CZ157294A3 - Ndr reversible agents - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález popisuje různé bicyklické aminy,.

které jsou účinné při obnovení citlivosti buněk rezistentních k více léčivům- k chemoterapeutickým činidlům jako je doxorubicin, vinkristin a bisantren. Znovu obnoveni' citlivosti má vliv na sníženi množství chemoterapeutického činidla nutného pro; usmrcení takových buněk. Navíc taková potenciace aktivity chemoterapeutickéhcr· činidla sloučeninami. podle vynálezu: umožňuje léčbu tumorů odolných proti mnoha léčivům u živočichů.

Objektem tohoto vynálezu je poskytnuti metody pro zvýšení citlivosti buněk odolných k mnoha léčivům použitím sloučenin podle tohoto vynálezu.

Dalším objektem tohoto vynálezu je poskytnutí metody léčby nádorů, které jsou· buň vnitřně nebo z vnějšku rezistentní vůči více léčivům u teplokrevných živočichů podáním terapeuticky účinné dívky sloučeniny podle tohoto vynálezu, před, současně nebo po podání terapeuticky účinné dávky protinádorového chemoterapeutického činidla.

Dosavadní stav techniky

Rezistence nádorových buněk k chemoterapeutickým léčivům je důležitým· problémem klinického managmentu rakoviny. Jedním typem rezistence je ten, který je charakterizován křížovou rezistencí k mnoha druhům chemoterapeutikkých činidel, která si nejsou podstatně strukturně podobná' nebo podobně nepůsobí. Teaito fenomen je nazván. rezistencí k: více léčivům (multiple drug £.esistance). Je potvrzeno, že tato forma rezistence se způsobena přítomností 170 kD trans-membrénového proteinu v nádorových buňkách,

-2který je nazváni P-glykoprotein. Předpokláďá se, že rezistence je způsobena schopností P-glykoproteinu zabránit akv tivrrímu transportu: chemoterapeutických činidel buňkami a tím je způsobena nižší intracelulární koncentrace takových léčiv? netoxických hladinách, ^linicky se toto vyjadřuje redukcí terapeutického indexu takových léčiv? na neúčinnou hladinu. Bylo zjištěno, že MDR1 mRNA hladiny jsou hodnoceny u neošetřených, vnitrně k léčivu rezistentních! tumorů,, zahrnujících ty, které se týkají střeva, ledvin, adrenálních žláz, jater a slinivky jakož i těchto rakovin?, při relapsu po chemoterapii zahrnujících rakovinu prsu·, neum blas tom, ALL a uzlinovýi.špatně rozlišitelný ly.mf om .

Chemoterapeutická činidla v klinickém použití, ke kterým byla pozorována multi-rezistence zahrnují doxorubicin, vinblastirr, vinkristín, taxol, óuanomycin, etoposid, teniposid a aktinomycin D.

V osmdesátých letech bylcr objeveno, že rezistence nádorových buněk vůči více léčivům-, by mohla být resenzibilizo.vána k chemoterapeutickým činidlům- antihypertenzivem, verapamilem. Od této doby byl verapamil a. některá další činidla zahrnující R-verapamil a trif luoroperizirx, použit jako resenzibilizující činidlo pro léčbu rakoviny v klinickém použití. Jejich aktivita byla omezena toxic?kými vedlejšími účinky.

Předložený vynález popisuje různé bicyklické' aminy, které jsou: účinné při resenzibilizaci odolnosti buněk k více léčivům, vůči chemoterapeutickým činidlům jako je doxorubicirr, vinkristín a bisantren. Tato resenzibilizaci má ten účinek, Že redukuje? množství chemoterapeutického činidla nezbytného k usmrcení těchto buněk. Navíc tato potenciace aktivity chemoterapeutického-činídla: sloučeninami

-3..podle vynálezu· umožňuje léčit nádory, které jsou; odolné vůči více léčivům?,, u teplokrevných živočichů.

Objektem tohoto vynálezu je poskytnuti způsobu zvýšeni citlivosti buněk, které jsou odolné vůči více léčivům,, použitím sloučenin podle předloženého vynálezu.

Dalším objektem vynálezu je poskytnutí metody léčby nádorů,, které jsou buď vnitrně nebo z vnějšku? odolné vůči více léčivům? u teplokrevných živočichů podáním· tera peuticky účinné dávky sloučeniny podle předloženého vyná lezu před, současně nebo po podání terapeuticky účinné dávky pro tinádorovéhar chemoterapeutického činidla.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká nových sloučeniny obecného vzorce ,

kde

-4OCHl

R^CHxCl, O-alkyl (C^-C^J-heterocyklus?, O-alkyl(C₂~ C₅-)N(r‘²)2, OSO2CF3, OCFj nebo N(R¹²)2, nebo R² a Fp dohromady znamenají methvlendioxy nebo ethy lendioxy,

R^ je H, OH, O-alkyl((?i-C.4), F, 3r, Cl, I nebo- alkylR^? je H, CN,. Cff₂OH, CO₂ alkyl, CI^NH^ CH^CR¹²)^ nebo alkyl(C^-C^),

R¹ je přímý neb® rozvětvený (C^Cj ₂)alkyl, cykloalkyl(C^ -Ογ.), bicykloalky 1 (Cg-C^ θ ), tricykloalkyl(C^-C^ θ ), heterocyklo nebo

X “7

m je celé číslo 0-3..,

X je H, přímý nebo rozvětvený- (C₁-C^)alkyl, I, Cl, 3r, F NO₂ ne ba N(R¹²)₂>

A je přímý nebo rozvětvený (C₂-C^ ₂)alkyl,

kde nap jsou celá čísla s n= 0-2, p= 0-2, R^ je E_r alkyl(Cj -), nebo·

kde s je celé čísla a=1-3,

R^ a R® jsou nezávisle: H, alkyl(C^-C^) nebo 0-alkyKC^~^g4),

R⁹ je E, O-alkyKCj-C ), F, Br, Cl, I nebo alkyKC^C^^) R¹⁰ je E, O-alkyKCpG ), OH,. F, Br, Cl, I, alkyH^-C^)

OCH^CH^Clr O-alkyl(C^-G^)-heterocyklus_r

S-alkyKGpC^), OSO₂CF₃,

OCF₃, OCH₂-fenyl, NO₂ nebo N(R¹²)₂,

R^{1 1} je? H, O-alkyl (G₁-C₄), S-alkyl (Cj-C₄), OE, F, B_r, Cl, I, OCFj, OCE₂-fenyl, alkyl(^-^) nebo O-alkyl(C2-C^)-heterocyklus,

R^{1 2} je alkyl(C₁-C₄)_r a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Výhodná je třída sloučenin vzorce

kde

R² je E, O-alkyl(C^-C^), F, Br, Cl, I, OCF^ nebo alk^l (C\j-C^), r3· je E, O-alkyKC^-C^), přímý nebo rozvětvený

OSí-ÍC^C )alkyl_ř F, 3r, Cl, I, NO_2ř alkyl -Cg), OCH^Cr^CÍ? O-alkyl (Cz^-C^ )-heterocyklus., OSC^CF^ neber 0CF₇, neba R a R“^L spolu znamenají methylendioxy nebo ethylendioxy,

R⁴¹ je E, O-alkyKCj-C ), F, Br, Cl, I nebo alkyl (C^-C,), R⁵ je H, CE, CE2OE, CC>₂ (C^C )alkyl nebo· alkyl (C_]-C₃),

R¹ je přímý nebo rozvětvený¹ (C^-C₁₂)alkyl, cykloalkyl (Cj-Cy.), 70 bicykloalkyl (Cg-C₁ θ ), tric.ykloalkyl (Cg hetero cyklus nebo.

;ch₂)₀ —n/w^- kde m je celé číslo 0-3,

X je H, přímý nebo rozvětvený (C^-C₄)alkyl, I, Cl, Br, F, NO₂ nebo N(R¹²)₂,

A je přímý nebo rozvětvený (C₂-C^₂)alkyl,

je.

kde nap jsou celá čísla n= 1—2, p=0-1, je ΓΓ, alkyl(C^-C^), nebo

kde s je celé číslo s= 1-3,,

R? a r8 jsou nezávisle? FT, alkyl(C^-C^), nebo:

O-alkyl (Cj-C^)

R^ je H, O-alkylíCj-C.^)F, 3r, Cl, I neba alkýlíOpC^),

R^O je ff, O-alkyl (C^-C-^), OH, F, Br, Cl, I, alkyl (C^-C^),

OCH₂CH₂C1, O-alkyl(C₂-C₅)-heterocyklus, O-CH₂-fenyl neba OSO₂CF^,

-8je H, O-alkyl(C^-C^), OH, O-alkyl)~heterocyklus , F, Br, Cl, I nebo alkyl(C₁-C^),

R^ ² j_e alkyl (C\j-C^) a jejich farmaceuticky přijatelné sole.

Zvláště preferovanou třídou sloučenin podle vynálezu jsou sloučeniny vzorce

kde

R² je H, O-alkyl (CpC ) nebo alkyl (C_]-Cg),

R³' je H, O-alkyl (C^C ), OSi (t-C^) (CH^, alkyl(C₁-C₆)_r OCH₂CH₂C1, OCH₂CH₂-N-imidazol nebo OSO₉CF_q, nebo? R a R^J dohromady znamenají methylendioxy nebo ethylendioxy,

R^ je H, O-alkyl (C\j-C^) nebo alkyl(C^-Cg),

R⁵ je H, CH, CH₂OR, C0₂ (C_]-C^alkyl nebo alkylíC,-^)

R^ je- přímý nebo rozvětvený· (C^-C^₂)alkyl, cykloalkyl(C^-C?), bicykloalkyl(Cg-Cjθ), tricykloalkyl(Cg-C^θ), heterocy klyl nebo

-9X

kde m je celé číslo 0-3,

X je H, přímý nebo rozvětvený (C₁-C^)alkyl,

A je přímý nebo rozvětveny- g)alkyl,

nap jsou celá čísla n=1-2, p= 0-1, je EE nebo; alkyl(C^-G^)

-10kde s je celé číslo s= 1—3,

R^ a Ηθ jsou nezávisle H nebo O-alkyl(C^-G^)_T β je H nebo; O-alkyl (Cj-C^),·

R¹⁰ je H, O-alkyl(Cj-G^), OH, F, Br, Cl, I,. alkyKC,-Ο_β), OCH₂CH₂C|_ř OCH CH -N-imidazol, OCH₂-fenyl nebo 0S0₂GF

R¹¹ je H, o-alkyl (G_rC₄), OH, F, Br, Cl, I nebo alkyl (C^Gj),

R¹² je alkyl (CpG^) a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Nejvíce preferovanou třídou sloučenin jsou sloučeniny obecného vzorce

R¹

kde

R² je H nebo O-CH^,

R³ je H, O-Cff₃, OSi(t-C₄H₉)(CH₃)₂, 0cH₂CH₂C1, OCH^CH^-N-imidazol nebo OSO₂CF₃, nebo R² a R³' jsou spolu spojeny a tvoří methylendioxy nebo ethylendioxy,

R^ je H nebo O-GHj,

R⁵ je H, CN_r CH₂Off, CO₂CH₃ nebo alkyl (C_]-C₃),

-1 1je přímý nebo^- rozvětvený C^)alkyl, cykloalkyl(C^Cg), adamantyl 2-pyridyl neba

X

'W\Mr kde a je celé číslo 0-1,

X je H, přímý nebo rozvětvený (0^-C^)alkyl,

A je přímý nebo? rozvětvený (C2- ^G12^alky¹,

kde nap jsou celá čísla n=1-2, p- 0-1, je H nebo CH^,

kde s = 1,

8

R a R jsou nezávisle Hinebo O-CH^,

R^ je H neber O-alkyl (C^ -0$) ,

R¹⁰ je H, O-Cff₃, OH*, Gl, OCH₂CH₂C1,

OCHgCH^-N-imidazol, OCH^-fenyl nebo OSO₂CF-^_r R^{1 1} je H, O-CJT₃, OH, Cl,

R^{1 2} je alkyl (C₁-C₄) a · jejich farmaceuticky přijatelné sole.

Heterocyklus je 5-6členný' kruh, obsahující od 1 do 4 heteroatomů vybraných ze skupiny, zahrnující atomy dusíku, síry a kyslíku. Představiteli heterocyklů jsou imidazol, pyrrol,. 1 , 2,4-triazol, oxazol, isoxazol, furan thiofen, pyridin, pyrimidin a thiazol.

Do předloženého vynálezu jsou rovněž zahrnuty- sloučeniny použitelné jako meziprodukty pro výrobu sloučenin podle předloženého vynálezu. Takové meziproduktové sloučeniny zahrnují sloučeniny vzorce

-13kde

R² je H, OH, O-alkyl (C^-C^), F, 3r, Cl, I, NO2, OCF3, alkyl(C^-Cg), nebo N(R¹²)2, r3· je H, OH, O-alkyl (C^-C^),. přímý nebo rozvětvený

OSi- (C^-C^)alkyl, F, Br, Cl, I, ÍÍO₂, alkyl (Cj-Cg),,

OCHTgCHgCl, O-alkyl (C₂-Cg)-heterocyklus _r

O-alkyl(C₂-C^)N(R¹²)2, OCF^ neba N(R¹²)2, nebo R² a R^ jsou spolu spojeny a ťv.ařf me th.ylendioxy nebo ethylerrdioxy,

R⁴ je H, OH, O-alkyl (C_]-C^) _r F, Br, Cl, I nebo; alkyl (G^ -C^),

R⁵ je H, CH, CE2OH, ^c02^(C12“^GJ^)aÍkyl nebo alkyl (C] -C^), R¹ je přímý nebo rozvětvený (C^-C^ 2)alkyl, cykloalkyl (C^

C-yj), bicykloalkyl (Cg-G^ θ ), tricykloalkyl(Cg-C^ θ ),

X

kde m je celé Číslo 0-3,

X je H, přímý nebo rozvětvený (C₁ -C )alk.yl, I, Cl, 3ir, F, N.'O₂ nebo; N(R¹²)₂, nebo r! je heterocyklus s tou podmínkou, že heterocyklus nemůže být (CÍL·)

-14kde r je celé číslo 1-4-,

A je přímý nebo rozvětvený (G₂-Gj₂)alkyl,

W je 3r, Cl, I, NE₂, OSO₂alk.yl(Cj-C^), OSO₂CF₃,

0S0₂-fenyl, OSCtj-p-tolyl, s podmínkou, že je-li A

-CH^C^CH^-,. W nemůže být OH'nebo: Cl, Br, F nebo I,

H je alk.yl (O₅-C^) a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Heterocyklus je 5-6členný kruh, obsahující 1 až 4 heteroatomy vybrané ze skupiny, zahrnující atomy dusíku, síry a kyslíku. Reprezentanty heterocyklů jsou imidazol, pyrrol, 1,2,4-triazol_f oxazol, isoxazol, furan, thiofen, pyridin, pyrimidin a thiazol.

Tento vynález také zahrnuje použití' sloučenin podle vynálezu spolu s protirakovinovými chemoterapeutickými činidly při léčbě nádorů odolných proti více léčivům a léčení rakoviny.

Bylo objeveno, že sloučeniny podle vynálezu mají schopnost resenzibilizovat vůči více léčivům rezistentní buňky k protinádorovým chemoterapeutickým činidlům jako je vinkristin, doxorubicin. a bisantren. Dále bylo objeveno, že sloučeniny podle vynálezu mají schopnost potencovat schopnost protinádorových terapeutických činidel jako je doxorubicin, redukovat velikost nádoru u živočichů,

-15nesoucích nádory rezistentní vůči více léčivům:. Díky těmto vlastnostem se předpokládá, že sloučeniny podle předloženého vynálezu- budou mít hlavně klinické použití při léčbě nádorů rezistentních k více léčivům-.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny podle jednoho nebo více následujících reakčních schémat '·

-16Schema A

I

-\ΊPodle schéma

A mohou být sloučeniny vzorce

kde

R² je H, OH, O-alkyKC^C ),. F, 3r, Cl, I, NO2, OCFg, . alkyl(C^-Cg) nebo: N(R¹²)2,.

r3- je H, OH,. O-alkyl(C^-Cg), přímý nebo. rozvětvený

OSi- (Cj-C )alkyl, F, 3r, Cl, I, NO_2>. alkyl (0_]-C_&), OCFg _r O-alkyl (C₂-Cj_)-heterocyklus nebo:

O-alkyl(C₂-C₅)N(R¹^)₂, nebo R² a R^ jsou spolu spojeny a tvoří methylendioxy nebo ethylendioxy_r

R^ je H, OH, O-alkyl (Cj-C^) _r F, 3rr, Cl, I nebo alkyl-Cg)_r

R^ je H, CIT, ČO₂ (C₁-Cg)alkyl, alkyl (Cj-Cg),. CHgNE-, ne^-boch2n(r¹²)2,.

R¹ je přímý nebo rozvětvený^- (Cj-Cg ₂ )alkyl, cykloalkyl(CgΟγ), bicykloalkyl (Cg-C^ θ ),. tricykloalkyl(Cg-C₁θ), heterocyklyl nebo

X

™₂vvw m je celé číslo 0-J,

X je 3, přímý nebo rozvětveny (C^-C-^) alkyl, I, Cl, Br^-, F, NO2 nebo N(R¹²)2,

-18A je přímý nebo rozvětvený (θ₂“θι 2>

je·

kde na p jsou celá čísla n=0-2, R° j_e H nebo alkyl(C^-G ), p=Q-2,

s je celé číslu s= 1-3,

R? a ]3θ jsou nezávisle H, alkyl(C^-C^) nebo. O-alkyl (C^-C^),

Μθ ”£4), F, Br, Cl, I neber alkyl (C1-C.3 ) _r

R. je ff, O-alkyl (C_]-Ο_β), Off, S-alkyl (C_j -C ), F, 3_r,

Cl, I, alkyl (C₁-C₃)_r OCH^i^Cl,.

I, OCF^, 0Cff₂-fenyl, alkyl(C^-C^) nebo:

O-alkyl(C₂-C^)-heterocyklua,

R¹² je alkyl (C^-C^) „ připraveny následujícím způsobem.:

arylchloracetonitril, 3.r ^se připraví z arylaldeh.ydu, J_>· přes 2, jak je popsáno v US patentu 4833162'. Meziprodukt 4_ může novaný význam-, a báze v polárních rozpouštědlech jako: je acetonitril při zvýšených teplotách. Deprotonacf 4 silnou' bázi jako je hydrid sodný v aprotickém rozpouštědle jako je dimethylsulfoxiď a reakcí s X-A-Y, kde A má dříve definovaný význam a X a Y jsou nezávisle na sobě chlor, brom nebo jod?, se získá meziprodukt 5· ^aeakce ? & 33, kde má výše definovaný význam, v polárním rozpouštědle jakoje Ν,Ν-dimethylformamidl a terciární amin nebo uhličitan alkalického kovu jako je uhličitan draselný při zvýšených teplotách poskytne Alternativně může být meziprodukt připraven zpracováním sloučeniny 7__ se silnou bází' jako je lithium-hexameth.yldisilazan v etherickém rozpouštědle jako je tetrahydrof uran a potom s disulfidem_r R^SSr\ kde-: R má výše definovaný význam. Meziprodukt 4., kde R =H, může být také připraven reakcí meziproduktu’ g._r kde X má dříve definovaný význam·, s? R¹ SíT, kde R¹ má dříve definovaný význam·., metodou podle Freudenberga, Carrary a Cohna, Ann., 446, 94 (192?). Sloučenina 6 může být dále zpracovávána známými metodami, např. R^= Off na OCř^Cí^Cl na OCH^CH^-N-imidazoiL.

-20—

Schema 3

I

-211 1 2

V souladu: se schematenr· 3, kde R -R , Α,Β,Χ,Υ a n mají význam' definovaný u schéma A, zpracování sloučeniny 2 Ěe ftalimidem draselným v polárním rozpouštědle jako je N,N-dimethylformamid poskytne sloučeninu; 2.· Zpracpván£ sloučeniny 2. ^s hydrazin-hydrátem v alkoholickém rozpouštědle poskytne amin, sloučeninu 1 0. Reakce sloučeniny 10 se sloučeninou 11 za přítomnosti báze poskytne sloučeninu &,

Schéma C

X

-22Podle schéma C, sloučeniny obecného vzorce

kde

R² je H, O-alkyl (Cj-Οφ), F, 3r, Cl, I nebo, alkyl -Cg.)-,

R³- je H, O-alk.yl(C₁-C₃),. F, 3r, Cl, I nebo alkyl (C.-Cr·),

-v i o nebo R a R.^J spolu tvoří methylendloxy nebo e thylendioxy,

R⁴ je H, O-alkyKCpC^), F, 3r, Cl, I nebo alkyl(C_]-C^), í? je H,

R¹ je přímý nebo rozvětvený (C^ -°,2 ) alkyl, cykloalkyl(C^ C^.), bicykloalkyl (Gg-C₁ θ ), heterocyklyl nebo;

<οη₂)^ΛΛ1γ kde m je celé číslo, 0-3,.

X je H, přímý nebo rozvětvený (C₁-C^)alkyl, I, Cl,

Br, F, NO₂ nebo N(R¹²)_2>.

-23A je přímý nebo rozvětvený (^^ΐ ’

kde nap jsou. celá čísla n= 0-2, p= 0-2, j_e H, alkyl(C'^-G^), nebo

s je celé číslo s=1-3.,

R? a R® jsou nezávisle ff, alkyl(G^-C )_r nebo

O-alkyl(C₁-&₄)_r

R^ je ff, O-alkyl(C₁-G^), F, 3xr, Cl, I nebo:

alkyl(G.-G ),

Π * 3

R je ff, O-alkyl (C^-C ),. OH, S-alkyl^-C₄) _r F, 3_Γ

-24Cl, I, alkyl (C₁-C₃), OCF^, OSC^CF-p OCH^-fenyl, NC^ nebo N'(R

R¹¹ je H, O-alkyl(C₁-G₄),. S-alkyl(C_]-C ), OH_r F, B_r, Cl, I, OCF^, OCí^-fenyl. nebo alkyl (C^-C^),

R¹² je alkylíc,-^), mohou být připraveny následujícím způsobem:

Friedel-Craftsova acylace sloučeniny;.· 1 2 sloučeninou 13: s Lewisovou kyselinou jako je chlorid hlinitý v rozpouštědle jako je methylenchloriďi poskytne sloučeninu; 14 po zmýdelnění s bází jako j;e hydroxid sodný ve směsích al kohol-voda. Acylace sloučeniny 1_4s BH, kde 3 má dříve definovaný význam, při aktivaci 14 činidly jako je diethylkyanofosfonát v rozpouštědlech jako je N,N-dimethylfbr.mamičr za přítomnosti terciárních aminových bází poskytne sloučeninu 1 . Redukce sloučeniny j 5 s činidly jako je boroh.ydrid sodný- v alkoholických rozpouštědlech? poskytne sloučeninu 16. Zoracování j & s Lewisovou kyselinou jako je jodid zinečnatý' za přítomnosti R^SH, kde R^ má výše definovaný význam·,, v halogenovaném rozpouštědle jako je 1,2-dichlorethan poskytne 1_7. Redukci V7 redukčním činidlem jako je boran-methylsulfiď v rozpouštědle jako je tetrahydrof uran, se získá 1 8. Sloučeniny 18 nohou být dále jednoduše zpracovány ználými metodami, např. R¹ °= OH^- na OC^C^Cl na *

Biologická aktivita

Testování buněk in vitro

Subpopulace buněk rakoviny lidského vaječníku (OVCAR 3, známá také jako HTB-161) se získá výběrem buněk s vysokou expresi 372,3' antigenu·. ^Tatové buňky se vytřídí na fluorescentním aktivačním buněčném sorteru (FACS, Becton Dickinson Model 440). Klon (SI ) z této populace se izoluje a potom se podrobí postupnému, zvyšováni množství

-25bisantrenu; během. 12-16 týďnů. Νθ^rezistentnější buněčná linie, označená S1-B1-20, označuje S1 klon, nejprve? nezávisle izolované bisantrenem: selektované buněčné linie (31) a udržovacf koncentrací.' v mikromolech (20 ^uM). Bisantrenea selektované buňky použité' v této studili jsou chronicky udržovány v 20 ^uM léčivu ( limit rozpustnosti bisantrenu).

* Screeningová studie reverzních činidel

Buňky připravené trypsinizacf, jsou umístěny na plotny v množství' 20000 buněk/jamku^- v mediu s a bez. bisantrenu·. Potom se k buňkám přidají testovaná činidla v různých' koncentracích. Testovaná činidla jsou solubilizována ve?

100% dimethylsulfoxidu, konečná koncentrace dimethylsulfoxidu v kultivovaných plotnách nepřestoupí 0,1 %. Kompletní plotny se inkubují' po 3 dny při 37 ^σΟ ve vlhké atmosféže 7 % CO^. Přežívající buňky se hodnotí sulforodoaminovou 3 zkouškou (Skehna a spol., 1990). Obsah barvivo/bunky se odečítá při 540 nm v mikrotitrační čtečce. Hodnoty jsou elektronicky zpracovány, % přežívájící'cn buněk porovnána s neošetřenými buňkami a výsledky jsou vyjádřeny; jako rozdíl mezi těmito hodnotami. Pokusy se provádějí za přítomnosti testovaného, činidla samotného.· a testovaného činidla s 20 /u’l bisantrenu Rozdíl mezi výsledky těchto dvou pokusů je uváděn dále pro 3 rozdílné koncentrace testovaného činidla.

7· rozdíl výsledků rozdíl výsledků rozdíl výsledků

Pří kl arl ř při 1 mikroM při 10 mikroti při 20 tnikroM η η η o h > N^Nin^in^o cn h ΐΓι'ύοη^^ΰποσιίΝΓ'Ηοι-ΐωΝ’ίσιίΐ’ί ο>ο>\£:.ι^ΝΝ<·'ί>>ΰΓ'ΐηβηηιηιη tOQt^ariri'?'OH'íf\’nN>ooc7i'?n>

in o in vo ld > cti ’τ oonMCna^oa

rj

O

o

rH

r\j

VO

r-

rH

(N

«Τ.

LT)

CO

rH

VO

σ\

Π)

iTi

r*

o

rH

(N

ΓΊ

>

VO

VO

VO

VO

o

t

>

r*

CO

CO

co

σ\

CV

σ»

t—t

r-1

r-4

r-t

-28In vivo hodnocení' MDR-1 reverzních činidel proti myší leukémii P388/VCR rezistentní vůči vinkristinu- implantované: IP CDF1 myši (tabulka 2)

Myší leukemie P388/7CR rezistentní vůči vinkristinu: je rozšíří.' intraperitoneální (IP) injekcí 1x10^ nádorových - buněk do syngenní DBA/2 myši(Charles: River Laboratories;, lne.). Ascity nádorových buněk se shromáždí o 5-7 dnů později. Pro testování léčiva se skupinám 10-15 CDF1 myší (DBA/2 x 3alb/cFl h.yóridy, Charles River Laboratories;, lne.) se injektují IP 0,5 ml zředěná ascitické kapaliny, obsahující 1 x 10& životaschopných P388/VCR nádorových buněk. Všechny myši jsou stejného pohlaví o hmotnosti minimálně 18 g a všechny s 3g hmotnostní odchylkou na test- Léčiva se podávají jednou denně, IP, Intravenozním (IV) nebo orálním způsobem,, se začátkem jeden den po implantaci nádoru a za použití různých intervalů léčby- Kyši se periodicky váží, zaznamenají se přežívající 30 dnů po implantaci nádoru a vypočte se průměrný čas přežití pro všechny skupiny myší. Provede se statistická analýza průměrného času přežití za použití Studentova t-testu- Pozitivní MDR-1 reverzní aktivita lékové rezistence: je zřejmá při statisticky významném (p < 0,05) zvýšení průměrného času přežití pro skupiny myší ošetřené v.inkr is tinem plus MDR-1 sloučeeninou, ve srovnání s; myšmi ošetřenými ekvivalentní ďávkou samotného vinkristinu.

-29Tabulka 2: In vivo.hodnocení MDR-1 reverz.činidel vůči myší k vinkristinu- rezistentní P388 leukémii(P388/VCR)

léč ..a mg/kg dávka	ošetř. (dny)	způ- sob	kst (dny)	b XILS	-£_ Student t-TEST (P’hodnota)
Placebo	0.5		1-3	IP	9.4		-
Vincristine	0.4		1-3	IP	14.2	-	-
Vincr. ♦ Ex-3	0.4 +	•50.0	1-3	IP	16.3	+15	<0.01
	0.4 +	25.0	1-3	IP	15.6	+10	<0.01
Placebo	0.5		1-7	CRAL	9.4	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	13.7	-	-
Vincr.+ Ex-3	0.2 +	200	1-7	CRAL	. 16.4	+20	<0.01
	0.2 +	100	1-7	CRAL	15.3	+15	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	9.9	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	13.8	-	-
Vincr. + Ex-3	0.2 +	75	1-7	IP	16.7	+21	0.04
Placebo	0.5		1-7	IP	8.9	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	14.9	-	-
Vincr. + Ex-9	0.2 +	12.5	1-7	IP	16.8	+13	<0.01
	0.2 +	6.3	1-7	IP	16.4	♦10	<0.03
Placebo	0.5		1-7	IP	13.2	-	•
Vincristine	0.2		1-7	IP	15.1	-	-
Vincr. ♦ Ex-16	0.2 +	25	1-7	IP	16.8	+ 11	<0.01
	0.2 +	12.5	1-7	IP	16.2	+ 7	0.02
Placebo	0.5		1-7	IP	13.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	I?	14.3	-	-
Vincr. + Ex-11	0.2 +	12.5	1-7	IP	16.3	*14	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	13.4	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	15.1	-	-
Vincr. + Ex-12	0.2 +	50	1-7	IP	16.7	+ 11	<0.01
	0.2 +	25	1-7	IP	16.5	+ 9	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	10.1	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. + Ex-20	0.2 +	6.3	1-7	IP	13.5	+· 8	0.C3
Placebo	0.5		1-7	IP	10.1	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. * Ex-21	0.2 +	25	1-7	IP	14.5	+ 16	<0.01
	0.2 +	12.5	1-7	IP	13.5	+ 8	0.02
Placebo	0.5		1-7	I?	10.1	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.7	-	-
Vincr. + Ex-22	0.2 +	12.5	1-7	IP	15.8	+24	<0.01
	0.2 +	6.3	1-7	IP	15.2	+20	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	8.7	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	13.8	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	50	1-5	IP	16.1	+ 17	0.03
	0.2 +	25	1-5	IP	16.8	+22	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	9.8	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	14.1	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 *	25	1-7	IP	20.3	+44	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	9.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	14.9	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	12.5	1-7	IP	17.6	+ 18	<0.01

0.2 +	6.3	1-7	IP	17.5	+ 17	<0.01
0.2 +	3.1	1-7	IP	17.6	+13	<0.01

-JUTabulka 2: In viv.o hodnocení MDR-1 revrez.činidel vůči myší k vinkristinu rezistentní P388 leukémii (P388/VCR)

η 4 χ 3 1 é c ·	mg/kg dávka	ošetř. způ(dny) sob	KST (dny)	b XILS	Student t-TEs/ (P'hodnota)
Placebo	0.5		1-7	IP	13.2	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	15.1	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 ♦	12.5	1-7	IP	16.8	+ 11	<0.01
Placete	0.5		1-7	IP	10.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP .	12.5	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	6.3	1-7	IP	15.3	+22	<0.01
Placebo	0.5		1-3,6,7	IP	11.8	-	-
Vincristi ne	0.4		.. 1-3,6,7	IV	11.4	-	-
Vincr. + Ex-17	0.4 +	50	1-3,6,7	IV	13.4	+ 18	0.02
	0.4 +	25	1-3,6.7	IV	13.3	+ 17	0.01
	0.4 +	12.5	1-3.6,7	IV	12.9	+15	<0.01
Placet»	0.5		1,2	IV	8.4	-	-
Vincristine	0.8		1,2	IV	9.8	-	-
Vincr. + Ex-17	0.8 +	25	1.2	IV	11.1	+13	<0.01
Placebo	0.5		1,2	IV	8.4	-	-
Vincristine	0.6		1,2	IV	9.6	-	-
Vincr. + Ex-17	0.6 +	50	1,2	IV	11.1	+16	<0.01
	0.6 +	25	1.2	IV	10.1	+ 5	<0.03
Placebo	0.5		1-7	IP	10.1	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	12.5	1-7	IP	13.7	+ 10	0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	11.6	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	12.5	1-7	IP	14.7	+ 13	<0.01
Placet»	0.5		1-7	IP	11.2	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.3	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	12.5	1-7	IP	15.8	+28	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	9.2	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.6	-	-
Vincr. + Ex-17	0.2 +	25	1-7	IP	14.7	+ 16	<0.03
	0.2 +	12.5	1-7	IP	16.8	+33	<0.01
	0.2 +	6.3	1-7	IP	14.9	+ 13	<0.01
	0,2 +	?.i	1-7	IP	13.8	+ 10	<0.03
Placebo	0.5		1,5,9	IP	9.3	-	-
Vincristine	0.6		1,5,9	IP	11.5	-	-
Vincr. + Ex-17	0.6 +	25	1,5,9	IP	15.8	+38	<0.01
	0.6 +	12.5	1,5,9	IP	14.1	+23	<0.01
	0.6 ♦	6.3	1.5.9	IP	12.9	♦12	<0.01
Placebo	0.5		1-7	IP	13.2	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	14.7	-	-
Vincr. + Ex-37	0.2 +	6.3	1-7	IP	15.7	+ 7	0.04
Placebo	0.5		1-7	IP	10.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. + Ex-37	0.2 +	12.5	1-7	IP	16.1	+29	<0.01
	0.2 ♦	U	1-7	IP	14,6	+17	0.02
Placebo	0.5	1-7	IP	9.2	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.6	-	-
Vincr. + Ex-37	0.2 +	25	1-7	IP	14.7	+17	0.01

0.2 + 12.5	1-7	IP	15.5	+23	<0.01
0.2 + 6.3	1-7	IP	13.8	+10	<0.02
0,2 ♦ 3.1	1-7	IP	14,1	*12	<0.01

-31Tabulka 2 (pokrač.)

léč.3 mg-/kg dévka	ošetř... (dnv)	'způ- sob	KST (dny)	-B— XILS .	Student t-TEST (p-hodnota)
Placebo	0.5		1-7	IP	9.8	-	-
Vincristine	0;2		1-7	IP	12.7	-	-
Vincr. + Ex-37	0.2 +	12,5	1-7	IP	15.0	♦ 18	<0.01
	0.2 +	3.1	1-7	IP	14.2	♦12	<0.01
Placete	0.5		• 1-7	IP	11.4	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	16.0	-	-
Vincr. + Ex-37	0.2 ♦	12.5	1-7	IP	17.9	+12 ·	0.01
Placete	0.5		1-7	_ IP	10.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	15.4	-	-
Vincr. + Ex-37	0.2 +	12.5	1-7	IP	18.1	+ 18	<0.01
Placete	0.5		1-7	IP	9.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	14.9		-
Vincr. * Ex-37	0.2 +	12.5	1-7	IP	19.1	+28	<0.01
	0.2 +	6.3	1-7	IP	17.7	+ 19	<0.01
	0.2 +	3.1	1-7	IP	16.6	+ 11	0.03
Placete	0.5		1-7	IP	13.2	-	-
Vincristine	0.2		1-Z	IP	15.1	-	-
Vincr. ♦ Ex-37	0.2 +	12.5	1-7	IP	17.1	+13	<0.01'
Placebo	0.5		1-7	IP	10.3	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. + Ex-41	0.2 +	6.3	1-7	IP	14.1	+13	0.02
Placete	0.5		1-7	IP	11.2	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.3	-	-
Vincr. + Ex-46	0.2 +	25	1-7	IP	16.7	+36	<0.01
	0.2 +	12.5	1-7	IP	14.7	+20	<0.01
P l aceto	0.5		1-7	IP	10.1	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	12.5	-	-
Vincr. + Ex-14	0.2 +	6.?	1-7	IP	14.3	+ 14	<0.01
Placete	0.5		1-7	IP	9.7	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	11.2	-	-
Vincr. + Ex-26	0.2 +	25	1-7	IP	15.8	+41	<0.01
	0.2 +	12.5	1-7	IP	15.0	+34	<0.01
	0.2 +	6-5	1-7	IP	13.8	+23	<0.01
Placete	0.5		1-7	IP	9.7	-	-
Vincristine	0.2		1-7	I?	11.2	-	-
Vincr. + Ex-112	0.2 +	50	1-7	IP	14.2	+26	0.02
	0.2 +	25	1-7	IP	16.3	+45	<0.01
	0.2 +	12.5	1-7	IP	16.2	+45	<0.01
Placete	0.5		1-7	IP	9.7	-	-
Vincristine	0.2		1-7	IP	11.2	-	-
Vincr. + Ex-33	0.2 +	50	1-7	IP	16.6	+43	<0.01
	0.2 +	25	1-7	IP	15.6	+39	<0.01
	0-2 *	12.5	1-7	IP	15.1	+35	<0.01

^a) léčiva podávána IP,. IV nebo Srálně ve dny-jak jsou ,\uvedeny vzhledem k implantaci nádoru.

^D^%ILS-procenta zvýšení přežití vzhledem k samotnému· vinkristinu-

c) indikuje významné zvýšení (pj> θ,5) v průměrné době přežití ve srovnání s ošetřením samotným vinkristinem vincr.= vinkristín

Ex= příklad číslo

-32In vivo hodnoceni MDR-1 reverzních činidel vůči lidskému epidermoidnímu karcinomu KB/8,5 implantovanému SC athymické Nudě” myši (tabulka 3)

Vůči více léčivům· rezistentní' lidský’ epióernoidní karcinom K3/8,5 se rozmnožuje v mediu, obsahujícím kolchicim (10 nanogramů/ml) pro udrženi rezistence k léčivu'. Kolchicin se odstrani z media dvojím paséžovéním buněk;, před subkutánním: (SC) implantováním·· 8 x 10⁶ KB/8,5 nádorových buněk: athymické nudě” myši (Harlan Sprague Dawley). Přibližně 7-10 dnů po implantování nádoru,, mají SC nádory hmotu 100-300 mg. V této době (den 0 testového období') se myši rozdělí do ošetřovaných skupin po 5-10 myších na skupinu tak, že skupiny mají' průměrnou hmotu nádoru co možno? nejbližší. Ošetření léčivem·, se provede o den později podle následujícího protokolu: doxorubicin se podává jako jedna intravenozní' dávka (8 mg/kg) a buč placebo (normální salinický roztok) nebo MDR-1 reverzní sloučenina se podá ve dvou subkutánních dávkách (12,5 —

200 mg/kg/óávka) 2 hodiny před a opět 2 hodiny po. jediné IV dávce doxorubicinu. Individuální' hmota myšího nádoru a průměrná hmota nádoru? pro každou léčenou skupinu se stanoví + 14.den a +21 ,den období testu. Pro každou léčenou skupinu se vypočte? relativní růst nádoru, RTG, následovně průměrná hmota nádoru +14«demnebo +21.den

RTG=~--— průměrná hmota inádonu- v den 0

-33Statistická' analýza log relativního růstu nádoru se provede za použití Studentova t-testu. Transformace dat z absolutní' průměrně hmoty nádoru (mg hmoty nádoru) na log relativní růst nádoru před statistickou analýzou má dv& výhody:

1) koriguje hodnoty rozdílů v průměrných hmotách nádorů různých ošetřovaných skupin na začátku zkušebního období (den 0) a

2) log transformace dat adekvátněji odráží exponenciální růstovou charakteristiku těchto; SC nádorů a; proto je použití Studentova t-testu vhodnější. Pozitivní MDR-1 aktivita léčiva je indikována statisticky významnou (ρ__θ₅θο) redukci v relativním růstu nádoru u skupin ošetřených doxorubicinem. plus MDR-1 sloučeninou ve srovnání s kontrolní skupinou ošetřenou ekvivalentní dávkou samotného dox orubicinu'.

Tabulka 3: Tn vivo hodnocení MDR-1 reverzních činidel vůči lidskému epidermoidnímu karcinomu KB/8,5 implantovanému athymické holé myši

-	relativní	růst nádoru	-
léčivo ošetření	b relativní růst. nádoru;.	c statisti- relativký _'_ni růst7’ (p-hodnotá)nádoru	statiistiky (p-hodnota)
	14.den	21 .den·

Sali ne	8.78	-	11.42	-
Doxortbicin (8)	6.50	-	10.26	-
Dox (8) ♦ Ex-26 (100)	3.87	<0.01	6.69	<0.01
Dox (8) + Ex-26 ( 50)	4.83	0.01	7.87	0.03
Dox (8) + Ex-26 ( 25)	5.46	0.12	9.62	0.39
Dox (8) + Ex-26 ( 12.5)	7.08	0.76	8.93	0.17
Salině	11.03	-	15.23	-
Doxorubicin(8)	7.44	-	12.82	-
Dox (8) + Ex-26 (150)	T ox i c	-	Toxic	-
Dox (8) + Ex-26 (100)	3.97	<0.01	6.87	<0.01
Dox (8) + Ex-26 ( 50)	4.8	<0.01	8.31	0.01
Dox (8) + Ex-26 ( 25)	6.25	0.27	9.06	0.02
Dox (8) + Ex-26 ( 12.5)	6.87	0.53	10.14	0.13 ·.
Salině	7.90	-	13.54	-
Dcxorubicin (8)	4.59	-	8.37	-
Dcx (8) + Ex-26 (200)	Tcxic	-	Toxic	-
Dox (8) + Ex-26 (100)	2.43	<0.01	3.84	<0.01
Dox (8) + Ex-26 ( 50)	2.82	<0.01	4.62	<0.01
Dcx (8) + Ex-26 ( 25)	3.30	0.04	5.49	0.02
Dcx (8) + Ex-26 ( 12.5)	4.97	0.76	8.33	0.54
Salině	5.98	-	10.34	-
Dcxorubicin (8)	2.88	-	5.69	-
Dox (8) + Ex-26 (100)	0.77	<0.01	1.70	<0.01
Dox (8) + Ex-26 ( 75)	1.75	0.01	3.49	<0.01
Dox (8) * Ex-26 ( 50)	2.51	0.16	3.9-5	<0.01

Salině	10.63	-	25.23	-
Dcxorubicin (8)	7.30	-	16.05	-
Dox (8) + Ex-17 (100)	4.95	0.04	10.39	0.02
Dox (8) + Ex-17 ( 75)	4.04	<0.01	9.18	<0.01
Dox (8) + Ex-17 ( 50)	4.33	<0.01	7.85	<0.01
Salině	13.13	-	23.44	-
Doxorufcicin (8)	6.73	-	10.99	-
Dox (8) + Ex-17 (150)	2.24	<0.01	3.35	<0.01
Dox (8) + Ex-17 (100)	4.53	<0.01	6.22	<0.01
Dox (8) + Ex-17 ( 75)	4.33	<0.01	7.37	<0.01
Salině	7.90	-	13.54	-
Dcxorubicin (8)	4.59	-	8.37	-
Dox (8) + Ex-17 (200)	2.77	<0.01	5.30	0.02
Dox (8) + Ex-17 (100)	2.85	<0.01	4.99	0.01
Dox (8) + Ex-17 ( 50)	3.43	0.05	6.09	0.06
Dox (8) + Ex-17 ( 25)	5.09	0.83	9.55	0.83
Dox (8) * Ex-17 ( 12.5)	3.97	0.26	8.58	0.66

-JbTabulka 3 (pokrač.) léčivo^{1 1} ošetření relativní⁰ růstfaádoru

14.den

C’ statisti- relativní statistiky ky růst ná- ' - (p-hodnota) (p-hodnota) doru.

.deru

Sal i ne	9.27	-	15.21	-
Doxorubicin (8) -	6.17	-	11.13	-
Dox (3) + Ex-33 (200)	2.20	<0.01	3.98	<0.01
Dox (8)' + Ex-33 (100>	3.28	<0.01	6.38	<0.01
Dox (8) + Ex-33 ( 50)	3.02	<0.01	6.04	<0.01
Dox (8) + Ex-33 ( 25)	2.85	<0.01	5.20	<0.01
Dox (8) + Ex-33 ( 12.5)	2.41	<0.01	4.09	<0.01
Salino	9.51	-	18.00	-
Doxorubicin (8)	5.66	-	9.29	-
Dox (3) ♦ Ex-33 (200)	2.71	<0.01	5.94	<0.01
Dox (8) + Ex-33 (100)	3.47	<0.01	5.63	<0.01
Dox (8) + Ex-33 ( 50)	3.85	<0.01	7.55	0.13
Dox (8) + Ex-33 ( 25)	3.97	0.01	7.70	0.17
Dox (8) + Ex-33 (12.5)	3.88	<0.01	7.88	0.13
Salině	17.50	-	31.38	-
Doxorubicin (8)	6.83	-	15.06	-
Dox (8) + Ex-112 (200)	4.31	<0.01	8.08	<0.01	*-
Dcx (8) + Ex-112 (100)	3.20	<0.01	7.26	<0.01
Dox (8) + Ex-112 ( 50)	3.36	<0.01	9.32	0.03
Dcx (8) + Ex-112 ( 25)	4.92	0.06	9.93	0.07
Dcx (8) + Ex-112 ( 12.5)	4.71	0.02	11.38	0.20
Salině	9.51	-	18.00	-
Doxorubicin (8)	5.66	-	9.29	-
Dcx (8) + Ex-112 (200)	2.75	<0.01	5.97	<0.01
Dox (8) + Ex-112 (100)	3.66	<0.01 -	6.82	0.03
Dcx (8) + Ex-112 ( 50)	4.97	0.19	6.99	0.06
Dox (8) + Ex-112 ( 25)	4.99	0.26	7.34	0.08
Dox (8) + Ex-112 ( 12.5)	4.33	0.06	6.47	0.01
Salině	6.49	-	10.18	-
Doxorubicin (8)	4.66	-	7.70	-
Dox (8) + Ex-112 (200)	2.35	<0.01	3.81	<0.01
Dox (8) + Ex-112 ( 25)	4.51	0.39	7.21	0.38
Dox (8) + Ex-112 ( 12.5)	4.75	0.52	6.58	0.15
Salině	17.50	-	31.33	-
Doxorubicin (8)	6.83	-	15.06	-
Dox (8) + Ex-3 (200)	3.34	<0.01	7.34	<0.01
Dox (8) + Ex-3 (100)	3.92	<0.01	8.87	0.01
Dox (8) + Ex-3 ( 50)	4.29	0.01	8.38	<0.01
Dox (8) + Ex-3 ( 25)	5.31	0.09	11.29	0.12
Dox (8) + Ex-3 ( 12.5)	4.39	<0.01	10.68	0.10
Salině	8.31	-	12.15	-
Doxorubicin (8)	4.91	-	9.34	-
Dcx (8) + Ex-3 (12.5)	4.37	0.23	8.19	0.14
Salině	6.49		10.18	-
Doxorubicin (8)	4.66	-	7.70	-
Dox (8) + Ex-3 (200)	3.06	<0.01	5.49	0.02
Dox (8) ♦ Ex-3 ( 25)	5.73	0.95	8.02	0.61
Dox (8) + Ex-3 ( 12.5)	5.19	0.75	7.97	0.54

36Tabulka 3 (pokrač.)

léčivo?3		relativní	statis	-c relativní' ·	-statis-
ošetření		růst- ná-	tiky	růst	ná-	tiky
		dorir	ÍD-hodnota) doru	(p—hodnota*?
		14.den		21 .	den
Salině		17.50 ·	-	31.38	-
Doxorubicin (8)		6.83	-	15.06	-
Dox (8) +-EX-14	(200)	4.59	0.02	7.84	<0.01
Dox (8) + Ex-14	<100)	3.46	<0.01	6.25	<0.01
Dox (8) + Ex-14	( 50)	4.14	<0.01	10.03	0.04
Dox (8) + Ex-14	( 25)	5.56	0.19	10.97	0.16
Salině		5.96	-	10.34	-
Doxorubicin (8)		2.83	-	5.69	-
Dcx (8) + Ex-14	(100)	2.94	0.43	5.40	0.41
Dox (8) + Ex-14	( 75)	2.90	0.48	5.86	0.48
Dcx (8) + Ex-14	( 50)	3.03	0.64	5.89	0.64
Dox (8) + Ex-14	( 25)	2.56	0.25	5.06	0.29
Saline		11.47	-	19.96	-
Doxorubicin (8)		5.15	-	10.08	-
Dcx (8) + Ex-32	(200)	2.23	<0.01	3.90	<0.01
Dox (8) + Ex-32	(100)	4.59	0.32	9.20	0.44 -	9
Dcx (8) * Ex-32	( 50)	6.56	0.90	12.91	0.93
Dox (3) + Ex-32	< 25)	5.69	0.70	11.30	0.79
Dox (8) + Ex-32	( 12.5)	9.50	1.00	19.93	1.00
Sal ine		11.14	-	18.56	-
Doxorubicin (8)		8.33	-	13.55	-
Dcx (8) + Ex-32	(200)	4.32	<0.01	7.33	<0.01
Dox (8) + Ex-32	(100)	5.37	<0.01	10.66	0.07
Dox (S) + Ex-32	( 50)	6.73	0.13	12.43	0.39
Salině		9.22	-	15.15	-
Doxorubicin (8)		9.78	-	19.57	-
Dcx (8) + Ex-47	(200)	5.60	0.04	11.04	0.16
Dox (8) ♦ Ex-47	(100)	6.12	0.08	10.09	0.08
Dcx (8) + Ex-47	( 50)	7.96	0.47	16.54	0.75
Dox (S) + Ex-47	( 25)	5.09	0.02	9.73	0.05
Dcx (8) + Ex-47	( 12.5)	8.79	0.39	17.53	0.57
Salině		7.90	-	13.54	-
Doxorubicin (8)		4.59	-	8.37	-
Dox (8) + Ex-41	(200)	2.41 (tox)	<0.01	4.57 (tox)	0.01
Dox (8) + Ex-41	(100)	3.13	0.01	6.28	0.12
Dcx (8) + Ex-41	( 50)	4.21	0.38	7.10	0.27
Dox (8) + Ex-41	< 25)	3.80	0.10	6.15	0.06
Dox (8) + Ex-41	( 12.5)	4.01	0.30	7.27	0.26
Saline		10.63	-	25.28	-
Doxorubicin (8)		7.30	-	16.05	-
Dox (S) + Ex-41	(100)	5.14	0.06	10.39	0.02
Dox (8) + Ex-41	( 75)	4.64	<0.01	8.54	<0.01
Dcx (8) + Ex-41	( 50)	8.63	0.58	15.08	0.13
Salině		10.63	-	25.28	-
Doxorubicin (8)		7.30	-	16.05	-
Dcx (8) + Ex-46	(100)	4.62	0.02	10.91	0.03
Dox (8) + Ex-46	( 75)	5.18	0.05	10.23	0.01
Dox (80 + Ex-46	( 50)	-531	<0.01	8.83	<0.01

Tabulka 3. (pokrač.)

Léčivo³ ošetřeni relativní⁶ statisti- relativní statisrůsťnádo- ky růst nádo- tiky _rui ·-; (p-hodnota) ru (p-hodnota)

14.den · 21.den

Seline	16.39	-	24.75	-
Doxorubicin (8)	7.34	-	12.53	-
Dox (8) + Ex-46 (200)	4.69	<0.01	8.99	0.02
Oox (8) + Ex-46 ( 25)	5.79	0.08	9.65	0.08
Salině	10.64	-	19.73	-
Doxorubicin (8)	4.18	-	6.87	-
Dox (8) + Ex-49 (200)	3.39	0.10	6.13	0.29
Dox (8)‘+ Ex-49 (100)	2.22	<0.01	3.83	0.01
Dox (8) + Ex-49 ( 50)	4.11	0.48	8.28	0.73
Dox (8) + Ex-49 ( 25)	2.88	0.03	5.04	0.06
Dox (8) + Ex-49 ( 12.5)	3.32	0.15	6.41	0.34
Salině	11.14	-	18.56	-
Doxorubicin (8)	8.38	-	13.55	-
Dox (8) + Ex-49 (200)	3.07	<0.01	4.65	<0.01
Dcx (8) + Ex-49 (100)	5.00	<0.01	7.47	<0.01
Dox (8) + Ex-49 ( 50)	5.60	0.01	11.17	0.14
Saline	11.47	-	19.96	-
Doxorubicin (8)	5.15	-	10.08	-
Dox (8) + Ex-50 (200)	4.34	0.17	6.87	0.04
Dox (8) + Ex-50 (100)	3.30	0.03	7.08	0.11
Dox (8) + Ex-50 ( 50)	4.20	0.20	8.76	0.39
Dcx (S) + Ex-50 ( 25)	4.26	0.21	7.86	0.19
Dox (8) + Ex-50 ( 12.5)	5.19	0.50	10.30	0.63
Salině	12.17	-	18.87	-
Doxorubicin (8)	7.80	-	11.05	-
Dox (8) + Ex-55 (200)	4.54	<0.01	7.15	0.02
Dcx (8) + Ex-55 (100)	5.80	0.07	12.37	0.61
Dox (8) + Ex-55 ( 50)	7.10	0.15	12.20	0.40
Dox (8) + Ex-55 ( 25)	6.39	0.15	9.31	0.25
Dox (8) + Ex-55 ( 12.5)	6.13	0.09	9.05	0.19
Salině	6.15	-	10.19	-
Doxorubicin (8)	3.81	-	5.82	-
Dox (8) + Ex-55 ( 25)	3.86	0.63	5.65	0.52
Dox (8) + Ex-55 ( 12.5)	3.94	0.68	6.03	0.65
Salině	9.27	-	15.21	-
Doxorubicin (8)	6.17	-	11.13	-
Dox (8) + Ex-61 (200)	2.57	<0.01	4.51	<0.01
Dox (8) + Ex-61 (100)	3.49	<0.01	6.86	0.01
Dox (8) + Ex-61 ( 50)	6.26	0.53	8.66	O.GS
Dox (8) + Ex-61 ( 25)	4.64	0.10	8.74	0.08
Dox (8) + Ex-61 ( 12.5)	4.67	0.01	8.88	<0.01
Salině	16.39	-	24.75	-
Doxorubicin (8)	7.34	-	12.53	-
Dox (8) + Ex-61 (200)	' 2.40	<0.01	6.13	<0.01
Dox (8) + Ex-61 ( 25)	5.51	0.05	10.20	0.16

Tabulka 2 (pokrač.)

léčivo3 ošetření	relativní růst nádoru·. 14-den	statisti- relativní; statisti-
k,y : (p-hodnots	růst?nádo- ky
i) ru'' 21.dem	(p-hodnota)
Saline		7.79		-	12.55	-
Dcxorubicin (8)	-	5.96		-	10.65	-
Dcx (8) + Ex-78	(200)	5.44		0.34	14.91	0.92'
Dox (8) + Ex-78	(100)	4.28		0.06	11.07	0.53
Ďox (8) + Ex-78	( 50)	4.38		0.10	7.09	0.13
Dox (8) + Ex-78	( 25)	5.56		0.54	10.14	0.63
Dox (8) + Ex-78	( 12.5)	6.22		0.72	10.27	0.65
Saline		11.14		-	18.56	-
Doxortbicin (8)		8.38		-	13.55
Ďox (8) + Ex-78	(200)	4.07		0.01	8.60	<0.01
Dcx (8) + Ex-78	(100)	5.30		0.01	10.72	0.06
Dox (8) + Ex-78 ( 50)	4.84		0.01	10.89	0.13
Saline		9.27		-	15.21	-
Dcxorubicin (8)		6.17		-	11.13	-
Dox (8) + Ex-62	(200)	4.27 (tox)	0.09	8.57 (tox)	0.11
Dox (8) ♦ Ex-62	(100)	4.25		0.04	6.08	<0.01
Dcx (8) + Ex-62	( 50)	5.40		. 0.29	9.47	0.19
Dox (8) ♦ Ex-62	( 25)	5.99		0.48	12.17	0.72
Dox (8) + Ex-62	( 12.5)	6.24		0.52	10.17	0.37
Saline		16.39		-	24.75	-
Doxortbicin		7.34		-	12.53	-
Dcx (8) + Ex-62	(200)	3.15		0.01	7.55	<0.01
Dox (8) * Ex-62	( 25)	6.18		0.15	9.09	0.05
Salině		9.22		-	15.15	-
Dcxorubicin (8)		9.73		-	19.57	-
Dcx (8) + Ex-92	(200)	4.54		0.02	8.71	0.03
Dcx (8) + Ex-92	(100)	4.98		0.02	10.43	0.09
Dox (8) + Ex-92	( 50)	8.09		0.46	11.75	0.26
Dox (8) + Ex-92	( 25)	5.76		0.06	12.05	0.21
Dox (8) + Ex-92	( 1?-5)	7.20		0.30	12.75	0.30

Salině	12.15	-	17.79	-
Dcxorubicin (8)	8.11	-	14.17	-
Dcx (8) + Ex-66 (200)	4.26	<0.01	7.07	<0.01
Dox (8) + Ex-66 (100)	5.73	0.07	8.17	0.04
Dcx (8) ♦ Ex-66 ( 50)	6.93	0-24	9.72	0.13
Dcx (8) + Ex-66 ( 25)	6.88	0.20	10.52	0.13
Dox (8) + Ex-66 ( 12.5)	7.01	. .. 0.27	11.97	0.31
Salině	7.99		12.58	-
Dcxorubicin (8)	6.13	-	11.58	-
Dox (8) + Ex-66 ( 50)	6.06	0.56	9.90	0.22
Dox (8) + Ex-66 ( 25)	6.33	0.67	9.89	0.23
Dcx (8) + Ex-66 ( 12,5)	5.16	0.17	7.41	<0.01
Saline	8.89		12.06	-
Dcxorubicin (8)	6.36	-	8.63	-
Dox (8) + Ex-74 ( 200)	5.90	0.28	8.92	0.70
Dcx (8) + Ex-74 (100)	4.23	0.01	6.25	0.17
Dox (8) ♦ Ex-74 ( 50)	6.61	0.47	9.18	0.71
Dox (8) * Ex-74 ( 25)	6.88	0.76	9.11	0.71
Dox (8) + Ex-74 ( 12.5)	6.47	0.62	9.00	0.79

39Tabulka 3. (pokrač-)

léčivo3 ošetření	relativníb růst nádoru - ’ 14·den“	statistiky relativní (p-hodnota) růst nádo- ru 21.den	statis- tiky (p-hodno
Sal ine		12.40	-	19.67	-
Doxorubicin (8)		7.19	-	12.05	-
Do* (8) + Ex-74	(200)	6.60	0.22	8.35	0.Ό7
Dox (8) + Ex-74	(100)	6.86	0.33	11.43	0.61
Sal ine		6.32 '	-	9.53	-
Doxorubicin (8)		6.84	-	10.84	-
Dox (8) + Ex-97,'(200)	4.86	0.10	8.27	0.13
Dox (8) + Ex-97	(100)	5.40	0.19	11.68	0.62
Dox (8) + Ex-97	( 50)	' 5.39	0.23	8.66	0.15
Dcx (8) + Ex-97	( 25)	4.23	0.02	9.12	0.20
Dox (8) + Ex-97	( 12.5)	8.64	0.92	14.09	0.92
Saline		9.28	-	15.09	-
Doxorubicin (8)		7.27	-	12.60	-
Dox (8) + Ex-97	(200)	7.26	0.55	12.62	0.56
Dox (8) + Ex-97	(100)	7.80	0.68	13.13	0.57
Dcx (8) + Ex-97	( 50)	8.37	0.74	12.91	0.53
Dox (8) + Ex-97	( 25)	8.31	0.80	11.60	0.35
Dox (8) + Ex-97	( 12.5)	10.52	0.96	14.89	0.79
Salině		9.99	-	13.39	-
Doxorubicin (8)		5.74	-	10.41	-
Dox (3) + Ex-81	(200)	5.38	0.34	8.71	0.14
Dox (8) + Ex-81	(100)	7.75	0.97	11.57	0.71
Dox (8) + Ex-81	( 50)	5.33	0.33	10.88	0.60
Dcx (8) + Ex-81	( 25)	5.31	0.2S	10.51	0.49
Dox (8) * Ex-81	( 12.5)	5.47	0.43	9.52	0.30
Saline		9.28	-	15.09	-
Doxorubicin (8)		7.27	-	12.60	-
Dox (8) + Ex-81	(200)	9.16	0.88	12.03	0.42
Dox (8) + Ex-81	(100)	8.82	0.8S	14.37	0.75
Dox (8) + Ex-81	( 50)	8.83	0.88	12.11	0.47
Dcx (8) + Ex-81	( 25)	10.22	0.96	20.00	0.66
Salině		*12.14	-	24.57	-
Dcxorubicin (8)		7.76	-	12.44	-
Dox (8) + Ex-67	(200)	4.27	<0.01	8.55	<0.01
Dox (8) ♦ Ex-67	(100)	4.16	<0.01	7.76	<0.01
Dox (8) + Ex-67	( 50)	5.12	0.03	• 11.52	0.36
Dox (8) + Ex-67	( 25)	5.27	0.04	11.73	0.35
Dox (8) * Ex-67	( 12.5)	5.00	0.02	9.81	0.12
Saline		16.39	-	24.75	-
Doxorubicin (8)		7.34	-	12.53	-
Dox (8) + Ex-67 (25)	5.62	0.01	12.54	0.26
Salině		14.56	-	15.95	-
Doxorubicin (8)		4.76	-	7.70	-
Dox (8) + Ex-64	(200)	3.13	<0.01	5.39	0.03
Dox (8) + Ex-64	( 25)	5.62	0.75	5.14	0.02
Dox (8) + Ex-64	( 12.5)	5Λ2	0.77	7.23	0.24

Tabulka 3 (pokrač.) léčivo³ ošetření relativní^b statistiky⁰ relativní statisrůst nádo- (ρ-hodnóta)· růst nádo- tiky ^rL1 ru (p-hodnota

14.den 21.den

Saline	6.49	-	10.18	-
Doxorubicin (8)	4.66	-	7.70	-
Dox (8) + Ex-64 (200)	2.91	<0.01	5.87	0.05
Dox (8) + Ex-64 ( 25)	3.86	0.06	6.21	0.09
Dox (8) + Ex-64 ( 12.5)	4.65	0.46	6.89	0.22
Saline	7.79	-	12.55	-
Doxorubicin (8)	5.98	-	10.65	-
Dox 8 + Ex-64 (200)	4.86	0.13	9.46	0.38
Dox 8 + Ex-64 (100)	4.06	0.05	8.00	0.27
Dox 8 * Ex-64 ( 50)	5.17	0.40	9.02	0.46
Dox 8 + Ex-64 ( 25)	6.61	0.54	11.48	0.82
Dox 8 + Ex-64 ( 12.5)	8.46	0.99	13.94	0.94
Sal ine	11.14	-	18.56	-
Doxorubicin (8)	8.38	-	13.55	-
Dox (8) + Ex-64 (200)	Deed	Deed	Dead	Deed
Dox (8) + Ex-64 (100)	5.03	<0.01	8.27	<0.01	-
Dox (8) + Ex-64 ( 50)	7.15	0.19	12.82	0.36
Salině	8.63	-	10.80	-
Doxorubicin (8)	4.72	-	7.27	-
Dox (8) * Ex-72 ( 200)	3.54	0.C8	5.70	0.23
Dox (8) ♦ Ex-72 (100)	2.73	<0.01	5.C6	0.07
Dox (8) + Ex-72 ( 50)	5.67	0.87	12.45	0.96
Dox (8) + Ex-72 ( 25)	4.14	0.32	7.65	0.63
Dox (8) + Ex-72 ( 12.5)	5.72	0.90	9.58	0.87
Salině	11.14	-	18.56	-
Doxorubicin (8)	8.38	-	13.55	-
Dox (8) + Ex-72 (200)	4.56	<0.01	8.13	<0.01
Dox (8) ♦ Ex-72 (100)	7.15	0.17	13.08	0.43
Dox (8) + Ex-72 ( 50)	5.85	0.02	10.01	0.04
Salině	• TO. 03	-	15.78	-
Doxorubicin (8)	5.46	-	8.72	-
Dox (8) + Ex-72 (200)	4.28	0.04	7.48	0.21
Dox (8) + Ex-72 (100)	6.46	0.91	11.99	0.98
Dox (8) + Ex-72 ( 50)	5.68	0.68	9.82	0.75
Dox (S) + Ex-72 ( 25)	7.11	0.98	11.57	0.96
Salině	8.35	-	12.08	-
Doxorubicin (8)	6.69	-	10.17	-
Dox (8) + Ex-27 (150)	Toxic	-	Toxic	-
Dox (8) + Ex-27 (100)	4.12	<0.01	6.39	0.01
Dox (8) + Ex-27 ( 50)	5.63	0.18	9.55	0.46
Dox (8) + Ex-27 ( 25)	5.71	0.20	10.30	0.61
Dox (8) + Ex-27 ( 12.5)	5.68	0.15	9.66	0.40
Salině	8.35	-	12.08	-
Doxorubicin (8)	6.69	-	10.17	-
Dox (8) + Ex-75 ( 200)	4.95	0.02	7.70	0.04
Dox (8) + Ex-75 (100)	3.76	<0.01	6.74	0.01
Dox (8) + Ex-75 ( 50)	5.60	0.18	9.12	0.34
Dox (8) + Ex-75 ( 25)	5.92	0.26	11.05	0.74
Dox (8) ♦ Ex-75 ( 12.5)	8.10	0.88	14.21	0.96

Tabulka 3 (pokrač.)
léčivo3 relativní statistiky0 ošetření růst nádo- (p-hodnota) ru 14.den	relativní růst nádoru 21.den	statis.ti- ky (p-hodnota)
Salině 6,32		9,53
Doxorubicin; (8) 6,84	-	10,84	-
Dox(8)+Εχ-89(200) 2,59	< 0 r01	6,04	<0,01
Dox<(8 )+Ex-89 (1 00) 7,46'	0,43	11,04	0,40
Dox(8)+Ex-89(50) 4,50	0,04	9,40	0,31
Dox<(8)+Ex-89 (25 ) 5,17		8,02	0,09
Dox(8)+Sx-89(12,5) 5,4?	0,10	10,70	0,41

)

Doxorubicin se podává v jediné intravenožní dávce^-:· a MDR-1 reverzní činidla se podávají subkutánnš v čase-2 hodiny a +2 hodiny vzhledem k ďávce doxorubicinu. Léčiva se podávají pouze· v den +1 po ustavení nádoru (den 0 testového období).

průměrná hmota nádoru; v dem 14,21 'Relativní růst. nádoru= průměrná hmota nádoru v den 0

c)

Statistické' analýza log relativního růstu nádoru, srovnání ošetření s doxorubicinem + MDR-1 reverzním činidlem k ošetření s ekvivalentní dávkou; samotného doxorubicinu^-. p-hodnota (p _ 0,05) indikuje významnou redukci v relativním růstu nádoru u skupin s kombinovanou terapií.

Dox = doxorubicin Salině = solný roztok Ex = příklad

-42Tyto výsledky ukazují, že sloučeniny- popsaná v nárocích, v kombinaci s vinkristinem, jsou účinná pro prodlouženi života myší s nádory, které jsou rezistentní k léčbě vinkristinem. Dále sloučeniny popsané v nárocích, v kombinaci s doxorubicinem, jsouj účinné při redukci velikosti nádorů u myší, které nesou nádory rezistentní k léčbě doxorubicinem- Jak vinkristin tak doxorubicin se používají klinicky 3fc léčbě MDR rezistentních nádorů.

Účinné složky terapeutických přípravků a nová sloučenina podle vynálezu jsou účinnými modulátory rezistence vůči více léčivům, běžně vykazované lidskými a zvířecími nádory, která vzniká z nadměrná exprese? MDR-1 genu. Při podáni v kombinaci s konvenční-' ántineoplastickou chemo terapii tyto sloučeniny obnovuji citlivost léčiva k nádorům: s rezistencí vůči více léčivům u zvířat a lidí,, což vede k významnému prodloužení doby života u leukemických živočichů a k významnému sníženi růstu- lidských pevných nádorů inplantovaných pokusným zvířatům. Preferovaný dávkový režim pro: optimální výsledky by měl být od asi 2? mg do asi 200 mg na kilogram tělesné hmotnosti na den a tyto dávkové jednotky- se používají tak, že se během 24hodinové periody podává celkem od asi 1,75 g do asi 14 g účinné sloučeniny u subjektu s tělesnou hmotností asi 70 kg. Tato dávka může být upravena tak, aby poskytla optimální terapeutickou odezvu- Například' může být denně podávána několik rozdělených dávek, nebo celková denní dávka může být podávána pomalou konstantní infuzl, nebo- může být dávka může být dávka poměrně snížena podle závislosti na terapeutické situaci. Značnou praktickou výhodou je, že účinné sloučeniny mohou být podávány orálně, subkutánně, intraperitoneálně nebo intravenozně-43$činné sloučeniny mohou být podávány orálně, například s inertním ředidlem nebo- s jedlým nosičem, nebo mohou být uzavřeny ve tvrdé nebo měkké želatinové kapslí, neber mohou být slisovány do tablet, nebo mohou být inkorporovány přímo do potravy. Pro orální terapeutické podání' mohou být inkorporovány do přísad a použity ve formě tablet, které se polykají, bukálních tablet, trochejů, kapslí', elixírů,, suspenzí, sirupů, oplatek: a podobně, lakové: přípravky a kompozice by měly obsahovat alespoň 0,1 % účinné sloučeniny. Procenta ve směsích, a přípravcích? se samozřejmě mohou měnit a obvykle mohou být mezi asi 2 a asi 60 % hmotnosti jednotky. Množství' účinně sloučeniny v takových terapeuticky použitelných přípravcích' bude takové', aby bylo dosaženo vhodné dávky. Preferovaně kompozice nebo přípravky podle předloženého vynálezu: se? připraví tak, že orální' dávková jednotková forma obsahuje mezi 200 mg a 3,5 g účinné sloučeniny..

Tablety, trocheje, pilulky, kapsle a podobně mohou také obsahovat následující složky: pojivo jako je tragantová guma, akáciii, kukuřičný škrob nebo želatinu; přísady jako je dikalciumfosfát; desintegračníí činidlo jako je kukuřičný škrob, kyselina alginová a podobně^ lubrikanty jako je stearát horečnatý'; a sladidla jako je sacharoza, laktóza nebo sacharin, nebo příchutě jako je mátový olej_r olej’ z libavky položené: nebo třešňovou příchu£. Je-li dávkovou jednotkou kapsle, může tato obsahovat navíc k materiálům uvedeného typu, kapalný nosič.

Různé jiné materiály mohou být přítomny jako potahy nebo pro:· jinou modifikaci fyzické formy dávkové jednotky. Například tablety, pilulky nebo kapsle mohou být potaženy šelakem, cukrem nebo oběma. .Sirup nebo elixír může obsahovat účinnou sloučeninu, sacharozu jako sladidlo, methyl· a prop.ylparabeny jako ochranné látky, barvivo a ochucovadlo jako je třešňová nebo pomerančová příchuí. Samozřejmě, jakýkoliv? materiál použitý při přípravě jakékoliv jednotkové dávkové formy by měl být farmaceuticky čistý a v podstatě

-44netoxicky v použitých množstvích, ^avíc.· může být účinná sloučenina inkorporována do přípravků s udržovaným uvolňováním:..

Očinné sloučeniny mohou· být také podávány parenterálně nebo.· intraperitoneálně. Roztoky účinné, sloučeniny jakovolné báze nebo farmakologicky přijatelné' solí mohou být připraveny v glycerolu, kapalných polyethylenglykolech a jejich směsích a v olejích. Za obvyklých podmínek skladování a použití obsahují tyto přípravky ochranné látky pro zabránění růstu mikroorganismů.

farmaceutické formy vhodné pro injekční použití·., zahrnují' sterilní vodné roztoky nebo disperze a sterilní prášky pro přípravu sterilních injekčních roztoků nebo disperzí.

Ve včech případech, musí být forma sterilní a musí být tekutá pro to, aby ji bylo možná snadno vstřikovat existujícími stříkačkami, lusí být stabilní za podmínek výroby a skladování a musí být chráněna proti kontaminaci mikroorganismy jako jsou bakterie a houby. Nosič může být rozpouštědlo: nebo medium pro disperzi,, obsahující, například vodu, ethylalkohol, polyol (například glycero.l, propylenglykol, kremofor a. kapalný polyethylenglykol a podobně), jejich vhodné směsi a rostlinné oleje. Vhodná tekutost může být udržována, například použitím potahu jako je lecitin, při zachování požadované velikosti částic? v případě disperze a použití surfaktantů. Prevence přeď působením? mikroorganismů může být provedena různými antibakteriálními a antifungálními činidly, například? parabeny, chlorrbutanolem, fenolem, kyselinou sorbovou, thimerosalem a podobně. V mnoha případech budou výhodně zahrnuta isotonická činidla, například cukry nebo chlorid sodný. -Prodloužené absorpce injekčních kompozic může být dosaženu použitím takových činidel, která v kompozici prodlužují absorpci, jako je například monostearát hlinitý a želatina.

-45Sterilní injekční' roztoky se připraví.' inkorporacf účinné sloučeniny v požadovaném množství do vhodného rozpouštědla s různými dalšími složkami uvedenými .výše, podle potřeby, s následující sterilizací filtrací. Obecně se disperze připraví inkorporacf různých sterilizovaných účinných složek do- sterilního vehikula, které obsahuje bázické disperzní medium: a požadované další složky, jak byly výše uvedeny. V případě sterilního prášku, pro přípravu- sterilních injekčních roztoku jsou výhodnými metodami přípravy vakuové sušení' a vymrazovánf, které poskytují prášek účinná složky plus jakékoliv další' požadované složky z předem sterilně filtrovaného roztoku těchto složek.

Použitý výraz farmaceuticky přijatelný nosič zahrnuje jakákoliv a všechny rozpouštědla, disperzní media, potahy, antibakteriální a antifungálnf činidla, isotonická a absorpci prodlužující činidla a podobně. Použití takového media a činidel pro farmaceuticky aktivní substance je v oboru velmi dobře známé'. V úvahu nepřipadají pouze jakákoliv? konvenční media nebo činidla, která jsou nekompatibilní s účinnou složkou, Do přípravků mohou být zahrnuty také doplňkové účinné složky.

Zvláště je výhodné? formulovat parenterální přípravky v dávkové jednotkové formě pro snadné podání a jednotnost dávky. Forma dávkové jednotky jak je zde použita označuje fyzicky oddělená jednotky vhodné jako jednotky dávky pro subjekt, kterým je savec, který je léčen. Každá jednotka obsahuje předem stanovené množství účinného materiálu vypočteného pro získání požadovaného terapeutického efektu ve spojení s požadovaným farmaceutickým nosičem. Specifikace nových dávkových jednotkových forem podle vynálezu- jsou diktovány a jsou^- přímo závislé na a) unikátních

- 4 6charakteristikách účinného materiálu a partikulárním terapeutickém účinku, kterého má být dosaženo a b) omezeních v oboru kompaundovárrí-' takového účinného materiálu pro léčení' choroby v živém subjektu, který je postižen chorobným stavem:, při kterém je jeho tělesné zdraví zhoršenu tak, jak je zde podrobně popsáno.

Základní účinná složka se kompaunóuje pro obvyklé a účinné podání v účinných množstvích se vhodným farmaceuticky přijatelným nosičem do dávkové jednotky, jak zde je popsáno. Jednotková dávková forma může, například, obsahovat základní účinnou sloučeninu v množstvích od asi 200 mg do asi 3,5 g, s asi 300 mg: až 3,0 g považovanými za výhodné'. Vyjádřeno v poměrech je účinná sloučenina obecně přítomna v množství' od asi 200 mg: do asi

3,5- g/ml nosiče. V případě, že přípravky obsahují, doplňkové účinné složky, jsou dávky stanoveny odkazem na obvyklou dávku a způsob podání uvedené složky.

Regrese a zmírnění' rakovin se dosáhne například: použitím· intraperitoneálního podání. Jediná' intravenozní dávka, pomalá konstantní infuze nebo opakované- denní dávky je možno podávat. Trvání léčby bude záviset na chemoterapeutickém činidle, se kterým jsou: sloučeniny podle nároku 1 podávány.

Je také možné vypustit, jednu denní dávku^- nebo ji podat v jiných dnech nebo méně často. Jak je zřejmé z dávkového režimu je množství základní účinné složky, které je podávána, množství, které je dostačující k dosažení regrese a zmírnění rakoviny a podobně, za nepřítomnosti nadměrných škodlivých vedlejších účinků cytotoxickéha charakteru u hostitelů rakoviny. Jak je zde použita rakovina znamená zde krevní malignity jako je leukemie, jakož i jiné pevné a nepevné malignity jako: jsou melanokarcinomy,

-47plicní karcinomy a tumory prsů. Fři Regresí a zmírněním je míněno ukončení nebo retardace růstu nádoru ne a> jiná manifestace choroby ve srovnání s průběhem choroby- za nepřítomnosti léčby.

-48Náslečující neomezující příklady ilustrují' přípravu reprezentativních sloučenin podle vynálezu.

Přlklaav provedení vynálezu

Příklad 1

3,4-Dimethoxy-^-/(4-methylfenyl)thio/benzen-acetonitril

Směs 4,12 g -chlor-3,4-dimethoxybenzenacetonitrilu (US patent 4833162), 2,48 g p-thiokresolu, 2,76 g uhličitanu draselného a 100 ml acetonitrilu se míchá přes noc při 65 -;G. Po odfiltrování solí se reakční směs zahustí •4·.

ve vakuu a získá se zlatý olej. Tento se rozpustí v minimálním množství ethylacetátu a zředí se 3 objemy hexanu. Naočkování poskytne 3,81 g požadované sloučeniny jako světle žlutých krystalůPříklad 2 \ -(3-Chlorpropyl)-3,4-dimethoxy-X. -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrii

K. roztoku 2,39 g 3,4-dimethoxy-<~( -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu ve 21 ml dimethylsulfoxidu se přidá' 0,316^ g 6ΰ%> hydridu sočného: v olej:i. Směs se míchá 1,5 hodiny. K výslednému roztoku se přidá 1,32 g 1-brom-3-cblorpropanu: a tato reakční směs se míchá 3 hodiny a nalije do 100 ml ledové vody. Tato směs se dvakrát extrahuje diethyletherem a spojené organické extrakty ae suší síranem hořečnatým. Organický roztok se filtruje a zahuštěním ve vakuu poskytne požadovanou sloučeninu jako zlatavý olej.

-49Príklad 3;

-(3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy- -/(4methylfenyl)thio/-2(1 H)-isochinolinpentannitril

K roztoku 3,20. g Cl -(3-chlorpropyl)-3,4-dimethoxyo(. -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu ve 30 ml dimethylformamidu, pod argonem, se přidá 2,78 g uhličitanu draselného, 79,5 mg jodidu draselného a 1,84 g hydrochloridu 6,.7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu. Reakční směs se pak zahřívá na 95 °^& po 4 hodiny, pak se nechá vychladnout a míchá se při teplotě místnosti. 12 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ze směsi za vakua při 45 °C. Zbytek se rozdělí mezi diethylether a vodu. Organický roztok se suší síranem horečnatým', filtruje a odpařením se získá' surový produkt·. Tento produkt se chromatografuje na sloupci silikagelu a eluuje se? ethylacetátem, získá se 1,6 g požadovaného produktu po odpaření rozpouštědla, jako oranžová guma.

MS(CI): m/z 533. (ME⁺).

Elementární analýza pro:

vypočteno 69,32 % C, 6,85 % H, 5,22 % E, 5,96. £ S:

nalezeno 69,38 % C,. 6,59 % E, 5,15 % E, 6,06 % S.

Příklad 4

Monohydrochlorid cý - (3,4-dimethoxyfenyl )-3,4-dihydro-6,7dimethoxy- $ -/(4-methylfenyl) thio/-2 (1 Hí-isochinolinpentannitrilu

K roztoku 1,43 S / ~ (3,4-dimethox,yf enyl )-3,4-dihydro6,7-dimethoxy- -/(4-methylfenyl)thio/-2(IH)-isochinolinpentannitrilu-ve 40 ml diethyletheru, za míchání, se přidá 0,617 mi 4,71M roztoku chlorovodíku v absolutním ethyl-50alkoholu. Reakční směs se míchá při uzavření 15 hodin. Titulní produkt se pak oddělí filtrací, promyje se etherem a sušením za vakua se získá 1 ,32 g požadovaného· produktu ve formě růžových krystalů.

t.t. 147' - 150 °C^: (rozkl-)

Elemetární analýza pro H^^O^SCl vypočteno 65,42 % C, 6,55 % Η, Φ,92 % ΓΣ, 6,23 % Cl, 5,63. % S nalezeno 65,21 % C, 6,78 % ΪΓ, 4,84 % N, 6,12 % Cl, 5,33. % S:

Příklad 5

-(3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dihydroxy-1 - methyl- ^-/(4-methylfenyl)thio;/-2 (1 H)-isochinolinpentannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 1,0 g<^-(3chlorpropyl )-3,4-dime thoxy-ý^ -/(4-methylfenyl) thio/benzen.acetonitrilu: a 0,76 g 1-methyl-6,7-dihydroxy-1,2,3,4tetrahydroisochinolinu. Získá se takto 0,253 g požadovaného produktu ve formě béžové gumy.

Elementární analýza pro C^qH-^N^O^S 0,5 H^O vypočteno 68,28 % C, 6,69 % E, 5,31 % E, 6,07 % S.

nalezeno 68,35 % C, 6,67 % E, 5,00 % E, 5,84 % s.

Příklad 6

Monohydrochlorid -(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7dihydroxy-1-methyl-Ά-/(4-methylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolin-pentanitrilu

Opakuje se postup z příkladu 4 za použití 0,19 g -(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dihydroxy-1methyl-^-/(4-methylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolinpentan-51nitrilu. Získá se tak 0,144 g požadovaného produktu jako světlehnědé pevné látky, t.t. 123 - 126 °C

Elementární analýza pro C^H^N^^SCl 0,75 H₂O vypočteno 63,37 % C, 6,47% H, 4,93. % N, 6,24% Cl, 5,63% S nalezeno 63,6H % G, 6,21 % H, 5,0Q % N, 5,S0 % Cl, 5,57 % S.

Příklad 7 (λ -(4-Chlorbutyl)-3,4-dlmethoxy-ok-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrii

Opakuje se postup z příkladu 2 za použití 3,3 g 4-dimethoxy-^-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a

2,23 g 1 -c£lor-4-brombutanu. Získá se tak 3,18 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

^]H NMR (CDC1₃)^ 7,25 (d, 2H, J=8, 2MePhH), 7,07 (d, 2H, J=8,2M_ePhH), 6,55 (d, 1 H, J=8, A_rH), 6,89 (s, 1 H, ArH),

3,88 (_s, 3H, OCff^), 3,48 (V,. 2H, Cí^Cl), 2,32 (s, 3H, CH Ph), 2,22 (m, 2H, 3-CH₂>, 1,80 (m, 2H, 2-CH₂), 1,68 (m, 1H,

1-CH^), 1 ,45 (η, 1H, 1-Cí^).

Příklad 8 χ- (3,4-jDime thoxyf enyl )-6,7-dimethoxy--/(4-methylfenyl)thio/-4-piperidinoi-2-isochinolinhexannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 3,11 g^-(4chlorobutyl)-3,4-óimethoxy-^ -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 1,.84 g hydrochloridu 6,7-dimethoxy-1 J 2,3,4tetrahydroisochinolinu'·. Získá se tak: 1 ,83 g požadovaného produktu: jako hnědého oleje.

MS(CI):m/z 547 (MH⁺).

^MR (CDC1₃)í ζ 7,24 (d, 2H, J=8, WePhH), 7,0 7 (d, 2H, J=8,

MePhHj, 6,96S (d, 1H, 3=8,4, ArH), 6,87 (s, 1H, ArH),

6,74 (d,. 1H, J=8,4, ArH), 6,58, 6,50 (2s, 2H, IQAtH),

3,84 (m, 1 2H, OCH^), 3,51 (s, 2ff, IQ 1-CH₂), 2,78',. 2,66 (2t, 4ff, IQ 3.+4-Cff₂), 2,45 (t, 2H, e-CH₂), 2,32 (s, 3H, ArCH^), 2,26 (m, 2H, d-Cff₂), 1 ,60 (m, 3H, g+b-CH₂), 1,35 (ta,. 1H, b-CH₂).

Příklad 9

Λ - (3,4-Dimethoxyfenyl )-3,4-dihydro-ó, 7-dimethoxy-£\ /(4-methylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolinbutannitril

Opakuje se postup z příkladu 3; za použití' 3,3 g <\-(2 chloreth.y 1.)-3,4-dimethoxy- X-/(4-methylf enyl) tftio/benzerr.acetonitrilu· a 1,14 g hydrochloridu 6,7-dimethoxy-1,2,3,4tetrahydroisochinolinu. Získá se tak 0,311 g požadovaného produktu jako hnědého oleje.

MS(FAB): m/z 519 (M+H).

Elementární analýza pro ^σ30^34^2θ4θ 0,5 H₂O vypočteno 68,28 % C, 6,99 % ff, 5,31 % N, 6,80 % 5 nalezeno 68,56% C_ř 6,55% H, 5,21 % Ν', 5,73% S.

Příklad 10 ‘A - (3-Chlor-2-methylpropyl )-3,4-dimethoxy-<X -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitril

Opakuje se postup z příkladu 2 za použití 3,79 g 4dimethoxy-o<-/(4-methylfenyl)-thio/benzenacetonitrilu a 3,26' g 1-brom-2-chlor-2-methylpropanu·. Takto se získá 4,13 g požadovaného produktu; jako světležlutého oleje. MS(LR): m/z 407 (M+Nffp.

¹ HNMR(CDC1₃): $ 7,24-5,74 (tn, 7H, ArH), 3,89-3,85 (m, 6H, OCH₃), 3,65-3,14 (2dd, 2H, CH^Cl), 2,70-2,45 (m, 1H, 2-CK)

-532,33. (s, 3H, CffgPh), 2,22-1,95· (m, 2E, 1-CE₂), 1,12, 0,87 (2d, 3H, CHg) (60/40 směs diastereomerů).

Příklad 11 i?\ - (3>4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-gamamethyl- / -/(4-methylfenyl)thio/-2(1 H)-isochinolinpentannitril

Opakuje se postup z příkladu 2 za použití 4,0 gc<.-(3chlor-2-methylpropyl )-3,4-dimethoxy-o; -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 3,5 g hydrochloridu’-6,7-dimethoxy1,2,3,4-tetrahydroisoohinolinu. Získá se tak: 0,985 g požadovaného produktu jako žlutá pěny.

MS(Hi res): m/z vypočteno pro Cg^HggN^O^S 1/SH^O 546,2553.

nalezeno 547,2625

Elementární analýza pro ^32^33^2^4⁸ ^⁸ ^2θ vypočt. 70,01 % C_ř 7,02 % H, 5,10 % N, 5,84 % S nalezeno $9,68 % C, 7,17 % H, 4,97 % Ν', 5,83 % 8.

Příklad 12

Methylester kyseliny -(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro6,7-dimethoxy-Λ-/(4-methylfenyl)thio/-2(IHý-isochinolinpentanové

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 3,0 g -(3-chlorpropyl)-3,4-dimethoxy- -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu. Získá se tak 0,84 g požadovaného produktu jako bezbarvé skelné látky.

MS (Cl): m/z 565 (M⁺).

Elementární analýza pro C^ff-^NOgS vypočteno 67,94 % C, 6,95% H, 2,48 % Ν', 5,67% S nalezeno 67,89 % C, 6,99 % H, 2,31 % N, 5,46 % S.

-54Príklad 13 i\-(11-Bromundecyl)-3,4-dimethoxy-^ -/(4-aeth.ylf enyl) thic/benzenacetonitrii

K roztoku 2,50 g 3,4-dimethoxy-(/-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu v 50 ml tetrahydrofuranu pod atmosférou argonu za míchání se přidá 0,36? g 6Cfé hydridu sodného v oleji. Po 1,5 hodině se přidá 10,0 g 1,11-dibromundekanu a v míchání se pokračuje 43 hodin. Reakční směs se odpaří a zbytek se rozdělí mezi dieth.ylether a vodu. Organická fáze se oddělí, promyje se vodou, suší se síranem horečnatým, filtruje a po odpaření se získá olej. Olej se čistí sloupcovou chromatografií' za použití hexan/etheru (1:1) a získá se 3,25^- g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

MS (Cl): m/z 532 (MH⁺).

Elementární analýza pro C-^H^NOgS vypočteno 63,15 % C, 7,19 % H, 2,63 % H, 15,00 % Br, 6,02 % S nalezeno 63,12 % C, 7,17 % H, 2,52 % N, 14,77 % Br, 6,02 % S

Příklad 14

-(3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-7\ -/(4methyIfenyl)thio/-2(1 H)-isochinolintridekannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 3,14 g;X-(11bromundecyl)-3,4-dimethoxy--/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 2,03 g hydrochloridu· 6,7-dimethoxy-1,2,3,4tetrahydroisochinolinu. Získá se tak 2,2 jg požadovaného produktu jako žlutého oleje..

MS (Hi res) : m/z vypočteno pra ^9^52^2^^{3 6}44,3648 nalezeno 645,3730 (M+H).

-55Elementární analýza pro 1/2^0 vypočteno 71 ,63 % G, 8,1 7 % IT, 4,29 % N, 4,90 % S nalezeno 71 ,31 % G, 8,19% T, 4,10 % N, 4,71 % S.

Příklad 15

J. -(5-Chlorpentyl)-3,4-dimethoxy-c\-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrii

K míchanému roztoku 5,00 g 3,4-dimethoxy-?\-/(4methylfenyl) thio/benzenacetonitrilu v 50 ml N.,N-dimethylformamidu; se přidá 0,73 g 60% hydridu sodného v oleji. Po

1,5 hodině se ke vzniklému roztoku přidá 4,65' g 1-brpm-5chlorpentanu a v míchání se pokračuje 3 hodiny. Reakční směs se nalije dOVQdy a dvakrát se extrahuje diethyletherem. Spojené organické extrakty se suší (síran hořečnatý) a zahuštěním ve vakuu se získá zlatavý olej. Purifikací pomocí chromatografie na silikagelu za použití diethyletheru/hexanu (2:3.) se získá 6,07 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

MS (Cl): m/z 421 (M+NH^).

vypočteno pro ^22^25^^2^^^ 1/16 T^O

65,22 % C, 8,17 % H, 3,46 % N, 8,75 % Cl, 7,82 % S nalezeno

64,92 % G, 6,49 % H, 3,46 % N, 8,19 % Cl, 8,22 % S.

Příklad 16

S/ -(3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-/_x-/(4-methylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolin-2-heptannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 2,1 g

-(5-chlorpentyl)-3,4-dimethoxy-J\-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 1,04 g 1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu.

Získá se tak 1,05 g požadovaného produktu jako světlehnědé gumy.

-56Ms(Hi res): m/z vypočteno pro : 500,2498 nalezeno 501,2574 (M+H).

Elementární analýza pro θ3ΐ^35^Ν2θ2^** vypočteno 74,36 % C, 7,25 % H, 5,59 % Ν', 6,40 % S nalezeno 74,10 % C, 7,40 % ff, 5,46 % N,. 6,15% S.’.

Příklad 17 ó\-(3,4-Dimethoxyfenyl )-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-tf^ -/(4methylfenyl)thio/-2(1 H)-isochinolinheptarmitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití' 4,65 g X -(5-chlorpentyl )-3,4-dimethoxy-řK-/(4-methylf enyl)thio/benzenacetonitrilu a 4,25 g 6,7-dimethoxy-1 ,2,3,4-tetrah.vdrois ochinolinu. Získá se tak 3,67 g požadovaného produk tu jako světlehnědé gumy..

MS(Hi res): m/z vypočteno pro C^H^q^O^S 0,5^0 560,2209 nalezeno 561,2287 (M+H).

Elementární analýza pro C^H^q^O^S 0,5^0 vypočteno 69,77 % C, 7,1 7 % H, 4,58 % N, 5,33 % S nalezeno 69,565 % C, 7,25 % H, 4,92 % N, 5,63 % S.

Příklad 18

Monohydrochlorid ¢/.-(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7dimethoxy- (X -/(4-methylfenyl) thio/-2 (1 H)-isochinolinheptan nitrilu

Opakuje se postup z příkladu 4 za použití 0,2 g -(3,4-dimethoxyfenyl )-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-^ X'

-57/(4-meth.ylf enyl)thio/-2(1H)-isochinolin-heptannitrilu.

Získá se 0,184 g požadovaného produktu jako bílých krystalů, t.t. 87 - 90 °C.

Elementární analýza pro °33^H40^N2°4^{S HC1 H}2° vypočteno 64,42 % C, 7,04 % H, 4,5? % N, 5,76 % Cl, 5,20 % S nalezeno 64,37 % G, 6,91 % ff, 4,43 % Ν’, 5,87 % Cl, 5,25 % S.

Příklad 19 ^-(5-Bromoktyl)-3,4-dimethoxy-ý_K-/(4-methylfen.yl)thio/benzenacetonitrii

Opakuje se postup z příkladu 13 za použití 0,869 g

3,4-dimethox.y- ;v-/( 4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu; a 1,6 ml 1,8-dibromoktanu. Získá se tak 0,544 g požadovaného produktu jako světležlutého oleje.

MS(Cl):m/z 490 (MH⁺).

¹H NMR (CDCl-j): 7,24 (d, 2ff, J=8, 2MePhH), 7,06 (d, 2ff,

J=8, 2MePh), 6,96 (d, 1H, J=8,4, ArH), 6,88 (s, 1H, ArH),

6,77 (d, 1H, J=8,4, A_rH), 3,88, 3,83 (2s, 3ΤΓ, OCH₃), 3,39 (t, 2ΓΓ, CH₂3r), 2,32 (s, 3H,. CH^It), 2,18 (m, 2H, 7-CH₂),

1,82 (m, 2H, 6-CHg), 1,55 (m, 1H, l-CHp, 1,38 (m, 3H, 1+5-CHp, 1,27 (m, 6H, 2+3+4-0^).

Příklad 20

- (3, 4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-3 /(4-methylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolindekannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 0,836 g (5-bromoktyl )-3,4-dimethoxy- -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 0,675 g 6,7-x3imethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu. Získá se tak 0,422 g požadovaného produktu; jako hnědé gumy.

-58MS'(Hi res ) : m/z vypočtena pro. 1/4hexan 602,3179 nalezeno 603,3254(M+H).

Elementární analýza pro ^6¾¾°4^S l/4hexan:

vypočtena 72,14 % C, 7,99 % H, 4,49 & N/ 5,13. % S nalezeno 72,44 % C, 8,13;% H,. 4,42 % Ny 5,53^:. % S.

Příklad 21

C\ -(3,4-Dimethoxyfenyl)-7,8-dihydro--/(4-methylfenyl)thio/-1,3-dioxolo/4,5-g/chinolin-6 ^Hj-heptannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 0,854 g ý -j^-chlorpentyl)-3,4-dimethoxy-o\-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 0,677 g 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu. Získá se tak 0,701 g požadovaného produktu.

MS (Hi res)im/z vypočteno pro 2¾⁰ 544,2396 nalezeno 545,2478(M+H).

Elementární analýza pro·· ^2^36^2^^ ^H^O vypočteno 66,18 % C, 6,94 % H, 4,83 % N, 5,52 % S nalezeno 66', 1 7 % C, 6,92 % H’, 4,58 2 N, 5,36 % S.

Příklad 22 ý - (3,4-Die thoxyf enyl) -3,4-dihydro-6-methoxy-_v/^ -/(4-me thyi fenyl)thio/-2 (1 H)-isochi'nolinheptannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 2,05 g

-(5-chlorpentyl)-3/4-dimethoxy-j/ -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 1,52 g 6, 7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisachinoliu. Získá se tak 1,25 g požadovaného produktu jako hnědého oleje.

-59MS(FA3): m/z 531 (M+H).

Elementární analýza pro ^C32^H38^N2°3^S vypočteno 72,42 % C, 7,22 % H, 5,28 % ΝΪ, 6,04 % S nalezenu 72,17% 0, 7,45% H, 4,94 % Ny 5-,93.% S.

Příklad 21

- (5-Joďpentyl )-3,4-dimethoxy-^ -/(4-methylfenyl) thio/ benzenacetonitrii

Směs 0,86 g- b\-(5-chlorpentyl)-3,4-dimethoxy-<\-/(4· methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu, 3,2 g jodidu sodnéh a 10 ml acetonu se zahřívá pod ref luxem přes noc?, chrání se před světlem. Těkavé látka se odstraní ve vakuu a ke zbytku se přidá 30 ml diethyletheru. Nerozpustné látky se spojí a těkavá látky se odstraní ve vakuu. Zbytek se čistí sloupcovou chromatografií za použití hexan/ethylacetátu; (2:1) a získá se 1,02 g požadovaného produktu ja ko čirého oleje.

MS(CI):m/z 496 (M+H).

Příklad 24

Jk - (3,4-Dimethoxyfenyl )-1,3-dihydro-^ —/ (4-meth.ylfen.yl) thio/-1 ,3-dioxo-2H-isoindol-2-heptannitril

Směs 6,12 g p(-(5-jodpen.tyl)-3,4-dimethoxy-c\-/(4methylfenyl) thio/benzenacetonitrilu a 2,22 g, ftalimidu araselnéhcc a 50 ml N ,N-dimethylf ormamidu. se zahřívá na parní lázni 2 hodiny. Peakční roztok se zahustí ve vakuu a zbytek se rozdělí’ mezi dieth.ylether-vodu za míchání. Organická vrstva se promyje 1N hydroxidem sodným.,potom vodným hydrogenuhličitanem draselným. Roztok se suší (sí ran sodný) a těkavé látky se odstraní ve vakuu. Ohroma-60tografií na silikagelu, s gradientem?, postupujícím od hexanu ke chloroformu k methylalkoholu, se získá 4,77 g požadovaného produktu: jaká fluorescentního oleje.

MS(FAB): m/z 515 (M+H), 391 (M-TolSH).

Elementární analýza pro C^qH^qN^O^S 3/8H₂O vypočteno 69,11 % C_r 5,95 % H, 5,37, 6,14 % S' nalezena 69,34 % 0, 5,78% H, 5,23% N,. 5,79% 8.

¹H NMR (CDCl-j): d7,84 (M,2H,. PhTh-H), 7,71 (m, 2H, PhTH-ff),

7,23 (d, 2H, ď=S, 2MePhH), 7,05 (d, 2H, J=8 ,.2MePhH),

6,95, 6,85, 6,77 (m, d ,d, 3íP, (MeO)2ArH), 3,88, 3,83 (2s,

2H„ 2ArOCHj), 3,63. (t, 2ff, z-CH₂), 1,65 (m, 2H, e-CH₂),

1,34 (m, 4H, bjd-CH^). ·. .

Příklad 25:

- (5-Aminopentyl )-3,4-dimethoxy- /\-/(4-methylf enyl) thio?/benzenacetonitril

Směs 4,72 g \-(3,4-dimethoxyfenyl)-1,3-dihydro-/(4-methylfenyl)thio/-1,3-dioxo-2H-isoindol-2-heptannitril, 1Ό0 ml ethylalkoholu a 7,0 ml hydrazin hydrátu se _z.ahří vá pod refluxem. Během asi 30 minut se vytvoří těžká sraženina. Po 1,33 hodinách se reakční směs ochladí a zahustí se ve vakuu. Zbytek se ohřeje na parní lázni s 2N kyselinou chlorovodíkovou na 10 min. Přidá se diatomický oxid křemičitý a chloroform·, směs se pečlivě třepe a potom se filtruje přes další diatomický oxid křemičitý. Organická fáze se nejprve promyje vodným amoniakem, potom solankou' a po sušení (síran sodný) se zahustí ve vakuu a získá se 3,97 g požadovaného proďuktu jako žlutého oleje. MS(CI): m/z 385: (M+H).

-61Elementární analýza pro 5/8ff₂O vypočteno 66,77 % C, 7,45 % ff, 7,08 % ff, 8,09 % S nalezeno 66,53 % C_r 7,02 % ff, 6,73 % ff, 8,04 % S.

¹H NMR (CDC1₃+ TFA): C>7,21 (d, 2H, J=8,2MePhff), 7,09 (d, 2H_r J=2M_ePhff), 6,88 (nr, 3H, (MeO)2ArH), 3,89, 3,84 (2s, 6ff, 2ArOCH₃), 3,10 (t, 2ff, 5-Cff₂), 2,33 (s, 3H, Ar-CH^),

2,21 (t, 2H, 1-Cff₂)_r 1,70 (m, 2H', 4-01¾), 1,43 (m, 4H,

2,3-01¾).

Příklad 26

C\ -(3,4-Dimethoxyfenyl )-1,3-dihydro-5,6-óimethoxy-^. - . /(4-methylfenyI)thia/-2H-isoindol-2-heptannitril

K roztoku 3,03 g οζ-(5-aminopentyl)-3,4-dimethoxycv -/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu, 1,85 g 1,2-bis(chlormethyl)-3,4-dimethóxybenzenu, 2Q ml toluenu a 0,22 g tetrabutylamoniumchloridu se přidá voda, obsahující 2 ghydroxidu sodného’. Směs se míchá po.’48 hodin. Po úpravě pH vodná vrstvy na 9 pevným hydřogenuhličitaném sodným’, vrst vy se oddělí a vodná vrstva se dále extrahuje chloroformem. Po sušení spojených organických extraktů nad síranem sodným, se tyto nechají projít sloupečkem hydratovaného křemičitanu horečnatého a zahustí se ve vakuu na hnědou gumu. Tato guma se čistí HPLC za použití C-18 radial-pak kolony s reverzní fází (6 cm x 30 cm) s pufrovaným rozpouštědlovým systémem (150 ml hydroxidu amonného ve vodě upraveného na pH 4,00 kyselinou octovou,, potom; zředěno na 7,875⁷ ml vodou, přidá se 5700 ml acetonitrilu a 1425 al methylalkoholu).

Po odstranění' rozpouštědla se získá 0,85 g požadovaného produktu jako žlutého oleje.

MS (Hi res)í m/z vypočteno pro ^cj2^H38^N2°2^S 546,2553 nalezeno 546,2569

Elementární analýza pro ^2^38^2³ vypočteno 70,30 % C, 7,01 % ff, 5,12 % ff, 5,86 % S

-62nalezeno 70,02 % C,. 4,79 % H, 4,79 % Ν', 5,62 % S’.

Příklad 27

Hýdrochlorid (\ - (3,4-dimethoxyfenyl )-1 , 3’-dihydro-5,6dimethoxy-Ά-/(4-methylfenyl)thio/-2H-isoindol-2-heptannitrilu

Dusík se probublává míchaným roztokem 16,63 g -(5aminopent.yl )-3,4-dimethoxy- d—/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu·, 10,12 g 1,2-bíschlormethyl-3,4-dimethoxybenzenu (připravený postupem podle ď.ff.Wooda a kol., J.Am. Chem.Soc., 72, 2989 (1950)) a 2,5 g tetrabutylamoniumcHloridu ve 250 ml toluenu·.Přidá se roztok 28 g hydroxidu sodného v 84 ml vody a směs se intenzivně míchá 48 hodin’.

Vrstvy se oddělí a organická fáze se promyje nasyceným; chloridem sodným, suší se a zahustí se ve vakuu^-. Zbytek se čistí chromatograficky(silikagel; 50 % ethylacetát/ hexan; ethylacetát; 1,2,3,4% methylalkohol/ethylacetát} methylalkohol) a získá se 14,85 g hnědé gumy. Tato guma se rozpustí v 30 ml ethylalkoholu a přidá se 7 ml 4,5M ethanolicrého chlorovodíku. Roztok se ochladí na 0 °C; a naočkuje se. Krystaly se oddělí a získá se 11,19 g surového produktu, t.t. 103- 114 °C. Krystaly se rekrystalují dvakrát, poprvé při poměru 1 g/4 ml ethylalkoholu, podruhé v poměru 1 g/5 ml ethylalkoholu a získá se 9,38 g požadovaného produktu ve formě šedých krystalů.

t.t.. 121 - 125 ^]H NHR(CDC1₃) Šs 7,20 (d, 2ÍT, J=3., M_ePh-H), 7,08 (d, 2H, J=

3, MePh-H), 6,96 (m, 3H, (MeO)₂ArH), 6,8 (m, 2H, isoindoIPh-H), 4,93. (š, 2H_r isoindol-CH^), 4,12 (š, 2H, isoindol-Cff₂),

3,87 (m, 12H,(OCH₃)₄, 3,15 (š, 2H, 0-CH₂), 2,32 (s, 3H,

PhCff₃),. 2,22 (š, 2H-,^-CH₂), 1,9? (š, 2H, jx-CH₂),

1,55¹ (m, 2H, £-0^), 1,42 (m,. 2^,^-0¾).

-63MS(FAB):m/z vypočteno pro- θβ2^38^Ν2θ4^ 547,2630 nalezeno 547,2630

Elementární analýza pro ^Cl ^2θ vypočteno: 63,93 $ θ, 6,87 % ff, 4,66 $ Ν’,. 5,90 % Cl, 5,33 nalezeno 64,22 % C', 6,57'$ ff, 4,59 $ Ν’, 5,74 $ Cl, 5,39

Příklad 28

7-//(1 ,1 -Dimethylethyl)dimethylsilyl/oxy/-1 ,2,3,4-tetrahydro-6-methoxyisochinolin l K roztoku. 19,2 g 6-hydroxy-7-methoxy-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolinu ve 425^: ml pyridinu se přidá 48,4 g terč. but.yldimethylsilylchloriču a 0,5 g 4-NrN-dimethylaminopyridinu. Roztok se zahřeje na teplotu refluxu na 3,5 hodiny a těkavé látky se odstraní při 70 °C destilací. Zbytek se rozdělí mezi vodný hydrogenuhličitan draselný a ethylacetát. Organická vrstva se promyje vodou, suší (síran hořečnatý) a těkavé látka se odstraní ve vakuu. Zbytek se suspenduje v diethyletheru⁵, filtruje a promyje se hexanem. Filtrát se odpaří a zbytek se destiluje via Kugelrohr při 150 mm a 120-130 °C a získá se 26,.2 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

MS(CI)ím/z 294 (ΜΡΓ+).

vypočteno pru CjgHgyNC^Si 1 /4^0

64,49 $ O, 9,31 $ H, 4,70 $ Ν’, 9,-43 $ Si nalezeno

64,46 % C, 9,03 % ff_r 4,70 $ N_ř 9,52 $ Si.

Příklad 29

-(3,4-Dimethoxyfenyl)-7-//( 1,1-dimethylethyl)dimethyl-64silyl/oxy/-3,4-dihydro-6-methoxy--/(4-methylfenyl)thio/2(1H)-isochinolinheptannitril

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 2,5 g .7^(5-chlorpentyl-3., 4-dimethoxy-K-/(4-methylf enyl) thio/benzenacetonitrilu a 2,54 g 7-//(1,1 -dioe thyl ethyl )dimeth.ylsilyl/oxy/-1,2,3,4-tetrahydro-6-methoxyisochinolinu. Získá se 1,2 g požadovaného produktu jako světležlutého olej;e.

MS (Cl): m/z 661 (MH+).

Elementární analýza pro C^gíT^I^O^SSi. 1/4 vypočteno 68,59 % 7,95 % H,· 4,21 % 4,81 % S, 4,22 % Si nalezeno 68,73 % C„ 7,69 % ff, 3,99 % Ν', 4,36 % S, 3,7a % Si

Příklad 30

CK -(3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-7-hydroxy-6-methoxyA-/(4 -methylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolin-heptannitril

K roztoku 1,0 g (3,4-dimethoxyfenyl)-7-//(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl/oxy/-3,4-dihydro-6-methoxy-/_x /(4-methyI-fenyl) thio/-2 (1 H)-isochinolinheptannitrilu ve 30 ml tetrahydrofuranu se přidá 3,02 ml 1 ,0M roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu·. Uzavře se a míchá 5· hodin. Reakční směs se odpaří a zbytek se vyjme do ethylacetátu. Roztok se třikrát promyje? vodou a organická fáze se oddělí a odpaří. Zbylá guma se znovu rozpustí v chlo roformu a roztok se odpaří ve vakuu při 66 °C. Tento postup se opakuje dvakrát a získá se 0,83 g požadovaného produktu jako hnědé gumy.

MS(CI):m/z 547 (ΜΤΓ+).

Elementární analýza pro ^32^38^2^4^ 1/2 1^0 vypočteno 69,17% C, 7,07% H, 5,04%’Ν', 5,76% S nalezeno 69,2? % C,. 6,88 % ÍF, 5,10% N, 5,66 % SY

-65Příklad 31 'J - (3 > 4-Limethoxyf enyl )-7-/2-(dimethylamino)ethoxy/-3,4dihydro-6-methoxy- j\-/(4-niethylfenyl)thio/-2(1H)-isochinolinheptannitril

K roztoku 0,583. g (3,4-dimethoxyf enyl )=.3,4-didihydro-T^-hydroxy-ó-methoxy- ^-/(4-siethylfenyl )thio/-2 (1 H)isochinolinheptannitrilu ve 20 ml Ν,Ν-dimethylformamidu; se přidá 0,051 gr 60% hydridu' sodného? v oleji'· a roztok se míchá 1 hodinu. K tomuto roztoku se přidá 0,34 g čerstvě připraveného 2-dimethylaminoethylchloridu a 0,60 g jodidu^ draselného?. Roztok se míchá při teplotě místnosti 18 hodin a potom se těkavé látky odstraní za sníženého tlaku?. Zbytek se rozpustí v minimálním množství ethylacetátu a přidá se 5’ objemů diethyletheru. Tento roztok se nechá projít přes malý sloupeček: hydratovaného křemičitanu¹ hořečnatéhoj a těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek, se chromatografuje na silikagelu za použití gradientu diethylether - ethylacetát - methylalkohol. Získá se tak 0,14 g požadovaného produktu jako čirého skla. MS(Hi res): m/z vypočteno pro . 617)3287 nalezeno 617/3302.

Příklad 32

7- (2-Chlorethoxy )-Á-/3,4-dimethoxyf enyl )-3,4-dihydro6-methoxy-/^ -/(4-methylf enyl) thio/-2 (1 H)-is ochinolinheptannitril ⁰ ) 93 g< podíl (3,4-dimethoxyf enyl )-3,4-dihydro-7hydroxy-6-methoxy- {^-/(4-methylfenylthio/-2 (iH)-isochinolinheptannitrilu se rozpustí ve 25 ml 2-butanonu a přidá

-66se 1,20 g 2-chlorethyltosylátu. Potom se přidá 0,72 g uhličitanu draselného: a dále 1,7 ml 1N roztoku hydroxidu sodného.. Tato směs se zahřívá pod refluxea 6 hodin za míchání a potom při teplotě místnosti 16 hodin.. Rozpouštědlo se odpaří při 50 °C ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi diethylether a vodu. Organická fáze se dvakrát promyje vodou, suší síranem hořečnatým, filtruje a odpaří ve vakuu, získá se olej. Zbytek se chromatografuje na sloupci silikagelu a eluuje ethylacetátem a získá se 0,43 g požadovaného produktu jako bezbarvé gumyMS(Hi res): m/z vypočteno pro 608,2476 nalezeno 608,2483

Elementární analýza pro C^H^ N₂O^C1S vypočteno. 67,03 % 0, 6,78 % H, 4,60 % N,. 5,82 % Cl, 5,26% S. nalezeno 66,96 % C, 6,87 % H, 4,55 % N, 5,56 % Cl, 5,09 % S

Fříklad 33 ^-(3,4-Dimethox.yf enyl )-3,4-dihydro-7-/2-(1 H-imidazol-1 yl)ethoxy/-6-methoxy- <X-/ (4-me thy lf enyl) thio/-2 (IH)-isochinolinheptaunitril

K roztoku 0,061 g imidazolu v 5^0 ml Ν,Ν-dimethylformamidu za míchání pod argonem se přidá 36,0 mg, 60% hydridu sodného v oleji. Po 45 min se přidá roztok 0_r366 g

7-(2-chlorethoxy)-^ - (3 _r4-dimethoxyfenyl )-3,4-dihydro-6methoxy- c/-/(4-methylfen.ylthio/-2 (1 H)-isochinolinheptannitrilu v 7,0 ml Ν,Ν-dimethylformamidu. Výsledný roztok se míchá 2 dny při teplotě okolí. Těkavé látky se odstraní při 55 C. ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi chloroform a vodu. Organická fáze se opět promyje vodou, suší se síranem hořečnatým, filtruje a odpařením se získá olej. Tento olej se chromatografuje na sloupci silikagelu a eluuje

-67se chloroformem/methylalkoholem (98:2). Získá se tak 0,144 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje. MS(Hi res ): m/z vypočteno pro. 640,3083 nalezeno 640,3144·

Příklad 3.4·.

Hydrocchloriď -(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-7-/2(1H-imidazol-1-yl)ethoxy/-6-methoxy--/(4-methylfenyl)thio/-2 (1 H)-isochinoli'nheptannitrilu

K roztoku 0,8 g - (3,.4-dime thoxyf enyl )-3,4-dihydro7-/2- (1 H-imidazol-1-yl )ethoxy/-6-methoxy- -/(4-methyl'f en.yl) thio/-2 (1 Hj-isochinolin-heptannitrilu ve 100 ml diethyletheru; a 5 ml ethylalkoholu se přidá 0,83 ml 4,5M kyseliny chlorovodíkové v ethylalkoholu. Roztok se míchá 20 min a bílá sraženina se oddělí a promyje se třiktát malými podíly diethyletheru. Pevná látka se suší ve vakuu a získá se 0,84 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

t.t. 70 °G (rozkl. )

Elementární analýza pro. C^H^ y^N^O^SCl vypočtena 60,00 % C, 6,77% H, 7,57% ΓΓ, nalezeno 60,10 % O, 6,86 % H, 7,21 % N,

1,75

8,38 % Cl, 4,32 8,78 % Cl, 4,28 a?

Příklad 35

Monohydrochlorid A -(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7dimethoxy- A-/(4-methylfenyl) thio/-2 (1 H)-isochinolinhexannitrilu

Opakuje se postup z .příkladu 4 za použití 1,77 g

X. - (3,4-dime thoxyf enyl )-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-A -/(4methylf enyl) thio/-2 (1 H)-isochinolinhexannitrilu. Získá se

-682,4 g požadovaného produktu jako krémově zbarvené pevné látky.

t.tň. 114 - 117 °C.

MS (CI): m/z 54& (M-Hcl).

Elementární analýza pro C^H^^O^Cl vypočteno 65,91 % C,6,74 % H, 4,80% E, 6,08 % Cl, 5,50 nalezeno: 65,66 % C, 6,90 % H, 4,60 % E, 5,90 % Cl, 5,43

Příklad 36'

ý. - (5-Chlorhexyl)-3,4-dimethoxy- <\-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrii

Opakuje se postup z příkladu 15 za použití 3,8 g 3,4dimethoxy-7\-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu a 2,66 g 1 -brom-5-chlorhexanu. Získá se tak 4,35 g požadovaného; produktu jako bezbarvého oleje.

MS(CI):m/z 435 (M+NE ).

Elementární analýza pro °23.^28^θ2^^^ 1/8 E₂O vypočteno 65,74 % C, 6,78'% E, 3,33 % E, 8,44 % Cl, 7,62 % S nalezeno 65,61 % C, 6,60 % E, 3,19 % rf, 8,18 % Cl, 8,02 % S.

Příklad 37'

Λ - (3,4-Dimethoxyfenyl )-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy- /(4-methylfenyl)thio/- 2(1 H)-isochinolinoktannitrii

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 4,3 g Z.-(5 -chlorhexyl )-3,4-dimethoxy- / -/(4-methylfenyl) thic/benzenacetonitrilu a 4,25g 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrochloridu. Získá se tak 3,05 g požadovaného produktu! jako zlaté gumy.

MS(CI): m/z 575.

-69Elementárni analýza pro C^H^N^O^S ΐ/δΗ^Ο vypočteno 70,77' % C, 7,38 % 8, 4,86 % Ný 5,56;% S nalezeno 70,38 % C, 7,59 % 8, 4,69 % H, 5,33.% S.

Příklad 38

4-/4-Chlor-1-/(4-methylf enyl )thio/butyl/-1,2-dimethoxybenzen

K roztoku- 13,72 g-; 1,2-dimethoxy-4-//(4-methylfenyl)thio/methyl/benzenu a krystalu fenantrolinu ve 250 ml tetrahydrofuranu; (sušený nad 3A síty), pod dusíkem při -78 °C se přidá' 21,Q ml 2,5M n-butyllithia/hexamx stříkačkou. Po 10 minutách se hnědý roztok ohřeje na 0 °G na 1 h, potom se znovu ochladí na^:. —78 °C a stříkačkou se přidá 8,02 ml 1 -brom-3-chlorpropanu. Reakční směs se nechá uhřát na teplotu místnosti přes noc. K ještě žluté reakční' směsi se přidá 10 ml ethylacetátu a výsledný roztok se zahustí za vakua. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu, organická fáze se suší (síran sodný) a zahuštěním ve vakuu se získá žlutý olej. Čištěním chromatografií na silikagelu s elučním gradientem postupijícím od hexanu ke chloroformu k methylalkoholu, opakovaně třikrát, se získá 16,47 g -požadovaného produktu jako žlutého oleje.

MS(CI): m/z 22?a 229 (MH⁺(-TolSH)).

Elementární analýza pro C^B^CIC^S 1 /δΗ^Ο vypočteno 63,80 % O, 6,59 % H, 1 1,15 % Cl, 8,95 % S. nalezeno 63,68'% C, 6,44% 8, 10,89% Cl, 8,98% 8. 'HM (CDCI-j): J 7,15 (ά, 2H, J=S,2MePhK), 7,02 (d, 2H, 7=8,2, MePhH), 6,72 (m, 3H_ř ArH), 4,01 (t, 1H, 1-CH),

3,86 (s, 3H, ArOCH_y), 3,82 (s, 3H, AnOCíLj), 3,49 (t, 2H, CH₂-C1), 2,29 (s, 3H, Ar-CH₃), 2,05 (m, 28, 2-CH₂), 1,82 (m, 2H, 3-Cíf₂).

-70Příklad 39

2-/4-(3,4-Dimethoxyf enyl' )-4-/(4-me thy If enyl) thío/butyl/1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochfnolin

Ke 4,6 g: 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydro-isochinolinu v 50 ml 2-pyrrolidinu se přidá 1,4 g uhličitanu draselnéhcc, 0,1 g jodiďu draselného a 3,51 g-4-/4-c:hlor1-/(4-methylfenyl)thio/butyl/-1,2-dimethoxybenzenu. Směs se míchá a zahřívá na 95 °C. na 24 hodin a potom se nalije do 400 ml vody a extrahuje se šestkrát 60ml podíly chloroformu- Spojené extrakty se promyjí solankou a suší (síran sodný) a zahustí se za vakua a získá se 8_r85 g hnědého oleje. Chromatografií na silikagelu s elučním gradientem postupujícím od hexanu ke chloroformu k methalalkoholu, opakováno čtyřikrát, se získá 0,61 g požadovaného produktu jako žlutého oleje.

MS(Ki res):m/z

Vypočteno pro C^ff^NO^S 507,2527 nalezeno 508,2527 (M+H).

Elementární analýza pro vypočteno 70,36 $ C:, 7,38 % ÍT, 2,74 % Ν', 6,25 % S nalezeno 70,45 $ C, 7,46 % ff,. 2,86 % íí, 6Γ,20 % S.

Příklad 40

4-/6-3rom-1 -/(4-methylfenyl)thio/hexyl/-1,2-dimethoxybenzen

Roztok 13,72 g 1,2-dimethoxy-4-//(4-methylfenyl)thin/methyl/benzenu ve 200 ml tetrahydrofuranu (sušen nad' 3A síty)

-71pod dusíkem, se ochladí na -78 °C a přidá se 30 ml 1,7M terč.butyllithia. Po 30 minutách se roztok kanylou převede do míchaného roztoku 14,0 ml 1,5-dibrompentanu ve 25 ml tetrahydrofuranu, pod dusíkem při -78 °C. Reakční směs se pomalu ohřeje na teplotu místnosti, a reakce se přeruší přídavkem 4 ml acetonu. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v ethylacetátu a promyje se solankou. Sušením (síran sodný) a odstraněním rozpouštědla se získá 33,22 g oleje. Zbytek se čistí chromatografií na silikagelu s gradientem eluce postupujícím od hexanu ke chloroformu k methalalkoholu a získá se 10,82 g požadovaného produktu jako hnědavá guma.

MS(FA3)ř m/z 299 (M-TolSH).

Příklad 41

2-/6- (3., 4-Dimethoxyf enyl )-6-/(4-methylfenyl) thio/hexyl/1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 39 za použití 2,12 g. 4-/6-brom-1-/(4-methylfenyl)thio/hexyl/-1,2-dimethoxybenzenu a 2,3. g 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinhydrochloridu^ Získá se tak 1,6 g požadovaného produktujako světležlutého oleje.

MS(Hi res ) : m/z vypočteno pro ^j2^41^N°4^S 535,2756' nalezeno 536,2834

Elementární analýza pro C^H^NO^S vypočteno 70,13 % G, 7,83 % H, 3,07 % N, 5,62 % S nalezeno 70,15 % C, 7,51 % H, 2,79 % N_r 5,25 % S.

Příklad 42 . ’

Kyselina 3-/2-kyano-2-(3,4-dimethoxyfenyl)-2-/(4-methylfenyl )thio/ethyl/benzoová

-72Ke studenému (-78 °C) roztoku 1,86 g 3,4-dimethoxy-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu: v 1 5 ml tetrahydrofuranu se přidá po kapkách roztok 2,9 ml n-butyllithia (2,2 M) v hexanu^ Tento roztok se míchá při -78 °C 35 minut. Po kapkách se přidá roztok 0,67 g m-karboxybenzylbromidu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuranu, míchá se při -78 40 minut a potom při teplotě místnosti. 15 minut.

Směs se rozruší vodou a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje? solankou, suší a filtruje. Filtrát se odpaří ve vakuu a získá se žlutý olej. Tento olej se čistí rychlou chromatografii za použití' methylenchlorrdu/methylalkoholu: (95:5) a získá se 1,15 g požadovaného produktu· jako žluté pěny.

^]H NMR (CDC1₃): S 7,95 (d, 1H, Ar), 7,73 (s, 1H, Ar),' 7,36 7,2 (m, 2H-, Ar), 7,1 (d, 2H, Ar), 6,98-6,92 (m, 2H, Ar),

6,75 (d, 1H, Ar), 3,87 (s, 3H, OCH₃), 3,83 (s, 3H, OCÍT), 3,49 (s, 2H), 2,34 (s.^HCH^).

Příklad 43 <Á -3,4-dimethoxyfenyl)-3- (hydroxymethyl)-^-/(4-methylfenyl)thio/benzenpropannitril

Směs 1,0. g; 3-/2-kýano-2-,(3 > 4-dimethoxyf enyl )-2-/(4methylfenyl)thio/ethyl/benzoové kyseliny a 0,7 ml boranmethylsulfidového komplexu v. 5 ml tetrahydrofuranu; se míchá při teplotě místnosti 18 hodin. Směs se rozruší methylalkoholem, zpracuje s plynným chlorovodíkem·, míchá se a rozpouštědlo se odpaří a získá se? bílá pěna. Tato se rozpustí ve vodě, zalkalizuje 5N~hydroxidem sodným a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje. Filtrát se odpaří ve vakuu a získá se žlutý olej. Tento olej se čistí rychlou chromatografii za použití 2 % methylalkoholu v methylenchloridu a získá se θ,55 s požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

-73Elementární analýza pro C^H^NSOg vypočteno 71,57% C, 6,01 % H, 3,34% N, 7,64% Cl nalezeno 71,25% C, 6,01 % H, 3,26:% N, 7,50 % Cl.

Přiklaď 44

3-(chlormethyl)--(dimethoxyfenyl)-r( -/(4-methylfenyl)- thio/benzenpropannitrii

Směs 0,1 ml thionylchloridu a 0,12 ml N,N-dimethylformamidu· se míchá při teplotě místnosti' 30 minut. K výše uvedené směsi se přidá roztok 0,34 g <A-(3,4-dimethoxyf enyl )-3- (hydroxymethyl -/(4-methylfenyl) thio/benzerípropannitrilu v 1,0 ml Ν,Ν-dimethylformamidu a výsledná směs se zahřívá na 70 °C po 17 hodin, ochladí, nalije do vody a extrahuje se diethyletherem. Diethyletherový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje. Filtrát se-? odpaří ve vakuu a získá se olej. Tento olej se čistí rychlou chromatografií? za použití ethylacetátu’ v hexanu a získá se 0,27 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

Elementární analýza pro C^IL^NSCIC^ vypočteno? 68,56:% C,’ 5,52 % H, 3,20 % Ný 8,09 % Cl, 7,32 % 8 nalezeno 68,33 % C, 5,50 % H, 3,16 % N,, 8,18 % Cl, 7,32 % 8

Příklad 45

3-(3,4-Pihydro-6,7-dimethoxy-2(1H)-isochinolinyl)-C\ -(3,4dimethoxyfenyl)-^-/(4-methylfenyl)thio/benzenpropannitrii

Směs 0,21 g 3-(chlormethyl)- -(3,4-dimethoxyfenyl)-/(4 -methylfenyl)thio/benzenpropannitrilu, 0,091 g

6,7-dimethoxy-1 , 2,3,4-tetrahydroisochinolinu a 0,3 g- bezvodého uhličitanu draselného ve 2,0 ml N,N-dimethylformamidu

-74se zahřívá na 85 °C po 4 hodiny, ochladí se, nalije se do vody a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje. Filtrát se odpaří ve vakuu a získá se olej. Tento olej se čistí rychlou chromatografií s 1,5 % methylalkoholu v chloroformu a získá se 0,18 g požadovaného· produktu jako žluté sklovité pevné látky.

MS(FAB): m/z 595 (M+H).

¹H NMR (CDC1₃): 7 7,35· - 6,83 (m, 10H, Ar), 6,73 - 6,70 (d, 1H,. Á_r), 6,58 (s, 1H, Ar), 3,86-3,79 (m, 12H, 4-OC^), 3,-58-3,50 (2s, 4H), 3,1 (s, 2H), 2,78-2,5? (2m, 4H),

2,32 (s, 3H-, Cff ).

Příklad 46

2-/6-(3,4-Dimethoxyfenyl)-6-/(4-methylfenyl)thio/hexyl/1 ,2,.3,4-tetranydro-6-methoxyisochinolin

K roztoku 4,23 g 4-/6-brom-1-/(4-methylfenyl)thio/hexyl/-1,2-dimethoxybenzenu ve 40 ml acetonitrilu se přidá

3,88 g 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu, 1,74 mí diisopropylethylaminu a 0,01 g jodidu sodného. Roztok se zahřívá pod refluxem 43 hodin a ochladí se na teplotu místnosti. Ngakčnf směš se rozdělí mezi chloroform a vodný uhličitan draselný a organická vrstva se suší naď síranem hořečnatým. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se chromatografuje na silikagelu za použiti' elučního gradientu; hexan - chloroform- methylalkohol. Zbytek z chromatografie se rozpustí v diethyletheru a nechá projít diatomickou hlinkou. Získá se tak 4,-4 g požadovaného; produktu jako žlutého oleje.

MS(FAB): m/z 506 (M+H).

-Ί5Elementární analýza pra C^ff^NO^S vypočteno 73,62 % C, 7,77% H, 2,7?% N,. 6,34% 8 nalezeno 73,37 % C, 7,88 % H, 2,70 % Ν', 6,13 % 8.

Příklad 47

6-/6- (3,4-Dimethoxyfenyl)-6-/(4-methylfenyl) thio/hexyl/-5 ,

6,7,8-te trah.ydro-1 ,3-dioxolo/4,5-g/isochinolin.

Opakuje se postup z přikladu 46 za použití 3,67 g

4-/o-brom-1-/(4-methylfenyl)thio/hexyl/-1 ,2-dimethoxybenzenu ve 40 ml acetonitrilu a 2,65 g 6,7- methylendíoxy1 ,2,3., 4-tetrahydroisochÍnolinuv Získá se tak 4,13 g požadovaného produktu jako žluté gumy.

MS(01): m/z 520 (M+H⁺).

Elementární' analýza pro C^^H^^NO^S ?/8H₂O vypočtena 69,53 % O, 7,1 5 % H, 2,57% N, 5,84 % S nalezeno? 69,54 % O_r 7,30 % H, 2,62 % N,. 5,98 % S.

Příklad 48

4-/6-Brom-1 - (4-methylfenyl) tnio/hept.yl/-1 , 2-dimethoxybenzen

Opakuje se postup z příkladu 40 za použití 44,θ g:

, 2-dimethoxy-4-//(4-methylf enyl)thio/methyl/benzenu a 46,15 g 1,6-dibromhexanun Získá se tak 36 g požadovaného· produktu: jako- žlutého oleje kontaminovaného. 24,8 % výchozího materiálu-,. 1 ,2-dimethoxy-4-//(4-methylfenyl )thio/me thyl/benzenu.

Příklad 49

2-/7-(3,4-Dimethoxyfenyl)-7-/(4-methylfenyl) thio/heptyl/2,3-dihydro-5,-6-dimethoxy-1 H-isoindol

Směs 1,79 g 4—/6—brom-1—/(4-methylfenyl)thio/heptyl

-76-1,2-dimethoxybenzenu, 3,29 g 5,6-dimethoxyisoindoluy ; 25 ml acetonitrilu a 1,74 mi. Ν,Ν-diisopropylethylaminu se zahřívá pod refluxem 2 dny. Heakční směs se zahustí za vakua a černý zbytek se rozdělí mezi chloroform· a vodný amoniak. Organická vrstva se suší (síran sodný) a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Chromatografií na silikagelu s gradientem eluce postupujícím od hexanu ke chloroformu k methylalkoholu, dvakrát, se získá 1,34 g-požadovaného produktu jako hnědé gumy.

MS(Hi res): m/z vypočteno pro- C^H^NO^S' 535,2756’ nalezeno 535,2723,

Elementární' analýza pro C^H^NO^S ^0 vypočteno 69,41 % C, 7,83 % H, 2,53 % N, 5,78 % S nalezeno 69,59 % C, 7,51 % FT, 2,53 % N, 6,19 % S.

Příklad 50

2-/7-(3,4-Dimethoxyfenyl)-7-/(4-methylfenyl)thio/heptyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 49 za použití 5,22 g 4-/6 brom-1 -/(4-methylf enyl) thio/hept.yl/-1 ,2-dimethoxybenzenu, 3,29 g 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrochloridu. Získá se tak 2,49 g· požadovaného produktu jako žluté gumy.

MS(ΗΣ res ) : m/z vypočteno pro C-^H^NO^S 549,29126 nalezeno 549,291

Elementární analýza pro C^H^IfO^S ^0 vypočteno 69,81 % 0,. 7,99 % H, 2,47 % Ν’, 5,64 % S nalezeno 70,19 % C, 7,83 % H, 2,41 % ří, 5,70 % S.

77Příklad 51

6.7- Bis-//(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl/oxy/-1,2,3,4tetrahydroisochinolin

Směs 1,0 g 1,2,3,4-tetrahydro-6,7-isochinolindiolhydrobromidu a 2,45 g pyridinu se zahřívá pod refluxem ve 25,0 ml pyridinu 4,5 hodiny, ochladí se, nalije do vody a extrahuje se diethyletherem. Diethyletherový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje. Filtrát se odpaří a získá se hnědý olej. Olej se čistí Kugelrohr destilací a poskytne 1,6 g požadovaného produktu jako žluté pevné látky, t.v. 155 °C, 350 torr.

Příklad 52

6.7- 3is-//(1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl/oxy/-2-/7-(3,4dimethox.yfenyl )-7-/(4-methylf enyl) thio/heptyl/-1 ,2,3,4tetrahydrois ochinolin

Opakuje se postup z příkladu: 49 za použití 1,24 g

6.7- bis//(l , 1-dimethylethyl )dimethylsilyl/ox.y/-1 ,2,3,4tetrahydroisochinolinu a 1 ,83. g~ 1-brom-7-(3 > 4-dimethoxyfenyl)-7-/(4-dimethoxyfenyl)thio/heptanu. Získá se tak 2,0 g požadovaného produktu jako oranžového oleje. Elementární analýza pro C^HgyNSS^O^ Q,2M CH₂C1₂ vypočteno 67,63 % O, 8,86 % H^;, 1 ,83 % Ν’, 1 ,85 % Cl, 4,18 % S nalezeno 67,1 7 % C, 8,97 % H, 1 ,81 % Ν’, 1,86 % Cl, 4,23; % S ¹H NMR (CDCl-p : á 7,15-7,12 (d, 2H, Ar), 7,02-6,99 (d,

2H, Ar), 6,72 (s, 2H, Arr), 6,53 (s, 1H, Ar), 6,45 (s, 1H, Ar), 4,0 (t, 1H), 3,85 (s, 3H, OCH₃), 3,81 (s, 3H, OCH-j), 3,45 (s,. 2H), 2,75 (t, 2H), 2,45-2,37 (m, 2H), 2,28 (s,

3Π, CH^), 1,9-1,2 (m, 10H), 0,96 (s, 18H, CH^J, 0,15 (s,

12H, CH₃).

-78Příklad 53

Diethyl-6-/7-(3,4-dimethoxyfenyl)-7-/(4-methylfenyl)thio/heptyl/-5,6,7,8-tetrahydro-1,3-dioxolo/4,5-g/isochinolindikarboxylát

Směs 1,95 g 6,7-bis//( 1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl/oxy/-2-/7- (3,4-dimethoxyfenyl)-7-/(4-methylf enyl)thio/hept.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolinu a 10,0. ml 1M tetrabutylamoniumfluoridu ve 25^; ml tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti 2,5 hodiny, nalije se do vody a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje solankou, suší, filtruje a filtrát se odpaří, získá se 1,8 g hnědavě černého olejě. Tento olej se vyjme do 60 ml acetonu, přidá se 1 ,8 g bezvodého uhličitanu draselného·, potom se přidá 0,83 g diethyldibrommalonátu. Výsledná směs se míchá při teplotě místnosti 5 hodin, filtruje se a filtrát se odpaří' ve vakuu, získá se hnědý olej. Tento olej se čistí rychlou chromatografií s:e 2 % methylalkoholu v chloroformu. Získá se 0,42 g hnědého olej^:e.

MS(FAB): m/z 678' (M+H).

Elementární analýza pro C^gH^NSOg 0,3M CH^Cl^ vypočteno 65,40 % C, 6,82 % H, 1 ,99 % N, 3,02 % Cl, 4,56? % S nalezeno 65,23 % G_r 6.-,73 % 1 ,93 % N, 2,66 % Cl, 4,55__% St

Příklad 54

6-/7- (3,4-Dimethox.yf enyl )-7-/(4-methylf enyl) thio/heptyl/5,6,7,8-te trahydro-1,3-dioxolo/4,5-g/isochinolin-2,2dimethanol

Směs 0,31 g diethyl-6-/7-(3,4-dimethoxyfenyl)-7/(4-methylfenyl)thio/heptyl/-5,6,7,8-tetrahydro-1 ,3-dioxolo/4,5-g/isochinolin-dikarboxylátu a 0,045 g lithiumborohyd-79ridu ve 20 ml tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti 1 hodiny, nalije se do vody a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Výsledná směs se extrahuje methylenchloridem. M-ethylenchloridový extrakt se suší, filtruje a filtrát se odpaří ve vakuu a získá se žlutý olej. Tento olej se čistí rychlou chromatografií za použití' 2 % methylalkoholu v methylenchloridu a. získá se 0,1 g požadovaného produktu jako bílé pěny.

Elementární' analýza pro- C^H^ffSOg 1,0M ff^O vypočtenu 66,75^-¾ G, 7,41 % ff, 2,29 % », 5-,24 % S nylezeno 67/,03 % C, 7,66 % ff, 2,12 % ff, 5,20 % S.

Příklad^- 55 (3,4-Eimethox.yf enyl)-1-/(j,4-dimethoxyfenyl)methyl/3.4- dihydro-6,7^Ldimethoxy- ^-/( 4-methylfenyl)thio-2(IH) — isochinolirrheptannitril

Opakuje se postup zz příkladu 49 za použiti 0,345 g hydrochloridu tetrahydropapaverinu· a 0,30 g- (5-joďpenťyl)3.4- dimethoxy-/Q-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu. Získá se 0,263, g požadovaného produktu jako žlutého- oleje.

MS (Hi. res ) : m/z vypočteno pro ^42^50^2^6 711,34678 nalezenu 711,3453.

Příklad 56

Ethyl-3,4-dimethoxy-E-oxo-benzenhexanoát

Ke studenému roztoku (0-5 °C) 1,52 g-veratrolu v 15 ml methylenchloridu se přidá 2,66 g bezvodého chloridu hli nitéhu po částech tak, aby se teplota udržela na 0 °G. Potom se přikape^- 1 ,93. g⁷ monoethylesteru chloridu kyseliny adipové. Výsledná směs se míchá při 0 °C po 4 hodiny a po-80nechá se ohřát na teplotu místnosti přes noc. Směs se nalije do směsi ledu a koncentrované kyseliny chlorovodíkové a dvě vrstvy se oddělí'. Vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem a spojené methylenchloridové vrstva se promyjí solankou, suší' a filtrují'. Filtrát se odpaří na oleíTento olej se čistí rychlou chromatografií, získá se 2,76? g požadovaného produktu; jako bílé pevné látky, t-t- 50-52

Elementární.' analýza pro ^1^22^^ vypočteno 65,29 % C^-, 7_r53. % H nalezeno 65,29 % C, 7_r60 % ff.

Příklad 57

Kyselina 3.,4-óimethoxy-E-oxo-benzenhexanová'

Směs 2,5 g ethyl-3,4-dimethoxy-E-oxo-benzenhexanoátix a 16 ml 10% alkoholického' hydroxidu sodného· se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny. Směs se zředí vodou^- a ethylalkohol se odstraní za sníženého tlaku^-. Roztok se okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Získaná pevná látka se oddělí filtrací, promyje se vodou a sušením se^ získá 2,2 g: požadovaného produktu jako béžové pevné látky, t.t- 123-125 °C.

Elementární' analýza pro (q 4^ gO^ vypočtenu 62,72 % C, 6,84 % H nalezeno 62,6? % C, 6,73 % K

Příklad 55

2-/6-(3,4-Dimethoxyfenyl)-1,6-dioxohexyl-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin/

K suspenzi hydrochloridu 6'_r7,dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu (1,73. g) ve 20 ml N,N-dimethylformamidu se přidá 4,2 ml triethýlaminu. Roztok se míchá 5 minut,

-81ochladí se na ledové lázni a přidá se 2,0 g kyseliny 3,4dimethoxy-E-oxo-benzen-hexanové, potom se přidá 1 ,5^; g diethylkyanofosfonátu. Ledová lázeň se odstraní' a směs se míchá při teplotě místnosti přes noc’. Směs se nalije do; vody a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetétový extrakt se promyje 2M kyselinou chlorovodíkovou·,, nasyceným roztokem hydrogénuhličitanu sodného, solankou a suší se. Rozpouštědlo se odsáraní a získá se 3., 15· g požadovaného produktu' jako bílé pevné látky.

t.t.101 - 103 °G ¹H'NMR (CDCip: í 7,&Q-1,52. (m, 2H, Ar), 6,9-6,86 (m, 1H, Ar),. 6,63-6,6' (m, 2H,Arr), 4,65-4,56 (2S,@E), 3,95-3,93 (m, 6ff, OCff₃), 3,87-3,8? (m, 6íT, OCff₃)_ř 3,83.-3,67 (2t,. 2H) 2,99 (t, 2H.^;), 2,84-2,75' (2t, 2H), 2,47 (t, 2H), 1,881,76 (m, 4H).

Příklad 59

2-/6-(β,4-Dimethoxyfenyl)-6-hydroxy/-1-oxohexyl/-1,2,3,4tetrahydro-6,7-aimethoxyis ochinolin/

Směs 1 ,4 g' 2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl)-1 ,6-dioxohexyl1 , 2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu/ a 0,28 gborohydridu sodného' ve 25 ml methylalkoholu se míchá při teplotě místnosti pres noc. Směs se nalije do vody a extra huje se ethylacetátem. Ethylacetétový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje, filtrát se odpaří a získá se

1,4 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

Příklad 60

2-/6-(Cyklohexylthio )-6- (3,4-dimethoxyfenyl)-1-oxohexyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

K. roztoku 1,0 g 2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl)-6-hydroxy/1 -oxohexyl/-!,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu v

-8210 ml 1 ,2-di'chlorethanu' se přidá 0,72 g jodidu zinečnatéího: a potom 0,30 g- cyklohexylmerkaptanu. Výsledná směs se? míchá při teplotě místnosti 1 hodinu, nalije se do.· vody a extrahuje se methylenchloridem. Methylenchloridová vrstva se promyje hydroxidem sodným, solankou, suší a odpařením se získá 1 ,06 g požadovaného produktu jako sklovité pevné', látky.

Elementární analýza pro C^H^NSO^ vypočtenu 68,73 % C, 8,00 % H, 2,59 % Ií, 5,92 %' 8 nalezeno 68,35 % O, 7,95 % H_r 2,42 % Ν', 5,87 % 8.

Příklad 61

2-/(Cyklohexylthio)-6-(3,4-dimethoxyfenyl)hexyl/-1,2,3,4t etrahydro-6’, 7-dimethoxy isochinolin

Směs 0,959 g 2-/6-(cyklohexylthio)-6-(3,4-d imethoxyfenyl)-1 -oxohexyl/-1,2,3,4-1etrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu a 0,35 mi komplexu boran-methylsulfiď (10M) v 10 ml tetrahydrofuranu se zahřívá pod.refluxem 2 hodiny, ochladí a rozruší methylalkoholem. Těkavé látky se odstraní ve vakuu. Zbytek se vyjme do 10 ml ethylalkoholu, přidá se 8 ml 1N hydroxidu sodného a výsledná směs se zahřívá pod refluxem 2 hodiny. Roztok se ochladí, zředí vodou a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje. Odpařením filtrátu dosucha se získá olej- Tento olej se čistí’ rychlou chromatografií za použití 2 % methylalkoholu v methylenchloridu a získá se θ,71 g· požadovaného produktu jako slaběžlutého oleje. Elementární analýza pro 0,5MEtCH' vypočtenu 69,78 % C, 8,78 % ff, 2,54 % Ν', 5,-82 % S nalezenu 69,72 %' G, 8,81 % H, 2,47 % N_r 5,88 % S.

Příklad 62

- (Cyklohexylthio )~c\ - (3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro6,7-dimethoxy-2(1H)-isochinolinheptannitril

Opakuje se postup podle? příkladu 3, za použití 2,7 g b -(5-ohlorpentyl)-# -(cyklohexylthioJ-3,4-dimethoxybenzenacétonitrilu a 2,53; g 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrochloridu·. Získá se tak 2,5 g požado váného produktu jako světležlutého oleje.

MS (Cl): m/z 553? (Mff⁺).

Elementární analýza pro ^32^44^2^4 vypočteno 69,53 % C_r 8,02 % ff, 5,07 % Ν', 5,80 % S nalezeno 69_r39 % C, 8_r26 % ff_r 4,78 % Ν’, 5,50 % S.

Příklad 63

2-/6-(3,4-Dimethoxyfenyl)-1-oxc-6-/(fenylmethyl) thio/hexyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 60 za použití' 1,4 g 2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl)-6-hydroxy/-1 -oxohexyl/~1 ,2,3,4tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu a ^ΰ,44 g benzylmerkaptanu. Získá se 1,5 g požadovaného produktu jako bezbar vého oleje.

Elementární analýza pro C^H-^NSO^ 0,1M EtOAc vypočtena 69,67% C, 7,18 % ff, 2,51 % Ν', 5,74 % S nalezeno 69,36 % C, 7,46 % ff, 2,36 % Ν’,. 5,98 % S\

Příklad 64

2-/6-(3,4-Dimethoxyfenyl)-6-/(fenylmethyl)thio/hexyl/1 ,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 61 za použití 1,4 g 2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl)-1-oxo-6-/(fenylmethyl)thio/he-84 xyl/-1 , 2,3,4-tetrah.ydro-6,7-dimethoxyisochinolinu. Získá se tak 1,15 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

Elementární analýza pra C^H^NSO^ vypočteno 71,71 % C, 7,71 % FT, 2,6l % N\ 5,98% S nalezeno 71,55% C? 7,81 % H, 2,50 % N> 5,92% S.

Příklad 65

2-/6- (3,4-Dimethoxyfenyí)-6-/( 1 ,1 -dimethethyl) thia/1 -oxohexyl'/-1 ,2,3,4-te trahydro-6,. 7-dimethoxy is o chinolin

Opakuje se postup z příkladu 60 za použití 1,4 g. 2-/6-(3, 4-dimethoxyfenyl)-5-hyóroxy/-1-oxohexyl/-1,2,3,4tetrahydro-6'·, 7-dimethoxyisochÍnolirru’ a 0_r42 ml 2-methyl2-propanthiolu·. Získá se tak 1,4 g požadovaného produktu jako bílé pěny.

Elementární analýza pro 020^^1450^. 0,1M EtOAc vypočteno 65,64 % O, 8,18 % H, 2,32 % 14, 5,31 % S nalezeno 65,61 % C, 8,14 % H,. 2,40 % Ný 5,98 % S.

H NMR (CDC1₃): £ 6,91-6,57 (m,5H, Ar)_r 4,63-4,5 (2s, 2H), 4,13-4,11 (m, 1H), 3,89-3,85 (m, 6H, OCH₃), 3,78-3,62 (2t, 2H), 2,81-2,2? (m, 2H), 2,34 (t, 2H), 1,92-1,66' (m_r 6H) 1,26 (s, 9H,. CH ).

Příklad 66

2-/6-(3,4-Dimethoxyfenyl )-6-/(1,1-dimethylethyl)thia/hexyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 61 za použití 1,3 g2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl)-6-/(1,1-dimethylethyl)thio/-1oxohexyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu. Získá se tak 1,08 g požadovaného produktu jako bezbarvého

-85oleje.

Elementární analýza pra <?₂9^43^^4 vypočteno 69,42 % C_t 8,64 % Η, 2_χ79 % E,. 6,39 % & nalezeno 69,27 % £, 8,90 % H, 2,66 % E, 6,25 °b S.

Příklad 67

2-/7- (3,4-Dimethoxyfenyl)-7-/(4-methylfenyl) thio/heptyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7,8-trimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 49 za použití 5,31 g 4-/6-brom-1-/(4-methylfenyl)thio/heptyl/-1 ,2-dimethoxybenzenu, 3,29 g-5,6-óimethoxyisoindolinu a 2,65· g

6,7,8-trimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu. Získá se tak 4,52 g požadovaného produktu jako žlutého oleje.

Příklad 68

5-/(3-Hydroxy-4-methoxyfenyl)methyl/-p-tolylťhioether

Bromovodík se probublává ledově chladnou suspenzí' 1,54 g 3-hydroxy-4-methoxybenzylalkoholu v 50 ml toluenu-. Reakční směs se míchá za chlazení až do nasycení roztoku, přibližně 20 minut. Roztok se z červenavé gumy slije a filtrát se zahustí ve vakuu při teplotě pod 40 ^QC. Zbytek (1,84 g, 85% výtěžek) se rozpustí v 50 ml toluenu a přidá se k předem při teplotě místnosti připravené směsi 0,12 g tetra-n-but.ylamonium- hydrogen síranu, 10 ml 1E hydroxidu sodnéhu, 40 ml vody a 2,52 g p-kresolu, ke kterému bylo přidáno 1,68 g hydrogenuhličitanu sodného. Výsledný dvoufázový systém se míchá přes noc při teplotě místností. Vrstvy se oddělí a organická fáze se suší a zahuštěním ve vakuu se získá' 3,27 g surového produktu. Zbytek se rozpustí v chloroformu a promyje se: zředěnou kyselinou chlorovodíkovou, suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se čistí

-86rychlou chromatografií (silikagel: hexan - chloroform methylalkohol gradient) a získá se 1,84 g bílých krystalů, které se rekrystalujf z hexanu a získá se 1 ,29 g požadovaného produktu.

t.t. 62-63,5 °C.

MS(Cl): m/z 278 (M+NH₄)⁺.

Elementární analýza provypočtenu 69,20 % C, 6', 19 % H, 12,32 % S’ nalezeno 69,25 % C, 6,27 % H, 12,32 % S.

Příklad 69 (1,1 - Dime thyle thy l')/2-methoxy-5-//4-me thylf enyl) thio/methyl/ fenoxy/dimethylsilarc

K roztoku 11,1 g 5-/(3-hydroxy-4-methoxyfenyl )methyl/p-tolyl-thioetheru ve 40 ml pyridinu se přidá 7,46 g terč. butyldime thylsil.ylchloridu· a 0,3 g p-N_rN-dimethylpyridinu. Tento roztok se zahřívá pod refluxem 3 hodiny a ochladí se na teplotu místnosti. Směs se rozdělí mezi chloroform a 1N kyselinu chlorovodíkovou. Organická vrstva se promyje solankou a suší. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se destiluje při 161-166 ^aC/0,03: mm a získá se 15,θ6 g požadovaného produktu jako čirého oleje.

MS(Cl): m/z 392 (M+RH₄ ⁺).

Elementární' analýza pro C^H^SO^i vypočteno 67,33% 8,07% H, 8,56% S, 7,50% Si nalezeno 67,32 % C_r 8,02.% H, 8,58 % S, 7,32 % Si.

Příklad 70 ^-/TZ-Brom-l-/(4-methylf enyl ) thio/heptyl/-2-methox.y- . f enoxy/(1 , 2-dimethylethyl )dimethylsilan

Opakuje se postup z příkladu 40 za použiti 14,θ g (1 , 1-dime thyle thyl)/2-methox.y-5-//4-me thylf enyl) thio/f enoxy/·

-87dimethylsilanu a 17,2 ml 1,6-dibromhexanu. Získá se 15,94 g požadovaného produktu jako žlutého oleje^:, který je kontaminován: 30 % výchozího materiálu, 1,2-dimethoxy-4-//(4methylfenyl)thio/methyl/benzenu.

Příklad 71

2-/7-/3-//(1,1-Dimethylsilyl/oxy-4-methoxyfenyl/-7/(4-methylfeny1)thio/heptyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 49 za použití 10,75 g /5-/7-brom-1 -/(4-me thylf enyl) thio/heptyl/-2-methoxyfenoxy/(1,2-dimethylethyl)dimethylsilanu a 11,5 g 6,7-dimethoxy1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrochloridu. Získá se tak 10,6 g požadovaného produktu jako hnědožlutého oleje.

MS (Cl): m/a 650 (W⁺).

Elementární analýza pro. CjgH^^NSO^Si vypočteno 70,21 % C,. 8,53 % H, 2,16 % N, 4,93 % S, 4,32 % Si nalezeno 69,99 % C, 8,.43 % H, 2,05 % N_r 5,35 % S, 4,57 % Si

Příklad 72

5-/7- (3,4-Dihydro-6,7-dimethoxy-2 (lH)-isochinolinyl)-1/ (4-me thylf enyl)thio/hep tyl/- 2-me thoxyf enol

K roztoku 10,28 g 2-/7-/3-//( 1 ,1-d imethylsilyl/oxy/4-methoxyf eny 1/-7-/(4-methylfenyl)thio/heptyl/-1 ,2,3., 4tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu ve 150 ml tetrahydrofuranu se přidá 49 ml tetrabutylamoniumfluoridu. Roztok se míchá přes noc a rozdělí se mezi chloroform a vodný hydroxid amonný. Organická vrstva se promyje solankou, suší a mechá se projít přes sloupeček hydratovaného křemičitanu hořečnatého. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se chromatografuje na silikagelu s elučním

-88gradientem hexan- chloroform- methylalkohol. Požadovaný materiál se rozpustí v diethyletheru a nechá se projít krátkým sloupkem hydratovaného křemičitanu horečnatého' a po odstranění rozpouštědla se získá 8,.75^- g požadovaného produktu jako hnědého oleje.

MS(CI): m/z 536 (M+H*). .

Elementární analýza pro θβ2^41^θ4 ^/^Ηζ,Ο vypočteno 70,56 % C, 7,77 % H^-, 2,57 % N,. 5,88 % S nalezeno 70,28 % C, 7,82 % H, 2,72 % N, 5,87% S.

¹ H NMR (01301^):^7,,16 (d, 2H, «7=8, 2MePhH), 7,01 (d, 2H, 7=8, 2MePnH), 6,85- (d,. 1H, OH, Me0ArH), 6,70 (m, 2BH, MeOArH^-), 6,58 (s, 1H, IQArH) r 6,51 (s, 1H, IQArH), 5,6 (br, 1H, OH), 3,96 (t, 1H, 1 -CH), 3,83. (m,. 9H, 3ArOCK₃), 3,52 (s, 2H, IQ 1-Cff₂), 2,81, 2,70 (2t, 4H, lQ3+4-CH₂),

2,44 (t_r 2F, 7-CH₂), 2,28 (_s, 3H, Arr-Cff ), 1,87 (m_r 2H,

6-CH₂), 1,55 (m, 2H).

Příklad 73

2-/7-/3-(2-Chlorethoxy)-4-methoxyfenyl/-7-/(4-methylfenyl)thio/hept.yl-1 ,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethox.yisochinolin

K míchanému roztoku ?,57 g 5-/7-(3,4-dihydro-6,7dimethox.y-2 (1 H)-isochinolinyl )-1-/ (4-me thy lf enyl) thio/heptyl/-2-methox.yfenolu a 2,0 ml 2-chlorethyltosylátu. v 50 ml 2-butanonu áe přidď 0,44 g 60% hydridu sodného- v oleji. Roztok se zahřívá pod refluxem 48 hodin a potom se ochladí na teplotu místnosti. Roztok se rozdělí mezi chloroform a solanku a organická vrstva se suší. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se chromatografuje na silikagelu s elučním gradientem od hexanu ke chloroformu k methylalkoholu. Požadované frakce se zahustí, rozpustí v diethyletheru a nechají projít krátkým· sloupečkem hydratovaného křemičitanu hořačnatého.. Rozpouštědlo se od-89straní za sníženého tlaku a získá se 1,6 g požadovaného produktu jako světlé hnědavé gumy.

MS(CI): m/z 598 (M+H)⁺ a 474 (M-(TolSH)aH⁺).

Elementární analýza pro C-,,Η..ClNSO,

44 4 vypočteno 68,26 % C', 7,41 % H, 2,34 % N, 5,93.% Cl,

5,36 % S nalezeno 68,41 % C,. 7,01 % H, 2,12 % N_ř 5,71 % Cl, 5,15% S.

Příklad 74

1,2,3., 4-Tetrahydro-2-/7-/3-/2- (1 H-imidazol-1-yl)ethoxy/4-methoxyfenyl/-7-/(4-methylfenyl)thin/heptyl/-6‘, 7-dimethoxyisochinolin

K 0,76 g imidazolu v 5 ml 4A sítem sušeného- N,N-dimethylformamidu se přidá 0,18 g 60% hydridu sodného v oleji.. Po té, kdy ustane tvorba bublinek se přidá 0,26· g jodidu sodného: a dále 1,12 g 2-/7-/3- (2-chlorethoxy )4-methoxyf enyl/-7-/(4-methylfenyl) thio/heptyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu v 5 ml N,N-dimethylformamidu. Pro promytí se použije¹ dalších 2 ml N’,N-dimethylformamidu. Hnědočervený roztok se něchá stát 48 hodin, zahustí se ve vakuu: a zbytek se: rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Organická vrstva se extrahuje IN kyše linou chlorovodíkovou, kyselá vrstva se zalkalizuje vodným amoniakem a výsledný olej se extrahuje do ethylacetátu. Po sušení (síran sodný) se extrakt zahustí ve vakuu na 0,53 g hnědavého oleje. -Rychlá chromatografie oleje na silikagelu (eluční gradient: hexan - chloroform - methylalkohol) poskytne olej, který se vyjme ďo ěthylacetátu a nechá se projití sloupečkem hydratovaného křemičitanu horečnatého: a zahuštěním se získá 0,194 g požadovaného produktu jako. žluté' gumy.

MS(CI): m/z 630 (MH⁺).

Elementární analýza pro' H₂O vypočteno 68,60 % C, 7,62 % H, 6,49 % N, 4,94 % S

-90nalezeno 68,83 % C, 7,53 $ E, 6,32 % Ν', 4,82 % S ¹ H NMR (CDCl-p : £ 7,62 (s, 1 E, 2-Im-E)_r 7,12 (s, 1H,. Im-H),

7,80 (ď, 2H, J=S, 2MePhH),. 7,08 (s, 1H, 2-Im-H), 6,99 (d,

2H_r J=8_r 2MePhH), 6,76 (m, 2E, (MeO)2ArH),.6,64 (m, 1H, (MeO)2ArH),. 8,59 (s, 11Γ, IQ, ArH), 4,3 (m, 2H, ethoxy CK₂), 4,17 (m, 2H, ethoxy CHg), 3,95 (t, 1H, 1-CH), 3,83 (m,

9H, ArOCH₃)_r 3,53 (s, 2H, IQ, 1-CE₂), 2,81 , 2,71 (2t,

4H, IQ, 3+4-CH₂), 2,45 (t. 2H, 1-CE₂), 2,26 (s, 3H_ř Ar-CR ), 1,88 (m, 2H, 2-GH₂), 1,55 (m, 2E', 6-CE₂), 1,29 (m, 6H, 3,4,5(CH^;2)₃).

Přiklaď 75

Dihydrochlorld 1,2,3,4-tetrahydro-2-/7-/3-/2-(1 E-imida-; zol-1 -yl) ethoxy/-4-methox.yf enyl/-7~/(4-methylf enyl) thio/heptyl-6,7-dimethoxyisochinolinu

Použije se postup z příkladu 34 s.· 0,77 g 1,2,3,4tetrahydro-2-/7-/3-/2-(1 H-imidazol-1-yl)ethoxy/-4-methoxyfenyl/-7-/(4-meth.ylfenyl) thio/heptyl/-6,7-dimethoxyis 0chinolinu. Získá se tak 0,32 g požadovaného produktu jako žluté gumy.

MS (FAB): m/z 575 (H⁺).

Elementární analýza pro C^H^y^SO^I 5/8HC1 H₂<D vypočteno 62,85 $ C, 7,22 % E, 8,15 $ N, 8J5 $ Cl, 4,53 nalezeno 62,70 $ C,. 7,45 $ H, 5,57 $ N_r 8,11 $ Cl, 4,48

Příklad 76

2-/6-(3,4-Dimethoxyf enyl )-6-h,ydroxy-1 -oxo ok tyl/-1 ,2,3,4tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Směs 3,0 g 2-/6-(3,4-dimethOxyfenyl)-1,6-dioxohexyl1 ,2,3,4-tetrahydro~-6,7-dimethoxyišochinolinú a 1 5, 0 ml ethylmagnesiumbromidu (1M) v tetrahydrofuranu ve 20,0 ml bezvodého tetrahydrofuranu se míchá při teplotě místnosti přes noc. Směs se nalije do směsi ledu a nasyceného roztoku chloridu amonného a extrahuje se diethyletherem. Diethyl-91etherový extrakt se promyje solankou, suší a filtruje. Filtrát se odpaří a získá se 3,0 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

Příklad 77

2-/6-(3,4-Dimethoxyfeny1)-6-/(4-methylfenyl)thio/-1 oxooktyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 60 za použití' 2,7 g 2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl)-6-hydroxy-1-oxooktyl/-1,2,3,4tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu a 1,06 g p-thiokresolu. Získá se 1,92 g požadovaného produktu jako bílé pěny. Elemehtární analýza pra C^^H^^NSO^O, l 5M EtOAc vypočteno 70,31 % C, 7,54 % H, 2,37 % Ν’, 5,42 % S‘ nalezeno 69,97 % C,. 7,58 % H,. 2,32 % N, 5,34 % S,

Příklad 78

2-/6-(3,4-Dimethoxyfenyl)-6-/ (4-methylfenyl)thio/-oktyl/1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 61 za použití 1,7 g 2-/6-(3,4-dimethoxyfenyl/-6-/(4-methylfenyl)thio/-1-oxooktyl/-1,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolinu.

Získá se 1,33 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

Elementární analýza pro C^H^NSO^ Q ,.5M EtOH vypočteno 71,63.% C, 8,24 % H_r 2,39 % N, 5,46 % S nalezeno 71,35 % C_r 8,29 % ff, 2,34 % Ν', 5,40 % S.

Příklad 79

4,5-Dichlor-1,2-benzendimethanol

1,24 g podíl kyseliny 4,5-dichlorftalové se rozpustí' ve 40 ml bezvodého tetrahydrofuranu a roztok se ochladí

-91na O °C. K tomuto roztoku se pomalu přidá' 4 ml boran-methyl— sulfidu, ^eakční nádoba se nejprve ohřeje na teplotu místnosti, potom se zahřívá pod refluxem po 12hodin. Směs produktu se ochladí na 0 ^σ0, potom se pomalu rozruší 50 ml methylalkoholu. Po odstranění rozpouštědla se zbytek rozdělí mezi 40 ml vody a 100 ml 1:1 ethylacetétu a tetrahydrofuranu. Organická vrstva se promyje 30 ml solanky, potom se suší nad síranem hořečnatým. Čištěním chromatografií na silikagelu (2:1 ethylacetát/hexan) se získá 1,0i g požadovaného produktu jako bílé pevné látky, t.t.

128 - 136 °C.

MS (Hi res): m/z vypočteno pro ΟθΗθΕ^^²⁰?»9901 nalezeno 205,9872

Příklad 80

1,2-3is-(brommethyl)-4,5-dichlorbenzen

2,53g podíl N-bromsukcinimidu se přidá' ke 40 ml methylenchloridu a 3 ml diethyletheru. Roztok se ochladí na 0 ^σΟ a pomalu se stříkačkou přidá 1,25 ml methylsulfidu. Vytvoří se žlutá sraženina. Po ukončení přidávání methylsulfidu se reakčni směs ochladí na -20 °C. Přidá se 0,736 g 4,5-dichlor-1,2-benzendimethanolu. Reakčni směs se ohřeje na 0 °C a míchá se 3 hodiny.Potom se rozruší 30 ml ledové vody. Přidá se dalších 30 ml methylenchloridu a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se promyje 20 ml solanky a suší se nad síranem hořečnatým. Čištěním chromatografií na silikagelu (2:1 ethylacetát/hexan) se získá 0,40 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

MS (Hi res): m/z vypočteno pro OgffgCl^B^ 329,8214 nalezeno- 329,8215

-92Příklad 81

5, 6-Dichlor- (X -(3,4-dimethoxyfenyl)-1 ,3-dihydro-6Y -/4-methyl fenyl)thio/-2H-isoindol-2-heptannitril

Použije se postup podle příkladu 27 za použití 0,52 g (P-(5-aminopentyl)-3,4-dimethoxy-o(-/(4-methylfenyl)thio/benženacetonitrilu a 0,3. g 1,2-bis(brommethyl )4,5-dichlorbenzenu. Získá se 0,475 g požadovaného produktu jako žlutého oleje.

MS(Hi res El)i m/z vypočteno ^C30^ff32^N2°2^G12 554,1561 nalezeno 554,1525

Příklad' 82

-(Cyklohexýlthio)-3,4-dimethoxybenzenacetonitrii

Opakuje se postup podle příkladu 1 za použití 10,2 g -chlor-3,4-dimethoxybenzenacetonitrilu a °,2 ml cyklohexylmerkaptanu. Získá se tak 7,θ g požadovaného produktu ve formě světležlutých krystalů, t.t. 80x82 °C.

MS (Cl): m/z 292 (MH⁺).··

Elementární analýza pro- C^í^h^S vypočteno 65,95 % C, 7,26% ff, 4,81 % N, 11,00% S.

nalezeno 66,06 % C, 7,29 % H, 4,82 % N, 10,88 % S'.

Příklad 83 ý -(5-Ohlorpentyl·)— cZ -(cyklohexylthio)-3,4-dimethoxybenzenacet oni trii

Opakuje se postup podle příkladu 2 za použití 3,0 g-93(cyklohexylthio)-3,4-dimethoxybenzenacetonitrilu a 2,0 ml brom-5-chlorpentanu. Získá se tak požadovaný produkt jako bezbarvý olej·' - 3_r1 g.

MS(CI): m/z 395' (M).

Příklad 84 (X. - (Cyklohexylthio)-- (3,4-dimethoxyf enyl )-1 ,3dioxo-2H-isoindol-2-heptanňitril

Opakuje se postup podle příkladu 24 za použití 2,1 g - (5-chlorpentyl)- <Á- (cyklohex,ylthio)-3,4-dimethoxybenzenacetonitrilu a 0,954 g draselné soli ftalimidu. Získá se tak 2,13; g požadovaného produktu jako bezbarvé'ho oleje.

Elementární analýza pro ^C29^34^2^^G4 vypočteno 68,75 % C, 6,76 % 8, 5,53 % H, 6,33 % S nalezeno 68,49 % C, 6,84 % 8, 5_r35 % N, 5,98 % S.

Příklad 85

X - (5-Aminopentyl )-ý - (c.yklohexylthio )-3,4-dimethoxybenzenacetonitrii

Opakuje se postup z příkladu 25 za použití 2,0 g h -(cyklohexylthio)- /- (3,4-dimethoxyfenyl)-1,3-dioxo-2Hisoindol-2-heptannitrilu a 3,0 ml hydrazin hydrátu. Získá se tak 1,32 g: požadovaného produktu jako žlutého oleje. Elementární analýza pro θ21^32^2^θ2 0,7MH₂0 vypočteme 64,81 % C_r 8,81 % H, 7,20 % H, 8_r24 % S nalezeno 65,04 % C, 8,49 % H, 6,98 % N, 8,20 % S.

-^4Příklad 86

-(Cyklohexylthio)-^ -(3,4-dimethox.yfenyl)-1,3-dihydro5,6-dimethoxy-2 (1 H)-isoindolheptannitril

- K roztoku 1,12 g -(5-aminopentyl)- οζ-(cyklohexylthio )-3,4-dimethoxybenzenacetonitrilu; v 15 ml N,N-dioethylformamidu se přidá 0,7 g 1,2-bischlormethyl-3,4dimethoxybenzenu, 1,64 g uhličitanu draselného a 0,025 g jodidu draselného. Roztok se míchá při 90 °C 24 hodin: a potom se ochladí. Roztok se nalije do vody a extrahuje se ethylacetátem- Organická vrstva se promyje solankou, su ší se nad síranem sodným a rozpouštědlo se odstraní za' sníženého tlaku. Zbytek se čistí třikrát rychlou chromatografii za použití methylenchloridu/methylalkoholu (98:2) Získaný žlutý olej se: rozpustí v diethyletheru' a filtruje se peřs sloupeček diatomické hlinky. Získá se tak 0,5 g· požadovaného produktu jako tmavé’ skelné pevné látky.

MS (PA3): m/z 539Elementární analýza pro vypočteno- 69,11 % C, 7,86 % E, 5,20 % N_r 5,95 % S nalezeno 68,96 % C, 7,96 % H, 4,95 % N, 5,92 % S.

Příklad 87

5-//(4-i»'ethylfenyl) thio/methyl/-1 , 3-benzodioxol

K roztoku 28,5 g p-thiokresolu ve 250 ml vody se přidá; 8,8 g hydroxidu sodného. Roztok se krátce zahřeje na parní lázní za intenzivního míchání a potom se ochladí na teplotu místnosti. K tomuto roztoku se přidá 250 ml toluenu, 39,7 g 5Cfé hmotn. roztoku 3,4-methylendioxybenzylchloridu v methylenchloridu a 3,3 g tetra-butylasc-95niumchloridu. Tento roztok se míchá při teplotě místnosti jednu hodinu a potom se přidá 4,4 g hydroxidu sodného. Výsledný roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc; a potom se rozdělí. Organická vrstva se promyje IN hydroxidem sodným, solankou a suší se nad síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbylý hnědý olej; se čistí sloupcovou chromatografií za použití.' hexanu/chloroformu (2:1). Získá se 24 g požadovaného produktu jako čirého olLeje.

MS (Cl) : m/z· 259 (MH⁺).

Elementární analýza pro- C^ff^O^S' vypočteno: 69,74 % C, 5,46 % E, 12,41 % S nalezeno 69,-53 % C, 5,36 % H, 12,69 % 8.

Příklad 88

5-/6-3rom-1-/(4-methylfenyl)thio/hexyl-1,3-benzodioxol

Opakuje se postup z příkladu 40 za použití 23,44 g

5-//(4-methylfen.yl)thio/methyl/-1 ,3-benzodioxolu a 24,7 ml 1 ,5-dibrompentanu. Získá se tak 23. g požadovaného produktu jako čirého oleje.

MS(Cl): m/z 408 (MH⁺).

Elementární analýza pro ^20^23^^2⁸ vypočtenu 58,96 % C, 5,69 % H, 19,62 % 3r, 7,87 % S nalezeno 59,09 % C, 5,73 % 3, 19,-65 % Br, 7,80 % S.

Příklad 89

2-/6-(1 ,3-3enzodioxol-5-yl )-6-/(4-methylfenyl)thiohex.yl/-1 ,2,3,4-tetrahydro-6,7-dimethoxyisochinolin

Opakuje se příklad 49 za použití 4,07 g 5-/6-brom1 -/(4-methylfenyl)thio/hex,yl-1 , 3-benzodioxolu a 4,6 g

-966,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrachloridu. Získá se tak 4,2 g požadovaného produktu jako žlutého oleje.

MS(Cl): m/z 520 (ME⁺).

Elementární analýza pro °3,^H37^NO4^S vypočteno 71 ,& 5 % C, 7,18% H, 2,70% IT, 6,1 7 % S nalezeno 71 , ?2 % C, 7,33. % E_ř 2,72 % Ν’, 5,90 % S.

Příklad 90 _//(4-M_eth.ylfenyl) thio/meth.yl/-4- (trifluormethoxy )benzen

Opakuje se postup z příkladu 87 za použití' 11,8 g p-thiokresolu a 9,6 g 4- (trifluormethoxy)benzylchloridu. Získá se 10,9 g požadovaného ^rpduktu jako bílých krystalů.

t.t. 74 - 76 °CMS(Cl): m/z. (MH⁺).

Elementární analýza pro 0·^ ^F^OS vypočtenu 60,39 % O, 4,39 % E, 19,11 % P, 10,75 % S nalezenu 60,33 % 0, 4,26 % H, 19,34 % P, 11,01 % S.

Příklad 91

-/6-3rom-1 -/(methy lf enyl) thio/hexyl/-4- (trif luormethoxy )benzen

Opakuje se postup z příkladu. 40 za použiti 9,95 g 1 - //(4-methylf enyl )thio/methy 1/-4- (trifluormethoxy) benzenu a 2.3,0 g i,5-dibrompentanu. Získá se tak 13,θ g požadovaného produktu jako žluté gumy.

-97MS (Hi res) : m/z.

vypočteno pro C^H^F^BrOS 446,052?

nylezeno 446,052?

Příklad 92 ,2,3,4-Tetrahydro-6,7->-dimethoxy-2-/6-/(4-me thylf enyl ) — thio/-6-/trifluormethoxy )fenyl/hexylisochinolin

Opakuje se postup z příkladu 46 za použití 7,16 g 1 -/6-brom-1-/(methylfenyl) thio/hexyl/-4-(trifluormethoxy)benzenu a 4,6 g 6,7-dimethox.y-1 , 2,3,4-tetrahydroisochInolin-hydrochloridu. Získá se tak 6,24 g požadovaného produktu jako žluté gumy.

MS(Cl): m/z 560 (Mff⁺).

Elementární analýza pro C^H^-F^NO S:

vypočteno 66,52 % C,. 6,48 % ff,. 2,50 % N, 10,18 % F, 5,73 nalezeno 66,38 % C, 6,46% ff, 2,47% N,. 10,36 % E, 5,84

Příklad 93

-Fluor·-4-//4-me thylf enyl) thio/methyl/benzen

IC 10 °C teplému roztoku 1,93 g 60% hydridu sodného, v 50 ml N,N-dimethylformamidu se přidá po kapkách roztok 4,16 g p-thiokresolu: v 10 ml Ν,Ν-dimethylformamidu. Roztok se míchá 20 minut při 5 °C, potom 40 minut při teplotě místnosti. Roztok se ochladí na 5 °C a přikape se 5,67 g 4-fluorfenylbenzylbromidu v 10 ml Ν,Ν-dimethylf ormamidu;. Roztok se nechá ohřát na teplotu místnosti přes noc. Směs se nalije do 250 ml vody a pevná látka se oddělí filtrací'. Získá se tak po sušení 5..,0 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky..

-98Elementární analýza pro C^H^FS vypočteno 72,38 % C, 5,64 % H_r 8,18 % F, S=neanalyzována nalezeno 72,48 % C, 5,66% H, 8,37% F, S=neanalyzována.

Příklad 94

-//6-3rom-1 - (4»f luorf enyl )hex.yl/thio/-4-me thylbenzen

Opakuje se postup z příkladu 40 za použití 1,39 g 1-fluor4-//4-me thylf enyl) thio/methyl/benzenu a 4,5 ml 1 ,6-dibromhexanu. Získá se tak. 0,49 g požadovaného produktu jako·, žlu té polopevné látky.

¹H NMR (CDC1₃): £ 7,25-6,9 (m, 8H), 4,0 (dd, 1H), 3,3? (t, 2H, CH₂3r), 2,28 (s, 3H, ArCff_β), 1,8 (m, 4H), 1,3.. (m, 6H).

Příklad 9?

2-/7- (4-Fluorf enyl) -7-/(4-me thylf enyl) thio/heptyl/1,2,3,4-tetrahydro-6,7-isochinolin

Opakuje se postup z příkladu 3 za použiti 0,49 g 1 -//6-brom-1-(4-fluorfenyl)hexyl/thio/-4-methylbenzenu a 0,284 g 6,7-dimethoxy-1 ,2,3,4-tetrahydroisochinolin-hydrochloridu'. Získá se 0,457 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje..

2,42 (m, 6H), 2,69 (s, 3H, Cff-j), 1,95 - 1,25 (m, 10H).

Příklad 98

Hýdrochlorid 1,2,3,4-tetrahydro-6-methoxy-7-(fenylmethoxy) isochinolinu’·

-99K roztoku 0,63 g kyseliny 3,4-dihydro-7-hydroxy-6methoxy-2(l H)-isochinolinkarboxylové ve formě 1 ,1 -dimethylethylesteru v 10 ml Ν,Ν-dimethylformamidu se přidá 0,092 g 60% hydridu sodného v oleji. Roztok se míchá při teplotě místnosti jednu hodinu· a potom se přidá' 0,578 g benzylbromidu. Roztok se míchá při teplotě místnosti 72 hodin. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku? a zbytek se vyjme^-- do ethylacetátu·. Roztok se promyje vodou- a organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vyjme do 20 ml· diethyletheru. Tento roztok se ochladí na 0 °C a přidá se 10 ml 4,5M kyseliny chlorovodíkové v ethylalkoholu. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se vyjme do minimálního množství horkého ethylalkoholu. Po ochlazení na teplotu místností se přidá stejný objem diethyletheru. Bílá pevná látka se odstraní a promyjediethyletherem. Získá se tak 0,56 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky, t.t. 217 - 219 ^QC.

MS(Hi res): m/z vypočteno pro G^^H^qNO^GI 269,1494 nalezeno 2 70,1494(MH⁺)

Elementární analýza pro ,^,θΝΟ^Ι vypočteno 65,41 % C, 6,64 % _H, 4,49 % N, 11,93 % Cl nalezeno 65,63 % C, 6,10 % R, 4,48 % Ν', 11,59% Cl.

-100Příklad 97 /, - (3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6-methoxy-{^ -/(4methylf enyl) thío/-7- (f enylme thoxy )2 (1 H)-is ochinolin

Opakuje se postup z příkladu 3 za použití 0,89 g - (5-chlorpentyl)-3,4-dimethoxy- -/(4-methylfenyl)thio/benzenace tonitrilu- a 0,56 g 1,2,3,4-tetrahydro-6-nethoxy7- (fenylmethoxy)isochi'nolin-hydrochloridu. Získá se 0,5 g požadovaného produktu? jako bezbarvá gumy.

MS(Hi res ) : m/z vypočteno pro C^H^N^SO^ 636,3021 nalezeno? 1636,3087

Elementární' analýza pro C^H^ř^SO^ H^O vypočtena- 71 ,53 & 0, 7,08 % H, 4,28 % N, 4,θ7 % S nalezeno 71 ,16 % C., 7,05 % H, 4,04 % N, 4,77 S.

Příklad 98^; ,1-Dimethylethylester kyseliny 3,4-dih,ydro-7-//( 1 ,1 dimethylethyl)dimeth.ylsilyl/ox.y/-6-methoxy-2 (1 H)-isochinolinkarboxylové

Do suché lahve se vloží 6,7 g 6-hydroxy-7-methoxy¹ >2,3,4-tetrahydroisochinolinu, 4,98 g di-tercbutyl-dikarbonátu? a 40 ml methylenchloridu. Roztok se ochladí na 0 °C a pomalu se k reakční směsi přidá 4,77 ml diisoprop.ylethylaminu a potom 0,010 g p-dimethylaminopyridinu.

Směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se 15 hodin.

Po odpaření rozpouštědla se' sueová směs produktu umístí přímo? na sloupec silikagelu (eluce 5:1 hexan/eth.ylacetát) a získá se 8,1 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

-101t.t. 4£-49 °c.

MS(Hi res): m/z vypočtenu pro C^H^NO^Si 393,2335 nalezeno: 393,2307

Elementární analýza pra C^HL^NO^Si vypočtenu 64,08 % G, 8,96 % H, 3,56 % N nalezeno 63,81 % O, 8,97% H, 3,48% E.

Příklad 99 ,1 -Dime th.ylethylester kyseliny 3,4-dih.ydro-7-hydroxy- 6- methoxy-2 (1 K)-isochinolinkarboxylové

6,0 g 1,1-dimethylethylesteru kyseliny 3,4-dihydro7- //(1,1 -dimethylethyl )dimethylsilyl/oxy/-6-methoxy_2 (1 H)isochinolinkarboxylové se rozpustí ve 30 ml tetrahyarafuranu a ochladí se na 0 °C. Přidá se 22,8 ml 1 ,0'ví roztoku tetrabutylamoniumfluoridu za míchání. Reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se tři hodiny. Reakce se přeruší 10 ml nasyceného roztoku hyórogenuhličitanu; sod néhcr a 10 ml vody, potom se přidá 20 ml diethyletheru. Po oddělení vrstev se vodná fáze extrahuje 2 x 20 ml diethyletheru··. Spojená organické vrstvy se prom.yjí 20 ml solanky a suší se nad síranem hořečnatým. Po odstranění rozpouštědla se produkt čistí chromatografií na silikagelu . se(za eluce 2:1 hexan/ethylacetát) a získá se 4,15 g požadovaného produktu; jako bílé pevné látky.

t.t. 80-83 °C.

MS (Hi res ) : m/z vypočteno pro θ^^21^θ4 279,1470 nalezeno 279,1469.

-102Elementární analýza pro vypočteno 64,50 % C, 7,58 % H, 5,01 % Ν' nalezeno 64,47 % C, 7,61 °h H, 5,19 % N.

Příklad 100 , 1-Dimethylethylesteir kyseliny 3,4-dihydro-6-methoxy7-//(trifluormethyl)sulfonyl/oxy/-2(1 H)-isochinolinkarbóxylové

Do suché nádoby pod argonem se přidá 2,54 g 1,1-dimethylethylesteru kyseliny 3,4-dihydro-7-hydroxy-6methoxy—2 (1 H)-isochinolinkarboxylové a 20 ml suchého pyridinu. Směs se ochladí na O °C a pomalu se přidá 1,68 ml triflic-anhydridu. Po ohřátí na teplotu místnosti a míchání po 1 5 hodin se reakce přeruší 70 ml vody. Přidá se 1OOml podíl diethyletheru a vrstvy se oddělí'. Diethyletherová vrstva se promyje 2 x 30 ml 10% HCL, 2 x 20 ml vody a 30 ml solanky. Po odstranění' rozpouštědla se zbytek čistí chromatografií na silikagelu (eluce 3:1 hexan/ethylacetát) a získá se 3,21 ..g požadovaného; produktu jako bílé pevné látky.

t.t. 100-102 °G.

vypočteno pro C^H^qNO^F^S 411,0963 nalezeno 411,1016

Elementární analýza pra vypočteno 46,71 % C, 4,90 % Hý 3,40 % N nalezeno 46,88 % C, 5,12% Η, 3,33% N.

-103Příklad 101

Ester kyseliny 1,2,3,4-tetrahydro-6-methoxy-7-isochinalinyl trifluormethansulfonové

Do nádoby se vloží 8 ml 4,5M kyseliny chlorovodíkové/ethylalkoholtc a ochladí se na 0 °C*. Potom se přidá 0,400 g 1,1-dimethylethylesteru kyseliny 3,4-dihydro-6methoxy- 7-//(trifluormethyl)sulfonyl/-oxy/-2(1H)-isochinolinkarboxylovď rozpuštěného v 1 ml diethyletheru. Reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se dalších 30 minut. Po odpaření rozpouštědla se ke zbytku přidá 40 ml· chloroformu! a 25⁷ ml vodného hydrogenuhličitanu· sod- ného. Vrstvy se oddělí a organická fáze se suší nad síranem hořečnatým·. Chloroform se odpaří a získá se 0,303. g požadované sloučeniny jako žluté gumy.

^]H NMR(CDC1₃) í 6,90(s, 1H), 6,74 (s, 1H), 3.,94 (s, 2H),

3,89 (s, 3Hj, 3,13. (t, J=6, 2H), 2,81 (t, J=6,2H)_ř 2,40 (šs,. 1H).

Příklad 102

Kyselina 2-/6-kyano-6-(3,4-dimethoxyfenyl·)-6-/(4-methylfenyl·)thio/hexyl/-1,2,3,4-tetrahydro-5-methoxy-7-isoChino lin-trifluormethansulfonová

K 0,3 g; esteru kyseliny 1,2,3,4-tetrahydro.-6.-methoxy7-isochinolinyl-trifluormethansulfonové kyselina se přidá 0,540' g ot - (5- jodpentyl) -3,4-dimethoxy- c<-/( 4-methylf enyl )thio/benzenacetonitrilu;, 10 ml acetonitrilu a nakonec 0,51 ml diisopropylethylaminu’. Směs se nechá refluxovat 15’ hodin. Po vychladnutí reakční směsi na teplotu místnosti se rozpouštědlo odstraní za vakua. Zbytek se rozdělí mezi 50 ml diethyletheru a 30 ml 1N hydroxidu sodnéhn. Ρσ

-104oddělení vrstev se vodná vrstva dále extrahuje 30 ml di ethyletheru. Spojené organické vrstvy se promyjí 20 ml vody a solanky (postupně) a suší se nad síranem horečnatým» Po odstranění rozpouštědla se produkt čistí chromatogra— fií na silikagelu (eluce 95 i5 methylenchloridem/methyl— alkoholem) a získá se 0,402 g požadovaného produktu jako bílé pěny.

MS(Hi res): m/z vypočteno pro ^333jyN₂0gF^S₂ 678,.2045 nalezeno 678,2270

Elementární analýza pro vypočteno 58,39 % C·, 5,49 % H, 4,13?% N”_r 9,4-? % S nalezeno 58,32 % C, 5,39 % Η, 4,05^;% K,. 9,52 % S.

Příklad 103 ,2-Bis(chlormethyl)-4-methoxy-5-(fenyImethoxy)benzen

So směsi 12,0 g 1-methoxy-2-(fenylmethoxy)benzenu 18,Q ml 37% formaldehydu a 2,0 g jodidu zínečnatého ve 200 ml diethyletheru'se probublává plynný chlorovodík takovou rychlostí že se udržuje mírný reflux. Přidávání plynného chlorovodíku se ukončí po 1,5 hodině a roztok se míchá dalších 1,5 hodiny. Roztok se nalije do vody a extrahuje se diethyletherem. Organická vrstva se promyje solankou a suší se nad síranem sodným. Těkavé látky se odstraní a získá se 15,θ g oleje. Tento olej se vyjme do diethyletheru a nechá se projít, přes krátký sloupeček hydra tovaného křemičitanu horečnatého se 400 ml diethyletheru. Těfcavé látky se odstraní a zbylý olej se čistí za použití 4 % ethylacetátu v hexanu·. Získá se tak 1,36 g požadovaného produktu: jako- bílé chmýřovité pevné látky.

-105t.t. 114-116 °C ’ηΝΜΚ (CDClj): 7,46-7,31 (a, 5H, Ar), 6,91 (s, 1H, Ar),

5,15 (s, 2H, OCff₂Plr), 4,69 (s, 1H, CI^Cl), 4,65 (s, lH_r CH^Cl),. 3,88 (s, 3H, OCH^).

Přiklaď 104

2,3-Dihydro-5-methoxy-6- (fenylmethoxy )-2- (fenylmethyl )1H-isoindoI

Opakujme se postup zz příkladu 26 za použití 1,0 g bis (chlormethyl )-4-aethoxy-5^;- (fenylmethoxy) benzen.tr a .0,6 mí benzylaminu-. Získá se tak 0,74 g požadovaného produktu jako béžové pevné látky.

t.t. 94 - 96 °O.

MS (PAS): m/z; 346 (M+H).

vypočteno pro 0,05M CE₂C1₂

79,16 % C, 6,66 %' ff, 4,01 % K nalezeno

78,96 % C, 6,76 % H, 3,87 % K.

Příklad 105

2,3-Dihydro-6-methoxy-1 H-isoindol-5-ol

Ke 35 mí ethylalkoholu se přidá 0,5 g 2,3-dihydro-5methoxy-6- (fenylmethoxy )-2- (fenylmethyl)-1 H-isoindolu.

Eoztok se ohřeje až do úplného rozpuštění všech složek. Roztok se ochladí na teplotu místnosti a přidá se 0,13 g 35% hydroxidu paladia na uhlí. Výsledná směs se třepena Parrově aparatuře při -©stok se zfiltruje přes sloupeček: diatomické hlinky a sloupešek se promyjes ethylalkoholem. Těkavé látky se odstraní a získá se 0,209 g požadovaného produktu· jako hnědožluté pevné látky.

— 106—

Příklad 106 σζ - (5-Brompentyl)-3,4-dimethoxy-c\-/(4-methylfenyl) thio/benzenacetonitrii

X· roztoku 7,0 g 3,4-dimethoxyacetonitrilu ve 160 ml bezvodého tetrahydrofuranu se přidá 1,12 g 50% hydridu sodného v oleji.. Po 1,5hodinovém míchání roztoku při teplotě místnosti se najednou přidá 12,3; ml 1,5-dibrompentanu- Roztok se míchá při teplotě místnosti. 3,5 hodiny a pak se nalije do vody- Směs se extrahuje diethyletherem(2 x 250 ml) a organická vrstva se promyje? solankou a suší se nad síranem- hořečnatým. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí sloupcovou chromatografií za použití elučního gradientu od hexanu do 10 % ethylacetátu v hexanu. Získá se tak 8,8 g požadovaného produktu jako bezbarvého oleje.

MS(Cl): m/z 448,5 (MH*)Elementární analýza pro C₂₂H₂g.BrNO₂S.

vypočteno 58,92 % C, 5,84 % H, 3,12 % N, 17,82 % 3r, 7, 1 5 % S nalezeno 58,80 % C, 5,75 % H, 2,96 % Ν’, 1 7,59 % Br, 7,45 % S ¹HNMR (CDClg): í 7,25 (d, 2H, ď=8, M_ePhH), 7,07 (d, 2H,

J=8, MePhH), 6,96 (q, 1H, (MeO)2Ar-4-H), 6,88 (d, 1H,(MeO)2Ar

4-H), 6,88 (d, 1H, (MeO)2Axr-2-H), 6,78 (d, 2H, J=8, (MeO)2Ar6-H), 3,88, 3,84 (2s, 2H, 2ArOCHg), 3,35 (t, 2H, 6-CH₂3r), 2,32 (s, 3H, Ar-CHg), 2,2 (a, 2H, 3-0^), 1,84 (ca, 2H_r

6-CE₂), 1,48, 1,31 (2m,. 4H), 5-0¾).

Příklad 1 07^z

A-(3,4-Dimethoxyfenyl )-1,3-dihydro-$-hydroxy-ó-methoxy-A /(4-methylfenyl)thio/-2H-isoindol-2-heptannitril

Použije se postup podle příkladu 49 s 0,209 g.

2,3-dihydro-6-methoxy-1H-isoindol-5-olu (příklad 105) ^a

-107°>5? g c< -(5-brompentyl)-3,4-dimethoxy-/-/(4-methylfenyl)thio/benzenacetonitrilu?. Získá se tak 0,5 g požadovaného produktu jako- šedé pěny.

MS (Hi res): m/z vypočteno pro ^3^35^2^4 533,2474 nalezeno 533,2460

Příklad 108

5- (2-Chlore thoxy)- Λ- (3,4-dimethoxyfenyl)-1 ,3-dihydro-6methoxy- (A-/(4-methylf enyl) thio/-2FT-isoindol-2-heptannitril

Použije se postup z příkladu 32 s 0,45 g ¢(-(3,4dimethoxyfenyl)-1,3-dihydro-5-hydroxy-6-methoxy-¢(-/(4methylfenyl)thio/-2H'-isoindol-2-heptannitrilu' a 0,65 g 2-chlorethyI-p-toluensulfonátu. Získá se tak 0,367’ g požadovaného produktu jako světlehnědého oleje.

MS(Hi res): m/z vypočteno pro C-^E^ř^SClO^ 595,2397' nalezeno 595,2391 (M+H).

Příklad 109

-(3,4-Dimethoxyfenyl)-1,3-dihydro-5-/2-(1 H-imidazol1 -yl)ethoxy/-6-methoxy- ,/ -/(4-methylfenyl)thio/-2Hisoindol-2-heptannitril

K roztoku 0,11 g, imidazolu v 6 ml N,N-dimethylformamidu·, pod argonem, se přidá' 0,36 g 60% hydriďu sodného v oleji. Po míchání po 40 minut se přidá roztok 0,3 g 5-(2-

toluenu a potom 0,3 g jodidu sodného. Výsledný roztok se

-1 08zahřívá na 76 ^ttC; 21 hodin. Roztok se ochladí a nalije se do vody. Roztok se extrahuje ethylacetátem a organická vrstva se promyje? solankou a suší nad¹ síranem sodným. Rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku: a zbylý olej se čistí sloupcovou chromatografií za použití elučního gradientu? od 4 % methylalkoholu v methylenchloridu do 9 % methylalkoholu v methylenchloridu. Získá se tak 0,196 g požadovaného produktu jako béžového oleje.

Příklad 110

Dihydrochloridl ^-(3,4-dimethoxyfenyl)-1 ,3-dihydro-5/2-(1 H-imidazol-1-yl)ethoxy/-6>methoxy--/(4-methylfenyl)thio/-2H-isoindol-2-heptannitrilu

K roztoku 0,196 g: X -(3,4-dimethoxyfenyl)-1,3-di-hydro-5-/2-(1H-imidazol-1-yl)ethoxy/-6-methoxy-y^ -/(4methylfenyl)thio/-2H-isoindol-2-heptannitrilu v 0,5 ml methylenchloridu se přidá; 5 ml diethyletheru a potom 0,17 ml 4,5^ kyseliny chlorovodíková v ethylalkoholu. Přidá’ se dalších 15 ml diethyletheru a roztok se intenzivně míchá 1 hodinu. Bílá pevná látka se oddělí filtrací,promyje se diethyletherem a suší. Získá se tak 0,166 g požadovaného produktu jako bílé pevné látky.

Elementární analýza pro O^H^N^SO^. 2HC1 1,5M:

vypočteno 59,58 % C, 6,34 % H, 7,71 % li,· 9,76 % Cl, 4,41 % S nalezeno 59,49 % C, 6,48 % H, 7,52 % Ν',. 9,62 % Cl, 4,28 % S.

Příklad 111 /(7-Brom-1-fenylheptyl)thio/benzen

Roztok 20,02 g. benzylfenylthioetheru ve 300 ml diethyletheru se ochladí, pod dusíkem, v lázni ze suchého

-1 09ledu (výchozí thioether se vysráží z roztoku). Přidá se šedesát dva ml 1,7M terč.butyllithia v pentanu a po 30 minutách se většina sraženiny znovu rozpustí. Heakční směs se ohřeje na 0 °C na 10 minut, ale tvoří se ještě příliš mnoha sraženiny, proto se reakční směs znovu ochladí na -78 °^G na 30 minut. Výsledný žlutý roztok? se pod; dusíkem· kanyloii přenese do na -78 ^aC ochlazené druhé nádoby s 38,5 ml 1 ,6-dibromhexanu: ve 400 ml diethyletheru (200 ml tetrahydrofuranu; je potřeba pro udržení homogenního roztoku;). Po přídavku se reakční' směs nechá ohřát na teplotu místnosti během 4 hodin. Přidá se deset ml ethylacetátu: a 10 ml 2-propanolu a reakční směs se zahustí ve vakuu. Bílý olejovitý zbytek se rozpustí v chloroformu, promyje se zředěnou kyselinou brcmovodíkovou a nasyceným chloridem sodným, suší se a zahuštěním ve vakuu se získá 74,6 g surového produktu. Surový produkt se čistí 3 x chromatografií (hexan - chloroform- methylalkohol) a zís á se 29,26 gr čistého, produktu.

MS(Cl): m/z 362 (M⁺) a 365 (M⁺+H).

Elementární analýza pro C^ ^H^BrS vypočteno? 63,31 % 6,3?% H, 21,2?% Br, 9,09 %' S nalezena 63,05 % K,· 6,49 % H, 21,05 % Er?, 9,14 % S.

Příklad 112 , 2,3,4-rTetrahydro-6,7-dimethoxy-2-/7-fenyl-7- (fen.ylthia)heptyl/isochinolin

Volná báze 4,60 g hydrochloridu 6,?-dimethoxy-1,2,3,4tetrahydroisochinolinu, 3,63 g /(7-brom-1 -fenylheptyl)thio/benzenu, 50 ml acetonitrilu a 2,61 ml ethyldiisopropylaminu se zahřívá pod reflůxěm 29 hodin. Rozpouštědlo se odpaří přes noc; a zbytek se rozdělí mezi chloroform a vodný hyd-1 10roxid amonný. Organický vrstva se suší a zahuštěním ve vakuu se získá 5,81 g surového produktu. Zbytek se čistí chromatografií' (silikagel,chlorof orm/methylalkoholL) a získá se 1,73 g požadovaného produktu.

Elementární analýza pro C^H^^NC^S vypočteno; 75,75 % C, 7,84 % ff, 2,94 % N, 6,74 % S nalezeno 75,40 % C, 7,56% H,. 2,74 % R, 6,96 % S

MS(cr): m/z 476 (M-H⁺).

Příklad 113 íA -(5-Brompentyl)-^ -(cyklohexylthio)-3,4-dimethoxybenzenacetonitril

K roztoku 7,57 g produktu z příkladu 82 ve 180 ml bezvodého tetrahydrofuranu, pod argonem se přidá 1,3 g 50% hydridu sodného v oleji. Směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu, potom se přidá 10,6 ml 1,5-dibrocrpentanu; a v míchání se pokračujme 4 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se nalije do 450 ml vody a extrahuje se diethyletherem. Organická vrstva se promyje nasyceným chloridem sodným, suší, filtruje a zahustí se ve vakuu. Získá se tak 23 g surového oleje:. Tento olej se čistí chromatografií (silikagel, hexan až 10 % ethylacetá:t/hexan) a získá se 8,9 g požadovaného produktu.

¹ H-NMRÍCDCl^): S 7,19-7,15(m, 1H,Ar)_r 7,08(d, 1ff, Ar), 6,89-6,83(d, 1 H, Ar)„ 3,91 (s, 6H, 4-OC^), 3,33 (t, 2H, -CH₂Br), 2,65/M, 1 H), 2,18-1,95 (m, 3H)_r 1,83-1,78 (m, 3Π), 1,56-1,35 (m, 7H), 1 ,34-1 ,12 (ta, 5H).

-111Příklad 114

-(Cyklohexylthio)- ^-(3,4-dimethoxyf enyl )-3,4-dihydro7-hydroxy-6-methoxy-2 (1 H)-isochinolinheptannitril

Bod argonem se směs 2,17 g; produktu z příkladu 113,

1,8 g produktu z příkladu 28, 13,0 ml N,N-dijodpropylethylaminu a 80 ml acetonitrilu? zahřívá pod refluxem 8 hodin. Reakční směs se ochladí.' a zahustí se ve vakuu, a suší za vysokého vakua 1 hodinu. Surový zbytek se-? rozpustí v 70 ml tetrahydrofuranu a přidá se 10,0 ml 1M tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu a směs se míchá při teplotě místnosti, pod argonem·,. 2,5 hodiny. Směs se nalije do vody a extrahuje? se ethylacetátem. Organická ..vrstva se promyje nasyceným chloridem sodným, suší, filtruje a zahustí se ve vakuu a získá se 4,0 g· hnědého.oleje. Tento, olej se čistí chromatografií (silikagel: 1 %, 1,5 % a 2 % methylskoholu/methylenchloríáLs) a získá se 2,2 g? požadovaného produktu.

Elementární analýza pro C^H^N^SO^ vypočteno 69,11' % C, 7,86 % ff, 5,20 % E nalezena 68,93 % C, 7,82 % H, 5,08% N.

Příklad 115

7- (2-Chlorethoxy)- ¢( - (cyklohexylthio)- /\- (3,4-dimethoxyf enyl)-3,4-dihydro-6-methoxy-2 (1 H)-isochinoIinheptanoitril

Směs, pod argonem, 2,0 g’produktu z příkladu 114,

5 ml 1N hydroxidu sodnéhcr, 5,4 mi 2-chlorethyl-p-toluensulfonátu?a 70 ml 2-butanonu se zahřívá pod refluxem 18 hodin. Směs se ochladí, zahustí' ve vakuu a zbytek sé rozdělí mezi ethylacetát? a vodu. Organická vrstva se promyje nasyceným·, chloridem sodným, suší se a zahustí ve vakuu; a získá se olej. Tento olej se Čistí chromatografií

-1 1 2(silikagel: methylenchlorid, 0,5 %, 1,0% a 1,5% methylalkohol/methylenchloriď) a získá se 1,7 g požadovaného produktu.

Elementární analýza pru C^ jE^NgSClO^ O,1M vypočteno: 65,20 %' C, 7,47% 8, 4,59 % ff, 5/25 % S, 6,98 % Cl nalezeno 65,32 % B, 7,66 % 8, 4,53 % 8, 5,34 % 8, 7,14 % Cl

Příklad 1 1 6'.

Dihydrochlorid? OÍ. - (cyklohexylthiu)-(/ - (3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-7- (2-imidazol-1-ylethoxy )-6-methoxy-2 (1 H)isochinolinheptanonitrilu

K roztoku, pod argonem:, 0,59 g: imidazolu v 16 ml íí,N-dimethylformamiďu se přidá' 0,185 g? 50% hydridu sodného v oleji. Směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu·, potom se přidá 1,6 g produktu z příkladu. 115 ve 20 ml toluenu, obsahujícího 0,10 g jodidu draselného. Výsledná reakční směs se zahřívá na 75 ^σ0· přes noc?·. Roztok se ochladí, nalije se do vody a extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným chloridem sodným, suší a zahustí se ve vakuu, získá se olej?. Tento olej se čistí chromatografií (silikagel,. 2, 4, 6, 8 a 10 % methylalkohol/ methylenchlorid) a získá se 1,27 g béžové pěny. Tato pěna se rozpustí' v 3,0 ml ethylalkoholu a přidá se 1,2 ml 4,5M chlorovodíku v ethylalkoholu. Směs se míchá a přidá se diethylether. Reakční směs se udržuje v. mrazničcer přes noc?·. Supernatant se slije, olej se trituruje s diethyletherem a ponechá se v mrazničce 48 hodin. Pevná látka se oddělí, promyje se diethyletherem a suší 3 hodiny při 40 °C za vysokého vakua a získá se 1,29 g požadovaného produktu: jako bílé pevné látky.

-1 13Elementární analýza pro C^H^ř^SC^ 1,75M HC1 1M H₂0 vypočten© 6Q,50 % C_r 7,3Q % ff„ 7,84 % Ν', 4,49 % S’, 8,68 % Cl nalezeno 60,10 % C, 7,14 % ff, 7,75 % Ν', 4,33 % S, 8,48 % Cl.

Příklad 117 (3,4-Dime thoxyf enyl) (2-pyridylthio)acetonitril

K 5 °C- roztoku 1,4-dimethoxyfenylacetonitrilu ve 40 ml tetrahydrofuranu se přidá po kapkách během 20 minut,

30,0 ml. bis(trimethylsilyl)amidu sodného. Výsledná směs se míchá při 0-5 °C 50 minut. Přidá se roztok 3,33 £. 2,2*- dipyridyldisulfidtí v 10 ml tetrahydrofuranu, po kapkách při 0-5 ^GC. Reakce se míchá' při. 5 °C po 40 minut a potom při teplotě místnosti 1,5 hodiny, -“eakční směs se nalije do ledové vody a extrahuje se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje nasyceným chloridem sodným, suší se a zahuštěním ve vakuu se získá olej, který stáním tuhne. Pevná látka se rozpustí v 16 ml horkého ethylacetátu, ke kterému se přidá 12 ml hexanu; a směs se ponechá při teplotě místnosti 0,5 hodiny a pak se přes noc chladí v mrazničce. Krystaly se oddělí a suší a''získá se 2,75 g požadovaného produktu.

t.t. 108 - 110 ^GC.

Elementární analýza pro C^H^NSC^ vypočteno 62,92 % O_r 4,93 % Η, 9,78 % N\ 11,20% S nalezeno 62,76 % C_r 4,95 % H^r, 9,74 % S, 1 1 ,1 7 % S.

Příklad 118

7-Brom-2- (3,4-dimethoxyfenyl )-2- (2-pyridylthio )heptanonitrii

Titulní sloučenina se připraví postupem podle příkladu 113 za použití 1,3 g produktu z příkladu 117, 0,218 g 50%

-114hydridu sodného, 2,15 g 1,5-dibrompentanu a 16 ni dimethylsulfoxidu se získá po chromatografii. 1 ,61 g požadovaného produktu jako žlutého oleje.

Vypočteno pra· θ20^23^2^®^Γθ2 vypočteno 55,18 % C, 5,32 % H, 6,43% N, 7,36 % S, 18,35 % Br nalezeno: .'-55,39 % C, 5,33% H, 6,32 % Ν’, 7,16 % S, 18,1?% Br.

Příklad 119

-(3,4-Dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-(2pyridylthio)-2(1 H)-isochi'nolinheptanonitril

Směs, pod argonem, 1 ,5-· g produktu z příkladu 1 1 8,

0,790' g hydrochloridír 6,7-dimethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu, 7 ml Ν,Ν-diisopropylethylaminu a 60 ml acetcnitrilu se zahřívá pod refluxem přes noc.·. Reakční směs se ochladí a zahuštěním ve vakuu se získá olej. Tento olej se čistí' chromatografi£ (silikagel: 1 a 2 % methylalkohol/methylenchlorxd) a získá se 1,1 g požadovaného produktu jako skelné? žluté pevné látky.

Elementární analýza pro Ct^H^N^SO^ vypočteno? 67,98 % G, 6,81 % E, 7,6?% Ν’, 5,85 % S nalezeno 6?, 68% C, 6>77 % H, 7,46% H, 5,76 % S.

Přiklaď 120

Hydrochlorid' -(cyklohexylthio)-<\- (3,4-dimethoxyfenyl )1 , 3-dihydro-5,6-dimethoxy-2 (1 H)-isoindolheptannitrilu.

Ke 2,04 g produktu z příkladu 86 v ethylalkoholu se přidá 1,2 ml 4,5M ethanolického· h.ydrochloridui a potom diethylether až do zakalení roztoku. Směs se ochladí v mrazničce přes víkend. Pevná látka se oddělí 'a filtrát, se zahustí ve vakuu, rozpustí v ethylalkoholu, odbarví, filtruje a zahustí se na malý objem. Přidá se diethylether do

-115zékalu, argon se probublává roztokem při teplotě místnosti. Nádoba se chrání před světlem hliníkovou folii a ponechá se při teplotě místnosti 2 hodiny a pak se chladil v mrazničce přes noc. Pevná látka se oddělí a získá se 1,51 g požadovaného produktu.

Elementární analýza pra. ^31^42^2^4 vypočtena 64,73 % C, 7,53 % 5, 4,87 % N, 5,57% 5, 6,16 % Cl nalezeno 64,39 % C, 7,75 % H, 4,74 % N, 5,43 % S, 6,00 % Cl

Příklad 121

Methylester kyseliny -/5-//( 1 ,1-dimethylethyl)dimethylsilyl/ox.y/pentyl/-3,4-dimethoxy benz enoc to vé;

K roztoku, -78 °C pod argonem·, 2,38 g 3,4-dimethoxyoctové kyseliny jako methylesteru ve 30 ml tetrahydrofuranu se přidá 12,45 ml 1,0M hexamethyldisilazanu sodného. Roztok se míchá' při -78 °C 5 minut a potom se ohřeje na 0 °C na 1 hodinu. K tomuto roztoku se přidá 3,5 g (5-brompentyl) (1,1-dimethylethyl)dimethylsilanu. Reakčni směs se nechá ohřát na teplotu místnosti na 12 hodin. Směs se zředí diethyletherem a vodou, vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje nasyceným-chloridem sodným, suš£ a zahustí se ve vakuu, Zbytek se čistí chromatografií (silikagel: hexan/ethylacetát, 5/1) a získá se 2,6 g požadovaného produktu jako čirého oleje.

MS (Hi res): vypočteno 4J0,2488 nalezeno 410,2492

-1 16Příklad 122

Methylester kyseliny -¼ -/5-//(1 _ř1-dimethylethyl )dimethyl silyl/oxy/pentyl/-3,4-dimethoxy- -/(4-methyIf enylúthiu/benzenoctové

Titulní sloučenina se připraví postupem podle příkladu

121 za použití 1,5 g produktu z příkladu 121 ve 35 ml tetrahydrof uranu·, 4,0 ml 1 ,Olí hexamethyldisilazanu a;

1,0 g p-tolyldisulfiďd a získá se 0,9 g požadovaného produktu.

Příklad 123.

Methylester kyseliny < - (5-hydroxypentyl )-3,4-dimethoxyΛ -/(methylfenyDthio/benzenoctové

K 0 °C teplému roztoku 0,9 g produktu z příkladu

122 v 15 ml tetrahydrof uranu se přidá 1,86 ml 1 ,0M tetrabutylamaniumf luoridu·. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti na 1 hodinu a potom se přidá 5 ml 0,1ΓΓ hydroxldřu sodného. Reakční směs se extrahuje diethyletherem. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se čistí chromatografií (silikagel:ethylacetát/hexan, 3/12) a získá se 0,67 g- požadovaného produktu.

Příklad 124Methylester kyseliny Λ-(3,4-dimethoxyfenyl)-1,3-dihydro5,6-dime thoxy- c4-/(4-methylfenyl) thio/-2H-is oind ol-2heptanové

K roztoku 0,2 g produktu z příkladu 123 v 5 mi methy

-117lenchloridu se přidá 0,092 g p-toluensulfonylchloriďtx. Roztok se ochladí na θ °C a přidá se 0,15 ml pyridinu. Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se 5 hodin. Rozpouštědlo se odstraní s proudem argonu^- a k rozpouštědlu se přidá' 5 ml acetonitrilu, 0,5. ml diisopropylethylaminu a 0,087'g 2,3-dihydro-5,6-dimethoxy-1H-isoindolu. Roztok se zahřívá pod řefluxem poď argonem- po 2 hodiny a potom se ochladí na teplotu místnosti. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a voda. Organická vrstva se promyje nasyceným chloridem sodným, suší a zahustí se ve vakuu^-. Zbytek se čistí chromatografií (silikagel: meth.ylenchlorid/methylalkohol, 95/5) a získá se 0,12 g požadovaného produktu.

MS (Hi res): vypočteno 579,2654 nalezeno; 580,2736 (M+H).

Claims (10)

PATENTOTÉ ϊίΆ'Η O K ϊ
1. -1 29kde R¹ , R², R^, R^ a R^ mají výše definovaný význam, který se zbaví chránící skupiny silnou bází v aprotickém rozpouštědle a nechá reagovat s X-A-Y, kde A má výše definovaný význam a X a Y nezávisle znamenají brom, chlor,, nebo jod, za získání meziproduktu vzorce kde A,Y, r\ R², r\ R^ a R^ mají výše definovaný význam', který se nechá reagovat s HB, kde B má výše definovaný význam, v polárním rozpouštědle a terciárním aminu nebu teplotě, za vzniku uhličitanu alkalického kovu při zvýšené

   R¹ sloučeniny vzorce kde

   R² je EF, OH, O-alkyl(C.-C.), F, Br, Cl, i, no₂, ocf₃, alkyKCpCg) nebo N(R^)₂, v

   -130R^' je 8, OH, O-alkyKCj-C^), přímý nebo rozvětvený

   0Si-(C₁-C₄)alkyl, F, Br, Cl, I, NO₂, alkyl(C_]-C_&),

   OCJ^CH^l,. O-alkyl(O₂-C<_)-heterocyklus,

   O-alkyl(C₂-C₅)N.(R¹²)2, OSO2CF3 nebo N(R¹²)2, nebo R^ a? R^' společně znamenají methylendioxy nebo ethylendioxy,

   R⁴ je 8, .OH, 0-alkyl(C:₁-C₄), F, Br, Cl,“ I nebo alkyl(C₁-C₃),

   R⁵ je H, CH, C8208, COg(Cj-C3)alkyl, C82NH2, CH2H(R¹²)2 nebo alkyl(C^-C^),

   R¹ je přímý nebo rozvětvený (C^-Cj ₂)alkyl, cy loalky 1((^C?), bicykloalkyl(Cg-Cj θ), tricykloalkyKCg-C^ θ), heterocyklo nebo skupina vzorce

   c. ir.

   kde m je celé Číslo 0-3,

   X je K, přímý nebo rozvětvený (Cj-C₄)alkyl, I, Cl, Br, F, NO₂ nebo N(R¹²)₂,

   A je přímý nebo. rozvětvený (C₂-₂)alkyl nebo skupina vybraná ze skupin vzorců

   -1313 je skupina vzorce

   R-

   R⁶ *

   kde nap jsou celá čísla n=0-2, p=0-2, r6 je H, alkyl(C^-C^), nebo skupina vzorce kde Sl je celé číslo: s= 1-3, *1 fi

   R' a R jsou nezávisle H, alkyl(C^-C₄), nebo O-alkyl(Cj-C₄),

   R^ je H, O-alkyl(Cj-G₄), F, Br, Cl, I nebo alky]l(G₁-C₃),

   R¹⁰ je H, O-alkyl (C₁-C₃), OR, F, Br,- Cl, I, alkyl -Cyl,

   OCí^ CÍLÍCÍ, O-alkyl (C₂-G^)-heterocyklo, S-alkyl(Cj-C₄), OSO₂CF_3ř OCF₃, OCÍ^-fenyl, NO₂ nebo N(R¹ — 132—

   R^{1 1} je H, O-alkyKC^C*), S-alkyl(C_]-¾), OH, F, 3_r, Cl, I, OCFg, OCHg-fenyl, alkyl(C^-Cg) neb© O-alkyl(C₂-Cg)-heterocyklo,

   R¹² je alkyl(C:₁-C₄) a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

   1 . Sloučenina vzorce
2. 2 3 4 kde R , R-⁵ a R* mají.' dříve definovaný význam, se sloučeninou vzorce v

   X

   -140kde A má dříve definovaný význam, X je brom, chlor nebo jod a R je (C^_^)alkyl, a Lewisovoir kyselinou v chlorová ném rozpouštědle za vzniku, po zpracování s' bází, slouAčenin.y vzorce kde A, Rr_t R-⁵ a R* mají výše definovaný význam·, která se acyluje, v rozpouštědle za přítomnosti terciárního aminu, pomocí H3, kde B má dříve definovaný význam, za získání meziproduktu vzorce kde A,B, R^, a R⁴ mají dříve definovaný význam, která se zpracuje s redukčním činidlem v alkoholickém rozpouštědle za získání meziproduktu vzorce

   -141Q A kde A,B,R , R^J a IC mají dříve definovaný význam, který se zpracuje s redukčním činidlem a získá se sloučenina vzorce kde

   R² je ΙΓ, O-alkyl(C₁-C₄), F, Br, Cl, I nebo alkyKC^Cg),

   R³' j_{e H>} O-alkyKC^-C ), F, 3r, Cl, I nebo alkyl (C,-Cg·) nebo ΈΓ a R^A spolu dohromady tvoří methylendioxy nebo eťhylendioxy,

   R⁴ je H, O-alkyl^-C ), F, Br, Cl, I nebo alkyl (C_]-C^), R⁵ je ff, r1 je přímý nebo rozvětvený (Cj-C^ ₂)alkyl, cykloalkyl(C^Ογ.) , bicykloalkyl (Cg-C^ q ) , tricykloalkyi(Og_^θ)_r heterocyklo nebo. skupina vzorce

   -142kde m je celé číslo 0-3,

   X je Η, přímý nebo rozvětvený (C^-Cpalkyl, I, Cl, Brr, F, NO^ nebo řr(R^)

   A je přímý neber-rozvětvený (C^-C^ ₂ )alkyl, rreba skupina vybraná ze souboru:

   B je skupina vzorce

   E⁶ kde nap jsou celá čísla kde n= 0-2, p= 0-2, R je H, alkylCCj-C^) nebo skupina vzorce

   -143kde s je celé číslo jb= 1-3,
3. 3 je skupina vzorce kde nap jsou celá čísla n= 0-2, p= 0-2, R^ je IF,. alkal(C^-C^) nebo skupina vzorce (CH_?) -A/Wo

   R8

   -J39kde s je celé číslo? s= 1-3,

   3 je skupina vzorce * kde nap jsou celá čísla n= 0-2, p = 0-2, g

   R je H, alkyl(C^-C^), nebo skupina vzorce

   -135- ch₂)_s-4Wkde s je celé číslo s= 1-3,

   R^ a R⁸ jsou nezávisle H, alkyl (C^-C^), nebo. O-alkyl(C₁ -G^), R^ je ff, O-alkyl (Cj-C^ů, F, Br, Cl, I nebo alkyl ((¾-G^),

   R¹⁰ je ff, O-alkyl(Oj-G ), Off, F, Br, Cl, I, alkyl(C₁-C^),

   OCH^CH^Cl, O-alkyl(C₂-C^)-heterocykia,. S-alkyl(C^C₄), OSO₂CF-j, OCF-p 0Cff₂-fenyl, NO₂ nebo N(R¹²)₂,

   R^{1 1} je ff, O-alkyl(C₁-G₄), S-alkyl(G₁-C₄), Off, F, Br,

   Cl, I, OCF^, OCí^-fenyl, alkyl (Oj-Cp nebo O-alkyl(C₂-C^)-heterocyklo, r' ² je alkyl(C,-C₄), a jejích farmaceuticky přijatelných solí.

   3. Sloučenina obecného vzorce ť

   s

   123kde

   R² je H, Off, O-alkyl (C1-O4), F, 3r, Cl, I, NO2, OCF^, alkyl(C1-G^), nebo N(r¹²)2,

   R³' je 5, OH, O-alkyl(C^-C^)přímý nebo rozvětvený

   0Si-(C_rC₄)alkyl, F, 3_r, Cl, I, HOg, alkyl(C_] -C^),

   OCH^CHgCl, O-alkyl(C₂-C-)-heterocyklus_r

   O-alkyl (C₂-C₅)N(R^{1 2} )2, OCF2 nebo Ií(R¹²)2r nebo R² a R³ jsou spolu spojeny a ťv.aří methylendioxy· nebo ethylenůioxy,

   R⁴ je H, OH, O-alkyl (C₁-C₄), F, B_r, Cl, I nebo' alkyl(C₁-C^),

   R⁵' .je H, CM, CE₂Oh, CO₂ (C_] ^C^)alkyl nebo alkyl(Cj-C),

   R je přímý nebo rozvětvený (Cj-Cj jalkyl, cykloalkyl(C^C_?), bicykloalkyl(Cg-C₁₀), tricykloalkylíCg-C^θ),

   X kde m je celé číslo 0-3,

   X je ΣΓ, přímý nebo rozvětvený (C₁ -C Jalkyl, I, Cl, 3ir, F, M0₂ nebe N(R¹²)₂, nebo R je heterocyklus s tou podmínkou, že heterocyklus. nemůže být (CÍL·)

   Wb /

   -124kde r je celé číslo 1-4,

   A je přímý nebo rozvětvený (C^-Gj ₂)alkyl, nebcn skupina vybraná ze skupin vzorců

   W je 3r, Cl, I, NE₂, CSO₂alkyl(Cj-C^), CSO₂C?₃,

   0S0₂~fenyl, OSO₂~p-tclyl, s podmínkou, že je-li A -CE^CR^CE^-,. W nemůže být OE nebo. Cl, 3r, F nebo l,'

   R^{1 2} je alkyKCj-C ) a jejií farmaceuticky přijatelné soli

   -,3 η

   kde

   E² je H, OH, O-alkyl (C,-C+), ?, 3r, Cl, I, NO2, OCE-j, alkyl (C,-C&) nebo !f(S^l2)2,

   A je H, OH, O-alkyl (Oj-CL·), přímý nebo rozvětvený OSi ÍC,-C₄ Jalkyl, ?, =r, Cl, I, NO₂, alkyl ÍC,-C_&),

   -119OCH^CHYCl, O-alkyl (C₂-C^)-heterocyklus·, O-alkyKC^C₅-)N(r'²)2, OSO2CF3, OCF3 neba N(R¹²)2, nebo R² a R^ dohromady znamenají methylendioxy nebo ethylendioxy,

   R^ je H, OH, O-alkyKCj-G ), F, 3r, 01, I nebo alkyl(Ci-c₃),

   R⁵ je H, ON,. Cff^OH, CO^C^-G^alkyl, CÍ^NH^, CE^R¹²)^ nebo alkyl (Cj-C.^),

   R¹ je přímý nebcn rozvětvený (C₁-C^₂)alkyl, cykloalkyl(C₃~ -Cy-), bicykloalkyl(C₆-C-₁₀), tricykloaikyl(C^-G^ θ ), heterocyklo nebo m je celé Číslo 0-1,

   X je H, přímý nebo rozvětvený' (C^-C^Jalkyl, I, Cl, 3r, F, N0₂ nebo- N(R^{1 2} )₂,

   A je přímý nebo. rozvětvený (C₂~C^ ₂)alkyl,

   -120- kde nap jsou celá čísla s n= 0-2, p= 0-2, R^ je ít_ř alkyKCj-C^), nebo kde s je celé číslo a=1-2,
4. 4. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1, kde R je CE, vyznačující se tím·, že zahrnuje reakci arylchloracetonitrilu vzorce

   Cl kde R², a R^ mají výše definovaný význam, s R¹SH_r kde R¹ má výše definovaný'^-význam, a bází při zvýšené teplotě za získání meziproduktu’ vzorce

   -125kde R¹, R

   Rί

   R'

   S* mají' výše uvedený význam a R' je CH, která se deprotonuj.e silnou bází' v aprotlckém rozpouštědle a nechá reagovat s X-A-Y, kde A má výše definovaný význam’ a X a Y jsou nezávisle brom, chlor nebo jod, za vzniku meziproduktu vzorce kde A, Y, B.¹ , R², R^, R⁴ a R^ mají výše definovaný význam, který se nechá reagovat, s H3, kde B má výše definovaný význam, v polárním rozpouštědle a terciárním aminem nebo uhličitanem alkalického kovu při zvýšené teplotě za získání sloučeniny vzorce

   -126*1 kde

   R² je E, OH, O-alkyl-CrC4), F, Br, Cl, I, NO2, OCFp alkyl (C^-C.g) nebo N(R¹²)2,

   R-^ je H, OR, O-alkyl (C^-C^), přímý neba rozvětvený

   OSi-(C₁-C₄)alkyl, F,. Br, Cl, I, NO₂, alkyl -C^) ,

   OCH^CEjCl, O-alkyltC₂-C^)-heterocyklus,

   O-alkyltC₂-C₅)N.(R^{1 2})2, OSO^F^, OCF3 nebo N(R¹²)2, nebo R² a iP spolu dohromady tvoří methylendioxy nebo ethylendioxy,

   R⁴ je; R, OR, O-alkyl (σ_]-0₄), F, Br, Cl, I nebo alkyl (C₁ -Ο_β ), R^ je CE,

   R¹ je přímý nebo' rozvětvený (C^-C^ ₂ )alkyl, cykloalkyl(C^, bicykloalkyl (Cg-C^ θ), tricykloalkyl (Cg-C₁ θ), heterocyklo' nebo skupina vzorce kde m je celé číslo Q-3,

   X je H, přímý nebo rozvětvený (C^-C^)alkyl, I, Cl, Br, F, NO₂ nebo N(R¹²)₂,

   -127A je přímý nebo rozvětvený (C^-^ ₂ )^alkyl nebo? skupina vybraná ze skupin vzorců kde nap jsou celá čísla n=O-2, p=0-2,

   R ' je H, alkyl(C^-C^) nebo skupina vzorce kde s je celé čísla? s= 1-3,

   T 8

   R a R jsou nezávisle H, alkyl(CpC^) nebo- O-alkyHCjo ^σ4?>

   R“⁷ je ff, O-alkylCCj-C^), F, Br, Cl, I nebo alkyl (Cj-C^),

   -128R¹⁰ je H, O-alkyl (C^G^), OH, F, Br, Cl, I, alkyl (C^Cj), OC^CHgCl, O-alkyl(C^C^ý-heterocyklus, S^-alkyl(C^-C^), OSOgCFj, OCF^, OCH^-fenyl, NO₂ neb®

   R¹¹ je ff, O-alkyl(S-alkyKC^-C^), OH, F, Brr, Cl, I, OCFp OCH^-fenyl, alkyl (C^C^) neba O-alkyl (G₂-C^)-heterocyklo,

   R^{1 2} je alkyl(C_rG₄), a jejích farmaceuticky přijatelných solí.
5. 5„ Způsob přípravy sloučenin podle nároku 1, v y z n a čující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny vzorce kde R², R³', R⁴ a R⁷ mají výše definovaný význam, se silnou bázi v etherickém rozpouštědle s disulfidem·. vzorce R¹ S-SR¹ , kde R¹ má výše definovaný význam, za získání meziproduktu vzorce i
6. 6. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1, kde

   R^ je vodík:, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny vzorce

   R³ kde Br, R“’ a R^ mají výše definovaný význam a X je brom, chlor nebo joď, .

   s R^SH, kde R^ má výše definovaný význam, za získání sloučeniny vzorce kde R¹ t R², r3-} mají výše definovaný vodík,, která se deprotonuje silnou bází pouštědle a nechá reagovat s X-A-Y, kde váný význam a X a Y jsou nezávisle brom za získání' meziproduktu vzorce význam a R je v aprotickém roz A má výše defina chlor nebo joď,

   -133.- kde A, Y, R¹ , R², r\ R^ a R^ mají výše definovaný význam, který reagujme s HB, kde B má výše definovaný význam, v polárním rozpouštědle a terciárním· aminu nebo: uhličitanu alkalického kovu při zvýšených teplotách, za získání sloučeniny vzorce nebo skupiny vzorce kde

   R² je H, OH, O-alkyl(C1-C4), F, Br, Cl, I,N02, OCF^, alkyl (C^-CLg), neba N(r¹²)2, r3 je H, OH, O-alkyl (C.j-C.p > přímý nebo- rozvětvený OSi(C^C^alkyl, F, Br, Cl, I,NO₂, alkyl(Gj-Cg), OCHgC^Cl, O-alkyl (Cg-C^)-heterocyklo, O-alkyl(C₂-C_?)N(R^{1 2})2, OSOgCF^, OČF^neba N(R¹²)£, nebo R² a R-^ spolu dohromady znamenají methylendioxy nebo ethylendioxy

   R^ je H, OH, O-alkyl (C^-C^), F, Br, Cl, I nebo alkyl(C₁ -C^), R⁵' je H,

   R^ je přímý nebo rozvětvený (Gj-C^ ₂ )alkyl, cykloalkyl(C^C?), bicykloalkyl(Cg-C₁ θ), tricykloalkyl(Cg-C^θ), heterocyklo nebo skupina vzorce

   -134X ^(αΗ2>_η-Λίνν kde m je celé číslo Q-3,

   X je H, přímý nebo rozvětvený (0^-C^)alkyl, I, Cl, Br, F, NC>2 neb® NťR^{1 2})₂,

   A je přímý nebo rozvětvený (C^-Ci₂)alkyl nebo skupina vybraná ze skupin vzorců
7. 7 8

   R' a R. jsou nezávisle H, alkyl (C^-C^), nebo O-alkyl (C_rC₄),

   R? je H, O-alkyKc^-C^) _t F, Brr, Cl, I nebo alkyl(0^-C^)

   R¹⁰ je H, O-alkyl(C₁-C₃), OH,S-alkyl (^-C^),

   F, Be-, Cl, I, alkyl(C₁-C₃), OCFp OSO₂CF₃, OCH^-fenyl, N0₂ nebo H(R ¹²)₂>

   R¹¹ je H, O-alkyl(C₁-C₄), S-alkyl(C_]-C₄), OH, F,

   Brr, Cl, I, OCF₃, OCH₂-fenyI nebo alkyl(C^-C^),

   R¹² je alkyl(0₁-0₄) a jejich farmaceuticky přijatelných solí.

   7 S¹

   R a R jsou nezávisle H, alkyl(C_]-C ).nebo O-alkyl(C_rQ₄)_ř

   R^y je 3ý O-alkyl (c^-C₄), F, 3r, Cl_r I neba alkal(C₁-C^),

   R^1Q je H, O-alkyl.(C1-0β), OH, F,. 3r, Clř I, alkyl(Or Cj ) r OCH^CH^Cl, O-alkyl (C^C^)-heterocyklo.·, S-alkyKC.· -C.), OSO?CF?, OCF., OCff9-fenylr EO2 neba N(R ¹²)2,.

   R^{1 1} je E, O-alkyl(Cp^), S-alkyKCpC ), OH, F, Sr, Cl, 1, OCF₃, OCH^-fenyl, alkyKc^G ) nebo O-alkyI.(C₂-C.f_)-heterocykIa,

   R^{1 2} je? alkyl(C^-C^) a jejích farmaceuticky přijatelných solí'.

   7. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci meziproduktu vzorce kde A, R¹ , R², R-\ R^ a R^ mají dříve definovaný význam a Y je brom, chlor nebo jod', se ftalimidem· draselným v polárním rozpouštědle za vzniku; meziproduktu vzorce;·

   -136- kde A, R¹ , R², R^·, R^ a R^ mají dříve definovaný význam * který se nechá reagovat s hydrazin-hydrátem v alkoholic kém rozpouštědle za vzniku meziproduktu vzorce kde A, R¹ , R²,. který se nechá

   R-⁵ a R* mají výše definovaný význam, reagovat se sloučeninou vzorce

   X

   I (CHp) a’°

   -1376 9 10 11 kde R , R. , R , R a n mají drive definovaný význam a X a Y jsou nezávisle brom, chlor nebo jod za získáni sloučeniny vzorc.e kde

   R² je R, OR, O-alkyl (C^-C^)F, Br, Cl, I, N02, OCF^, alkyl(G1-Cg) nebo N(R¹²)2,

   R^ je R, OR, O-alkyl (C^-C^), přímý nebo rozvětvený

   OSi-CCj-G )alkyX, F, 3r_r Cl, I, N0₂, alkyl(C_]-Cg),

   OCR₂CH₂C1, O-alkyl (C₂-C'g)-heterocyklo _r

   O-alkyl(C₂-C₅)N(R¹²)2, OSO^F^, 0C?3 ne:boN(R^I2)2, nebo R² a R^ spolu dohromady znamenají' methylendioxy nebo ethylendioxy_ř r4 je H, OR, Q-alkyl (Cj-C^), F, Br, Cl, 1 nebo alkyl-C),

   R⁵’ je R, CR,. CR20Hr C02 -C-^)alkyl, CH2NR2, CH2N(R¹²)2, nebo alkyl (C,-C<3) _ř 1 i -Λ

   R je přímý nebo rozvětvený (C^₂)alkyl, cykloalkyl(C₃~

   C^,) _r bicykloalk.yl (Cg-C^ θ ), tric.ykloalkyl (Cg-C₁ θ ), heterocyklo nebo skupina vzorce kde m je celé číslo 0-3,

   -138X je ÍF, přímý nebo rozvětvený (C^-C^)alkyl, I, Cl, Br, F, IFO₂ nebo N(R¹²)₂,

   A je přímý nebo rozvětvený· (C^-C^nebo? skupina vybraná ze skupin vzorců

   7 S

   R a R jscu nezávisle: E, alkylíCj-Cp nebo O-alkyKC^’^C4^)}

   R je E, O-alkyl (0^-G^), F, Br, Cl, I nebo alkyKC^-C^) R¹⁰' je E, O-alkyl (C^C.^), OH,. F, 3r, Cl, I, alkylíCpC^)

   OCH^Cí^Cl _r O-alkyl (G^-O-ý-heterocyklus _r.

   S-alkyl (C_]-C.₄ ), OSO₂CF

   OCF^, 0CE₂-fenyl, NO₂ nebo E(R¹²)₂,

   R^{1 1} je E, O-alkyl (C₁-C₄), S-alkyl (O_] -C₄), OE, F, Br, Cl, I, OCF^, OCK₂-fenyI, alkyl(C^-C^) nebo O-alkyl (C₂-C^)-heterocyklus,

   R^{1 2} je alkyl:(Ο_]-C ) _r a jejich farmaceuticky přijatelné soli.

   1212. Sloučenina podle nároku 1, kde

   R² je R nebo OrCH^,

   R³ je H, O-CH₃, OSi(t-C₄H₉)(CH₃)₂, OCR₂CH₂C1, OSH^CH^N-imidazoI. nebo OSOgCF^ nebo R² a R³ dohromady společně jsou methylendioxy nebo ethylendioxy,

   R⁴ je R nebo 0-Cff ,

   R⁵ je H, CH, CI^OH, CO₂CH₃ nebo. alkyl (C_]-C ),

   R^ je přímý nebo rozvětvený (C^-C^Jalkyl, cykloalkyl (C^-Cg), adamantyl, 2-pyridiyl nebo skupina vzorce

   X (ch₂)_b/WIt á m kde m je celé číslo 0-1,

   X je H, přímý nebo rozvětvený (C^-C^Jalkyl,

   A je přímý nebo rozvětvený (C₂—C₂)alky1 nebo skupina vzorce

   B je skupina vzorné

   -122- kde nap jsou. celá čísla n= 1-2, p= θ-) , R⁶ je ff, Cff_ nebo skupina vzorce kde s= 1 , r? a R⁸ jsou nezávisle H nebo O-Cff^,

   R⁹ je H nebo O-alkyiíCj-C^),

   R¹ θ' je ff, O-Cff Off, Cl, OCH₂Cff₂Cl,OCH₂GH₂-S-imidazol, OCH₂~fenyl nebo OSC^CF^,

   R^{1 1} je H, 0-Cff^, Off, Cl,

   R^{1 2} je alkyl (Cj-C^) a je jí „farmaceuticky přijatelné soli.
8. 8. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 1, kde

   R ge vodík, vyznačující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny vzorce
9. 9. Sloučenina podle nároku 1, kterou je

   X - (3,4-dimethoxyfenyl)-3 >4-dihydro-6,7-dimethoxy- X— /(4-methylf enyl )thio/-2 (1 H)-isochinolinheptannitril.
10. 10. Sloučenina podle nároku 1, kterou je monohydrochlorid ,ξ -(3,4-dimethoxyfenyl)-3,4-dihydro-6,7-dimethoxy-/(4-methylf enyl) thio/-2 (1 H)-isochinolinheptannitrilu·.

    Ί4. Způsob zvýšení citlivosti nádoru k antineonhanfic-, kému^č^nidlu', kdy tento nádor je nesen sujxj-ektám a tento nádor je· r-ezistentní k uvedenému antfneoplastickému či- I nidlu·, v y zrhač ují c í^s e tím, že zahrnuje současné podání uvedehá^u^slíbjektu antineoplastického činidla a potencojípffío činidla, kde tímto potencujícím činidlem je sloučenina podleháj^oku 1 a uvedené potencující činidlo je podáváno v množstvxkičinném ke zvýšení citlivosti uvedeného nádoru k uvedenému antirrenplastickému jfínidlu.

    Farmaceutický přípravek,v yznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.