JP2005530768A

JP2005530768A - 血漿または血清を含有した創傷治療用医薬組成物

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Publication number: JP2005530768A
Application number: JP2004503020A
Authority: JP
Inventors: リー・ソンユ; チャン・キュンヒ; クム・キチャン; ユ・ネチュン; ユ・ウォンミン; リー・ジーン
Original assignee: メディジーンズ
Priority date: 2002-05-09
Filing date: 2003-05-09
Publication date: 2005-10-13
Also published as: AU2003230321B2; US8017157B2; EP1507543A4; KR20040068172A; RU2308954C2; CN1668317A; US20070148142A1; EP1507543A1; RU2004135913A; US20050142208A1; WO2003094937A1; KR100518152B1; CN1668317B; AU2003230321B8; BR0309890A; AU2003230321A1

Abstract

本発明は血漿又は血清を含む創傷治療用医薬組成物及びその組成物を創傷部位に投与し、その部位の組織環境を正常化して創傷を効果的に治療する方法に関する。

Description

本発明は、血漿または血清の創傷治療剤としての用途に関する。より詳しくは、本発明は、血漿または血清を含有する創傷治療用医薬組成物及びその組成物を創傷の部位に投与し、その部位の組織環境を正常化して創傷を効果的に治療する方法に関する。

初期の創傷治療に関する研究は細胞段階、すなわち、炎症細胞及び血小板の役割を究明することに中点をおいた［参考：ＡｌｌｇｏｗｅｒＭ．ａｎｄＨｕｌｌｉｇｅｒＬ．，Ｓｕｒｇｅｒｙ，４７，６０３（１９６０）；ＤｉｃｏｒｅｔｏＰ．Ｅ．ａｎｄＢｒｏｗｅｎ−ＰｏｐｅＤ．Ｆ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８０，１９１９（１９８３）；ＨｏｕｃｋＪ．Ｃ．ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１７，２０８１（１９６８）］。
最近、組織の成長を促進する成長因子が慢性潰瘍のような創傷を治療するのに使用されている。成長因子は繊維芽細胞のような細胞の増殖である類似分裂生殖（ｍｉｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）を刺激する。また、成長因子はコラーゲン及び細胞外メトリックスタンパク質の合成を刺激する［参考：Ｌ．Ｇｒｅｅｎｈａｌｇｈ，Ｊ．Ｔｒａｕｍａ４１：１５９（１９９６）］。

創傷治療と関連のある成長因子として、サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）が明らかになっており、代表的な例では、ケラチノサイト（角化細胞）及び繊維芽細胞で生成され、上皮細胞の成長を促進する繊維成長因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）、血小板の内皮組織で生成され、表皮成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）と共に上皮細胞の異常増殖を促進する血小板−由来の成長因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）、繊維芽細胞及び血小板で生成され、結合組織の生成を促進する形質転換成長因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ−β，ＴＧＦ−β）、唾液刺激腺で生成され、上皮細胞の増殖を促進する上皮細胞成長因子、繊維細胞成長因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＦＧＦ）及びマクロファージと上皮細胞で生成され、上皮細胞の成長と運動性を促進するインターロイキン−１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１）等が含まれる。
Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎによりＲｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）の商品名で局所投与用創傷治療剤として市販されているベカプレルミン（ｂｅｃａｐｌｅｒｍｉｎ）は遺伝工学的に生成されたＰＤＧＦである。

Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ等のヨーロッパ特許公報第０５７５４８４Ｂ１号公報には、ＰＤＧＦとデキサメタソン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）を含んで哺乳動物の組織再生及び治療のための医薬組成物が開示されている。
Ｍａｒｔｉｎの米国特許第５，９８１，６０６号には、ＴＧＦ−βを含んで創傷治療のための医薬組成物が開示されている。
Ｈｅｍｍａｔｉ−Ｂｒｉｖａｎｌｏｕ等の国際特許公開ＷＯ９６／３００３８号には、ＴＧＦ−β、ピブリン酸及び抗酸化剤を共に含む創傷治療用医薬組成物が開示されている。
Ｌｅｅ等の米国特許第５，１８３，８０５号には、ＥＧＦを含んで組織を再生する効果がある医薬組成物が開示されている。

日本特許第０５０７０３６５号及びＲｏｇｅｒｓ等の米国特許第６，１６５，９７８号には、ＦＧＦを含む創傷治療剤が開示されている。
活性成分としてヒアルロン酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ）を用いた製剤が皮膚創傷の治療に有用であることもあると報告したことがある（参考：Ｄｒｉｚｅｎ等の米国特許第５，８９７，８８０号）。ナトリウムヒアルロネートを含んだ製剤はＬＡＭＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓによりＩＰＮＷｏｕｎｄＧｅｌ^ＴＭの商品名で市販されている。
また、局所投与されたフィブロネクチン（血漿で発見される糖タンパク質）が角膜創傷［Ｎｉｓｈｉｄａ，ＬａｒｃｈＯｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ１０１：１０４６（１９８３）］の治療速度を増加させるのに有用なものと報告されたことがある。
たとえ、上記のような療法は一部の患者に対して部分的な創傷の緩和を提供するが、治療期間が長く治療に関する反応が最適に及ぼしていない。創傷、特に慢性皮膚潰瘍は深刻な臨床的問題として継続されており、これに効果的な療法を開発するために多くの努力がなされているが、創傷縫合が悪く示される主原因は複雑で、依然としてよく理解されていない。
したがって、創傷を治療するのにより効果的でかつ、新しい方法が要求されている。
本発明により開発された製剤を単独に使用するかまたはいろいろな公知の治療剤と併用することにより従来技術の限界を克服することができる。

本発明者らは驚くにも血漿または血清が創傷を治療するにあたって高度に効果的であることを発見した。本発明により血漿または血清を活性成分として含有した製剤は部分的な欠損創傷に適用した結果、損傷された皮膚を数日内に回復させる一方、大きな創傷も数周日（約２〜６週間）内に完治または回復させることが明らかになった。このような発見はこれまで報告または利用されている創傷の治療に比べて治療効果及び治療期間において顕著に向上されたことと認められる。

一つの観点で、本発明は医薬的に許容される担体と共に、医薬的に有効な量の血漿または血清を含有することを特徴とする、創傷治療用医薬組成物を提供する。
他の観点で、本発明は医薬的に許容される担体と共に、医薬的に有効な量の血漿または血清を含有する医薬組成物を、これを必要とする患者の創傷に投与することを特徴として、創傷を治療する方法を提供する。

本発明は、一般的に創傷治療に有用な血漿または血清の用途に関する。本発明により医薬組成物で活性成分として使用される血漿または血清は、創傷を治療するにあたって高度に効果的である。
創傷（ｗｏｕｎｄ）は、生体の損傷された状態で、生体内部または外部の表面をなす組織、例えば、皮膚、筋肉、神経組織、骨、軟組織、内部器官または血管組織が分断あるいは破壊された病理学的な状態を包括する。創傷の例としては、これらに限定するのではないが、挫傷（ｃｏｎｔｕｓｅｄｗｏｕｎｄ）、非−治癒外傷性創傷、放射線照射による組織の破壊、擦過傷（ａｂｒａｓｉｏｎ）、骨壊疽、裂傷（ｌａｃｅｒａｔｉｏｎ）、結出傷（ａｖｕｌｓｉｏｎ）、貫通傷（ｐｅｎｅｔｒａｔｅｄｗｏｕｎｄ）、銃傷（ｇｕｎｓｈｏｔｗｏｕｎｄ）、折傷、火傷、凍傷、皮膚潰瘍、皮膚乾燥、皮膚角化症、裂け、割れ、皮膚炎、皮膚絲状菌症による痛症、手術傷、血管疾患創傷、角膜創傷などの創傷、褥瘡（ｄｅｃｕｂｉｔｕｓ）、臥瘡、糖尿性皮膚びらん（ｅｒｏｓｉｏｎ）のような糖尿病及び循環不良に関する状態、慢性潰瘍、成形手術後の縫合部位、脊髄傷害性創傷、婦人科的創傷、化学的創傷及びニキビを含んで、個体のどの部分に対する損傷が含まれる。このような観点で、本発明による血漿または血清含有製剤はそのような損傷された組織を復元（ｒｅｐａｉｒ）、復位（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、好転、加速化、促進または完治させるのに非常に有用である。

本発明で活性成分として使用する血漿（ｂｌｏｏｄｐｌａｓｍａ）は、典型的に哺乳動物の血液内の類型成分、すなわち細胞及び細胞単片が分離された淡黄色の液体成分を指し、その成分はよく知られている（ＰｈｉｌｉｐＷｅｓｔｅｒｍａｎ，ＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｉｎｓ，ＶＩＩ−１ｔｏＶＩＩ−１３，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ１７，２００２；及びＷｅｎｄｙＹ．Ｃｒａｉｇ，ｅｔａｌ．，ＰｌａｓｍａＰｒｏｔｅｉｎｓＰｏｃｋｅｔＧｕｉｄｅ，ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒＢｌｏｏｄＲｅｓｅａｒｃｈ−これらの文献の全体内容は本願に参考として援用される。）。血漿（ｓｅｒｕｍ）もよく定義されており、一般的にはフィブリノゲン（ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ）とその他の凝固因子が除去された血漿であるという。

本発明において血漿または血清の供給源はヒトを含んだ哺乳動物の全種を含み、例えば、羊、山羊、豚、馬、イヌ、牛等を含んだ家畜、その他の霊長類（Ｐｒｉｍａｔｅｓ）、齧齒類（ｒｏｄｅｎｔ）等が含まれる。
本発明において血漿または血清はよく知られている通常の方法、例えば遠心分離、沈降または濾過方法により血液から容易に分離することができる。遠心分離は、血漿から血液細胞を沈降させるのに適切な条件下で実施することができる。例えば、約３，０００ｒｐｍで約１０分間遠心分離するが、これは赤血球及び白血球だけでなく実質的にすべての細胞単片（血小板）を沈殿させるのに充分である。

血漿を含んだ上澄液は標準技術により沈降された細胞から容易に分離できる。濾過法は、血液を血漿から血液細胞を分離するに適切なフィルターに通過させることにより行うことができる。フィルターはタンパク質の良好な透過を提供する微細孔膜であることもある。
血漿または血清は、採血後に遠心分離または沈殿させて得た新鮮な液状血漿あるいは液状製剤の他に、使用前にいろいろな状態で保存されていることと知られており、例えば新鮮な凍結製剤、凍結沈殿製剤、凍結乾燥製剤または濃縮製剤を挙げることができる。このようなすべての状態の血漿または血清は本発明に使用することができる。新鮮な凍結血漿は、血液から採血後に６時間内に約２，８００ｒｐｍで約１５分間遠心分離して血液細胞と血漿成分とを分離し、約−１８℃〜−４０℃の温度で凍結させて製造したもので、使用時には約３０℃〜３７℃の温水で解凍させて使用する。

凍結沈殿血漿は、新鮮な凍結血漿１単位を約４℃で溶かし、この時生じる白色の沈殿物（ｃｏｌｄｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ）（ＶＩＩＩ：Ｃ，フィブリノゲン、ＸＩＩＩ，フィブロネクチンなどのような多量の因子を含む）を分離して約−１８℃乃至−４０℃の温度で再凍結させたものである。凍結沈殿製剤は１〜６℃の冷蔵庫で一日間放置して解凍させ、もしくは約４℃の水浴（ｗａｔｅｒｂａｔｈ）でより速く解凍させて使用することができる。濃縮血漿は血液から血漿を分離し、分離された血漿をデキストラノマ、セファーデクス（ＳＥＰＨＡＤＥＸ）、デキストラミン、ポリアクリルアミド、バイオ−ゲル（ＢＩＯ−ＧＥＬ）Ｐ、シリカーゲル、ゼオライト、デブリサン（ＤＥＢＲＩＳＡＮ）、架橋されたアガロース、澱粉またはアルギネートゲルのような濃縮剤と混合して濃縮させた後、濃縮物から濃縮剤を分離して得る。

本発明の一つの様態で、血漿または血清は血液銀行で商業的に市販している粉末状製剤であるものを使用することができる。このような製品はヒトの起源の血漿単位から由来されたもので、いろいろな抗原抗体、例えばＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及びＣ型肝炎（ＨＣＶ）抗体に対して非反応性であり、ＨＩＶ−１及びＨＩＶ−２に対する抗体について陰性であるものと試験結果により確認された。このような製剤を製造するのに使用されるすべての血漿単位は事前に病源性がないことが検証されている。病源菌の潜伏的な伝播危険性を減らすために、製剤はＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウィルス及びＨＣＶのような外皮ウィルスを不活性化させるために考案されたトリ（ｎ−ブチル）／ホスフェート／ポリソルベート８０のような有機溶媒／洗浄剤混合物で処理することができる。また、ウィルスの除去はナノ濾過段階を付加的に行うことにより強化することができる。

追加の様態で、製剤は独立的な（従って、剰余の）精製技術（すなわち、溶媒洗浄剤とナノ濾過）及び低温殺菌を用いて製造する。精製は血液または血漿状態で実施することができる。
生成された血漿または血清分画は加熱、凍結乾燥またはその他の適切な乾燥技術により粉末化することができる。例えば、血漿を数日間（約７日間）−４０℃未満の温度で凍結乾燥させる。当業者に知られている通常の技術及び変数を使用することができる。
本発明の追加の他の様態で、粉末化された血漿または血清は粉末またはシートの形態であることもある。シートの形態は血漿または血清分画を適切な鋳型で鋳造し、脱水させて形成する。その他の追加の様態で、血漿または血清分画に増粘剤や担体を含有させてシートに機械的強度及び／又は物理的一体性を提供することができる。

本発明の望ましい様態で、血漿または血清は酸性に調節して使用する。酸性化された血漿または血清は弱アルカリ性血漿または血清に比べて優れた創傷治療効能を示すことと本発明により明らかになった。望ましい血漿または血清のｐＨ範囲は約３．５〜６．５である。血漿または血清の酸性化は医薬的に許容される無機酸または有機酸を使用して達成することができる。医薬的に許容される無機酸の例としては、これに限定されるのではないが、塩酸、硼酸、硝酸、硫酸及び燐酸が含まれる。医薬的に許容される有機酸の例ではギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、修酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸等が含まれる。

本発明による血漿または血清は液状または粉末状で、創傷に直接適用することができる。すなわち、創傷部位に散布することができる。シートの形態である場合は、創傷部位に塗布するが、このときに塗布した部位に適切にドレッシングして創傷を保護しながら、活性成分の治療効果が減少することを防止する。ドレッシングは市販されており、もしくは通常に知られているいかなるものであっても使用可能である。市販されているドレッシングの例としてはＣｏｍｐｅｅｌ、Ｄｕｏｄｅｒｍ、Ｔａｇａｄｅｒｍ及びＯｐｓｉｔｅを挙げることができる。
本発明による活性成分として医薬的に有効な量の血漿または血清を含む組成物は医薬的に許容される担体と共に、いろいろな多様な形態で製形することができる。製形化は当分野で公知の方法により行うことができる。

製剤の形態は、これに限定されてはいないが、液状塗布剤、噴霧剤、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、パスタ剤、リニメント剤、軟膏剤、エアロゾル、粉末剤及び経皮吸収剤などの通常の外用剤の形態が含まれる。これらの製形はすべての製薬化学で一般的に公知の処方書である文献［参考：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１５^ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，１９７５，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ１８０４２（Ｃｈａｐｔｅｒ８７：Ｂｌａｕｇ，Ｓｅｙｍｏｕｒ）］に記述されている。

本発明の外用剤において、医薬的に許容される担体としてはその製形により異なるが、バセリン、流動パラフィン、ゲル化炭化水素（別名：プラスティベース）等の炭化水素類；重鎖脂肪酸トリグリセライド、豚脂、ハードパット（ｈａｒｄｆａｔ）、カカオオイルなどの動植物性オイル；セタノール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、パルミチン酸イソプロピルなどの高級脂肪酸アルコール及び脂肪酸及びそのエステル類；マクロゴール（ポリエチレングリコール）、１，３−ブチレングリコール、グリセロール、ゼラチン、白糖、糖アルコール等の水溶性基剤；グリセリン脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の軟化剤；アクリルエステル、アルギン酸ナトリウム等の粘着剤；液化石油ガス、二酸化炭素等の噴射剤；パラオキシ安息香酸エステル類などの防腐剤を挙げることができ、本発明の外用剤はこれらを使用して通常の方法により製造することができる。また、これら以外にも安定剤、香料、着色剤、ｐＨ調整剤、希釈剤、界面活性剤、保存剤、抗酸化剤等を必要に応じて配合することもある。本発明の外用剤は通常の方法により局所創傷部に塗布することができる。

また、本発明による外用剤は通常の絆創膏の創傷剥離カバーのような固体支持体上に粘着されて使用されることがある。粘着は血漿または血清の分画に固体支持体を飽和させた後、脱水させて達成する。本発明の様態で、固体支持体をまず粘着層で被覆して固体支持体に対して血漿または血清の付着を向上させる。粘着剤の例としてはポリアクリレート及びシアノアクリレートが含まれる。
このような形態の製形は市販されているものが多く、例えば穿孔されたプラスチックフィルム形態の非付着性傷剥離カバーを有している絆創膏（Ｓｍｉｔｈ＆ＮｅｐｈｅｗＬｔｄ．）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎの薄いストリップ（ｓｔｒｉｐ）、パッチ（ｐａｔｃｈ）、スポート（ｓｐｏｔ）、可塑性ストリップ形態のバンド・エイド（ＢＡＮＤ−ＡＩＤ）；Ｃｕｒｉｔｙ、Ｃｕｒａｄ絆瘡膏（Ｃｏｌｇａｔｅ−Ｐａｌｍｏｌｉｖｅ製）、及びＳｔｉｋ−Ｔｉｔｅ弾性ストリップ（ＡｍｅｒｉｃａｎＷｈｉｔｅｃｒｏｓｓＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．製）を挙げることができる。

一つの様態で、本発明による医薬組成物は血漿粉末と生理食塩水を一定の体積比で混合し、ｐＨを３．５〜６．５に調整して液状塗布剤の形態で製形化することができる。他の様態で、本発明による医薬組成物は上記した本発明の血漿粉末と水溶性軟膏基剤を混合し、ここに生理食塩水を添加して軟膏剤の形態で製形化することができる。望ましい様態で、本発明による医薬組成物は上記軟膏剤のｐＨを３．５〜６．５に調整して製形化する。
本発明において創傷の治癒を加速化するために、ゲルまたは微小球のような製薬用担体が使用され得る。米国特許第５，２６４，２０７号、ＷＯ２０００／２４３７８、ＷＯ９６／１３１６４及びＷＯ９４／１３３３３には、一つまたはそれ以上の活性製薬用または化粧用物質のための担体として作用するポリマーの微小球が記述されている。

本発明の医薬組成物は、哺乳動物の多様な創傷症状を治療するのに使用することができる。これは感染状態、悪性、巨大血管動脈不足、小血管動脈不足、心整脈遮断または不足、表層整脈不足、リンパ管傷害、内因性循環不足、血液異常、コラーゲン血管異常、放射線皮膚炎、栄養性原因等を含んだ大部分の悪性潰瘍について効果的である。
本発明の医薬組成物で治療することができる特定症状は放射線潰瘍を含む。放射線療法（例えば、癌の治療）はしばしば悪性皮膚潰瘍を誘発する。このような潰瘍は放射線−処理の組織で減少された循環により通常の治療法にはよく反応せず、潰瘍はよく低強度のレーザ照射で処置される。放射線潰瘍は本発明による血漿または血清含有組成物の処置によく反応する。本発明の様態で、５重量％血漿製剤の１ｇｍ容量が約１．５〜２ｍｉｌの厚さ、５ｃｍ^２の表面積に投与される。

本発明の組成物に使用される血漿または血清の医薬的有効量は創傷部位の非正常の細胞及び各種細胞活性物質を正常化させることにより、創傷の治療効果を示す活性成分の量をいう。有効量は患者の創傷種類、適用部位、処理回数、処理時間、製形、患者の状態、補助剤の種類により変えることができる。
一般的に２〜５重量％の血漿または血清粉末を含有した容量が投与される。投与回数は一日に２回〜週１回であることもある。一つの様態で、本発明の医薬組成物の一日の有効量は粉末剤を全層皮膚損失創傷に適用時に、０．０１〜０．１ｇ／ｃｍ^２、望ましくは０．０２〜０．０９ｇ／ｃｍ^２、さらに望ましくは０．０２〜０．０７ｇ／ｃｍ^２である。

慢性悪性創傷の治療のための例示的なプロトコル１００が図９に示されている。段階１１０から分かるように、欠損創傷を本発明の活性成分で治療する場合の適合性について評価決定する。この治療は糖尿性潰瘍、放射性潰瘍、圧迫潰瘍、３度火傷及びその他の組織怪死のような全層欠損創傷に適切である。この治療はまた２度火傷、放射腺皮膚炎及び剥皮術による組織損傷のような部分層欠損創傷に適切である。
一応、欠損創傷が本発明の治療に適切なものと評価されると、その創傷を培養（段階１２０）して感染があるのかを決定する。必要な場合、創傷組織を除去する。４期潰瘍は組織除去を要求する。一部はまた深度の手術を要することができる。潰瘍に膿汁及び怪死性破片が多いとき、テキストラノマビッドまたは他の親水性重合体の適用は手術せずに組織除去を促すことができる。鉗子とハサミで怪死組織を除去することが必要である。一部組織の除去は創傷を１．５％過酸化水素で洗浄して行うことができる。水でドレッシングするもの（特に渦巻浴）が組織除去に一助することができる。怪死組織の除去後に肉芽は小さい面積を塗布する皮膚移植を充足することができる。

培養物が陽性である場合、創傷を感染から治療する（段階１４０）。抗生物質を包含した湿潤ドレッシング（段階１４５）を血漿治療以前に適用することができる。また、血漿粉末と抗生物質を包含した製剤を適用する（段階１４８）。抗生物質の例ではペニシリンナーゼ耐性ペニシリンまたはセファロスポリンが含まれる。
培養物が陰性である場合（段階１５０）、抗生物質を適用する必要はなく、創傷を本発明の血漿粉末で処理する（段階１５５）。
血漿粉末は創傷に本願に記述されたいろいろな製形のうちいずれでも適用可能であり、創傷をＣｏｍｐｅｅｌ、Ｄｕｏｄｅｒｍ、ＴａｇａｄｅｒｍまたはＯｐｓｉｔｅ創傷ドレッシングのような通常の創傷ドレッシングでドレッシングする。投与する血漿の量及び医薬的担体から所望の血漿の放出プロフィルによりドレッシングは１〜５日の間隔に変え、３〜４日の間隔に変えることもできる。下部組織の損傷程度により部分層の欠損創傷の治癒は約４日内に、全層の欠損創傷は２〜４週内になされるものと観察される。

以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。単に、下記の実施例は本発明を例示したもので、本発明の内容が実施例により限定されるのではない。

実施例１
本発明による液状塗布剤の製造
ＨＩＶ、ＨＣＶ及びＨＢＶを含んだ可能な病源体に対して検査した結果、陰性に判定を受けたヒト−由来の血液製剤（中央血液院、新鮮な凍結血漿）を３０℃で解凍させた後、これを生理食塩水と１０：１の体積比で混合し、１ＮＨＣｌ（塩酸）または１ＮＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）を添加して攪拌しながら、ｐＨ測定器（Ｏｒｉｏｎ）でｐＨを測定し、ｐＨ５．５に調整した。
使用してから残った製剤は凍結乾燥ビン、バイアル、容器、トレイまたはその他の貯蔵容器に入れて冷凍保存した。

実施例２
本発明による粉末剤の製造
ＨＩＶ、ＨＣＶ及びＨＢＶを含んだ可能な病源体に対して検査した結果、陰性に判定を受けたヒト−由来の血液製剤（中央血液院、新鮮な凍結血漿）を３０℃で解凍させた後、冷凍乾燥用飼料ビン（ｂｏｔｔｌｅ）に５００ｍｌを入れ、−８０℃の冷凍機（ＤｅｅｐＦｒｅｅｚｅｒ，ＦｏｒｍａＳｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｏｈｉｏ，ＵＳＡ）で８時間冷凍した。冷凍された飼料ビンを冷凍乾燥／シェル冷凍システム（ＬａｂｃｏｎｃｏＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＫａｎｓａｓＣｉｔｙ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）に装着し、システムを稼働して−４８℃で７日間冷凍乾燥した。このとき、すべての過程は無菌条件で行った。５００ｍｌの血漿は約３０ｇの血漿粉末を提供する。

実施例３
本発明による軟膏剤の製造
上記実施例２で製造した粉末５ｇを水溶性軟膏基剤（Ｓａｍ−Ａベース、Ｓａｍ−Ａ製薬）９５ｇと混合した後、ここに適当量の生理食塩水を添加混合して軟膏剤を製造した。軟膏基剤は１ｇを基準として硬鉛３８ｍｇ、ステアリルアルコール１１６ｍｇ、ポリエチレングリコール４０００３８ｍｇ、濃グリセリン１９２ｍｇ、セタノール２３ｍｇ、精製水（適量）、ラウリール硫酸ナトリウム９ｍｇ、パラオキシ安息香酸エチル０．８７ｍｇ及びパラオキシ安息香酸ブチル０．１２ｍｇから構成された。

実施例４
ｐＨを調節した本発明による軟膏剤の製造
上記実施例２で製造した粉末５ｇを水溶性軟膏基剤（Ｓａｍ−Ａベース、Ｓａｍ−Ａ製薬）９５ｇと混合した後、ここに適当量の生理食塩水を添加混合し、１ＮＨＣｌ（塩酸）又は１ＮＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）を添加して攪拌しながら、ｐＨ測定器（Ｏｒｉｏｎ）でｐＨを測定してｐＨを５．５に調節した軟膏剤を製造した。

実施例５
本発明による粉末剤の製造
牛胎児血清（ＦＢＳ，ＦｅｔａｌＢｏｖｉｎｅＳｅｒｕｍ；ＢｉｏｆｌｕｉｄｓＩｎｃ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を冷凍乾燥用試料ビンに５００ｍｌを入れ、−８０℃の冷凍機（ＦｏｒｍａＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｏｈｉｏ，ＵＳＡ）で６時間冷凍した。このとき、使用されるＦＢＳは耐毒素容量が０．１ｎｇ／ｍｌ以下であるものを使用し、ヘモグロビン容量が３０ｎｇ／ｍｌ以下であるものを使用した。冷凍されたＦＢＳが入れている試料ビンを冷凍乾燥／シェル冷凍システム（ＬａｂｃｏｎｃｏＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＫａｎｓａｓＳｉｔｙ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）に装着し、システムを作動して−４８℃で７時間冷凍乾燥して粉末剤を製造した。このとき、すべての過程は無菌の条件で行った。

実施例６
本発明による軟膏剤の製造
上記実施例５で製造した粉末５ｇを水溶性軟膏基剤であるセミベースクリーム（Ｓａｍ−Ａ製薬）９５ｇと混合した後、ここに適当量の生理食塩水を添加混合し、１ＮＨＣｌ（塩酸）又は１ＮＮａＯＨ（水酸化ナトリウム）を添加して攪拌しながら、ｐＨ測定器（Ｏｒｉｏｎ）でｐＨを測定してｐＨを５．５に調節した軟膏剤を製造した。

実施例７
本発明によるゲル剤の製造
上記実施例２で製造した粉末（５ｇ重量部）を９５重量部の成分（ＣａｒｂｏｐｏｌＥＴＤ２０２０３８ｍｇ、グリセリン１１６ｍｇ、プロピレングリコール３８ｍｇ、トリエタノールアミン１９２ｍｇ及び適当量の精製水）と混合してｐＨ５．８〜６．０の透明なゲル剤を得た。ＣａｒｂｏｐｏｌＥＴＤ２０２０はＣ_{１０−３０}アルキルアクリルレート架橋重合体を有するアクリルレートである。

実験実施例１
本発明によるヒトの血漿を含有した液状塗布剤の創傷治療の効果
成熟白鼠の皮膚の全層欠損創傷にヒト−由来の血漿を含有する本発明による液状塗布剤（実施例１で製造）を適用して創傷の肉芽組織生成速度が対照群に比べて促進するかを組織学的に調査した。成熟白鼠（３００乃至３５０ｇ、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系）１０匹の腹部を完全に除毛した後、正中線から同じ距離の上肢部と下肢部の一方の欠損創傷にそれぞれｐＨ５．５を調節した０．３ｍｌの液状剤を浸した１０×１０ｍｍ大きさの皮膚全層の欠損創傷を作った。上肢部と下肢部の一方の欠損創傷にそれぞれｐＨ５．５に調節した０．３ｍｌの液状剤を浸した１０×１０ｍｍの二重ガーゼ（ｇａｕｚｅ）で対照群には同量の蒸留水を浸した同一の大きさのガーゼで嵌めた後、ドレッシングフィルム（Ｔａｇａｄｅｒｍ，３Ｍ製）で封止し、各欠損創傷に５−０ナイロン縫合糸で４つずつ縫合して実験期間中に離れないようにした。

実験後７日にそれぞれの白鼠の組織を取り、１０％中性緩衝ホルマリンに２４時間固定した。これを通常の組織処理過程を経てパラフィンに包埋し、創傷の中央で縦軸に対して正確に垂直に４μｍ厚さに薄切し、Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎｅ−ｅｏｓｉｎｅと結体組織を観察するためにメソンのトリクロム（Ｍａｓｓｏｎ’ｓｔｒｉｃｈｒｏｍｅ）染色で標本を製作した。製作した組織標本をイメージ分析プログラム（ｉｍａｇｅａｎａｌｙｓｉｓｐｒｏｇｒａｍ，Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏｖｅｒｓｉｏｎ３．０，Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ製）を使用して顕微鏡で１００倍率で観察し、生成された肉芽組織の幅を測定して対照群と比較した。肉芽組織層の厚さは新生血管生成が確認される層のみ測定し、新生血管は組織の基底部から上層まで縦軸に育つ様態を示す、すなわち、組織標本で血管の縦軸に切断された血管とした。厚さが一致でない場合には最も狭い部位と広い部分の中間値とした。測定結果はスチューデントーＴテストで検証した。

実験結果、実験群の組織標本の肉芽組織の厚さは対照群に比べて厚く示された。トリクロム染色で実験群は対照群に比べて膠原質（Ｃｏｌｌａｇｅｎ）がさらに緻密に沈着されており、沈着された膠原質も対照群では細くかつ、非常に粗く分布された様態を示した。肉芽組織の新生血管は実験群では基底部から上層まで緻密に形成されているので、肉芽組織が活発に形成されているとみなすことができる。一方、対照群では基底部で稀に発見される様態で、まだ活発な肉芽組織形成の段階が開始されていなかったことが分かった（図１.Ａ、図１.Ｂ）。
肉芽組織の厚さを４０倍率で測定した結果、対照群は平均５９．４４μｍ±１４．４２で、実験群は１６８．６２±１６．０６であり、スチューデントＴ−テスト結果、有意水準０．０５でｐ値が０．０１以下で、統計的に有意の差異を示した。

実験実施例２
本発明によるヒトの血漿を含有した粉末剤の創傷治療の効果
成熟白鼠の皮膚の全層欠損創傷にヒトの由来の血漿を含有する本発明による粉末剤（実施例２で製造）を適用して創傷の肉芽組織生成速度が対照群に比べて促進するかを組織学的に調査した。
上記実験実施例１のように、白鼠１０匹の皮膚全層に欠損創傷を形成した後、上肢部と下肢部の一方の欠損創傷に、本発明による他の血漿を含有した粉末形態の医薬的組成物０．０５ｇを処理して嵌め、対照群では何らの処置をせずにドレッシングフィルム（Ｔａｇａｄｅｒｍ，３Ｍ製）で封止し、各欠損創傷に５−０ナイロン縫合糸で４つずつ縫合して実験期間中に離れないようにした。

創傷誘発７日後に実験実施例１と同様の方法で組織標本を製作し、これを顕微鏡で組織学的に観察し、肉芽組織層の厚さを測定した。
実験結果、実験群の肉芽組織の厚さが対照群に比べて厚く示された。
トリクロム染色で実験群は対照群に比べて膠原質がさらに緻密に沈着されていた。対照群では観察された沈着の膠原質は細く、非常に粗く分布された様態を示した。肉芽組織の新生血管は実験群では基底部から上層まで緻密に形成されている様態で、全般的に上記実験実施例１と同一の形態を示した（図２.Ａ、２.Ｂ）。
肉芽組織の厚さを１００倍率で測定した結果、対照群は平均４４．２４μｍ±１４．３２、実験群は１５１．６２±１４．２４であり、スチューデントＴ−テスト結果、有意水準０．０５でｐ値が０．０１以下で、統計的に有意の差異を示した。

実験実施例３
本発明によるヒトの血漿を含有した軟膏剤の創傷治療の効果
成熟白鼠の皮膚の全層欠損創傷にヒト−由来の血漿を含有する本発明による軟膏剤（実施例３で製造）を適用して創傷の肉芽組織生成速度が対照群に比べて促進するかを組織学的に調査した。
上記実験実施例１と同じように、白鼠１０匹の皮膚全層に欠損創傷を形成した後、上肢部と下肢部の一方の欠損創傷に、本発明による他の血漿を含有した軟膏剤の形態の医薬的組成物０．０３ｇを処理して嵌め、対照群では同量のセミベニスクリームで埋めた後、ドレッシングフィルム（Ｔａｇａｄｅｒｍ，３Ｍ製）で封止し、各欠損創傷に５−０ナイロン縫合糸で４つずつ縫合して実験期間中に離れないようにした。

創傷誘発７日後に実験実施例１と同様の方法で組織標本を製作し、これを顕微鏡で組織学的に観察し、肉芽組織層の厚さを測定した。
実験結果、実験群の肉芽組織の厚さが対照群に比べて厚く示された。
トリクロム染色で実験群は対照群に比べて膠原質がさらに緻密に沈着されていた。対照群では観察された沈着の膠原質が細くかつ、非常に粗く分布された様態を示した。
肉芽組織の新生血管は実験群では基底部から上層まで緻密に形成されている様態で、全般的に実験実施例１の組織形態に類似して示された（図３.Ａ、３.Ｂ）。
肉芽組織の厚さを１００倍率で測定した結果、対照群は平均５４．５４μｍ±１０．０２、実験群は１６４．５０±１７．６４を示し、スチューデントＴ−テスト結果、有意水準０．０５でｐ値が０．０１以下で、統計的に有意の差異を示した。

実験実施例４及び５
本発明による牛胎児血漿を含有した軟膏剤及び粉末剤の創傷治療の効果
創傷治療効果がヒトの血漿でない動物の血漿を使用した場合にも同一の効果があるのかを確認するために、牛胎児血清を含有した製剤の創傷治療の効果を調査した。上記実施例５及び実施例６で製造したＦＢＳを用いた粉末剤及び軟膏剤を上記実験実施例２及び実験実施例３と同一の方法で成熟白鼠１０匹ずつ二つのグループに分けて欠損創傷に処理した。
実験後７日に各白鼠の組織を取り、上記実験実施例２及び３と同一の方法で組織標本を製作した後に染色して組織を観察し、顕微鏡で肉芽組織層の厚さを測定した。
実験結果、粉末剤又は軟膏剤で処理した実験群の肉芽組織の厚さが対照群に比べて厚く示された。トリクロム染色時に実験群は対照群に比べて膠原質がさらに緻密に沈着されていた。対照群の場合は沈着された膠原質が実験群に比べて細くかつ、非常に粗く分布されていた。肉芽組織の新生血管は実験群では基底部から上層まで緻密に形成されており、これから肉芽組織が活発に形成されていることが分かった（図４.Ａ、４.Ｂ、図５.Ａ、図５.Ｂ）。
肉芽組織の厚さを１００倍率で測定した結果、粉末剤の場合、対照群は平均４１．２０μｍ±７．４４、実験群は１５２．６２±２０．８６であり、スチューデントＴ−テスト結果、有意水準０．０５でｐ値が０．０１以下で、統計的に有意の差異を示した。
軟膏剤の場合、対照群は平均５８．６２μｍ±７．６２、実験群は１６８．６２±１９．２６であり、スチューデントＴ−テスト結果、有意水準０．０５でｐ値が０．０１以下で、統計的に有意の差異を示した。

実験実施例６
本発明による軟膏剤と市販されているＰＤＧＦ軟膏剤の創傷治療の効果比較
本発明による軟膏剤（実施例６で製造）と現在唯一にＦＤＡが公認した創傷治療促進剤であるＰＤＧＦ軟膏剤（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＲｅｇｒａｎｅｘ（登録商標））の創傷治療の効果を比較した。実験実施例３と同一の方法で成熟白鼠に欠損創傷を作った後、上肢部と下肢部に一方の欠損創傷に０．３ｇの本発明の軟膏剤で嵌め、他方には同量のＲｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）で処理した。対照群には同量のＳａｍ−Ａベース（Ｓａｍ−Ａ製薬）を処理した。
実験後７日に各白鼠の組織を取り、上記実験実施例２と同一の方法で組織標本を製作した後に染色して組織を観察し、顕微鏡で肉芽組織層の厚さを測定した。

実験結果、Ｒｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）を処理したグループの肉芽組織の厚さは対照群に比べては厚かったが、本発明による軟膏剤を処理したグループに比べては微弱でかつ、組織が全般的に緻密でない様態を示した。トリクロムで染色した場合、Ｒｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）で処理した群は膠原質がほとんど生成されず、対照群とも膠原質の形成においては大きな差異はなかった。これに比べて本発明による軟膏剤を処理した場合、Ｒｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）で処理したグループおよび対照群に比べて膠原質がさらに緻密に沈着されており、沈着された膠原質も正常真皮の膠原質のように厚くかつ、均一に分布された様態を示した。肉芽組織の新生血管はＲｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）で処理したグループの場合、縦軸に育つ血管が非常に稀に観察されたが、本発明による軟膏剤を処理したグループでは基底部から上層まで緻密に形成されているので、肉芽組織が生成されていることが分かった（図６.Ａ、図６.Ｂ）。
肉芽組織の厚さを２００倍率で測定した結果、Ｒｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）で処理したグループは平均８１．８２μｍ±１８．０１、本発明の軟膏剤で処理したグループは１６８．６２±１３．４１であり、スチューデントＴ−テスト結果、有意水準０．０５でｐ値が０．０１以下で、統計的に有意の差異を示した。

実験実施例７
本発明による軟膏剤と市販されているＰＤＧＦ軟膏剤の創傷治療の効果比較
本発明による軟膏剤（実施例６で製造）とＰＤＧＦ軟膏剤（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆ＪｏｈｎｓｏｎのＲｅｇｒａｎｅｘ（登録商標））の創傷治療の効果を比較した。成熟白鼠の腹部に全層欠損創傷を作った後、本発明の軟膏剤とＲｅｇｒａｎｅｘ（登録商標）で０．３ｇずつ処理した。対照群としては十分に保護だけし、治療剤は投与しない創傷を設定した。本発明の軟膏剤で処理された創傷はＰＤＧＦ軟膏剤で処理した創傷及び対照創傷に比べて非常に早く回復した。図７は治療剤の処理を行った後４日目及び１１日目の創傷部位に関する光学写真を示す。本発明により血漿−処置された創傷（Ｈｅａｌａｄｅｘで表記）は４日目に治療を開始し、１１日目には創傷がほとんど治癒されたことが分かった。

実験実施例８
本実施例は、本発明による軟膏剤（実施例６で製造）の巨大表面創傷に対する治療効果を証明する。２度火傷の創傷（部分層の欠損創傷）を本発明の軟膏剤で処理した。図８は、処理後１日目、２日目及び４日目の治療程度を示す。４日後に完全な創傷縫合が観察された。

図１.Ａは、蒸留水で処理した対照群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図１.Ｂは、本発明によるヒトの血漿を含んだ液状塗布剤で処理した実験群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図２.Ａは、何らの処理も行わない対照群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図２.Ｂは、本発明によるヒトの血漿を含んだ粉末剤で処理した実験群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図３.Ａは、水溶性軟膏基剤のみで処理した対照群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図３.Ｂは、本発明によるヒトの血漿を含んだ軟膏剤で処理した実験群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図４.Ａは、何らの処理も行わない対照群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図４.Ｂは、本発明による牛胎児血清（ＦＢＳ）を含んだ粉末剤で処理した実験群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率２００Ｘ）。

図５.Ａは、水溶性軟膏基剤で処理した対照群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率１００Ｘ）。図５.Ｂは、本発明による牛胎児血清を含んだ軟膏剤で処理した実験群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率２００Ｘ）。図６.Ａは、ＰＤＧＦ軟膏剤（Ｒｅｇｒａｎｅｘ０．０１％）で処理した対照群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率２００Ｘ）。図６.Ｂは、本発明による牛胎児血清を含んだ軟膏剤で処理した実験群の７日後の創傷組織の所見を示す写真である（トリクロム染色、倍率２００Ｘ）。図７は、本発明によるヒトの血漿を含んだ軟膏剤及びＦＤＧＦ軟膏剤をラットの腹部全層の欠損創傷に処理した後、４日目及び５日目の光学写真を示す。図８は、本発明による牛胎児血清を含んだ軟膏剤で２度火傷の創傷を処理した後、１日目、２日目及び４日目の光学写真をみせる。図９は、本発明の様態により慢性創傷を治療するためのプロトコルの図解図である。

Claims

医薬的有効量の血漿又は血清を活性成分として含むことを特徴とする創傷治療用医薬組成物。
請求項１において、ｐＨが３．５〜６．５である組成物。
請求項１において、活性成分が家畜から由来したものである組成物。
請求項１において、局所投与された組成物。
請求項１において、クリーム、軟膏、ゲル、液剤、粉末剤又はパッチの形態である組成物。
請求項１において、創傷が挫傷、非−治癒外傷性創傷、放射線照射による組織の破壊、擦過傷、骨壊疽、裂傷、結出傷、貫通傷、銃傷、折傷、火傷、凍傷、皮膚潰瘍、皮膚乾燥、皮膚角化症、裂け、割れ、皮膚炎、皮膚絲状菌症による痛症、手術傷又は血管疾患創傷、角膜創傷、褥瘡、臥瘡、糖尿性皮膚びらん（ｅｒｏｓｉｏｎ）のような糖尿病及び循環不良に関する状態、慢性潰瘍、成形手術後の縫合部位、脊髄傷害性創傷、婦人科的創傷、化学的創傷又はニキビを含む組成物。