CZ135898A3 - Nové antagonisty LH-RH se zlepšeným účinkem - Google Patents

Nové antagonisty LH-RH se zlepšeným účinkem Download PDF

Info

Publication number
CZ135898A3
CZ135898A3 CZ981358A CZ135898A CZ135898A3 CZ 135898 A3 CZ135898 A3 CZ 135898A3 CZ 981358 A CZ981358 A CZ 981358A CZ 135898 A CZ135898 A CZ 135898A CZ 135898 A3 CZ135898 A3 CZ 135898A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
amino
formula
acid
compound according
group
Prior art date
Application number
CZ981358A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ290098B6 (cs
Inventor
Bernhard Kutscher
Michael Bernd
Thomas Beckers
Thomas Klenner
Peter-Paul Emig
Patricia-Marie Charpentier
Original Assignee
Asta Medica Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Asta Medica Aktiengesellschaft filed Critical Asta Medica Aktiengesellschaft
Publication of CZ135898A3 publication Critical patent/CZ135898A3/cs
Publication of CZ290098B6 publication Critical patent/CZ290098B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C257/00—Compounds containing carboxyl groups, the doubly-bound oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a doubly-bound nitrogen atom, this nitrogen atom not being further bound to an oxygen atom, e.g. imino-ethers, amidines
    • C07C257/10—Compounds containing carboxyl groups, the doubly-bound oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a doubly-bound nitrogen atom, this nitrogen atom not being further bound to an oxygen atom, e.g. imino-ethers, amidines with replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group by nitrogen atoms, e.g. amidines
    • C07C257/18—Compounds containing carboxyl groups, the doubly-bound oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a doubly-bound nitrogen atom, this nitrogen atom not being further bound to an oxygen atom, e.g. imino-ethers, amidines with replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group by nitrogen atoms, e.g. amidines having carbon atoms of amidino groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
    • C07D207/27—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/08—Indoles; Hydrogenated indoles with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/61—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C07D213/80—Acids; Esters in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/84—Nitriles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/22—Oxygen atoms attached in position 2 or 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D233/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/26—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D233/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/30—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D233/32—One oxygen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/14—Radicals substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/38—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/52—Radicals substituted by nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nových antagonistů LH-RH, obzvláště peptidomimetik a peptidů modifikovaných ve svém bočním řetězci, jejich solí s farmakologicky vhodnými kysel inámi a způsobu přípravy antagonistů LH-RH a jejich solí. Peptidy podle vynálezu představují analogy luteinizujícího hormonu uvolňujícího hormon (LH-RH), který má následující strukturu: p-Glu-His-TrpSer-Tyr-G1y-Leu-Arg-Pro-G1ý-NH2, [LH-RH, gonadorelin].
Dosavadní stav techniky
Po více než 20 let hledali badatelé selektivně působící antagonisty LH-RH-dekapeptidu [M. Karten a J.E. Rivier, Endocrine Reviews 7, str. 44 až 66 (1986)]. Důvodem velkého zájmu o takové antagonisty je jejich užitečnost v oboru endokrinologie, gynekologie, ochrany proti početí a proti rakovině. Bylo připraveno velké množství sloučenin jako potenciálních antagonistů LH-LR. Zajímavé sloučeniny, které byly dosud objeveny, jsou sloučeninami, jejichž struktura představuje modifikaci struktury LH-RH.
První série schopných antagonistů byla získána zavedením aromatických zbytků aminokyselin do poloh 1, 2, 3 a 6 nebo 2, 3 a 6. Obvyklý zápis sloučenin vypadá takto·’ napřed se udají *
aminokyseliny, které vstoupily v peptidovém řetězci LH-RH na místo původně existujících aminokyseliη, přičemž polohy, kde došlo k výměně, se značí nahoře umístěnými číslicemi. Dále se následujícím označením LH-RH vyjádří, že jde o analogy LH-RH na kterých došlo k výměně.
Známými antagonisty jsou:
* · · i
[Ac-D-Phe(4-CI)1'2,D-Trp3*6]LH-RH (D.H. Coy a kol., publikace Gross,E. a Meienhofer J. (vydavatelé) Peptides; Proceedings of the 6th Američan Peptid Symposium, str. 775 aě 779, Pierce Chem. Co., Rockville III. (1979):
[Ac-Pro1,D-Phe 4-C1)2,D-Nal(2)3·61LH-RH (americký patentový spis číslo 4 419 347) a [Ac-Pro1,D-Phe(4-C1)2,D-Trp3·6]LH-RH (J.L.Pineda a kol., J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, str. 420, 1983).
Ke zvýšení rozpustností antagonistů ve vodě byly později zavedeny bázické aminokyseI iny, například D-Arg v 6. poloze. Například : [Ac-D-Phe(4-C1)1'2,D-Trp3,D-Arg6 , D-A1 a10]LH-RH (0RG-30276) (D.H. Coy a kol., Endocrinology 100, str.1445, 1982) a [ Ac-D-Nal( 2) 1, D-Phe( 4 F) 2, D-Trp3, D-Árg6.] LH-RH ( ORF 18260) ý (J.E. Rivier a kol., Vickery B.H. Nestor,Jr., J.J.Hafez, R.S.E (vydavatelé). LHRH a jejich analogy, str.11 až 22 MTP Press. Lancaster, UK 1984).
Takové analogy vykazovaly nejenom očekávanou zlepšenou rozpustnost ve vodě, ale měly také zlepšenou antagonistickou účinnost. Přesto vsak způsobují tyto nanejvýš mocné, hydrofilní analogy s D-Arg6 a s jinými bazickými bočními řetězci v 6. poloze přechodné edemy na obličeji a na končetinách při suhkutanním podání krysám v dávkách 1,25 nebo 1,5 mg/kg (F. Schna i dt a kol. Contracepti on 29, str. 283, 1984' J.E.Morgan a kol.
Int. Arcbs. Alleřgy Appl.Immun. 80 str. 70 (1986). Další schopné antagonisty LH-RH jsou popsány v patentových spisech W0 92/19651, W0 94/19370, W0 92/17025, W0 94/14841, W0 94/ 13313, US-A 5 300 492, US-A 5 140 009, a EP 0413209 AI.
Výskyt endemalogenních účinku po podání některých z těchto antagonistů u krys, vyvolaly pochybnosti o bezpečnosti při jejich použití na lidech, a tak se zavádění těchto léčiv do klinického použití opozdilo. Proto existuje velká poptávka po
* · • · antagonistických peptidech prostých vedlejších účinků.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je sloučenina obecného vzorce I
R2
I
R1 - CO - NH - CH - CO - N - R3
I (CH2)n (I)
I
NH · · C0_p4 \ — --kde znamená n číslo 3 nebo 4, R1 případně substituovanou skupinu alkylovou, alkyloxyskupinu, skupinu arylovou, heteroarylovou, aralkýlovou, heteroaralkýlovou, ara1kyloxyskupinu nebo heteroaralkyloxyskupinu, R2 a R3 na sobě nezávisle atom vodíku, případně substituovanou skupinu alkylovou, aralkylovou, nebo heteroaralkýlovou, přičemž jakožto substituenty přicházejí v úvahu skupina arylová nebo heteroarylová, nebo -NR2R3 znamená skupinu aminokyseliny, a R4 znamená skupinu obecného vzorce II
--- (CH2)p --- CO --- NR& (II)
I
R5 kde znamená p celé číslo 1 až 4, R5 atom vodíku nebo alkylovou skupinu a R6 případně substituovanou skupinu arylou nebo heteroarylovou, přičemž jakožto substituenty přicházejí v úvahu opět skupina arylová nebo heteroarylová, nebo R4 znamená
• · • · ·
- 4 kruh obecného vzorce III
kde znamená q číslo nebo 2, R7 atom vodíku nebo alkylovou skupinu, Rs atom vodíku nebo alkylovou skupinu a X atom kyslí ku nebo síry,, přičemž zbytky aromatické nebo heteroaromatické mohou být částečně nebo úplně hýdrogeňovány a chirální uhlíko vé atomy mohou býl-v konfiguraci—D nebo I. a jej í soli s farmaceuticky vhodnými kyselinami.
Jakožto výhodné kombinace skupin symbolu R1 až R4 se uváděj í
a) R1 znamená benzyloxyskupinu, R2 atom vodíku, a R3 atom vodíku,
b) R1znamená benzyloxyskupinu, R3 atom vodíku, a R4 skupinu obecného vzorce II, kde p je číslo 2 nebo 3, R5 atom vodíku a R6 4-amidinofenylovou skupinu a
c) R2 znamená atom vodíku, R3 atom vodíku a R4 skupinu obecného vzorce II, kde p je 2, R5 atom vodíku a R6 skupinu 4-amidinofenylovou.
Výhodnými a1 kýlovými skupinami jsou: skupina methylová, ethylová, n-propylová, i-propylová, n-butylová, i-butylová, t-butylová, 2-ethylhexylová, dodecylová a hexadecylová.
Výhodnými arylovými skupinami jsou: skupina fenyl ová, naftylová, fenanthrenylová a fluorenylová.
íTr.Hjr.
Výhodnými heteroarylovými skupinami jsou skupina 2-, 3- a
4-pyridylová, 2- a 4-pyrimidylová, imidazolylová, midzopyridylová, 5- a 6-indolylová,
5- a 6-imidazolylová, triazalylová, tetrazolylová, benzimidazolylová, chi nolylová,
2,6-di chlorpyrid-3-ylová a furylová.
Výhodnými hydrogenovanými heteroarylovými skupinami jsou skupina piperidinová, piperazinylová, morfolinová a pyrrolidinyl ová.
Aralkylovými a heteroaralkylovými skupinami jsou skupiny, které jsou vázány k příslušnému vazebnímu místu alkylenovou skupinou, s výhodou skupinou methylenovou, ethylenovou, n-propylenovou nebo n-butylenovou.
Vedle jmenovaných arylových a heteroary1ových skupin jsou výhodnými substituenty atomy halogenů jako fluoru^ chloru, bromu a jódu i skupiny methylová, ethylová, i-propylová, terč.-butylová, kyanoskupina a nitroskupina, skupina karboxylové kyseliny, amidu, methytesteru, ethylesteru kyseliny kar-, boxylóvé kyseliny, ethylesteru kyseliny krotonové a skupina trifluormethylová, benzoylová, methoxyskupina, benzyloxyskupina, pyridyloxyskupina, aminoskupina, dimethy1aminoskupina, isopropy1aminoskupina, amidinoskupiňa a chinolylmethoxyskupina.
Dále se vynález týká také sloučenin obecného vzorce V
Ac-D-Nal(2)1-D(pCl)Phe2-D-Palí3)3-Ser4-Tyr5-D-Xxx6-Leu7-Arg8Pro9-D-Ala10-NH2 (V) přičemž znamená D-Xxx skupinu aminokyseliny obecného vzorce VI • · • ···
- HN - CH - CO - O I (CH2)n | (VI)
NH
I
CO - R4 kde n, p, q, R4, R5, R6, R7, Rs a X mají shora uvedený význam a jejich solí s farmaceuticky vhodnými kyselinami.
Sloučeniny podle vynálezu výkazují vysokou antagonickou potenci a jsou prosté nežádoucích vedlejších účinků, zejména jsou prosté edematogenních účinků. Pokud nejsou ve formě solí obtížně ve vodě, rozpustných.farmaceuticky vhodných kyselin,, vykazují kromě toho zlepšenou rozpustnost ve vodě. Dále mají sloučeniny vysokou afinitu k lidskému receptoru LH-RH, jsou tedy vysoce účinné při brzdění uvolňování gonadotropinů žlázy mozkového přívěsku u savců včetně lidí, vykazují dlouhodobě •působící potlačení testosteronu v krysách a způsobují minimální uvolňování histaminu in vitro.
Vhodnými sloučeninami obecného vzorce (I) jsou: alfa-N-Z[ epsi lon-N -4- ( 4-amidinofenyl ) am ino- 1,4-dioxo-butyl ] lysinám i d, alfa-N-Z-[epsi 1on-N -íimidazolidin-2-on-4-y11formy1]1ysinamid. Výhodnými peptidy obecného vzorce (V) jsóu peptidy, kde Xxx znamená skupinu [epsilon-N -4-í4-amidinofenyl)amino-1,4-dioxobutyl ]-lýsylovou mebo [epsilon-N -Cimidazolidin-2-on-4-yl)formyl]lysylovou. Soli s farmaceuticky vhopdnými kyselinami jsou s výhodou obtížně vodou rozpustné. Obzvlášť výhodné jsou soli 4,4 -methylen-bisí3-hydroxy-2-naftoové kyseliny, známé také jako kyselina embonová nebo pamóaová.
Názvosloví používané k definování peptidů souhlasí s názvoslovím vysvětleným komisí IUPAC-IUB-Komission uber Bioche-
mi sche
Nomenklatur íEuropean J. Biochem. 138 str.
až 37, • toto to · to to to to · •··· · ·«·· · ♦ ·· • to · · · · · · ··· · · ··* · · · · · · · • ••to ·· ·· ·· ·· ··
1984), přičemš v souladu s dosavadním znázorňováním jsou aminoskupiny u N-zakončení vlevo a karboxylové skupiny u C-zakončení vpravo. Antagonisty LH-RH jako peptidy a peptidomimetika v přírodě Ala, Val, podle vynálezu zahrnují aminokyseliny vyskytující se i synteticky připravené, přičemž přírodní zahrnují
Leu,
Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin,
Cys, Met,
Phe, jsou
Ala
Tyr, Pro, Trp a His. Zkratky jednotlivých aminokyselin založeny na triviálních alanin,
Arg arginin, Gly glycin, Leu jménech aminokyselin a znamenají leucin, Lys lysin,
Pal ( 3)-3-(3-pyridyl)a 1anin, Nal(2)3-í2-naftyl)alanin, Phe fe nylalanin,(pCl)Phe 4-chlorfenylalanin, Pro prolin, Ser serin,
Thr threonin, Trp tryptofan a Tyr tyrosin. Pokud není uvedeno jsou popisované aminokyseliny řady L. Například D-Nal(2) a'Serjě zkratkou pro j inak, je zkratkou pro 3-(2-ňa f ty1)-D-alan i n bserin. Další používané zkratky mají tento význam·'
Boc terč.-butyloxykarbonyl
Bop benzotriazol-1-yloxy-tris-(dimethylami no) fosfoniumhexaf1uorofosfát,
DCC
DCM d i cyk1ohexy1karbod i i m i d dichlormethan
Ddz di metboxyfenyldimethylmethylenoxykarbonyl (dimethoxydimethyl-Z)
DIC di isopropylkarbodi im id
DIPEA
N, N-di isopropylethylamin
DMF
Fmoc d i methylformam i d f1uorenylmethyloxykarbony1
HF tekutá bezvodá kyselina fluorovodíková
HOBt
HPLC
PyBop
-hydroxýbenzotri azo1 vysokotlaká kapalinová chromatografie benžotri azol-1-yloxy-tr is-pyrroli dinofosfon iumhexaf1uorofosf át
TFA
Trifluoroctová kyselina
Benzyloxykarbonyl ··« · φ · · · * ·
ΦΦΦ · · ·« · · φ ·· • e · φ ♦ φ · ·> ··♦ φ · • ·Φ · φ · · Φ φ · • φφΦ ·· ·» ·· ·· *·
Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I spočívá podle vynálezu v tom, že se napřed funkční skupiny (alfa-aminoskupina, epsi lon-atninoskupina a skupina alfa-karboxylové kyseliny) opatří chrániči skupinou a pak se volná třetí funkční skupina vhodným způsobem nechává reagoval. Popřípadě je mošno také v případech, kdy se dosahuje lepších výsledků, zavést v první operaci přechodně chránící skupiny, které se po druhé operaci zamění za požadovanou funkční skupinu. Vhodné chránící skupiny a způsoby jejich vnášení jsou v oboru dobře známé. Příklady vhodných chránících skupin jsou popsány v knize Principles of Peptide Synthesis” nakladatelství Spinger Verlag 1984, v knize Solid Phase Peptide Synthesis J.M. Stewart a J.D.Young, Pierce Chem. Company, Rpckforď. III, 1984 a G. Barany a R.B. Merrifield The Peptides, sv. 1, str. 1 až 285, 1979' Academie Přešs lne. . .
Příprava sloučenin obecného vzorce IV může probíhat buď klasickým způsobem kondenzací fragmentů nebo synlhesou pevných fází podle Merrifielda postupným nastavováním za použití D-lysinu okyseleného již karboxylovou kyše1 inou obecného vzorce VII v bočním řetězci stejně jako reakcí dekapeptidovéhó stavebního, kamene s odpovídajícími karboxylovými kyselinami amidovým spojením v bočním řetězci D-lysinu6. K tomuto postupu jsou k přípravě sloučeniny obecného vzorce V podle vynálezu k disposici tři alternativy.
Podle první možnosti přípravy sloučeniny obecného vzorce
V (a) se zavádí do alfa-aminoskupiny a do skupiny karboxylové kyseliny D-lysinu nebo D-ornithinu vhodné chránící skupiny, (b) nechává se reagovat D-lysin nebo D-ornithin s chráněnými skupinami s karbóxylovou kyselinou obecného vzorce VII
R4 -COOH í VII)
Junu .Λ-
• « * φ φ · kde R4 má shora uvedený význam,
C cl odštěpují se chránící skupiny ze skupiny alfa-karboxylové kyseliny sloučeniny získané ve stupni b) k začlenění do polohy 6 operací (h), (dl kopuluje se D-alanin s chráněnou aminoskupinou na pevný nosič v podobě pryskyřice (Merrifieldova synthesa), (e) odštěpují se chránící skupiny z aminoskupiňy alaninu, íf1 nechává se reagovat alanin vázaný na pevném nosiči s prolínám, s chráněným atomem dusíku, íg) odštěpuje se chránící skupina z atomu dusíku prolinu, (h) opakuje se operace f) a g) s aminokyselinámi 1 až 8 obecného vzorce V v pořadí od 8 k 1 za použití modifikovaného Dlysinu nebo D-ornithinu popsaného v operaci (c) pro polohu 6, ( i)’ odštěpujése sloučenina, získaná, v operaci (ti)., od .nosiče..a . případně se čistí, zvláště chromatografií HPLC, (j) případně se sloučenina nechává reagovat s farmaceuticky vhodnou kyselinou, s výhodou s kyselinou embonovou.
Podle druhé možnosti přípravy sloučeniny obecného vzorce
V (a) se váže D-alanin s chráněnou aminoskupinou na nosič vhodný k synthese v pevné fázi, (b) odštěpí se chránící skupiny z aminoskupiny alaninu, (c) nechává se reagovat alanin vázaný na pryskyřici s prolínem s chráněným atomem dusíku,
Cd) odštěpí se chránící skupina z atomu dusíku prolinu, (e) opakuje se operace c) a dl s aminokyselinami 1 až 8 obecného vzorce V v pořadí od 8 k 1,
Cf) odštěpuje se ve stupni e) získaná sloučenina od nosiče, (g) nechává se reagovat s karboxylovou kyselinou obecného vzorce VII
R4 -COOH (VII): kde R4 má shora uvedený význam,
- at-
(h) popřípadě se sloučenina nechává reagovat s farmaceuticky vhodnou kyselinou, s výhodou s kyselinou emhonovou.
Podle třetí možnosti přípravy sloučeniny obecného vzorce
V (a) se váže D-alanin s chráněnou aminoskupinou na nosič vhodný k synthese v pevné fázi, (b) odštěpí se chránící skupina z aminoskupiny alaninu,
Cc) nechává se reagovat alanin vázaný na pryskyřici s prolinem s chráněným atomem dusíku, (d) odštěpí se chránící skupina z atomu dusíku prolinu, fe) opakuje se operace c) a dl s aminokyselinami 6 až 8 obecného vzorce V v pořadí od 8 k .6, _______________ ....___ .. ........- -- ( f) odštěpuje se skupina chránící epsi Ion-aminoskupinu D-lysinu nebo D-ornithinu v poloze 6 a provádí se reakce s karboxylovou kyselinou obecného vzorce (VII)
R4 - COOH (VII) kde R4 má shora uvedený význam, (g) odštěpuje se chránící skupina z alfa-aminoskupiny D-lysinu nebo D-ornithinu, (h) opakuje se operace c) a d) s aminokyselinami 1 až 5 obecného vzorce IV v pořadí od 5 k 1, (i) odštěpí se sloučenina získaná v operaci (h) od pryskyřice a čiští se zvláště chromatografií HPLC, (j) popřípadě šě sloučenina nechává reagovat s farmaceuticky vhodnou kyselinou, s výhodou s kyselinou embonovou.
Výhodnými karboxylovými kyselinami obecného vzorce VII jsou imidazolin-2-on-4-karboxylová kyselina a N-(4-amidinofenyl)amino-4-oxo-máselná kysel ina.
Sloučeniny obecného vzorce V se připravují o sobě známými způsoby, například technikou pevných fá2Í, technikou částečně
· • · « • « 9 •
• • · • · · 4 · ♦ ·
• «
• • * • · · • » *
• ·· · • * • · • · 4 *
pevných fází nebo klasickými roztokovými kopulacemi (vis M. Bodanszky Principles of Peptide Synthesis“ Springer Verlag 1984). Způsoby syntesy pevných fází jsou popsány v učebnici “Solid Phase Peptide Synthesis J.M. Stewart a J.D.Young, Pierce Chem.Company, Rockford, TTI, 1984 a v G. Barany a R.B. Merrifield The Peptides, sv. 1, str. 1 až 285, 1979, Academie Press lne. Klasické rostokové syntesy jsou podrobnmě popsány v publikaci Methodeh der Organischen Chemie (HoubenWeyl), Synthese von Peptiden vydavatel E. Wiinsch 1974, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, BRD.
Postupná stavba probíhá například Lak, že se napřed kovalentně váže na obvyklý nerozpustný nosič karboxylová koncová aminokyselina, jejíž aminoskupina v poloze alfa je chráněna, . ... . chránící skupina al f a-ani i nóskupi ny téf.o aminokyseliny’se odštěpí a takto vzniklá volná aminoskupina váže néjbližší chráněnou aminokyselinu prostřednictvím její karboxylové skupiny a takto krok za krokem se spojí ostatní aminokyseliny syntetizovaného peptidu ve správném pořadí a po pospojování všech aminokyselin se odštěpí hotový peptid od nosiče a popřípadě se odštěpí další existující chránící skupiny bočních skupin. K postupné kondenzaci dochází syntézou z odpovídajících obvyklým způsobem chráněných aminokyselin o sobě známým způsobem. Rovněž je možné použití automatických syntetizátorů peptidu, například typu Labortec SP 650 od fy. Bachem, Švýcarsko s použitím obchodně dostupných chráněných aminokyselin.
Spojování jednotlivých aminokyselin navzájem probíhá obvyklými metodami, zejména přicházejí v úvahu
- metoda symetrických anhydridň v přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu nebo diisopropylkarbodiimidu (DCC, DIC)
- metoda karbodiimidu všeobecně
- metoda karbodiimidhydroxybenzotriazolová (Thé Peptides, sv. 2, vydavatel R.Gross a J. Meienhofer). Ke spojování argininu se používá s výhodou metody karbodiimidové.
Pro ostatní aminokyseliny se všeobecně používá metody symet• ' · t ( * • *·* · · ··· • · · * » · · ·«·. ·· ·· ··
- 12 rických nebo smíšených anhydridů.
Při kopulaci fragmentů se používá s výhodou amidové kopulace probíhající bez racemizace nebo metody DCC-1-hydroxybenzotriazolové, případně DCC-3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2,3benzotriazinové. Použít lze též aktivovaných esteru fragmentů.
K postupné kondenzaci aminokyselin se obzvlášť dobře hodí aktivované estery N-chráněných aminokyselin, jako je například N-hydroxysukccinimidester nebo 2,4,5-trichlorfenylester. Aminolysa se může dobře katalyzovat N-hydroxysloučeninami, které mají přibližně kyselost kyseliny octové, jako například 1-hydroxybenzotřiazol .
.Jako skupiny'.chrání cí přechodně aminoskupiny. připadají v úvahu skupiny odstranitelné hydrogenací jako například skupina benzyloxykarbonylová (Z= zbytek) nebo skupiny odštěpitelné slabými kyselinami. Jako chránící skupiny pro aminoskupiny v poloze alfa přicházejí v úvahu například: terciární butyloxykarbonylové skupiny, karbobenzoxyskupiny, případně karbobenzothioskupiny (případně vždy s atomem bromu nebo s niLrobenzylovou skupinou v p-poloze), skupina trifluoracetylová, ftalylová, skupina o-nitrofenoxyacetalová, tritylová, p-toluolsulfonylóvá, benzylová, substituované benzylové skupiny v benzolovém jádru (atomem bromu nebo nitrobenzylovou skupinou v p-póloze) a alfa-fenylethylová skupina ( Jesse P. Greenstein a Milton Winitz, Chemistry of Amino Acids, New York 1961, John Riley and sons.Inc. sv. 2, případně str. 883 a dále i The Peptides, sv. 2, vydavatel E.Gross a J.Meienhofer, Academie Press, New York). Tyto chránící skupiny přicházejí v úvahu v zásadě také k ochraně dalších funkčních vedlejších skupin (hydroxylové skupiny, aminoskupiny) příslušných aminokyselin.
Obsažené hydroxylové skupiny (serin, theorin) se chrání
• · v · · · s výhodou benzylovými nebo podobnými skupinami. Další aminoskupiny, které nejsou v alfa-poloze, (například aminoskupiny v poloze omega, guanidinová skupina argininu) se chrání s výhodou ortogonálně.
Reakce ke spojení aminokyselin nastává v unertním roztokovém nebo suspensnía prostředí, obvyklém pro tyto reakce (například v dichlormethanu), přičemž se může ke zlepšení rozpustnosti přidávat dimethylformámid.
K začlenění skupiny R4-CO reakcí aminoskupiny lysinu s karboxylovou kyselinou, přicházejí v úvahu v zásadě stejné postupy jako jsou popsány shora pro spojování aminokyselin. Obzvlášť výhodná je však kondenzace za použití karbodi imidu, napříkl ad - 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropy1)karbodi i midu a 1hydroxybenzotr i azo1u.
Jako nerozpustný nosičový materiál přicházejí v úvahu nerozpustné polymery například polystyrolová pryskyřice ve tvaru perel, bobtnající v organických rozpouštědlech ínapři klad kot polymer polystyrolu a 1 % divinylbenzolu). Vytváření chráněného dekapept idamidu na methyl benzhydryl am-i dové pryskyřici (pryskyřici MBHA, totiž polystyrolové pryskyřici opatřené methyl benzhydryl o vým i skupinami), která dává požadovanou C-koncovou amidovou skupinu peptidu po HF~odštěpení od nosiče, může být provedeno podle následujícího postupového digramu:
Postupový diagram
Protokol syntézy peptidu
Stupeň Funkce Rozpouštědlo/reakční činidlo v/v Čas
1 prán í methanol 2x2 min
2 prán í DCM 3x3 min
• · • ·♦· « * » ·»·
3 odštěpení DCM/TFA (11) 1 x30 min
4 prán í isopropanol 2x2 min
5 prán í methanol 2x2 min
6 prán í DCM 2x3 min
7 neutrálísace DCM/DIPEA (9:1) 3x5 min
8 prán í methanol 2x2 min
9 prán í DCM 3x3 min
10 STOP přísada Boc-As v DCM+DIC+HOBt
11 kopulace - přibl.90 min
12 praní methanol 3x2 min
13 praní DCM 3x2 min
Aminokyseliny chráněné N-alfa-Boc se kopulují v trojnásobném molárním přebytku v přítomnosti diisopropylkarbodiimidu (DIC) a 1-hydroxyhenzotriazolu (HÓBL) v systému dichlor methan/dimethylformamid během 90 minut a chránící skupina Boc se odštěpí půlhodinovým působením kyseliny trifluoroctové (TFA) v dichlormethanu.
Ke kontrole úplného proběhnutí reakce může sloužit chloranilový test podle Christensena a ninhydri nový test podle Kei sera. Zbytky volné aminoskupiny acetylací v pětinásobném přebytku acetylimidasolu se blokuj í v dichlormethanu.
- 15 Následnost reakčnlch operací vytváření peptidu na pryskyřici vychází z postupového diagramu. K odštěpení peptidu, vázaných na pryskyřici, se vždy konečný produkt syntesy v pevném stavu vysuší oxidem fosforečným ve vakuu a zpracovává se v 500 násobném přebytku systému fluorovodík/anisol 10:1 (objemově) 60 minut při teplotě O1 C.
Po oddesti 1 ování fluorovodíku a anisolu se vysrážejí peptidové amidy vymícháním s bezvodým ethyletherem v podobě bílých pevných látek, oddělení od vysrášeného polymerního nosiče probíhá promývánfm 50% vodnou kyselinou octovou. Šetrným zahuštěním roztoků okyselených kyselinou octovou ve vakuu mohou být získány příslušné peptidy v podobě vysoce viskozních olejů, které se v chladu přemění na bílé pevné látky přísadou absolutního etheru.. ................. ...
Další čištění probíhá rutinními způsoby preparativní vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC).
Převod peptidů na jejich adi ční soli s kyselinami se může provádět jejich reakcí s kyselinami o sobě známým způsobem. Naopak je možno získat volné peptidy reakcí jejich solí s adičními kyselinami se zásadami. Peptidembonáty lze 2ískat reakcí solí kyseliny trif1uoroctové (solí TFA) peptidů s volnou kyselinou embonovou. Za tímto účelem se nechává reagovat peptidová sůl TFA ve vodném roztoku s roztokem dinatriumembonátu v dipólárním aprotickém prostředí, s výhodou v dimethylacetamidu a vytvořená světležlutá sraženina se izoluje.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení. Procenta a díly jsou míněny hmotnostně, pokud není uvedeno jinak.
φ φ
- 15ΑSeznam obrázků
Na obr. 1 je vazba zkoušených sloučenin na lidský receptor ve vztahu ke koncentraci kompeti toru;
na ose x je koncentrace kompeti toru, na ose y procento specifické vazby křivka s kolečky platí pro sloučeninu podle příkladu 56, se čtverečky pro cetrorelix (BS 75), s trojúhelníčky pro sloučeninu podle příkladu las kosočtverečky pro sloučeninu podle příkladu 2
Na obr. 2 je brzdění tvory ΪΡ3 v závislosti na koncentraci zkoušené látky , podle příkladu 2;. . .
na ose x je množství sloučeniny podle příkladu 2 v nM, na ose y IP3 v pmol/4 χ 106 buněk
Na obr. 3 je totéž jako na obr. 2 pro sloučeninu podle příkladu 56;
Na obr. 4 je závislost potlačení testosteronu v ng/ml zkoušenou sloučeninou podle příkladu 1 v množství 1,5 mg/kg sc na čase v hodinách;
na ose x je čas v hodinách, na ose y testosteron v ng/τη 1, křivka s prázdnými kolečky platí pro zvíře 1, s prázdnými čtverečky pro zvíře 2, s čárkami pro zvíře 3 s plnými kolečky pro zvíře 4 a s plnými
čtverečky pro zvíře 5.
Na obr. 5 je totéž jako na obr. 4 pro sloučeninu podle příkladu 2;
Na obr. 6 je totéž jako na obr. 4 pro sloučeninu podle příkladu 56, používanou však v množství 10 mg/kg sc.
«ais · ·.!&< A .1
- 16 Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Ac-D-Nal(2)-D(pCl)Phe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-[epsi1 on-N'(imidazolídin-2-on-4-yl)formy1]-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Syntéza probíhá podle postupového diagramu na pryskařici 5 g mBHA (hustota 1,08 mmol/g). Lysin se kopuluje jako Fmoc-D-LysíBoc)-OH a po odštěpení Boc-skupiny se acyluje v bočním řetězci i midazolidin-2-on-4-karboxy1ovou kyselinou ve 3-násobném přebytku. Po odštěpení chránící skupiny Fmoc systémem 20% piperidin/DMF se společný postupový diagram prodlouží k N-zakončení. Po odštěpení polymerního nosiče se vysráží 5,2 g surového peptidu, ktrerý .se čistí standardním způsobem preparativní HPLC. Po návazném vysušení vymrazením se získá 2,1 g HPLC-jednotného produktu sumárního vzorce
C74Hc>7Ni30i5Cl se správným FAB-MS 1514 (M+H+) (vypočteno 1512,7) a odpovídajícího spektra iH-NMR.
1H-NMR(500 MHz,DMS0- d&, delta v ppm):
8,56, m, 2H, arom.H; 8, 08, m, 1H, arom.H; 7, 81, m, 1Ή, arom.H;
7, 73, rrt, 2H, arom.H; 7, 66, m, IH, ň rnm. H; 7, 60, s, IH, arom.H;
7,44, m, 2H, arom.H; 7, 30, d, 1H, arom.H; 7, 25 a 7,18, 2d,2 x
2H, arom .H p- Cl-Phe; 6, 97 a 6, 60, 2d, 2 x 2H, arom.H Tyr; 9,2-
6,3 četné signály, amid-NH; 4,8-4,0 četné m, C-alfa-H a alifat.H: 2,1-1,1 četné m, zbylé alifat.H; 1,70, s, 2H, acetyl;
1,22, d, 3H, Cbeta H Ala; 0,85; dd; 6H; Cdelta-H Leu.
Příklad 2
Ac-D-Nal(2),-D(pCl)Phe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-[epsi1 on-N -4-(4ami dinofenyl)amino-1,4-dioxo-butyl]-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Nechá se reagovat 0,7 mmol (1,03 g) dekapetidu >v.'.
« * / ’
- 17 Ac- D-Nal-D-( pC])Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala - NHs s 1,0 mmol (0,27 g) (4-amidinofenyl)amino-4-oxo-máse1 né kyseliny v přítomnosti 1,0 mmol (0,16 σ) l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu a 1,0 mmol (0,16 g) 1-hydroxybenzotriasolu v čerstvě destilovaném DMF. Rozpouštědlo se po 24 hodinách odstraní ve vakuu, vysrážený zbytek se rozpustí ve vodě a vysuší se vymrasením. Vysrážený surový produkt (1,63 g) se vyčistí preparativní reverzní fázovou chromatografií HPLC. Celkem se vysráží 0,61 g jednotného produktu vyčištěného HPLC sumárního vzorce Cs1H1Q4N1aOisCl s korektním FAB' MS: 1618,7 (M+H+)(vypočteno 1617,7) a s odpovídajícím spektrem 1H-NMR 1H-NMR(500 MHz,DMSO-dédelta v ppm):
10,4, s, IH a 9,15 s, 2H a 8,8, s, IH, NH 4-amidínoani1 inu;
8,60, m, ’ 2Η7* ářom. ΗΓ 820, m, 1H,. arom.H; 7,80. m, ..IH, aroin.H;,7,73, m, arom.H; 7,61, s, IH. arom.H; 7,44, m, 2H, arom.H;
7,30, d, IH, arom.H; 7,25 a 7,20, 2d, 4H, arom.H (pCl)-Phe; 7,00 a 6,60, 2d, 4H, arom.H Tyr; 8,3-7.2 četné signály,
am i d - NH; 4,73-4,2 četné multiplety, C-alfa-H, Ala; 3,78-2, 4
četné multiplety, C-heta H a ali fat.H; 1,72, 3, 3H, acetyl;
1,22; d; 3H, C-beta Ala; 0,85, dd, 6H, C-de1 ta Leu.
Příklad 3
Nechá se reagovat 0,5 g (0,3 mmol) peptidického antagonistu LH-RH podle příkladu 1, rozpuštěného v 50 ml vody reakcí s 0,130 g (0,3 mmol) dinatriové soli kyseliny embonové ve 2 ml vodného roztoku za získání peptidového embonátu, který se rychle vyloučí z roztoku v podobě žlutého precipitátu. Získá se 0,281 g jemně krystalického žlutozeleného prášku s 33% obsahem kyseliny embonové.
Příklad 4
Nechá se reagovat 0,3 g (0,17 mmol) peptidického antago- 18 nistu LH-RH podle příkladu 2, rozpuštěného v 5 ml dimethylacetamidu s 0,195 g ÍO,45 mmol) dinatriové soli kyseliny embonové ve 2 ml vodného roztoku aa získání peptidového embonátu, který se vysráží po přidání 50 ml vody v podohe Sluté sraženiny. Získá se 0,330 g jemně krystalíckého Slutého produktu s 20% obsahem kyseliny embonové.
Sloučeniny obecného vzorce I lze získat podle následujících schémat 1, 3, 4 a 5, přičemž se systematicky mění významy tří symbolů R1 2, R3 a R4 . Schéma 1 ukazuje výstavbu sloučeniny podle příkladu 1:
Schéma 1
1) benzctri azol-1-yloxy-trisí dimethyl amino)fosfon iumhexafluorfosfát (BOP)
2) N-methylmorfolin
3) 2n NaOH
4) CF3COOH
t · • · ./
- 19 Obecný předpis přípravy sloučenin obecného vzorce I podle schéma 1
Rozpustí se, popřípadě se suspenduje karboxylová kyselina obecného vzorce R4-C00H substituovaná skupinou symbolu R4, která je základem sloučeniny obecného vzorce I a způsobu podle schéma 1, která v případě zásaditého zbytku R4 může existovat jako sůl, například jako hydrochlorid, hydrosulfát nebo acetát, s vyloučením vlhkosti za míchání v nepolárním nebo v dipolárním aprotickém organickém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, dioxan, methyl-terč.-butylether, toluen, dimethyl formamid, dimethylacetamid, N-methylpyrrolidon, dimethylsulfaxid nebo methylenchlorid a nechá se reagovat za míchání se zásadou sloužící k vázání kyseliny, jako je například diišbpropylamin, triethylamin,. N-methylmorfolin,. ďinethylami-nopyridin nebo pyridin. Přidá se směs Z-(L)-1ysinamidhydro chloridu v ředidle, přičemž jako ředilo přicházejí v úvahu rozpouštědla použitá k rozpuštění karboxylové kyseliny onecné ho vzorce R4-C00H substituovaná skupinou symbolu R4. Hodnota pH reakční směsi se nastaví zásadou vážící kysel i nu, např í klad na 6,5 až 9,0, s výhodou na 7,0 až 8,5, obzvláště na 7,0 až
7,5. Nakonec se přidá do míchané reakční směsi roztok kopulač ního reakčního činidla, například benzotriazol-l-yl-oxytris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátu (BOP), nebo benzotri azol- 1 -y1oxy-trispyrrolidinofosfon iumhexafluorofosfátu (PyBOP) nebo dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) a po krátké době se hodno ta pH roztoku nastaví na shora uvedený rozsah. Suspense se míchá například 1 až 15 hodin při teplotě 0 až 80 C, s výhodou při teplotě 10 až 50 C, obzvláště 20 až 30 C, odsaje se, pevná látka se promyje a filtrát se zahustí ve vakuu k suchu. Zbytek se nechá vykrystalovat třením s organickým rozpouštědlem, jako je například toluen, tetrahydrofuran, aceton, methyl ethyl keton, popřípadě s isopropylalkoholem, nebo se vyčistí překrystalováním, destilací nebo sloupcovou nebo bleskovou chromátografií na silikagelu nebo oxidu hlinitém. Jako eluční
A- - .«St. ’=!Γ “ t!
^“-MrArs*****··* λ» i.’ί'ΆΙΐι· k n· I-W uiwcrtM • · ·· * činidlo se používá například směs methylechloridu, methanolu, amoniaku (25%) (v objemovém poměru 85:15:1) nebo směs methylenchloridu, methanolu, amoniaku (25%) v objemovém poměru 80: 25:5.
Syntéza trif1uoracetátu
Vyčištěná sloučenina, získaná podle shora uvedeným způsobem se rozpustí v protickém nebo aprotickém rozpouštědle, například v alkoholu, jako je methanol, ethanol, isopropanol nebo v cyklických etherech, jako je například tetrahydrofuran nebo dioxan a 2n roztokem hydroxidu sodného se nastaví hodnota pH na 10 až 11. Vysrážená pevná látka se odsaje, promyje, vysuší se ve vakuu a v ethanolovém roztoku při teplotě 10 až 80 ’’ fl . - T- r·C, s- výhodou 20 až 40 C a nechá se reagovat s molárním ekvivalentem nebo s 2- až 4-násobným přebytkem trifluoroctové kyseliny. Po 24-hodinovém stání roztoku při teplotě. 0 až 4 C vykrystaluje žádaný trif1uoracetát, který se odsaje a ve vakuu se vysuší.
Podle tohoto obecného předpisu, který je základem pro schéma 1, se syntetizují sloučeniny, které objasňuje příklad 5 a navazující tabulka I.
Příklad 5 alfa-N-[Benzyloxykarbony1]-eps i 1 on-N-[5-C(4-am i di nofenyl)amino] -5-oxo-pentanoyl ] -L- lysinalhidtr if luoracetát
Za míchání a s vyloučením vlhkostí se vě 200 ml dimethylformamidu suspenduje 5 g (17,5 mmol) hydrochloridu 5-[[4-(aminoiminomethyl)fenyllamino]-5-oxopentanové kyseliny a nechá se reagovat se 3,85 ml (35,0 mmol) N-methylmorfolinu. Přidá se směs 5,53 g (17,5 mmol) Z-(L)- lysinámidhydrochloridu ve 100 ml dimethylformámidu a hodnota pH se nastaví N-methylmorfolinem na 7,0 až 7,5. Nakonec se přidá roztok 9,73 g (21,9 mmol) benmnu MKtťn. J*» - '•ζΛτ• * • ··· * 9 • ···
- 21 zotriazol- 1-yloxy-tris-(dimethylam ino)fosfoniumhexafluorfosfátu (BOP) a po 10 až 15 minutách se znovu nastaví hodnota pH na 7,0 až 7,5. Žlutě zbarvená suspense se míchá 3 až 4 hodiny za stlálého sledování hodnoty pH, která má být 7,0 až .7,5, při teplotě místnosti, bezbarvá sraženina se odsaje, promyje se dvakrát dimethylformámidem a žlutě zbarvený filtrát se odpaří k suchu. Olejnatý zbytek se digeruje celkem 5x40 ml methylenketonu tak, že se po každém z pěti zpracování rozpouštědlem methylketonová fáze odlije a vyhodí. Zbylý surový produkt v krystalickém stavu se odsaje, promyje se 30 ml methylketonu a vysuší se ve vakuu při teplotě místnosti.
Pevná látka se pak rozpustí v přiblížené 50 ml ethanolu a hodnota pH se nastaví louhem sodným na 10 až 11. Vysrážená zásada .se odsaje, .promyje se vodou a ethanolem a vysuší se ve vakuu při teplotě 35 ’c. Výtěžek: 5,5 g (62 % teorie).
Trif1uoracetát:
Nechává se reagovat 5,5 g zásady v ethanolové suspensi s pětinásobným množstvím trif1uoroctové kyseliny při teplotě 60 C. Roztok se udržuje na teplotě 4 C přes noc, získaný trifluoracetát se odsaje a vysuší se ve vakuu při teplotě 35
’C. výtěžek: 5,9 g (87,7% teorie) Teplota tání je 185 C
Analysa.
vypočteno C 53, 84 H 5,65 N 13,45
nalezeno C 54, 11 H 5, 74 N 13,33
Shora popsaným způsobem se připraví další sloučeniny obecného vzorce I uvedené v tabulce I, přičemž n je 4.
* · ··· · · ·' ♦ • · · ··· · · ·· • · ... ·· ...... · * · · · · · » ··· ·*·* *· ·· *· ·· ··
Tabulka I alfa, eps i 1 on -N-subst i tuované der i váty- L-1-ys i nam idu podle schéma přípravy 1 a obecného vzorce I í ve všech příkladech je n = 4)
Příklad R1-CO r2/r3 R4
5 / Trifluoracetat ^'_·_ o o d H/H 0
6 o CH, // \ CH, Γ4Η-Ύ7 '1--CN
7 O CH '-CH, NH—7' 'i F
8 O CH f/ \ CH, NhV7 Ό C1
9 O ch^ JL /r\ CHj NH —Z \ Br
10 o
11 o CH f/ \ '-CH, ^NH—T '>--
Ί· —ji, Ít ; iiMUlt I I Tjt m*· *»- MkÍ Jí rTl fle ^Br . í-w i_p i“ ·!» *BB “ TU .ai. ttPTTc.
« · · • • • ·♦ ·. · ··
• » · ♦ • • • a • · a · ·
♦ · · • • » ·. a ·
···· 99 ·· • · ♦ · ··
í t
Teploty tání sloučenin podle uvedeného příkladu jsou uvedeny v tabulce II
Tabulka II
Teploty tání sloučenin podle příkladů 5 až 34
Příklad t.tání E°C] Příklad t.tání [°C] Příklad t.tání [c
5 185 15 225 25 syrup. zbytek
6 185 16 211-214 26 205 - 210
7 216-220 17 183-186 27 172-177
8 225 18 (olej) 28 227-230'
9 217-220 19 syrup. zbytek 29 ” 225-229 .
10 218-222 20 (olej) 30 233-235
11 208-212 21 (olej) 31 215-218
12 (olej) 22 (olej) 32 155
13 232-236 23 syrup. zbytek 33 (olej)
14 194-198 24 (olej) 34 (olej
Výchozí stupně sloučenin obecného vzorce I, připravených podle schéma 1, vyplývající z tabulky I.
Lysinamid Z-(L), použitý jako výchozí sloučenina pro konečné stupně přípravy podle příkladů 5 až 34, je obchodně dostupný. Substituované aryl- případně heteroarylaminooxoalkanové kyseliny, použité jako edukty podle schéma 1, je možno připravit obdobně jako podle schéma 2 způsoby známými 2 literatury (P.R. Boy, J. Organ. Chem. 58, str. 7948, 1993).
·”* * · '· · · · * · • »*· · ···· · · · · ·· · · · * · φ φ ·φ· · * φ φφ φφ·· · · · φ φ · · φφ φφ · · ·Φ ··
Schéma 2
ρ= 2-5
Α= Aryl
Heteroaryl
Aromatické, případně heteroaromatické
A= Aryl, Heteroaryl p-2-5 aminy A-NH2 přicházející v úvahu při způsobu podle schéma 2, jsou obchodně dostupné; aminoimidazol[1,2-a1pyridin, který je základem pro sloučeninu podle příkladu 28, lze připravit způsoby známými z literatury (R. Westwood, J.Med.Chen. 31, str. 1098 (1988)1.
---- Zmíněné aryl - ” pří pádně heteroaryl am i nooxoalkanové kysel i ny, jako výchozí látky, je dále možno připravit Lak, že vé, například monomethylester se nechává reagovat alkanmonomethylester kyseliny dikarboxylokyseliny suberové a monomethy1ester kyseliny azelainové jako výchozí látka s aromatickým nebo s heteroaromatickým am i nem aminolyzovou reakcí ve vroucím alkoholu, například ve vroucím ethanolu nebo butanolu, nebo popřípadě v aromatickém len při teplotě varu, případně rozpouštědla 2a použití rozpouštědle, jako je toluen nebo v autoklávu při teplotě xyvaru tlaku 5
MPa, řěakční roztok se 2ahustí ve vakuu a 2bytek se vyčíst í krystalizací 2 methanolu nebo z ethanolu, nebo pomocí sloupcové chromatografie. Jako elučnl činidlo slouží například směs methylenchloridu, methanolu, a moniaku (25%) v objemovém poměru 85:15:1, nebo směs methylenchloridu, methanolu, amoniaku (25%) v objemovém poměru 80:25=5.
Alternativní provádění způsobu přípravy sloučenin obecného vzorce (I), kde znamená R1 benzyloxykarbonylovou skupinu a R2 a R3 atom vodíku, je následující:
1. amiduje se skupina alfa-karboxylové kyseliny,
2. chrání se epsiIon-aminová skupina Z-skupinou,
♦ ♦·· · * ·» * · ··
♦ · · · · · • » · «·« « *
« · · · · * · · · •
»*·» ·· ·* ·« ·♦
3. alfa-aminoskupina se chrání Boc-skupinou, takže vzniká selektivita vůči pozdějšímu odštěpení skupin chránících am i noskupi nu,
4. odštěpí se Z-skupi na z epsiIon-aminoskupiny,
5. na epsiIon-aminoskupinu se zavede žádaná skupina R4-CO,
6. odštěpí se Boc-skupina z alfa-aminoskupiny,
7. do alfa-aminoskupiny se zavede Z-skupina.
Získat lze další sloučeniny obecného vzorce I podle následujícího schéma 3, objasněného na 2púsobu přípravy sloučeniny podle příkladu 35'·
Schéma 3
Stupeň i
PJvafoylchlofld
THFřEtjN
Stupeň
** Μ». S*—1 ·** **** w*»* *-*·=** • · ·
• ···
o
Obecný způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I podle schéma 3.
Stupeň 1
Do aprotického nebo nepolárního organického rozpouštědla, jako je například tetrahydrofuran, dimethylsulfoxid, dimethylformamid, acetonitril, ethylacetát, dimethylacetamid, N-methylpyrrolidon, dioxan, toluen, ether, methylenchlorid nebo o
chloroform se přidá při teplotě -30 až 30 C, s výhodou -20 až 20 C a obzvláště -15 až 5 C Z-LysíBOC)-OH a zásada, například triethylamin, diisopropylamin, N-methylmorfolin, N- ethyl piperidin a chlorid alifatické nebo aromatické kyseliny karboxylové, například acetylchlorid, isobutyroylchlorid, isovaleroylchlorid, pivaloylchlorid, benžoylchlorid nebo 4-methoxybenzoylchlorid. Po určité dohě, například po 30 minutách až 3 hodinách, se přidá za intensivního míchání roztok, případně suspense aminu ochlazená na teplotu -10 C v dipólárním aprotickém nebo nepolárním organickém rozpouštědle, jako je například tetrahydrofuran, dimethylsulfoxid, dimethylformamid, acetonitril, ethylacetát, dimethylacetamid, N-methylpyrrolidon, dioxan, toluen, ether, methylenchlorid nebo chloroform. Suspense se míchá 1 až 2 hodiny při teplotě -30 až 30 C, s výho« ••‘ť***’* -Se- Λ’-*»?· * a·-·.» *- - riwi- ..J dou -20 až 20 C, obzvláště -15 až 5 C. Po ukončení reakce se zásada v podobě hydrochloridu odsaje a rozpouštědlo se zahustí. Olejovitý zbytek se smíchá s aprotickým nebo s nepolárním organickým rozpouštědlem, jako je například ether, diisopropylether, methyl-terč.-butylether, petrolether, toluen, xylen, pentan, hexan. Roztok se míchá po určitou dobu, například 30 minut až 3 hodiny až do vysráěení bílého prášku. Sraženina se odsaje a usuší .
Stupeň 2
Z-Lys(BOC)-amid, získaný ve stupni 1, se při teplotě -20 až 30 C, s výhodou -20 až 20 0 a obzvláště -15 až 5 C rozpustí v trifluoroctové kyselině a míchá se po dobu 15 minut až 1 hodiny. Přebytečná kysel ina...tri fluorocťová se odpaří a olejovitý zbytek se smíchá s di polárním aprotickým nebo s nepolárním organickým rozpouštědlem, jako je například dimethylformamid, methylenchlorid, tetrahydrofuran, acetonitril, Nmethylpyrrolidon a ethylacetát. Pak Se přidá žádaná kyselina, zásada, jako například diisopropylamin, N-methylmorfolin a vhodné kopulační činidlo, jako například Β0Ρ, PyBOP, DCC v dipolárním aprotickém nebo nepolárním organickém rozpouštědle', jako je například dimethylformamid, methylenchlorid, tetrahydrofuran, acetonitril, N-methylpyrroli don a ethylacetát. Reakce se provádí při teplotě -10 až 100 C, s výhodou 0 až 80 C a
Q obzvláště 10 až 35 C. Po 1 až 5-hod i nové reakční době a po 24-hodinovém stání při teplotě místnosti se reakční směs zahustí. Zbytek se vysráží organickým rozpouštědlem, jako je například isopropanol, methylenchlorid nebo ether. Surový produkt se čistí chromatografií na silikagelu.
Obecným způsobem podle stupně 1 a 2 se na základě způsobu podle schéma 3 se syntetizují sloučeniny, objasněné v následující tabulce III, kde n znamená 4.
r· -
alfa, epsi 1 on N-Subst i tuované deriváty L-lysinamidu podle schéma a obecného vzorce I ,(n znamená,vědy 4) . ___________
íí*nfc^ ΐϊ«*ί*:ί·«ΜΗ **r
3^-4,: MSSř' * ·31 -
.Τ' *«» .i
49 0 H Ó CH,^VSYÁi O NH,
50 CH^ 0
51 ‘a.
52
' ' 53/ - - —........ - ^ch3- CH, ..... . ...
54 N u . ° Vy*». NH,
55 o
Příklad 35
N-[alfa-N-[Benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[ 4- [ (4-amidinofenyl> amino]-4-óxobutanoyl]-L-lysin-N-(3-pyridylmethyl)]am i d
Stupeň 1
N-[alfa-N-[Benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[terč.-butyloxykarbony1]-L-1ysi n-N-í 3-pyri dy1methy11]-am i d
• * • ··* • ··
D
Do 60 ml teLrahydrofuranu se při teplotě -15 C přidají 4 g ( 10 mmol) obchodně dostupného Z-Lys(Boc)-OH, 1 g (10 mmol) triethylaminu a 1,26 g (10 mmol) piualoylchloridu. Po 30 minuQ tách se za intensivního míchání přidá na -10 C předchlazený roztok 1,08 g (10 mmol) 3-( aiíi inomethyl) pyr idi nu ve 20 ml teLrahydrof uranu. Suspense se pak míchá 1 až 2 hodiny při teplotě o
-10 C. Za nízké teploty se Lriethylaminhydroóhlorid odsaje a návazně se odpaří teLrahydrofuran. Olejoví ty 2bytek se smíchá se 100 ml diethyl etheru. Roztok se dále míchá až do vysráěéní bílého prášku. Sraženina se odsaje a vysuší. Výtěžek je 4 g (85 % teorie).
Stupeň 2
N-. [ al f a - N- [ Benzyloxykarbony 1 ] - epsi 1 on - H - [ 4 - [ ( 4-am idinofenyl) am i noJ-4-oxobutanoyl]-L-lysin-N-(3-pyr i dylmethyl)] am i d
Při teplotě 0 C se ve 20 ml trif1uoroctové kyseliny (TFA) rozpustí 2 g (4,25 mmol) N-[alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsi1on-N- [terč.-butyloxykarbony1]-L-lysin-N-(3-pyri dylmethyl)]βία i du a 20 minut se míchá. Přebytečná trifluoroctová kyselina se odpaří a olejovitý zbytek se smíchá s 10 ml dimethylformamidu. Přidá se 4,6 ml (42,5 mmol) N-methylmorfolinu, 1,15 g (4,25 mmol) hydrochloridu 4-[[4-aminolminomethyl)fenyl]amino]4-oxomáselné kyseliny, 2, 35 g (5,3 mmol) BOP a 20 ml dimethylformamidu. Reakční směs se míchá 24 hodin při teplotě místnosti. Dimethylformamid se odpaří, zbytek se digeruje dvakrát se 40 ml vody, pak se odsaje a vysuší. Surový produkt se vyčistí chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla 89b (70 % HCCI3, 40 % MeOH, 10 % CH3C00-Na+ v 1 molu na litr NH4OH 25%). Výtěžek je 340 mg (14 % teorie).
Obdobně jako podle příkladu 35 se získají sloučeniny podle příkladu 36 až 55.
• ···
Tabulka TV
Teploty tání sloučenin podle příkladu 35 aě 55
Příklad t.tání [Cl Příklad t.tání t°C] Příklad t.tání [’C
35 190-198 42 190 49 189
36 218-220 43 198 50 197
37 209 44 213 51
38 195 45 52
39 189-191 46 175 53
40 215-220 47 196 54 194
41 183 48 217 55
12 (olej) 22 (olej) 32 155
13 232-236/ . . 23. . ' syr.up, zbytek 33 . (olej)... ...
14 194-198 24 (olej) 34 (olej
Podle následujícího schéma 4 a 5 se připraví další sloučen iny· obecného vzorce I
Schéma 4= Reakce s karboxylovými kyselinami
Diisopfopyftarbodiimid
------------------>
N-Meihylmor-^olin
. ÍhÍfWb.j^ -T mWMMifc·' iimF' “ ' £- — i . r»‘> .Π- -eí-.Mfc, VUrn 4'
- 35 Schéma 5= Reakce s estery chlormravenčí kyseliny
podmí nky
Schotten-Baumann-
1. ftcylace karboxylovými kyselinami nebo estery chlormravenčí kyseliny podle schéma 4 a 5
Na výsledný amid se nechá reagovat H-Lys( Boc)-NH2 při teplotě místnosti v dipolárním rozpouštědle (dimethylformamid, dimethylsulfoxid) v přítomnosti zásady (DIPEA, NMM) a kopulačního reakčního činidla (DCC, DIC, EDCI) s karboxylovou kyselinou. Po odstranění rozpouštědla se zbytek smísí s vodou a obtížně rozpustný surový produkt se odsaje. Produkt se může čistit krystalizaci z alkoholu (například 2 methanolu, ethanolu nebo isopropanolu) nebo esteru (například ethylacetátu) nebo ketonu (například methylethylketonu) .
Reakce H-LysíBoc)-NH2 s chloridy karboxylové kyseliny vede ve vodném alkalickém roztoků (podmínky Schotten-Baumann) s 90 až 95% výtěžky k žádaným derivátům. Surový produkt se izoluje rtkL 't-^· w.'W T-.tí*nr .jaí Λ’βτί'··1—*> * ifc · # .ar» t l;; -- -J*·» odsátím a vyčistí se překrystalován im z alkoholu (methanol/ethanol), případně zethy1acetátu nebo zmethylethy1 ketonu.
2. Odštěpení chránící Boc-skupiny TFA:
Odštěpení chránící Boc-skupiny při teplotě místnosti ve směsi dichlormethanu a trif1uoroctové kyseliny (2:1) je po přibližně 60 minutách kvantitativní. Izolovaný surový produkt Rl-Lys-NH2 rychle dále reaguje bez dalšího Čištění.
3. Acylace hydrochloridu 4-((4-(aminoiminomethyl)fenyl)amino)4-oxomásledné kyseliny:
Reakce s další karboxylovou kyselinou (R4) se provádí v dipolárních aprotických rozpouštědlech (dimethylformám id, dimethylsulfoxid) v přítomnosti 2ásady ÍNMM, DIPEA) s kopulačními reakčními činidly, jako EDCI, Bop nebo PyBop. Po odstranění rozpouštědla se za přidání vody produkt výsráží. Čištění se provádí preparát ivní HPLC na čistém sloupci RPia za použití jako elučního činidla směsí vody, acétonitrilu a trifluoroctové kyseliny. Produkt se vysráží jako sůl TFA.
Podle tohoto obecného předpisu, jehož základem je schéma 4 a 5, se syntetizují sloučeniny, které objasňují příklad 56 a navazující tabulka V.
Příklad 56
Do 120 ml vysušeného, odplyněného N,N-dimethylformamidu (DMF) se přidá při teplotě místnosti 32 mmol Z-lysinamidhydrochloridu a 32 mmol hydrochloridu 4-((4-(aminomethyl)feny1)ami no-4-oxomáselné kyseliny, Edukty se za míchání rychle rozpustí; po přidání 104 mmol diisopropylethylamidu a 40 mmol BOP se směs míchá 16 hodin při teplotě místnosti.
• *
- 37 Na rotační odparce se odtáhne rozpouštědlo a přebytečná DIPEA při teplotě lázně 50 až 55 Ca za tlaku 1 MPa. Olejovítý zbytek se smísí s 250 ml vody, homogenizujé se v ultrazvukové lázni a ochladí se. Vysrážený konečný produkt se odsaje a v nuči se promyje vodcu.
Po vysušení chloridem vápenatým ve vakuu se získá přibližně 16 g béžového prášku o čistotě přibližně 90% (HPLC) v podobě hydrochloridové soli.
K přípravě odpovídajícího trifluoracetátu se produkt suspenduje ve 100 ml vody a smísí se s 32 mmol (2,45 ml) kyseliny trifluoroctová (99%). K odstranění přebytečné kyseliny se směs evakuuje na rotační odparce a nato se vodná suspense lyofilizuje ; -Po překrystalováníl. z alkoholu ( EtOH/MeOH)/ muže být~ zís-kaný produkt k lepší rozpustnosti znovu 1yofi 1 izován. Výtěžek je 5,26 g. Teplota tání 210 až 213 °C.
1H-NMR(500 MHz,DMS0-de., delta v ppm):
10,47, s, IH anilid, 9,14 a 8,82 s» NH amidin, 7,82 m, IH, Lys-epsilon-NH, 7,79 a 7,46, 2s, arom.H, 7,27 a 6,93 2s, 2H, CONHž, 7,20 d, IH, urethan NH( 5,0, s... 2H, benzyl.H, 3,89, m, IH, Calfa-H, 3,0 a 2,58 a 2,40, 3m, celkem 6H, alifat.H, 1,60-1,20, 4m, celkem 6H, zbytek alifat. H
• · · t v
• 44« • • 4« ♦
4 4 4 • · 4 4 4
« * * • 4 4 4
·»·♦ «· • • 4 4
- 38 Tabulka 5 alfa, epsiIon-N-SubstiLuované deriváty L-1ysinamidu podle schéma 4 a 5 a obecného vzorce I (n žnamená vždy 4)
- 39 ·· ···
s·“*-:!» ftiiHiiL , siř
Η..Λ*· - . .TS__/ ' * « ·«!
.1
7ďb>WW» . .( '. >et-♦♦ · * •· · · »·· ·· • ·· ·· ·♦ .1
- 41 Tabulka 6
Teploty tání sloučenin podle příkladů 56 až 82
Příklad t.tání [°C1 Příklad t.tání [’c] Příklad t.tání [°CJ
56 210-213 65 218-222 74 191-193
57 220-223 66 216-219 75 186-188
58 213-215 67 235-238 76 220-222
59 223-226 68 až 218 77 210-215
60 až 233 69 205-208 78 až 223
61 až 237 70 168-170 79 až 226
62 až 221 71 197-202 80 194-197
63 až 220 72 221-226 81 215-222
64 230-236 73 225-228 82 219-222
Poznámka: Údaj až“ naznačuje, že substance po vysušení vymrazením tvoří amorfní pěnu s odpovídajícími fyzikálními vlastnostmi. Teplota tání přísně vzato neexistuje, spíše pomalé slinování až do 2tekucení,
Soli sloučenin obecného vzorce I
Sloučeniny podle vynálezu mohou být ve formě adiční soli s kyselinou, například jako soli minerálních kyselin, jako například kyseliny chlorovodíkové, sírové, fosforečné, soli organických kyselin, jako například kyseliny octové, tri fluoroctové, mléčné, malonové, maleinové, fumarové, glukonové, glukuronové, citrónové, embonové, methansulfonové, hydroxyethansulfonové, pyrohroznové a jantarové.
Jak sloučeniny obecného vzorce I, tak jejich soli jsou biologicky aktivní.
Sloučeniny obecného vzorce I se mohou podávat ve volné formě nebo jako soli s fyziologicky vhodnými
··“ J!*' A-.eáL·, *7^ « · «
* * ·' • ··· * · « · ·« ·· • · • · · « ·· · · kyselinami. Aplikace může být perorální, parenterální, intravenosní, transdermální nebo inhalační.
Vynález se dále týká farmaceutických prostředků s obsahem alespoň jedné sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli s fyziologicky vhodnými anorganickými nebo organickými kyselinami a případně s farmaceuticky použitelnými nosiči a/nebo ředidly, případně s pomocnými látkami.
Příklad 83
Vazební afinity cetrorelixu, příklad 1, příklad 2, příklad 5, příklad 35 a příklad 56 na lidském recéptoru LH^-RH ( Ce tror e 1- i x: Ac - D - Na ( 2)-- D - p- C1 - Phe - D - Pa 1 ( 3 ) - Ser - Tyr - D - C i t - Leu Arg-Pro- D - A1 a -NH2)
Způsob stanovení vazební afinity (disóciační konstanty Kd) =
Vazební afinita se určuje kompetičně vazebním testem (displacement bindíng experiment, Beckér a kol Eur.J. Bíochem. 231, str. 535 až 543, 1995) . Jako radiaktivně značeného 1igandu se používá [125J] Cetrorelix (specifická aktivita 510x105 dpm/pmol: rozpuštěný v objemově 20% acetonitrilu, 0,2 % hm./obj. albuminu, 0, 1 % hm./obj. ŤFA, objemově přibližně 80 % vody) Vazební schopnost jodovaného peptidu je 60 až 85 % . Jako neznačených testovacích sloučenin se použije sloučenina podle příkladu 1, příkladu 2 a příkladu 56 v roztoku. Látky se nasazují v koncentracích Ο,ΟΙηΜ až 1000 nM (Cetrorelix, příklad 1, příklad 2) případně 0,01qM až 10qM (příklad 5, příklad 35, příklad 56).
Buňky jednobuněčného klonu L3,5/78 vytěsňujícího lidský receptor LH-RH, použité pro vazební test, se oddělí pomocí
g * φ • to < • • • v
fl to toto • to to«* • to • to
φ • · * to • • · • to* · to •
• ···· to · to • • * • to to* • ·· • • ··
PBS/EDTA (PBS bez Ca2+/Mg2+/lmM EDTA) od nekonfluentní obrostlé slupky buněčné kultury, určí se počet buněk v odpovídající hustotě buněk, resuspenduíi se v inkubačním mediu (modifikovaném Eagle Medium Dulbecco s 4, 5 g/1 glukózy, 10mM Hepes, pH 7,5, 0,5% hm./obj. BSA, ig/1 Bacitracinu, 0,1 g/1 SBTI, 0,1% hm./obj. NaN3) Do specielních 400 ql reakčních nádob (Fa. Renner typ Beckman) se předloží 200 ql směsi si1ikon/parafinový olej (84/16 obj.%) a na to se pipetuje 50 ql buněčné suspense (2,5xl05 buněk). K buněčné suspensi na vrstvě si1 ikon/parafi nový olej se pak okamžitě přidá 50 ql vazebního media s [125J] Cetrorelix a testované sloučeniny v odpovídající koncentraci.
a '
Nyní se za otáčení ve vytápěné skříni při teplotě 35 C 60 minut inkubuje. Po této operaci následuje odstředění v Heraeus Biofuge 15 v rotoru HTA 13,8 2 minuty při 9000 otáčkách za minutu /při teplotě místnosti).- Vlivem vrstvy sil i kon/paraf.i nový, olej přitom buňky peletují a tak se od vazebního media oddělí. Po odstředění se reakční nádoby náhle zmrazí v tekutém dusíku a špička reakční nádoby (buněčná peleta) se kleštěmi odstřihne a špička s buněčnými peletami (vázaný ligand [125J] Cetrorelix) a také přebytek buněčné pelety (vázaný ligand [125J] Cetrorelix) i přebytek buněčné pelety (nevázaný, volný ligand [i25jj Cetrorelix) se převedou do citaci trubičky: Ke stanovení nespecifické vazby (Bo) se kompetitor nepřidává. Ke stanovení nespecifické vazby se přidá 1 qM neznačeného Cetrorelixu ke konkurenci. Nespecifická vazba je rovna nebo je manší než 10 % celkově vytvořené Bo a je tedy nízká. Ke kvantifikaci slouží gama-čítač, vyhodnocení s programem EBDA/Ligand V3.0 (McPherson, J. Pharmacol. Methods 14, str. 213 až 228, 1985).
Vynesení do grafu účinku dávky umožňuje posouzení koncentrace IC50 (koncentrace, která způsobí 50% inhibici reakce na receptorů) a program EBDA/Ligand z toho vypočte disociační konstantu Kd [nM].
Výsledek: Z konkurenčních křivek (viz obr.l) je patrno, že všechny testované sloučeniny s radioaktivně značeným
« » • ··· • · .{
- 44 1igandem [125J] Cetrorelix) konkurují vazbou na lidský receptor LH-RH. Vynesena je vždy vazba (v 5í celkové vazby Bo) vůči koncentraci kompetitoru. Pro sloučeniny vyznačené na obr. 1 bylo možno vypočítat následující vazební afinity vypočtené jako disóciační konstanta Kd[nM:]: Cetrorelix (SB-75): 0,214 nM, Příklad 1: 0,305 nM, příklad 2: 0,104 nM, příklad 5: 108 nM, příklad 35: 300 nM a příklad 56:1082 nM. Vazební afinity jako střední hodnota různých stanovení jsou udány v tabulce VII.
Příklad 84
Antagonistické působení sloučeniny podle příkladu 2 a podle příkladu 56 ve funkční zkoušce na lidském receptortu LH-RH
Způsob staďóvění IPSí DŮTiyp-'l, 3, 5-tri fosfát) u: Subkonflu-_______ entní kultura lidského recepotoru LH-RH exprimovaného buněčného klonu /L 3,5/78) se promyje jednou PBS, buňky se uvolní PBS/EDTA a buněčná suspense se peletuje. Buňky se resuspendují v inkubačním mediu (modifikované eagle medium Dulbeco se 4,5 g/1 glukózy, 10 mM Hepes, pH 7,5, 0,5 % hm./obj. BSA, 5 mM LiCl, lg/1 bacitracinu, 0,1 g/1 SBTI) , rozdělí se na podíly v 1,5 ml reakčních nádobách a 30 minut se předinkubují při teplotě 37 C, Potřebuje se 4xl06 buněk v objemu 500 ql na měřicí bod. Po předinkubační operaci následuje přísada LH-RH (zásobní roztok 0,5 mM v 10 ntí Tris, pH 7,5, 1 mM dithiotreitholu, 0,1 hm./obj. BSA/Bachem Arttt H4005) k suspensi buněk v konečné koncentraci 10 nM. Účinek antagonistů se testuje současným pořidáváním odpovídající koncentrace (například 0,0316, 0,1, 0,316 atd. až 100 nM pro příklad 2). Jako negativní kontrola se inkubují buňky bez přidaného LH-RH. Po 15 minutové inkubaci při teplotě 37 C se vytvořený IP3 izoluje z buněk extrakcí kyselinou trifluoroctovou (TCA). Přidá se 500 ul ledově studeného 15% (hm./obj.) roztoku TCA do buněčné suspense. Vznikající sraženina se peletuje 15-minutovým odO středěním při teplotě 4 C, při 2000xg v bioodstředivce Heraeus íkiji^'Τ'ΐΜΐιΐΓ* ~J rcr *» hwiioj; τ,Α 1
« · • · • · · · f
- 45 15R. Nadbytek 950 14I se extrahuje třikrát 10 objemy studeného vodou nasyceného diethyletheru v 15 ml nádobě stáním na ledu. Po poslední extrakční operaci se hodnota pH roztoku nastaví na 7,5 0, 5M roztokem hydrogenuhli či tanu sodného. .
Stanovení koncentrace IP3 v buněčných extraktech se provádí pomocí senzitivního kompetitivního vazebního testu s vazebním proteinem IP3, značeným [3H]-IP3 a neznačeným IP3-K tomu se používá zkušebního kitu Amersham íTRK 10001, s provedením podle popsaného testovacího protokolu. Po provedení příslušných operací se nakonec přidá 2 ml scintilátoru pro vodné vzorky (Rotiszint Ecoplus), suspendovaná peleta s vázaným [3H]-IP3 se s ním opatrně smísí a měří se beta-scinti 1ačním čítačem. Množství buněčných IP3 se vypočte pomocí standardní křivky , a .sestaví se. křivka účinnosti dávky . Hodnotu . IP3- lze odhadnout z inflexního bodu křivky.
Výsledek: Na obr. 1 jsou znázorněny odpovídající křivky účinnosti dávky pro peptidické antagonisty příklad 2 (obr.2) i peptidomimetikum příklad 56 (obr. 3). Simuluje se lOnM LH-RH a určí se brzdění tvorby IP3 v závislosti na koncentraci substance. Pro příklad 2 a příklad'56 nemohla být určena žádná agonistická aktivita, tedy látky samotné nevedou k simulaci synthesy IP3. Ve zde neuváděných kontrolních pokusech se ukázalo, že netransfektované buňky nemohou být simulovány LH-RH k synthese IP3. Ještě měřitelné nejvyšší koncentrace IP3 odpovídají koncentracím néstimulovaných buněk. Jde tedy u příkladu 2 a příkladu 56 o funkční antagonisty LH-ŘH. Látky se však liší v potenci. Za zvolených zkušebních podmínek je ÍC50 podle příkladu 2 přibližně 0,4 nM, IC50 podle příkladu 56 je naproti tomu přibližně 4um. Tyto aktivity jsou ve velmi dobrém vztahu s vazebními aktivitami Kd = 0,109 nM v případě příkladu 2 a Kd=l,08 14M v případě příkladu 56 zjištěnými konkurenčním vazebním testem [125J] Cetrórelix.
0 • 0 • · 0 ·
Příklad 85
Hormony potlačující účinek sloučenin podle příkladu 1, příkladu 2 a příkladu 56 u zdravých krysích samců.
Ke stanovení potlačení testosteronu v krvi zdravých krysích samců se injektuje látka subkutánně do pravé chlopně. Dávkování je v případě sloučeniny podle příkladu 1 a 2 1,5 mg/ kg, v případě sloučeniny podle příkladu 56 10 mg/kg. Ke kon-. trole hodnot testosteronu se zvířatům odebírá 300 ql krve z žíly véna sublingualis v časových úsecích 0, 2, 4, 8.(pouze v případě příkladu 56), 24. 48, 72 a 96 hodin a pak každý 3. den až do konce potlačení. Potlačení pod 1 ng/ml testosteronu vydrželo po dávce sloučeniny podle příkladu 1 u jednoho zvířete až 264 hodin, u dvou zvířat až 336 hodin a u jednoho zvíře-,- te 384 hodin (obr. 4). Po dávce sloučeniny podle příkladu 2. byla hladina testosteronu potlačena u jednoho zvířete 408 hodin, u 4 zvířat až 648 hodin, (obr. 5). Příklad 56 (10 mg/kg s.c.) potlačil hladinu testosteronu u všech 5 zvířat již po 2 hodinách a tento účinek si podržel až 8 hodin. Při následujícm 2kušebním okamžiku (24 hodin) hodnoty testosteronu opět vzrůstaly (obr. 6).
Tabulka 7
Biologické hodnoty
Vazební afinita na lidském receptoru LH-RH (vyjádřená jako disociační konstanta KdfnMJ; vyhodnocení analýzou EBDA/ligand analytickým programem. Udány jsou střední hodnoty z různých pokusů (počet pokusu v závorkách) i potlačení testosteronu in vivo, uvolňování histaminu in vivo a rozpustnost ve vodě v porovnání s SB-75=
Á ťMSTčWflí: ·' 10« -!*π i ‘ ‘ W.·1..
φ • ΦΦΦ φ φ
Látka Afinita (1,5mg/kg (IC50) h2o
. Λ...... 1 i dský LH-RH-recept. [nmol/1] jedna dávka) potlačení testosteronu u krys . .. [h] uvolnění histaminu [Lig/ml] rozpustu [mgíml] IOS
Cetrorelix SB-75 0, 202ť 10) 144 9, 7 9
Příklad 1 0,306 (2) 336 31,9 27
Příklad 2 0, 109 (2) 648 17, 1 23
Příklad 3 0, 170 (2) 864 n. b. x n. b.
Příklad 4 0,206 (2) 696 n. b. n. b.
Příklad 5 108 (2) -
Příklad 35 300 (2) ; - ., - —
Příklad 56 1082 (2) - - -
χ pro obtížnou rozpustnost nestanoví tel né
Průmyslová využitelnost
Sloučenina pro výrobu farmaceutických prostředků k ošetřování nádorů závislých na hormonech, zvláště karcinomu prostaty nebo prsu a pro ošetřování nezhoubných indikací, jejichž ošetření vyžaduje potlačení hormonu LH-RH.

Claims (15)

  1. PATENTOVÉ
    NÁROKY
    1. Sloučenina obecného vzorce I
    R2
    I
    R1 - CO - NH - CH - CO - N - R3
    I (CHz)n ( I)
    NH
    I
    CO-R4 kde'znamená n číslo 3 nebo 4, R1 případně, substituovanou skupinu alkylovou, alkyloxyskupinu, skupinu arylovou, heteroarylovou, aralkylovou, heteroaralkylovou, aralkyloxyskupinu nebo heteroaralkyloxvskupi nu, R3 a R3 na sobě nezávisle atom vodíku, případně substituovanou skupinu alkylovou, aralkylovou, nebo heteroaralkylovou, přičemž jakožto substituenty přicházejí v úvahu skupina arylová nebo heteroarylová, nebo -NR3R3 znamená skupinu aminokyseliny, a R4 znamená skupinu obecného vzorce II
    --- ÍCHzlp --- CO --- NR6
    I
    R5 í II) kde znamená p celé Číslo 1 až 4, R5 atom vodíku nebo alkylovou skupinu a R6 případně substituovanou skupinu arylou nebo heteroarylovou, přičemž jakožto substituenty přicházejí v úvahu opět skupina arylová nebo heteroarylová, nebo R4 znamená kruh obecného vzorce III
    4*1*?“^τι* *=.í«Afc.> -4 ;* (III) * kde znamená q číslo 1 nebo 2; R7 atom vodíku nebo alkylovou skupinu, Rs atom vodíku nebo alkylovou skupinu a X atom kyslíku nebo síry, přičemž zbytky aromatické nebo heteroaromatické mohou být částečně nebo úplně hydrogenovány a chirální uhlíkové atomy mohou být v konfiguraci D nebo L a její soli s farma- ceuticky vhodnými kyselinami.
  2. 2. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kterou je alfa-N-[benzyloxykarbony1]-epsilon-N-[5-[(4-am i di nofenyllamino] -5-oxo-pentanoy1]-L-]ysi nami dtr if1uoracetát.
  3. 3. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kterou je alfa-N-[benzyloxykarbony1]-epsi lon-N-[5-[( 4-am idi nofeny1) am i - . no]-4-oxo-butanoyl]-L-1ysinámi dtri f1uoracetát.
  4. 4. Sloučenina podle nároku 1 obecného vzorce I, kterou je alfa-N-[benzyloxykarbony1]-epsilon-N-[5-[(4-am i di nofeny1)am i no] -4-oxo-butanoy 1 ]-]..-] ysiη - N- ( 3-pyr i dyl methyl ) am idtr i f luoracetát.
    5. Sloučenina podle nároku 1 až 4 obecného vzorce I v po- době embonátové soli. 6, Sloučenina podlé nároku i obecného vzorce V
    Ac - D- Na 1 í 2) 1 - D( pC 1) Phe2 - D - Pa 1 ( 3)3 - Se r4 - Tyr® - D - Xxx«> - Leu7 - Arg8 Pro9-D-Alalo-NH2 ÍV)
    --“i· SĚÍ.t'*.*- *** ** B ..i '»..'!* » *·*
    50 kde znamená D-Χχχ skupinu aminokyseliny obecného vzorce VI
    - HN - CH - CO - 0 I
    ....... -...... ---.....( CH2 ) n................r ’ - I tví)
    NH
    I
    CO - R4 kde znamená n 3 nebo 4, R4 skupinu obecného vzorce II
    O (CH2)p “ CO NR6 - (II) ’ ________'..... .. ! ^................ ...... R5 kde znamená p celé číslo 1 až 4; R5 atom vodíku nebo alkylovou skupinu a R6 případně substituovanou skupinu arylou nebo heteroary 1 ovou. nebo R4 znamená kruh obecného vzorce III dli) kde znamená q číslo 1 nebo 2; R7 atom vodíku nebo alkylovou skupinu, R® atom vodíku nebo alkylovou skupinu a X atom kyslíku nebo síry, a její soli s farmaceuticky vhodnými kyselinami.
    7.
    Sloučenina.podle nároku 6 obecného vzorce V, kde znali. ÍŤ“« -n.w. <
    '4! » -Jť mená Xxxx [ epsi 1 on-N-4-( 4-ami dinof enyl) am ino-1,4-di oxobuty ΜΙ ysyl ovou skupinu.
  5. 8. Sloučenina podle nároku 6 obecného vzorce V, kde znamená Xxxx [epsilon-N-(imidasolidin-2-on-4-yl)formyl]lysylovou skupinu.
  6. 9. Sloučenina podle nároku 6 až 8 obecného vzorce V v podobě embonátové sol i.
  7. 10. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 6 obecného vzorce V, kde jednotlivé symboly mají v nároku 6 uvedený význam, vyznačující se tím, že (a) se zavádí do alfa-aminoskupiny a do skupiny karboxy Tové’ kyseliny D-lysinu nebo D-ornithinu vhodné chránící skupiny, (b) nechává se reagovat D-lysin nebo D-ornithin s chráněnými skupinami s karboxylovou kyselinou obecného vzorce VII·
    R4 -C00H (VII) kde R4 má shora uvedený význam, (c) odštěpují se chránící skupiny ze skupiny alfa-karboxylové. kyseliny sloučeniny získané ve stupni b) k začlenění do polohy 6 operací (h), (d) váže se D-alanin s chráněnou aminoskupinou na pevný nosič v podobě pryskyřice, (e) odštěpují se chránící skupiny z aminoskupiny alan i nu, (f) nechává se reagovat alanin vázaný na pevném nosiči s prolinem, s chráněným atomem dusíku, (g) odštěpuje se chránící skupina z atomu dusíku prolinu, (h) opakuje se operace f) a g) s aminokyselinami 1 až 8 obecného vzorce V v pořadí od 8 k 1 za použití modifikovaného Dlysinu nebo D-ornithinu popsaného v operaci (c) pro polohu 6, (i) odštěpuje se sloučenina, získaná v operaci (h), od nosiče a
    3*. fek .
    ··· 9 případně se čistí, zvláště chromatografií HPLC, (j) popřípadě se sloučenina nechává reagovat s farmaceuticky vhodnou kyselinou, s výhodou s kyselinou embonovou.
  8. 11. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 6 obecného vzorce V, kde jednotlivé symboly mají v nároku 6 uvedený význam, vyznačující se tím, že (a) se váže D-alanin s chráněnou aminoskupinou na nosič vhodný k synthese v pevné fázi, (b) odštěpí se chránící skupina z aminoskupiny alaninu, (cl nechává se reagovat alanin vázaný na pryskyřici s prolinem s chráněným atomem dusíku, ( d) odštěpí se chránící skupina z atomu dusíku prolinu, (e) opakuje se operace c) a d) s aminokyselinami . .1 až.8 obecného vzorce V v pořadí od 8 k 1 , (f) odštěpuje se ve stupni e) získaná sloučenina od nosiče, ( g) nechává se reagovat s karboxylovou kyselinou obecného vzorce VII
    R4 -COOH (VII) kde R4 má shora uvedený význam, (h) popřípadě se sloučenina nechává reagovat s farmaceuticky vhodnou kyselinou, s výhodou s kyselinou embonovou.
  9. 12. Způsob přípravy sloučeniny podle nároku 6 obecného vzorce V, kde jednotlivé symboly mají v nároku 6 uvedený význam, vyznačující se tím, že (a) se váže D-alanin s chráněnou aminoskupinou na nosič vhodný k synthese v pevné fázi, (b) odštěpí se chránící skupina z aminoskupiny alaninu, (c) nechává se reagovat alanin vázaný na pryskyřici s prolinem s chráněným atomem dusíku, (d) odštěpí se chránící skupina z atomu dusíku prolinu, (e) opakuje se operace c) a d) s aminokyselinami 6 až 8 ·!' AŠE'!
    «-r-vsř.n Jr -..z·
    - 53 obecného vzorce V v pořadí od 8 k 6, (f) odštěpuje se skupina chránící epsilon-aminoskupinu D-lysinu nebo D-ornithinu v poloze 6 a provádí se reakce s karboxylovou kyselinou obecného vzorce (VII)
    R4 - COOH (VII) kde R4 má shora uvedený význam,
    Cg) odštěpuje se chránící skupina z al fa-aminoskupíny D-lysinu nebo D-ornithinu, (h) opakuje se operace c) a d) s aminokyselinami 1 až 5 obecného vzorce IV v pořadí od 5 k 1, (i) odštěpí se sloučenina získaná v operaci (h) od pryskyřice a čistí se zvláště chromatografií HPLC, ' ( j) popřípadě se sl oučenina nechává ..reagovat s farmaceut icky vhodnou kyselinou, s výhodou kyselinou embonovou.
  10. 13. Způsob podle nároku 10 až 12, vyznačující se tím, že se jakožto karboxylové kyseliny obecného vzorce VII používá N-(4-amidinofenyl)amino-4-oxomáselné kyseliny.
  11. 14. Způsob podle nároku 10 až 12, vyznačující se tím, že se jakožto karboxylové kyseliny obecného vzorce VII používá imidazolidin-2-on-4-karboxylové kyseliny.
  12. 15. Způsob podle nároku 10 až 14, vyznačuj ící se tím, že se pro příprqavu farmaceuticky vhodné soli používá embonové kyseliny.
  13. 16. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje jako účinnou látku sloučeninu podle nároku 1 až 9.
  14. 17. Použití sloučeniny podle nároku 1 až 9 pro výrobu farmaceutických prostředků k ošetřování nádorů závislých na hormonech, zvláště karcinomu prostaty nebo prsu a pro ošetřování u
    • 9 9 • 9 • • 9 9 9 • •99 • · ·· e « · « · • v • · · ♦ · 9 ·»· 9 9 • • · • 9 • · 9 9 9 *9*9 * 9 99 • · »9 9 >
    - 54 nezhoubných indikací, jejichž ošetření vyžaduje potlačení hormonu LH-RH.
  15. 18, Způsob výroby farmaceutických prostředků obsahujících jako účinnou látku sloučeninu podle nároku 1 až 9, vyznačující se tím, že se mísí sloučenina podle nároku 1 až 9 s běžnými nosiči a pomocnými činidly a směs se zpracovává na formu farmaceutickéhpý prostředku.
CZ19981358A 1995-11-28 1996-11-14 Derivát peptidu, způsob jeho přípravy, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje CZ290098B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19544212A DE19544212A1 (de) 1995-11-28 1995-11-28 Neue LH-RH-Antagonisten mit verbesserter Wirkung

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ135898A3 true CZ135898A3 (cs) 1998-09-16
CZ290098B6 CZ290098B6 (cs) 2002-05-15

Family

ID=7778552

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19981358A CZ290098B6 (cs) 1995-11-28 1996-11-14 Derivát peptidu, způsob jeho přípravy, jeho použití a farmaceutický prostředek, který ho obsahuje

Country Status (30)

Country Link
EP (1) EP0876337B1 (cs)
JP (1) JP2000501083A (cs)
KR (1) KR100460165B1 (cs)
CN (1) CN1087283C (cs)
AR (1) AR004354A1 (cs)
AT (1) ATE289588T1 (cs)
AU (1) AU706546B2 (cs)
BG (1) BG64386B1 (cs)
BR (1) BR9611760A (cs)
CA (1) CA2238570A1 (cs)
CZ (1) CZ290098B6 (cs)
DE (2) DE19544212A1 (cs)
DK (1) DK0876337T3 (cs)
EE (1) EE04318B1 (cs)
ES (1) ES2238704T3 (cs)
HK (1) HK1016999A1 (cs)
HU (1) HUP9901656A3 (cs)
IL (1) IL119703A (cs)
IS (1) IS1914B (cs)
MX (1) MX9804120A (cs)
NO (1) NO311023B1 (cs)
NZ (1) NZ330521A (cs)
PL (1) PL186872B1 (cs)
PT (1) PT876337E (cs)
RU (1) RU2163910C2 (cs)
SI (1) SI0876337T1 (cs)
SK (1) SK282760B6 (cs)
UA (1) UA65531C2 (cs)
WO (1) WO1997019953A2 (cs)
ZA (1) ZA969987B (cs)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19911771B4 (de) * 1999-03-17 2006-03-30 Zentaris Gmbh LHRH-Antagonist, Verfahren zu seiner Herstellung und seiner Verwendung
US7005418B1 (en) 1999-09-23 2006-02-28 Zentaris Gmbh Method for the therapeutic management of extrauterine proliferation of endometrial tissue, chronic pelvic pain and fallopian tube obstruction
HUP0300222A3 (en) 2000-03-14 2004-08-30 Zentaris Gmbh Novel lhrh-antagonists, production and use thereof as medicament
SE0100567D0 (sv) * 2001-02-20 2001-02-20 Astrazeneca Ab Compounds
CN104086632A (zh) * 2014-08-05 2014-10-08 杭州诺泰制药技术有限公司 一种制备西曲瑞克的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5300492A (en) * 1988-02-10 1994-04-05 Tap Pharmaceuticals LHRH analogs
US5110904A (en) * 1989-08-07 1992-05-05 Abbott Laboratories Lhrh analogs
US5140009A (en) * 1988-02-10 1992-08-18 Tap Pharmaceuticals, Inc. Octapeptide LHRH antagonists
IL101074A (en) * 1991-03-14 1997-09-30 Salk Inst For Biological Studi GnRH ANALOGS AND THEIR PREPARATION
DE593491T1 (de) * 1991-04-25 1994-11-17 Romano Deghenghi LHRH-Antagonisten.
JPH08504209A (ja) * 1992-12-04 1996-05-07 アボツト・ラボラトリーズ ６位修飾デカペプチドｌｈｒｈ拮抗薬
DK0683792T3 (da) * 1992-12-18 2002-01-14 Abbott Lab LHRH-antagonister med modificerede aminoacylrester i stilling 5 og 6
IL108509A0 (en) * 1993-02-22 1994-05-30 Salk Inst For Biological Studi GnRH antagonist peptides

Also Published As

Publication number Publication date
HUP9901656A2 (hu) 1999-08-30
AU706546B2 (en) 1999-06-17
IL119703A0 (en) 1997-02-18
CA2238570A1 (en) 1997-06-05
WO1997019953A8 (de) 2002-09-26
EP0876337B1 (de) 2005-02-23
UA65531C2 (en) 2004-04-15
WO1997019953A3 (de) 1997-08-28
ES2238704T3 (es) 2005-09-01
CN1202882A (zh) 1998-12-23
SK62998A3 (en) 1999-07-12
BG102514A (en) 1999-04-30
DE19544212A1 (de) 1997-06-05
NO311023B1 (no) 2001-10-01
SI0876337T1 (en) 2005-06-30
BG64386B1 (bg) 2004-12-30
IS1914B (is) 2004-02-03
BR9611760A (pt) 1999-10-05
DE59611201D1 (de) 2005-03-31
HUP9901656A3 (en) 2001-10-29
RU2163910C2 (ru) 2001-03-10
PL326977A1 (en) 1998-11-09
PL186872B1 (pl) 2004-03-31
ATE289588T1 (de) 2005-03-15
DK0876337T3 (da) 2005-05-09
HK1016999A1 (en) 1999-11-22
IS4733A (is) 1998-05-05
SK282760B6 (sk) 2002-12-03
CZ290098B6 (cs) 2002-05-15
IL119703A (en) 2001-04-30
EE04318B1 (et) 2004-06-15
EP0876337A2 (de) 1998-11-11
MX9804120A (es) 1998-09-30
NZ330521A (en) 1999-01-28
KR100460165B1 (ko) 2005-06-01
JP2000501083A (ja) 2000-02-02
WO1997019953A2 (de) 1997-06-05
CN1087283C (zh) 2002-07-10
EE9800165A (et) 1998-12-15
ZA969987B (en) 1997-06-17
PT876337E (pt) 2005-06-30
NO982366D0 (no) 1998-05-25
AR004354A1 (es) 1998-11-04
NO982366L (no) 1998-05-25
KR19990071864A (ko) 1999-09-27
AU1867097A (en) 1997-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5843901A (en) LHRH antagonist peptides
KR100519421B1 (ko) 5 및 6 위치에서 변형되는 지엔알에이치 길항제
JPH09501177A (ja) 治療効果のあるペプチド誘導体
KR100569623B1 (ko) 개선된 용해도 특성을 가진 신규의 ｌｈｒｈ 길항제
US5502035A (en) N-terminus modified analogs of LHRH
RU2242481C2 (ru) Аналоги циклического соматостатина
US5942493A (en) LH-RH antagonists having improved action
CZ135898A3 (cs) Nové antagonisty LH-RH se zlepšeným účinkem
SK14332002A3 (sk) Antagonisty LHRH, ich výroba a použitie ako liečiv
EP0738154A1 (en) N-terminus modified analogs of lhrh
EP1593686B1 (en) Antineoplastic peptides
TW379216B (en) Novel LH-RH antagonists having improved action, harmaceutical composition comprising the same and process for preparing the same
WO1997010261A1 (fr) Derives peptidiques
CZ20004654A3 (cs) Cyklická analoga somatostatinu

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20051114