SK282760B6 - Antagonista LH-RH, spôsob jeho prípravy, jeho použitie a farmaceutický prostriedok, ktorý ho obsahuje - Google Patents

Antagonista LH-RH, spôsob jeho prípravy, jeho použitie a farmaceutický prostriedok, ktorý ho obsahuje Download PDF

Info

Publication number
SK282760B6
SK282760B6 SK629-98A SK62998A SK282760B6 SK 282760 B6 SK282760 B6 SK 282760B6 SK 62998 A SK62998 A SK 62998A SK 282760 B6 SK282760 B6 SK 282760B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
amino
formula
group
acid
alanine
Prior art date
Application number
SK629-98A
Other languages
English (en)
Other versions
SK62998A3 (en
Inventor
Bernhard Kutscher
Michael Bernd
Thomas Beckers
Thomas Klenner
Peter-Paul Emig
Patricia-Marie Charpentier
Original Assignee
Zentaris Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zentaris Ag filed Critical Zentaris Ag
Publication of SK62998A3 publication Critical patent/SK62998A3/sk
Publication of SK282760B6 publication Critical patent/SK282760B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A61P5/04—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin for decreasing, blocking or antagonising the activity of the hypothalamic hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C257/00—Compounds containing carboxyl groups, the doubly-bound oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a doubly-bound nitrogen atom, this nitrogen atom not being further bound to an oxygen atom, e.g. imino-ethers, amidines
    • C07C257/10—Compounds containing carboxyl groups, the doubly-bound oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a doubly-bound nitrogen atom, this nitrogen atom not being further bound to an oxygen atom, e.g. imino-ethers, amidines with replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group by nitrogen atoms, e.g. amidines
    • C07C257/18—Compounds containing carboxyl groups, the doubly-bound oxygen atom of a carboxyl group being replaced by a doubly-bound nitrogen atom, this nitrogen atom not being further bound to an oxygen atom, e.g. imino-ethers, amidines with replacement of the other oxygen atom of the carboxyl group by nitrogen atoms, e.g. amidines having carbon atoms of amidino groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
    • C07D207/27—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/08—Indoles; Hydrogenated indoles with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/61—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/63—One oxygen atom
    • C07D213/64—One oxygen atom attached in position 2 or 6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C07D213/80—Acids; Esters in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/84—Nitriles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/20—Oxygen atoms
    • C07D215/22—Oxygen atoms attached in position 2 or 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D233/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/26—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D233/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/30—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D233/32—One oxygen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D235/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings
    • C07D235/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, condensed with other rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D235/04—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles
    • C07D235/06—Benzimidazoles; Hydrogenated benzimidazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached in position 2
    • C07D235/14—Radicals substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D257/04—Five-membered rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/38—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D307/52—Radicals substituted by nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Opisujú sa zlúčeniny všeobecného vzorca (I), najmä peptidomimetiká a v bočnom reťazci modifikované peptidy s vysokou antagonistickou potenciou a bez vedľajších účinkov a ich soli s farmaceuticky vhodnými kyselinami. Význam jednotlivých substituentov je uvedený v opise. Opísaný je i spôsob prípravy týchto LH-RH - antagonistov, ich použitie a farmaceutické prostriedky, ktoré ich obsahujú a sú vhodné na ošetrovanie nádorov závislých od hormónov, najmä karcinómu prostaty alebo prsníka a na ošetrovanie nezhubných indikácií, ktorých ošetrenie vyžaduje potlačenie hormónu LH-RH.ŕ

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka nových antagonistov LH-RH, predovšetkým peptidomimetík a peptidov modifikovaných vo svojom bočnom reťazci, ich solí s farmakologicky vhodnými kyselinami a spôsobu prípravy antagonistov LH-RH a ich solí. Peptidy podľa vynálezu predstavujú analógy luteinizujúceho hormónu uvoľňujúceho hormón (LH-RH), ktorý má nasledujúcu štruktúru: p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-LeuArg-Pro-Gly-NH2, [LH-RH, gonadorelín].
Doterajší stav techniky
Viac ako 20 rokov hľadali bádatelia selektívne pôsobiace antagonisty LH-RH - dekapeptidu [M. Karten a J. E. Riviér, Endocrine Reviews 7, str. 44 až 66 (1986)]. Dôvodom veľkého záujmu o také antagonisty' je ich užitočnosť v odbore endokrinológie, gynekológie, ochrany proti počatiu a proti rakovine. Bolo pripravené veľké množstvo zlúčenín ako potenciálnych antagonistov LH-LR. Zaujímavé zlúčeniny, ktoré boli dosiaľ objavené, sú zlúčeninami, ktorých štruktúra predstavuje modifikáciu štruktúry LH-RH.
Prvá séria schopných antagonistov bola získaná zavedením aromatických zvyškov aminokyselín do polôh 1, 2, 3 a 6 alebo 2, 3 a 6. Obvyklý zápis zlúčenín vyzerá takto: najprv sa udajú aminokyseliny, ktoré vstúpili v peptidovom reťazci LH-RH na miesto pôvodne existujúcich aminokyselín, pričom polohy, kde došlo k výmene, sa značia hore umiestnenými číslicami. Ďalej sa nasledujúcim označením „LH-RH vyjadrí, že ide o analógy LH-RH, na ktorých došlo k výmene. Známymi antagonistami sú:
[Ac-D-Phe(4-Cl)1,2, D-Trp3’6]LH-RH (D. H. Coy a kol., publikácia Gross, E. a Meienhofer J. (vydavatelia) Peptides; Proceedings of tne 6th Američan Peptid Symposium, str. 775 až 779, Pierce Chem. Co., Rockville III. (1979):
[Ac-Pro'D-Phe 4-C1)2, D-NaI(2)3'6]LH-RH (americký patentový spis číslo 4 419 347) a [Ac-Pro',D-Phe(4-Cl)2, D-Trp3’s]LH-RH (J. L.Pineda a kol., J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, str. 420, 1983).
Na zvýšenie rozpustnosti antagonistov vo vode boli neskoršie zavedené bázické aminokyseliny, napríklad D-Arg v 6. polohe. Napríklad:
[Ac-D-Phc(4-C1)I,2,D-Trp3, D-Arg6, D-Ala10]LH-RH (ORG-30276) (D. H. Coy a kol., Endocrinology 100, str. 1445, 1982) a [Ac-D-Nal(2)', D-Phe(4-F)2, D-Trp3, DArg6]LH-RH (ORF 18260) (J. E. Riviér a kol., Vickery B. H. Nestor, Jr., J. J. Hafez, R. S. E (vydavatelia). LHRH a ich analógy, str. 11 až 22 MTP Press. Lancaster, UK 1984).
Také analógy vykazovali nielen očakávanú zlepšenú rozpustnost vo vode, ale mali tiež zlepšenú antagonistickú účinnosť. Napriek tomu však spôsobujú tieto nanajvýš mocné, hydrofilné analógy s D-Arg6 a s inými bázickými bočnými reťazcami v 6. polohe prechodné edémy na tvári a na končatinách pri subkutánnom podaní potkanom v dávkach 1,25 alebo 1,5 mg/kg (F. Schmidt a kol. Contraception 29, str. 283, 1984: J. E. Morgan a kol. Int. Archs. Allergy Appl.Immun. 80 str. 70 (1986). Ďalšie schopné antagonisty LH-RH sú opísané v patentových spisoch WO 92/19651, WO 94/19370, WO 92/17025, WO 94/14841, WO 94/13313, US-A 5 300 492, US-A 5 140 009, a EP 0413209 Al.
Výskyt endematogénnych účinkov po podaní niektorých z týchto antagonistov pri potkanoch, vyvolali pochybnosti o bezpečnosti pri ich použití na ľuďoch, a tak sa zavádzanie týchto liečiv do klinického použitia oneskorilo.
Preto existuje veľký dopyt po antagonistických peptidoch bez vedľajších účinkov.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je antagonista LH-RH všeobecného vzorca (I)
R3
I
H* - CO - SH - CH - CO - R - R3
I (CHaín (I)
I
HH
I
CO-R* kde znamená n číslo 3 alebo 4,
R1 skupinu fenylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, naftylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, fenantrylkarbonylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, fenylalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele alebo naftylalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, pričom všetky tieto skupiny sú prípadne substituované atómom halogénu, alkoxyskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, cinolylovou skupinou alebo fenylovou skupinou,
R2 a R3 od seba nezávisle atóm vodíka, skupinu alkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka, fenylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele alebo pyridylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, pričom všetky tieto skupiny sú prípadne substituované alkoxyskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, aminoskupinou alebo karbamoylovou skupinou,
R4 skupinu všeobecného vzorca (II) g
— (CHa)ŕ ~ CO — Kŕ (II),
I i
kde znamená
P celé číslo 1 až 4 a
R6 skupinu fenylovú prípadne substituovanú skupinou amidinoskupinou, kyanoskupinou, atómom halogénu, benzyloxyskupinou, alkoxyskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkylovou skupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, alebo znamená
R4 kruh všeobecného vzorca (III)
H kde znamená q číslo 1 alebo 2, a chirálne uhlíkové atómy môžu byt v konfigurácii D alebo L a jeho soli s farmaceutický vhodnými kyselinami.
Ďalej sa vynález týka tiež zlúčenín všeobecného vzorca (V)
Ac-D-Nal (2)1 -D(pCl) Phe2 -D-Pal (3)3 - Ser4 - Tyr5 - D- Xxx6 - Leu7 - Args -Pro9-D-Ala'°-NH2 (V), pričom znamená D-Xxx skupinu aminokyseliny všeobecného vzorca (VI)
- HU - CH - CO - o I <CHa>n
I <VI> ,
HH
I CO - R4 kde n, p, q, R4, H5, R6, R7, R8 a X majú uvedený význam a ich solí s farmaceutický vhodnými kyselinami.
Zlúčeniny podľa vynálezu vykazujú vysokú antagonickú potenciu a nemajú nežiaduce vedľajšie účinky, predovšetkým sú bez edematogénnych účinkov. Pokiaľ nie sú vo forme solí ťažko vo vode rozpustných farmaceutický vhodných kyselín, vykazujú okrem toho zlepšenú rozpustnosť vo vode. Ďalej majú zlúčeniny vysokú afinitu k ľudskému receptoru LH-RH, sú teda vysoko účinné pri brzdení uvoľňovaní gonadotropínov žľazy mozgového prívesku u cicavcov vrátane ľudí, vykazujú dlhodobo pôsobiace potlačenie testosterónu v potkanoch a spôsobujú minimálne uvoľňovanie histamínu in vitro.
Vhodnými zlúčeninami všeobecného vzorca (1) sú: alfa-N-Z-[epsilon-N' -4-(4-amidinofenyl)amino-l, 4-dioxobutyljlyzínamid, alfa-N-Z-[epsilon-N' -(imidazolidin-2-on-4-yl)formyl]lyzínamid. Výhodnými peptidmi všeobecného vzorca (V) sú peptidy, kde Xxx znamená skupinu [epsilonN' -4- (4-amidinofenyl)amino-l,4-dioxo-butyl]-lyzylovú alebo [epsilon-N1 -(imidazolidin-2-on-4-yl)formyl]lyzylovú. Soli s farmaceutický vhodnými kyselinami sú výhodne ťažko vodou rozpustné. Osobitne výhodné sú soli 4,4'metylén-bis(3-hydroxy-2-naftoovej kyseliny, známe tiež ako kyselina embonová alebo pamoaová.
Názvoslovie používané na definovanie peptidov súhlasí s názvoslovím vysvetleným komisiou 1UPAC-IUBKomission Uber Biochemische Nomen-klatur (European J. Biochem. 138 str. 9 až 37, 1984), pričom v súlade s doterajším znázorňovaním sú aminoskupiny pri N-zakončeni naľavo a karboxylové skupiny pri C-zakončení napravo. Antagonisty LH-RH ako peptidy a peptidomimetiká podľa vynálezu zahŕňajú aminokyseliny vyskytujúce sa v prírode aj synteticky pripravené, pričom prírodné zahŕňajú Ala, Val, Leu, Íle, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp a His. Skratky jednotlivých aminokyselín sú založené na triviálnych menách aminokyselín a znamenajú: Ala alanín, Arg arginín, Gly glycin, Leu leucín, Lys lyzín, Pal (3)-3-(3-pyridyl)alanín, Nal (2)3-(2-naftyl)alanín, Phe fenylalanín, (pCl)Phe 4-chlórfenylalanín, Pro prolín, Ser serín, Thr treonín, Trp tryptofán a Tyr tyrozín. Pokiaľ to nie je uvedené inak, sú opisované aminokyseliny radu L. Napríklad D-Nal(2) je skratkou pre 3-(2-naftyl)-D-alanín a Ser je skratkou pre L-serín. Ďalšie používané skratky majú tento význam: Boe terc.-butyloxykarbonyl
Bop benzotriazol-l-yloxy-tris-(dimetylamino)-fosfóniumhexafluorofosfát
DCC dicyklohexylkarbodiimid DCM dichlórmetán
Ddz dimetoxyfenyldimetylmetylenoxykarbonyl (dimetoxydimetyl-Z)
DIC diizopropylkarbodiimid DIPEA N,N-diizopropyletylamín DMF dimetylformamid Fmoc fluorenylmetyloxykarbonyl HF tekutá bezvodá kyselina fluorovodíková HOBt 1-hydroxybenzotriazol
HPLC vysokotlaková kvapalinová chromatografia PyBop benzotriazol-1 -yloxy-tris-pyrolidinofosfónium- hexafluorofosfát
TFA trifluóroctová kyselina
Z benzyloxykarbonyl
Spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I) spočíva podľa vynálezu v tom, že sa najprv funkčné skupiny (alfa-aminoskupina, epsilon-aminoskupina a skupina alfakarboxylovej kyseliny) opatrí chrániacou skupinou a potom sa voľná tretia funkčná skupina vhodným spôsobom necháva reagovať. Prípadne je možné tiež v prípadoch, keď sa dosahujú lepšie výsledky, zaviesť v prvej operácii prechodne chrániace skupiny, ktoré sa po druhej operácii zamenia za požadovanú funkčnú skupinu. Vhodné chrániace skupiny a spôsoby ich vnášania sú v odbore dobre známe. Príklady vhodných chrániacich skupín sú opísané v knihe „Principles of Peptide Synthesis nakladateľ-stvo Spinger Verlag 1984, v knihe „Solid Phase Peptide Synthesis J. M. Stewart a J. D. Young, Pierce Chem. Company, Rpckford, III, 1984 a G. Barany a R. B. Merrifield „The Peptides, zv. 1, str. 1 až 285, 1979, Academic Press Inc.
Príprava zlúčenín všeobecného vzorca (IV) môže prebiehať buď klasickým spôsobom kondenzáciou fragmentov alebo syntézou pevných fáz podľa Merrifielda postupným nastavovaním pri použití D-lyzínu okysleného už karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (VII) v bočnom reťazci rovnako ako reakciou dekapeptidového stavebného kameňa so zodpovedajúcimi karboxylovými kyselinami amidovým spojením v bočnom reťazci D-lyzinu6. V tomto postupe sú na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (V) podľa vynálezu k dispozícii tri alternatívy.
Podľa prvej možnosti prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (V)
a) sa zavádzajú do alfa-aminoskupiny a do skupiny karboxylovej kyseliny D-lyzínu alebo D-omitínu vhodné chrániace skupiny,
b) necháva sa reagovať D-lyzín alebo D-omitín s chránenými skupinami s karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (VII)
R4 - COOH (VII), kde R4 má už uvedený význam,
c) odštepujú sa chrániace skupiny zo skupiny alfakarboxylovej kyseliny zlúčeniny získanej v stupni b) na začlenenie do polohy 6 operáciou (h),
d) kopuluje sa D-alanín s chránenou aminoskupinou na pevný nosič v podobe živice (Merrifieldova syntéza),
e) odštepujú sa chrániace skupiny z aminoskupiny alanínu,
f) necháva sa reagovať alanín viazaný na pevnom nosiči s prolinom, s chráneným atómom dusíka,
g) odštepuje sa chrániaca skupina z atómu dusíka prolínu,
h) opakuje sa operácia f) a g) s aminokyselinami 1 až 8 všeobecného vzorca (V) v poradí od 8 k 1 pri použití modifikovaného D-lyzínu alebo D-omitínu opísaného v operácii
c) pre polohu 6,
i) odštepuje sa zlúčenina, získaná v operácii h), od nosiča a prípadne sa čistí, najmä chromatografiou HPLC,
j) prípadne sa zlúčenina necháva reagovať s farmaceutický vhodnou kyselinou, výhodne s kyselinou embónovou.
Podľa druhej možnosti prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (V)
a) sa viaže D-alanín s chránenou aminoskupinou na nosič vhodný na syntézu v pevnej fáze,
b) odštiepia sa chrániace skupiny z aminoskupiny alanínu,
c) necháva sa reagovať alanín viazaný na živicu s prolínom s chráneným atómom dusíka,
d) odštiepi sa chrániaca skupina z atómu dusíka prolínu,
e) opakuje sa operácia c) a d) s aminokyselinami 1 až 8 všeobecného vzorca (V) v poradí od 8 k 1,
f) odštepuje sa v stupni e) získaná zlúčenina od nosiča,
g) necháva sa reagovať s karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (Vil)
R4 - COOH (VII), kde R má už uvedený význam,
h) prípadne sa zlúčenina necháva reagovať s farmaceutický vhodnou kyselinou, výhodne s kyselinou embónovou.
Podľa tretej možnosti prípravy zlúčeniny všeobecného vzorca (V)
a) sa viaže D-alanín s chránenou aminoskupinou na nosič vhodný na syntézu v pevnej fáze,
b) odštiepi sa chrániaca skupina z aminoskupiny alanínu,
c) necháva sa reagovať alanín viazaný na živicu s prolínom s chráneným atómom dusíka,
d) odštiepi sa chrániaca skupina z atómu dusíka prolínu,
e) opakuje sa operácia c) a d) s aminokyselinami 6 až 8 všeobecného vzorca (V) v poradí od 8 k 6,
f) odštepuje sa skupina chrániaca epsilon-amino-skupinu D-lyzínu alebo D-omitínu v polohe 6 a vykonáva sa reakcia s karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (VII)
R4 - COOH (VII), kde R4 má už uvedený význam,
g) odštepuje sa chrániaca skupina z alfa-aminoskupiny D-lyzínu alebo D-omitínu,
h) opakuje sa operácia c) a d) s aminokyselinami 1 až 5 všeobecného vzorca (IV) v poradí od 5 k 1,
i) odštiepi sa zlúčenina získaná v operácii (h) od živice a čistí sa najmä chromatografiou HPLC,
j) prípadne sa zlúčenina necháva reagovať s farmaceutický vhodnou kyselinou, výhodne s kyselinou embónovou.
Výhodnými karboxylovými kyselinami všeobecného vzorca (VII) sú imidazolin-2-ón-4-karboxylová kyselina a N-(4-amidino-fenyl)amino-4-oxo-maslová kyselina.
Zlúčeniny všeobecného vzorca (V) sa pripravujú známymi spôsobmi, napríklad technikou pevných fáz, technikou čiastočne pevných fáz alebo klasickými roztokovými kopuláciami (pozri M. Bodanszky „Principles of Peptide Synthesis Springer Verlag 1984). Spôsoby syntézy pevných fáz sú opísané v učebnici „Solid Phase Peptide Synthesis'' J. M. Stewart a J. D. Young, Pierce Chem. Company, Rockford, III, 1984 a v G. Barany a R. B. Merrifield „The Peptides, zv. 1, str. 1 až 285, 1979, Academic Press Inc. Klasické roztokové syntézy sú podrobne opísané v publikácii „Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl) „Synthese von Peptiden vydavateľ E. Wiinsch 1974, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, BRD.
Postupná stavba prebieha napríklad tak, že sa najprv kovalentne viaže na obvyklý nerozpustný nosič karboxylová koncová aminokyselina, ktorej aminoskupina v polohe alfa je chránená, chrániaca skupina alfa-aminoskupiny tejto aminokyseliny sa odštiepi a takto vzniknutá voľná aminoskupina viaže najbližšiu chránenú aminokyselinu prostredníctvom jej karboxylovej skupiny a takto krok za krokom sa spoja ostatné aminokyseliny syntetizovaného peptidu v správnom poradí a po spojení všetkých aminokyselín sa odštiepi hotový peptid od nosiča a prípadne sa odštiepia ďalšie existujúce chrániace skupiny bočných skupín. K postupnej kondenzácii dochádza syntézou zo zodpovedajúcich obvyklým spôsobom chránených aminokyselín známym spôsobom. Rovnako je možné použitie automatických syntetizátorov peptidov, napríklad typu Labortec SP 650 od fy. Bachem, Švajčiarsko s použitím obchodne dostupných chránených aminokyselín.
Spojovanie jednotlivých aminokyselín navzájom prebieha obvyklými metódami, osobitne prichádzajú do úvahy
- metóda symetrických anhydridov v prítomnosti dicyklohexyl-karbodiimidu alebo diizopropylkarbodiimidu (DCC, DIC),
- metóda karbodiimidu všeobecne,
- metóda karbodiimidhydroxybenzotriazolová, (The Peptides, zv. 2, vydavateľ R. Gross a J. Meienhofer). Na spojovanie arginínu sa používa výhodne metóda karbodiimidová. Pre ostatné aminokyseliny sa všeobecne používa metóda symetrických alebo zmiešaných anhydridov.
Pri kopulácii fragmentov sa používa výhodne azidová kopulácia prebiehajúca bez racemizácie alebo metóda DCC-l-hydroxybenzotriazolová, prípadne DCC-3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazínová. Použiť je možné tiež aktivované estery fragmentov.
Na postupnú kondenzáciu aminokyselín sa osobitne dobre hodia aktivované estery N-chránených aminokyselín, ako je napríklad N-hydroxysukcínimidester alebo 2,4,5trichlór-fenylester. Aminolýza sa môže dobre katalyzovať N-hydroxy-zlúčeninami, ktoré majú približne kyslosť kyseliny octovej, ako napríklad 1-hydroxybenzotriazol.
Ako skupiny chrániace prechodne aminoskupiny prichádzajú do úvahy skupiny odstrániteľné hydrogenáciou, ako napríklad skupina benzyloxykarbonylová (Z = zvyšok) alebo skupiny odštiepiteľné slabými kyselinami. Ako chrániace skupiny pre aminoskupiny v polohe alfa prichádzajú do úvahy napríklad: terciáme butyloxykarbonylové skupiny, karbobenzoxyskupiny, prípadne karbobenzotioskupiny (prípadne vždy s atómom brómu alebo s nitrobenzylovou skupinou v p-polohe), skupina trifluóracetylová, ftalylová, skupina o-nitrofenoxyacetalová tritylová, p-toluolsulfonylová, benzylová, substituované benzylové skupiny v benzolovom jadre (s atómom brómu alebo nitrobenzylovou skupinou v p-polohe) a alfa-fenyletylová skupina (Jesse P. Greenstein a Milton Winitz, Chemistry of Amino Acids, New York 1961, John Wiley and Sons, Inc. zv. 2, prípadne str. 883 a ďalej tiež The Peptides, zv. 2, vydavateľ E. Gross a J. Meienhofer, Academic Press, New York). Tieto chrániace skupiny prichádzajú do úvahy v zásade tiež na ochranu ďalších funkčných vedľajších skupín (hydroxylové skupiny, aminoskupiny) príslušných aminokyselín.
Obsiahnuté hydroxylové skupiny (serín, treonin) sa chránia výhodne benzylovými alebo podobnými skupinami. Ďalšie aminoskupiny, ktoré nie sú v alfa-polohe, (napríklad aminoskupiny v polohe omega, guanidínová skupina arginínu) sa chránia výhodne ortogonálne.
Reakcia k spojeniu aminokyselín nastáva v inertnom roztokovom alebo suspenznom prostredí, obvyklom pre tieto reakcie (napríklad v dichlórmetáne), pričom sa môže na zlepšenie rozpustnosti pridávať dimetylformamid.
Na začlenenie skupiny R4-CO reakciou amino-skupiny lyzínu s karboxylovou kyselinou, prichádzajú do úvahy v zásade rovnaké postupy, ako sú opísané skôr na spojovanie aminokyselín. Osobitne výhodná je však kondenzácia pri použití karbodiimidu, napríklad l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidu a 1-hydroxybenzotriazolu.
Ako nerozpustný nosičový materiál prichádzajú do úvahy nerozpustné polyméry napríklad polystyrolová živica v tvare periel, napúčajúca v organických rozpúšťadlách (napríklad kopolymér polystyrolu a 1 % divinylbenzolu). Vytváranie chráneného dekapeptidamidu na metylbenzhydrylamidovej živici (živici MBHA, teda polystyrolovej živici opatrenej metylbenzhydrylovými skupinami), ktorá dáva požadovanú C-koncovú amidovú skupinu peptidu po HF
-odštiepení od nosiča, môže byť vykonané podľa nasledujúceho postupového diagramu:
Postupový diagram Protokol syntézy peptidu
Stupeň Funkcia Rozpúéťadlo/reakčné činidlo v/v čas
1 pranie metanol 2x2 min
2 pranie DCM 3x3 min
3 odštiepenie DCM/TFA (ltl) 1x30 min
4 pranie izopropanol 2x2 min
5 pranie metanol 2x2 min
6 pranie DCH 2X3 min
7 neutralizácia dcm/dipea (9:1) 3x5 min
B pranie metanol 2X2 min
9 pranie DCM 3X3 min
10 STOP prísada Boc-As v DCM+DIC+HOBt
11 kopulácia ] pribi.90 min
12 pranie metanol 3X2 nm
13 pranie DCM 3x3 min
Aminokyseliny chránené N-alfa-Boc sa kopulujú v trojnásobnom molámom prebytku v prítomnosti diizopropylkarbodiimidu (DIC) a 1 -hydroxybenzotriazolu (HOBt) v systéme dichlórmetán/dimetylformamid v priebehu 90 minút a chrániaca skupina Boe sa odštiepi polhodinovým pôsobením kyseliny trifluóroctovej (TFA) v dichlórmetáne. Na kontrolu úplného prebehnutia reakcie môže slúžiť chlóranilový test podľa Christensena a ninhydrínový test podľa Keisera. Zvyšky voľnej aminoskupiny sa blokujú acetyláciou v päťnásobnom prebytku acetylimidazolu v dichlórmetáne.
Následnosť reakčných operácií vytvárania peptidu na živici vychádza z postupového diagramu. Na odštiepenie peptidov, viazaných na živicu, sa vždy konečný produkt syntézy v pevnom stave vysuší oxidom fosforečným vo vákuu a spracováva sa v 500-násobnom prebytku systému fluorovodík/anizol 10 : 1 (objemovo) 60 minút pri teplote 0 °C. Po oddestilovaní fluorovodíka a anizolu sa vyzrážajú peptidové amidy vymiešaním s bezvodým etyléterom v podobe bielych pevných látok, oddelenie od vyzrážaného polymémeho nosiča prebieha premývaním 50 % vodnou kyselinou octovou. Šetrným zahustením roztokov okyslených kyselinou octovou vo vákuu môžu byť získané príslušné peptidy v podobe vysoko viskóznych olejov, ktoré sa v chlade premenia na biele pevné látky prísadou absolútneho éteru.
Ďalšie čistenie prebieha rutinnými spôsobmi preparatívnej vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie (HPLC).
Prevod peptidov na ich adičné soli s kyselinami sa môže vykonávať ich reakciou s kyselinami známym spôsobom. Naopak je možné získať voľné peptidy reakciou ich solí s adičnými kyselinami so zásadami. Peptidembonáty je možné získať reakciou solí kyseliny trifluóroctovej (solí TFA) peptidov s voľnou kyselinou embónovou. Na tento účel sa necháva reagovať peptidová soľ TFA vo vodnom roztoku s roztokom dinátriumembonátu v dipolámom aprotickom prostredí, výhodne v dimetylacetamide a vytvorená svetložltá zrazenina sa izoluje.
Vynález objasňujú, ale neobmedzujú nasledujúce príklady praktického rozpracovania. Percentá a diely sú mie nené hmotnostne, pokiaľ to nie je uvedené inak. Vynález objasňujú tiež pripojené obrázky.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Na obr. 1 je väzba skúšaných zlúčenín na ľudský receptor vo vzťahu ku koncentrácii kompetitora, na osi x je koncentrácia kompetitora, na osi y percento špecifickej väzby, krivka s kolieskami platí pre zlúčeninu podľa príkladu 56, so štvorčekmi pre cetrorclix (BS 75), s trojuholníčkami pre zlúčeninu podľa príkladu 1 a s kosoštvorčekmi pre zlúčeninu podľa príkladu.
Na obr. 2 je brzdenie tvorby IP3 v závislosti od koncentrácie skúšanej látky podľa príkladu 2.
Na obr. 3 je brzdenie tvorby 1P3 závislosti od koncentrácie skúšanej látky podľa príkladu 56.
Na obr. 4 je závislosť potlačenia testosterónu v ng/ml skúšanou zlúčeninou podľa príkladu 1 v množstve 1,5 mg/kg od času v hodinách, na osi x je čas v hodinách, na osi y testosterón v ng/ml, krivka s prázdnymi kolieskami piati pre zviera 1, s prázdnymi štvorčekmi pre zviera 2, s čiarkami pre zviera 3, s plnými kolieskami pre zviera 4 a s plnými štvorčekmi pre zviera 5.
Na obr. 5 je závislosť potlačenia testosterónu v ng/ml skúšanou zlúčeninou podľa príkladu 2 v množstve 1,5 mg/kg od času v hodinách, na osi x je čas v hodinách, na osi y testosterón v ng/ml, krivka s prázdnymi kolieskami platí pre zviera 1, s prázdnymi štvorčekmi pre zviera 2, s čiarkami pre zviera 3, s plnými kolieskami pre zviera 4 a s plnými štvorčekmi pre zviera 5.
Na obr. 6 je závislosť potlačenia testosterónu v ng/ml skúšanou zlúčeninou podľa príkladu 56 v množstve 10 mg/kg od času v hodinách, na osi x je čas v hodinách, na osi y testosterón v ng/ml, krivka s prázdnymi kolieskami platí pre zviera 1, s prázdnymi štvorčekmi pre zviera 2, s čiarkami pre zviera 3, s plnými kolieskami pre zviera 4 a s plnými štvorčekmi pre zviera 5.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Ac-D-Nal(2)-D(pCl)Phe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-[epsilon-N'-(imidazolidin-2-ón-4-yl)formyl]-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Syntéza prebieha podľa postupového diagramu na živici 5 g mBHA (hustota 1,08 mmol/g). Lyzin sa kopuluje ako Fmoc-D-Lys-(Boc)-OH a po odštiepení Boc-skupiny sa acyluje v bočnom reťazci imidazolidin-2-ón-4-karboxylovou kyselinou v 3-násobnom prebytku. Po odštiepení chrániacej skupiny Fmoc systémom 20 % piperidín/DMF sa spoločný postupový diagram predĺži k N-zakončeniu. Po odštiepení polymémeho nosiča sa vyzráža 5,2 g surového peptidu, ktorý sa čistí štandardným spôsobom preparatívnej HPLC. Po nadväzujúcom vysušení vymrazením sa získa 2,1 g HPLC-jednotného produktu sumárneho vzorca C74H97N|8O15C1 so správnym FAB-MS 1514 (M+H+) (vyrátané 1512,7) a zodpovedajúceho spektra 'H-NMR.
'H-NMR (500 MHz, DMSO-d6, delta v ppm):
8,56, m, 2H, arom.H; 8,08, m, IH, arom.H; 7,81, m, IH, arom H; 7,73, m, 2H, arom.H; 7,66, m, IH, arom.H; 7,60, s, IH, arom.H; 7,44, m, 2H, arom.H; 7,30, d, IH, arom.H; 7,25 a 7,18, 2d,2 x 2H, arom.H p-Cl-Phe; 6,97 a 6,60, 2d,2 x 2H, arom.H Tyr; 9,2-6,3 početné signály, amid-NH; 4,8
-4,0 početné m, C-alfa-H a alifat.H; 2,1-1,1 početné m, zvyšné alifat.H; 1,70, s, 2H, acetyl; 1,22, d, 3H, Cbeta H Ala; 0,85; dd; 6H; Cdelta-H Leu.
Príklad 2
Ac-D-Nal(2)-D(pCl)Phe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-[epsilon-N'-4-(4-amidinofenyl)amino-l,4-dioxo-butyl]-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
Nechá sa reagovať 0,7 mmol (1,03 g) dekapetidu Ac-DNal-D-(pCl)Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2 s 1,0 mmol (0,27 g) (4-amidinofenyl)amino-4-oxo-maslovej kyseliny v prítomnosti 1,0 mmol (0,16 g) l-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimidu a 1,0 mmol (0,16 g) 1-hydroxybenzotriazolu v čerstvo destilovanom DMF. Rozpúšťadlo sa po 24 hodinách odstráni vo vákuu, vyzrážaný zvyšok sa rozpustí vo vode a vysuší sa vymrazením. Vyzrážaný surový produkt (1,63 g) sa vyčistí preparativnou reverznou fázovou chromatografiou HPLC. Celkom sa vyzráža 0,61 g jednotného produktu vyčisteného HPLC sumárneho vzorca CS1H104N19O15CI s korektným FAB MS: 1618,7 (M+H+) (vyrátané 1617,7) a so zodpovedajúcim spektrom 'H-NMR 'H-NMR (500 MHz,DMSO-d6delta v ppm):
10,4, s, IH a 9,15 s, 2H a 8,8, s, IH, NH' 4-amidinoanilínu; 8,60, m, 2H, arom.H; 8,20, m, IH, arom.H; 7,80, m, IH, arom.H; 7,73, m, arom.H; 7,61, s, IH, arom.H; 7,44, m, 2H, arom.H; 7,30, d, IH, arom.H; 7,25 a 7,20, 2d, 4H, arom.H (pCl)-Phe; 7,00 a 6,60, 2d, 4H, arom.H Tyr; 8,3-7,2 početné signály, amid-NH; 4,73-4,2 početné multiplety, C-alfa-H, Ala; 3,78- 2,4 početné multiplety, C-beta H a alifat.H; 1,72, 3, 3H, acetyl; 1,22; d; 3H, C-beta Ala; 0,85, dd, 6H, C-delta Leu.
Príklad 3
Nechá sa reagovať 0,5 g (0,3 mmol) peptidického antagonistu LH-RH podľa príkladu 1, rozpusteného v 50 ml vody reakciou s 0,130 g (0,3 mmol) dinátriovej soli kyseliny embónovej v 2 ml vodného roztoku za získania peptidového embonátu, ktorý sa rýchlo vylúči z roztoku v podobe žltého precipitátu. Získa sa 0,281 g jemne kryštalického žltozeleného prášku s 33 % obsahom kyseliny embónovej.
Príklad 4
Nechá sa reagovať 0,3 g (0,17 mmol) peptidického antagonistu LH-RH podľa príkladu 2, rozpusteného v 5 ml dimetylacetamidus0,195 g (0,45 mmol) dinátriovej soli kyseliny embónovej v 2 ml vodného roztoku za získania peptidového embonátu, ktorý sa vyzráža po pridaní 50 ml vody v podobe žltej zrazeniny. Získa sa 0,330 g jemne kryštalického žltého produktu s 20 % obsahom kyseliny embónovej.
Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) je možné získať podľa nasledujúcich schém 1, 3, 4 a 5, pričom sa systematicky menia významy troch symbolov R1, R3 a R4. Schéma 1 ukazuje výstavbu zlúčeniny podľa príkladu 1:
Schéma 1
NH,
1) benzotriazol-l-yloxy-tris(dinetylaiino} f osf óniunhexafluórfoefát (BOP)
2) N-Mtylnorfolín
3) 2n KaOH
4} CFjCOOH
Všeobecný predpis prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I) podľa schémy 1
Rozpustí sa, prípadne sa suspenduje karboxylová kyselina všeobecného vzorca R4-COOH substituovaná skupinou symbolu R4, ktorá je základom zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a spôsobu podľa schémy 1, ktorá v prípade zásaditého zvyšku R môže existovať ako soľ, napríklad ako hydrochlorid, hydrosulfát alebo acetát, s vylúčením vlhkosti za miešania v nepolámom alebo v dipolámom aprotickom organickom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán, dioxán, metyl-tere.-butyléter, toluén, dimetylformamid, dimetylacetamid, N-metylpyrolidón, dimetylsulfoxid alebo metylénchlorid a nechá sa reagovať za miešania so zásadou slúžiacou na viazanie kyseliny, ako je napríklad diizopropylamín, trietylamín, N-metylmorfolín, dimetylaminopyridín alebo pyridín. Pridá sa zmes Z-(L)-lyzín- amidhydrochloridu v riedidle, pričom ako riedidlo prichádzajú do úvahy rozpúšťadlá použité na rozpustenie karboxylovej kyseliny všeobecného vzorca R4-COOH substituovaná skupinou symbolu R4. Hodnota pH reakčnej zmesi sa nastaví zásadou viažucou kyselinu, napríklad na 6,5 až 9,0, výhodne na 7,0 až 8,5, osobitne na 7,0 až 7,5. Nakoniec sa pridá do miešanej reakčnej zmesi roztok kopulačného reakčného činidla, napríklad benzotriazol-l-yl-oxytris-(dimctylaminojfosfóniumhexafluórfosfátu (BOP), alebo benzotriazol-1 -y loxy-trispyroli-dinofosfóniumhexafluorofosfátu (PyBOP), alebo dicyklohexylkarbodiimidu (DCC) a po krátkom čase sa hodnota pH roztoku nastaví na už uvedený rozsah. Suspenzia sa mieša napríklad 1 až 15 hodín pri teplote 0 až 80 °C, výhodne pri teplote 10 až 50 °C, najmä 20 až 30 °C, odsaje sa, pevná látka sa premyje a filtrát sa zahustí vo vákuu do sucha. Zvyšok sa nechá vykryštalizovať trením s organickým rozpúšťadlom, ako je napríklad toluén, tetrahydrofurán, acetón, metyletylketón, prípadne s izopropylalkoholom, alebo sa vyčistí prekryštalizovaním, destiláciou alebo stĺpcovou alebo rýchlou chromatografiou na silikagéli alebo oxide hlinitom. Ako elučné činidlo sa používa napríklad zmes metylénchloridu, metanolu, amoniaku (25 7o) (v objemovom pomere 85 : 15 : 1) alebo zmes metylénchloridu, metanolu, amoniaku (25 %) v objemovom pomere 80 : 25 : 5.
Syntéza trifluóracetátu
Vyčistená zlúčenina, získaná uvedeným spôsobom, sa rozpustí v protickom alebo aprotickom rozpúšťadle, napríklad v alkohole, ako je metanol, etanol, izopropanol alebo v cyklických éteroch, ako je napríklad tctrahydrofurán alebo dioxán a 2n roztokom hydroxidu sodného sa nastaví hodnota pH na 10 až 11. Vyzrážaná pevná látka sa odsaje, premyje, vysuší sa vo vákuu a v etanolovom roztoku pri teplote 10 až 80 °C, výhodne 20 až 40 °C a nechá sa reagovať s molárnym ekvivalentom alebo s 2- až 4-násobným prebytkom trifluóroctovej kyseliny. Po 24-hodinovom státí roztoku pri teplote 0 až 4 °C vykryštalizuje žiadaný trifluóracetát, ktorý sa odsaje a vo vákuu sa vysuší.
Podľa tohto všeobecného predpisu, ktorý je základom pre schému 1, sa syntetizujú zlúčeniny, ktoré objasňuje príklad 5 a nadväzujúca tabuľka 1.
Príklad 5
Alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[5-[(4-amidino-fenyl)-amino]-5-oxo-pentanoyl]-L-lyzínamidtrifluóracetát
Za miešania a s vylúčením vlhkosti sa v 200 ml dimetyl-formamidu suspenduje 5 g (17,5 mmol) hydrochloridu 5-[[4-(aminoiminometyl)fenyl]amino]-5-oxopentánovej kyseliny a nechá sa reagovať s 3,85 ml (35,0 mmol) Nmetylmorfolínu. Pridá sa zmes 5,53 g (17,5 mmol) Z-(L)lyzínamidhydrochloridu v 100 ml dimetyl-formamidu a hodnota pH sa nastaví N-metylmorfolínom na 7,0 až 7,5. Nakoniec sa pridá roztok 9,73 g (21,9 mmol) benzotriazol-l-yloxytris-(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfátu (BOP) a po 10 až 15 minútach sa opäť nastaví hodnota pH na 7,0 až 7,5. Žlto zafarbená suspenzia sa mieša 3 až 4 hodiny za stáleho sledovania hodnoty pH, ktorá má byť 7,0 až 7,5, pri teplote miestnosti, bezfarebná zrazenia sa odsaje, premyje sa dvakrát dimetylformamidom a žlto zafarbený filtrát sa odparí do sucha. Olejnatý zvyšok sa digeruje celkom 5 x 40 ml metylénketónu tak, že sa po každom z piatich spracovaní rozpúšťadlom metylketónová fáza odleje a odloží. Zvyšný surový produkt v kryštalickom stave sa odsaje, premyje sa 30 ml metylketónu a vysuší sa vo vákuu pri teplote miestnosti.
Pevná látka sa potom rozpustí v približne 50 ml etanolu a hodnota pH sa nastaví lúhom sodným na 10 až 11. Vyzrážaná zásada sa odsaje, premyje sa vodou a etanolom a vysuší sa vo vákuu pri teplote 35 °C. Výťažok: 5,5 g (62 % teórie).
Trifluóracetát:
Necháva sa reagovať 5,5 g zásady v etanolovej suspenzii s päťnásobným množstvom trifluóroctovej kyseliny pri teplote 60 °C. Roztok sa udržuje na teplote 4 °C cez noc, získaný trifluóracetát sa odsaje a vysuší sa vo vákuu pri teplote 35 °C. Výťažok: 5,9 g (87,7 % teórie). Teplota topenia je 185 °C.
Analýza: vyrátané C 53,84 H 5,65 N 13,45 nájdené C 54,11 H 5,74 N 13,33
Opísaným spôsobom sa pripravia ďalšie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) uvedené v tabuľke 1, pričom n je 4.
I (CH2)n
NH
I
CO-R4 (všeobecný vsocec I)
Tabuľka 1
Alfa, epsilon-N-substituované deriváty L-lyzínamidu podľa schémy prípravy 1 a všeobecného vzorca (1) (vo všetkých príkladoch je n=4)
Príklad R*-CO r7r3 R4
5 Trifljcracetít a,, <3 H/H
6 o
7 O CH, JL '’CH, HK-C y--f
a O
9
10
11
12 --Λ-Ο
13 Oazl=8enzytaxy
14 O ^CH, 'V—OCH, OCM,
15 16 O. ň H/H
17 Ä ^Α-φ
18 ™ n
19 “ Y
20
21 - Y
22 «.-Q “ Y
23 24 25 Ou, H H/H “‘Á-O-O
26
27
26 P cocet
29
30 i jQo
31
32
33 α-ηοφ
34 “-=A~Q-Cji
Teploty topenia zlúčenín podľa uvedeného príkladu sú uvedené v tabuľke 2
Tabuľka 2
Teploty topenia zlúčenín podľa príkladov 5 až 34
Pr. t.top. [*C] Pr. t.top. [’C] Pr. t.top. [*C]
5 185 15 225 25 sirup, zvyšok
6 185 16 211-214 26 205 - 210
7 216-220 17 183-186 27 172-177
8 225 18 (olej) 28 227-230
9 217-220 19 sirup, zvyšok 29 225-229
10 218-222 20 (olej) 30 233-235
11 208-212 21 (olej) 31 215-218
12 (olej) 22 (olej) 32 155
13 232-236 23 sirup, zvyšok 33 (olej)
14 194-198 24 (olej) 34 (olej
Východiskové stupne zlúčenín všeobecného vzorca (I), pripravených podľa schémy 1, vyplývajúce z tabuľky 1.
Lyzínamid Z-(L), použitý ako východisková zlúčenina pre konečné stupne prípravy podľa príkladov 5 až 34, je obchodne dostupný. Substituované „aryl- prípadne „heteroarylaminooxoalkánové kyseliny, použité ako edukty podľa schémy 1, je možné pripraviť obdobne ako podľa schémy 2 spôsobmi známymi z literatúry (P. R. Boy, J. Organ. Chem. 58, str. 7948,1993).
SchéM 2 o
o
A’Atyf ρ»2·ί A=Ar)rt,He(eroaiyt
Heteroaryl
Aromatické, prípadne heteroaromatické amíny A-NH2 prichádzajúce do úvahy pri spôsobe podľa schémy 2, sú obchodne dostupné; aminoimidazol[l,2-a]pyridín, ktorý je základom pre zlúčeninu podľa príkladu 28, je možné pri praviť spôsobmi známymi z literatúry (R. Westwood, J. Med. Chen. 31, str. 1098 (1988)).
Uvedené „aryl- prípadne „heteroarylaminooxoalkánové kyseliny, ako východiskové látky, je ďalej možné pripraviť tak, že sa necháva reagovať alkánmonometylester kyseliny dikarboxylovej, napríklad monometylester kyseliny suberovej a monometylester kyseliny azelaínovej ako východisková látka s aromatickým alebo s heteroaromatickým amínom aminolýzovou reakciou vo vriacom alkohole, napríklad vo vriacom etanole alebo butanole, alebo prípadne v aromatickom rozpúšťadle, ako je toluén alebo xylén pri teplote varu, prípadne v autokláve pri teplote varu rozpúšťadla pri použití tlaku 5 MPa, reakčný roztok sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa vyčisti kryštalizáciou z metanolu alebo z etanolu, alebo pomocou stĺpcovej chromatografie. Ako elučné činidlo slúži napríklad zmes metylénchloridu, metanolu, amoniaku (25 %) v objemovom pomere 85 : 15 : 1, alebo zmes metylénchloridu, metanolu, amoniaku (25 %) v objemovom pomere 80 : 25 : 5.
Alternatívne rozpracovanie spôsobu prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I), kde znamená R1 benzyloxykarbonylovú skupinu a R2 a R3 atóm vodíka, je nasledujúce:
1. amiduje sa skupina alfa - karboxylovej kyseliny,
2. chráni sa epsilon-amínová skupina Z-skupinou,
3. alfa-aminoskupina sa chráni Boc-skupinou, takže vzniká selektivita proti neskoršiemu odštiepeniu skupín chrániacich aminoskupinu,
4. odštiepi sa Z-skupina z epsilon-aminoskupiny,
5. na epsilon-aminoskupinu sa zavedie žiadaná skupina R CO,
6. odštiepi sa Boc-skupina z alfa-aminoskupiny,
7. do alfa-aminoskupiny sa zavedie Z-skupina.
Získať je možné ďalšie zlúčeniny všeobecného vzorca (I) podľa nasledujúcej schémy 3, objasnenej na spôsobe prípravy zlúčeniny podľa príkladu 35:
nnto/khMU tufío/í
Všeobecný spôsob prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I) podľa schémy 3
Stupeň 1
SK 282760 Β6
Do aprotického alebo nepolámeho organického rozpúšťadla, ako je napríklad tetrahydrofurán, dimetylsulfoxid, dimetylformamid, acetonitril, etylacetát, dimetylacetamid, N-metyl-pyrolidón, dioxán, toluén, éter, metylénchlorid alebo chloroform sa pridá pri teplote -30 až 30 °C, výhodne 20 až 20 °C a osobitne -15 až 5 °C Z-Lys(BOC)-OH a zásada, napríklad tri-etylamín, diizopropylamín, N-metylmorfolín, N-etylpiperidín a chlorid alifatickej alebo aromatickej kyseliny karboxylovej, napríklad acetylchlorid, izobutyroyíchlorid, izovaleroylchlorid, pivaloylchlorid, benzoylchlorid alebo 4-metoxybenzoylchlo-rid. Po určitom čase, napríklad po 30 minútach až 3 hodinách, sa pridá za intenzívneho miešania roztok, pripadne suspenzia amínu ochladená na teplotu -10 °C v dipolámom aprotickom alebo nepolárnom organickom rozpúšťadle, ako je napríklad tetrahydrofurán, dimetylsulfoxid, dimetylformamid, acetonitril, etylacetát, dimetylacetamid, N-metylpyrolidón, dioxán, toluén, éter, metylénchlorid alebo chloroform. Suspenzia sa mieša 1 až 2 hodiny pri teplote -30 až 30 °C, výhodne -20 až 20 °C, osobitne -15 až 5 °C. Po ukončení reakcie sa zásada v podobe hydrochloridu odsaje a rozpúšťadlom sa zahustí. Olejovitý zvyšok sa zmieša s aprotickým alebo s nepolámym organickým rozpúšťadlo, ako je napríklad éter, diizopropyléter, metyl-tere.-butyléter, petroléter, toluén, xylén, pentán, hexán. Roztok sa mieša po určitý čas, napríklad 30 minút až 3 hodiny až do vyzrážania bieleho prášku. Zrazenina sa odsaje a usuší.
Stupeň 2
Z-Lys(BOC)-amid, získaný v stupni 1, sa pri teplote 20 až 30 °C, výhodne -20 až 20 °C a osobitne -15 až 5 °C rozpustí v trifluóroctovej kyseline a mieša sa počas 15 minút až 1 hodiny. Prebytočná kyselina trifluóroctová sa odparí a olejovitý zvyšok sa zmieša s dipolámym aprotickým alebo s nepolámym organickým rozpúšťadlom, ako je napríklad dimetylformamid, metylénchlorid, tetrahydrofurán, acetonitril, N-metylpyrolidón a etylacetát. Potom sa pridá žiadaná kyselina, zásada, ako napríklad diizopropylamín, N-metylmorfolín a vhodné kopulačné činidlo, ako napríklad BOP, PyBOP, DCC v dipolámom aprotickom alebo nepolámom organickom rozpúšťadle, ako je napríklad dimetylformamid, metyIcnchlorid, tetrahydrofurán, acetonitril, N-metylpyrolidón a etylacetát. Reakcia sa vykonáva pri teplote-10 až 100 °C, výhodne 0 až 80 °C a osobitne 10 až 35 °C. Po 1- až 5-hodinovom reakčnom čase a po 24-hodinovom státí pri teplote miestnosti sa reakčná zmes zahustí. Zvyšok sa vyzráža organickým rozpúšťadlom, ako je napríklad izopropanol, metylénchlorid alebo éter. Surový produkt sa čistí chromatografiou na silikagéli.
Všeobecným spôsobom podľa stupňa 1 a 2 sa na základe spôsobu podľa schémy 3 syntetizujú zlúčeniny, objasnené v nasledujúcej tabuľke 3, kde n znamená 4.
R1 -CO-NH-CH-CO-N
NH I C0-R4 (všeobecný vzorec I)
Tabuľka 3
Alfa,epsilon N-substituované deriváty L-lyzínamidu podľa schémy 3 a všeobecného vzorca (I) (n znamená vždy 4)
Príklad R1-CO R2 R3 R*
35 /=° o d H CH’ NH,
36 CHO
37 •'Ό
38 o•Φ _____CÍLX°
39 o H TV t CH, NH,
40 O 1’vJL J H| CH,
41 CH,. Φ NH,
42 CH’O
43 CK,YTi V4
44 CH,. d
45 CH,^
46 CH. I * ✓S. -N. CK< CH,
47 V
48 O/V NH,
49 OV H 0 H ” <=Ηίχ \ r Ó ° NH,
50 CH,^ Ό
51 Ύι,
52 'TO
53 CH,
54 T NH,
55 o
Príklad 35
N-[alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[4-[(4amidinofenyl)-amino] -4-oxobutanoyl]-L-Iyzín-N -(3 pyridyl-metyl)]amid
Stupeň 1
N-[alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[terc.-butyloXY-karbonyl]-L-lvzín-N-(3-pyridylmeh'l)]-amid
Do 60 ml tetrahydrofuránu sa pri teplote -15 °C pridajú 4 g (10 mmol) obchodne dostupného Z-Lys(Boc)-OH, 1 g (10 mmol) trietylamínu a 1,26 g (10 mmol) pivaloylchloridu. Po 30 minútach sa za intenzívneho miešania pridá na 10 °C predchladený roztok 1,08 g (10 mmol) 3-(aminometyl)pyridínu v 20 ml tetrahydrofuránu. Suspenzia sa potom mieša 1 až 2 hodiny pri teplote -10 °C. Za nízkej teploty sa trietylamínhydrochlorid odsaje a potom sa odparí tetrahydrofurán. Olejovitý zvyšok sa zmieša so 100 ml dietyléteru. Roztok sa ďalej mieša až do vyzrážania bieleho prášku. Zrazenina sa odsaje a vysuší. Výťažok je 4 g (85 % teórie).
Stupeň 2
N-[alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[4-[(4-amidinofenyl)-amino]-4-oxobutanoyl]-L-lyzín-N-(3-pyridylmetyl)]amid
Pri teplote 0 °C sa v 20 ml trifluóroctovej kyseliny (TFA) rozpustí 2 g (4,25 mmol) N-[alfa-N-[benzyloxykarbonyl3-epsilon-N-[terc.-butyloxykarbonyl]-L-lyzín-N-(3-pyridylmetyl)]amidu a 20 minút sa mieša. Prebytočná trifluóroctová kyselina sa odparí a olejovitý zvyšok sa zmieša s 10 ml dimetylformamidu. Pridá sa 4,6 ml (42,5 mmoljN-metylmorfolínu, 1,15 g (4,25 mmol) hydrochloridu 4[[4-aminoiminome-tyl)fenyl]amino]-4-oxomaslovej kyseliny, 235 g (5,3 mmol) BOP a 20 ml dimetylformamidu. Reakčná zmes sa mieša 24 hodín pri teplote miestnosti. Dimetylformamid sa odparí, zvyšok sa digeruje dvakrát so 40 ml vody a potom sa odsaje a vysuší. Surový produkt sa vyčistí chromatografiou na silikagéli pri použití elučného činidla 89b (70 % HCClj, 40 % MeOH, 10 % CH3COO’Na+ v 1 mole na liter NH4OH 25%). Výťažok je 340 mg (14 % teórie).
Obdobne ako podľa príkladu 35 sa získajú zlúčeniny podľa príkladu 36 až 55.
Tabuľka 4
Teploty topenia zlúčenín podlá príkladov 35 až 55
Pr. t.top. [’C] Pr. t.top. ['C] Pr. t.top. [‘C]
35 190-198 42 190 49 189
36 218-220 43 198 50 197
37 209 44 213 51
38 195 45 52
39 189-191 46 175 53
40 215-220 47 196 54 194
41 183 48 217 55
12 (olej) 22 (olej) 32 155
13 232-236 23 sirup, zvyšok 33 (olej)
14 194-198 24 (olej) 34 (olej
Podľa nasledujúcej schémy 4 a 5 sa pripravia ďalšie zlúčeniny všeobecného vzorca (1)
Schéaa 4: Reakcia a karboxyLcvými kyselina»!
Schéma 5: Reakcia s eetemi chlóraravčej kyseliny
1. Acylácia karboxylovými kyselinami alebo estermi chlórmravčej kyseliny podľa schémy 4 a 5
Na výsledný amid sa nechá pôsobiť H-Lys (Boc)-NH2 pri teplote miestnosti v dipolámom rozpúšťadle (dimetylformamid, dimetylsulfoxid) v prítomnosti zásady (DIPEA, NMM) a kopulačného reakčného činidla (DCC, DIC, EDCI) s karboxylovou kyselinou. Po odstránení rozpúšťadla sa zvyšok zmieša s vodou a ťažko rozpustný surový produkt sa odsaje. Produkt sa môže čistiť kryštalizáciou z alkoholu (napríklad z metanolu, etanolu alebo izopropanolu) alebo esteru (napríklad etylacetátu), alebo ketónu (napríklad metyletylketónu).
Reakcia H-Lys(Boc)-NH2 s chloridmi karboxylovej kyseliny vedie vo vodnom alkalickom roztoku (podmienky Schotten-Baumann) s 90 až 95 % výťažkami k žiadaným derivátom. Surový produkt sa izoluje odsatím a vyčistí sa prekryštalizovaním z alkoholu (metanol/etanol), prípadne z etylacetátu alebo z metyletylketónu.
2. Odštiepenie chrániacej Boc-skupiny TFA
Odštiepenie chrániacej Boc-skupiny pri teplote miestnosti v zmesi dichlórmetánu a trifluóroctovej kyseliny (2 : 1) je po približne 60 minútach kvantitatívne. Izolovaný surový produkt R‘-Lys-NH2 rýchlo ďalej reaguje bez ďalšieho čistenia.
3. Acylácia hydrochloridu 4-((4-(aminoiminome-tyl)fenyl)amino)-4-oxomaslovej kyseliny
Reakcia s ďalšou karboxylovou kyselinou (R4) sa vykonáva v dipolámych aprotických rozpúšťadlách (dimetylformamid, dimetylsulfoxid) v prítomnosti zásady (NMM, DIPEA) s kopulačnými reakčnými činidlami, ako EDCI, Bop alebo PyBop. Po odstránení rozpúšťadla sa za pridania vody produkt vyzráža. Čistenie sa vykonáva preparatívnou HPLC na čistom stĺpci RPlg - pri použití zmesi vody, acetonitrilu a trifluóroctovej kyseliny ako elučného činidla. Produkt sa vyzráža ako soľ TFA.
Podľa tohto všeobecného predpisu, ktorého základom je schéma 4 a 5, sa syntetizujú zlúčeniny, ktoré objasňuje príklad 56 a nadväzujúca tabuľka 5.
Príklad 56
Do 120 ml vysušeného, odplyneného N,N-dimetylformamidu (DMF) sa pridá pri teplote miestnosti 32 mmol Z-lyzínamidhydrochloridu a 32 mmol hydrochloridu 4-((4-(aminometyl)fenyl)-amino-4-oxomaslovej kyseliny. Edukty sa za miešania rýchlo rozpustia; po pridaní 104 mmol diizopropyletylamidu a 40 mmol BOP sa zmes mieša 16 hodín pri teplote miestnosti.
Na rotačnej odparke sa odtiahne rozpúšťadlo a prebytočná DIPEA pri teplote kúpeľa 50 až 55 °C a za tlaku 1 MPa. Olejovitý zvyšok sa zmieša s 250 ml vody, homogenizuje sa v ultrazvukovom kúpeli a ochladí sa. Vyzrážaný konečný produkt sa odsaje a v nuči sa premyje vodou.
Po vysušení chloridom vápenatým vo vákuu sa získa približne 16 g béžového prášku s čistotou približne 90 % (HPLC) v podobe hydrochloridovej soli.
Na prípravu zodpovedajúceho trifluóracetátu sa produkt suspenduje v 100 ml vody a zmieša sa s 32 mmol (2,45 ml) kyseliny trifluóroctovej (99 %). Na odstránenie prebytočnej kyseliny sa zmes evakuuje na rotačnej odparke a potom sa vodná suspenzia lyofilizuje. Po prekiyštalizovaní z alkoholu (EtOH/MeOH) môže byt získaný produkt kvôli lepšej rozpustnosti opäť lyofilizovaný. Výťažok je 5,26 g, teplota topenia210 až 213 °C.
’H-NMR(500 MHz,DMSO-d6, delta v ppm):
10,47, s, 1H anilid, 9,14 a 8,82 s, NH amidín, 7,82 m, 1H, Lys-epsilon-NH, 7,79 a 7,46, 2s, arom.H, 7,27 a 6,93 2s, 2H, CONH2, 7,20 d, 1H, uretán NH, 5,0, s, 2H, benzyl.H, 3,89, m, 1H, Calfa-H, 3,0 a 2,58 a 2,40, 3m, celkom 6H, alifat.H, 1,60-1,20, 4m, celkom 6H, zvyšok alifat. H r Z2 r*-co-nh-ch-co-n
NH
I CO-R4 ___________________(véeobacný vzorec I)
Tabuľka 5
Alfa,epsilon-N-substituované deriváty L-lyzínamidu podľa schémy 4 a 5 a všeobecného vzorca (I) (n znamená vždy 4)
R’ - CO r’/r’ R*
56 H/H CH2 \t~/ NHj
57 L jl o
58 ©
59 OOM
60 H/H ch2 \_—t/ KIH,
61
62
63
64 O
65
66 CJÄ
67
68 H/H CH2 NH,
69 A Γ
70
71
72 -y—o—o
73 Cv
74
75
76
77 o o H/H O /CH2—X Z—N NH CHj \^/ Yjh,
76
79
BO CL
81 -----------
82
Tabuľka 6
Teploty topenia zlúčenín podľa príkladov 56 až 82
Pr. t.top, pC] Pr. t.top. [*CJ Pr. |t.top. pC]
56 210-213 65 218-222 74 191-193
57 220-223 66 216-219 75 186-180
56 213-215 67 235-238 76 220-222
59 223-226 68 až 218 77 210-215
60 až 233 69 205-208 78 až 223
61 až 237 70 168-170 79 až 226
62 až 221 71 197-202 80 194-197
63 až 220 72 221-226 81 215-222
64 230-236 73 225-228 82 219-222
Poznámka: Údaj „až naznačuje, že substancie po vysušení vymrazením tvoria amorfnú penu so zodpovedajúcimi fyzikálnymi vlastnosťami. Teplota topenia prísne vzaté neexistuje, skôr pomalé spekanie až do stekutenia.
Soli zlúčenín všeobecného vzorca (I)
Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byt vo forme adičnej soli s kyselinou, napríklad ako soli minerálnych kyselín, ako napríklad kyseliny chlorovodíkovej, sírovej, fosforečnej, soli organických kyselín, ako napríklad kyseliny octovej, trifluóroctovej, mliečnej, malónovej, maleínovej, filmárovej, glukónovej, glukurónovej, citrónovej, embónovej, metánsulfónovej, hydroxyetánsulfónovej, pyrohroznovej a jantárovej.
Tak zlúčeniny všeobecného vzorca (I), ako aj ich soli sú biologicky aktívne. Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) sa ll môžu podávať vo voľnej forme alebo ako soli s fyziologicky vhodnými kyselinami. Aplikácia môže byť perorálna, parenterálna, intravenózna, transdermálna alebo inhalačná.
Vynález sa ďalej týka farmaceutických prostriedkov s obsahom aspoň jednej zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej soli s fyziologicky vhodnými anorganickými alebo organickými kyselinami a prípadne s farmaceutický použiteľnými nosičmi a/alebo riedidlami, prípadne s pomocnými látkami.
Príklad 83
Väzbové afinity cetrorelixu, príklad 1, príklad 2, príklad 5, príklad 35 a príklad 56 na ľudskom receptore LH-RH (Cetrorelix: Ac-D-Na(2)-D-p-CI-Phe-D-Pal(3)-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2)
Spôsob stanovenia väzbovej afinity (disociačnej konštanty Kd):
Väzbová afinita sa určuje kompetične väzbovým testom („displacement binding experiment, Becker a kol. Eur. J. Biochem. 231, str. 535 až 543, 1995). Ako rádioaktívne značený ligand sa používa [l25J] Cetrorelix (špecifická aktivita 5 - 10 x 10 dpm/pmol; rozpustený v objemovo 20 % acetonitrilu, 0,2 % hm./obj. albumínu, 0,1 % hm./obj. TFA, objemovo približne 80 % vody). Väzbová schopnosť jódovaného peptidu je 60 až 85 %. Ako neznačené testovacie zlúčeniny sa použijú zlúčenina podľa príkladu 1, príkladu 2 a príkladu 56 v roztoku. Látky sa nasadzujú v koncentráciách 0,01 nM až 1000 nM (Cetrorelix, príklad 1, príklad 2), prípadne 0,01 μΜ až 10 μΜ (príklad 5, príklad 35, príklad 56).
Bunky jednobunkového klonu L3, 5/78 vytesňujúceho ľudský receptor LH-RH, použité na väzbový test, sa oddelia pomocou PBS/EDTA (PBS bez Ca2+/Mg2+/lmM EDTA) od nekonfluentnej obrastenej šupy bunkovej kultúry, určí sa počet buniek v zodpovedajúcej hustote buniek, resuspendujú sa v inkubačnom médiu (modifikovanom Eagle Médium Dulbecco s 4,5 g/1 glukózy, lOmM Hepes, pH 7,5, 0,5 % hm./obj. BSA, lg/1 Bacitracinu, 0,1 g/1 SBT1, 0,1 % hm./obj. NaN3) Do špeciálnych 400 μΐ reakčných nádob (Fa. Renner typ Beckman) sa predloží 200 μΐ zmesi silikón/parafinový olej (84/16 obj .%) a potom sa pipetuje 50 μΐ bunkovej suspenzie (2,5 x 105 buniek). K bunkovej suspenzii na vrstve silikón/parafinový olej sa potom okamžite pridá 50 pl väzbového média s [125J] Cetrorelix a testované zlúčeniny v zodpovedajúcej koncentrácii. Teraz sa za otáčania vo vykurovanej skrini pri teplote 35 “C 60 minút inkubuje. Po tejto operácii nasleduje odstredenie v Heraeus Biofuge 15 v rotore HTA 13,8 2 minúty pri 9000 otáčkach za minútu/pri teplote miestnosti). Vplyvom vrstvy silikón/parafinový olej pritom bunky peletujú a tak sa od väzbového média oddelia. Po odstredení sa reakčné nádoby rýchlo zmrazia v tekutom dusíku a špička reakčnej nádoby (bunková peleta) sa kliešťami odstrihne a špička s bunkovými peletami (viazaný ligand [125J] Cetrorelix) a tiež prebytok bunkovej pelety (viazaný ligand [l25J] Cetrorelix) aj prebytok bunkovej pelety (neviazaný, voľný ligand [l25J] Cetrorelix) sa prevedú do počítacej rúrky. Na stanovenie nešpecifickej väzby (Bo) sa kompetitor nepridáva. Na stanovenie nešpecifickej väzby sa pridá 1 μΜ neznačeného Cetrorelixu ku konkurencii. Nešpecifická väzba sa rovná alebo je menšia ako 10 % celkovo vytvorenej Bo a je teda nízka. Na kvantifikáciu slúži gama-počítač, vyhodnotenie s programom EBDA/Ligand V3.0 (McPherson, J. Pharmacol. Methods 14, str. 213 až 228, 1985). Vynesenie do grafu účinku dávky umožňuje posúdenie koncentrácie IC30 (koncentrácia, ktorá spôsobí 50 % inhibíciu reakcie na re ceptore) a program EBDA/Ligand z toho vyráta disociačnú konštantu Kd [nM],
Výsledok:
Z konkurenčných kriviek (pozri obr. 1) je zrejmé, že všetky testované zlúčeniny s rádioaktívne značeným ligandom [l25J] Cetrorelix) konkurujú väzbou na ľudský receptor LH-RH. Vynesená je vždy väzba (v % celkovej väzby Bo) voči koncentrácii kompetitora. Pre zlúčeniny vyznačené na obr. 1 bolo možné vypočítať nasledujúce väzbové afinity vyrátané ako disociačná konštanta Kd[nM:]: Cetrorelix (SB-75): 0,214 nM, príklad 1: 0,305 nM, príklad 2: 0,104 nM, príklad 5: 108 nM, príklad 35: 300 nM a príklad 56:1082 nM. Väzbové afinity ako stredná hodnota rôznych stanovení sú uvedené v tabuľke 7.
Príklad 84
Antagonistické pôsobenie zlúčeniny podľa príkladu 2 a podľa príkladu 56 vo funkčnej skúške na ľudskom receptorte LH-RH
Spôsob stanovenia IP3(D-myo-l,3,5-trifosfát)u: Subkonfluentná kultúra ľudského recepotora LH-RH exprimovaného bunkového klonu /L 3,5/78) sa premyje raz PBS, bunky sa uvoľnia PBS/EDTA a bunková suspenzia sa peletuje. Bunky sa resuspendujú v inkubačnom médiu (modifikované eagle médium Dulbeco s 4,5 g/1 glukózy, 10 mM Hepes, pH 7,5, 0,5 % hm./obj. BSA, 5 mM LÍCI, lg/1 bacitracínu, 0,1 g/1 SBTI), rozdelia sa na podiely v 1,5 ml reakčných nádobách a 30 minút sa predinkubujú pri teplote 37 °C. Potrebuje sa 4 x 106 buniek v objeme 500 μΐ na merací bod. Po predinkubačnej operácii nasleduje prísada LHRH (rezervný roztok 0,5 mM v 10 nM Tris, pH 7,5, 1 mM ditiotreitolu, 0,1 hm./obj. BSA/Bachem Art # H4005) k suspenzii buniek v konečnej koncentrácii 10 nM. Účinok antagonistu sa testuje súčasným pridávaním zodpovedajúcej koncentrácie (napríklad 0,0316, 0,1, 0,316 a pod. až 100 nM pre príklad 2). Ako negatívna kontrola sa inkubujú bunky bez pridaného LH-RH. Po 15-minútovej inkubácii pri teplote 37 °C sa vytvorený IP3 izoluje z buniek extrakciou kyselinou trifluóroctovou (TCA). Pridá sa 500 μΐ ľadovo studeného 15 % (hm./obj.) roztoku TCA do bunkovej suspenzie. Vznikajúca zrazenina sa peletuje 15-minútovým odstredením pri teplote 4 °C, pri 2000 x g v bioodstredivke Heraeus 15R. Nadbytok 950 μΐ sa extrahuje trikrát 10 objemami studeného vodou nasýteného dietyléteru v 15 ml nádobe státím na ľade. Po poslednej extrakčnej operácii sa hodnota pH roztoku nastaví na 7,5 0,5M roztokom hydrogenuhličitanu sodného.
Stanovenie koncentrácie IP3 v bunkových extraktoch sa uskutočňuje pomocou senzitívneho kompetitívneho väzbového testu s väzbovým proteínom 1P3, značeným [3H]-IP3 a neznačeným IP3 Na tento účel sa používa skúšobný kit Amersham (TRK 1000), podľa opísaného testovacieho protokolu. Po vykonaní príslušných operácií sa nakoniec pridajú 2 ml scintilátoru pre vodné vzorky (Rotiszint Ecoplus), suspendovaná peleta s viazaným [3H]-IP3 sa s ním opatme zmieša a meria sa beta - scintilačným počítačom. Množstvo bunkových IP3 sa vyráta pomocou štandardnej krivky a zostaví sa krivka účinnosti dávky. Hodnotu IP3 je možné odhadnúť z inflexného bodu krivky.
Výsledok:
Na obr. 1 sú znázornené zodpovedajúce krivky účinnosti dávky pre peptidické antagonisfy príklad 2 (obr. 2) aj peptidomimetikum príklad 56 (obr. 3). Simuluje sa 10 nM LH-RH a určí sa brzdenie tvorby IP3 v závislosti od koncentrácie substancie. Pre príklad 2 a príklad 56 nemohla byt určená žiadna agonistická aktivita, teda látky samotné nevedú k simulácii syntézy IP3 . V tu neuvádzaných kontrol ných pokusoch sa ukázalo, že netransfektované bunky' nemôžu byt simulované LH-RH na syntézu IP3. Ešte merateľné najvyššie koncentrácie 1P3 zodpovedajú koncentráciám nestimulovaných buniek. Ide teda v príklade 2 a príklade 56 o funkčné antagonisty LH-RH. Látky sa však odlišujú v potencii. Za zvolených skúšobných podmienok jc IC50 podľa príkladu 2 približne 0,4 nM, IC5O podľa príkladu 56 je naproti tomu približne 4qm. Tieto aktivity sú vo veľmi dobrom vzťahu s väzbovými aktivitami Kd = 0,109 nM v prípade príkladu 2 a Kd=l,08 μΜ v prípade príkladu 56 zistenými konkurenčným väzbovým testom [125J] Cetrorelix.
Príklad 85
Hormóny potlačujúce účinok zlúčenín podľa príkladu 1, príkladu 2 a príkladu 56 u zdravých samcov potkanov.
Na stanovenie potlačenia testosterónu v krvi zdravých samcov potkanov sa injektuje látka subkutánne do pravej chlopne. Dávkovanie je v prípade zlúčeniny podľa príkladu 1 a 2 1,5 mg/kg, v prípade zlúčeniny podľa príkladu 56 10 mg/kg. Na kontrolu hodnôt testosterónu sa zvieratám odoberá 300 μΐ krvi z žily vena sublingualis v časových úsekoch 0, 2. 4, 8 (iba v prípade príkladu 56), 24, 48, 72 a 96 hodín a potom každý 3. deň až do konca potlačenia. Potlačenie pod 1 ng/ml testosterónu vydržalo po dávke zlúčeniny podľa príkladu 1 u jedného zvieraťa až 264 hodín, u dvoch zvierat až 336 hodín a u jedného zvieraťa 384 hodín (obr. 4). Po dávke zlúčeniny podľa príkladu 2 bola hladina testosterónu potlačená u jedného zvieraťa 408 hodín, u 4 zvierat až 648 hodín (obr. 5). Príklad 56 (10 mg/kg s. c.) potlačil hladinu testosterónu u všetkých piatich zvierat už po 2 hodinách a tento účinok sa udržal až 8 hodín. Pri nasledujúcom skúšobnom okamihu (24 hodín) hodnoty testosterónu opäť vzrastali (obr. 6).
Tabuľka 7
Biologické hodnoty
Väzbová afinita na ľudskom receptore LH-RII (vyjadrená ako disociačná konštanta Kd[nM]; vyhodnotenie analýzou EBDA/ligand analytickým programom. Udané sú stredné hodnoty z rôznych pokusov (počet pokusov v zátvorkách) aj potlačenie testosterónuin vivo, uvoľňovanie histamínu in vivo a rozpustnosť vo vode v porovnaní s SB75:
Látka Afinita ludeký LH-RH-recept. [naol/1] (1,5 mgAg jedna dávka) potlačenie testosterónu u potkanov [h] uvolnenie i histaeínu (ŕg/ml) h2° ozpuetnosť (ng(al)
Cetrorelix 0,202(10) 144 9,7 9
SB-75
Príklad 1 0,306 (2) 336 31,9 27
Príklad 2 0,109 (2) 648 17,1 23
Príklad 3 0,170 (2) 864 n.b.* n.b.
Príklad 4 0,206 (2) 696 n.b. n.b.
Príklad 5 108 (2) - - -
Príklad 35 300 (2) - - -
Príklad 5ť 1082 (2) - - -
* pre obťažnú rozpustnosť nastanoviteíné
Priemyselná využiteľnosť
Zlúčenina na výrobu farmaceutických prostriedkov na ošetrovanie nádorov závislých od hormónov, osobitne karcinómu prostaty alebo prsníka a na ošetrovanie nezhubných indikácií, ktorých ošetrenie vyžaduje potlačenie hormónu LH-RH.

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Antagonista LH-RH všeobecného vzorca (I)
    RF
    I
    R< - CO - HH CH - CO - R - R3 (CHaln < I) ,
    I w
    I
    C0-R* kde znamená n číslo 3 alebo 4,
    R1 skupinu fenylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, naftylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, fenantrylkarbonylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, fenylalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele alebo naftylalkoxyskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, pričom všetky tieto skupiny sú prípadne substituované atómom halogénu, alkoxyskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, cinolylovou skupinou alebo fenylovou skupinou,
    R2 a R3 od seba nezávisle atóm vodíka, skupinu alkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka, fenylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele alebo pyridylalkylovú s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom podiele, pričom všetky tieto skupiny sú prípadne substituované alkoxyskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, aminoskupinou alebo karbamoylovou skupinou,
    R4 skupinu všeobecného vzorca (II) — (Cfe), “ CO — ffi6 (II)
    I
    H kde znamená p celé číslo 1 až 4 a
    R6 skupinu fenylovú prípadne substituovanú skupinou amidinoskupinou, kyanoskupinou, atómom halogénu, benzyloxyskupinou, alkoxyskupinou s 1 až 6 atómami uhlíka alebo alkylovou skupinou s 1 až 6 atómami uhlíka, alebo znamená
    R4 kruh všeobecného vzorca (III)
    K \
    kde znamená q číslo 1 alebo 2, a chirálne uhlíkové atómy môžu byť v konfigurácii D alebo L a jeho soli s farmaceutický vhodnými kyselinami.
  2. 2. Antagonista LH-RH podľa nároku 1 všeobecného vzorca (1), ktorým je alfa-N-[bcnzyloxykarbonyl]-cpsilon-N-C 5-[(4-amidino-fenyl)amino]-5-oxo-pentanoyl]-L-lyzínamidtrifluóracetát.
  3. 3. Antagonista LH-RH podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), ktorým je alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[5-[(4-amidinofenyl)-amino]-4-oxo-butanoyl]-L-lyzínamidtrifluóracetát.
  4. 4. Antagonista LH-RH podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), ktorým je alfa-N-[benzyloxykarbonyl]-epsilon-N-[5-[(4-amidinofenyl)-amino]-4-oxo-butanoyl]-L-lyzín-N-(3 -pyridylmetyl) amidtrifluóracetát.
  5. 5. Antagonista LH-RH podľa nároku 1 až 4 všeobecného vzorca (I) v podobe embonátovej soli.
  6. 6. Antagonista LH-RH podľa nároku 1 všeobecného vzorca (V)
    Ac-D-Nal(2)‘-D(pCl)Phe2-D-Pal(3)3-Ser4-Tyr5-D-Xxx6-Leu7-Args-Pro9-D-Ala10-NH2 (V), kde znamená
    D-Xxx skupinu aminokyseliny všeobecného vzorca (VI)
    - b» - ch - co - o I (CHa)n
    I < vi>
    J ra
    I
    CO - R4 kde n a R4 majú význam uvedený v nároku 1 a jej soli s farmaceutický vhodnými kyselinami.
  7. 7. Antagonista LH-RH podľa nároku 6 všeobecného vzorca (V), kde znamená Xxxx [epsilon-N-4-(4-amidinofenyl)amino-1,4-dioxo-butyl]lyzylovú skupinu.
  8. 8. Antagonista LH-RH podľa nároku 6 všeobecného vzorca (V), kde znamená Xxxx [epsilon-N-(imidazolidin-2-on-4-yl)formyl]-lyzylovú skupinu.
  9. 9. Antagonista LH-RH podľa nároku 6 až 8 všeobecného vzorca (V) v podobe embonátovej soli.
  10. 10. Spôsob prípravy antagonista LH-RH podľa nároku 6 všeobecného vzorca (V), kde jednotlivé symboly majú v nároku 6 uvedený význam, vyznačujúci sa tým, že
    a) sa zavádza do alfa-aminoskupiny a do skupiny karboxylovej kyseliny D-lyzínu alebo D-omitínu vhodné chrániace skupiny,
    b) necháva sa reagovať D-lyzin alebo D-omitín s chránenými skupinami s karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (VII)
    R4-COOH (VII), kde R4 má hore uvedený význam,
    c) odštepujú sa chrániace skupiny zo skupiny alfa-karboxylovej kyseliny zlúčeniny získanej v stupni b) na začlenenie do polohy 6 operáciou (h),
    d) viaže sa D-alanín s chránenou aminoskupinou na pevný nosič v podobe živice,
    e) odštepujú sa chrániace skupiny z aminoskupiny alanínu,
    f) necháva sa reagovať alanín viazaný na pevnom nosiči s prolínom, s chráneným atómom dusíka,
    g) odštepuje sa chrániaca skupina z atómu dusíka prolínu,
    h) opakuje sa operácia ŕ) a g) s aminokyselinami 1 až 8 všeobecného vzorca (V) v poradí od 8 k 1 pri použití modifikovaného D-lyzinu alebo D-omitínu opísaného v operácii
    c) pre polohu 6,
    i) odštepuje sa zlúčenina, získaná v operácii h), od nosiča a prípadne sa čistí, predovšetkým chromatografiou HPLC,
    j) prípadne sa zlúčenina necháva reagovať s farmaceutický vhodnou kyselinou, výhodne s kyselinou embónovou.
  11. 11. Spôsob prípravy antagonista LH-RH podľa nároku 6 všeobecného vzorca (V), kde jednotlivé symboly majú v nároku 6 uvedený význam, vyznačujúci sa tým, že
    a) sa viaže D-alanín s chránenou aminoskupinou na nosič vhodný na syntézu v pevnej fáze,
    b) odštiepi sa chrániaca skupina 2 aminoskupiny alanínu,
    c) necháva sa reagovať alanín viazaný na živicu s prolínom s chráneným atómom dusíka,
    d) odštiepi sa chrániaca skupina z atómu dusíka prolínu,
    e) opakuje sa operácia c) a d) s aminokyselinami 1 až 8 všeobecného vzorca (V) v poradí od 8 k 1,
    f) odštepuje sa v stupni e) získaná zlúčenina od nosiča,
    g) necháva sa reagovať s karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (VII)
    R4 -COOH (VII), kde R4 má uvedený význam,
    h) prípadne sa zlúčenina necháva reagovať s farmaceutický vhodnou kyselinou, výhodne s kyselinou embónovou.
  12. 12. Spôsob prípravy antagonistu LH-RH podľa nároku 6 všeobecného vzorca (V), kde jednotlivé symboly majú v nároku 6 uvedený význam, vyznačujúci sa tým, že
    a) sa viaže D-alanín s chránenou aminoskupinou na nosič vhodný na syntézu v pevnej fáze,
    b) odštiepi sa chrániaca skupina z aminoskupiny alanínu, c) necháva sa reagovať alanín viazaný na živicu 5 prolínom s chráneným atómom dusíka,
    d) odštiepi sa chrániaca skupina z atómu dusíka prolínu,
    e) opakuje sa operácia c) a d) s aminokyselinami 6 až 8 všeobecného vzorca (V) v poradí od 8 k 6,
    f) odštepuje sa skupina chrániaca epsilon-aminoskupinu Dlyzínu alebo D-omitínu v polohe 6 a vykonáva sa reakcia s karboxylovou kyselinou všeobecného vzorca (VII)
    R4-COOH (VII), kde R4 má uvedený význam,
    g) odštepuje sa chrániaca skupina z alfa-aminoskupiny D-lyzínu alebo D-omitínu,
    h) opakuje sa operácia c) a d) s aminokyselinami 1 až 5 všeobecného vzorca (IV) v poradí od 5 k 1,
    i) odštiepi sa zlúčenina získaná v operácii h) od živice a čistí sa predovšetkým chromatografiou HPLC,
    j) prípadne sa zlúčenina necháva reagovať s farmaceutický vhodnou kyselinou, výhodne kyselinou embónovou.
  13. 13. Spôsob podľa nároku 10 až 12, vyznačujúci sa tým, že sa ako karboxylová kyselina všeobecného vzorca (VII) používa N-(4-amidinofenyl)amino-4-oxomaslová kyselina.
  14. 14. Spôsob podľa nároku 10 až 12, vyznačujúci sa tým, že sa ako karboxylová kyselina všeobecného vzorca (VII) používa imidazolidin-2-on-4karboxylová kyselina.
  15. 15. Spôsob podľa nároku 10 až 14, vyznačujúci sa tým, že sa na prípravu farmaceutický vhodnej soli používa embónová kyselina.
  16. 16. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje ako účinnú látku antagonistu LH-RH podľa nároku 1 až 9.
  17. 17. Použitie antagonistu LH-RH podľa nároku 1 až 9 na výrobu farmaceutických prostriedkov na ošetrovanie nádorov závislých od hormónov, predovšetkým karcinómu prostaty alebo prsníka a na ošetrovanie nezhubných indikácií, ktorých ošetrenie vyžaduje potlačenie hormónu LH-RH.
SK629-98A 1995-11-28 1996-11-14 Antagonista LH-RH, spôsob jeho prípravy, jeho použitie a farmaceutický prostriedok, ktorý ho obsahuje SK282760B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19544212A DE19544212A1 (de) 1995-11-28 1995-11-28 Neue LH-RH-Antagonisten mit verbesserter Wirkung
PCT/DE1996/002171 WO1997019953A2 (de) 1995-11-28 1996-11-14 Neue lh-rh-antagonisten mit verbesserter wirkung

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK62998A3 SK62998A3 (en) 1999-07-12
SK282760B6 true SK282760B6 (sk) 2002-12-03

Family

ID=7778552

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK629-98A SK282760B6 (sk) 1995-11-28 1996-11-14 Antagonista LH-RH, spôsob jeho prípravy, jeho použitie a farmaceutický prostriedok, ktorý ho obsahuje

Country Status (30)

Country Link
EP (1) EP0876337B1 (sk)
JP (1) JP2000501083A (sk)
KR (1) KR100460165B1 (sk)
CN (1) CN1087283C (sk)
AR (1) AR004354A1 (sk)
AT (1) ATE289588T1 (sk)
AU (1) AU706546B2 (sk)
BG (1) BG64386B1 (sk)
BR (1) BR9611760A (sk)
CA (1) CA2238570A1 (sk)
CZ (1) CZ290098B6 (sk)
DE (2) DE19544212A1 (sk)
DK (1) DK0876337T3 (sk)
EE (1) EE04318B1 (sk)
ES (1) ES2238704T3 (sk)
HK (1) HK1016999A1 (sk)
HU (1) HUP9901656A3 (sk)
IL (1) IL119703A (sk)
IS (1) IS1914B (sk)
MX (1) MX9804120A (sk)
NO (1) NO311023B1 (sk)
NZ (1) NZ330521A (sk)
PL (1) PL186872B1 (sk)
PT (1) PT876337E (sk)
RU (1) RU2163910C2 (sk)
SI (1) SI0876337T1 (sk)
SK (1) SK282760B6 (sk)
UA (1) UA65531C2 (sk)
WO (1) WO1997019953A2 (sk)
ZA (1) ZA969987B (sk)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19911771B4 (de) 1999-03-17 2006-03-30 Zentaris Gmbh LHRH-Antagonist, Verfahren zu seiner Herstellung und seiner Verwendung
AU2001260110B2 (en) 1999-03-17 2005-05-05 Zentaris Gmbh Novel LHRH-antagonists, production and use thereof as medicament
US7005418B1 (en) 1999-09-23 2006-02-28 Zentaris Gmbh Method for the therapeutic management of extrauterine proliferation of endometrial tissue, chronic pelvic pain and fallopian tube obstruction
SE0100567D0 (sv) * 2001-02-20 2001-02-20 Astrazeneca Ab Compounds
CN104086632A (zh) * 2014-08-05 2014-10-08 杭州诺泰制药技术有限公司 一种制备西曲瑞克的方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5110904A (en) * 1989-08-07 1992-05-05 Abbott Laboratories Lhrh analogs
US5300492A (en) * 1988-02-10 1994-04-05 Tap Pharmaceuticals LHRH analogs
US5140009A (en) * 1988-02-10 1992-08-18 Tap Pharmaceuticals, Inc. Octapeptide LHRH antagonists
IL101074A (en) * 1991-03-14 1997-09-30 Salk Inst For Biological Studi GnRH ANALOGS AND THEIR PREPARATION
DE593491T1 (de) * 1991-04-25 1994-11-17 Romano S.-Cergue Deghenghi LHRH-Antagonisten.
WO1994013313A1 (en) * 1992-12-04 1994-06-23 Abbott Laboratories 6-position modified decapeptide lhrh antagonists
DE69330838T2 (de) * 1992-12-18 2002-04-25 Abbott Laboratories, Abbott Park Lhrh antagonisten mit modifizierten aminoacylresten an den positionen 5 und 6
IL108509A0 (en) * 1993-02-22 1994-05-30 Salk Inst For Biological Studi GnRH antagonist peptides

Also Published As

Publication number Publication date
CA2238570A1 (en) 1997-06-05
AR004354A1 (es) 1998-11-04
NO982366L (no) 1998-05-25
MX9804120A (es) 1998-09-30
DK0876337T3 (da) 2005-05-09
SI0876337T1 (en) 2005-06-30
RU2163910C2 (ru) 2001-03-10
IS4733A (is) 1998-05-05
KR19990071864A (ko) 1999-09-27
DE19544212A1 (de) 1997-06-05
AU706546B2 (en) 1999-06-17
WO1997019953A8 (de) 2002-09-26
PT876337E (pt) 2005-06-30
ATE289588T1 (de) 2005-03-15
EE04318B1 (et) 2004-06-15
HUP9901656A2 (hu) 1999-08-30
IL119703A0 (en) 1997-02-18
PL186872B1 (pl) 2004-03-31
WO1997019953A2 (de) 1997-06-05
CN1202882A (zh) 1998-12-23
BG102514A (en) 1999-04-30
AU1867097A (en) 1997-06-19
JP2000501083A (ja) 2000-02-02
CZ135898A3 (cs) 1998-09-16
IL119703A (en) 2001-04-30
EP0876337A2 (de) 1998-11-11
ZA969987B (en) 1997-06-17
NZ330521A (en) 1999-01-28
CZ290098B6 (cs) 2002-05-15
ES2238704T3 (es) 2005-09-01
HK1016999A1 (en) 1999-11-22
NO982366D0 (no) 1998-05-25
HUP9901656A3 (en) 2001-10-29
PL326977A1 (en) 1998-11-09
SK62998A3 (en) 1999-07-12
BR9611760A (pt) 1999-10-05
CN1087283C (zh) 2002-07-10
BG64386B1 (bg) 2004-12-30
NO311023B1 (no) 2001-10-01
EP0876337B1 (de) 2005-02-23
EE9800165A (et) 1998-12-15
WO1997019953A3 (de) 1997-08-28
UA65531C2 (en) 2004-04-15
KR100460165B1 (ko) 2005-06-01
IS1914B (is) 2004-02-03
DE59611201D1 (de) 2005-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100519421B1 (ko) 5 및 6 위치에서 변형되는 지엔알에이치 길항제
CA2272990C (en) Heptapeptide oxytocin analogues
Tatemoto et al. Synthesis of receptor antagonists of neuropeptide Y.
AU759442B2 (en) Novel LHRH antagonists with improved solubility characteristics
CA2022740C (en) Cyclic neurokinin a antagonists
US5942493A (en) LH-RH antagonists having improved action
SK282760B6 (sk) Antagonista LH-RH, spôsob jeho prípravy, jeho použitie a farmaceutický prostriedok, ktorý ho obsahuje
KR100607396B1 (ko) 신규한 ｌｈｒｈ 길항제
US5935932A (en) Bradykinin antagonists containing pentafluorophenylalanine
EP1593686B1 (en) Antineoplastic peptides
TW379216B (en) Novel LH-RH antagonists having improved action, harmaceutical composition comprising the same and process for preparing the same