CZ188998A3 - Způsob přípravy frakce hyaluronové kyseliny s nízkým polydisperzním indexem - Google Patents
Způsob přípravy frakce hyaluronové kyseliny s nízkým polydisperzním indexem Download PDFInfo
- Publication number
- CZ188998A3 CZ188998A3 CZ981889A CZ188998A CZ188998A3 CZ 188998 A3 CZ188998 A3 CZ 188998A3 CZ 981889 A CZ981889 A CZ 981889A CZ 188998 A CZ188998 A CZ 188998A CZ 188998 A3 CZ188998 A3 CZ 188998A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- molecular weight
- average molecular
- ultrasound
- fraction
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 106
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 103
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 103
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 25
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 229910019093 NaOCl Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 2
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 2
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 claims 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 abstract description 36
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 230000009471 action Effects 0.000 description 13
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 11
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfonylbenzoic acid Chemical compound CS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O BZSXEZOLBIJVQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000201841 Celosia Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 230000003444 anaesthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 238000007620 mathematical function Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 229940023490 ophthalmic product Drugs 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000025218 regulation of catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000003639 vasoconstrictive effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Oblast techniky
Tento vynález se týká způsobu přípravy frakce hyaluronové kyseliny s nízkou střední molekulovou hmotností v rozsahu 5.000 až 300.000 a polydisperzním indexem pod 1,7, zahrnujícího současné působení chlornanu a ultrazvuku na výchozí hyaluronovou kyselinu s vysokou molekulovou hmotností.
Dosavadní stav techniky
Hyaluronové kyselina je přírodní lineární disacharid, biokompatibilní a biologicky odbouratelný, složený z opakující se disacharidové jednotky tvořené glukuronovou kyselinou a N-acetylátglukosaminem spojených glykosidovými vazbami β 1-3 a a 1-4.
Hyaluronové kyselina je obsažena v pojivových tkáních vyšších organismů, v kloubním mazu, v pupeční šňůře a v kohoutím hřebínku; lze ji též synthetizovat z určitých bakteriálních druhů jako jsou streptokoky (Kendall a další, Journ. Biol. Chem., sv. 118, s. 61, 1937).
Hyaluronové kyselina hraje důležitou roli v mnoha biologických procesech jako je hydratace tkání, organizace proteoglykanu, diferenciace buněk a angiogeneze. Mnoho biomedicinských aplikací souvisí s reologickými vlastnostmi roztoků hyaluronové kyseliny: jedním z důležitých oborů je oční chirurgie (Grav a další, Exp. Eye Res., sv. 31, s. 119, 1979). Další biomedicinská použití hyaluronové kyseliny a jejích derivátů (jako jsou estery hyaluronové kyseliny, jak popsal della Valle a Romeo, EP 0216453, 1987), spadají do oblasti regenerace tkáni (léze, spáleniny).
Pokud jde o frakce s nízkou molekulovou hmotností, v současné době se úspěšně zkoumají různé aplikační oblasti v dermatologii (Scott, EP 0295092 Bl, r. 1987) a farmakologii. Zjistilo se, že různé biologické vlastnosti jsou citlivé vůči poklesům molekulové hmotnosti a funkci distribuční křivky charakterizované různými lokalizacemi a disperzními indexy (Mw, Mn, Mz), a polydisperzním indexem. Frakce hyaluronové kyseliny s nízkou molekulovou hmotností například působí jako možná angiogenní činidla tím, že ovlivňují schopnost polysacharidu zvýšit vaskularizaci nebo vstoupit do zánětlívých pochodů jako specifické inhibitory faktorů jako je TNF (Noble a další, J. Clin. Inv., sv. 91, s. 2.163, r. 1993).
Existuje mnoho příkladů přípravy frakcí hyaluronové kyseliny fyzikálními methodami jako je například zahřívání, ultrazvuk, UV- a gama-záření, nebo enzymatické reakce za použití hyaluronidázy (Chabreck a další, Jour. Appl. Póly. Sci., sv. 48, s. 233, r. 1991; Řeháková a další, Int. J.
Bio. Macrom., sv. 16/3, s. 121, r. 1994); nebo též reakcemi chemické depolymerace kyselinou askorbovou (Cleveland a další, Bioch. Biophy. Acta, sv. 192, s. 385, r. 1969) nebo působením chlornanů (Schiller a další, Biol. Chem. HoppSeyler, sv. 375, s. 169, r. 1994). Všechny uvedené způsoby jsou však nějakým způsobem neuspokojivé z hlediska typu získaných produktů. I když totiž některé z nich nemění primární polymemí strukturu působením na glykozidové vazby, nejsou schopny vytvořit odbouráním produkty s nízkou molekulovou hmotností charakterizované nízkým polydisperzním indexem. Bylo totiž shledáno, že technologie používající ultrazvuku nebo tepla mají kinetiku depolymerace asymptotického typu. Pokračování v depolymeraci za těchše podmínek (energie ultrazvuku a tepla) vedou k úplnému ·· ·· ·· 99 99 • ··· 9 9 9 9
999 · ···· 9 999 odbourání (degradaci) produktu.
Na rozdíl od fyzikálních způsobů, depolymerace působením hyaluronidázy má určité výhody jako je účinnost reakce, zachování primární struktury polymemího řetězce a regulace kinetiky odbourání.
Respektování těchto parametrů však nemusí zaručit vysoké výtěžky nebo produkty charakterizované distribucí nízkých molekulových hmotností.
Rozsáhlé použití chemických činidel jako je chlornan a askorbová kyselina však zároveň vede i ke ztrátě molekulové hmotnosti a k podstatným změnám chemické struktury polymemího řetězce. Degradační produkty s požadovanou velikostí a strukturou molekuly lze získat jen pečlivým a regulovaným použitím uvedených činidel, takže možné užití chemického řešení v průmyslovém měřítku se jeví jako značně omezené.
Podstata vynálezu
Tento vynález se týká způsobu přípravy frakce hyaluronové kyseliny nebo její soli se střední molekulovou hmotností v rozsahu 5.000 až 300.000, při níž se na hyaluronovou kyselinu nebo její sůl se střední molekulovou hmotností mezi 50.000 a 10,000.000 působí současně ultrazvukem a chlornanem sodným po dobu nižší než 240 minut a v takové koncentraci, že molárni poměr chlornan sodný/opakující se jednotka hyaluronové kyseliny (HA r.u.) je mezi 0,01 a 5.
Přehled obrázků na výkresech'
Obrázek 1 ukazuje ve formě grafu výsledky depolymerace výchozí hyaluronové kyseliny se střední molekulovou hmotností 175.000 provedené během 8 hodin pouze chlornanem sodným při molárním poměru NaOCl/HA r.u. v rozsahu 1,0 až • ·· ·· ·· φφ ·Φ φφφ φφφ φφφφ • · φφ φ φφφφ φ φφφ • · φφφ φφ φφ φφφ φ φ φφφ φφφφ φφφ φφφ φφ φφ φφ φφ φφ
10,0, přičemž se tyto molární poměry vynášejí na ose úseček, střední molekulové hmotnosti na levé ose pořadnic a polydisperzní indexy na pravé ose pořadnic.
Obrázek 2 ukazuje graf degradační kinetiky depolymerace provedené pouze chlornanem sodným při molárním poměru NaOCl/HA r.u. = 5,0, přičemž se doba (hr = hodiny) vynáší na ose úseček, střední molekulové hmotnosti na levé ose pořadnic a polydisperzní index na pravé ose pořadnic.
Obrázek 3 představuje graf degradační kinetiky depolymerace frakce D3-b hyaluronové kyseliny, přičemž se doba (hcx/.J vynáší na ose úseček, střední molekulová hmotnost na levé ose pořadnic a polydisperzní indexy na pravé ose pořadnic.
Obrázek 4 ukazuje degradační graf kinetiky depolymerace frakce D2 hyaluronové kyseliny, přičemž se v tomto grafu doba (hocQ vynáší na ose úseček, střední molekulová hmotnost na levé ose pořadnic a polydisperzní indexy na pravé ose pořadnic.
Obrázek 5 ilustruje degradační kinetiku depolymerace výchozí hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností 990.000 a polydisperzním indexem 1,40 při současném působení ultrazvuku a chlornanu sodného a molárním poměru NaC10/HA r.u. 0,5, 1,0 a 2,5 ve srovnání s depolymerací téže hyaluronové kyseliny pouhým ultrazvukem, přičemž jsou střední molekulové hmotnosti vynášeny na ose pořadnic a doba (minuty) na ose úseček.
Obrázek 6 ukazuje degradační kinetiku depolymerace hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností 990.000 a polydisperzním indexem 1,40, na kterou se současně působí ultrazvukem a chlornanem sodným při molárním poměru NaC10/HA r.u. 0,5, 1,0 a 2,5 ve srovnání s depolymerací téže hyaluronové kyseliny pouze účinkem ultrazvuku, přičemž jsou • · • · • ··
• · · * polydisperzní indexy vyneseny na ose pořadnic a doba (minuty) na ose úseček.
Podrobný popis vynálezu
Postup podle tohoto vynálezu se může použit pro depolymeraci hyaluronové kyseliny nebo jejích solí s různými molekulovými hmotnostmi.
Může se například použít pro depolymeraci hyaluronové kyseliny extrahované z kohoutích hřebínků, jak je popsáno v EP 0,138.572 a v EP-A-0,535.200, se střední molekulovou hmotností v rozsahu 100.000 do 1,500.000.
V takovém případě mají frakce hyaluronové kyseliny výhodně molekulovou hmotnost od 5.000 do 50.000, výhodněji v těchto rozsazích: 5.000-10.000, 10.000-15.000, 15.000-25.000 a 25.000-50.000.
Způsob podle vynálezu může též být výhodně použit pro depolymeraci komerční hyaluronové kyseliny vyrobené fermentačním způsobem, jež se vyznačuje spíše vyšší molekulovou hmotností, zpravidla v mezích 1,000.000 až 5,000.000, přičemž depolymeračním způsobem podle tohoto vynálezu se z těchto frakcí hyaluronové kyseliny může získat hyaluronová kyselina se střední molekulovou hmotností v rozsahu 50.000 do 300.000. Konečně se tento způsob podle vynálezu může výhodně aplikovat na frakce hyaluronové kyseliny s vysokou molekulovou hmotností získané syntézou in vitro popsanou v patentu PCT č. WO 95/24497, přičemž tato hyaluronová kyselina má molekulovou hmotnost od 50.000 do 10,000.000.
Způsob podle vynálezu se všeobecně realizuje s vodným roztokem NaCl obsahujícím výchozí hyaluronouvou kyselinu nebo její soli při koncentracích výhodně 10 mg/ml a teplotách výhodně 4 °C. Při použití způsobu podle vynálezu se NaOCl zpravidla přidává k uvedenénu roztoku ve formě • · ··· • · · · · ·
vodného roztoku při koncentracích většinou od 1 % do 20 % hmot.
Při aplikaci způsobu podle vynálezu se NaOCl přednostně přidává v takových koncentracích, že molární poměr NaOCl/HA r.u. je mezi 0,5 a 2,5.
Způsob podle vynálezu se výhodně uskutečňuje během 120 a 240 minut.
Energie ultrazvuku je přednostně v rozmezí 50 a 200 Watt a frekvence v rozmezí 10 až 50 Hz.
Navíc se způsob podle vynálezu vyznačuje depolymerační kinetikou, již lze nejen řídit a sledovat na základě jednoduchých matematických funkcí, ale která především umožňuje, jak bylo výše uvedeno, získat frakce polysacharidů s nízkým polydisperzním indexem (hodnoty Pd = Mw/Mn <1,7),jaký by jinak bylo možno získat jen zdlouhavým a nákladným způsobem čištění.
Molekulové hmotnosti a polydisperzní indexy byly stanoveny kombinací chromatografie typu DEC (dimensional exclusion chromatography) s různými měřicími technikami jako je refraktometrie - zjištování indexu lomu (Rl) a měření rozptylu laserových paprsků MALLS (multi-angle laser light scattering).
Přihlašovatel experimentálně neočekávaně zjistil, že pouze současné působení ultrazvuku a NaClO umožňuje dosáhnout uvedeného cíle, zatímco alternativní způsoby, v nichž se ultrazvuk a NaClO aplikují ve dvou oddělených stupních, neumožňuje úspěšně dosáhnout zároveň frakcí s nízkou molekulovou hmotností a nízkého polydisperzníno indexu.
V praxi bylo použito následujících tří alternativních způsobů:
1) způsob A: depolymerace uskutečněná přidáním roztoku • ·· • · · · chlornanu sodného, po němž následuje působení ultrazvuku na výsledný roztok.
2) způsob B: depolymerace působením ultrazvuku ve dvou oddělených po sobě následujících stupních při zvolené energii vyjádřené ve W a s přídavkem roztoku chlornanu sodného.
3) způsob C: depolymerace účinkem současného kombinovaného působení roztoku chornanu sodného a ultrazvuku.
V zájmu srovnání těchto tří způsobů jsme uvedené proměnné (koncentraci hyaluronové kyseliny, koncentraci chlornanu, energii ultrazvuku aj.) maximálně stabilizovali. Vycházejíce z roztoků hyaluronové kyseliny získaných extrakcí, s molekulovou hmotností v rozsahu 100.000 a 1,500.000 a koncentrací 20 mg/ml, jsme studovali degradační kinetiku polymeru působením 5% roztoku chlornanu při různých molárních poměrech NaClO/HA r.u. při 50 °C v časových periodách kolísajících mezi 1 a 48 hodinami. Cílem bylo získat frakce hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností mezi 5.000 a 20.000 Da s polydisperzním indexem <1,7.
Obrázek 1 ukazuje frakce hyaluronové kyseliny a polydisperzní index, jež se získají, když se nechá výchozí hyaluronová kyselina HA-1 se střední molekulovou hmotností 175.000 reagovat 8 hodin s roztoky chlornanu sodného při různých molárních poměrech NaClO/HA r.u. od 1,0 do 10 podle údajů v tabulce 1; na základě zvoleného molárního poměru 5,0 a údajů v tabulce 2 byla konstruována křivka degradační kinetiky (obrázek 2).
Ze získaných údajů vyplývá, že je obtížné získat frakce hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností pod 20.000 Da a polydisperzním indexem, jehož číselná hodnota (Mw/Mn) nepřekračuje 1,7. Zvyšováním množství depolymeračniho činidla a/nebo prodlužováním reakční doby nelze získat ···· · ··· • · · · · · · · • · · · · ·· · · · · frakce hyaluronové kyseliny s požadovanými molárními charakteristikami, protože dochází k úplné degradaci polymeru.
Pro dokončení zkoumání způsobu A jsme použili frakcí označovaných kódy D2 a D3-b, izolovaných z reakční směsi vysrážením organickou směsí složenou z methanolu a acetonu. Po solubilizaci v 0,15M roztoku NaCl se na ně 15 minut až 8 hodin působí ultrazvukem při energii 150-200 W a frekvenci 20 KHz. Tabulka 3 uvádí molekulové hmotnosti zjištěné chromatografií GPC.
Tabulka 1
| Produkt | Kód | Molekulová hmotnost | Polydisperzní index |
| Přír. hyaluronové kys.(HA) | HA-1 | 175.000 | 1,24 |
| HA degradovaná s molár. poměrem NaClO/HA r.u.:l/l | Dl | 119.000 | 1,29 |
| HA degradovaná s molár. poměrem NaC10/HA r.u.:2/l | D2 | 64.000 | 1,32 |
| HA degradovaná s molár. poměrem NaClO/HA r.u.:5/l | D3 | 21.000 | 1, 81 |
| HA degradovaná s molár. poměrem NaClO/HA r. u. : 10 /1 | D4 | 6.000 | 2,2 |
Tabulka 2
| Produkt | Kód | Molekulová | Polydisperzní |
| hmotnost | index | ||
| Doba: 1 hodina | D3-a | 73.000 | 1,35 |
| Doba: 2 hodiny | D3-b | 56.000 | 1,41 |
| Doba: 8 hodin | D3-c | 21.000 | 1, 81 |
| Doba: 24 hodin | D3-d | 11.500 | 1, 98 |
| Doba: 48 hodin | D3-e | 5.000 | 3, 00 |
Tabulka 3
| Frakce | D2 | D3-b | ||
| Doba (min) | Molekulová hmotnost | Polydisp. index | Molekulová hmotnost | Polydisp. index |
| 0 | 64.000 | 1, 32 | 56.000 | 1, 41 |
| 15 | 62.000 | 1,32 | 51.500 | 1, 43 |
| 30 | 57.000 | 1, 33 | 47.500 | 1, 43 |
| 60 | 52.500 | 1,35 | 44.000 | 1, 45 |
| 120 | 48.000 | 1, 35 | 41,500 | 1, 47 |
| 240 | 46.500 | 1,36 | 39.000 | 1, 51 |
| 480 | 42.000 | 1, 36 | 37.500 | 1, 53 |
Získané údaje a příslušné grafy (obrázky 3 a 4) ukazují, že je nemožné připravit frakce hyaluronové kyseliny s požadovanou molekulovou hmotností použitím způsobu A. I když se prodlouží doba ultrazvukového působeni nebo se upraví podmínky chemické depolymerace, stále ještě není možné získat finální produkt charakterizovaný polydisperzním indexem <1,7 a molekulovou hmotností mezi 5.000 a 20.000.
Způsob B rovněž zahrnuje dvojí působení, jednak • · · ultrazvuku, jednak reakce s chlornanem ve dvou oddělených stupních, a stejně jako způsob A vychází z přírodní hyaluronové kyseliny podle popisu, ale nevede ke vzniku frakcí s požadovanou střední molekulovou hmotností nebo polydisperzním indexem. Přesněji, bylo zjištěno, že i když působení ultrazvuku vytvoří hyaluronovou kyselinu s molekulovou hmotností kolem 35.000 a polydisperzním indexem 1,5 (po čtyřhodinové expozici za teploty 4 ’C), následující chemická reakce s chlornanem sodným zničí strukturální charateristiky produktu, a to i za velmi mírných podmínek.
Způsob C, jehož inovativní výsledky jsou popsány v tomto patentu, kombinuje a reguluje působení ultrazvuku a chlornanu. Kombinované působení předpokládá současné použití obou faktorů v časové periodě mezi 0 a 480 minutami. Fyzikálně-chemická degradace probíhá v 0,15M roztoku NaCI při teplotě 4 °C za použití ultrazvuku energie 150 W a s frekvencí 20 KHz generovaného ponorným snímačem povlečeným titanem. Dále se přidá 5% roztok ONaCl v koncentraci přihlížející k molekulové hmotnosti hyaluronové kyseliny kolem 1,000.000, tak aby molární poměr (moly ONaCl/moly hyaluronové kyseliny) byl mezi 0,5 a 2,5.
V době vyplývající z reakční kinetiky se odebere alikvotní množství roztoku a vysráží se v 5 objemech směsi methanol/aceton. Potom je produkt usušen a analyzován chromatografií GPC za použití dvou dříve popsaných způsobů měření; pro separaci se užijí dva za sebou řazené válce modelu TSK (G2000 a G3000). Výsledné údaje tohoto rozboru jsou uvedeny v tabulce 4 (molekulová hmotnost) a 5 (polydisperzita). Pro názornost se současně uvádějí hodnoty molekulových hmotností získaných v prvním stupni methody B (působení samotného ultrazvuku.)
Ze srovnání údajů z těchto dvou řad rozborů vyplývá, že • · ·
• 9 · 9 9 9
9999 9 9 ·9
99 9999 ·
9 9 · · 9 ·· 99 99 lze získat nejméně tři frakce s požadovaným charakterem molekuly. Tyto tři odlišné produkty se kódovými názvy označují D4 (doba: 240 minut, ONaCl 0,5), D5 (doba: 120 minut, ONaCl 1,0) a D6 (doba: 120 minut, ONaCl 2,5). Mají molekulové hmotnosti 13.400, 11,500 a 7.800 a polydisperzní indexy mezi 1,55 a 1,7.
Tabulka 4
| doba (min) | ultrazvuk (MW) | ultrazvuk + 0. S- * (MW) | ultrazvuk W* (MW) | ultrazvuk + Z,S * (MW) |
| 0 | 990.000 | 990.000 | 990.000 | 990.000 |
| 15 | 645.000 | 396.000 | 341.000 | 286.000 |
| 30 | 453.000 | 198.000 | 125.000 | 92.400 |
| 60 | 266.000 | 67.000 | 61.400 | 35.000 |
| 120 | 172.300 | 23.000 | 11.500 | 7.800 |
| 240 | 89.400 | 13.400 | <5.000 | <5.000 |
| 480 | 54.900 | <5.000 | <5.000 | <5.000 |
*molární poměr NaC10/HA r.u.
Molekulové hmotnosti pod 5.000 je těžké určit přesně, protože jsou pod hranicemi citlivosti analytických přístrojů, takže je obtížné definovat frakce s těmito hodnotami.
Stojí za zmínku, že methoda degradace C kombinující dva současně použité přístupy vytváří frakce hyaluronové kyseliny, které jsou uvnitř přijatelných limitů polyd.isperzity a molekulových hmotností. Tyto výsledky potvrzují specifičnost depolymeračních reakcí a, soudě podle křivek v obrázcích 5 a 6, dobrou regulaci kinetiky, vyplývající ze tří testů s použitím těchto reakčních parametrů: ultrazvuk s energií 150 W, doba 120 minut a molární koncentrace ONaCl 1M/1M hyaluronové kyseliny, přičemž se vychází z téže hyaluronové kyseliny, jíž bylo použito v předchozím pokusu, a odpovídající údaje uvedené v tabulce 6 ilustrují, že proces degradace je reprodukovatelný za použití těchše experimentálních podmínek.
Tabulka 5
| doba (min) | ultrazvuk (MW) | ultrazvuk <0,5* (MW) | ultrazvuk (MW) | ultrazvuk | |
| (MW) | |||||
| 0 | 1, 40 | 1,40 | 1, 40 | 1, | 40 |
| 15 | 1,45 | 1, 32 | 1, 42 | 1, | 50 |
| 30 | 1, 51 | 1, 34 | 1, 45 | 1, | 53 |
| 60 | 1, 56 | 1,38 | 1, 60 | 1, | 55 |
| 120 | 1, 60 | 1, 44 | 1, 63 | 1, | 7 |
| 240 | 1, 60 | 1, 55 | >1,7 | >1 | ,7 |
| 480 | 1,65 | >1,7 | >1,7 | >1 | ,7 |
Tabulka 6
| Produkt | Molekulová hmotnost | Polydisperzní index | Výtěžek reakce |
| D5-a | 11.100 | 1, 60 | 55 % |
| D5-b | 10.700 | 1,55 | 61 % |
| D5-c | 12.000 | 1, 60 | 65 % |
V dalším uvádíme následující příklady jako ilustrativní a nikoliv omezující platnost způsobu podle tohoto patentu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
99 99 99 99 99
9 9 9 9 9 9 9 9
999 9 9 999 9 999
9 9 9 · · · 9 9 999 9 *
9 · 9 9 9 9 9 9 9
9 99 99 9 9 9 9 99
Příprava hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností mezí 5.000 a 10.000
2,40 g sodné soli hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností 990.000 Da z hyaluronové kyseliny získané extrakcí se solubilizuje ve 240 ml 0,15M roztoku NaCl. Přidá se 7,9 ml 14% roztoku ONaCl. Při teplotě +4 °C se na výsledný roztok působí 120 minut ultrazvukem energie 150 W a frekvence 20 KHz.
Po skončení této reakce, což je zřejmé z poklesu viskozity, se pH pomocí 0,IN HCl sníží na 6,5 a pak se provede vysrážení pevného produktu v 1.000 ml směsi methanol-aceton 2:1. Produkt se separuje filtrací a suší ve vakuu 48 hodin při 45 °C.
Takto získaný výtěžek ve formě sodné soli (kód HA-D9Na) je 1,65 g. Analýzou HPLC-GPC (kobinace vysokovýkonnostní kapalinové a plynové chromatografie) se zjišťuje, že takto získaná frakce hyaluronové kyseliny má střední molekulovou hmotnost (MW) 5.850, číselný průměr molekulové hmotnosti 3.640 a polydisperzní index 1,61.
Při srovnání s přírodní hyaluronovou kyselinou se spektroskopií FT-IR nezjistily ve spektru žádné abnormality. Stanovení procentuálního obsahu hyaluronové kyseliny za použití karbazolu pro určení D-glukuronové kyseliny prokazuje čistotu 95 %.
Příklad 2
Příprava hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotnosti mezi 10.000 a 15.000
2,5 g sodné soli hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností 740.000 Da z hyaluronové kyseliny získané extrakcí se solubilizuje ve 250 ml 0,15M roztoku NaCl. Přidá se 3,3 ml 14% roztoku ONaCl. Při teplotě.+4 °C se na výsledný ··
999 • * ·
• ·
9· 99 ·· ·· • ' 9 · · · · • · 9 · · · * · · • · · · · ♦ ··♦ · · • · 9 · 9 · · roztok působí 120 minut ultrazvukem energie 150 W a frekvence 20 RHz.
Po skončení této reakce, což je zřejmé z poklesu viskozity, se pH pomoci 0,IN HCI sníží na 6,5 a pak se provede vysrášení pevného produktu v 1.000 ml směsi methanol-aceton v poměru 2:1. Produkt se separuje filtrací a suší ve vakuu 48 hodin při 45 °C.
Takto získaný výtěžek ve formě sodné soli (kód HA-D9Na) je 1,50 g. Analýzou HPLC-GPC se zjišťuje, že takto získaná frakce hyaluronové kyseliny má střední molekulovou hmotnost (MW) 11.650, číselný průměr molekulové hmotnosti (MN) 7.330 a polydisperzní index 1,59.
Při srovnání s přírodní hyaluronovou kyselinou se spektroskopií FT-IR nezjistily ve spektru žádné abnormality. Stanovení procentuálního obsahu hyaluronové kyseliny za použití karbazolu pro určení D-glukuronové kyseliny prokazuje čistotu 98 %.
Příklad 3
Příprava hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností mezí 15.000 a 25.000
1,00 g sodné soli hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností 1,000.000 Da z hyaluronové kyseliny získané extrakcí se solubilizuje ve 100 ml 0,15M roztoku NaCI. Přidá se 0,6 ml 14% roztoku ONaCl. Při teplotě +4 °C se na výsledný roztok působí 120 minut ultrazvukem energie 150 W a frekvence 20 J«Hz.
Po skončení této reakce, což je zřejmé z poklesu viskozity, se pH pomocí 0,lN HCI sníží na 6,5 a pak se provede vysrážení pevného produktu v 500 ml směsi methanolaceton v poměru 2:1. Produkt se separuje filtrací a suší ve vakuu 48 hodin při 45 °C.
·· ·* • · · · • · · · • · · · · • · · ·· ·· • ·· ·· *· ·· · · · · • ··· · · ··· • · ··· ·· · · • · · ♦ · · · ··· ·· ♦· ··
Takto získaný výtěžek ve formě sodné soli (kód HA-D8Na) je 0,65 g. Analýzou HPLC-GPC se zjišťuje, že takto získaná frakce hyaluronové kyseliny má střední molekulovou hmotnost (MW) 22.500, číselný průměr molekulové hmotnosti (MN) 15.550 a polydisperzní index 1,45.
Ve srovnání s přírodní hyaluronovou kyselinou se spektroskopií FT-IR nezjistily ve spektru žádné abnormality. Stanovení procentuálního obsahu hyaluronové kyseliny za použití karbazolu pro určení D-glukuronové kyseliny prokazuje čistotu 97 %. Frakce hyaluronové kyseliny získané způsobem podle tohoto vynálezu lze široce použít při přípravě farmaceutických kompozic s charakteristikami vhodnými pro buněčné interakce v rámci mechanismů regenerace tkání, při angiogenesi a tvorbě kostí.
Kromě toho lze použít tyto frakce hyaluronové kyseliny v průmyslové výrobě samozesíťující hyaluronové kyseliny způsobem podle Evropského patentu č. 0,341.745 Bl použitelné v přípravě farmaceutických kompozic pro oční lékařství a oborové mechanismy zahrnující sloučeniny s účinky anesthetickými, protizánětlivými, vazokonstrikčními, antibiotickými, antibakteriálními a antivirovými.
Deriváty hyaluronové kyseliny lze rovněž použít při výrobě hygienických a chirurgických výrobků, dále v potravinářském průmyslu a ve výrobě kosmetických přípravků.
Uvedené frakce lze též esterifikovat a připravit esterifikovanou kyselinu hyaluronovou způsobem popsaným v Evropském patentu č. 0,216.453 Bl, použitelnou v očním lékařství, dermatologii, otorinolaryngologii, zubním lékařství, angiologii, gynekologii a v neurologii pro přípravu zdravotnických a chirurgických produktů.
Vedle syntézy samozesíťující a esterifikované hyaluronové kyseliny lze použít frakce hyaluronové kyseliny
0 0 · 0 ·· • 000 0 0 000 · · ·0· 0000 000 000 00 00 00 ·· ·· získané způsobem podle tohoto vynálezu pro přípravu sulfátované hyaluronové kyseliny způsobem popsaným v patentové přihlášce PCT WO 95/25751 pro aplikaci v očním lékařství, dermatologii, otorinolaryngologii, zubním lékařství, angiologii, gynekologii, urologii, hemodialýze, kardiologii, mimotělním oběhu, pro povlékání biomedicinských výrobků, jako vehikulum pro regulované uvolňování léčiv, při léčbě zánětů a pro urychlení hojení ran při zraněních a spáleninách.
Z tohoto popisu vynálezu je zřejmé, že uvedené způsoby je možno modifikovat tak, aby se z přírodních polymerů z živočišných, biotechnologických a biosyntetických zdrojů získaly frakce hyaluronové kyseliny s molekulovou hmotností až 300.000 Da.
Podobné modifikace však nemají být považovány za odchylky od ducha a účelu vynálezu.
Claims (13)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob přípravy frakce hyaluronové kyseliny nebo její soli se střední molekulovou hmotností v rozsahu 5.000 až 300.000, vyznačující se tím, že zahrnuje působení na výchozí hyaluronovou kyselinu nebo její sůl s molekulovou hmotností od 50.000 do 10,000.000 po dobu kratší než 240 minut současně ultrazvukem i chlornanem sodným v takových koncentracích, aby molární poměr chlornan sodný/opakující se jednotka hyaluronové kyseliny byl mezi 0,01 a 5.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se hyaluronové kyselina extrahuje z kohoutích hřebínků a má molekulovou hmotnost 100.000 až 1,500.000.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že výsledná frakce hyaluronové kyseliny má molekulovou hmotnost 5.000 až 50.000.
- 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že výsledná frakce hyaluronové kyseliny má molekulovou hmotnost 5.000 až 10.000.
- 5. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že výsledná hyaluronová kyselina má střední molekulovou hmotnost 10.000 až 15.000.
- 6. Způsob podle nároku 3, vyznačující se t í m, že výsledná hyaluronová kyselina má střední molekulovou hmotnost 15.000 až 25.000.4 · • · ·
- 7. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že výsledná hyaluronová kyselina má střední molekulovou hmotnost 25.000 až 50.000.
- 8. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že výchozí hyaluronová kyselina pochází z fermentačního způsobu a má střední molekulovou hmotnost v rozmezí 1,000.000 až 5,000.000.
- 9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že výsledná frakce hyaluronové kyseliny má střední molekulovou hmotnost v rozmezí 50.000 až 300.000.
- 10. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že výchozí hyaluronová kyselina pochází ze syntézy in vitro a má střední molekulovou hmotnost v rozmezí 50.000 až 10,000.000.
- 11. Způsob podle jednoho z nároků 1-10 provedený s použitím vodného roztoku NaCl obsahujícího výchozí hyaluronovou kyselinu nebo její sůl při koncentracích 10 mg/ml a teplotách 4 °C.
- 12. Způsob podle nároku 11, v němž se NaOCl přidá k řečenému roztoku ve formě vodného roztoku s koncentrací v rozmezí 1 až 20 % hmotnostních.
- 13. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 1-12, v němž se NaOCl přidává v takové koncentraci, že molární poměr NaOCl/ opakující se jednotka hyaluronové kyseliny je mezi 0,5 a
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT95PD000244A IT1282219B1 (it) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ188998A3 true CZ188998A3 (cs) | 1998-09-16 |
| CZ291394B6 CZ291394B6 (cs) | 2003-02-12 |
Family
ID=11391198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19981889A CZ291394B6 (cs) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Způsob přípravy frakce hyaluronové kyseliny s nízkým polydisperzním indexem |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6020484A (cs) |
| EP (1) | EP0868437B1 (cs) |
| JP (1) | JP4094059B2 (cs) |
| AT (1) | ATE184024T1 (cs) |
| AU (1) | AU703332B2 (cs) |
| CZ (1) | CZ291394B6 (cs) |
| DE (1) | DE69604087T2 (cs) |
| DK (1) | DK0868437T3 (cs) |
| ES (1) | ES2139402T3 (cs) |
| GR (1) | GR3031973T3 (cs) |
| HU (1) | HU226949B1 (cs) |
| IL (1) | IL124909A (cs) |
| IT (1) | IT1282219B1 (cs) |
| WO (1) | WO1997022629A1 (cs) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1282219B1 (it) * | 1995-12-20 | 1998-03-16 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
| IT1291452B1 (it) | 1997-04-14 | 1999-01-11 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Rivestimento a base di acido ialuronico e suoi derivati per la protezione di parti elettroniche da agenti esterni |
| US20020172712A1 (en) * | 2001-03-19 | 2002-11-21 | Alan Drizen | Antiemetic, anti-motion sustained release drug delivery system |
| US20060153893A1 (en) * | 2002-04-08 | 2006-07-13 | Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Therapeutic composition for bone infectious disease |
| US20050142208A1 (en) * | 2002-05-09 | 2005-06-30 | Won Min Yoo | Pharmceutical composition for treatment of wounds conntaining blood plasma or serum |
| MXPA04011337A (es) * | 2002-05-17 | 2005-07-01 | Wyeth Corp | Portadores de acido hialuronico solidos y susceptibles de ser inyectados para la liberacion de proteinas osteogenicas. |
| AU2003247816A1 (en) * | 2002-07-02 | 2004-01-23 | Procyte Corporation | Compositions containing peptide copper complexes and soft tissue fillers |
| US20060183709A1 (en) * | 2005-02-15 | 2006-08-17 | Ahmad Alkayali | Preparation of low molecular weight hyaluronic acid as a food supplement |
| JP4576583B2 (ja) * | 2005-03-22 | 2010-11-10 | キユーピー株式会社 | ヒアルロン酸またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物 |
| US7323184B2 (en) * | 2005-08-22 | 2008-01-29 | Healagenics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of wounds and the reduction of scar formation |
| US8367818B2 (en) | 2006-02-24 | 2013-02-05 | Q.P. Corporation | Low molecular weight hyaluronic acid and/or salt thereof, and cosmetic preparation, pharmaceutical composition, and food composition each using same |
| WO2008000260A1 (en) * | 2006-06-28 | 2008-01-03 | Novozymes Biopolymer A/S | Compositions with several hyaluronic acid fractions for cosmetic and medical uses |
| WO2008003321A2 (en) * | 2006-07-07 | 2008-01-10 | Novozymes Biopolymer A/S | Compositions with several hyaluronic acid fractions for cosmetic use |
| JP2009545637A (ja) | 2006-08-04 | 2009-12-24 | ノボザイムス バイオファーマ デーコー アクティーゼルスカブ | 分岐ヒアルロン酸及びその製造方法 |
| US8529951B1 (en) | 2007-02-21 | 2013-09-10 | Anand Ramamurthi | Elastogenic cues and methods for using same |
| WO2009063291A1 (en) * | 2007-11-13 | 2009-05-22 | Bio-Technology General (Israel) Ltd. | Dilute filtration sterilization process for viscoelastic biopolymers |
| US20130209531A1 (en) * | 2010-06-08 | 2013-08-15 | University Of Utah Research Foundation | Applications of partially and fully sulfated hyaluronan |
| CN113512134B (zh) | 2021-07-30 | 2022-05-20 | 梅晔生物医药股份有限公司 | 一种全分子量分布的透明质酸钠及其制备方法和应用 |
| JP7503278B1 (ja) | 2024-02-09 | 2024-06-20 | 株式会社ブルー・スターR&D | 低分子ヒアルロン酸の製造方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5166331A (en) * | 1983-10-10 | 1992-11-24 | Fidia, S.P.A. | Hyaluronics acid fractions, methods for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing same |
| IN163192B (cs) * | 1983-10-11 | 1988-08-20 | Fidia Spa | |
| US4851521A (en) * | 1985-07-08 | 1989-07-25 | Fidia, S.P.A. | Esters of hyaluronic acid |
| GB8713747D0 (en) * | 1987-06-12 | 1987-07-15 | Unilever Plc | Skin treatment composition |
| IT1219587B (it) * | 1988-05-13 | 1990-05-18 | Fidia Farmaceutici | Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati |
| JPH0675512B2 (ja) * | 1989-03-20 | 1994-09-28 | 株式会社紀文食品 | 低重合度ヒアルロン酸アルカリ塩の製造方法 |
| IT1247175B (it) * | 1991-04-19 | 1994-12-12 | Fidia Spa | Procedimento per la purificazione di acido ialuronico e frazione di acido ialuronico puro per uso oftalmico. |
| IT1260148B (it) * | 1992-04-17 | 1996-03-28 | Fidia Spa | Impiego di preparazioni di acido ialuronico per la formazione di tessuto osseo |
| IT1268954B1 (it) * | 1994-03-11 | 1997-03-18 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Processo per la preparazione di acido ialuronico mediante sintesienzimatica e relative composizioni farmaceutiche |
| ITPD940054A1 (it) * | 1994-03-23 | 1995-09-23 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Polisaccaridi solfatati |
| IT1282219B1 (it) * | 1995-12-20 | 1998-03-16 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
-
1995
- 1995-12-20 IT IT95PD000244A patent/IT1282219B1/it active IP Right Grant
-
1996
- 1996-12-19 CZ CZ19981889A patent/CZ291394B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-12-19 EP EP96944007A patent/EP0868437B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 HU HU9903666A patent/HU226949B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-12-19 AT AT96944007T patent/ATE184024T1/de active
- 1996-12-19 WO PCT/EP1996/005701 patent/WO1997022629A1/en active IP Right Grant
- 1996-12-19 JP JP52251197A patent/JP4094059B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-12-19 IL IL12490996A patent/IL124909A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-12-19 DK DK96944007T patent/DK0868437T3/da active
- 1996-12-19 DE DE69604087T patent/DE69604087T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 ES ES96944007T patent/ES2139402T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 US US09/096,646 patent/US6020484A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 AU AU13749/97A patent/AU703332B2/en not_active Ceased
-
1999
- 1999-10-26 US US09/426,536 patent/US6232303B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-29 GR GR990403066T patent/GR3031973T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US6020484A (en) | 2000-02-01 |
| CZ291394B6 (cs) | 2003-02-12 |
| EP0868437B1 (en) | 1999-09-01 |
| ES2139402T3 (es) | 2000-02-01 |
| EP0868437A1 (en) | 1998-10-07 |
| ITPD950244A0 (cs) | 1995-12-20 |
| AU1374997A (en) | 1997-07-14 |
| GR3031973T3 (en) | 2000-03-31 |
| WO1997022629A1 (en) | 1997-06-26 |
| IT1282219B1 (it) | 1998-03-16 |
| IL124909A (en) | 2002-09-12 |
| DE69604087D1 (de) | 1999-10-07 |
| HUP9903666A3 (en) | 2001-03-28 |
| HUP9903666A2 (hu) | 2000-03-28 |
| IL124909A0 (en) | 1999-01-26 |
| US6232303B1 (en) | 2001-05-15 |
| ITPD950244A1 (it) | 1997-06-20 |
| ATE184024T1 (de) | 1999-09-15 |
| AU703332B2 (en) | 1999-03-25 |
| DK0868437T3 (da) | 2000-03-13 |
| JP4094059B2 (ja) | 2008-06-04 |
| JP2000502141A (ja) | 2000-02-22 |
| DE69604087T2 (de) | 2000-02-24 |
| HU226949B1 (en) | 2010-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ188998A3 (cs) | Způsob přípravy frakce hyaluronové kyseliny s nízkým polydisperzním indexem | |
| JP4278716B2 (ja) | Ｎ−硫酸化ヒアルロン酸化合物、その誘導体および製造方法 | |
| EP2772273B1 (en) | Viscoelastic gels as novel fillers | |
| EP1817347B1 (en) | Method of cross-linking hyaluronic acid with divinylsulfone | |
| Huerta-Ángeles et al. | An effective translation: The development of hyaluronan-based medical products from the physicochemical, and preclinical aspects | |
| AU2003227050B2 (en) | Ester derivatives of hyaluronic acid for the preparation of hydrogel materials by photocuring | |
| US8202986B2 (en) | Branched hyaluronic acid and method of manufacture | |
| EP2989128B1 (fr) | Hydrogel a base de polysaccharides natifs et/ou fonctionnalises, phosphates co-reticules | |
| IL205968A (en) | Botry Esters - Mixed Forms of Acidic Polysaccharides, Preparation and Cosmetics for Skin Containing Them | |
| RU2582702C1 (ru) | Способ получения композиции на основе модифицированного гиалуроната натрия, композиция на основе модифицированного гиалуроната натрия и ее применение | |
| Montanari et al. | Halting hyaluronidase activity with hyaluronan-based nanohydrogels: Development of versatile injectable formulations | |
| JP2001163789A (ja) | マトリックスメタロプロテアーゼ阻害用医薬組成物 | |
| JP2024502880A (ja) | ヒアルロン酸、ポリエチレングリコール、及びシリコーン含有成分を含む生体適合性ヒドロゲル | |
| CA2240682C (en) | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index | |
| CN114514267A (zh) | 包含透明质酸和聚乙二醇的生物相容性水凝胶 | |
| IL141230A (en) | Hyaluronic acid derivatives obtained from hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index and pharmaceutical compositions and healthcare products containing them | |
| KR20220070499A (ko) | 글루콘산 아연 및 히알루론산 에스테르 기반 하이드로겔 | |
| JP2024509534A (ja) | ポリマーをベースとする植込み型又は注入型生成物及びそれらの調製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20111219 |