유니버시티 | 이뇨제 내성의 치료 |
| US11033496B2 (en) | 2017-03-17 | 2021-06-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoparticles for delivery of chemopreventive agents |
| WO2018203545A1 (ja) | 2017-05-02 | 2018-11-08 | 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター | Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法 |
| WO2019078344A1 (ja) | 2017-10-20 | 2019-04-25 | 学校法人兵庫医科大学 | 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物 |
| CN111787950A (zh) | 2018-01-05 | 2020-10-16 | 科威迪亚治疗公司 | 用于无免疫抑制地治疗il-6介导的炎症的方法 |
| EP3765494A4 (en) | 2018-03-15 | 2022-03-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ANTI-DENGUE VIRUS ANTIBODIES WITH CROSS-REACTIVITY AGAINST ZIKA VIRUS AND METHODS OF USE |
| CN114206442A (zh) | 2019-01-31 | 2022-03-18 | 赛诺菲生物技术公司 | 用于治疗幼年特发性关节炎的抗il-6受体抗体 |
| US20220177978A1 (en) | 2019-04-02 | 2022-06-09 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions |
| WO2021136841A2 (fr) * | 2019-12-31 | 2021-07-08 | Peptinov | Composition pharmaceutique pour la prevention ou le traitement des douleurs post-operatoires |
| WO2022047730A1 (en) * | 2020-09-04 | 2022-03-10 | Shanghai Pharmaceuticals Holding Co., Ltd. | Methods to treat inflammatory bowel disease |
Family Cites Families (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6428979B1 (en) | 1988-01-22 | 2002-08-06 | Tadamitsu Kishimoto | Receptor protein for human B cell stimulatory factor-2 |
| US5670373A (en) | 1988-01-22 | 1997-09-23 | Kishimoto; Tadamitsu | Antibody to human interleukin-6 receptor |
| CA1341152C (en) | 1988-01-22 | 2000-12-12 | Tadamitsu Kishimoto | Receptor protein for human b cell stimulatory factor-2 |
| US5530101A (en) * | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| JP2914672B2 (ja) | 1989-01-17 | 1999-07-05 | 中外製薬株式会社 | Ｂｓｆ▲下２▼アンタゴニスト |
| US5210075A (en) | 1990-02-16 | 1993-05-11 | Tanabe Seiyaku Co., Ltd. | Interleukin 6 antagonist peptides |
| IE910955A1 (en) | 1990-03-23 | 1991-09-25 | Yamanouchi Europ Bv | Il-6 inhibiting compositions |
| AU668349B2 (en) | 1991-04-25 | 1996-05-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Reconstituted human antibody against human interleukin 6 receptor |
| US5888511A (en) | 1993-02-26 | 1999-03-30 | Advanced Biotherapy Concepts, Inc. | Treatment of autoimmune diseases, including AIDS |
| US5888510A (en) * | 1993-07-21 | 1999-03-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component |
| WO1995009873A1 (en) | 1993-10-06 | 1995-04-13 | Board Of Regents, The University Of Texas System | A monoclonal anti-human il-6 receptor antibody |
| US5420109A (en) | 1993-11-12 | 1995-05-30 | Houghten Pharmaceuticals, Inc. | Cytokine restraining agents |
| JPH07324097A (ja) | 1994-05-30 | 1995-12-12 | Daicel Chem Ind Ltd | インターロイキン６拮抗剤、及びペプチド類または医薬として許容されるその塩類 |
| CA2191733A1 (en) | 1994-06-07 | 1995-12-21 | Daniel A. Vallera | Methods for inhibiting antigen specific t cell responses |
| WO1996000081A1 (en) | 1994-06-24 | 1996-01-04 | Immunex Corporation | Controlled release polypeptide compositions and methods of treating inflammatory bowel disease |
| JPH0850829A (ja) | 1994-08-05 | 1996-02-20 | Tokai Rika Co Ltd | レバースイッチ |
| US6010871A (en) | 1994-09-29 | 2000-01-04 | Ajinomoto Co., Inc. | Modification of peptide and protein |
| ES2384222T3 (es) | 1994-10-07 | 2012-07-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Inhibición del crecimiento anómalo de células sinoviales utilizando un antagonista de IL-6 como principio activo |
| WO1996012503A1 (fr) | 1994-10-21 | 1996-05-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6 |
| JPH08245414A (ja) | 1995-01-27 | 1996-09-24 | Private Biolog Corp | Ｉｌ−６関連疾患の治療用組成物および方法 |
| ATE330629T1 (de) * | 1995-02-13 | 2006-07-15 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Inhibitor des muskelproteinabbaus enthaltend einen il-6 rezeptor antikörper |
| US5569680A (en) * | 1995-02-13 | 1996-10-29 | Trustees Of The Univ. Of Penna | Method of treating inflammatory bowel disease with tributyrin |
| KR20050085971A (ko) | 1995-04-27 | 2005-08-29 | 아브게닉스, 인크. | 면역화된 제노마우스 유래의 인간 항체 |
| JPH08311098A (ja) * | 1995-05-22 | 1996-11-26 | Daicel Chem Ind Ltd | 新規ペプチド類およびそれを含有するインターロイキン６拮抗剤 |
| US5571513A (en) * | 1995-05-31 | 1996-11-05 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Anti-gp130 monoclonal antibodies |
| WO1996040966A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Private Biologicals Corporation | Compositions and methods of treating il-6 associated diseases |
| AU1209497A (en) | 1995-12-27 | 1997-07-28 | Takeda Chemical Industries Ltd. | Oxazole derivatives, their production and use |
| JPH09235276A (ja) | 1995-12-27 | 1997-09-09 | Takeda Chem Ind Ltd | オキサゾール誘導体、その製造法および用途 |
| EA000852B1 (ru) * | 1996-04-09 | 2000-06-26 | Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. | Мутантный il-6 человека и его внутренний фрагмент, кодирующие их последовательности днк, способы их получения, содержащие их фармацевтические композиции, содержащие их векторы, линии клеток-хозяев и способ лечения il-6 опосредованных заболеваний |
| GB9625640D0 (en) | 1996-12-10 | 1997-01-29 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological products |
| US20020187150A1 (en) | 1997-08-15 | 2002-12-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient |
| CN101239185A (zh) * | 1998-03-17 | 2008-08-13 | 中外制药株式会社 | 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂 |
| EP1085906B1 (en) * | 1998-06-10 | 2008-08-13 | Ophidian Pharmaceuticals, Inc. | Anti il6 antibodies in the prevention and treatment of inflammatory bowel disease |
| JP4889187B2 (ja) | 2000-10-27 | 2012-03-07 | 中外製薬株式会社 | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する血中ｍｍｐ−３濃度低下剤 |
| UA80091C2 (en) | 2001-04-02 | 2007-08-27 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist |
| BR0309200A (pt) | 2002-04-12 | 2005-02-22 | Pfizer | Uso de ligandos receptores ep4 no tratamento de doenças envolvidas com a il-6 |
| GB2401040A (en) | 2003-04-28 | 2004-11-03 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for treating interleukin-6 related diseases |
-
1999
- 1999-03-16 CN CNA2008100813567A patent/CN101239185A/zh active Pending
- 1999-03-16 WO PCT/JP1999/001298 patent/WO1999047170A1/ja active IP Right Grant
- 1999-03-16 HU HU0101694A patent/HU225539B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1999-03-16 PL PL342938A patent/PL201461B1/pl unknown
- 1999-03-16 EP EP99907951A patent/EP1074268B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-16 AT AT99907951T patent/ATE383875T1/de active
- 1999-03-16 AU AU27481/99A patent/AU754006B2/en not_active Ceased
- 1999-03-16 RU RU2000126295/14A patent/RU2195960C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1999-03-16 PT PT99907951T patent/PT1074268E/pt unknown
- 1999-03-16 KR KR10-2000-7010242A patent/KR100407811B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-03-16 DE DE69937994T patent/DE69937994T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-16 CZ CZ20003297A patent/CZ297083B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-03-16 DK DK99907951T patent/DK1074268T3/da active
- 1999-03-16 CA CA002324115A patent/CA2324115C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-16 JP JP2000536409A patent/JP4124573B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-16 US US09/646,188 patent/US6723319B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-16 CN CNB998052094A patent/CN100374159C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-03-16 ES ES99907951T patent/ES2299241T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-09-14 NO NO20004581A patent/NO327718B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-07-05 HK HK01104649A patent/HK1033911A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-10-08 HK HK01107040A patent/HK1036018A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-10-03 US US10/677,227 patent/US7824674B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6723319B1 (en) | Method of treating inflammatory intestinal diseases containing as the ingredient IL-6 receptors antibodies | |
| JP4776145B2 (ja) | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する乾癬の予防又は治療剤 | |
| US8440196B1 (en) | Treatment for pancreatitis using IL-6 receptor antagonist antibodies | |
| CA2284271C (en) | A preventive or therapeutic agent for sensitized t cell-mediated diseases comprising il-6 antagonist as an active ingredient | |
| CA2549467C (en) | A preventive agent for vasculitis | |
| US8617550B2 (en) | Treatment of vasculitis with IL-6 antagonist | |
| JP4698652B2 (ja) | Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防又は治療剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20140316 |