KR20080084818A - 전립선암 치료제 - Google Patents

전립선암 치료제 Download PDF

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KR20080084818A
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겐트 가나오
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각고호우징 게이오기주크
추가이 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

본 발명자들은 항 IL-6 수용체 항체의 전립선암에 대한 항종양효과에 대해서 검토를 행하였다. 그 결과, 항 IL-6 수용체 항체가 인비보(in vivo) 및 인비트로(in vitro)의 어느 것에 있어서도 전립선암에 대한 항종양효과를 나타내는 것이 명확해졌다. 또한 hPM1은 IL-6 수용체를 매개로 하여 항종양효과를 나타내는 것도 명확해졌다.

Description

전립선암 치료제{Therapeutic agent for prostate cancer}
본 발명은 IL-6 저해제를 유효성분으로서 함유하는 전립선암 치료제, 및 그 이용에 관한 것이다. 또한, IL-6 저해제를 전립선암을 발증한 대상에 투여하는 공정을 포함하는, 전립선암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
현재, 전립선암의 치료법으로서는 호르몬요법, 외과요법, 방사선요법, 화학요법, 및 이들의 병용이 이용되고 있다. 호르몬요법은 전립선암의 증식에 관계하는 안드로겐의 생산을 억제하거나, 그 작용을 억제함으로써 행해진다. 호르몬요법은 남성호르몬을 생산하는 정소의 제거, 하수체에 작용하여 안드로겐을 저하시키는 LH-RH 아날로그나 에스트로겐 제제의 투여, 항안드로겐제의 투여 등에 의해 행해진다. 진행 전립선암의 치료법으로서는 호르몬요법이 유일한 치료법이나, 호르몬요법을 개시한 대부분의 진행 전립선암 환자는 수년 후에는 호르몬 내성을 획득하여, 치료에 고심하고 있어, 호르몬요법에 대해 내성을 획득한 전립선암에 대해서 유효한 치료법이 요망되고 있다.
IL-6는 B세포 자극인자2(BSF2) 또는 인터페론 β2라고도 호칭된 사이토카인이다. IL-6는 B 림프구계 세포의 활성화에 관여하는 분화인자로서 발견되고(비특허문헌 1), 그 후, 각종 세포의 기능에 영향을 미치는 다기능 사이토카인인 것이 명 확해졌다(비특허문헌 2). IL-6는 T 림프구계 세포의 성숙화를 유도하는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 3).
IL-6는 세포 상에서 2종의 단백질을 매개로 하여 그 생물학적 활성을 전달한다. 하나는 IL-6가 결합하는 분자량 약 80 kDa의 리간드 결합성 단백질의 IL-6 수용체이다(비특허문헌 4, 5). IL-6 수용체는 세포막을 관통하여 세포막 상에 발현하는 막 결합형 외에, 주로 그 세포외 영역으로 되는 가용성 IL-6 수용체로서도 존재한다.
다른 하나는 비(非)리간드 결합성의 시그널 전달에 관여하는 분자량 약 130 kDa의 막 단백질 gp130이다. IL-6와 IL-6 수용체는 IL-6/IL-6 수용체 복합체를 형성하고, 이어서 gp130과 결합함으로써, IL-6의 생물학적 활성이 세포내에 전달된다(비특허문헌 6).
IL-6 저해제는 IL-6의 생물학적 활성의 전달을 저해하는 물질이다. 지금까지, IL-6에 대한 항체(항 IL-6 항체), IL-6 수용체에 대한 항체(항 IL-6 수용체 항체), gp130에 대한 항체(항 gp130 항체), IL-6 개변체, IL-6 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드 등이 알려져 있다.
항 IL-6 수용체 항체에 관해서는 몇가지의 보고가 있다(비특허문헌 7, 8, 특허문헌 1~3). 그 중 하나인 마우스 항체 PM-1(비특허문헌 9)의 상보성 결정영역(CDR; complementarity determining region)을 인간 항체로 이식함으로써 얻어진 인간화 PM-1 항체가 알려져 있다(특허문헌 4).
최근의 보고에서는, IL-6는 전립선암에 자가분비(autocrine) 또는 측분 비(paracrine)의 형태로 작용하여 종양을 증식시키는 것이 알려져 있다(비특허문헌 10). 또한, 진행 전립선암 환자의 악액질(cachexia)에 있어서, 종양으로부터 과잉 생산된 IL-6가 그 주된 원인이 되고 있는 것이 시사되어 있다.
지금까지, 인비트로(in vitro)의 실험에서는 항 IL-6 항체가 일정 조건하에서 인간 전립선암 세포(LNCaP DU145, PC3)의 증식을 억제한 것이 보고되어 있다(비특허문헌 10). 그러나, 현재까지, 인비보(in vivo)에 있어서, IL-6를 특이적으로 저해함으로써 전립선암의 증식을 억제할 수 있다는 보고는 없다. IL-6 등의 사이토카인이 관여하는 질환에서는, 어느 한 사이토카인이 다른 사이토카인과 복잡한 네트워크를 형성하고 있는 것은 잘 알려져 있고, 또한, 복수의 사이토카인이 동일한 세포에 동일한 작용을 나타내는 것이 알려져 있으므로, IL-6 저해제가 전립선암의 치료에 유효한지의 여부는 불명확하였다.
또한, 본 출원의 발명에 관련하는 선행기술문헌 정보를 이하에 나타낸다.
비특허문헌 1: Hirano, T. et al., Nature(1986) 324, 73-76
비특허문헌 2: Akira, S. et al., Adv. in Immunology(1993) 54, 1-78
비특허문헌 3: Lotz, M. et al., J. Exp. Med.(1988) 167, 1253-1258
비특허문헌 4: Taga, T. et al., J. Exp. Med.(1987) 166, 967-981
비특허문헌 5: Yamasaki, K. et al., Science(1988) 241, 825-828
비특허문헌 6: Taga, T. et al., Cell(1989) 58, 573-581
비특허문헌 7: Novick, D. et al., Hybridoma(1991) 10, 137-146
비특허문헌 8: Huang, Y. W. et al., Hybridoma(1993) 12, 621-630
비특허문헌 9: Hirata, Y. et al., J. Immunol.(1989) 143, 2900-2906
비특허문헌 10: Okamoto et al., Cancer Res. 57(1), 141-6, 1997
특허문헌 1: 국제 특허출원 공개번호 WO 95-09873
특허문헌 2: 프랑스 특허출원 공개번호 FR 2694767
특허문헌 3: 미국 특허번호 US 5216128
특허문헌 4: 국제 특허출원 공개번호 WO 92-19759
발명의 개시
발명이 해결하고자 하는 과제
본 발명은 이와 같은 상황을 감안하여 이루어진 것으로서, 그 목적은 IL-6 저해제를 유효성분으로서 함유하는 전립선암 치료제를 제공하는 것에 있다. 또한, 본 발명은 IL-6 저해제를 전립선암을 발증한 대상에게 투여하는 공정을 포함하는 전립선암을 치료하는 방법의 제공도 과제로 한다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명자들은 상기의 과제를 해결하기 위해, 항 IL-6 수용체 항체의 전립선암에 대한 항종양효과에 대해서 검토를 행하였다.
먼저, 본 발명자들은 인간 전립선암 세포주 PC3, DU145, 및 JCA-1에 있어서, IL-6 수용체의 발현 여부를 웨스턴 블롯 해석에 의해 확인하였다. 그 결과, 상기 3개의 세포주에 있어서는 IL-6 수용체가 발현되고 있는 것이 명확해졌다(도 1). 또한, 상기 세포의 배양 상청 중의 IL-6를 ELISA로 측정함으로써, 이들 세포가 IL-6를 생산하고 있는 것이 명확해졌다(도 2).
다음으로, 상기 세포를 각종 농도의 인간화 PM-1 항체(hPM1)의 존재하에 인비트로에서 배양하고, 24시간 후 및 48시간 후에 항종양효과를 검토한 결과, hPM1이 농도의존적 및 시간의존적으로 세포증식 억제효과를 나타내는 것이 명확해졌다(도 3). 또한, hPM1이 IL-6 수용체를 매개로 하여 항종양효과를 나타내는지의 여부를, STAT3의 인산화를 웨스턴 블롯 해석에 의해 비교함으로써 확인하였다. 그 결과, hPM1 투여 60분 후에 있어서 전립선암 세포주 STAT3의 인산화는 억제되고 있는 것이 명확해졌다. 또한, hPM1은 IL-6의 자극에 의해 증강되는 STAT3의 인산화를 억제하는 것이 명확해졌다(도 4).
또한, 마우스를 사용한 피하종양 담암(擔癌) 모델에 인간화 PM-1 항체(hPM1)를 투여함으로써, 인비보에 있어서 항 IL-6 수용체 항체의 항종양효과를 확인한 결과, hPM1을 투여함으로써 종양증식과 체중감소가 유의(有意)하게 억제되는 것이 명확해졌다(도 5).
즉, 본 발명자들은 항 IL-6 수용체 항체를 투여함으로써, 전립선암의 증식을 억제하는 것이 가능한 것을 최초로 발견하여, 이것에 의해 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
본 발명은 보다 구체적으로는 이하의 [1]~[22]를 제공하는 것이다.
[1] IL-6 저해제를 유효성분으로서 함유하는 전립선암 치료제.
[2] IL-6 저해제가 IL-6를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [1]에 기재의 전립선암 치료제.
[3] IL-6 저해제가 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [1]에 기재의 전립선암 치료제.
[4] 항체가 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 [2] 또는 [3]에 기재의 전립선암 치료제.
[5] 항체가 인간 IL-6 또는 인간 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [2] 또는 [3]에 기재의 전립선암 치료제.
[6] 항체가 재조합형 항체인 것을 특징으로 하는 [2] 또는 [3]에 기재의 전립선암 치료제.
[7] 항체가 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 [6]에 기재의 전립선암 치료제.
[8] 전립선암이 호르몬 저항성 전립선암인 [1] 내지 [7] 중 어느 하나에 기재의 전립선암 치료제.
[9] IL-6 저해제를 전립선암을 발증한 대상에게 투여하는 공정을 포함하는, 대상에 있어서 전립선암을 치료하는 방법.
[10] IL-6 저해제가 IL-6를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [9]에 기재의 방법.
[11] IL-6 저해제가 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [9]에 기재의 방법.
[12] 항체가 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 [10] 또는 [11]에 기재의 방법.
[13] 항체가 인간 IL-6 또는 인간 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [10] 또는 [11]에 기재의 방법.
[14] 항체가 재조합형 항체인 것을 특징으로 하는 [10] 또는 [11]에 기재의 방법.
[15] 항체가 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 [14]에 기재의 방법.
[16] 전립선암 치료제를 제조하기 위한, IL-6 저해제의 사용.
[17] IL-6 저해제가 IL-6를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [16]에 기재의 사용.
[18] IL-6 저해제가 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [16]에 기재의 사용.
[19] 항체가 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 [17] 또는 [18]에 기재의 사용.
[20] 항체가 인간 IL-6 또는 인간 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 [17] 또는 [18]에 기재의 사용.
[21] 항체가 재조합형 항체인 것을 특징으로 하는 [17] 또는 [18]에 기재의 사용.
[22] 항체가 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 [21]에 기재의 사용.
도면의 간단한 설명
도 1은 웨스턴 블롯 해석에 의해 인간 전립선암 세포주 JCA-1, PC3, 및 DU145에 있어서, IL-6 수용체가 발현되고 있는 것을 나타내는 사진이다.
도 2는 인간 전립선암 세포주 JCA-1, PC3, 및 DU145의 배양 상청의 IL-6 농도가 상승하고 있는 것을 나타내는 도면이다.
도 3은 인간 전립선암 세포주 JCA-1, PC3, 및 DU145에 대해서, 인간화 PM-1 항체(hPM1)가 인비트로에서 항종양효과를 갖는 것을 나타내는 도면이다. X축의 수치는 hPM1의 농도를 나타낸다.
도 4는 DU145 세포를 IL-6로 60분간 자극한 결과 pSTAT3의 발현이 증강하고, hPM1을 사용함으로써, 그 pSTAT3의 발현 증강이 억제된 것을 나타내는 사진이다.
도 5는 SCID 마우스에 인간 전립선암 세포주 DU145를 이식한 피하종양 담암 마우스 모델에 있어서, 인간화 PM-1(hPM1)의 인비보에 있어서의 항종양효과를 나타내는 도면이다. 상도(上圖): 인간화 PM-1 항체 또는 대조군 항체(IgG)를 담암 마우스에 투여했을 때의, 종양 사이즈의 경시변화를 나타내는 도면이다. 하도(下圖): 인간화 PM-1 항체 또는 대조군 항체(IgG)를 담암 마우스에 투여했을 때의, 체중의 경시변화를 나타내는 도면이다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 발명자들은 항 IL-6 수용체 항체를 투여함으로써, 전립선암의 증식을 억제하는 것이 가능한 것을 발견하였다. 본 발명은 이들의 지견(知見)을 토대로 하는 것이다.
본 발명은 IL-6 저해제를 유효성분으로서 함유하는, 전립선암 치료제에 관한 것이다.
본 발명에 있어서 「IL-6 저해제」란, IL-6에 의한 시그널 전달을 차단하고, IL-6의 생물학적 활성을 저해하는 물질이다. IL-6 저해제는, 바람직하게는 IL-6, IL-6 수용체 및 gp130 중 어느 하나의 결합에 대한 저해작용을 갖는 물질이다.
본 발명의 IL-6 저해제로서는, 예를 들면 항 IL-6 항체, 항 IL-6 수용체 항체, 항 gp130 항체, IL-6 개변체, 가용성 IL-6 수용체 개변체 또는 IL-6 또는 IL-6 수용체의 부분 펩티드 및, 이들과 동일한 활성을 나타내는 저분자 물질을 들 수 있으나, 특별히 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 IL-6 저해제로서는, 바람직하게는 IL-6 수용체를 인식하는 항체를 들 수 있다.
본 발명에 있어서 항체의 유래는 특별히 한정되는 것은 아니나, 바람직하게는 포유동물 유래이고, 보다 바람직하게는 인간 유래의 항체를 들 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항 IL-6 항체는 공지의 수단을 사용하여 다중클론항체 또는 단일클론항체로서 얻을 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항 IL-6 항체로서, 특히 포유동물 유래의 단일클론항체가 바람직하다. 포유동물 유래의 단일클론항체로서는, 하이브리도마에 생산되는 것, 및 유전자공학적 수법에 의해 항체 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환한 숙주에 생산되는 것이 있다. 이 항체는 IL-6와 결합함으로써, IL-6의 IL-6 수용체로의 결합을 저해하여 IL-6의 생물학적 활성의 세포내로의 전달을 차단한다.
이와 같은 항체로서는 MH166(Matsuda, T. et al., Eur. J. Immunol.(1988) 18, 951-956)나 SK2 항체(Sato, K. et al., 제21회 일본 면역학회 총회, 학술기록(1991) 21, 166) 등을 들 수 있다.
항 IL-6 항체 생산 하이브리도마는 기본적으로는 공지 기술을 사용해서, 이하와 같이 하여 제작할 수 있다. 즉, IL-6를 감작항원으로서 사용하고, 이것을 통상의 면역방법에 따라 면역하여, 얻어지는 면역세포를 통상의 세포융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시키고, 통상의 스크리닝법에 의해 단일클론항체 생산세포를 스크리닝함으로써 제작할 수 있다.
구체적으로는, 항 IL-6 항체를 제작하는데는 다음과 같이 하면 된다. 예를 들면, 항체 취득의 감작항원으로서 사용되는 인간 IL-6는 Eur. J. Biochem(1987) 168, 543-550, J. Immunol.(1988) 140, 1534-1541, 또는 Agr. Biol. Chem.(1990) 54, 2685-2688에 개시된 IL-6 유전자/아미노산 서열을 사용함으로써 얻어진다.
IL-6의 유전자 서열을 공지의 발현벡터계에 삽입하여 적당한 숙주세포를 형질전환시킨 후, 그 숙주세포 중 또는, 배양 상청 중으로부터 목적하는 IL-6 단백질을 공지의 방법으로 정제하고, 이 정제 IL-6 단백질을 감작항원으로서 사용하면 된다. 또한, IL-6 단백질과 다른 단백질의 융합 단백질을 감작항원으로서 사용해도 된다.
본 발명에서 사용되는 항 IL-6 수용체 항체는 공지의 수단을 사용하여 다중클론항체 또는 단일클론항체로서 얻을 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항 IL-6 수용체 항체로서, 특히 포유동물 유래의 단일클론항체가 바람직하다. 포유동물 유래의 단일클론항체로서는, 하이브리도마에 생산되는 것, 및 유전자공학적 수법에 의해 항체 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환한 숙주에 생산되는 것이 있다. 이 항체는 IL-6 수용체와 결합함으로써, IL-6의 IL-6 수용체로의 결합을 저해하여 IL-6의 생물학적 활성의 세포내로의 전달을 차단한다.
이와 같은 항체로서는 MR16-1 항체(Tamura, T. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1993) 90, 11924-11928), PM-1 항체(Hirata, Y. et al., J. Immmunol.(1989) 143, 2900-2906), AUK12-20 항체, AUK64-7 항체 또는 AUK146-15 항체(국제 특허출원 공개번호 WO 92-19759) 등을 들 수 있다. 이들 중에서, 인간 IL-6 수용체에 대한 바람직한 단일클론항체로서는 PM-1 항체가 예시되고, 또한 마우스 IL-6 수용체에 대한 바람직한 단일클론항체로서는 MR16-1 항체를 들 수 있다.
항 IL-6 수용체 단일클론항체 생산 하이브리도마는 기본적으로는 공지 기술을 사용해서, 이하와 같이 하여 제작할 수 있다. 즉, IL-6 수용체를 감작항원으로서 사용하고, 이것을 통상의 면역방법에 따라 면역하여, 얻어지는 면역세포를 통상의 세포융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시키고, 통상의 스크리닝법에 의해 단일클론항체 생산세포를 스크리닝함으로써 제작할 수 있다.
구체적으로는, 항 IL-6 수용체 항체를 제작하는데는 다음과 같이 하면 된다. 예를 들면, 항체 취득의 감작항원으로서 사용되는 인간 IL-6 수용체는 유럽 특허출원 공개번호 EP 325474에, 마우스 IL-6 수용체는 일본 특허출원 공개번호 특개평3-155795에 개시된 IL-6 수용체 유전자/아미노산 서열을 사용함으로써 얻어진다.
IL-6 수용체 단백질은 세포막 상에 발현하고 있는 것과 세포막으로부터 이탈되어 있는 것(가용성 IL-6 수용체)(Yasukawa, K. et al., J. Biochem.(1990) 108, 673-676)의 2종류가 있다. 가용성 IL-6 수용체는 세포막에 결합하고 있는 IL-6 수용체의 실질적으로 세포외 영역으로 구성되어 있고, 세포막 관통영역 또는 세포막 관통영역과 세포내 영역이 결손되어 있는 점에서 막 결합형 IL-6 수용체와 상이하다. IL-6 수용체 단백질은 본 발명에서 사용되는 항 IL-6 수용체 항체 제작의 감작항원으로서 사용될 수 있는 한, 어느 IL-6 수용체를 사용해도 된다.
IL-6 수용체의 유전자 서열을 공지의 발현벡터계에 삽입하여 적당한 숙주세포를 형질전환시킨 후, 그 숙주세포 중 또는, 배양 상청 중으로부터 목적하는 IL-6 수용체 단백질을 공지의 방법으로 정제하고, 이 정제 IL-6 수용체 단백질을 감작항원으로서 사용하면 된다. 또한, IL-6 수용체를 발현하고 있는 세포나 IL-6 수용체 단백질과 다른 단백질의 융합 단백질을 감작항원으로서 사용해도 된다.
본 발명에서 사용되는 항 gp130 항체는 공지의 수단을 사용하여 다중클론항체 또는 단일클론항체로서 얻을 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항 gp130 항체로서, 특히 포유동물 유래의 단일클론항체가 바람직하다. 포유동물 유래의 단일클론항체로서는, 하이브리도마에 생산되는 것, 및 유전자공학적 수법에 의해 항체 유전자를 포함하는 발현벡터로 형질전환한 숙주에 생산되는 것이 있다. 이 항체는 gp130과 결합함으로써, IL-6/IL-6 수용체 복합체의 gp130으로의 결합을 저해하여 IL-6의 생물학적 활성의 세포내로의 전달을 차단한다.
이와 같은 항체로서는 AM64 항체(일본국 특허공개 평3-219894), 4B11 항체 및 2H4 항체(US 5571513) B-S12 항체 및 B-P8 항체(일본국 특허공개 평8-291199) 등을 들 수 있다.
항 gp130 단일클론항체 생산 하이브리도마는 기본적으로는 공지 기술을 사용해서, 이하와 같이 하여 제작할 수 있다. 즉, gp130을 감작항원으로서 사용하고, 이것을 통상의 면역방법에 따라 면역하여, 얻어지는 면역세포를 통상의 세포융합법에 의해 공지의 친세포와 융합시키고, 통상의 스크리닝법에 의해 단일클론항체 생산세포를 스크리닝함으로써 제작할 수 있다.
구체적으로는, 단일클론항체를 제작하는데는 다음과 같이 하면 된다. 예를 들면, 항체 취득의 감작항원으로서 사용되는 gp130은 유럽 특허출원 공개번호 EP 411946에 개시된 gp130 유전자/아미노산 서열을 사용함으로써 얻어진다.
gp130의 유전자 서열을 공지의 발현벡터계에 삽입하여 적당한 숙주세포를 형질전환시킨 후, 그 숙주세포 중 또는, 배양 상청 중으로부터 목적하는 gp130 단백질을 공지의 방법으로 정제하고, 이 정제 gp130 단백질을 감작항원으로서 사용하면 된다. 또한, gp130을 발현하고 있는 세포나 gp130 단백질과 다른 단백질의 융합 단백질을 감작항원으로서 사용해도 된다.
감작항원으로 면역되는 포유동물로서는 특별히 한정되는 것은 아니나, 세포융합에 사용하는 친세포와의 적합성을 고려하여 선택하는 것이 바람직하고, 일반적으로는 설치류의 동물, 예를 들면 마우스, 랫트, 햄스터 등이 사용된다.
감작항원을 동물에 면역하는데는 공지의 방법에 따라 행해진다. 예를 들면, 일반적인 방법으로서, 감작항원을 포유동물의 복강내 또는, 피하에 주사함으로써 행해진다. 구체적으로는, 감작항원을 PBS(Phosphate-Buffered Saline)나 생리식염수 등으로 적당량으로 희석, 현탁한 것을 목적에 따라 통상의 애쥬번트(adjuvant), 예를 들면 프로인트 완전 애쥬번트를 적량 혼합하고, 유화(乳化) 후, 포유동물에 4-21일마다 수회 투여하는 것이 바람직하다. 또한, 감작항원 면역시에 적당한 담체(擔體)를 사용할 수 있다.
이와 같이 면역하고, 혈청 중에 목적하는 항체 레벨이 상승하는 것을 확인한 후에, 포유동물로부터 면역세포가 취출(取出)되어, 세포융합 처리된다. 세포융합 처리되는 바람직한 면역세포로서는, 특히 비장세포를 들 수 있다.
상기 면역세포와 융합되는 다른쪽 친세포로서의 포유동물의 골수종세포는 이미 공지의 각종 세포주, 예를 들면 P3X63Ag8.653(Kearney, J. F. et al. J. Immunol.(1979) 123, 1548-1550), P3X63Ag8U.1(Current Topics in Microbiology and Immunology(1978) 81, 1-7), NS-1(Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol.(1976) 6, 511-519), MPC-11(Margulies. D. H. et al., Cell(1976) 8, 405-415), SP2/0(Shulman, M. et al., Nature(1978) 276, 269-270), FO(de St. Groth, S. F. et al., J. Immunol. Methods(1980) 35, 1-21), S194(Trowbridge, I. S. J. Exp. Med.(1978) 148, 313-323), R210(Galfre, G. et al., Nature(1979) 277, 131-133) 등이 적절히 사용된다.
상기 면역세포와 골수종세포의 세포융합은 기본적으로는 공지의 방법, 예를 들면 밀스테인들의 방법(Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol.(1981) 73, 3-46) 등에 준하여 행할 수 있다.
보다 구체적으로는, 상기 세포융합은 예를 들면, 세포융합 촉진제의 존재하에 통상의 영양배양액 중에서 실시된다. 융합 촉진제로서는 예를 들면, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 센다이 바이러스(HVJ) 등이 사용되고, 추가적으로 목적에 따라 융합효율을 높이기 위해 디메틸설폭시드 등의 보조제를 첨가 사용하는 것도 가능하다.
면역세포와 골수종세포의 사용비율은, 예를 들면 골수종세포에 대해 면역세포를 1~10배로 하는 것이 바람직하다. 상기 세포융합에 사용하는 배양액으로서는, 예를 들면 상기 골수종세포주의 증식에 적합한 RPMI 1640 배양액, MEM 배양액, 그 외에 이 종의 세포배양에 사용되는 통상의 배양액이 사용 가능하고, 추가적으로 소 태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보액(serum supplement)을 병용하는 것도 가능하다.
세포융합은 상기 면역세포와 골수종세포의 소정량을 상기 배양액 중에서 잘 혼합하고, 사전에 37℃ 정도로 가온한 PEG 용액, 예를 들면 평균분자량 1,000~6,000 정도의 PEG 용액을 통상, 30~60%(w/v)의 농도로 첨가하여, 혼합함으로써 목적으로 하는 융합세포(하이브리도마)가 형성된다. 계속해서, 적당한 배양액을 축차 첨가하고, 원심하여 상청을 제거하는 조작을 반복함으로써 하이브리도마의 생육에 바람직하지 않은 세포융합제 등을 제거할 수 있다.
당해 하이브리도마는 통상의 선택 배양액, 예를 들면 HAT 배양액(하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함하는 배양액)에서 배양함으로써 선택된다. 당해 HAT 배양액에서의 배양은, 목적으로 하는 하이브리도마 이외의 세포(비융합세포)가 사멸하는데 충분한 시간, 통상 수일~수주간 계속한다. 이어서, 통상의 한계희석법을 실시하고, 목적으로 하는 항체를 생산하는 하이브리도마의 스크리닝 및 클로닝이 행해진다.
또한, 인간 이외의 동물에 항원을 면역하여 상기 하이브리도마를 얻는 외에, 인간 림프구를 인비트로에서 목적하는 항원 단백질 또는 항원 발현세포로 감작하고, 감작 B 림프구를 인간 골수종세포, 예를 들면 U266와 융합시켜, 목적하는 항원 또는 항원 발현세포로의 결합활성을 갖는 목적하는 인간 항체를 얻는 것도 가능하다(일본국 특허공고 평1-59878 참조). 또한, 인간 항체 유전자의 레퍼토리를 갖는 트랜스제닉 동물에 항원 또는 항원 발현세포를 투여하고, 전술의 방법에 따라 목적하는 인간 항체를 취득해도 된다(국제 특허출원 공개번호 WO 93/12227, WO 92/03918, WO 94/02602, WO 94/25585, WO 96/34096, WO 96/33735 참조).
이와 같이 하여 제작되는 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마는 통상의 배양액 중에서 계대(繼代) 배양하는 것이 가능하고, 또한, 액체 질소 중에서 장기간 보존하는 것이 가능하다.
당해 하이브리도마로부터 단일클론항체를 취득하는데는, 당해 하이브리도마를 통상의 방법에 따라 배양하고, 그의 배양 상청으로서 얻는 방법, 또는 하이브리도마를 이것과 적합성이 있는 포유동물에 투여하고 증식시켜, 그의 복수(腹水)로서 얻는 방법 등이 채용된다. 전자의 방법은 고순도의 항체를 얻는데 적합한 한편, 후자의 방법은 항체의 대량생산에 적합하다.
예를 들면, 항 IL-6 수용체 항체 생산 하이브리도마의 제작은 일본국 특허공개 평3-139293에 개시된 방법에 의해 행할 수 있다. PM-1 항체 생산 하이브리도마를 BALB/c 마우스의 복강내에 주입하여 복수를 얻고, 이 복수로부터 PM-1 항체를 정제하는 방법이나, 본 하이브리도마를 적당한 배지, 예를 들면 10% 소 태아 혈청, 5% BM-Condimed H1(Boehringer Mannheim제) 함유 RPMI 1640 배지, 하이브리도마 SFM 배지(GIBCO-BRL제), PFHM-II 배지(GIBCO-BRL제) 등에서 배양하고, 그 배양 상청으로부터 PM-1 항체를 정제하는 방법으로 행할 수 있다.
본 발명에는, 단일클론항체로서, 항체 유전자를 하이브리도마로부터 클로닝하고, 적당한 벡터에 삽입하여, 이것을 숙주에 도입하고, 유전자 재조합 기술을 사용하여 생산시킨 재조합형 항체를 사용할 수 있다(예를 들면, Borrebaeck, C. A. K. and Larrick, J. W. THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990 참조).
구체적으로는, 목적으로 하는 항체를 생산하는 세포, 예를 들면 하이브리도마로부터, 항체의 가변(V)영역을 코드하는 mRNA를 단리한다. mRNA의 단리는 공지의 방법, 예를 들면 구아니딘 초원심법(Chirgwin, J. M. et al., Biochemistry(1979) 18, 5294-5299), AGPC법(Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem.(1987) 162, 156-159) 등에 의해 전 RNA를 조제하고, mRNA Purification Kit(Pharmacia제) 등을 사용하여 mRNA를 조제한다. 또한, QuickPrep mRNA Purification Kit(Pharmacia제)를 사용함으로써 mRNA를 직접 조제할 수 있다.
얻어진 mRNA로부터 역전사 효소를 사용하여 항체 V영역의 cDNA를 합성한다. cDNA의 합성은 AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit 등을 사용하여 행할 수 있다. 또한, cDNA의 합성 및 증폭을 행하는데는 5'-Ampli FINDER RACE Kit(Clontech제) 및 PCR을 사용한 5'-RACE법(Frohman, M. A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1988) 85, 8998-9002; Belyavsky, A. et al., Nucleic Acids Res.(1989) 17, 2919-2932)을 사용할 수 있다. 얻어진 PCR 산물로부터 목적으로 하는 DNA 단편을 정제하고, 벡터 DNA와 연결한다. 추가적으로, 이로부터 재조합 벡터를 제작하고, 대장균 등에 도입하여 콜로니를 선택해 목적하는 재조합 벡터를 조제한다. 목적으로 하는 DNA의 염기서열을 공지의 방법, 예를 들면 디데옥시법에 의해 확인한다.
목적으로 하는 항체의 V영역을 코드하는 DNA가 얻어지면, 이것을 목적하는 항체 정상영역(C영역)을 코드하는 DNA와 연결하고, 이것을 발현벡터로 삽입한다. 또는, 항체의 V영역을 코드하는 DNA를 항체 C영역의 DNA를 포함하는 발현벡터로 삽입해도 된다.
본 발명에서 사용되는 항체를 제조하는데는, 후술하는 바와 같이 항체 유전자를 발현 제어영역, 예를 들면 인핸서(enhancer), 프로모터의 제어하에서 발현하도록 발현벡터에 삽입한다. 다음으로, 이 발현벡터에 의해 숙주세포를 형질전환하여, 항체를 발현시킬 수 있다.
본 발명에서는, 인간에 대한 이종 항원성을 저하시키는 것 등을 목적으로서 인위적으로 개변한 유전자 재조합형 항체, 예를 들면 키메라(Chimeric) 항체, 인간화(Humanized) 항체, 인간(human) 항체를 사용할 수 있다. 이들 개변 항체는 기지의 방법을 사용하여 제조할 수 있다.
키메라 항체는 상기한 바와 같이 하여 얻은 항체 V영역을 코드하는 DNA를 인간 항체 C영역을 코드하는 DNA와 연결하고, 이것을 발현벡터에 삽입하여 숙주에 도입하고 생산시킴으로써 얻어진다(유럽 특허출원 공개번호 EP 125023, 국제 특허출원 공개번호 WO 92-19759 참조). 이 기지의 방법을 사용하여, 본 발명에 유용한 키메라 항체를 얻을 수 있다.
인간화 항체는 재구성(reshaped) 인간 항체 또는 인간형화 항체라고도 불리우고, 인간 이외의 포유동물, 예를 들면 마우스 항체의 상보성 결정영역(CDR)을 인간 항체의 상보성 결정영역으로 이식한 것으로, 그 일반적인 유전자 재조합 수법도 알려져 있다(유럽 특허출원 공개번호 EP 125023, 국제 특허출원 공개번호 WO 92-19759 참조).
구체적으로는, 마우스 항체의 CDR과 인간 항체의 프레임워크영역(FR; framework region)을 연결하도록 설계한 DNA 서열을, 말단부에 오버랩하는 부분을 갖도록 제작한 수개의 올리고뉴클레오티드로부터 PCR법에 의해 합성한다. 얻어진 DNA를 인간 항체 C영역을 코드하는 DNA와 연결하고, 이어서 발현벡터에 삽입하여, 이것을 숙주에 도입하고 생산시킴으로써 얻어진다(유럽 특허출원 공개번호 EP 239400, 국제 특허출원 공개번호 WO 92-19759 참조).
CDR을 매개로 하여 연결되는 인간 항체의 FR은 상보성 결정영역이 양호한 항원결합부위를 형성하는 것이 선택된다. 필요에 따라서, 재구성 인간 항체의 상보성 결정영역이 적절한 항원결합부위를 형성하도록 항체 가변영역의 프레임워크영역의 아미노산을 치환해도 된다(Sato, K. et al., Cancer Res.(1993) 53, 851-856).
키메라 항체, 인간화 항체에는 인간 항체 C영역이 사용된다. 인간 항체 C영역으로서는 Cγ를 들 수 있고, 예를 들면 Cγ1, Cγ2, Cγ3 또는 Cγ4를 사용할 수 있다. 또한, 항체 또는 그 생산의 안정성을 개선하기 위해, 인간 항체 C영역을 수식해도 된다.
키메라 항체는 인간 이외의 포유동물 유래 항체의 가변영역과 인간 항체 유래의 C영역으로 되고, 또한 인간화 항체는 인간 이외의 포유동물 유래 항체의 상보성 결정영역과 인간 항체 유래의 프레임워크영역 및 C영역으로 되며, 양자는 인간 체내에 있어서의 항원성이 저하되어 있으므로, 본 발명에 사용되는 항체로서 유용하다.
본 발명에 사용되는 인간화 항체의 바람직한 구체예로서는 인간화 PM-1 항체를 들 수 있다(국제 특허출원 공개번호 WO 92-19759 참조).
또한, 인간 항체의 취득방법으로서는 앞서 기술한 방법 외에, 인간 항체 라이브러리를 사용하고, 패닝에 의해 인간 항체를 취득하는 기술도 알려져 있다. 예를 들면, 인간 항체의 가변영역을 단일 사슬 항체(scFv)로서 파지 디스플레이법에 의해 파지의 표면에 발현시키고, 항원에 결합하는 파지를 선택하는 것도 가능하다. 선택된 파지의 유전자를 해석하면, 항원에 결합하는 인간 항체의 가변영역을 코드하는 DNA 서열을 결정할 수 있다. 항원에 결합하는 scFv의 DNA 서열이 명확해지면, 당해 서열을 포함하는 적당한 발현벡터를 제작하여, 인간 항체를 취득할 수 있다. 이들 방법은 이미 주지이고, WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388을 참고로 할 수 있다.
상기한 바와 같이 구축한 항체 유전자는 공지의 방법에 의해 발현시킬 수 있다. 포유류 세포를 사용한 경우, 상용되는 유용한 프로모터, 발현되는 항체 유전자, 그의 3'측 하류에 폴리 A 시그널을 기능적으로 결합시킨 DNA 또는 그를 포함하는 벡터에 의해 발현시킬 수 있다. 예를 들면 프로모터/인핸서로서는 인간 사이토메갈로바이러스 전기 프로모터/인핸서(human cytomegalovirus immediate early promoter/enhancer)를 들 수 있다.
또한, 그 외에 본 발명에서 사용되는 항체 발현에 사용할 수 있는 프로모터/인핸서로서, 레트로바이러스, 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 시미안 바이러스 40(SV40) 등의 바이러스 프로모터/인핸서나 인간 연장인자 1α(HEF 1α) 등의 포유류 세포 유래의 프로모터/인핸서를 사용하면 된다.
예를 들면, SV40 프로모터/인핸서를 사용하는 경우, 멀리건들의 방법(Mulligan, R. C. et al., Nature(1979) 277, 108-114), 또한, HEF 1α 프로모터/인핸서를 사용하는 경우, 미즈시마들의 방법(Mizushima, S. and Nagata, S. Nucleic Acids Res.(1990) 18, 5322)에 따르면 용이하게 실시할 수 있다.
대장균의 경우, 상용되는 유용한 프로모터, 항체 분비를 위한 시그널 서열, 발현시키는 항체 유전자를 기능적으로 결합시켜 발현시킬 수 있다. 예를 들면 프로모터로서는 lacZ 프로모터, araB 프로모터를 들 수 있다. lacZ 프로모터를 사용하는 경우, 워드들의 방법(Ward, E. S. et al., Nature(1989) 341, 544-546; Ward, E. S. et al. FASEB J.(1992) 6, 2422-2427), araB 프로모터를 사용하는 경우, 베터들의 방법(Better, M. et al. Science(1988) 240, 1041-1043)에 따르면 된다.
항체 분비를 위한 시그널 서열로서는, 대장균의 페리플라즘(periplasm)에 생산시키는 경우, pelB 시그널 서열(Lei, S. P. et al J. Bacteriol.(1987) 169, 4379-4383)을 사용하면 된다. 페리플라즘에 생산된 항체를 분리한 후, 항체의 구조를 적절히 리폴드(refold)하여 사용한다(예를 들면, WO 96/30394를 참조).
복제기원으로서는 SV40, 폴리오마 바이러스, 아데노바이러스, 소 유두종 바이러스(BPV) 등의 유래의 것을 사용할 수 있고, 추가적으로, 숙주세포계에서 유전자 복제수 증폭을 위해, 발현벡터는 선택 마커로서, 아미노글리코시드 포스포트랜스퍼라아제(APH) 유전자, 티미딘키나아제(TK) 유전자, 대장균 크산틴 구아닌 포스포리보실트랜스퍼라아제(Ecogpt) 유전자, 디히드로 엽산 환원효소(dhfr) 유전자 등을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 항체의 제조를 위해, 임의의 생산계를 사용할 수 있다. 항체 제조를 위한 생산계는 인비트로 및 인비보 생산계가 있다. 인비트로의 생산계로서는, 진핵세포를 사용하는 생산계나 원핵세포를 사용하는 생산계를 들 수 있다.
진핵세포를 사용하는 경우, 동물세포, 식물세포, 또는 진균세포를 사용하는 생산계가 있다. 동물세포로서는 (1) 포유류 세포, 예를 들면 CHO, COS, 골수종, BHK(baby hamster kidney), HeLa, Vero 등, (2) 양서류 세포, 예를 들면 아프리카 발톱개구리 난모세포, 또는 (3) 곤충세포, 예를 들면 sf9, sf21, Tn5 등이 알려져 있다. 식물세포로서는 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum) 유래의 세포가 알려져 있고, 이것을 캘러스 배양하면 된다. 진균세포로서는 효모, 예를 들면 사카로마이세스(Saccharomyces)속, 예를 들면 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae), 사상균, 예를 들면 아스페르길루스(Aspergillus)속, 예를 들면 아스페르길루스 니거(Aspergillus niger) 등이 알려져 있다.
원핵세포를 사용하는 경우, 세균세포를 사용하는 생산계가 있다. 세균세포로서는 대장균(E. coli), 고초균이 알려져 있다.
이들 세포에, 목적으로 하는 항체 유전자를 형질전환에 의해 도입하고, 형질전환된 세포를 인비트로로 배양함으로써 항체가 얻어진다. 배양은 공지의 방법에 따라 행한다. 예를 들면, 배양액으로서 DMEM, MEM, RPMI 1640, IMDM을 사용할 수 있고, 소 태아 혈청(FCS) 등의 혈청 보액을 병용하는 것도 가능하다. 또한, 항체 유전자를 도입한 세포를 동물의 복강 등으로 옮김으로써, 인비보로 항체를 생산해도 된다.
한편, 인비보의 생산계로서는, 동물을 사용하는 생산계나 식물을 사용하는 생산계를 들 수 있다. 동물을 사용하는 경우, 포유류 동물, 곤충을 사용하는 생산계 등이 있다.
포유류 동물로서는 염소, 돼지, 양, 마우스, 소 등을 사용할 수 있다(Vicki Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993). 또한, 곤충으로서는 누에를 사용할 수 있다. 식물을 사용하는 경우, 예를 들면 담배를 사용할 수 있다.
이들 동물 또는 식물에 항체 유전자를 도입하고, 동물 또는 식물의 체내에서 항체를 생산시켜, 회수한다. 예를 들면, 항체 유전자를 염소 β 카세인과 같은 유즙 중에 고유하게 생산되는 단백질을 코드하는 유전자의 도중에 삽입하여 융합 유전자로서 조제한다. 항체 유전자가 삽입된 융합 유전자를 포함하는 DNA 단편을 염소의 배(embryo)에 주입하고, 이 배를 암컷 염소에 도입한다. 배를 수용한 염소로부터 태어나는 트랜스제닉 염소 또는 그의 자손이 생산하는 유즙으로부터 목적하는 항체를 얻는다. 트랜스제닉 염소로부터 생산되는 목적하는 항체를 포함하는 유즙량을 증가시키기 위해, 적절히 호르몬을 트랜스제닉 염소에 사용해도 된다(Ebert, K. M. et al., Bio/Technology(1994) 12, 699-702).
또한, 누에를 사용하는 경우, 목적의 항체 유전자를 삽입한 베큘로바이러스(baculovirus)를 누에에 감염시키고, 이 누에의 체액으로부터 목적하는 항체를 얻는다(Maeda, S. et al., Nature(1985) 315, 592-594). 또한, 담배를 사용하는 경우, 목적하는 항체 유전자를 식물 발현용 벡터, 예를 들면 pMON530에 삽입하고, 이 벡터를 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)와 같은 박테리아에 도입한다. 이 박테리아를 담배, 예를 들면 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum)에 감염시키고, 본 담배의 잎으로부터 목적하는 항체를 얻는다(Julian, K. -C. Ma et al., Eur. J. Immunol.(1994) 24, 131-138).
전술한 바와 같이 인비트로 또는 인비보의 생산계로 항체를 생산하는 경우, 항체 중쇄(H쇄) 또는 경쇄(L쇄)를 코드하는 DNA를 개별적으로 발현벡터에 삽입하여 숙주를 동시 형질전환시켜도 되고, 또는 H쇄 및 L쇄를 코드하는 DNA를 단일 발현벡터에 삽입하여, 숙주를 형질전환시켜도 된다(국제 특허출원 공개번호 WO 94-11523 참조).
본 발명에서 사용되는 항체는, 본 발명에 적합하게 사용될 수 있는 한, 항체의 단편이나 그의 수식물이어도 된다. 예를 들면, 항체의 단편으로서는 Fab, F(ab')2, Fv 또는 H쇄와 L쇄의 Fv를 적당한 링커로 연결시킨 싱글체인 Fv(scFV)를 들 수 있다.
구체적으로는 항체를 효소, 예를 들면 파파인, 펩신으로 처리하여 항체 단편을 생성시키거나, 또는 이들 항체 단편을 코드하는 유전자를 구축하고, 이것을 발현벡터에 도입한 후, 적당한 숙주세포에서 발현시킨다(예를 들면, Co, M. S. et al., J. Immunol.(1994) 152, 2968-2976, Better, M. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology(1989) 178, 476-496, Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology(1989) 178, 497-515, Lamoyi, E., Methods in Enzymology(1989) 121, 652-663, Rousseaux, J. et al., Methods in Enzymology(1989) 121, 663-666, Bird, R. E. et al., TIBTECH(1991) 9, 132-137 참조).
scFv는 항체의 H쇄 V영역과 L쇄 V영역을 연결함으로써 얻어진다. 이 scFv에 있어서, H쇄 V영역과 L쇄 V영역은 링커, 바람직하게는 펩티드 링커를 매개로 하여 연결된다(Huston, J. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.(1988) 85, 5879-5883). scFv에 있어서 H쇄 V영역 및 L쇄 V영역은 상기 항체로서 기재된 것 중 어느 유래여도 된다. V영역을 연결하는 펩티드 링커로서는, 예를 들면 아미노산 12-19 잔기로 되는 임의의 단일 사슬 펩티드가 사용된다.
scFv를 코드하는 DNA는 상기 항체의 H쇄 또는, H쇄 V영역을 코드하는 DNA, 및 L쇄 또는, L쇄 V영역을 코드하는 DNA를 주형(鑄型)으로 하여, 그들의 서열 중 목적하는 아미노산 서열을 코드하는 DNA 부분을, 그 양쪽 말단을 규정하는 프라이머쌍을 사용하여 PCR법에 의해 증폭하고, 이어서, 추가적으로 펩티드 링커 부분을 코드하는 DNA 및 그 양쪽 말단을 각각 H쇄, L쇄와 연결되도록 규정하는 프라이머쌍을 조합하여 증폭함으로써 얻어진다.
또한, 일단 scFv를 코드하는 DNA가 제작되면, 그들을 함유하는 발현벡터, 및 이 발현벡터에 의해 형질전환된 숙주를 통상적인 방법에 따라 얻을 수 있고, 또한, 그 숙주를 사용하여 통상적인 방법에 따라, scFv를 얻을 수 있다.
이들 항체의 단편은 상기와 동일하게 하여 그 유전자를 취득하여 발현시키고, 숙주에 의해 생산시킬 수 있다. 본 발명에서 말하는 「항체」에는 이들 항체의 단편도 포함된다.
항체의 수식물로서, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 등의 각종 분자와 결합한 항체를 사용하는 것도 가능하다. 본 발명에서 말하는 「항체」에는 이들 항체 수식물도 포함된다. 이와 같은 항체 수식물을 얻는데는, 얻어진 항체에 화학적인 수식을 행함으로써 얻을 수 있다. 이들 방법은 이 분야에 있어서 이미 확립되어 있다.
상기한 바와 같이 생산, 발현된 항체는 세포내외, 숙주로부터 분리하여 균일하게까지 정제할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 항체의 분리, 정제는 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)에 의해 행할 수 있다. 친화성 크로마토그래피에 사용하는 칼럼으로서는, 예를 들면 프로테인 A 칼럼, 프로테인 G 칼럼을 들 수 있다. 프로테인 A 칼럼에 사용하는 담체로서, 예를 들면 HyperD, POROS, Sepharose F.F. 등을 들 수 있다. 그 외, 통상의 단백질에서 사용되고 있는 분리, 정제방법을 사용하면 되고, 조금도 한정되는 것은 아니다.
예를 들면, 상기 친화성 크로마토그래피 이외의 크로마토그래피, 필터, 한외여과, 염석, 투석 등을 적절히 선택, 조합하면, 본 발명에서 사용되는 항체를 분리, 정제할 수 있다. 크로마토그래피로서는, 예를 들면 이온교환 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 겔 여과 등을 들 수 있다. 이들 크로마토그래피는 HPLC(High performance liquid chromatography)에 적용할 수 있다. 또한, 역상 HPLC(reverse phase HPLC)를 사용해도 된다.
상기에서 얻어진 항체의 농도측정은 흡광도 측정 또는 ELISA 등에 의해 행할 수 있다. 즉, 흡광도 측정에 의한 경우에는, PBS(-)로 적당히 희석한 후, 280 ㎚의 흡광도를 측정하고, 1 ㎎/㎖를 1.35 OD로서 산출한다. 또한, ELISA에 의한 경우는 이하와 같이 측정할 수 있다. 즉, 0.1 M 중탄산 완충액(pH 9.6)으로 1 ㎍/㎖로 희석한 염소 항 인간 IgG(TAG제) 100 ㎕를 96 웰 플레이트(Nunc제)에 첨가하고, 4℃에서 하룻밤 인큐베이션하여, 항체를 고상화한다. 블로킹 후, 적절히 희석한 본 발명에서 사용되는 항체 또는 항체를 포함하는 샘플, 또는 표품(標品)으로서 인간 IgG(CAPPEL제) 100 ㎕를 첨가하고, 실온에서 1시간 인큐베이션한다.
세정 후, 5000배 희석한 알칼리 포스파타아제 표지 항 인간 IgG(BIO SOURCE제) 100 ㎕를 첨가하고, 실온에서 1시간 인큐베이트한다. 세정 후, 기질(基質)용액을 첨가하여 인큐베이션 후, MICROPLATE READER Model 3550(Bio-Rad제)을 사용하여 405 ㎚에서의 흡광도를 측정하고, 목적하는 항체의 농도를 산출한다.
본 발명에서 사용되는 IL-6 개변체는 IL-6 수용체와의 결합활성을 가지며, 또한 IL-6의 생물학적 활성을 전달하지 않는 물질이다. 즉, IL-6 개변체는 IL-6 수용체에 대해 IL-6와 경합적으로 결합하지만, IL-6의 생물학적 활성을 전달하지 않으므로, IL-6에 의한 시그널 전달을 차단한다.
IL-6 개변체는 IL-6의 아미노산 서열의 아미노산 잔기를 치환함으로써 변이를 도입하여 제작된다. IL-6 개변체의 기초가 되는 IL-6는 그 유래에 상관없으나, 항원성 등을 고려하면, 바람직하게는 인간 IL-6이다.
구체적으로는 IL-6의 아미노산 서열을 공지의 분자 모델링 프로그램, 예를 들면, WHATIF(Vriend et al., J. Mol. Graphics(1990) 8, 52-56)를 사용하여 그 2차 구조를 예측하고, 추가적으로 치환되는 아미노산 잔기의 전체에 미치는 영향을 평가함으로써 행해진다. 적절한 치환 아미노산 잔기를 결정한 후, 인간 IL-6 유전자를 코드하는 염기서열을 포함하는 벡터를 주형으로 하고, 통상 행해지는 PCR법으로 아미노산이 치환되도록 변이를 도입함으로써, IL-6 개변체를 코드하는 유전자가 얻어진다. 이것을 필요에 따라 적당한 발현벡터에 삽입하고, 상기 재조합형 항체의 발현, 생산 및 정제방법에 준하여 IL-6 개변체를 얻을 수 있다.
IL-6 개변체의 구체예로서는 Brakenhoff et al., J. Biol. Chem.(1994) 269, 86-93, 및 Savino et al., EMBO J.(1994) 13, 1357-1367, WO 96-18648, WO 96-17869에 개시되어 있다.
본 발명에서 사용되는 IL-6 부분 펩티드 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드는 각각 IL-6 수용체 또는 IL-6와의 결합활성을 갖고, 또한 IL-6의 생물학적 활성을 전달하지 않는 물질이다. 즉, IL-6 부분 펩티드 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드는 IL-6 수용체 또는 IL-6에 결합하고, 이들을 포착함으로써 IL-6의 IL-6 수용체로의 결합을 특이적으로 저해한다. 그 결과, IL-6의 생물학적 활성을 전달하지 않으므로, IL-6에 의한 시그널 전달을 차단한다.
IL-6 부분 펩티드 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드는, IL-6 또는 IL-6 수용체의 아미노산 서열에 있어서 IL-6와 IL-6 수용체의 결합에 관계되는 영역의 일부 또는 전부의 아미노산 서열로 되는 펩티드이다. 이와 같은 펩티드는 통상 10~80, 바람직하게는 20~50, 보다 바람직하게는 20~40개의 아미노산 잔기로 된다.
IL-6 부분 펩티드 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드는, IL-6 또는 IL-6 수용체의 아미노산 서열에 있어서 IL-6와 IL-6 수용체의 결합에 관계되는 영역을 특정하고, 그 특정한 영역의 일부 또는 전부의 아미노산 서열을 토대로 하여 통상 알려지는 방법, 예를 들면 유전자공학적 수법 또는 펩티드 합성법에 의해 제작할 수 있다.
IL-6 부분 펩티드 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드를 유전자공학적 수법으로 제작하는데는, 목적하는 펩티드를 코드하는 DNA 서열을 발현벡터에 삽입하고, 상기 재조합형 항체의 발현, 생산 및 정제방법에 준하여 얻을 수 있다.
IL-6 부분 펩티드 또는 IL-6 수용체 부분 펩티드를 펩티드 합성법으로 제작하는데는, 펩티드 합성에 있어서 통상 사용되고 있는 방법, 예를 들면 고상 합성법 또는 액상 합성법을 사용할 수 있다.
구체적으로는, 속(續)의약품의 개발 제14권 펩티드 합성, 감수 야지마 하루아키, 히로카와 쇼텐 1991년에 기재의 방법에 준하여 행하면 된다. 고상 합성법으로서는, 예를 들면 유기용매에 불용성인 지지체에 합성하고자 하는 펩티드의 C말단에 대응하는 아미노산을 결합시키고, α-아미노기 및 측쇄 관능기를 적절한 보호기로 보호한 아미노산을 C말단으로부터 N말단 방향의 순서로 1아미노산씩 축합시키는 반응과 수지 상에 결합한 아미노산 또는 펩티드의 α-아미노기의 상기 보호기를 이탈시키는 반응을 번갈아가며 반복함으로써, 펩티드 사슬을 신장시키는 방법이 사용된다. 고상 펩티드 합성법은 사용되는 보호기의 종류에 따라 Boc법과 Fmoc법으로 크게 나뉜다.
이와 같이 하여 목적으로 하는 펩티드를 합성한 후, 탈보호반응 및 펩티드 사슬의 지지체로부터 절단반응을 한다. 펩티드 사슬과의 절단반응에는, Boc법에서는 플루오르화 수소 또는 트리플루오로메탄설폰산을, 또한 Fmoc법에서는 TFA를 통상 사용할 수 있다. Boc법에서는, 예를 들면 플루오르화 수소 중에서 상기 보호 펩티드 수지를 아니솔 존재하에서 처리한다. 이어서, 보호기의 이탈과 지지체로부터 절단하여 펩티드를 회수한다. 이것을 동결건조함으로써, 조(粗) 펩티드가 얻어진다. 한편, Fmoc법에서는, 예를 들면 TFA 중에서 상기와 동일한 조작으로 탈보호반응 및 펩티드 사슬의 지지체로부터의 절단반응을 행할 수 있다.
얻어진 조 펩티드는 HPLC에 적용함으로써 분리, 정제할 수 있다. 그의 용출에 있어서, 단백질의 정제에 통상 사용되는 물-아세토니트릴계 용매를 사용하여 최적 조건하에서 행하면 된다. 얻어진 크로마토그래피의 프로파일의 피크에 해당하는 분획을 분취하고, 이것을 동결건조한다. 이와 같이 하여 정제한 펩티드 분획에 대해서, 질량 스펙트럼 분석(mass spectrum analysis)에 의한 분자량 해석, 아미노산 조성 분석, 또는 아미노산 서열 해석 등에 의해 동정(同定)한다.
IL-6 부분 펩티드 및 IL-6 수용체 부분 펩티드의 구체예는, 일본국 특허공개 평2-188600, 일본국 특허공개 평7-324097, 일본국 특허공개 평8-311098 및 미국 특허공보 US 5210075에 개시되어 있다.
본 발명에 사용하는 항체는 폴리에틸렌글리콜(PEG), 방사성 물질, 톡신 등의 각종 분자와 결합한 콘주게이트 항체여도 된다. 이와 같은 콘주게이트 항체는 얻어진 항체에 화학적인 수식을 행함으로써 얻을 수 있다. 또한, 항체의 수식방법은 이 분야에 있어서 이미 확립되어 있다. 본 발명에 있어서의 「항체」에는 이들 콘주게이트 항체도 포함된다.
본 발명의 전립선암 치료제는, 전립선암의 치료에 있어서 사용하는 것이 가능하다. 본 발명에 있어서, 전립선암이란 전립선의 선세포가 암화(canceration)되는 것을 나타낸다.
본 발명에 있어서 「전립선암 치료」란, 전립선암의 증식 억제, 또는 타 부위로의 전이 억제 또는 예방, 또는 전립선암의 진행에 수반되는 악액질 등을 억제하는 것을 의미한다. 외과수술 후의 전립선암 재발을 억제하는 것도, 상기의 의미에 포함되는 것으로 한다.
본 발명에 있어서, 전립선암의 증식이 억제되었는지 여부의 확인은, 전립선의 형상 및 상태의 확인(직장 진단), 화상 진단에 의한 원발소(primary lesion)나 전이소(metastatic lesion)의 평가 또는 PSA(전립선 특이항원)의 값을 측정(PSA 검사)함으로써 행할 수 있다. 전립선암이 진행되면 PSA 값이 상승하는 것이 알려져 있다. 즉, 본 발명의 약제를 투여함으로써 PSA 값이 감소한 경우에, 전립선암의 증식이 억제되었다고 볼 수 있다.
또한, 전립선암의 증식이 억제되었는지 여부의 확인은, 화상 진단 등에 의해 전립선암의 원발소나 전이소의 크기(또는 체적)를 평가함으로써도 행할 수 있다. 본 발명의 약제를 투여함으로써, 전립선암의 체적이 감소하고 있는 경우에, 전립선암의 증식이 억제되었다고 불 수 있다. 전립선암의 체적의 측정은 공지의 방법에 의해 행할 수 있고, 실시예에 기재의 방법에 의해서도 행할 수 있다.
또한, 전립선암의 증식이 억제되었는지 여부의 확인은, 전립선으로부터 조직샘플을 채취하여 병리조직학적 검사(생검)를 함으로써도 행할 수 있다. 전립선암의 악성도를 나타내는데 가장 자주 사용되는 것이, 글리슨 스코어(Gleason score)에 의한 분류이다. 생검으로 채취한 조직의 병리조직학적 검사의 결과로부터, 2~10의 스코어로 암을 분류하고, 숫자가 클수록 악성도가 높으며, 암이 전이될 확률도 높아진다. 일반적으로 전립선 내의 좁은 범위에 그치고 있고, 글리슨 스코어가 5 이하로 악성도가 낮은 암에서는, 예후(豫後)는 양호한 것으로 알려져 있으며, 이 경향은 환자의 연령에 좌우되지 않는다. 대조적으로, 글리슨 스코어가 7 이상인 암에서는, 예후가 불량한 것으로 생각되고 있다. 즉, 본 발명의 약제를 투여함으로써 글리슨 스코어가 감소한 경우에, 전립선암의 증식이 억제되었다고 볼 수 있다.
또한, 전립선암이 진행되는데 수반하여 체중감소나 빈혈 등의 악액질을 나타내 전신상태가 악화되나, 본 발명의 약제를 투여함으로써 이들 전신상태의 개선이 얻어진 경우에는, 전립선암 환자에 대해서 유용하다고 볼 수 있다.
본 발명에서 사용되는 IL-6 저해제의 IL-6 시그널 전달 저해활성은 통상 사용되는 방법에 의해 평가할 수 있다. 구체적으로는 IL-6 의존성 인간 골수종주(S6B45, KPMM2), 인간 렌네르트 T 림프종 세포주(Lennert T lymphoma cell line) KT3, 또는 IL-6 의존성 세포 MH60.BSF2를 배양하여, 이것에 IL-6를 첨가하고, 동시에 IL-6 저해제를 공존시킴으로써 IL-6 의존성 세포의 3H-티미딘 흡수(3H-thymidine uptake)를 측정하면 된다. 또한, IL-6 수용체 발현세포인 U266를 배양하여, 125I 표지 IL-6를 첨가하고, 동시에 IL-6 저해제를 첨가함으로써, IL-6 수용체 발현세포에 결합한 125I 표지 IL-6를 측정한다. 상기 어세이계에 있어서, IL-6 저해제를 존재시키는 군에 더하여 IL-6 저해제를 포함하지 않는 음성 대조군을 두고, 양자에서 얻어진 결과를 비교하면 IL-6 저해제의 IL-6 저해활성을 평가할 수 있다. 또한, 전립선암 세포주에 있어서 IL-6 저해제의 IL-6 시그널 전달 저해활성은, IL-6 수용체의 시그널 전달의 하류에 있는 STAT3의 인산화를 측정함으로써도 평가할 수 있다. IL-6 저해제를 첨가함으로써 STAT3의 인산화가 억제된 경우에, IL-6 저해제는 IL-6 시그널 전달을 저해하고, 또한 전립선암의 증식을 억제하는 것으로 볼 수 있다. STAT3의 인산화 측정은 공지의 방법에 의해 행할 수 있고, 실시예에 기재의 방법에 의해서도 행할 수 있다.
후술의 실시예에 나타내어지는 바와 같이, 항 IL-6 수용체 항체의 투여에 의해, 전립선암의 증식이 억제되는 것이 인정된 점으로부터, 항 IL-6 수용체 항체 등의 IL-6 저해제는 전립선암 치료제로서 유용하다는 것이 시사되었다.
본 발명의 전립선암 치료제가 투여되는 대상은 포유동물이다. 포유동물은 바람직하게는 인간이다.
본 발명의 전립선암 치료제는 의약품의 형태로 투여하는 것이 가능하고, 경구적 또는 비경구적으로 전신 또는 국소적으로 투여할 수 있다. 예를 들면, 점적 등의 정맥내 주사, 근육내 주사, 복강내 주사, 피하 주사, 좌약, 관장, 경구성 장용제 등을 선택할 수 있고, 환자의 연령, 증상에 따라 적절히 투여방법을 선택할 수 있다. 유효 투여량은 1회당 체중 1 ㎏당 0.01 ㎎~100 ㎎의 범위에서 선택된다. 또는, 환자당 1~1000 ㎎, 바람직하게는 5~50 ㎎의 투여량을 선택할 수 있다. 바람직한 투여량, 투여방법은, 예를 들면 항 IL-6 수용체 항체의 경우에는, 혈중에 프리의 항체가 존재하는 정도의 양이 유효 투여량이고, 구체적인 예로서는, 체중 1 ㎏당 1개월(4주간)에 0.5 ㎎~40 ㎎, 바람직하게는 1 ㎎~20 ㎎을 1회에서 수회로 나누고, 예를 들면 2회/주, 1회/주, 1회/2주, 1회/4주 등의 투여 스케줄로 점적 등의 정맥내 주사, 피하 주사 등의 방법으로 투여하는 방법 등이다. 투여 스케줄은, 투여 후 상태의 관찰 및 혈액 검사치의 동향을 관찰하면서 2회/주 또는 1회/주로부터 1회/2주, 1회/3주, 1회/4주와 같이 투여간격을 늘려가는 등 조정하는 것도 가능하다.
본 발명에 있어서 전립선암 치료제에는, 보존제나 안정제 등의 제제상 허용 가능한 담체가 첨가되어 있어도 된다. 제제상 허용 가능한 담체란, 그 자체는 상기의 전립선암의 증식 억제효과를 갖는 재료여도 되고, 당해 억제효과를 갖지 않는 재료여도 되며, 상기의 억제제와 함께 투여 가능한 재료를 의미한다. 또한, 전립선암의 증식 억제효과를 갖지 않는 재료여도, IL-6 저해제와 병용함으로써 상승적(相乘的) 또는 상가적(相加的)인 안정화 효과를 갖는 재료여도 된다.
제제상 허용되는 재료로서는, 예를 들면 멸균수나 생리식염수, 안정제, 부형제, 완충제, 방부제, 계면활성제, 킬레이트제(EDTA 등), 결합제 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서 계면활성제로서는 비이온 계면활성제를 들 수 있고, 예를 들면 소르비탄 모노카프릴레이트, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트 등의 소르비탄 지방산 에스테르; 글리세린 모노카프릴레이트, 글리세린 모노미리스테이트, 글리세린 모노스테아레이트 등의 글리세린 지방산 에스테르; 데카글리세릴 모노스테아레이트, 데카글리세릴 디스테아레이트, 데카글리세릴 모노리놀레이트 등의 폴리글리세린 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리올레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리스테아레이트 등의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 소르비트 테트라스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비트 테트라올레이트 등의 폴리옥시에틸렌 소르비트 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 글리세릴 모노스테아레이트 등의 폴리옥시에틸렌 글리세린 지방산 에스테르; 폴리에틸렌글리콜 디스테아레이트 등의 폴리에틸렌글리콜 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 라우릴에테르 등의 폴리옥시에틸렌 알킬에테르; 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌글리콜, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 프로필에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 세틸에테르 등의 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 알킬에테르; 폴리옥시에틸렌 노닐페닐에테르 등의 폴리옥시에틸렌 알킬페닐에테르; 폴리옥시에틸렌 피마자유, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(폴리옥시에틸렌 수소 피마자유) 등의 폴리옥시에틸렌 경화 피자마유; 폴리옥시에틸렌 소르비트 밀랍 등의 폴리옥시에틸렌 밀랍 유도체; 폴리옥시에틸렌 라놀린 등의 폴리옥시에틸렌 라놀린 유도체; 폴리옥시에틸렌 스테아르산 아미드 등의 폴리옥시에틸렌 지방산 아미드 등의 HLB6~18을 갖는 것 등을 전형적인 예로서 들 수 있다.
또한, 계면활성제로서는 음이온 계면활성제도 들 수 있고, 예를 들면 세틸황산나트륨, 라우릴황산나트륨, 올레일황산나트륨 등 탄소원자수 10~18의 알킬기를 갖는 알킬 황산염; 폴리옥시에틸렌 라우릴황산나트륨 등의, 에틸렌 옥시드의 평균 부가 몰수가 2~4이고 알킬기의 탄소원자수가 10~18인 폴리옥시에틸렌 알킬에테르황산염; 라우릴설포숙신산 에스테르나트륨 등의, 알킬기의 탄소원자수가 8~18인 알킬설포숙신산 에스테르염; 천연계의 계면활성제, 예를 들면 레시틴, 글리세로인지질; 스핑고미엘린 등의 스핑고 인지질; 탄소원자수 12~18의 지방산의 자당 지방산 에스테르 등을 전형적인 예로서 들 수 있다.
본 발명의 억제제에는, 이들 계면활성제의 1종 또는 2종 이상을 조합하여 첨가할 수 있다. 본 발명의 제제에서 사용하는 바람직한 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 40, 60 또는 80 등의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르이고, 폴리소르베이트 20 및 80이 특히 바람직하다. 또한, 폴록사머(플루로닉 F-68(등록상표) 등)로 대표되는 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌글리콜도 바람직하다.
계면활성제의 첨가량은 사용하는 계면활성제의 종류에 따라 상이하나, 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80의 경우에서는, 일반적으로는 0.001~100 ㎎/mL이고, 바람직하게는 0.003~50 ㎎/mL이며, 더욱 바람직하게는 0.005~2 ㎎/mL이다.
본 발명에 있어서 완충제로서는 인산, 구연산 완충액, 초산, 말산, 타르타르산, 숙신산, 젖산, 인산칼륨, 글루콘산, 카프르산, 데옥시콜산, 살리실산, 트리에탄올아민, 푸마르산 등, 기타 유기산 등, 또는 탄산 완충액, 트리스 완충액, 히스티딘 완충액, 이미다졸 완충액 등을 들 수 있다.
또한 용액 제제의 분야에서 공지의 수성 완충액에 용해함으로써 용액 제제를 조제해도 된다. 완충액의 농도는 일반적으로는 1~500 mM이고, 바람직하게는 5~100 mM이며, 더욱 바람직하게는 10~20 mM이다.
또한, 본 발명의 억제제에는, 그 외의 저분자량의 폴리펩티드, 혈청알부민, 젤라틴이나 면역글로불린 등의 단백질, 아미노산, 다당 및 단당 등의 당류나 탄수화물, 당 알코올을 포함하고 있어도 된다.
본 발명에 있어서 아미노산으로서는 염기성 아미노산, 예를 들면 아르기닌, 리신, 히스티딘, 오르니틴 등, 또는 이들 아미노산의 무기염(바람직하게는 염산염, 인산염의 형태, 즉 인산 아미노산)을 들 수 있다. 유리(free) 아미노산이 사용되는 경우 바람직한 pH 값은, 적당한 생리적으로 허용되는 완충물질, 예를 들면 무기산, 특히 염산, 인산, 황산, 초산, 포름산 또는 이들 염의 첨가에 의해 조정된다. 이 경우, 인산염의 사용은, 특히 안정한 동결건조물이 얻어지는 점에서 특히 유리하다. 조제물이 유기산, 예를 들면 말산, 타르타르산, 구연산, 숙신산, 푸마르산 등을 실질적으로 함유하지 않는 경우 또는 대응하는 음이온(말산 이온, 타르타르산 이온, 구연산 이온, 숙신산 이온, 푸마르산 이온 등)이 존재하지 않는 경우에 특히 유리하다. 바람직한 아미노산은 아르기닌, 리신, 히스티딘, 또는 오르니틴이다. 추가적으로 산성 아미노산, 예를 들면 글루타민산 및 아스파라긴산, 및 그의 염의 형태(바람직하게는 나트륨염) 또는 중성 아미노산, 예를 들면 이소류신, 류신, 글리신, 세린, 트레오닌, 발린, 메티오닌, 시스테인, 또는 알라닌, 또는 방향족 아미노산, 예를 들면 페닐알라닌, 티로신, 트립토판, 또는 유도체의 N-아세틸트립토판을 사용하는 것도 가능하다.
본 발명에 있어서 다당 및 단당 등의 당류나 탄수화물로서는, 예를 들면 덱스트란, 글루코오스, 프룩토오스, 락토오스, 크실로오스, 만노오스, 말토오스, 수크로오스, 트레할로오스, 라피노오스 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서 당 알코올로서는, 예를 들면 만니톨, 소르비톨, 이노시톨 등을 들 수 있다.
본 발명의 약제를 주사용 수용액으로 하는 경우에는, 예를 들면 생리식염수, 포도당이나 그 외의 보조제(예를 들면 D-소르비톨, D-만노오스, D-만니톨, 염화나트륨)를 포함하는 등장액과 혼합할 수 있다. 또한 이 수용액은 적당한 용해 보조제(예를 들면 알코올(에탄올 등), 폴리알코올(프로필렌글리콜, PEG 등), 비이온성 계면활성제(폴리소르베이트 80, HCO-50) 등)와 병용해도 된다.
목적에 따라 추가적으로 희석제, 용해 보조제, pH 조정제, 무통화제, 황 함유 환원제, 산화방지제 등을 함유해도 된다.
본 발명에 있어서 황 함유 환원제로서는, 예를 들면 N-아세틸시스테인, N-아세틸호모시스테인, 티옥트산, 티오디글리콜, 티오에탄올아민, 티오글리세롤, 티오소르비톨, 티오글리콜산 및 그의 염, 티오황산나트륨, 글루타티온, 및 탄소원자수 1~7의 티오알칸산 등의 설프히드릴기를 갖는 것 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서 산화방지제로서는, 예를 들면 에리소르빈산, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, α-토코페롤, 초산토코페롤, L-아스코르브산 및 그의 염, L-아스코르브산 팔미테이트, L-아스코르브산 스테아레이트, 아황산 수소나트륨, 아황산나트륨, 몰식자산 트리아밀, 몰식자산 프로필 또는 에틸렌디아민 사초산 이나트륨(EDTA), 피로인산나트륨, 메타인산나트륨 등의 킬레이트제를 들 수 있다.
또한, 필요에 따라 마이크로캡슐(히드록시메틸셀룰로오스, 젤라틴, 폴리[메틸메타크릴산] 등의 마이크로캡슐)에 봉입하거나, 콜로이드 드러그 딜리버리 시스템(리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐 등)으로 하는 것도 가능하다("Remington's Pharmaceutical Science 16th edition", Oslo Ed., 1980 등 참조). 추가적으로, 약제를 서방성(徐放性) 약제로 하는 방법도 공지로, 본 발명에 적용할 수 있다(Langer et al., J. Biomed. Mater. Res. 1981, 15: 167-277; Langer, Chem. Tech. 1982, 12: 98-105; 미국 특허 제3,773,919호; 유럽 특허출원 공개(EP) 제58,481호; Sidman et al., Biopolymers 1983, 22: 547-556; EP 제133,988호).
사용되는 제제상 허용 가능한 담체는 제형에 따라 상기 중에서 적절히 또는 조합해서 선택되나, 이들에 한정되는 것은 아니다.
본 발명은, IL-6 저해제를 전립선암을 발증한 대상에 투여하는 공정을 포함하는, 대상에 있어서 전립선암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 있어서 「대상」이란, 본 발명의 전립선암 치료제를 투여하는 생물체, 이 생물체의 체내의 일부분을 말한다. 생물체는 특별히 한정되는 것은 아니나, 동물(예를 들면 인간, 가축동물종, 야생동물)을 포함한다.
또한, 「생물체의 체내 일부분」에 대해서는 특별히 한정되지 않으나, 바람직하게는 전립선 또는 전립선 주변부위 또는 전이부위를 들 수 있다.
본 발명에 있어서 「투여한다」란, 경구적, 또는 비경구적으로 투여하는 것이 포함된다. 경구적인 투여로서는 경구제라는 형태로의 투여를 들 수 있고, 경구제로서는 과립제, 산제, 정제, 캡슐제, 용제, 유제, 또는 현탁제 등의 제형을 선택할 수 있다.
비경구적인 투여로서는 주사제라는 형태로의 투여를 들 수 있고, 주사제로서는 점적 등의 정맥 주사, 피하 주사제, 근육 주사제, 또는 복강내 주사제 등을 들 수 있다. 또한, 투여해야 할 올리고뉴클레오티드를 포함하는 유전자를 유전자 치료의 수법을 사용하여 생체에 도입함으로써, 본 발명 방법의 효과를 달성할 수 있다. 또한, 본 발명의 약제를 처치를 실시하고자 하는 영역에 국소적으로 투여하는 것도 가능하다. 예를 들면, 수술 중의 국소주입, 카테터의 사용, 또는 본 발명의 펩티드를 코드하는 DNA의 표적화 유전자 송달에 의해 투여하는 것도 가능하다. 전립선암의 공지의 치료법, 예를 들면 전립선 절제술, 방사선요법, 호르몬요법, 화학요법 등과 동시에 또는 시간을 두고 본 발명의 약제가 투여되어도 된다.
또한 본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은 참조로서 본 명세서에 포함된다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이들 실시예에 제한되는 것은 아니다.
[실시예 1] 인간 전립선암 세포주에 있어서 IL-6 수용체의 발현확인
인간 전립선암 세포주가 IL-6 수용체를 발현하고 있는지를, 이하에 기재하는 바와 같이 웨스턴 블롯 해석에 의해 확인하였다. 인간 전립선암 세포주로서 PC3, DU145, JCA-1을 사용하였다.
상기의 세포주를 RPMI 1640 배지(Invitrogen, Groningen, The Netherlands)에 10%의 소 태아 혈청(FBS)과 스트렙토마이신을 첨가한 배지에서 배양 후, 빙냉하고, 인산 완충액 생리식염수(PBS)를 사용하여 2회 세정하였다. 세포를 회수 후, 200 ㎕의 RIPA 버퍼(20 mM tris HCl, pH 7.4, 150 mM NaCl, 2 mM 에틸렌디아민 사초산, 1% NP-40, 1% Na 데옥시콜산염, 0.1% 도데실 황산나트륨[SDS], 50 mM NaF, 1 mM 오르토바나듐산 나트륨, 1 mM 페닐메틸설포닐플루오르화물, 10 ㎍/㎖ 아프로티닌(aprotinin), 및 10 ㎍/㎖ 류펩틴(leupeptin))를 사용하여 용해하였다. 상청 중의 단백농도는 manufacturer's instructions(BioRad Laboratories, Hercules California)에 의한 the dye binding method로써 측정하였다. 얻어진 단백은 SDS-폴리아크릴아미드겔 전기영동을 사용하고, 니트로셀룰로오스막(BioRad Laboratories)에 전사하였다. 비특이 흡착을, 5% 탈지분유를 포함하는 트리스 완충 생리식염수를 사용하여 억제하고, 500배로 희석한 토끼 항 인간 IL-6 수용체 항체(Santa Cruz Biotechnology)와 반응시켰다. 면역반응성 밴드는 manufacturer's instructions(BioRad Laboratories)에 의한 the amplified alkaline phosphatase system에 의해 얻었다.
그 결과, 인간 전립선암 세포인 JCA-1, PC3, DU145에 있어서 IL-6 수용체가 발현되고 있는 것이 명백해졌다(도 1).
[실시예 2] 인간 전립선암 세포주에 있어서 IL-6 생산의 확인
인간 전립선암 세포주에 있어서 IL-6가 생산되고 있는지의 여부를, 이하에 기재의 방법에 의해 확인하였다.
구체적으로는, 24 웰 플레이트에 실시예 1에 기재의 세포주를, 실시예 1에 기재의 배지를 사용하고, 1 웰당 5×104개, 48시간 배양하여, 상청 중의 IL-6 농도를 ELISA법에 의해 측정하였다.
그 결과, 인간 전립선암 세포인 JCA-1, PC3, DU145에 있어서, IL-6가 생산되고 있는 것이 명확해졌다(도 2).
[실시예 3] hPM1의 인비트로에 있어서 항종양효과의 확인
hPM1이 인비트로에 있어서 항종양효과를 갖는지의 여부를, 이하에 기재의 방법에 의해 확인하였다.
실시예 1에 기재의 세포주를 5%의 소 태아 혈청(FBS)과 스트렙토마이신을 첨가한 RPMI 1640 배지(Invitrogen, Groningen, The Netherlands)에서 96 웰 플레이트를 사용하고, 1 웰당 5×103개로 24시간 배양한 후, 인간화 PM-1 항체(hPM1)를 30, 100, 300 ㎕/㎖의 농도로 투여하였다. 그 24시간 후, 48시간 후의 항종양효과를, MTT 어세이에 의해 검토하였다. hPM1(Hirata T et al., Leuk Res. 2003; 27(4): 343-9, Sato K et al., Cancer Res. 1993; 53(4): 851-6)은 츄가이 세이야꾸 가부시키가이샤로부터 제공받았다.
그 결과, hPM1이 농도의존적 및 시간의존적으로 세포증식 억제효과를 나타내는 것이 명확해졌다(도 3).
[실시예 4] hPM1의 인비트로에 있어서 IL-6 수용체를 매개로 하는 효과의 확인
hPM1의 효과가 IL-6 수용체를 매개로 하는지의 여부를, 이하에 기재의 방법으로 확인하였다.
IL-6 수용체의 시그널 전달의 하류에 있는 STAT3에 착안하였다. DU145를 상기의 배지에서 24시간 배양 후, 100 ㎍/㎖의 hPM1을 투여하였다. 그 60분 후의 STAT3의 인산화를 전술의 웨스턴 블롯 해석에 의해, 대조군과 비교하였다. 다음으로 24시간 배양 후의 세포를 100 ㎍/㎖의 hPM1의 존재하와 비존재하에서 10 ng/㎖의 IL-6로 자극하고, 그 후 30분, 60분 후의 STAT3의 인산화를 웨스턴 블롯 해석에 의해 비교하였다. 일차 항체로서는 토끼 항-인간 pSTAT3 항체(Cell Signaling Technology)를 1000배로 희석하여 사용하였다.
그 결과, hPM1 투여 60분 후에 있어서 전립선암 세포주의 STAT3의 인산화는 억제되고 있는 것이 명확해졌다. 또한, hPM1은 IL-6의 자극에 의해 증강되는 STAT3의 인산화를 억제하는 것이 명확해졌다(도 4).
[실시예 5] hPM1의 인비보에 있어서 항종양효과의 확인
hPM1이 인비보에 있어서 항종양효과를 갖는지의 여부를, 이하에 기재의 방법으로 확인하였다.
SCID 마우스의 피하에, DU145 세포(107개/body)를 이식하고, 피하종양 모델을 제작하였다. 종양 생착이 확인된 5일 후부터 hPM1을 투여하고(200 ㎍/body 3일에 1회), 경시적으로 종양의 체적과, 마우스의 체중을 계측함으로써, 인비보에서의 hPM1의 항종양효과를 검토하였다.
그 결과, DU145가 이식된 SCID 마우스에 hPM1을 투여하면, 종양증식과 체중감소가 유의하게 억제되는 것이 명확해졌다(도 5). 종양모델에 있어서 체중감소가 억제된 점으로부터, 본 발명의 IL-6 저해제가 전립선암에 수반되는 악액질의 치료에도 유효하다는 것이 시사되었다.
진행 전립선암의 치료법으로서는 호르몬요법이 유일한 치료법이지만, 호르몬요법을 개시한 많은 진행 전립선암 환자는 수년 후에는 호르몬 내성을 획득하여, 치료에 고심하고 있는 것이 현재 상황이다. 본 발명의 IL-6 저해제를 유효성분으로 하는 전립선암 치료제는, 호르몬요법을 대신하는 유효한 치료법으로, 호르몬요법에 내성을 획득한 전립선암에 대해서도 유효한 치료효과를 나타내는 것이라고 생각된다. 본 발명의 전립선암 치료제는, 외과수술 후의 전립선암 재발을 억제하는 효과도 나타내는 것이라고 생각된다. 또한, 본 발명의 전립선암 치료제는 전립선암에 수반되는 악액질의 치료에도 유효하다고 생각된다.

Claims (22)

  1. IL-6 저해제를 유효성분으로서 함유하는 전립선암 치료제.
  2. 제1항에 있어서, IL-6 저해제가 IL-6를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 전립선암 치료제.
  3. 제1항에 있어서, IL-6 저해제가 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 전립선암 치료제.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 항체가 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 전립선암 치료제.
  5. 제2항 또는 제3항에 있어서, 항체가 인간 IL-6 또는 인간 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 전립선암 치료제.
  6. 제2항 또는 제3항에 있어서, 항체가 재조합형 항체인 것을 특징으로 하는 전립선암 치료제.
  7. 제6항에 있어서, 항체가 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 전립선암 치료제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 전립선암이 호르몬 저항성 전립선암인 전립선암 치료제.
  9. IL-6 저해제를, 전립선암을 발증한 대상에게 투여하는 공정을 포함하는, 대상에 있어서 전립선암을 치료하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, IL-6 저해제가 IL-6를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제9항에 있어서, IL-6 저해제가 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 항체가 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제10항 또는 제11항에 있어서, 항체가 인간 IL-6 또는 인간 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제10항 또는 제11항에 있어서, 항체가 재조합형 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 항체가 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 전립선암 치료제를 제조하기 위한, IL-6 저해제의 사용.
  17. 제16항에 있어서, IL-6 저해제가 IL-6를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 사용.
  18. 제16항에 있어서, IL-6 저해제가 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 사용.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 항체가 단일클론항체인 것을 특징으로 하는 사용.
  20. 제17항 또는 제18항에 있어서, 항체가 인간 IL-6 또는 인간 IL-6 수용체를 인식하는 항체인 것을 특징으로 하는 사용.
  21. 제17항 또는 제18항에 있어서, 항체가 재조합형 항체인 것을 특징으로 하는 사용.
  22. 제21항에 있어서, 항체가 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 사용.
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Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015093854A1 (ko) 2013-12-17 2015-06-25 주식회사 카엘젬백스 전립선 암 치료용 조성물
US9540419B2 (en) 2012-05-11 2017-01-10 Gemvax & Kael Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
US9730984B2 (en) 2012-05-11 2017-08-15 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for preventing or treating rheumatoid arthritis
US9907838B2 (en) 2013-04-19 2018-03-06 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition and methods for treating ischemic damage
US9937240B2 (en) 2014-04-11 2018-04-10 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having fibrosis inhibitory activity and composition containing same
US10034922B2 (en) 2013-11-22 2018-07-31 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having angiogenesis inhibitory activity and composition containing same
US10383926B2 (en) 2013-06-07 2019-08-20 Gemvax & Kael Co., Ltd. Biological markers useful in cancer immunotherapy
US10463708B2 (en) 2014-12-23 2019-11-05 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide for treating ocular diseases and composition for treating ocular diseases comprising same
US10561703B2 (en) 2013-06-21 2020-02-18 Gemvax & Kael Co., Ltd. Method of modulating sex hormone levels using a sex hormone secretion modulator
US10662223B2 (en) 2014-04-30 2020-05-26 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for organ, tissue, or cell transplantation, kit, and transplantation method
US10835582B2 (en) 2015-02-27 2020-11-17 Gemvax & Kael Co. Ltd. Peptide for preventing hearing loss, and composition comprising same
US10898540B2 (en) 2016-04-07 2021-01-26 Gem Vax & KAEL Co., Ltd. Peptide having effects of increasing telomerase activity and extending telomere, and composition containing same
US10967000B2 (en) 2012-07-11 2021-04-06 Gemvax & Kael Co., Ltd. Cell-penetrating peptide, conjugate comprising same and composition comprising same
US11015179B2 (en) 2015-07-02 2021-05-25 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having anti-viral effect and composition containing same

Families Citing this family (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2382488T3 (es) 1997-03-21 2012-06-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Un agente preventivo o terapéutico para enfermedades mediadas por células t sensibilizadas que comprende un antagonista de il-6 como ingrediente activo
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
EP3192528A1 (en) * 2002-02-14 2017-07-19 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Formulation of anti-il6r antibody-containing solutions comprising a sugar as a stabilizer
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
EP3269738A1 (en) 2004-03-24 2018-01-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Subtypes of humanized antibody against interleukin-6 receptor
AU2006300234B2 (en) 2005-10-14 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents for suppressing damage to transplanted islets after islet transplantation
CN101330930B (zh) * 2005-10-21 2011-11-23 中外制药株式会社 心脏病治疗剂
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
AR059213A1 (es) 2006-01-27 2008-03-19 Univ Keio Agentes terapeuticos para enfermedades que involucran neovascularizacion coroidal
DK3056568T3 (da) 2006-03-31 2021-11-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Fremgangsmåder til kontrollering af antistoffers blodfarmakokinetik
WO2007116962A1 (ja) 2006-04-07 2007-10-18 Osaka University 筋再生促進剤
TW200831528A (en) 2006-11-30 2008-08-01 Astrazeneca Ab Compounds
WO2008090901A1 (ja) 2007-01-23 2008-07-31 Shinshu University 慢性拒絶反応抑制剤
JP5334319B2 (ja) 2007-09-26 2013-11-06 中外製薬株式会社 Ｃｄｒのアミノ酸置換により抗体の等電点を改変する方法
EP3789400A1 (en) 2007-09-26 2021-03-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
CA2721052C (en) 2008-04-11 2023-02-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
CN102256623A (zh) 2008-06-05 2011-11-23 独立行政法人国立癌症研究中心 神经浸润抑制剂
KR20110043643A (ko) 2008-07-02 2011-04-27 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 인터루킨 6 면역치료제
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
TWI523661B (zh) * 2009-07-31 2016-03-01 Shin Maeda Anti-IL-6 receptor antibody in the manufacture of inhibitors of metastatic inhibition of lung cancer metastasis to the liver
KR102071834B1 (ko) 2009-10-26 2020-01-30 에프. 호프만-라 로슈 아게 글리코실화된 면역글로불린의 제조 방법
JP5904552B2 (ja) 2010-05-28 2016-04-13 国立研究開発法人国立がん研究センター 膵癌治療剤
JP6051049B2 (ja) * 2010-05-28 2016-12-21 中外製薬株式会社 抗腫瘍ｔ細胞応答増強剤
KR20190120439A (ko) 2010-11-08 2019-10-23 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
SG10201509790YA (en) 2010-11-30 2015-12-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-Binding Molecule Capable Of Binding To Plurality Of Antigen Molecules Repeatedly
JO3370B1 (ar) 2011-11-10 2019-03-13 Regeneron Pharma طريقة لتثبيط نمو الورم عن طريق تثبيط مستقبل انترلوكين 6
WO2014200018A1 (ja) 2013-06-11 2014-12-18 独立行政法人 国立精神・神経医療研究センター 再発寛解型多発性硬化症（ｒｒｍｓ）患者の治療予後予測方法、及び新規治療適応判断方法
WO2015000865A1 (en) 2013-07-04 2015-01-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Interference-suppressed immunoassay to detect anti-drug antibodies in serum samples
AU2016224409B2 (en) 2015-02-27 2021-01-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating IL-6-related diseases
US10697883B2 (en) 2015-05-19 2020-06-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for determining application of therapy to multiple sclerosis (MS) patient
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
US11203636B2 (en) 2017-02-01 2021-12-21 Yale University Treatment of existing left ventricular heart failure
CN110603057A (zh) 2017-03-17 2019-12-20 俄亥俄州创新基金会 用于递送化学预防剂的纳米颗粒
WO2018203545A1 (ja) 2017-05-02 2018-11-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
US11692037B2 (en) 2017-10-20 2023-07-04 Hyogo College Of Medicine Anti-IL-6 receptor antibody-containing medicinal composition for preventing post-surgical adhesion
CA3087699A1 (en) 2018-01-05 2019-07-11 Corvidia Therapeutics, Inc. Methods for treating il-6 mediated inflammation without immunosuppression
EP3947737A2 (en) 2019-04-02 2022-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
US20220204608A1 (en) * 2019-04-17 2022-06-30 Hiroshima University Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with il-6 inhibitor and ccr2 inhibitor in combination

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
JPS58201994A (ja) 1982-05-21 1983-11-25 Hideaki Hagiwara 抗原特異的ヒト免疫グロブリンの生産方法
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5171840A (en) 1988-01-22 1992-12-15 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human B cell stimulatory factor-2
US5670373A (en) * 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5216128A (en) 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
DE69029015T2 (de) 1989-07-20 1998-01-22 Tadamitsu Kishimoto Antikörper gegen menschlichen Interleukin-6-Rezeptor
JP2898064B2 (ja) 1989-08-03 1999-05-31 忠三 岸本 ヒトｇｐ１３０蛋白質
JPH03155795A (ja) 1989-11-13 1991-07-03 Chuzo Kishimoto マウス・インターロイキン―６レセプター蛋白質
US5210075A (en) 1990-02-16 1993-05-11 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Interleukin 6 antagonist peptides
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2109602C (en) 1990-07-10 2002-10-01 Gregory P. Winter Methods for producing members of specific binding pairs
ES2246502T3 (es) 1990-08-29 2006-02-16 Genpharm International, Inc. Animales no humanos transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
KR100249937B1 (ko) * 1991-04-25 2000-04-01 나가야마 오사무 인간 인터루킨-6 수용체에 대한 재구성 인간 항체
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
ATE275198T1 (de) 1991-12-02 2004-09-15 Medical Res Council Herstellung von antikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken.
JPH07503132A (ja) 1991-12-17 1995-04-06 ジェンファーム　インターナショナル，インコーポレイティド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
JP3507073B2 (ja) 1992-03-24 2004-03-15 ケンブリッジ アンティボディー テクノロジー リミティド 特異的結合対の成員の製造方法
ATE381614T1 (de) 1992-07-24 2008-01-15 Amgen Fremont Inc Bildung von xenogenen antikörpern
FR2694767B1 (fr) 1992-08-13 1994-10-21 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
US5648267A (en) 1992-11-13 1997-07-15 Idec Pharmaceuticals Corporation Impaired dominant selectable marker sequence and intronic insertion strategies for enhancement of expression of gene product and expression vector systems comprising same
AU6819494A (en) 1993-04-26 1994-11-21 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
GB9313509D0 (en) 1993-06-30 1993-08-11 Medical Res Council Chemisynthetic libraries
US5888510A (en) * 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
AU7967294A (en) 1993-10-06 1995-05-01 Board Of Regents, The University Of Texas System A monoclonal anti-human il-6 receptor antibody
AU690171B2 (en) 1993-12-03 1998-04-23 Medical Research Council Recombinant binding proteins and peptides
US8017121B2 (en) * 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
IT1274350B (it) 1994-12-06 1997-07-17 Angeletti P Ist Richerche Bio Antagonisti di interleuchina-6(il-6) che consistono di forme solubili del ricettore alfa di il-6, mutate nell'interfaccia che si lega a gp 130
IT1274782B (it) 1994-12-14 1997-07-24 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodo per selezionare superagonisti, antagonisti e superantagonisti di ormoni del cui complesso recettoriale fa parte gp 130
US6060293A (en) 1995-03-31 2000-05-09 Prokyon Aps Resonance driven changes in chain molecule structure
EP1709970A1 (en) 1995-04-27 2006-10-11 Abgenix, Inc. Human antibodies against EGFR, derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5571513A (en) 1995-05-31 1996-11-05 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Anti-gp130 monoclonal antibodies
RU2195960C2 (ru) * 1998-03-17 2003-01-10 Тугаи Сейяку Кабусики Кайся Профилактический или терапевтический агент для лечения воспалительных заболеваний кишечника, содержащий в качестве активного ингредиента антагонист il-6
DE60023008T2 (de) * 1999-07-16 2006-07-06 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd., Matsumoto Mittel zur verhinderung der chronischen abstossreaktion infolge einer organtransplantation
CA2467719C (en) * 2001-11-14 2015-03-17 Jill Giles-Komar Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses
CA2505991C (en) * 2002-11-15 2018-02-27 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd25
EP1594897A4 (en) * 2003-02-04 2006-11-08 Centocor Inc USE OF IL-6 ANTAGONISTS IN COMBINATION WITH STEROIDS FOR INCREASED APOPTOSIS
PL378199A1 (pl) * 2003-02-24 2006-03-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Środek terapeutyczny do stosowania w urazach rdzenia kręgowego, zawierający antagonistę interleukiny-6
US20040208876A1 (en) * 2003-04-18 2004-10-21 Kim Kyung Jin Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
GB2401040A (en) * 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
AU2004268614C1 (en) * 2003-08-27 2010-10-28 Ophthotech Corporation Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders
KR100556660B1 (ko) * 2003-11-11 2006-03-10 국립암센터 Ｈｇｆ의 중화가능 에피토프 및 이에 결합하는 중화 항체
CN101905023B (zh) * 2004-07-16 2012-07-11 杏林制药株式会社 有效的医药使用方法及与副作用发生的防御相关的方法
BRPI0514138A (pt) * 2004-08-05 2008-05-27 Wyeth Corp método para tratar, melhorar, ou prevenir um distúrbio, proteìna de fusão, vetor, célula hospedeira recombinante, método para produzir uma proteìna de fusão, composição farmacêutica, e, métodos para transplantar/enxertar um órgão, tecido, célula ou grupo de células em um indivìduo mamìfero, e para tratar, prevenir ou melhorar rejeição de transplante/enxerto em um receptor de transplante/enxerto mamìfero
AU2006300234B2 (en) * 2005-10-14 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents for suppressing damage to transplanted islets after islet transplantation
CN101330930B (zh) * 2005-10-21 2011-11-23 中外制药株式会社 心脏病治疗剂
AR057582A1 (es) * 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
AR059213A1 (es) * 2006-01-27 2008-03-19 Univ Keio Agentes terapeuticos para enfermedades que involucran neovascularizacion coroidal
WO2007116962A1 (ja) * 2006-04-07 2007-10-18 Osaka University 筋再生促進剤
WO2008042611A2 (en) * 2006-09-29 2008-04-10 Centocor, Inc. Method of using il6 antagonists with mitoxantrone for prostate cancer
WO2008090901A1 (ja) * 2007-01-23 2008-07-31 Shinshu University 慢性拒絶反応抑制剤
CN102256623A (zh) * 2008-06-05 2011-11-23 独立行政法人国立癌症研究中心 神经浸润抑制剂

Cited By (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10960056B2 (en) 2012-05-11 2021-03-30 Gemvax & Kael Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
US11857607B2 (en) 2012-05-11 2024-01-02 Gemvax & Kael Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
US9540419B2 (en) 2012-05-11 2017-01-10 Gemvax & Kael Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
US9730984B2 (en) 2012-05-11 2017-08-15 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for preventing or treating rheumatoid arthritis
US9844584B2 (en) 2012-05-11 2017-12-19 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for preventing or treating sepsis
US9907837B2 (en) 2012-05-11 2018-03-06 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for preventing or treating cachexia
US11369665B2 (en) 2012-05-11 2022-06-28 Gemvax & Kael Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
US10039811B2 (en) 2012-05-11 2018-08-07 Gemvax & Kael Co., Ltd. Anti-inflammatory peptides and composition comprising the same
US10967000B2 (en) 2012-07-11 2021-04-06 Gemvax & Kael Co., Ltd. Cell-penetrating peptide, conjugate comprising same and composition comprising same
US9907838B2 (en) 2013-04-19 2018-03-06 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition and methods for treating ischemic damage
US10383926B2 (en) 2013-06-07 2019-08-20 Gemvax & Kael Co., Ltd. Biological markers useful in cancer immunotherapy
US10561703B2 (en) 2013-06-21 2020-02-18 Gemvax & Kael Co., Ltd. Method of modulating sex hormone levels using a sex hormone secretion modulator
US10034922B2 (en) 2013-11-22 2018-07-31 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having angiogenesis inhibitory activity and composition containing same
WO2015093854A1 (ko) 2013-12-17 2015-06-25 주식회사 카엘젬백스 전립선 암 치료용 조성물
US11058744B2 (en) 2013-12-17 2021-07-13 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for treating prostate cancer
KR20160089523A (ko) 2013-12-17 2016-07-27 주식회사 젬백스앤카엘 전립선 암 치료용 조성물
US9937240B2 (en) 2014-04-11 2018-04-10 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having fibrosis inhibitory activity and composition containing same
US10662223B2 (en) 2014-04-30 2020-05-26 Gemvax & Kael Co., Ltd. Composition for organ, tissue, or cell transplantation, kit, and transplantation method
US10463708B2 (en) 2014-12-23 2019-11-05 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide for treating ocular diseases and composition for treating ocular diseases comprising same
US11077163B2 (en) 2014-12-23 2021-08-03 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide for treating ocular diseases and composition for treating ocular diseases comprising same
US10835582B2 (en) 2015-02-27 2020-11-17 Gemvax & Kael Co. Ltd. Peptide for preventing hearing loss, and composition comprising same
US11015179B2 (en) 2015-07-02 2021-05-25 Gemvax & Kael Co., Ltd. Peptide having anti-viral effect and composition containing same
US10898540B2 (en) 2016-04-07 2021-01-26 Gem Vax & KAEL Co., Ltd. Peptide having effects of increasing telomerase activity and extending telomere, and composition containing same

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