ITPD950244A1 - Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa poli- - Google Patents
Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa poli- Download PDFInfo
- Publication number
- ITPD950244A1 ITPD950244A1 IT95PD000244A ITPD950244A ITPD950244A1 IT PD950244 A1 ITPD950244 A1 IT PD950244A1 IT 95PD000244 A IT95PD000244 A IT 95PD000244A IT PD950244 A ITPD950244 A IT PD950244A IT PD950244 A1 ITPD950244 A1 IT PD950244A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- molecular weight
- preparation
- fractions
- polydispersion
- Prior art date
Links
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 title claims abstract description 47
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 title claims abstract description 47
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 title description 7
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 claims abstract description 12
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 7
- 241000561734 Celosia cristata Species 0.000 claims description 2
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical class Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 9H-carbazole Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 UJOBWOGCFQCDNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-YXBJCWEESA-N (2s,4s,5r,6s)-6-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-2-[(3s,4r,5r,6r)-6-[(3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)C(O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)C(C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-YXBJCWEESA-N 0.000 description 3
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N alpha-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-WAXACMCWSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003413 degradative effect Effects 0.000 description 2
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000007620 mathematical function Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000004819 osteoinduction Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012667 polymer degradation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
La presente invenzione descrive un nuovo metodo chimico - fisico di preparazione di frazioni di acido ialuronico, caratterizzate da un peso molecolare medio compreso tra 5.000 e 50.000 e da una polidispersione inferiore a 1.7 che prevede l'uso combinato della tecnica degli ultrasuoni con l'addizione di modeste quantità di ipoclorito di sodio come reagente depolimerizzante.
Description
Descrizione di una domanda di brevetto per invenzione industriale dal titolo "PROCESSO CHIMICO-FISICO COMBINATO PER LA PREPARAZIONE DI FRAZIONI DI ACIDO IALURONICO A BASSO PESO MOLECOLARE CARATTERIZZATE DA BASSA POLIDISPERSIONE"
OGGETTO DELL’INVENZIONE
La presente invenzione descrive un nuovo metodo chimico-fisico di preparazione di frazioni di: acido ialuronico, caratterizzate da un peso molecolare medio, compreso tra 5.000 e 50.000 e da una polidispersione inferiore a 1.7. che prevede l'uso combinato de.lla tecnica degli ultrasuoni con l'addizione di modeste quantità di ipoclorito di sodio come reagente depolimerizzante.
Le frazioni di acido ialuronico ottenute esaltano molte attività biologiche tipiche del polisaccaride nativo e, in modo particolare, la capacità di interazione cellulare nei meccanismi di riparazione tessutale, nell'angiogenesi e nell’osteoinduzione.
CAMPO DELL'INVENZIONE
L'acido ialuronico é un polisaccaride lineare naturale, biocompatibile e biodegradabile, costituito da un'unità disaccaridica ripetitiva formata da acido glucuronico e glucosammina N-acetilata, legati attraverso legami glicosidid β 1-3 e a 1-4.
L'acido ialuronico è presente nei tessuti connetivi di organismi superiori, nel liquido sinoviale, nel -cordone ombelicale- e- nelle creste di gallo; può inoltre essere sintetizzato, da_certe_forme..di batteri come i Streptococchi (Kendall et al, Joum. Biol. Chem., voi 118, pag.
61,1937).
L'acido ialuronico gioca un ruolo vitale in molti processi biologici come l'idratazione tessutale, l'organizzazione proteoglicanica, la differenziazione cellulare e l'angiogenesi. Molte sono le applicazioni biomediche legate alle proprietà reologiche di soluzioni di acido ialuronico: un settore importante coinvolge la chirurgia dell’occhio (Grav et al., Exp. Eye Res., voi 31, pag 119, 1979). Altre applicazioni biomediche che vedono implicati l'acido ialuronico e i suoi derivati (ad esempio gli esteri di acido ialuronico come descritti da della Valle e Romeo, EP 0216453, 1987), riguardano i processi legati alla riparazione tessutale (ferite, ustioni).
Per quanto riguarda le frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare si stanno esplorando con successo possibili campi di applicazione nei settori dermatologici (Scott EP0295092 Bl, 1987) e farmacologici. Sono infatti evidenziate proprietà biologiche sensibili alla diminuzione del peso molecolare e alla funzione della curva di distribuzione caratterizzata dai vari momenti (Mw, Mn, Mz) e dalla polidispersione. Ad esempio, le frazioni di acido ialuronico di basso peso molecolare agiscono come- potenziali sostanze a n gl eugenetiche, . agendo sulla capacità del polisaccaride di incrementare la vascolarizzazione, o intervenendo nei processi infiammatori come specifici inibitori di fattori come ad esempio il TNF (Noble et al, J.
Clin. Inv., voi 91, pag 2163, 1993). Inoltre, le frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare possono trovare impiego nei fenomeni osteinduttivi e come agenti antivirali.
Molti sono gli esempi di preparazione di frazioni di arido ialuronico ottenute attraverso metodi fisici quali il riscaldamento, gli ultrasuoni, l'irraggiamento UV e gamma, oppure attraverso reazioni enzimatiche utilizzando ialuronidasi (Chabreck et al., Jour.
Appi. Poly. Sci., voi 48, pag. 233, 1991; Rehakova et al., Int. J. Biol.
Macrom., voi 16/3 pag. 121, 1994); o, ancora, mediante reazioni depoi ime rizzati ve chimiche con acido ascorbico (Cleveland et al., Bioch. Biophy. Acta, voi 192, pag 385, 1969) o per trattamento con ipocloriti (Schiller et al., Biol. Chem. Hopp-Seyler, voi 375 pag. 169, 1994). Tuttavia, tutti i metodi citati presentano alcuni problemi in relazione alla tipologia dei prodotti ottenuti. Infatti, nonostante taluni di essi non modifichino la struttura polimerica primaria, intervenendo sui legami glicosidici, essi non sono in grado di generare prodotti degradati a basso peso molecolare, caratterizzati da una bassa polidispersione. Si è visto, infatti, che le tecniche che sfruttano gli ultrasuoni o il calore producono cinetiche di depolimerizzazione che presentano andamenti asintotici. Ulteriori trattamenti, nel tempo o nelle condizioni degradative (energia degli ultrasuoni e temperatura) portano alla completa degradazione del prodotto.
La depolimerizzazione indotta datazione della ialuronidasi, invece, rispetto ai metodi fisici, presenta alcuni vantaggi quali l'efficienza della reazione con conseguente mantenimento della struttura primaria della catena polimerica ed il controllo della cinetica degradativa. Il rispetto di tali parametri non garantisce, tuttavia di ottenere alte rese chimiche e prodotti caratterizzati da basse dispersioni di peso molecolare.
Infine, l’azione in larga scala di agenti chimici, quali ipoclorito di sodio e acido ascorbico, porta ad ottenere contemporaneamente la perdita del peso molecolare e l'alterazione significativa della struttuta chimica della catena polimerica. Solo un utilizzo estremamente attento e controllato di questi reagenti produce derivati di degradazione dal profilo molecolare richiesto, riducendo le possibilità di industrializzazione del processo chimico.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE
La presente invenzione descrive un nuovo processo di preparazione di frammenti di acido ialuronico, di pesi molecolari medi compresi tra 5.000 e 50.000, che combina per la prima volta reazioni di depolimerizzazione di tipo chimico, con tecniche di degradazione fisica (ultrasuoni). Inoltre, tale metodo permette non solo cinetiche di depolimerizzazione controllabili e tracciabili da semplici funzioni matematiche, ma soprattutto di ottenere frazioni di polisaccaride a bassa polidispersità (valori di Pd= Mw/Mn ≤ 1.7), ricavabili altrimenti solo con lunghi e costosi processi di purificazione.
Scopo della presente invenzione é di ottenere, pertanto, una serie di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare utilizzando, una, tecnica di depolimerizzazione, combinata con ultrasuoni e ipoclorito di sodio, e comparando, quindi, i dati ottenuti attraverso la determinazione del peso molecolare medio e della polidispersione, mediante cromatografia di esclusione dimensionale, associata a una serie di rivelatori, quali un indice di rifrazione (RI) e un laserscattering multiangolo (MALLS).
Per poter raggiungere questo obiettivo si sono confrontati metodi alternativi, di cui il 3) è risultato quello ottimale:
1) metodo ’A': depolimerizzazione attraverso l'azione, ottenuta in due fasi temporali distinte e consequenziali, di ultrasuoni ad una particolare energia e addizione di una soluzione di ipoclorito di sodio.
2) metodo 'Β': depolimerizzazione ottenuta mediante l'aggiunta di una soluzione di ipoclorito di sodio seguita dal trattamento della soluzione risultante con ultrasuoni.
3) metodo ’C: depolimerizzazione ottenuta mediante razione combinata e simultanea di una soluzione di ipoclorito di sodio e di ultrasuoni.
Per rendere le tre metodiche comparabili, si é cercato di rendere le variabili di reazione (concentrazione di . acido., ialuronico, concentrazione di ipoclorito, energia degli, ultrasuoni impiegati, etc.) le più stabili possibili. A tale proposito, partendo da soluzioni di acido ialuronicoV di PM compreso tra 100.000 e 1.500.000, e a concentrazione di 20 mg/mL, si é studiata la cinetica di degradazione del polimero per trattamento con soluzioni (al 5%) di ipoclorito in concentrazione differente, a 50°C per tempi compresi tra 1 e 48 ore Le figure 1 e 2 rappresentano rispettivamente le cinetiche ottenute lasciando reagire per 8 ore acido ialuronico con soluzioni di ipoclorito di sodio in rapporto molare, rispetto all’unità monomerica del polisaccaride, compreso tra 1.0 e 10 (ved. tabella 1) e, selezionando il valore di rapporto molare (moli-ONaCl/moli-acido ialuronico) a 5.0, é stata costruita una curva rappresentante la cinetica di degradazione in funzione del tempo (tabella 2).
Dai dati ottenuti si nota immediatamente la difficoltà di ottenere frazioni di acido ialuronico caratterizzati da pesi molecolari inferiori a 20000 e da una polidispersione non superiore al valore numerico (Mw/Mn) di 1.7. Utilizzando quantità di agente depolimerizzante e/o incrementando il tempo di reazione, non si ottengono frazioni di acido ialuronico aventi le caratteristiche di profilo molecolare ricercate (complèta' degradazione del polimero).
Per completare lo studio del metodo A, si sono usate le frazioni codificate D2 e D3-b, separate dalla miscela di reazione attraverso precipitazione con una miscela organica costituita da metanolo e acetone. Queste, dopo solubilizzazione in una soluzione 0.15 M di NaCl, sono trattate con ultrasuoni di energia compresa tra 150 e 200 W e frequenza di 20 KHz per un tempo compreso tra 15 min. e 8 hrs. La tabella 3 riporta i valori di PM e polidispersione ricavati dall'analisi cromatografica GPC.
Dai dati e dai relativi grafici (figure 3 e 4), si evidenzia l'impossibilità di produrre frazioni di PM desiderato secondo il metodo 'Α'. Aumentando i tempi di trattamento con ultrasuoni, o modificando le condizioni di depolimerizzazione chimica, non si è in grado di ottenere un prodotto finito caratterizzato da una polidispersione ≤ 1.7 e da pesi "molecolari compresi la 5.000 e 20.000.
Il metodo ’B', che prevede anch'esso il doppio trattamento in due fasi distinte di azione di ultrasuoni e reazione con ipoclorito, partendo da acido ialuronico nativo definito nel metodo Ά', non produce frazioni interessanti in termini di PM medio e di polidispersione: più esattamente si è notato che, nonostante l'azione degli ultrasuoni produca acido ialuronico di peso molecolare di ca.
35.000 e polidispersione 1.5 (4 hrs di trattamento a 4°C), la conseguente reazione chimica con ipoclorito di sodio ha un effetto devastante sulle caratteristiche strutturali del prodotto, anche agendo in condizioni estremamente blande.
Il metodo 'C, di cui questa invenzione descrive i risultati innovativi ottenuti, combina in maniera controllata l'azione degli ultrasuoni e del'ipoclorito di sodio. Per 'azione combinata' intendiamo l'uso contemporaneo di questi due fattori in un intervallo di tempo costituito da 0 a 480 minuti. La reazione di degradazione chimico-fisica avviene in soluzione di NaCl 0.15 M alla temperatura di 4°C, utilizzando ultrasuoni di .150 W_ e frequenza di 20 KHz, prodotti da una sonda ad immersione ricoperta di titanio. Inoltre, viene aggiunta una soluzione al 5% di ONaCl in concentrazione molare rispetto all'acido ialuronico nativo (PM ca.
1.000.000) compresa tra 0.5 e 2.5 (moli di ONaCl/moli di acido ialuronico).
Ai tempi stabiliti dalla cinetica dLreazione, si preleva un'aliquota di soluzione e si precipita in 5 volumi di una miscela metanoio/acetone; quindi, dopo aver seccato il- prodotto, si analizza mediante tecnica cromatografica GPC, utilizzando in serie i due rivelatori precedentemente descritti: si usano come mezzi di separazione due colonne in sere TSK (G2000 e G3000)
I dati provenienti dall'analisi sono riportati in tabella 4 (pesi molecolari) e in tabella 5 (polidispersioni). Per una migliore comprensione dei risultati sono stati inseriti i valori di PM ottenuti nella prima fase del metodo A (trattamento con soli ultrasuoni).
Dalla comparazione dei dati provenienti dalle due serie di analisi, si evidenzia la possibilità di ottenere almeno tre frazioni aventi i requisiti di profilo molecolare richiesto. Chiameremo questi tre distiniti prodotti con i codici D4 (tempo: 240 min; ONaCl 0.5), D5 (tempo: 120 min; ONaC 1.0), e D6 (tempo: 120 min, ONaCl 2.5), rispettivamente di peso molecolare 13.400, 11.500 e 7.800, e con valori di polidispersione compresi tra 1.55 e 1.7.
I valori di PM inferiore a 5.000 identificano frazioni la cui reale misura dei parametri molecolari risulta difficile poiché al di sotto dei limiti strumentali.
E' interessante notare che il metodo di degradazione combinata simultanea ’C’ produce frazioni di acido ialuronico che rimangono sempre entro limiti accettabili in termini di dispersione dei pesi molecolari. Questi risultati confermano la specificità della reazione di depolimerizzazione e anche, osservando le curve di Fig. 5 Fig. 6, un buon controllo della cinetica, confermata da tre prove ottenute mantenendo, come parametri di reazione, l'energia degli ultrasuoni, un tempo di 120 min e una concentrazione molare di ONaCl di 1 mole/mole di acido ialuronico (tabella 6).
ESEMPI DI PREPARAZIONE
Esempio 1:
Preparazione di acido ialuronico a peso molecolare compreso tra 5.000 e 10.000
2.40 gr di acido ialuronico sale sodico a PM 990000, é solubilizzato in 240 mL di soluzione 0.15 M di NaCl. Si aggiungono 7.9 mL di una soluzione al 14% di ONaCl. Mantenendo la temperatura a 4°C, si tratta la soluzione risultante per 120 min con ultrasuoni g
150 W e alla frequenza di 20 KHz.
Al termine della reazione, evidenziata da un calo della viscosità, il pH é portato a 6.5 con HC1 0.1N, e infine precipitato in 1000 mL di una miscela metanolo-acetone- 2:1. Il prodotto, separato per filtrazione, é seccato in alto vuoto a 45°C per 48 hrs.
Si ottengono 1.65 gr in forma sodica (codice HA-D9_Na) . L'analisi HPLC-GPC rivela che la frazione di acido ialuronico ottenuta ha un peso molecolare medio (Mw) di 5.850, un numero medio (Mn) di 3.640 e una polidispersione di 1.61.
L’analisi spettroscopica FT-IR, comparata con acido ialuronico nativo, non rileva anomalie nello spettro. Infine, analisi della percentuale di arido ialuronico presente; ottenuta con- il metodo del carbazolo per la determinazione dell'acido D-glucuronico, dimostra che la purezza é del 95%.
Esempio 2:
Preparazione di acido ialuronico a peso molecolare compreso tra 10.000 e 15.000
2.5 gr di acido ialuronico sale sodico a PM 740000, é solubilizzato in 250 mL di soluzione 0.15 M di NaCl. Si aggiungono 3.3 mL di una soluzione al 14% di ONaCl. Mantenendo la temperatura a 4°C, si tratta la soluzione risultante per 120 min con ultrasuoni di energia 150 W e alla frequenza di 20 KHz.
Al termine della reazione, evidenziata da un calo della viscosità, il pH é portato a 6.5 con HC1 0.1N, e infine precipitato in 1000 mL di una miscela metanolo-acetone 2:1. Il prodotto, separato per filtrazione, é seccato in alto vuoto a 45°C per 48 hrs.
Si ottengono 1.50 gr in forma sodica (codice HA-D9_Na) . L'analisi HPLC-GPC rivela che la frazione di acido ialuronico ottenuta ha un peso molecolare medio (Mw) di 11650, un numero medio (Mn) di 7.330 e una polidispersione di 1.59.
L'analisi spettroscopica FT-IR, comparata con acido ialuronico nativo, non rileva anomalie nello spettro. Infine, i'analisi della percentuale di acido ialuronico presente, ottenuta con il metodo del carbazolo per la determinazione dell'acido D-glucuronico, dimostra che la purezza é del 98%.
Esempio 3:
Preparazione di acido ialuronico a peso molecolare compreso tra 15.000 e 25.000
1.00 gr di acido ialuronico sale sodico a PM ca. 1.000.000, è solubilizzato in 100 mL di soluzione 0.15 M di NaCl. Si aggiungono 0.6 mL di una soluzione al 14% di ONaCl. Mantenendo la temperatura a 4°C, si tratta la soluzione risultante per 120 min con ultrasuoni di energia 150 W e alla frequenza di 20 KHz.
Al termine della reazione, evidenziata da un calo della viscosità, il pH é portato a 6.5 con HC1 0.1N, e infine precipitato in 500 mL di una miscela metanolo-acetone 2:1. Il prodotto, separato filtrazione, é seccato in alto vuoto a 45°C per 48 hrs.
Si ottengono 0.65 gr in forma sodica (codice HA-D8_Na). L'analisi HPLC-GPC rivela che la frazione di acido ialuronico ottenuta ha un peso molecolare medio (Mw) di 22.500, un numero medio (Mn) di 15.550 e una polidispersione di 1.45.
L'analisi spettroscopica FT-IR, comparata con acido ialuronico nativo, non rileva anomalie nello spettro.
Infine, l'analisi della percentuale di acido ialuronico presente, ottenuta con il metodo del carbazolo per la determinazione del’addo D-glucuronico, dimostra che la purezza é del 97%
Essendo l'invenzione cosi descritta, è chiaro che questi metodi possono essere modificati in vari modi. Tali modificazioni non sono da considerarsi come divergenze dello spirito e dalle prospettive dell'invenzione e tutte quelle modificazioni che apparirebbero evidenti ad un esperto nel campo sono comprese nell'ambito delle seguenti rivendicazioni:
Claims (9)
- RIVENDICAZIONI 1) Un processo di depolimerizzazione controllata di frazioni di acido ialuronico che prevede l'uso combinato della tecnica di degradazione fisica degli ultrasuoni con ipoclorito di sodio come reagente chimico depolimerizzante.
- 2) Un processo secondo la rivendicazione 1, in cui gli ultrasuoni impiegati sono ad una energia compresa tra 50 e 200 W ed una frequenza variabile tra 10 e 50 Hz.
- 3) Un processo secondo la rivendicazione 1, in cui l’ipoclorito di sodio è ad una concentrazione compresa tra 1% e 20% e in quantità molari variabili tra 0,1 e 2,5 moli /moli acido ialuronico rispetto al’acido ialuronico di partenza.
- 4) Un processo per la preparazione di frazioni di acido ialuronico di peso molecolare compreso tra 5.000 e 10.000 e polidispersione inferiore a 1.7, secondo le rivendicazioni 1-3.
- 5) Un processo per la preparazione di frazioni di acido ialuronico di peso molecolare compreso tra 10.000 e 25.000 e polidispersione inferiore a 1.7, secondo le rivendicazioni 1-3.
- 6) Un processo per la preparazione di frazioni di arido ialuronico di peso molecolare compreso tra 15.000 e 25.000 e polidispersione inferiore a 1.7, secondo le rivendicazioni 1-3.
- 7) Un processo per la preparazione di frazioni di acido ialuronico di so molecolare compreso tra 15.000 e 25.000 e polidispersione inferiore a 1.7, secondo le rivendicazioni 1-3.
- 8) Un processo per la preparazione di frazioni di acido ialuronico di cui alle rivendicazioni 2-7, partendo da acido ialuronico nativo del peso molecolare compreso tra 100.000 e 1.200.000 ottenuto da estrazione da creste di gallo.
- 9) Un processo per la preparazione di frazioni di acido ialuronico di cui alle rivendicazioni 2-7, partendo da acido ialuronico nativo del peso molecolare compreso tra 1.000.000 e 2.500.000 ottenuto da processi fermentativi .
Priority Applications (18)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT95PD000244A IT1282219B1 (it) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
| JP52251197A JP4094059B2 (ja) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | 低い多分散指数を有するヒアルロン酸分画の調整方法 |
| CA002240682A CA2240682C (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| AU13749/97A AU703332B2 (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| HU9903666A HU226949B1 (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| DE69604087T DE69604087T2 (de) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Verfahren zur herstellung von einer hyaluronsäurefraktion mit niedrigem polydispersionindex |
| SI9630118T SI0868437T1 (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| PCT/EP1996/005701 WO1997022629A1 (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| CZ19981889A CZ291394B6 (cs) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Způsob přípravy frakce hyaluronové kyseliny s nízkým polydisperzním indexem |
| IL14123096A IL141230A (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Hyaluronic acid derivatives obtained from hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index and pharmaceutical compositions and healthcare products containing them |
| IL12490996A IL124909A (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | The process involving ultrasound and sodium hypochlorite in the preparation of a fraction of hyaluronic acid with a low polydispersity index |
| DK96944007T DK0868437T3 (da) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Fremgangsmåde til fremstilling af hyaluronsyrefraktion med et lavt polydispersionsindeks |
| US09/096,646 US6020484A (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| EP96944007A EP0868437B1 (en) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| ES96944007T ES2139402T3 (es) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Un proceso para preparar una fraccion del acido hialuronico con un bajo indice de polidispersion. |
| AT96944007T ATE184024T1 (de) | 1995-12-20 | 1996-12-19 | Verfahren zur herstellung von einer hyaluronsäurefraktion mit niedrigem polydispersionindex |
| US09/426,536 US6232303B1 (en) | 1995-12-20 | 1999-10-26 | Process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
| GR990403066T GR3031973T3 (en) | 1995-12-20 | 1999-11-29 | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT95PD000244A IT1282219B1 (it) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITPD950244A0 ITPD950244A0 (it) | 1995-12-20 |
| ITPD950244A1 true ITPD950244A1 (it) | 1997-06-20 |
| IT1282219B1 IT1282219B1 (it) | 1998-03-16 |
Family
ID=11391198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT95PD000244A IT1282219B1 (it) | 1995-12-20 | 1995-12-20 | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6020484A (it) |
| EP (1) | EP0868437B1 (it) |
| JP (1) | JP4094059B2 (it) |
| AT (1) | ATE184024T1 (it) |
| AU (1) | AU703332B2 (it) |
| CZ (1) | CZ291394B6 (it) |
| DE (1) | DE69604087T2 (it) |
| DK (1) | DK0868437T3 (it) |
| ES (1) | ES2139402T3 (it) |
| GR (1) | GR3031973T3 (it) |
| HU (1) | HU226949B1 (it) |
| IL (1) | IL124909A (it) |
| IT (1) | IT1282219B1 (it) |
| WO (1) | WO1997022629A1 (it) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1282219B1 (it) * | 1995-12-20 | 1998-03-16 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
| IT1291452B1 (it) | 1997-04-14 | 1999-01-11 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Rivestimento a base di acido ialuronico e suoi derivati per la protezione di parti elettroniche da agenti esterni |
| US20020172712A1 (en) * | 2001-03-19 | 2002-11-21 | Alan Drizen | Antiemetic, anti-motion sustained release drug delivery system |
| JPWO2003084571A1 (ja) * | 2002-04-08 | 2005-08-11 | 電気化学工業株式会社 | 骨感染症治療用組成物 |
| JP2005530768A (ja) * | 2002-05-09 | 2005-10-13 | メディジーンズ | 血漿または血清を含有した創傷治療用医薬組成物 |
| BR0310087A (pt) * | 2002-05-17 | 2005-08-16 | Wyeth Corp | Veìculos sólidos injetáveis para ácido hialurÈnico para aplicação de proteìnas osteogênicas |
| WO2004004671A1 (en) * | 2002-07-02 | 2004-01-15 | Procyte Corporation | Compositions containing peptide copper complexes and soft tissue fillers |
| US20060183709A1 (en) * | 2005-02-15 | 2006-08-17 | Ahmad Alkayali | Preparation of low molecular weight hyaluronic acid as a food supplement |
| JP4576583B2 (ja) * | 2005-03-22 | 2010-11-10 | キユーピー株式会社 | ヒアルロン酸またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物 |
| US7323184B2 (en) * | 2005-08-22 | 2008-01-29 | Healagenics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of wounds and the reduction of scar formation |
| EP1992645A4 (en) | 2006-02-24 | 2011-03-09 | Q P Corp | NOVEL HYALURONIC ACID WITH LOW MOLECULAR WEIGHT AND / OR SALT THEREOF, AND COSMETIC PREPARATION, PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND EACH FOOD COMPOSITION USING THE SAME |
| EP2037874A1 (en) * | 2006-06-28 | 2009-03-25 | Novozymes Biopolymer A/S | Compositions with several hyaluronic acid fractions for cosmetic and medical uses |
| WO2008003321A2 (en) * | 2006-07-07 | 2008-01-10 | Novozymes Biopolymer A/S | Compositions with several hyaluronic acid fractions for cosmetic use |
| WO2008014787A1 (en) | 2006-08-04 | 2008-02-07 | Novozymes Biopolymer A/S | Branched hyaluronic acid and method of manufacture |
| US8529951B1 (en) | 2007-02-21 | 2013-09-10 | Anand Ramamurthi | Elastogenic cues and methods for using same |
| EP2209814B1 (en) * | 2007-11-13 | 2017-01-25 | Bio-Technology General (Israel) Ltd. | Dilute filtration sterilization process for viscoelastic biopolymers |
| US20130209531A1 (en) * | 2010-06-08 | 2013-08-15 | University Of Utah Research Foundation | Applications of partially and fully sulfated hyaluronan |
| CN113512134B (zh) * | 2021-07-30 | 2022-05-20 | 梅晔生物医药股份有限公司 | 一种全分子量分布的透明质酸钠及其制备方法和应用 |
| JP7503278B1 (ja) | 2024-02-09 | 2024-06-20 | 株式会社ブルー・スターR&D | 低分子ヒアルロン酸の製造方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5166331A (en) * | 1983-10-10 | 1992-11-24 | Fidia, S.P.A. | Hyaluronics acid fractions, methods for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing same |
| IN163192B (it) * | 1983-10-11 | 1988-08-20 | Fidia Spa | |
| US4851521A (en) * | 1985-07-08 | 1989-07-25 | Fidia, S.P.A. | Esters of hyaluronic acid |
| GB8713747D0 (en) * | 1987-06-12 | 1987-07-15 | Unilever Plc | Skin treatment composition |
| IT1219587B (it) * | 1988-05-13 | 1990-05-18 | Fidia Farmaceutici | Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati |
| JPH0675512B2 (ja) * | 1989-03-20 | 1994-09-28 | 株式会社紀文食品 | 低重合度ヒアルロン酸アルカリ塩の製造方法 |
| IT1247175B (it) * | 1991-04-19 | 1994-12-12 | Fidia Spa | Procedimento per la purificazione di acido ialuronico e frazione di acido ialuronico puro per uso oftalmico. |
| IT1260148B (it) * | 1992-04-17 | 1996-03-28 | Fidia Spa | Impiego di preparazioni di acido ialuronico per la formazione di tessuto osseo |
| IT1268954B1 (it) * | 1994-03-11 | 1997-03-18 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Processo per la preparazione di acido ialuronico mediante sintesienzimatica e relative composizioni farmaceutiche |
| ITPD940054A1 (it) * | 1994-03-23 | 1995-09-23 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Polisaccaridi solfatati |
| IT1282219B1 (it) * | 1995-12-20 | 1998-03-16 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa |
-
1995
- 1995-12-20 IT IT95PD000244A patent/IT1282219B1/it active IP Right Grant
-
1996
- 1996-12-19 CZ CZ19981889A patent/CZ291394B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-12-19 HU HU9903666A patent/HU226949B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-12-19 EP EP96944007A patent/EP0868437B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 DK DK96944007T patent/DK0868437T3/da active
- 1996-12-19 AT AT96944007T patent/ATE184024T1/de active
- 1996-12-19 ES ES96944007T patent/ES2139402T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 DE DE69604087T patent/DE69604087T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 US US09/096,646 patent/US6020484A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-19 JP JP52251197A patent/JP4094059B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-12-19 WO PCT/EP1996/005701 patent/WO1997022629A1/en active IP Right Grant
- 1996-12-19 AU AU13749/97A patent/AU703332B2/en not_active Ceased
- 1996-12-19 IL IL12490996A patent/IL124909A/en not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-10-26 US US09/426,536 patent/US6232303B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-29 GR GR990403066T patent/GR3031973T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1997022629A1 (en) | 1997-06-26 |
| GR3031973T3 (en) | 2000-03-31 |
| DE69604087D1 (de) | 1999-10-07 |
| JP4094059B2 (ja) | 2008-06-04 |
| DK0868437T3 (da) | 2000-03-13 |
| US6232303B1 (en) | 2001-05-15 |
| ES2139402T3 (es) | 2000-02-01 |
| EP0868437A1 (en) | 1998-10-07 |
| ATE184024T1 (de) | 1999-09-15 |
| IT1282219B1 (it) | 1998-03-16 |
| AU1374997A (en) | 1997-07-14 |
| EP0868437B1 (en) | 1999-09-01 |
| HU226949B1 (en) | 2010-03-29 |
| IL124909A (en) | 2002-09-12 |
| AU703332B2 (en) | 1999-03-25 |
| DE69604087T2 (de) | 2000-02-24 |
| CZ291394B6 (cs) | 2003-02-12 |
| HUP9903666A3 (en) | 2001-03-28 |
| US6020484A (en) | 2000-02-01 |
| JP2000502141A (ja) | 2000-02-22 |
| CZ188998A3 (cs) | 1998-09-16 |
| HUP9903666A2 (hu) | 2000-03-28 |
| IL124909A0 (en) | 1999-01-26 |
| ITPD950244A0 (it) | 1995-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ITPD950244A1 (it) | Processo chimico fisico combinato per la preparazione di frazioni di acido ialuronico a basso peso molecolare caratterizzate da bassa poli- | |
| Palumbo et al. | New graft copolymers of hyaluronic acid and polylactic acid: Synthesis and characterization | |
| Ciancia et al. | Overview of anticoagulant activity of sulfated polysaccharides from seaweeds in relation to their structures, focusing on those of green seaweeds | |
| Andriamanantoanina et al. | Characterization of the alginates from five madagascan brown algae | |
| CA2810742C (en) | Hybrid cooperative complexes of hyaluronic acid | |
| Zhang et al. | Regioselective syntheses of sulfated porphyrans from Porphyra haitanensis and their antioxidant and anticoagulant activities in vitro | |
| Wu et al. | Physicochemical characterization of Sargassum fusiforme fucoidan fractions and their antagonistic effect against P-selectin-mediated cell adhesion | |
| Zhang et al. | Synthesis and characterisation of cellulose sulfates regarding the degrees of substitution, degrees of polymerisation and morphology | |
| Picotti et al. | Hyaluronic acid lipoate: synthesis and physicochemical properties | |
| Barbucci et al. | Immobilisation of sulphated hyaluronan for improved biocompatibility | |
| Jin et al. | The neuroprotective activities of heteropolysaccharides extracted from Saccharina japonica | |
| Arlov et al. | The impact of chain length and flexibility in the interaction between sulfated alginates and HGF and FGF-2 | |
| Simulescu et al. | Kinetics of long-term degradation of different molar mass hyaluronan solutions studied by SEC-MALLS | |
| Achour et al. | Anti-heparanase activity of ultra-low-molecular-weight heparin produced by physicochemical depolymerization | |
| EP3736296A1 (en) | Method of crosslinking glycosaminoglycans | |
| Bobula et al. | Solid-state photocrosslinking of hyaluronan microfibres | |
| Gao et al. | Efficient synthesis of glycosaminoglycan analogs | |
| Colodi et al. | Semi-synthesis of hybrid ulvan-kappa-carrabiose polysaccharides and evaluation of their cytotoxic and anticoagulant effects | |
| NZ530848A (en) | Polysaccharidic esters of retinoic acid | |
| Münster et al. | Dicarboxylated hyaluronate: Synthesis of a new, highly functionalized and biocompatible derivative | |
| EP3494145A1 (en) | Method of crosslinking glycosaminoglycans | |
| Gu et al. | Degradation of hyaluronan by an electrochemical process | |
| Varghese et al. | Synthesis and Characterization of Regioselectively Functionalized Mono-Sulfated and-Phosphorylated Anionic Poly-Amido-Saccharides | |
| CA2240682C (en) | A process for preparing a hyaluronic acid fraction having a low polydispersion index | |
| CN106573013B (zh) | 用于治疗关节炎的包含石莼多糖的粘性补充剂组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 0001 | Granted | ||
| TA | Fee payment date (situation as of event date), data collected since 19931001 |
Effective date: 19981001 |