CS85991A3

CS85991A3 - Polyfunctional pharmaceuticals

Info

Publication number: CS85991A3
Application number: CS91859A
Authority: CS
Inventors: Alvin J Glasky
Original assignee: Alvin J Glasky
Priority date: 1990-03-28
Filing date: 1991-03-28
Publication date: 1992-02-19
Also published as: AU7678191A; DE69126701D1; JPH05508390A; ATE154880T1; IL97638A0; DK0522082T3; WO1991014434A1; DE69126701T2; EP0522082A4; ES2104700T3; CA2079342C; IE910994A1; EP0522082B1; GR3024904T3; IL97638A; CA2079342A1; TW279865B; NZ237574A; US5091432A; EP0522082A1

Description

Vícefunkční farmaceutické sloučeniny a zp^ objoje^Jfch poii&ífc.^Oblast techniky

Vynález se týká nových vícefunkčních farmaceuisloučenin, které mají neočekávané a ojedinělé kombinaci bio-logických aktivit. Zejména se týká přípravků, které jsou tvo-řeny nejméně dvěma biologicky aktivními částmi spojenými che-mickým můstkem. Každá chemická část má strukturu látky vybra-né z široké skupiny biologicky aktivních sloučenin, které majítakové farmakologické vlastnosti jako jsou imunomodulace,neuromodulace, kardiovaskulární modulace, antimikrobiální akti-vita a další terapeutické vlastnosti. Tyto kombinace farmakolo-gických aktivit jsou u vícefunkčních sloučenin závislé jediněna dávce a umožňují používat způsoby a kombinace, které bylydříve v léčení nedostupné a ktsré mohou být řízeny podánímvhodné dávky určitých farmaceutických prostředků.

Dosavadní stav, techniky

Kodifikace farmaceuticky a biologicky aktivních sloučeninve smyslu změny nebo zvýšení jejich funkčních vlastností jeznáma. Dosavadní způsoby byly zaměřeny k získání léků vázanýchna nosič, u nichž molekuly nosiče mají selektivní fyzikálnívlastnosti, jako je zvyšování rozpustnosti ve vodě, a jsou che-micky připojené k biologicky aktivním sloučeninám. NapříkladJacobson a kolegové objevili "funkčně podobný" přístup k návr-hu látek vázaných na nosič. (Jacobson, K.A., Adenosine Recep-tors; Cooper, D.K.P., Londos, C., Eds, Receptor Biochemistryand Kethodology; Venter, J.C., Harrison, L.C., Eds., Alan R.Diss: New York, 1S88, Vol. 11, ρρτ 1-26). Tento přístup za-hrnuje modifikaci dobře definovaných lékových molekul v necit-livém místě, udržuje schopnost léků vázat se na odpovídajícímísto specifického receptoru. Aby mohly být získávány chemic-ky funkčně podobné látky, molekula léku byla modifikována za-vedením chemické funkční skupiny, která potom mohla být vázá-na kovalentní vazbou k molekule nosiče. Vznikla bifunkční mo-lekula, u níž jedna část ("farmakofor") vykazuje biologickou aktivitu a druhá část nebo její nosič jí dodává selektivní fy-zikální vlastnosti, jako jsou zvýšená receptorová vaznost nebo rozpustnost ve vodě. Užitím tohoto přístupu funkčně podobnýchsloučenin byly připraveny funkční katecholaminy, sgonisté a an-tagonisté adenosinových receptorů a muskarinové prostředky.

Poslední vývoj v pochopení biologických mechanismů jakoje spojeni selektivních ligandů s receptoxy a jejich vzájemnývztah u takových zdánlivě rozdílných fyziologických systémů ja-ko jsou kardiovaskulární systém, centrální nervový systém aimunitní systém, byl stimulací k pokusům vedoucím k odhaleníalternativních metod k získání biologicky aktivních látek, vy-kazujících vlastnosti, které budou selektivně léčit nebo řídittyto zdánlivě rozdílné chemické systémy bez vážnějších nebooslabujících účinků. Mapř. adenosinové receptory byly nalezenyv kardiovaskulárním systému, centrálním nervovém systému av imunitním systému. V souladu s tím se původně uvažovalo, ževývoj adenosinových analogů by mohl být efektivní v řízení a mo-difikaci biologických aktivit s tím spojeným. Současný výskytdistribuce adenosinových receptorů vede ke vzniku vážných aoslabujících vedlejších účinků v biologických systémech, o kte-rých se původně soudilo, že nemají souvislost, čímž významněsnižují terapeutické užití adenosinových analogů.

Podobné vzájemné vztahy byly rovněž zjištěny v imunitníma nervovém systému savců. V období několika minulých desetile-tí mnoho badatelů popsalo další podrobnosti nutné ke všeobec-nému porozumění imunitního systému savců a jejich význam proudržení celkového fyzického zdraví. V posledních letech bylytyto podobné detaily popsány při studiu nervového systému. Srozvojem informací a nalezením řady příbuzností v těchto zdán-livě nezávislých oblastech směřoval výzkum k oblasti spojujícídva fyziologické systémy. Například,' oba systémy se orientujína uchovávání informací a využití rozpustných chemických lá-tek k přenosu signálu mezi buňkami. Přitom původní endogennísubstance, jako jsou hormony a transmitery jsou aktivoványna buňkách obou systémů. Některé významnější společné funkcemezi dvěma systémy jsou založeny na podobných chemickýchstrukturách nebo markérech na povrchu nervových a imunitníchbuněk. Současný objev, že CD4 receptory obsazované AIDS vi-rem jsou přítomné na T4 lymfocytech a na neuronech, je jedenz dramatičtějších příkladů blízkého vztahu mezi nervovým aimunitním systémem. - 3 -

Další křižovatkou ve smyslu klasických hranic v oblastiimunologie a neurologie jsou poslední výzkumy týkající se po-chopení mechanismu vzniku Alzheimerovy choroby, které vyjad-řují, že u tohoto neurologického onemocnění mohou být přítom-ny i imunologické příznaky. Očekává se, že jak anatomická, takbiochemická specifika defektu typická pro Alzheimerovu chorobu,může být vysvětlena jako imunologické napadení vlastních mozko-vých cév se sekundárním postižením neuronálních, gliálních ne-bo synaptických částí, které přispívají k tvorbě senilních pla-ků nebo imunitně ohrožených cév spojené s imunitním napadenímspecifických neuronálních, gliálních nebo synaptických částí(Appel, S.H., Neurobiol· Aging, 7:512, 1986).

Nepřímý důkaz imunologických komponent při neurologic-kých onemocněních je umožněn změněnou supresorovou buněčnoufunkcí u starší populace a zejména u Alzheimerovy nemoci (Mac-Bonald et al., Clin. Exp. Immunol. 49:123-8,1982; Iáiller,A.E.,Ann.Neurol. 10:506-10,1981, Stefansson, K., Clinical Neurologyof Aging, vyd. M.L.Albert, Oxford Univ.Press, 1984, pp· 76-94).Implikace HLA oblasti 6 chromozomu a GM lokusu 14 chromozomu ješiroce spřízněna s Alzheimerovou nemocí (V/eitkamp,L.Rem Am.J»Hum.Genet. 35:443-53,1983), a poškozenými imunologickými para-metry u Do v: no v a syndromu, nemocí jejíž symptomy jsou podobnésenilní demenci Alzheimerova typu (SDAT). Vědci, na podkladě vznikajícího odvětví neuroimunologie,předpokládali, že defekty funkce mozkových buněk (neuronů), mo-hou být sledovány průběžně, jako paralelní defekty nebo defici-ence recepterů u buněk imunitního systému (jako jsou imunocytyv periferní krvi)· Význam této hypotézy přinesl světlo do výšezmíněného objevu HIV infekce neuronů. Tato neuroimunologickáteorie měla značný význam, protože dříve byla Častěji všechnaneuropsychiatrická onemocnění považována jako primární, způso-bená takovými faktory jako jsou genetická predispozice, mentál-ní stav a nebo rezistence na přírodní prostředí, spíše než jakoonemocnění způsobená defekty nebo deficiencí buněčné funkce. Po-dobně se soudilo, že imunitní systém může být postižen mnoha ne-mocemi v pořadí od infekce a rakoviny až k degenerativním onemocněním, jako jsou Alzheimerova nemoc, artritida a stárnutí, je-jichž vzájemný vztah k poznání funkce imunitního systému nebyldříve sledován·

Protože chemické vztahy mezi těmito odlišnými fysiologic-kými systémy byly poznány poměrně nedávno, byla léčba a využitífarmaceutických látek zaměřeny jen na jednotlivé systémy. A takbyly farmaceutické sloučeniny vyvíjeny jen pro léčení buď kar-diovaskulárního nebo imunitního nebo centrálního nervového sy-stému, s myšlenkou zabránit nežádoucím interakcím, souvisejí-cích s určitým fysikálním systémem. Zdaleka největší přínos po-sledních objevů na farmaceutickém a lékařském poli směřoval kléčení či řízení imunitního systému jako takového. Velké množ-ství imunomodulačních a protivirových prostředků bylo objevenozpůsobem, který byl popsán v Hvropské zveřejněné patentové při-hlášce c.126 813 (Simon, a kol.), v US patentu č. 4 221 909(Simon, a kol.), US patentu Č. 4 211 794 (Kraska), a US patentuČo 4 221 910 (Giner-Sorolla). Různá antibiotika, která přímp po-stihují a ničí napře bakterie, imunomodulační agens a specifi-čtější imunitní agens jsou sloučeniny, které pomáhají zvyšovatvlastní obranyschopnost organismu proti infekci. Imunomoduláto-ry obnovují sníženou funkci nebo vyvolávají hyperaktivní imunit-ní funkci.

Tak např. u epidemie AIDS byla značná pozornost věnovánastudiu defektů a deficiencí v imunitním systému, kromě posled-ního objevu HIV infekce nervové tkáně, přičemž značně menší dů-raz byl kladen na výzkum zaměřující S6 na vývoj vícefunkčníchfarmaceutických sloučenin, jako jsou neuroimunologické prostředkynebo jiné sloučeniny, vykazující funkčně příbuzné terapeutickéúčinky, jako je imunomodulace s kardiovaskulárně aktivními slou-čeninami, nebo imunomodulace s antimikrobiálně aktivními slouče-ninami «

Podstata vynálezu V souladu s tím jsou základním předmětem tohoto vynálezuvícefunkční farmaceutické sloučeniny, které mají nejméně dvěoddělené farmakologické aktivity a které jsou terapeuticky fun-kčně podobné. Dále jsou předmětem vynálezu vícefunkční farmaceutickésloučeniny párující biologicky aktivní chemické části, jako jsou imunomodulační íarmakofory, neurologické farmakofory,kardiovaskulární farmakofory, antimikrobiální a ostatní far-ma kofory.

Dalším předmětem vynálezu jsou vícefunkční farmaceutickésloučeniny, které kombinují biologicky aktivní chemické částia které produkují kombinované farmakologické aktivity, lišícíse množstvím, charakterem nebo obojím od individuálních far-makologických aktivit samostatných chemických částí. Předmětem vynálezu jsou také specifické neurologicky ak-tivní imunomodulační sloučeniny, které jsou farmaceuticky ak-tivní se zřetelem k defektům nebo deficiencím postihujícímcentrální nervový a imunitní systém. Tyto sloučeniny budou mítzvláštní účinek na léčbu neuroimunologických stavů jako jsouAlzheimerova choroba, AIDS, pamětová a imunitní funkce, stejnětak jako projevy stáří.

Tyto a další záměry jsou úspěšně dosaženy u vícefunkčníchfarmaceutických prostředků podle vynálezu, které kombinují nej-méně dvě biologicky aktivní chemické části vázané nejméně jed-nou chemickou skupinou tvořící můstek. Párování chemických čás-tí může být někdy farmakologicky relevantní kombinaci biologic-ky aktivních molekul, vykazujících samotné farmakologické akti-vity. Například, v souhlase s popisovaným vynálezem je možné vy-rábět biologicky aktivní sloučeniny, které spojují imunomodu-lačně působící části s neurologicky účinnými částmi. Zjednodu-šeně lze říci, že i jiná spojení jsou možná podle vynálezu,taková jako kombinace částí, vykazujících kardiovaskulární ak-tivitu s chemickými částmi vykazujícími antimikrobiální aktivi-tu apod.

Nejvýhodněji budou vznikat vícefunkční farmaceutické slou-čeniny podle vynálezu z biologicky aktivních částí vázanýchchemickými můstkovými skupinami, takovými jako jsou kyselinapropionová, kyselina butanová nebo jejich defiváty. Chemickémůstkové skupiny, které jsou biodegradabilní, tak jako amido-vá nebo peptidová vazba, jsou považovány za nejvhodnějšía předpokládá se, že takové můstkové skupiny mohou být snad-no hydrolyzovány známými proteolytickými enzymy, Čímž jsouzískány individuální chemické strukturální části s nezávisloufunkcí. Je nutné zdůraznit, že jednotlivé chemické části se - 6 - podle vynálezu mohou spojovat a tedy simultánně reagovat sesousedními nebo strukturálně blízkými receptory na léčenýchbuňkách. Vícefunkční sloučeniny podle vynálezu mohou být formová-ny do nových farmaceutických prostředků, obsahujících účinnémnožství specifických sloučenin a farmaceuticky vhodných no-sičů. Tyto farmaceutické prostředky mohou být užitečné připraktických metodách léčení, kdy je podáno perorálně nebo in-jekčně pacientům - savcům trpícím takovými stavy, jako jsouAlzheimerova choroba, neuroimunologická onemocnění, neurokar-diovaskulární onemocnění a pod., účinné množství takto vytvo-řeného farmaceutického přípravku. Následující příklady vícefunkčních farmaceutických slou-čenin jsou uvedeny pro bližší pochopení a objasnění předmětuvynálezu.

Popis příkladů provedení Z širšího hlediska se vícefunkční farmaceutické slouče-niny podle vynálezu skládají nejméně ze dvou biologicky aktiv-ních chemických částí, které jsou vázány nejméně jednou che-mickou můstkovou skupinou. Každá z těchto chemických Části ne-bo farmakoforů vnáší svoji vlastní biologickou aktivitu dovlastností vícefunkční sloučeniny. Přednostně tyto biologickéaktivity zahrnují imunologickou nebo imunomodulační aktivitu,neurologickou aktivitu, kardiovaskulární aktivitu nebo anti-mikrobiální aktivitu a další kombinace biologických aktivit,Např. každá z chemických částí může být tvořena z aktivníhostrukturálního jádra specifického typu biologicky aktivní mo-lekuly nebo alternativně z vybraných analogů nebo jiných bi-ologicky aktivních sloučenin. Na rozdíl od známých léků váza-ných na nosič, sloučeniny podle vynálezu jsou tvořeny jako ná-sobné biologicky aktivní farmakofory, které mohou plnit funk-ci nosiče vedle svých biologických aktivit. Bylo zjištěno, žesloučeniny podle vynálezu vykazují jedinečné farmakologickéaktivity, které se liší v množství, charakteru nebo obojím odsamostatných aktivit příslušných farmakofor. V souladu s popisovaným vynálezem se předpokládá, že jed-notlivé farmakofory jsou kovalentně vázány chemickými můstko-vými skupinami. Přednostně můstkové skupiny obsahují biodegra-dabilní vazby, jako je jednoduchá nebo multiamidová nebo pep-tidová vazba. Tím je možné provést u chemických strukturálníchčástí sloučenin následnou hydrolýzu chemických můstkových sku-pin. Příklady můstkových skupin podle vynálezu jsou podle vyná-lezu kyselina propionová, kyselina butanová nebo jejich derivá-ty, např. propanamid. Ačkoliv se předpokládalo, že takové bio-degradabilní vazby by mohly být hydrolyzovány známými proteo-lytickými enzymy přítomnými v organizmu, je nyní navrhováno, žev důsledku neočekávané biologické aktivity.u těchto sloučeninmohou odpovídající chemické části sloučenin zůstat spojeny.Předpokládá se, že tyto vazebné, biologicky aktivní části jsouschopné simultánně vzájemně reagovat s přilehlými nebo struktu- v rálně blízkými receptory na jednotlivých buňkách. Přesněji, nadávce závislé aktivity, synergické biologické vlastnosti a roz-dílné specifické účinky sloučenin podle vynálezu svědčí o ne-obvyklých a neočekávaných mechanismech reakce, které nemohou býtvysvětleny prostou biodegradací chemické vazebné skupiny.

Parmakofory popisované ve vynálezu mohou být vybrány ztakových chemických částí, které vykazují biologickou aktivi-tu v následujících třídách: analgetika, antihelmintika, proti-vředové látky, antibakteriální činidla, antibiotika, antikon-vulsiva, antihypertonika, protiplísňová činidla, antimalarika,antianthritika, protinádorová činidla, bronchodilatátory, kar-diovaskulární činidla, imunologika, antidepresiva, diuretika,inhibitory diureticko-karbonové anhydrasv, myorelaxancia, neu-rologika, neurotransmittery, antiparkinsonika, psychostimulan-cia a sympatomimetika. Lze očekávat, že v rámci vynálezu budouvznikat i další terapeutické třídy farmakofor. Vícefunkční farmaceutické sloučeniny podle vynálezu mohoubýt tvořeny chemickými můstkovými kombinacemi takových látek,jako jsou aspirin, piperazin, dimetidin, ranitidin, sulfametho-xazol, sulfoiso.xazol, penicilín G, cefalosporin G, tetracyklin,fenytoin, flucytosin, kyselina aminobutanová, primashin, pyri- methamin, methostrexat, naproxen, ibufren, adrenalin, efedrin,theofilin, captopril, acebutol, flecainid, mexiletin, procain- amid, tocainid, carnitin, chlordiazepoxid, desipramin, ma—protilin, meprobamat, nortriptylin, protriptylin, tran^lcy-promiň, amilorid, triamteren, kyselina ethacrinová, aceta-zolamid, captopril, pxazosin, baciofan, hypoxanthin, 5-hyd-.roxytryptamin, levodopa, methamfetamin, mathylfenidat, pemo-lin, dejxtroamf etamin, dopamin nabo strukturálně jednodušší-mi biologicky aktivními sloučeninami. Ačkoliv v xámci popisovaného vynálezu mohou být kombi-novány chemické části, ktaxé mají velmi xozdílné biologickéaktivity, včetně imunologických, neuxologických, kardiovas-kuláxních a antimikxobiélních vlastností, následující příkla-dy uvádějí vázané imunomodulační farmakofory a neurologickéfarmakofory. Jak bylo uvadano dříve, princip párování biolo-gicky aktivních chemických sloučenin, ktaxé mají imunologic-kou a neurologickou aktivitu, je založen na funkčním vzta-hu mezi centrálním a nervovým systémem a imunitním systémem,vyplývající z přítomnosti povrchových markérů vyskytujícíchse na povrchu buněk obou systémů. Defekty ve funkci mozko-vých buněk byly pozorovány současně s defekty ve funkci imu-nitních buněk periferní soustavy.

Podlte vynálezu je zejména žádoucí získávat sloučeniny,které jsou schopné korigovat funkční defekty v imunitních a v nervových buňkách. Specifické a neurologické imunitní defektya deficience jsou známé jak u Alzheimerovy nemoci, tak i vespojení s neurologickými aspekty infekce HIV a tyto symptomynebo stavy jsou hlavními cíly řešení popisovaného vynálezu.Nemoci, jako je schizofrenie a neuroimunologické deficience,které doprovázejí stárnutí, jsou také hlavními cíly řešení.Následující příklady je třeba chápat jako ilustrativní příkla-dy a v žádném případě neomezují rozsah popisovaného vynálezuna neuroimunologické sloučeniny.

Uvedené vícefunkční farmaceutické sloučeniny, které vy-kazují neuroimunologické vlastnosti, mohou vznikat z prvníbiologicky aktivní chemické části, která má imunologické účin-ky a z druhé biologicky aktivní chemické části, která má neu-rologické účinky. V uvedené imunologicky účinné chemické části je hypoxanthin nebo purin-6(lH)-on dále označován jakoAIT - 001. Dalším úspěchem využití hypoxanthinu ve slouče-ninách podle vynálezu je jeho strukturální vztah k inosinu2jako jedinému purinu, který je schopen proniknout hematoen-cefalickou bariéru. Hypoxanthin může vedle své biologickéaktivity jako imunologická sloučenina plnit i funkci nosičenebo jako část molekuly může dodávat vícefunkční farmaceu-tickou sloučeninu určitým orgánům, jako je např. mozek. Pod-le předloženého vynálezu je hypoxanthin vázán chemickou můstkovou skupinou, jako je kyselina propionová nebo kyselina butanová k různým neurologicky aktivním chemickým částem, při-čemž vznikají následující chemické sloučeniny (jejich vzorcejsou uvedeny v dodatku A): - 10 - SLOUČENINY ΑΙΤ AIT-OO26 ethylester 3-( 6-amino-9H-purin-9-yl)priopionové kyse-liny AIT-0027 e thýle ster 3-( 1,6-dihydro-6-oxo-SK-purin-9-yl)propiono-vé kyselinyAIT-0029 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-C(l-ethylpyrro-1idin-2-y1)methyl]propanamidAIT-0031 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-( 4-morfolinyl)-ethyl]propanamidAIT-0033 3-(l,6-dihydxo-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-( l-benzylpiperi-din-4-yl)piopanamidAIT-0034 3-(1,6-dihydro-6-o2o-SH-purin-9-yl)-N-[3-(2-ozopyroli-tí in-l-yl) pro pyl] pro panamidAIT-OO35 3-(l,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(l-methylpyr-rol-2-yl)ethyl]propanamidAIT-CO37 3-(l,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[3-(1-imidazolyl)-propyl]propanamidAIT-OO43 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[3-( 4-morfolinyl)-propyl]propanamidAIT-0044 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)“N-[3-(2-methylpipe-ridin-l-yl)propyl]propanamidAIT-OO45 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(l-methylpyr-rolidin-2-yl)ethyl]propanamid - 11 - AIT-0046 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-(2-hydroxyethyl)-propanamidAIT-OO47 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2-(2-hydroxyetho-xy)ethyl]propanamidAIT-0048 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-[(2-hydroxyet- hyl)amino]ethyl]propanamid AIT-0049 3-(l,6-aihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(4-aminosulfo-nylfenyl)ethyl]propanamidAIT-0050 3-(l,6-dihydro-6-cxo-9H-purin-9-yl)-N-[(2-hydroxy-l-mat-hyl-2-f enyl)ethyl] propanamidAIT-0051 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-[(1-ozoethyl)-amino]ethyl]propanamidAIT-0052 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-[l,4-dioxa-8-aza-spiro[4,5]dec-8-yl]jpropanonAIT-0056 hydrasid 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propanovékyselinyAIT-0058 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl)-H-(2-aminoe thyl)pro-panamidAIT-OO59 3-(1»6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2-hydroxypro pyl)-propanamidAlT-0060 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-K'-((2-furanyl)met-hyl]propanamidAIT-0062 3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl)-N-( 2,3-d ihydroxy prop·-1-yl)propanamidAIT-OO63 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-C(2-pyrid inyl)met-hyl] propanamid - 12 AIT-0064 3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl) -H-[ 2-( diethy lamino) et-hyl] propanamidAIT-OO65 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-[[2-(2-oxopyrro- lidin-l-yl)-l-oxoethyl]amino]ethyl]propanamid AIT-0066 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-piperonylpropanamidAIT-0068 3- (1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-y 1) -i?- C 2-( 1-py r rol id iny 1) -ethyl]propanamidAIT-OO69 Ν,Ιί',Ιί” -tri[2-[3-(1»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l~ -oxopropyl]aminoethyl]aminAIT-0070 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[[2-(l-piperidinyl)]ethyl]propanamidAIT-0071 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl]-N-[2-( 2,2'-diethanol-amino)ethyl]propanamidAIT-0072 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-( lH-indol-3-yl)-ethyl]propanamidAIT-0073 methyldiester 2-[(6-amino-9H-purin-9-yl)methyl]butandiolo-vé kyselinyAIT-OO74 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(3-aminopropyl)pro-panamidAIT-OO75 methyldiester 2-[(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)met-hyl] butand iolové kyselinyAIT-0079 ethylester 4-[C 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-y1)-1--oxopropyl]amino]benzoové kyselinyAIT-0080 3- (l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propanová kyselinaAIT-0081 4- nitrofenylester 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-propanové kyseliny 13 AIT-0082 4-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]-amino]benzoová kyselinaAIT-0083 4-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]-amino]benzoová kyselina kombinovaná s l-(dimethylamino)-2--propanolem (l:í) AIT-0084 1- (dimethylamino)-2-pro pyle ster 4-[[3-(l,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]benzoové kyselinyAIT-0085 methyle ster 2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-8-yl)-l--oxopro pyl]amino]-3-fenylpropanové kyselinyAIT-0086 2- [ [ 3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-l-oxopro pyl]-amino]-3-fenylpropanová kyselina AIT-0087 3- (1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-5-yl)-N-[2-(2-deoxyglu-kopyranosyl)]propanamid AIT-0090 4- [[2-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]ethyl]ámino]-2-hydroxy-4-oxo-II,N,N-trimethyl-l-butan-aminiumchlorid AIT-0092 methýlester 4-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l--oxopro pyl]amino]butanové kyselinyAIT-0093 3-[[3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl)-l-oxo propyl]ami-no] propahsulfonová kyselinaAIT-0094 1-[2-[[3-(l,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopro pyl]-hydra z ino]-2-oxoethyl]pyr id iniumchlor idAIT-0095 monohydrochlorid 4-[[3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]amino]-N-[2-(diethylamino)ethyl]benzamidu - 14 - AIT-0096 3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2-oxothiaolan-3--yl)propanamidAIT-OO97 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-Ií-[2-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-hydroxyethyl]propanamidAIT-0098 3-(1,δ-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-(1-fenyl-4-oxo--1,3,8-t r ia za sp iro [ 4,5-d ac-8-y1] pro panonAIT-OO99

3-( 1,6-d ihydro-8-Oxo-9H-pur in-9-yl)-1-(1,2,3,4-tetrahyd-ro-2-azakarbazo-2-yl)propanonAIT-O1OO 3-( 1,β-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(3,4-dihydroxy-fenyl)-2-hydroxyethyIj-itf-methy1propanamidAIT-0102 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-(2-fenylimidazo-l--yl)propanonAIT-0103 ethylestár 1—C 3—(1 *6-dihydro-6-oxo-9H-pnrin-9-yl)-l-oxo-propylj-3-piperidinkarboxylové kyselinyAIT-0105 monohydrochlorid l-(dimethylaraino)-2-propylesteru 4-CÍ3--(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]amino]benzoovékyseliny AIT-0106 1- (d imethylamino)-2-propyle ster 3-(1,6-d ihydro-6-oxo--9H-purin-9-yl)propanové kyseliny AIT-110 3-( 1»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propanová kyselinakombinovaná s l-(dimethylamino)-2-propanolem (1:1) AIT-0111 2- [[3-(l> 6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]-amino]-2-(5-hydroxyl-lfí-indol-3-yl)propionová kyselina - 15 - Následující neuroimunologické vícefunkční farmaceutickésloučeniny mohou být připraveny tak, jak je uvedeno v násle-dujících příkladech, které předmět vynálezu nijak neomezují Příklad 1

Syntéza ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-amino-9H-purin-9-yi)-propionové kyseliny (ΑΪΤ-ΟΟ26) 10,00 g (74,00 mmol) adeninu bylo umístěno do čisté su-ché 500 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchacítyčinkou, zpětným chladičem a sušicí rourkou s CaCl2· Bylopřidáno 3.60 ml absolutního ethanolu a roztok byl míchán,, Ksuspenzi bylo přidáno přibližně 75 mg malých kousků sodíku.Jakmile sodík zcela sreagoval, bylo přidáno 22,2 g (0,222 mol)ethylacetátu a směs byla přivedena k varu pod zpětným chladi-čem. Var pod zpětným chladičem pokračoval přes noc po dobupřibližně 18 hodin a výsledný homogenní roztok barvy červena-vě žlutého odstínu byl pomalu ochlazován na pokojovou teplotu.Při 4°C roztok krystalizoval. Roztok byl filtrován na Buchna-rově nálevce a pevná látka byla promyta bezvodým etherem. Povysušení bylo získáno 15,2 g (64,6 mmol) ethylesteru 3-(1,6--dihydro-6-amino-SH-purin-9-yl)propionové kyseliny (ΑΓΤ-ΟΟ26)ve výtěžku 87 %. Teplota tání 166 - 167 °C„ Příklad 2

Syntéza ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6— oxo-9H-purin-9-yl)pro-pionové kyseliny (AIT-0027) 15,2 g (64,6 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny bylo umístěno do 500 ml baňkys kulatým dnem s 350 ml ledové kyseliny octové a bylo míchánodo úplného rozpuštění. Za míchání bylo přidáno po kapkách bě-hem 1 hodiny za použití kapací nálevky 22,3 g (0,323 mol)NaííOg rozpuštěného ve vodě . Během přidávání sa vytvářel hně-dý dým. Po skončeném přidávání byla baňka s kulatým dnem za-sátkována a roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu - 16 - 24 hod. Přibližně při 45 - 50 °C bylo za sníženého tlaku od-straněno rozpouštědlo. Zbytek byl promyt studeným (0 °C) ab-solutním ethanolem a filtrován. Vznikající pevná látka bylarozpuštěna ve 175 ml směsi ethanolu a vody (70 dílů ethanolua 30 dílů vody) a roztok byl ochlazen na 0 °C přes noc. Vzni-kající sraženina byla zfiltrována, umístěna do baňky a magne-tickou míchací tyčinkou a promývána vodou za intensivního mí-chání. Roztok byl filtrován na Buchnerově nálevce a vznikajícípevná látka byla sušena ve vakuu při teplotě 50 °C. Bylo zí-skáno 4,6 g (19,5 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-pu-rin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) ve výtěžku 30 %. Bodtání 197 - 200 °C. Příklad 3

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[(1-ethylpyrroli-din-2-yl)methyl]propanamidu (AIT-CO29) 250 mg (1,06 mol) ethylesteru 3-(1,6-aihydro-6-oxo-9H-pu-rin-9-yl)propionové kyseliny bylo umístěno do 10 ml baňky s ku-latým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou, zpětným chla-dičem a sušicí rourkou s CaGlg. Poté byly přidány 3 ml acetoni-trilu a 280 mg (2,18 mmol) 2-(aminomethyl)-l-ethylpyrrolidinu aroztok byl zahříván pod zpětným chladičem. Veškerý ester se podzpětným chladičem nerozpustil, ale jak reakce pokračovala, roz-tok se stal homogenní® Zahřívání pod zpětným chladičem pokračo-valo po dobu 17 hodin a za tuto dobu se rozpouštědlo zcela odpa-řilo® Zbytek byl zpracován acetonitrilem a ochlazen, přičemž sevytvořila bílá sraženina. Ke vzniklé sraženině byl přidán estera roztok byl míchán za účelem promytí této sraženiny. Roztokbyl filtrován na Buchnerově nálevce a sraženina byla promytaetherem. Po vysušení bylo získáno 300 mg (0,94 mmol) 3-(1,6--dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-C(l-ethyl-2-pyrrolidinyl)methyl]propanamidu (AIT-0029) jako ne zcela bílá pevná látka. Bod tá-ní 177 - 180 °C. - 17 - Příklad 4

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N —[2-4-morfoli-nyl)ethyl]propanamidu (AIT-0031) 250 mg (1,06 ramol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) bylo umístěno do10 ml baňky s kulatým dnem s magnetickou míchací tyčinkou,zpětným chladičem, sušící rourkou s CaC^ a s 3 ml acetonit-rilu. Poté bylo přidáno 280 mg (2,15 mmol) 4-(2-aminoethyl)-morfolinu. Roztok byl přiveden k varu pod zpětným chladičem avar pod zpětným chladičem pokračoval po dobu 18 hodin» Dálebylo přidáno 280 mg (2,15 mmol) 4-(2-aminoethyl)morfolinu,část acetonitrilu byla odpařena, přičemž vznikl koncentrova-nější roztok, který byl vařen pod zpětným chladičem po dobu 28hodin. K tmavému viskóznímu zbytku byly přidány 4 ml acetonit-rilu a roztok byl míchán. Vzniklá bílá sraženina byla zachyce-na na Buchnerově nálevce a pevná látka byla promyta acetonitrilem a poté etherem. Po vysušení bylo získáno 250 mg 3-(l,6-di-hydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-K-[2-(4-morfolinyl)ethyl]propanami-du (AIT-0031) jako ne zcela bílá látka ve výtěžku 74 Příklad 5

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-^-(l-benzylpiperi-din-4-yl)propanamidu (AIT-0033) 250 mg (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1>β-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) bylo umístěno do10 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací ty-činkou, zpětným chladičem a sušicí rourkou s CaG^· Poté bylopřidáno 604 mg (3»17 mmol) 4-amino-l-benzylpiperidinu a 1 mlacetonitrilu a roztok byl přiveden k varu pod zpětným chladi-čem. Zahřívání pod zpětným chladičem pokračovalo po dobu 17hodin, acetonitri! byl odpařen, směs byla zahřívána na teplotu120 °C po dobu 8 hodin, přičemž vznikl tmavý viskózní olej,který byl zpracován etherem za míchání. Roztok byl filtrován - 18 - a oranžově hnědá pevná látka byla promývána etherem. Po vysušení bylo získáno 385 mg hnědé pevné látky, která byla mícbánas acetonem, filtrována, promyta acetonem a poté etherem. Výtě-žek činil 200 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(l-ben-zylpiperidin-4-yl)propanamidu (AIT-0033) ve formě pevné látky.Analýzou byla stanovena čistota produktu, která byla 65 %. Příklad 6

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-Ií-[3-(2-oxopyrro-lidin-l-yl)propyl]propanamidu (AIT-OO34) 25Ο mg (1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) bylo umístěno do v 10 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčin-kou, zpětným chladičem a sušicí rourkou s CaCl2. Poté bylo přidáno 452 mg (3,18 mmol) l-(3-aminopropyl)-2-pyrrolidinonu a1 ml acetonitrilu. Roztok byl zahříván pod zpětným chladičempo dobu 17 hod., přičemž vznikl tmavý viskózní olej. Olej bylchromatografován 15 g silikagslu, vyluhován směsí obsahující40 % methanolu a 60 % ethylacetátu. Bylo získáno 185 mg 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-R-C 3-(2-oxopyrrolid in-l-yl)pro-pyl]propanamidu (AIT-0034) ve formě bílé, čisté tuhé látky, vevýtěžku 53 %· Příklad 7

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-lí-[2-(l-methyl-pyrrol-2-yl)ethyl]propanamidu (AIT-OO35) 25Ο mg (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) a 400 mg (3,33mmol) 2-(2-aminoethyl)-l-methylpyrrolu bylo zahříváno v 10 ml v bance s kulatým dnem za míchání (bez rozpouštědla) při teplo-tě 110-120 °C po dobu 3,5 hod. Tmavý viskózní zbytek bylzpracován směsí etheru a acetonu^:!) a byl intenzivně míchánpo dobu 30 minut. Sraženina byla odfiltrována a promyta ethe-rem a acetonem, sušena ve vakuu, přičemž bylo získáno 265 mg - 19 - 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(l-methylpyrrol-2--yl)ethyl]propanamidu (AIT-OO35) ve formě na zcela bílé pev-né látky a ve výtěžku 80 %. Příklad 8

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-IT-C3-(l-imida-zoDpropyljpropanamidu (AIT-0037) 250 mg (1,06 mmol) ethylestaru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-puxin-9-yl)pxopionové kyseliny (AIT-0027) bylo zahřívános Boo mg (3,99 mmol) l-(3-aminopxopyl)imidazolu v 10 ml baň-ce' s kulatým dnem na 120 °0 po dobu 2 hodin a za míchání.Vzniklý viskosní žlutý olej byl chxomatogxafován na 15 g si-likagelu, přičemž bylo jako elučního činidla použito směsiobsahující 60 % methanolu a 40 % ethylacetátu. Po odpařenírozpouštědla vznikl vysoce viskózní bezbarvý olej. Tento olejbyl rozpuštěn v přibližně 50 ml ethyletheru a poté byl pomalupřidáván methanol, dokud se tvořila bílá sraženina. Sraženinabyla vakuově odfiltrována a promyta ethyletherem. Po vysušeníbylo získáno 200 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-Ií--[3-(l-imidazolyl)propyl]propanamidu (AIT-0037) ve formě bílépevné látky. Výtěžek činil 66 %. Příklad 9

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[3-(4-morfoli-nyl)propyl]propanamidu (AIT-0043) 475 mg (3,29 mmol) 4-(3-aminopropyl)morfolinu bylo umís-těno do 10 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou. Baňka byla vyhřátá na 100 - 120 °C a za mícháníbylo přidáno 250 mg (1,06 mmol) ethylestaru 3-(1,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027). Zahřívánípokračovalo po dobu 2 hodin, roztok byl ochlazen na pokojovouteplotu a za míchání zpracován 8 ml acetonitrilu. Po 20ti mi-nutovém míchání byla odfiltrována vzniklá bílá sraženina, filtrát byl promyt acatonitrilem a poté etherem. Výtěžek činil - 20 - 130 mg bílé pevné látky. íáatečný louh byl opět filtrován,přičemž bylo získáno dalších 100 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)-H-[3-(4-morfolinyl)propyl]propanamidu (AIT-0043).Dosažený výtěžek činil 65 %. Teplota tání 145 - 148 °C. Příklad 10

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-D-[3-(2-methylpi-peridin-l-yl)propyljpropanamidu (AIT-0044) 0,565 g (3,62 mmol) l-(3-aminopropyl)-2-pipekolinu byloumístěno do 10 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickoumíchací tyčinkou. Baňka byla zahřáta na 120 °C a poté bylo při-dáno 250 mg (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH--purin-9-yl)pxopionové kyseliny (AIT-0027). Směs byla zahřívá-na 2 hodiny při teplotě 120 °C a poté byla ochlazena. Výslednýsvětle oranžový viskozní olej byl zpracován 8 ml acetonitrilua míchán 25 min. Roztok byl filtrován a pevná látka byla promy-ta acetonem a etherem. Výtěžek činil 254 mg 3-(1,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)-H-[3-(2-methylpiperidin-l-yl)propyl]pro-panamidu (AIT-0044) ve formě ne zcela bílé látky. Příklad 11

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(l-methylpyr-rolidin-2-yl)athyl]propanamidu (AIT-0045) 0,565 g (4,41 mmol) 2-(2-aminoethyl)-l-methylpyrrolidinubylo umístěno do 10 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetic-kou míchací tyčinkou. Roztok byl zahříván a poté bylo přidáno0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin--9-yl)propionové kyseliny a vzniklý roztok byl zahříván po dobu2 hodin na teplotu 110 - 120 °C. Oranžový roztok byl ochlazenna pokojovou teplotu a poté bylo přidáno 8 ml acetonitrilu aroztok byl míchán 20 minut, aby se promyla pevná látka. Roztokbyl filtrován na. Buchnerově nálevce a pevná látka byla promytascetonitrilem a poté etherem. Po vysušení bylo získáno 265 mg3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-lT-[2-( l-methylpyrrolid in-2--yl)ethylpropanamidu (AIT-0045) ve formě bílé pevné látky. - 21 Příklad 12

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-nT-(2-hydroxyethyl)propanamidu (AIT-CO46) 0,500 g (8,19'mmol) athanolaminu bylo umístěno do 10 mlbanky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou»Banka byla zahřáta a za míchání bylo přidáno 0,250 g (1,06mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-ó-oxo-9K-purin-9-yl)propio-nové kyseliny (AIT-0027). Roztok byl poté 1 hodinu zahřívánpři teplotě 120 °G, ochlazen na pokojovou teplotu a poté bylopřidáno 8 ml acetonitrilu. Za neustálého míchání vznikala bí-lá sraženina. Roztok byl filtrován a pevná látka byla promytaacetonitrilem a poté etherem. Pevná látka byla sušena při te-plotě 100 °C za sníženého tlaku a bylo získáno 240 mg 3-(1,6--dihydro-6-oxo-9H-purin-S-yl)-R-(2-hydroxyethyl)propanamidu(AIT-OO46) ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činil 90 %,Teplota tání 225 - 229 °C. Příklad 13

Syntéza 3-( 1,6-dibydro-6-oxo-3H-purin-9-yl)-iT-[2-(2-hydro.xy-ethozy)ethyl]propanamidu (AIT-047) 0,500 g (4,76 mmol) 2-(2-aminoethozy)ethanolu bylo za-hříváno s 0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) v 10 mlbaňce s kulatým dnem při teplotě 120 °C 1 hodinu. Roztok bylzpracován 8 ml acetonitrilu a intenzivně míchán 20 minut. Povysušení bylo získáno 265 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin--9-yl)-lí-[2-(2-hydroxyethoxy)ethyl] propanamidu (AIT-047) veformě bílé pevné látky. Výtěžek činil 85 %· 22 - Příklad 14

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2-[(2-hydroxy-ethyl)amino]ethyl]propanamidu (AIT-0048) 0,500 g (4,80 mmol) 2-(2-aminoethylamino)ethanolu a0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-pu-rin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) bylo zahříváno zamíchání v 10 ml baňce s kulatým dnem 1 hodinu. Raakční směsbyla chromatografována v koloně s 15 g silikagelu, přičemž by-lo použito jako elučního činidla směsi obsahující 60 % metha-nolu a 40 % ethylacetátu. Jakmile prošlo přes kolonu 200 mlrozpouštědla byl eluant nahrazen eluantem obsahjícím 60 % raet-hanolu a 20 % ethylacetátu a nakonec byl použit 100% methanol»Frakce obsahující produkt byly spojeny a odpařením byl získánbezbarvý olej. Olej byl zpracován 50 ml etheru a 5 ml methanolua byl promíchán špachtlí. Olej byl nechán stát přes noc a vzniklá pevná látka byla získána filtrací v množství 120 mg. Pevnálátka byla promyta etherem a bylo zjištěno, Ž6 je poněkud hyg-roskopická. Výtěžek činil 38 %. Příklad 15

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(4-aminosul-fonylfenyl)ethyl]propanamidu (AIT-0049) 0,500 g (2,50 mmol) 4-(2-aminoethyl)benzensulfonamidu by-lo umístěno do 10 ml baňky s kulatým dnem. Baňka byla zahřívánadokud se pevná látka neroztavila. Teplota byla ustálena na150 °C a poté bylo přidáno 250 mg (1,06 mmol) ethylesteru 3--(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT--ΟΟ27) a směs byla zahřívána 1 hodinu za míchání. Bylo přidáno10 ml acetonitrilu a pevná látka byla rozdrcena špachtlí zaneustálého míchání. Míchání pokračovalo dokud nevymizelychuchvalce (refluxující acetonitril)· Horký acetonitrilový t roztok byl rychle zfiltrován za vakua a bílá pevná látka by-la promyta acetonitrilera o poté etherem. Bylo získáno 280 mg - 23 - 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-R-[2-(4-aminosulfonylfe-nyl)ethyl]propanamidu (AIT-OO49) va formě bílé pevné látky. Vý-těžek činí 68 %. Teplota tání 212 - 216 °C. Příklad 16

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-K-[(2-hyaroxy-l--methyl-2-fenyl)ethyl]propanamidu (AIT-0050) 0,535 g (3,54 mmol) (lS,2R)-(+)-norefedrinu bylo umístěnodo 10 ml baňky s kulatým dnem. Baňka byla sahřáta na 120 °C ado roztaveného norefedrinu bylo přidáno za míchání 250 mg(1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-propionové kyseliny (AIT-0027). Reakce skončila po 4,25 hod. apoté bylo přidáno k pevné hmotě 8 ml acetonitrilu a tato hmotabyla rozdrcena špachtlí. Roztok byl míchán ještě 45 minut a po-té byl filtrován odsátím. Tuhá bílá látka byla promyta acetonit-rilem a poté etherem. Po vysušení bylo získáno 210 mg 3-(l,6-di-hydro-6-ojco-9H-purin-9-yl)-H-[(2-hydroxy-l-methyl-2-fenyl)et-hyl]propanamidu (AIT-0050) ve formě pevné bílé látky. Výtěžekčinil 58 %. Teplota tání 210 - 215 °C. Příklad 17

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-R-(2-[(1-oxoet-hyDaminojethylpropanamidu (AIT-0051) 0,516 g (5,05 mmol) N-acetylethylendiaminu bylo umístěnodo 10 ml baňky s kulatým dnem. Baňka byla zahřáta na 120 °C aza míchání bylo přidáno 0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6--dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027). Roztok byl zahříván po dobu 1 hod. na 120 °C a poté bylo přidánoza míchání k viskóznímu oleji 8 ml acetonitrilu. Dále byl přidánpřibližně 1 ml methanolu a roztok byl intenzivně míchán po 30minut. Vzniklá bílá sraženina byla vakuově odfiltrována a pro-myta acetonitrilem a etherem. Po vysušení bylo získáno 237 mg3-( 1,6-d ihydro-6-o.xo-9H-pur in-9-y 1)-N-[2-[ (1-οςο ethyl )amino]-ethyljpropanamidu (AIT-0051) ve formě bílé pevné látky. Výtěžekčinil 7θ %· - 24 - Příklad 18

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-[1,4-dioxa-8--&2aspiro[4,5]dec-8-yl]propanonu (AIT-0052) 0,500 g (3,49 mmol) l,4-dioxa-8-azaspiro[4,5jdekanu by-lo umístěno do .10 ml baňky s kulatým dnem a magnetickou mí-chací tyčinkou. Amin byl zahřát na 110 °C a bylo přidáno0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-pu-rin-9-yl)p*opionové kyseliny (AIT-0027) a roztok byl ještězahříván 4 hod. Reakce byla zastavena a bylo přidáno 10 mlacetonitrilu, pevná látka byla rozdrcena špachtlí a roztokbyl míchán ještě 30 minut. Roztok byl filtrován a pevná látkabyla promyta acetonitrilem a etherem. Po vysušení bylo získá-no 130 mg 3-(l,6-dihydro-6-oro-9H-purin-9-yl)-l-[l,4-dioxa--8-azaspiro[4,5]-dec-8-yl]propanu (AIT-0052) ve formě bílépevné látky. Výtěžek činil 37 %. Příklad 19

Syntéza hydrazidu 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propi-onové kyseliny (AIT-OO56) 1,181 g (5,00 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) bylo umístěno do25 ml baňky opatřené magnetickou míchací tyčinkou. Bylo při-dáno přibližně 5 ml absolutního ethanolu a poté 2,50 g(50,00 mmol) hydřazinhydrátu a roztok byl míchán v uzavřenébaňce při pokojové teplotě. Po 30ti minutách se vytvořilo vět-ší množství sraženiny a roztok byl ponechán v klidu přes noc.Poté byl roztok vakuově filtrován a bílá pevná látka byla pro-myta ethanolem a poté etherem. Po vysušení bylo získáno 0,890ghydrazidu 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyse-liny (AIT-OO56) ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činil80 %. - 25 - Příklad 20

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-K-(2-aminoethyl)-propanamidu (AIT-0058) 1,500 g (25,00 m«!al)ethylendiaminu bylo mícháno při poko-jové teplotě s 250 mg (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny po dobu 1 hod* Roz-tok byl zpracován 4 ml acetonitrilu a 20 ml etheru za míchání.Po filtraci a promytí etherem bylo získáno 245 mg 3-(l,6-dihyd-ro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-R-(2-aminoethylpropanamidu (AIT-0058)jako ne zcela žlutá pevná látka. Výtěžek činil 92 %. Teplota tání 215 - 219 °0. Příklad 21

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-R-(2-hydroxypropyl)propanamidu (AIT-OO59) 0,500 g (6,66 mmol) DL-l-amino-2-propanolu a 0,250 gethylesteru(1,06 mmol) 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-propionové kyseliny (AIT-0027) bylo spolu zahříváno v 10 mlbaňce s kulatým dnem za míchání při teplotě 120 °0 1 hod. Roz-tok byl ochlazen na pokojovou teplotu a bylo přidáno 10 mlacetonitrilu a roztok byl dála promícháván. Roztok byl rozmí-chán s malým množstvím methanolu (přibližně 1 ml) a byl míchán,dokud nevznikala jemná bílá sraženina. Roztok byl filtrována bílá pevná látka byla promyta acetonitrilem a poté etherem.

Po vysušení bylo získáno 240 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin--9-yl)-N-(2-hydroxypropyl)propanamidu (AIT-0059) ve formě bílépevné látky. Výtěžek činil 85 %. Teplota tání 212 - 216 °C. Příklad 22 *

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-K-(2-hydroxypropyl)propanamidu (AIT-0060) 0,500 g (5,15 mmol) furfurylaminu a 0,250 g (1,06 mmol)ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové ky-seliny (AIT-0027) bylo zahříváno na teplotu 120 °C po dobu - 26 - 2 hod. Roztok byl ochlazen na pokojovou teplotu, přidáno 10 mlacetonitrilu a roztok byl dále míchán. Vzniklá sraženina bylafiltrována a bílá pevná látka byla promyta acetonitrilem a po-té etherem. Po vysušení bylo získáno 170 mg 3-(l,6-dihydřo-6--oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2-hydroxypropyl)propanamidu (AIT-0060)ve formě bílé pevné látky. Příklad 23

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-S-yl)-N-(2,3-dihydro-prop-l-yl)propanamidu (A1T-OO62) 0,500 g (5,49 mmol) 3-amino-l,2-propandiolu bylo umístě-no do 10 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchacítyčinkou. Baňka byla zahřáta na 110 °C a za míchání bylo při-dáno 0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027). Roztok byl mí-chán při teplotě 100 - 110 °G po dobu 1 hod., poté byl ochla-zen na pokojovou teplotu a bylo přidáno 10 ml směsi methanolu aacetonitrilu (1:1) a roztok byl dále intenzivně míchán po do-bu 30 minut. Vzniklá bílá sraženina byla filtrována na Buch-nerově nálevce a bylo získáno 272 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-5H-purin-9-yl)-N-(2,3-dihydroxyprop-l-yl)propanamidu (AIT-OO62)ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činil 91 %. Teplota tání232 - 235 °0. Příklad 24

Syntéza 3-( 1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-hT-[(2-pyridinyl)-methyl]propanamidu (AIT-OO63) 0,500 g (4,62 mmol) 2-(aminomethyl)pyridinu a 0,250 g(1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-propionové kyseliny (AIT-0027) bylo spolu zahříváno za mí-chání v 10 ml baňce s kulatým dnem po dobu 90 min. Roztokztuhnul, byl ochlazen na pokojovou teplotu, bylo k němu přidáno10 ml acetonitrilu, pevná látka byla rozdrcena špachtlí, ažse vytvořila jemná bílá sraženina. Sraženina byla filtrovánana Buchnerove nálevce a pevná látka byla promyta acetonitri-lem a poté etherem. Bylo získáno 267 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo- - 27 - -9H-purin-9-yl )-!<-[(2-pyridinyl)methyl]propanamidu(A.IT-CO63) ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činil 84 %. Příklad 25

Syntéza 3-Cl,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(diethyl-amino)ethyl]propanamidu (AIT-CO64) 0,500 g (4,30 mmol) N,lí-d iethylend iaminu bylo umístěnodo 10 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchacítyčinkou. Amin byl zahřát na 110 °C a za míchání bylo při-dáno 0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo--9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027). Roztok bylzahříván 1 hod. při teplotě 110 °C a poté byl ochlazen na pokojovou teplotu. Poté bylo přidáno 10 ml scetonitrilu a roz-tok byl dále míchán 15 min. Získaná bílá. sraženina byla fil-trována a promyta acetonitrilem a etherem. Po vysušení bylozískánol95 mg 3-(l,6-dihydro-6-cxo-9H-purin-9-yl)-E-[2--(diethylsmino)ethyl]propanamidu (AIT-OO64) ve formě bílépevné látky. Vý Výtěžek činil 60 %♦ Příklad 26

Syntéza 3-(1»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2-[(2-(oxo-pyrrolid in-l-yl)-l-oxcethyl]amino]ethyl]propanamidu(AIT-0065) 3,00 g (19,09 mmol) methyl-2-oxo-l-pyrrolidinacetátua 11,47 g (190,9 mmol) ethylendiaminu bylo mícháno v 50 mlbaňce s kulatým dnem při pokojové teplotě 20 hod. Přebytekethylendiaminu byl odstraněn snížením tlaku při 50 °C« Bylozískáno 0,620 g (3,35 mmol) vysoce viskózního světle žluté-ho oleje iT-(2-aminoe thyl)-3-[2-oxo-l-pyr rol id inyl) acetamidu.Tento olej byl umístěn do 10'ml baňky s kulatým dnem opatře-né magnetickou míchací tyčinkou a byl zahřát na 140 °C. Potébylo přidáno 0,/250 g (l,06;mmol) ethylesteru 3-( 1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0027). Roztokse stal rychle homogenní a teplota byla snížena na 120 °C. 28 -

Reakce pokračovala ještě 135 min. Poté bylo přidáno 8 ml bez-vodého etheru, roztíráno s methanolem, dokud se tvořila bílásraženina. Roztok byl vakuové filtrován a bílá pevná látka by-la promyta acetonitrilem a etherem. Získaný produkt, 300 mg(0,8 mmol) 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-lT-[2-[[2-(oxo-pyrrolidin-l-yl)-l-oxoethyl]amino]ethyl]propanamidu (AIT-OO65)byl čistě bílý a velmi dobře rozpustný ve vodě. Výtěžek činil75 %. Příklad 27

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-piperonylpropan-amidu (AIT-0066) 0,500 g (3,31 mmol) piperonylaminu bylo umístěno do 10 mlbanky s kulatým dnem a magnetickou míchací tyčinkou a bylo za-hřáto na 110 °C. Za míchání bylo k aminu přidáno 0,250 g (1,06mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propiono-vé kyseliny (AIT-0027). Roztok byl zahříván 40 min., kdy reak-ční směs ztuhla. Ke zbytku bylo přidáno 10 ml acetonitrilu aroztok byl míchán asi 20 min. Bílá sraženina byla filtrovánana Buchnerově nálevce a byla promyta acetonitr ilem a poté et-herem. Bylo získáno 245 mg AIT-0066 ve formě bílé pevné látky.Výtěžek Činil 68 %o Příklad 28

Syntéza 3-( 1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-Ii-[2-( 1-pyrroli-dinyl)ethyl]propanamidu (AIT-0068) 0,500 g (4,38 mmol) l-(2-aminoethyl)pyrrolidinu bylo za-hříváno při teplotě 100 - 110°C s 0,250 g (1,06 mmol) ethyl-esteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny(AIT-0027) v 10 ml baňce s kulatým dnem za míchání 1 hodinu.Poté bylo přidáno 10 ml acetonitrilu a roztok byl míchán 15minut. Výsledná sraženina byla vakuově filtrována a pevná lát-ka byla promyta acetonitrilem a poté etherem. Bylo získáno275 mg 3-(l,6-dihydro-6-o;<o-9H-pur in-9-y1)-1-(2-(1-pyrrolidin)·ethyl]propanamidu (AIT-0C68) ve forma bílé pevné látky. Výsle-dek činil 85 %· - 29 - Příklad 29

Syntéza I\T,NZ,H” -tri[2-[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)--1-oxopropyl]aminoethyl]aminu 0,750 g 0,17 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo--SH-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027) bylo umístě-no do 25 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickou mícha-cí tyčinkou. Poté byly přidány 3 ml methanolu společně s28 mg (0,57 mmol) UaCIí a 157 mg (1,07 mmol) tris-(2-aminoet-hyl)aminu. Roztok byl zahříván pod zpětným chladičem za mí-chání pod atmosférou dusíku. Roztok se rychle stal homogenní(přibližně po 15 min.). Ke. zbytku byly přidány po 48 hod.další 3 - 4 ml methanolu. Velká část zbytku zůstala nerozpustná a proto bylo pokračováno v zahřívání pod zpětným chladičemdalších 20 hod. Roztok byl ochlazen na pokojovou teplotu abylo přidáno 20 ml acetonitrilu. Pevná bílá sraženina bylaz roztoku odfiltrována a promyta acetonitrilem a poté ethe-rem. Bylo získáno 57 mg ne zcela bílé pevné látky. K olejna-tému zbytku bylo přidáno 20 ml acetonitrilu spolu s 3 ml met-hanolu. Roztok byl míchán a zahříván pod zpětným chladičemdokud se tvořila ne zcela bílá sraženina. Po filtraci, promy-tí acetonitrilem a etherem bylo získáno 686 mg oranžově pev-né látky. Pevný vzorek byl rozpuštěn v minimálním množstvívody a byl chromatografován 16 g silikagelu, přičemž jakoeluční činidlo bylou, použitá směs obsahující 90 % methanolu a10 % vody. Všechny frakce obsahující produkt byly spojeny aodpařeny. K pevnému zbytku byl přidán acetonitril a roztokbyl filtrován. Pevná látka byla promyta etherem a bylo zí-skáno 170 mg -tri[2-[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin- -9-yl)-l-oxopropýl]aminoethyl]aminu (AIT-0069) ve formě ne-hygroskopické bílé pevné látky. Výtěžek činil 22 %. Příklad 30

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[[2-(l-pipe-rid inyl)]e thyl]propanamidu 0,500 g (3,90 mmol) l-(2-aminoethyl)piperidinu bylo sz umístěno do 10 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickou 30 - míchací tyčinkou. Amin byl zahřát na teplotu 100 - 110°Ca k promíchávanému roztoku bylo přidáno 0,250 g (1,06 mmol)ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionovékyseliny (AIT-0027). Roztok byl zahříván po dobu 1 hodiny,přičemž ztuhl, poté byl ochlazen na pokojovou teplotu a by-lo přidáno 10 ml acetonitrilu. Směs byla míchána a pevnálátka byla odsáta.na Buchnerově nálevce. Bílé krystaly by-ly promyty acetonitrilem a poté etherem. Bylo získáno290 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[[2-(l-pipe-ridinyl]ethyl]propanamidu (AIT-0070). Výtěžek'činil 86 %. Příklad 31

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(2,2'-di-et hano lamino )ethyl] propanamidu 0,500 g (3,37 mmol) K,H-bis(2-hydroxyethyl)ethylendia-minu bylo umístěno do 10 ml baňky s kulatým dnem opatřenémagnetickou míchací tyčinkou. Amin byl zahřát na teplotu110 °C a k promíchávanému roztoku bylo přidáno 0,250 g(1,06 mmol) ethylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0027). Roztok byl zahříván 1 hod.poté ochlazen na pokojovou teplotu. Ke zbytku bylo přidáno20 ml etheru a po kapkách byl k promíchávanému roztoku při-dáván methanol, dokud se tvořila v hojné míře bílá sraženi-na. Roztok byl dále míchán až do úplného rozpuštění přítom-ných hrudek. Roztok byl poté filtrován a čistá bílá pevnálátka byla promývána acetonitrilem a poté etherem. Bylozískáno 200 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-lT-C2--(2'-diethanolamino)ethyl]propanamidu (AIT-0071). Výtěžekčinil 56 %. Příklad 32

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(lH— indol-3-yl)ethyl]propanamidu (AIT-0072) 0,700 g (4,37 mmol) tryptaminu bylo umístěno do 50 mlbanky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou. - 31 -

K rozpuštění tryptaminu bylo přidáno 5,0 dimethylsulfoxidu.Jakmile přešel veškerý tryptamin v roztok, bylo přidáno 1,0 g(3,04 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9K-pu-rin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0C81) a baňka byla uzavřenazabroušenou zátkou. Směs byla míchána při pokojové teplotě podobu 5 hod. Reakční směs byla nalita do 60 ml acetonu, pro-dukt byl filtrován, dvakrát promyt 10 ml acetonu a sušen navzduchu. Bylo získáno 0,813 g 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin--9-yl)-B-[2-(lH-indol-3-yl)ethyl]propanamidu. Výsledek činil48 % (čistota 99,3 %). Teplota tání 204 - 206 °GO Příklad 33

Syntéza methyldiesteru 2-[(l,6-dihydro-6-amino-9E-purin-9-yl)-methyl]butandiové kyseliny (AIT-0073) 5,00 g (37,00 mmol) adeninu bylo umístěno do 110 ml baň-ky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou azpětným chladičem. Poté bylo přidáno 70 ml bezvodého methanoluspolu s 40 mg kovového sodíku. Roztok byl míchái} pokud se vše-chen sodík nespotřeboval. Poté bylo přidáno 23,41 g (0,148mmol) dimethylitakonátu a roztok byl zahříván pod zpětnýmchladičem. Zahřívání pod zpětným chladičem pokračovalo ještě2 dny. Roztok byl převeden do 250 ml baňky a bylo k němu při-dáno 50 ml methanolu a 80 mg kovového sodíku. Roztok byl za-hříván pod zpětným chladičem. Po několika hodinách byla reak-ce zastavena a roztok byl ochlazen na pokojovou teplotu. Pevnálátka byla odsáta na Buchnerově nálevce, promyta methanolem apoté etherem. Po vysušení bylo získáno 8,10 g methyldiesteru2-C(1,6-dihydro-6-amino-9H-purin-9-yl)methyl]butand iové kyse-liny (AIT-0073) ve formě bílých krystalků. Výtěžek činil75 %. Teplota tání 185 - 187 °C. Příklad 34

Syntéza 3-( 1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-B-(3-amino pro pyl)-propanamidu (AIT-OO74) 0,250 g (1,06 mmol) ethylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo--9H-purin-9-yl)propionové kyseliny bylo přidáno k 1,85 g - 31a - (25,0 mmol) 1,3-diaminopropanu v 10 ml baňce a kulatým dnemopatřené magnetickou míchací tyčinkou. Roztok byl míchán připokojové teplotě 2 hod. Poté bylo přidáno 10 ml etheru aroztok byl dále míchán několik minut. Roztok byl dekantován,k olejovému zbytku bylo přidáno 5 ml acetonitrilu a 4 ml z etheru a roztok byl míchán. Iáethanol byl přidáván po kap-kách, dokud se tvořila sraženina. Roztok byl filtrován apromyt acetonitrilem a etherem. Bylo získáno 205 mg 3-(1,6--d ihydro-6-oxo-SH-pur in-S-yl) -II-(3-amino pro pyl) pro pana midu(AIT-0074). Výtěžek činil 73 Teplota tání 172 - 175 °0. Příklad 35

Syntéza methyld iesteru 3-C(1,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-methyl]butandiové kyseliny (AIT-OO75) 2,00 g (6,62 mmol) dimethylesteru 2-[(1,6-dihydro-6--amino-9H-purin-S-yl)methyl]butandiové kyseliny (ΛΙΤ-0073)bylo umístěno do 50 ml banky s kulatým dnem opatřené magne-tickou míchací tyčinkou. Poté bylo přidáno 10 ml ledové - 32 kyseliny octové a roztok byl míchán, dokud se nestal homogen-ní. K promíchávanému roztoku bylo přidáno po kapkách 2,35 g(34,10 mmol) NaNOg ve 4 ml E2O. Uzavřený roztok byl míchán24 hod. při pokojové teplotě. Poté bylo přidáno 0,775 g(11,23 mmol) v 1 ml HgO a roztok byl opět míchán dal- ších 24 hod. Kyselina octová byla odstraněna na rotační od-parce za sníženého tlaku. Voda byla odstraněna stejným způso-bem. Tento postup se opakoval, dokud nebylo zjištěno, že od-chází malé množství kyseliny octové. K polosuchému zbytku by-lo přidáno 10 ml H^O, čímž došlo k úplnému rozpuštění směsi0Roztok byl extrahován 30 - 40 ml acetonitrilu a vodná vrstvabyla odstraněna. Organická vrstva byla 2x promyta 30 ml nasy-ceného solného roztoku. Po odpaření rozpouštědla byl získánsvětle oranžový olejovitý zbytek. Tento zbytek byl zpracován35 ml ethyletheru a rozetřen s methanolem. Bylo získáno 6l5mgmethyldiesteru 3-C(l,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-y1]methyl]-butandiové kyseliny (AIT-0075) ve formě ne zcela bílé pevnélátky. Výtěžek činil 31 %. Teplota tání 130 - 135 °č. Příklad 36

Syntéza ethylesteru 4-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)--1-oxopropyl]amino]benzoové kyseliny (AIT-OO79) I65 mg (0,50 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 64 mg(0,50 mmol) ethylesteru 4-aminobenzoové kyseliny bylo spoluzahříváno v 1,5 ml dimethylsulfoxidu při teplotě 35 - 40 °Cpo dobu 72 hod. Na dně banky se objevila bílá sraženina. Bylopřidáno 10 ml acetonu a pevná látka byla odsáta na Buchnero-vě nálevce. Pevná látka byla 2x promyta acetonem a usušena.Výtěžek činil 53 mg ethylesteru 4-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-SK--purin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]benzoové kyseliny (AIT-OO79)ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činil 30 %. Teplota tání265 - 269 °C. - 33 - Příklad 37

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)propanové kyse- liny (AIT-0080) 20,00 g (64,66 mmol) ethylesteru 3-( 1,6-dihydro-6-oxo--9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0027) bylo umístěno v do 500 ml banky s kulatým dnem, opatřené magnetickou mícha-cí tyčinkou. Do banky bylo přidáno 150 ml vody a roztok bylmíchán. K míchanému heterogennímu rozteku bylo přidáno 10,46 g (0,1854 -mol) pelet KOK. Během několika minut seroztok stával homogenním a získal světle zelenou barvu. Roztok byl míchán při pokojové teplotě 3,5 hod. Roztok byl okyselen koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou na pH 1,0,Sražený roztok byl ponechán při 4°0 přes noc. Pevná látkabyla odfiltrována, postupně promyta vodou, methanolem a et-herem a vysušena. Bylo získáno 17,63 g (84,7 mmol) 3-(1,6-—dihydro-6—oxo-9K-purin-S-yl)propanové kyseliny (AIT-0080)ve formě bílé pevné látky. Výtěžek činil 100 %, Příklad 38

Syntéza 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0061) 7,00 g (0,03363 mol) 3-(l,6-dihydro-6-oxo-5H-purin-S--yl)propanové kyseliny (AIT-008D) bylo umístěno do 250 mlbaňky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací tyčin-kou. Bylo přidáno 70 ml bezvodého pyridinu a roztok byl mí-chán. K tvořícímu se heterogennímu roztoku bylo pod proudemdusíku přidáno 11,46 g (0,04876 mol) 4-nitrofenyl trifluor-methylacetátu. Roztok byl míchán při teplotě 30 °C po dobu17 hodin. Vznikající kaše byla ochlazena na pokojovou teplotu a k míchanému roztoku bylo přidáno 175 ml destilované vody. Roztok se stal homogenní a poté se začala tvořit sraže-nina. Směs byla umístěna na několik -hodin do ledničky, kdebyla udržována při teplotě pod 0 °C. Roztok byl vyjmutz ledničky a roztaven. Pevná látka byla odfiltrována, pro-myta vodou, methanolem a etherem. Po vysušení bylo získáno - 34 - 10,32 g 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9--yl)pro panové kyseliny (AIT-0081) ve formě pevné bílé látky.Výtěžek činil 93 %. Příklad 39

Syntésa 4-CC 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxooropyl]-amino]benzoové kyseliny (AIT-C082) 8,88 g (24,99 mmol) ethylesteru 4-CC3-(1,6-dihydro-S-oxo--9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]benzoové kyseliny (AIT-OG79)bylo umístěno do 500 ml baňky s kulatým dnem se 180 ml vody amagnetickou míchací tyčinkou. K promíchávanému roztoku bylo pokapkách přidáno během 135 ml 0,53 mol vodného roztoku KOH. Roz-tok byl míchán při pokojové teplotě 3,5 hod. Pomocí zředěné EC1bylo pH roztoku upraveno na přibližně 3,0 a poté byl vakuověfiltrován. Vznikající pevná látka byla promyta vodou a methano-lem. Po vysušení za sníženého tlaku při teplotě přibližně45 °C bylo získáno 7,34 g (22,4 mmol) bílé pevné látky, 4-LÍ3--(1,6-d ihydro-6-oxo-S‘H-purin-9-yl)-l-oxo pro pyl] amino] benzoovékyseliny (AIT-C082). Výtěžek činil 90 %. Teplota tání 319 -- 321°C. Příklad 40

Syntéza 4-CC3-(1,6-3 ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]-amino]benzoové kyseliny kombinované s l-(dimethylamino)-2--propanolem (1:1) (AIT-0083). 7,34 g (22,42 mmol) 4-CÍ3—(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9--yl)-l-oxopropyl]amino]benzoové kyseliny (AIT-C082) byl umístě-no do 500 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchacítyčinkou. Bylo přidáno 25 ml vody a bílá kašovitá směs byla mí-chána. Poté bylo k promíchávané kaši přidáno 18,6 g (180,3 mmol)l-(dimethylamino)-2-propanolu (AIT-1000). Roztok se rychle stalhomogenní a reakce pokračovala 90 minut při pokojové teplotě. Poté bylo přidáno 350 ml acetonu a míchaný roztok byl roztírán smethanolem dokud se tvořila v hojné míře bílá sraženina. Po od-sátí a vysušení bylo získáno 9,45 g (22,0 mmol) 4-CC3-(l,6-di-hydro-6-oxo-9K-purin-9-yl)-1-oxopro pyl]amino]benzoové kyseliny 35 - kombinované s l-(dimethylamino)-2_propanolem (1:1) (AIT-0083). Výtěžek činil 98 %. Příklad 41

Syntéza l-(dimethylamino)-2-prop_ylesteru 4-[[3-(l,6-dihyd-ro -6-oxo-SH-pur in-9-yl)-l-oxoprop„yl]amino]benzoové kyseli-ny (áIT-0084) 2,0 g (5,78 mmol) 4-CC3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9--yl)-l-amino]benzoové]kyseliny (AIT-0082) bylo umístěno do100 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací ty-činkou, zpětným chladičem a sušící rourkou. Poté bylo přidá-no 16 ml thionylchloridu a směs byla pomalu zahřívána na te-plotu 55 - 60 °C. po dobu 6 hodin. Reakční směs byla ochla-zena na pokojovou teplotu a přidáno 50 ml benzenu k rozruše-ní krystalické hmoty. Pevná látka byla odfiltrována, dvakrátpromyta 10 ml benzenu a sušena v digestoři 2 hodiny. Běhemsušení produktu bylo přidáno do 100 ml banky s kulovým dnemopatřené magnetickou míchací tyčinkou a sušicí rourkou 20 mldimethylamino-2-propanolu. Produkt byl přidáván opatrně zamíchání. Sušicí rourka byla vyměněna a míchání pokračovalopři pokojové teplotě 6 hodin. Reakční směs byla vlita do500 ml Brlenmayerovy baňky obsahující 300 ml acetonitrilu.Roztok byl míchán 5 minut. Baňka byla potažena folií a bylaponechána přes noc stát v digestoři při pokojové teplotě.Pevná látka byla odfiltrována, promyta dvakrát 15 ml aceto-nitrilu a sušena na vzduchu v digestoři 3 hodiny. Bylozískáno 830 mg l-(dimethylamino)-2-propylesteru 4-C[3-(1,6--d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]amino]benzoové ky-seliny (AIT-0084). Výtěžek Činil 33 %· Příklad 42

Syntéza methylestaru 2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9--yl)-l-oxopropyl]amino]-3-fenylpropanové kyseliny ;(AIT»0085) 0,500 g (1,519 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro- - 36 - -6-oxo-9H-pur in-9-yl)-l-oxopropyl]amino]-3-fenylpropanové ky-seliny (AIT-0085) 0,500 g (1,519 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihydro--6-o.xo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,328 g(1,519 mmol) hydrochloridu methylesteru L-fenylalaninu byloumístěno do 25 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickoumíchací tyčinkou. Poté byly přidány 3 ml dimethylsulfozidu aroztok byl míchán při pokojové teplotě tak, aby se rozpusti-lo pokud možno nejvíce pevné látky. Dále bylo přidáno 159 mg(1,571 mmol) triethylaminu a roztok byl opět míchán při poko-jové teplotě (20 °C) po dobu 1 hodiny. K promíchávanému roz-toku bylo přidáno 10 ml acetonitrilu a roztok byl dále míchán.Roztok byl roztírán s etherem, dokud εβ tvořila bílá sraženi-na. Roztok byl filtrován k odstranění hydrochloridu triethyl-aminu. Matečný louh byl opět zpracován s etherem, přičemž sezískala sraženina. Směs byla filtrována a bílá pevná látka by-la promyta ethyletherem a vysušena. Výtěžek činil 0,465 g bí-lé pevné látky. Tato látka byla přidána do 22 ml směsi etha-nolu a vody (9:1) a byla zahřívána, aby S6 rozpustila. Poochlazení na pokojovou teplotu byl přidán ether až do záka-lu. Roztok byl umístěn do chladničky, kde byl ponechán přesnoc. Po filtraci a promytí etherem bylo získáno 0,235 gmethylesteru 2-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxo-propyl]amino]-3-fenylpropanové kyseliny (AIT-0085) ve forměbílé, krystalické látky. Teplota tání 186 - 191°Ce Příklad 43

Syntéza 2-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]-amino]-3-fenylpropanové kyseliny (AIT-0086) 100 mg (0,271 mmol) methylesteru 2-[[3-(l,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]-3-fenylpropanové ky-seliny (AIT-0085) bylo umístěho do 10 ml kádinky opatřenémagnetickou míchací tyčinkou. Do kádinky byl.o přidáno 5 mlvody a začalo se s mícháním. K promíchávané heterogenní smě-si bylo přidáno 100 mg (1,79 mmol) pelet Κ0Η. Během několikasekund směs získala homogenní zelenou barvu. Míchání pokra- 4 37 - čovalo 1 hodinu, pH roztoku bylo pomocí konc. . chlorovodí-kové kyseliny upraveno na 2,0. Produkt byl vakuově filtrována dvakrát promyt 2 ml vody a poté 2x 2 ml acetonu. Bylo získáno 80 mg 2-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]aminoJ-3-fenylpropanové kyseliny (AIT-0086). Výtěžek Činil63 %. Teplota tání 240 - 242 °C. Příklad 44

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[3-(2-deoxyglu-kopyranosyl)propanamidu (AIT-0087) 0,300 (0,911 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihyoro-6--oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,196 g(0,911 mmol) hydrochloridu L-glukosaminu bylo umístěno do10 ml baňky s kulatým dnem, ve které byly 2 ml dimethylsul-foxidu s magnetickou míchací tyčinkou. Poté bylo přidáno100 mg (0,988 mmol) triethylaminu a roztok byl v zazátkované v* bance míchán při pokojové teplotě 1 hodinu. Roztok byl dálemíchán ještě 1 hodinu při teplotě 20 °C a produkt byl vysrá-žen z reakční směsi přidáním 10 ml acetonitrilu za míchání.Produkt byl vakuově filtrován a pevná látka byla promytaacetonitrilem a poté etherem. Po vysušení bylo získáno 345 mg3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2-(2-deoxyglukopyrano-syl)propanamidu (AIT-0087) ve formě bílé pevné látky. Výtěžekčinil 103 %. Příklad 45

Syntéza 4-CC2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopro-pyljamino]ethy^amino]-2-hydroxy-4-oxo-N,N,N-trimethyl-l-bu-tanaminiumchlor idu (AIT-0090) 248 mg (1,0344 mmol) 4-[(2-aminoethyl)aminoJ-2-hydroxy-4-oxo-ií,N,N-trimethyl-l-butanaminiumchloridu bylo umístěno do10 ml baňky s kulatým dnem a magnetickou míchací tyčinkou. Po·té byly přidány 2 ml dimethylsulfoxidu a roztok byl jemně za-hříván, aby se amin lépe rozpouštěl. K promíchávanému roztokub$»lo přidáno 340 mg (1,034 mmol) 4-nitrof enylesteru 3-(l,6-di - 38 - hydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propionové kyseliny (AIT-0081)T Roz-tok byl míchán ještě 1 hodinu a poté byly přidány 3 ml methano-lu. Pak byly přidány 3 cil acetonu a roztok byl filtrován. Pevnálátka byla několikrát promyta acetonem a usušena. Bylo získáno105 mg 4-[[2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-l-oxopropylj-amino]ethýl]amino]-2-hydroxy-4-oxo-N,Ií ,K-trimethyl-l-butanami-niumchloridu (AIT-0090) ve formě bílé pevné látky. Výtěžek či-nil 33 %. Teplota tání přibližně 260 - 265 °C (rozklad). Příklad 46

Syntéza methylesteru 4-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyljamino]butanové kyseliny (AIT-0092) 0,300 g (0,911 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)pro panové kyseliny (AIT-0081) a 0,142 g(0,925 mmol) methylester hydrochloridu gama-aminobutanové kyse-liny bylo umístěno do 10 ml banky s kulatým dnem, ve které byly2 ml dimethylsulfoxidu, a opatřené magnetickou míchací tyčinkou.K tomuto roztoku bylo přidáno 0,100 g (0,968 mmol) triethylaminuRoztok se ihned zbarvil do zelena a při pokojové teplotě byl mí-chán 1 hodinu. Poté bylo přidáno 5 ml acetonu a roztok byl fil-trován. Matečný louh byl zpracován přibližně 35 ml etheru k vy-sarážení produktu. Po filtraci a promytí etherem bylo získáno232 mg methylesteru 4-C[3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-l--oxopropyl]aminojbutanové kyseliny (AIT-0092) ve formě bílé pev-né látky. Výtěžek činil 82 %. Příklad 47

Syntéza 3-CC3-( 1»6-dihydro-6-oxo-9K-purin-S-yD-l-oxopropyljami-no] propansulf ono vé kyseliny (AIT-0093) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1»6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 127 g(0,9111 mmol) 3-amino-l-propansulfonové kyseliny bylo umístěnodo 10 ml banky s kulatým dnem obsahující 2 ml dimethylsulfoxidua opatřené magnetickou míchací tyčinkou. K roztoku bylo přidáno0,100 g (0,988 mmol) triethylaminu a roztok se ihned zbarvil dozelena. Roztok byl míchán při pokojové teplotě 5 hodin. Dimet- - 39 - hylsulfoxid byl odstraněn ve vakuu při mírném zahřívání. Potébylo přidáno 9. ml acetonu a roztok byl roztírán s mathanolamaž sa stal homogenní. Žádná sraženina se nevytvořila. Roztokbyl převeden do 50 ml banky s kulatým dnem, která obsahovala10 ml acetonu a 5 ml ethanolu. Byl přidán ether až do zákalu v a banka byla vložena přes noc do ledničky při teplotě pod 0°C. Příklad 48

Syntéza l-[2-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopro-pylJhydrazinoJ-2-oxoethylJpyridiniumchloridu (AIT-0094) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-3H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,172 g(0,9166 mmol) Girardova činidla P bylo umístěno co 10 ml ban-ky s kulatým dnem obsahující 2 ml dimethylsulfoxidu a opatře-né magnetickou míchací tyčinkou. Roztok byl zahříván za míchání na teplotu 70 °C. Jakmile se roztok začal zahřívat, pevnálátka se začala rozpouštět a roztok postupně nabýval zslenoubarvu. Po 30 minutách byl roztok zcela homogenní. Roztok senechal reagovat při 70 °C 4 hodiny a poté byl ochlazen napokojovou teplotu. Pak bylo přidáno 10 ml acetonitrilu a ih-ned po přidání se začala tvořit bílá sraženina. Roztok bylzfiltrovén a promyt acetonitrilem a etherem. Pevná látka by-la vysušena, ale docházelo u ní k absorbci HgO z atmosféry.Hygroskopičnost je způsobena buď přítomností zbytku dimethyl-sulfoxidu nebo samotným produktem. Příklad 49

Syntéza 4-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-l-oxopropyl]-amino]-H-[2-(ú isthylamino)ethyl]benzamid-monochlcridu(AIT-OO95) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-( 1,6-dihyd-ro-6-oxo-SK-purin-S-yl)propanové kyseliny bylo umístěno do10 ml banky s kulatým dnem s 0,250 g (0,9198 mmol) prokain- - 40 - amid hydrochloridu. Byly přidány 2 ml dimethylsulfoxidu a roz-tok byl zahříván na teplotu 40 °C po dobu 4 dnů. Fotě byl roz-tok vlit do 40 ml acetonu a byl intensivně míchán 20 min. Pev-ná látka byla vakuově odfiltrována a byla promyta acetonem. Po- té byla pevná látka umístěna co5 ml ethanolu a byla míchána 2odfiltrována, promyta- ethanolem a poté etherem. Bylo získáno133 mg 4-CC3—(1,6-dihydro-6-oro-5H-purin-9-yl)-l-oxooropyl]-amino]-M-[2-£d iethylamino)ethyl]benzamid mono hydro chloridu(AIT-OO95) ve formě světla žluté nehygroskopické pevné látky.Teplota tání 210 - 213 °0 (bez rozkladu). 25 ml baňky s kulatým dnem smin. Pevná látka byla vakuově Příklad 50

Syntéza 3-( 1,6-dihydro-6-oxo-SE-purin-S-y 1)-11-(2-oxothiaolan--3-yl)propanamidu (AIT-OO96) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-ono-SH-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 142 mg(0,942 mmol) hydrochloridu thiolaktonu DL-homocysteinu byloumístěno do 10 ml baňky s kulatým dnem opatřené magnetickoumíchací tyčinkou. Poté bylo přidáno 100 mg (0,9862 mmol) tri-ethylaminu a roztok byl míchán při pokojové teplotě v uzavře-né baňce 3 hodiny. K míchanému rozteku byly přidány 2 ml ace-tonitrilu. Roztok byl roztírán s etherem, dokud se tvořilo ma-lé množství sraženiny. Roztok byl zfiltrován a matečný louhbyl srážen 30 ml etheru. Po filtraci a po promytí etherem bylozískáno 306 mg bílé pevné látky. Těchto 306 mg pevné látky by-lo umístěno do 10 ml baňky s kulatým dnem, ve které bylo 5 mlacetonitrilu a opatřené magnetickou míchací tyčinkou, goztokbyl míchán při pokojové teplotě 20 minut. Roztok byl filtro-ván a pevná látka byla promyta chloroformem. Bylo získáno235 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2-oxothiolan--3-yl)propanamidu (AIT-OO96) ve formě bílé pevné látky. Výtě-žek činil 84 %. Teolota tání 228 - 230 °C (ostrá)« - 41 - Příklad 51

Syntéza 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2-( 3,4-dihyd-rofenyl)-2-hydroxyethyl]propanamidu (AIT-OO97) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,190 g(0,924 mmol) (R)-(-)-noradrenalin hydrochloridu bylo umístěnodo 10 ml banky s kulatým dnem obsahující 2 ml dimethylsulfo-xidu a opatřené magnetickou míchací tyčinkou. Poté bylo při-dáno 128 mg (1,26 mmol) triethylaminu a roztok byl míchán připokojové teplotq 1 hod. Po přidání 10 ml chloroformu se zača-la v hojné míře ihned tvořit žlutá sraženina. Roztok byl -ješ-tě několik minut míchán a poté byl vakuově filtrován. Vznika-jící pevná látka byla promyta chloroformem a vysušena. Po vy-sušení bylo získáno 3.59 mg 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9--yl)-H-[2-(3,4-dihydroxyfenyl)-2-hydroxyethyl]propanamidu(AIT-0097) ve formě žluté pevné látky. Výtěžek činil 110 Příklad 52

Syntéza 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-(1-fenyl-4-oxo--1,3,8-tr ia za sp iro(4,5)dec-8-y1)pro panonu (AIT-C098) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny a 0,212 g (0,9165mmol) 1-fenyl-l,3,8-triazaspiro(4,5)dekan-4-onu bylo umístěnodo 10 ml baňky, s kulatým dnem opatřené magnetickou míchací ty-činkou. Do baňky byly přidány 2 ml dimethylsulfoxidu (sušenýpřes oxid barnatý) a roztok byl míchán v uzavřené baňce připokojové teplotě 20 hod. Reakce se nechala probíhat přes noc,aby se zabezpečilo úplné proběhnutí reakce. Rozpouštědlo byloodstraněno za použití vakua a mírného zahřívání (přibližně45 °C). K promíchávanému olejovitému zbytku bylo přidáno 10 mlethylacetátu, přičemž se začala ihned tvořit v hojné míře bílásraženina. Roztok byl dále míchán 30 minut, aby se dosáhlo homogenity. Po filtraci, promytí ethylacetátem a vysušení bylozískáno -145 mg l-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-1-(1-fenyl--4-oxo-l,3j8-triazaspiro(4,5)dec-8-yl)propanonu (AIT-0098) veformě bílé pevné látky. Výtěžek činil 90 %. - 42 Příklad 53

Syntéza 3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-y 1)-1-( 1,2,3,4-tetra-hydro-2-azakarbazo-2-yl)propanonu (AIT-OO99) 0,300 g (0,911 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,157 g(0,9111 mmol) 1,2,3,4-tetrahydro-9H-pyrido(3,4-b)indolu byloumístěno do 10 ml banky s kulatým dnem opatřené magnetickoumíchací tyčinkou. Do baňky byly přidány 2 ml dimethylsulfoxi-du (sušeného přes oxid barnatý) a roztek byl míchán při poko-jové teplotě 3 hod. Poté byly k roztoku přidány 3 ml ethylace-tátu a roztok byl umístěn do ledničky na 2 dny ke krystalizaciVzniklá krystalická hmota byla rozdrcena Špachtlí a vakuověfiltrována. Krystaly byly promyty acetonem a etherem, přičemžbylo získáno 260 mg hnědé pevné látky. Tato látka byla překry-stalována z vroucího ethanolu, ochlazena na pokojovou teplotua poté na 0 °C přes noc. Bylo získáno 205 mg 3-(l,6-dihydro-6--oxo-9H-purin-9-y1)-1-(1,2, 3,4-tetrahydro-2-azakarbazo-2-yl)-propanonu (AIT-OO99) ve formě ne zcela bílé pevné látky. Výtě-žek činil 65 %. Teplota tání 185 - 190 °C (rozklad). Příklad 54

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2—(3,4-dihyd-roxyíenyl)-2-hydroxyetkyl]-N-methylpropanamidu (AIT-0100) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,167 g(0,9111 mmol) (R)-(-)-adrenalinu bylo umístěno do 10 ml baňkys kulatým dnem obsahující 2 ml dimethylsulfoxidu (sušený přesoxid barnatý) a opatřené magnetickou míchací tyčinkou. Roztokbyl míchán při pokojové teplotě (25 °C) a byl zpočátku hete-rogenní. Asi po 45 minutách, jakmile adrenalin začal reagovats AIT-0081, se stal roztok téměř homogenním a získal žlutě--oranžovou barvu. Roztok byl míchán další 2 hodiny, poté bylvyjmut do pasterizační pipety a přidán za míchání do baňky ob-sahující 50 ml acetonu a opatřené magnetickou míchací tyčinkou.Vzniklá bílá sraženina a roztok byly míchány 10 minut. Roztok - 43 - byl vakuově filtrován a bílá pevná látka byla promyta ace-tonem. Stopy dimethylsulfoxidu byly odstraněny na Buchnero-vě nálevce při použití vysokého vakua. Bylo získáno 120 mg3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(3>4-dihydroxyfe-nyl)-2-hydroxyethyl]-N«methylpropanamidu (AIT-0100) ve for-mě bílé pevné látky. Výtěžek Činil 48 %. Příklad 55

Syntéza 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-y1)-1-(2-fenylimi-dazo-l-yl)propanonu (AIT-0102) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)própanové kyseliny (AIT-0081) a 0,133 g(0,9111 mmol) 2-fenyl-2-imidazolinu bylo umístěno do 10 mlbaňky s kulatým dnem obsahující 2 ml suchého dimethylsulfo-xidu a opatřené magnetickou míchací tyčinkou. Roztok byl mí-chán při pokojové teplotě a reakce pokračovala 1 hodinu po-té bylo přidáno 12 ml acetonu. Roztok byl filtrován a pevnálátka byla promyta acetonem. Po vysušení bylo získáno 275 mg3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-y1)-1-( fenylimidazo-l-yl)-propanonu (AIT-0102) ve formě bílé pevné látky. Výtěžek či-nil 90 %. Teplota tání 192 - 197 °C. Příklad 56

Syntéza ethylesteru l-C3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l--oxopropyl]-3-pipexidiňkarboxylové kyselin^y (AIT-0103). 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(l»6-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) bylo umís-těno do 10 ml baňky s kulatým dnem obsahující 2' ml suchého dimethylsulfoxidu a opatřené magnetickou míchací tyčinkou. Kroztoku bylo přidáno 150 mg (+-)-ethinylpektátu. Roztok ihnedzezelenal a byl míchán při pokojové teplotě (25 °C) 2 hodiny.Dimethylsulfoxid byl odstraněn za sníženého tlaku a mírného zhřívání. Poté bylo ke žlutému zbytku přidáno 10 ml etheru apevná látka byla rozdrcena Špachtlí. Roztok byl míchán, až se - 44 - získala jasná bílá homogenní sraženina. Roztok byl zfiltro-ván a pevná látka promyta etherem. Bylo získáno 285 mg ethyl-esteru 1—[3—(1,6-dihydro-6-oxo-5H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]-3--piperidinkarboxylové kyseliny (AIT-0103) ve formě bílé pevnélátky. Výtěžek činil 80 %. Teplota tání 171 - 175°C. Příklad 57

Syntéza l-(dimethylamino)-2-propylester monochloridu 4—CÍ3— -(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyl]amino]benzoovékyseliny (AIT-0105) 0,300 g (0,9111 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,6-dihydro--6-oxo-SH-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a 0,245 g(0,9468 mmol) l-(dimethylamino)-2-propylesteru 4-aminobenzoovékyseliny (AIT-0104) bylo umístěno do 5 ml baňky se 2 ml dimet-hylsulfoxidu, malou magnetickou míchací tyčinkou s teploměrem.Roztok byl zahříván při teplotě 75 °C po dobu 23 hodin. Dimet-hylsulfoxid byl odstraněn za sníženého tlaku a zahříváním. Kezbývajícímu tmavému viskóznímu zbytku byly přidány 3 ml aceto-nitrilu a 2 ml methanolu. Po několikaminutovém míchání při po-kojové teplotě se začala tvořit hnědá sraženina, poté byl roz-tok filtrován a promyt acetonitrilem. Po vysušení bylo získáno85 mg 1—(dimethylamino)-2-propylester monochloridu 4-C[3-(1,6--dihydro-6-oxo-3H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]benzoové kyse-liny (AIT-0105) ve formě hnědé pevné látky. Teplota tání 270 -- 275 °C. Příklad 58

Syntéza l-(dimethylamino)-2-propylesteru 3-(1,6-dihydro-6-oxo--9H-purin-9-yl)propanová kyseliny (AIT-0106) 0,300 g (1,441 mmol) 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-propanové kyseliny (AIT-0080) a 0,305 g (1,478 mmol) dicyklo-hexylkarbodiimidu bylo umístěno do 10 ml baňky s kulatým dnemopatřené magnetickou míchací tyčinkou a teploměrem. Poté bylypřidány 4 ml N,R-dimethylacetamidu a 0,168 g (1,628 mmol) 1--dimethylamino-2-propanolu a roztok byl zahříván na teolotu75 C (v uzavřené bance) 2 hodiny. Roztok byl ochlazen na do- - 45 - kojovou teplotu, přičemž se vytvořilo větší množství sraženi-ny. Obsah byl převeden do větší baňky a 20 ml acetonu. Potébylo přidáno 20 ml etheru a roztok byl ochlazen v ledničce. Zakrátkou dobu se vytvořily krystaly. Pevná látka byla získánafiltrací a byla promyta etherem. Bylo získáno 408 mg l-(dimet-hylamino)-2-propyle steru 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-propanové kyseliny (A1T-0106) ve formě bílé krystalické pevnélátky. Výsledek Činil 97 %. Teplota tání 280 - 284 OC. Příklad 59

Syntéza 2-[[3-(1,6-dihydro-6-oxo-SH-purin-9-yl)-l-oxopropyl]-amino]-3-(5-hydroxyl-lH-indol-3-yl)protonové kyseliny(AIT-0111) 100 mg (0,500 mmol) DL-5-hydroxytryptofanu a 3 ml suché-ho aimethylsulfoxidu bylo umístěno do 25 ml banky s kulatýmdnem opatřené magnetickou míchací tyčinkou a zátkou. Poté bylopřidáno 150 mg (0,456 mmol) 4-nitrofenylesteru 3-(1,β-dihydro--6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny (AIT-0081) a heterogenní směs byla míchána 2,5 hod. při pokojové teplotě v uzavřenébaňce. Směs se stala zcela homogenní. Eeakční směs byla nalitado 20 ml acetonu a byla získána polotuhá sraženina,filtrací. Surový produkt byl promyt dvakrát 2 ml acetonu. Pev-ná látka byla přesuspendována v 10 ml acetonu a nerozpustnýzbytek byl odstraněn filtrací. Acetonový roztok byl odpařen dosucha. Bylo získáno 15 mg 2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-uurin-9--yl)-1-oxopro pyl]aminoJ-3-(5-hydroxyl~lK-indol-3-yl)propionovékyseliny (AIT-0111). Výtěžek činil 7,3 % (čistota 93 %). - 46 -

Jak bylo vysvětleno na předcházejících příkladech a vdodatku A a jak vyplývá ze znalostí uvedeného oboru, vzorcesloučenin uvedeného vynálezu sestávají se dvou strukturálníchčástí, které jsou spojeny biodegradabilní vazbou. Každá ztěchto dvou rozdílných částí je tvořena chemickou strukturouspecifického typu biologicky aktivní molekuly. Původně sepředpokládalo, že by tyto sloučeniny mohly plnit funkci do-davatelů prekurzorů léčiv. Dle známého stavu techniky tytosystémy využívají biologicky aktivní sloučeniny zabudované dofyzikálně biodegraaabilních matric, sloučeniny podle vynálezumají fungovat jako svůj vlastní dodávací systém. Iíavíc se předpokládalo, že by tyto sloučeniny byly schop-né pronikat hamatoencefalitickou bariérou, protože obsahujíhypo-xanthinové jádro. Kromě toho, protože každá z těchto bio-logicky aktivních chemických částí sloučenin byla navrženatak, aby byla biologicky aktivní jako taková, mohou být využi-ty i jako nosič. Předpokládalo se, že by tyto sloučeniny mohlyléčit neurologické a imunologická onemocnění. Jak bylo uvedenovýše, také se předpokládalo, že pokud by byly biodegradabilnívazby, které chemickým můstkem spojují dvě biologicky aktivníčásti hydrolyzovány, vznikly by části schopné nezávislé funkce

Stejně tak jak bude detailně popsáno v následujících pří-kladech, byla u těchto sloučenin pozorována celkově neočekáva-ná biologická aktivita a tím vznikla hypotéza, že aktivní jád-ra každé sloučeniny mohou zůstat spojená. K potvrzení či vy-vrácení této hypotézy bude nutný ještě podrobný výzkum, nynímůžeme předpokládat, že příslušná aktivní jádra, každé vazbouspojené sloučeniny, simultánně reagují se sousedními nebo • strukturálně blízkými receptory na léčených buňkách a neuro-nech. Tato jedinečná, na dávce závislá aktivita, biologické • vlastnosti a rozmanité specifické biologické účinky těchtosloučenin, jsou příznačné pro neobyčejné a neočekávané inter-aktivní mechanismy. Názorněji, když byla biologická aktivita uvedených slou- čenin, popisovaného vynálezu srovnána se svými nejbližšími che nickými analogy, byly získány naprosto neočekávané výsledky.

Tyto výsledky jsou vysvětleny v následujících neomezených bio- logických pokusech a sestaveny do tabulek neuroimunologické - 47 - aktivity, včetně imunologické odpovědnosti, pamětové funkce,a pohybové stimulace. Pro snadnější presentaci byly nejužsíanalogové sloučeniny popsány jako AIT-001 a AIT-1000, resp.hypoxanthin a kyselina 4-acetylaminobenzoová spojená s l-(di-metnylamino)-2-propanolem (1:1) nebo DIP-P-a-c-B—a, jak uve-deno v americkém patentu Č. 4,221.910.

Pokus sledující pamětovou funkci Účinek AIT sloučenin na pamět byl vyšetřován použitímtestu, který využívá užitečných změn v chování myší (Ordy,J.M., et. al., neurobiol. of Aging. 9:667-683,1986). Tentotest vychází ze základního předpokladu, že hladové zvíře,které půjde k určitému místu, kde sežere všechnu potravu,půjde v dalším pokusu hledat potravu na jiné místo. Pokudstřídáme odměňující stranu a měníme interval mezi pokusy, mů-žeme určit, zda si subjekt (zvíře) umí zapamatovat, ve kteréze dvou stran T-bludiště bylo v předchozím pokusu. Kyš hlado-ví, dokud nedosáhne 80 % své váhy. Poté je umístěna do star-tovacího boxu a o tři sekundy později jsou dveře otevřeny azvíře vypuštěno do volného prostoru. Potom se otevře jedenza dvou cílových oddílů. V této studii oba oddíly obsahovalypři prvním tréninkovém pokusu 0,5 ccm mléka. Poté co myšvstoupí do cílového oddílu, se dveře zavřou, aby zvíře nemoh-lo odejít. Zvířeti je dovoleno vypít všechno mléko. Pak jezvíře přemístěno z bludiště a po uplynutí 90 sekund je znovuumístěno do startovacího boxu. Pokus běží dále za stejnýchpodmínek. Výsledek 50 % je považován za náhodu, tzn., že sisubjekt nepamatuje, ve kterém oddílu byl při předchozím poku-su. Čas latence nutný k opuštění startovacího boxu je zazna-menán jako míra motivace, čas běhu (čas od opuštění startova-cího boxu do dosažení cílového oddílu) je zaznamenán jako míraplnění, a počet správných odpovědí jako index paměti. Posled-ní zkušenosti ukazují, že jen málo myší z kontrolní skupiny, které dostaly jen fyziologický roztok, při devadesáti sekundo- * vém intervalu náhodně boduje. Léčebná látka byla podána intra-peritoneálně 60 minut před pokusem. Výsledky tohoto pokusujsou uvedeny v následující tabulce,. - 48 -

Tabulka 1 Údaje o provedení zkoušek paměti

Zoož- Léčbadění ( sec) Dávka (mg/ k Motivaceg) Latence (sec)*’ Výkon Oas ' běhu π(sec)1 % sDrávnosti Léče- né Kontrol-ní sku-pina Účinek léčiva 90 Složená kontrola 3 3,19 2,46 AIT-083 1 5,75 4,96 58 61 0,5 11,63* 3,76 60 35 + 0,1 2,25 2,15 48 43 AIT-082 0,5 1,95 2,20 65 38 + 0,1 1,71 1,65 40 33 AIT-034 0,5 15,14* 11,22* 67 57 AIT-065 0,5 8,96 7,36* 60 49 AIT-080 0,5 12,81* 14,99* 65 40 + AIT-110 0,5 21,68* 6,35 72 45 AIT-1000 0,5 10,44* 10,08* 75 50 + AIT-001 0,5 2,38 4,05 45 50 (1) ilotivace *: = čas latence léčené skupiny je 3x kontrolní Výkon* : = čas běhu bludištěm léčené skupiny je 3x > kontrolní (2) Pamět : % správnosti: + = výsledek léčené skupiny je > kontrolní při 50 % (3) Složená kontrola představuje průměr 11 sérií kontrol

Zkouška pro pohybovou aktivitu

Pro hodnocení účinku různých sloučenin na spontánní pohybovou aktivitu byla myším podána i.p. jedna ze sloučenin(0,5 mg/kg) nebo odpovídající objem (0,1 ml/10 g;. tělesnéváhy) fyziologického roztoku (Ritzmann, R.P., Walter, R.,Bhargava, H.M. a Flexner, L.B., Blockage of narcotic-indu-cec dopamine receptor supersenzitivity by cyclo (Leu-Gly),Proč. Nati. Acad. Sci. USA 76: 5997-3,1979). Aktivita bylazaznamenávána po dobu jedné hodiny na přístroji Varimex,Columbus Instruments, Columbus Ohio, a zanesena do následují·cí tabulky. - 49 -

Tabulka 2

Pohybová aktivita Sloučenina Počet/hod - S.E.M. Hodnota P Kontrola 323 - 59 AIT-001 402 ± 120 US AIT-O34 426 ± 86 US AIT-O65 644 i 114 0,03 AIT-080 525 í 109 0,06 AIT-082 415 i 85 US AIT-083 698 i 133 0,03 AIT-110 301 i 57 US AlT-1000 430 i 139 US ^^US = statisticky nevýznamná ve srovnání s kontrolou Biologická aktivita Lymfocytární proliferace - zkouška imunitní funkce

Lymfocyty jsou jedněmi 2 mnoha důležitých buněk, kterézabezpečují ochranu organismu před infekčními nemocemi arakovině. Určení kvality funkce lymfocytů je, v širším uži-tí, měřítkem zdravotního stavu organismu. Schopnost látekzvyšovat nebo snižovat funkci lymfocytů předurčuje jejichléčebný účinek. (Tsang, P.H., Tangavarad, K., Solomon, S. aBekesi, J.G.: Modulation of T-and B-Lymphocyte Functions byIsoprinosine in Homosexuál Subjects with Prodromata and inPatients with Acquired Immune Deficienci Syndrome (AIDS).* J. Clin. Immunol. 4:469-478, 1984).

Periferní krev (50 ml) byla získána od dobrovolníků po-užitím plastických stříkaček venepunkcí a byla chráněna he-parinem v množství 15j/ml. Lymfocyty byly z periferní krve odděleny pomocí Picoll-Hypaque gradientu, centrifugací. (Tsang,P.H., Holland, J.P., a Bekesi J.G.: Central role of T lympho-cytes in specific recognition of tumor antigens in Cr-leukocyte adherence inhibition. Cell. Immunol. 73:365-375, 1982). V podstatě bylo 50 ml krve rozředěno stejným množstvím fyzio- - 50 - logického roztoku a na povrchu překryto 25 ml Picoll-Hypaquegradientem a centrifugováno při 850 g a 20 °C po dobu 45 mi-nut. Lymfocyty, které byly vzájemně pospojované ve vrstvě vy-srážených leukocytů byly ještě dvakrát vyprány ve fyziologic-kém roztoku a znovu resuspendovány v mediu RPKI-1640 s přida-nou 20% tepelně inaktivovanou autologní nebo skladovanou ABplasmou.

Funkce lymfocytů byla určena blastogenní odpovědí, kterábyla indukována dvěma mitogeny: vysoce čistým fytohemaglutini-nem (PHA, Wellcome, Dartford, England) pro funkce T-lymfocytůa poke-vjeed mitogenem (PY/1S, Wellcome, Dartford, Sngland) proT-lymfocyty závislé na funkci B-lymfocytů (ref.: Hadden, J.W.,Lopez, C., 0 Reilly, R.J. a Hadden, R.M.: Levamisol and inosi-plex: Antiviral agents with immunopotentiating action. Ann. NYAcad. Sci 284:139-152,1977). Kononukleární buňky byly (1x10^buněk/0,lml RPMI-1640) kultivovány triplicitně na mikroplátechza přítomnosti optimální stimulační koncentrace PHA (0,5 micro-gramů) nebo PWM (0,75 microgramů) při 37 °C ve zvlhčené atmo-sféře obsahující 5% C0£ · Kontrolní kultury byly kultivoványbez mitogenů. lymfocytární blastogenese byla určována měřenímúrovně syntesy DNA po přidání 1 microcurie (H3)-thymidinu (TdR)ke každé kultivaci 18 hodin před ukončením kultivace (64 hodinpo indukované reakci přidáním PHA a 96 hodin po přidání PWM).Následující inkubace byla odebrána automatickým sběračem MashII na filtry ze skleněných vláken a navázané množství [H^jTdRbylo určováno ve světelném scintilačním spectrometru Packard.Výsledky jsou vyjádřeny jako počet impulsů za minutu/10^ lymfo-cytů. Různé testované sloučeniny byly na začátku kultivace vindikované koncentraci vneseny do inkubaČního media. Výsledky byly zaneseny do tabulek 3 a 4 jako cpm pro kon-trolní kultivace a jako % stimulace nebo inhibice ve srovnánís odpovídající kontrolou. Výsledky jsou tedy vyjádřeny jakozvyšující se (+) nebo snižující se (-) nebo žádný efekt naproliferaci T nebo B lymfocytů. - 51 -

Tabulka 3 Účinek na mitogeny indukovanou prolyferacílymfocytů

Sloučenina Dávka Kontrolní, % Stimulace Aktivita^2) ( ^g/ml) fa°á.npta

Odpověď T-buněk (PHA) Kontrola 110,000 AIT-001 100 39 % + AIT-034 100 8 0 AIT-083 7 57 +

Odpověď B-buněk (PWIví)

Kontrola AIT-001 100 69,368 29 % + AIT-034 100 0 0 AIT-083 7 0 0 (1) Počet za minutu (c pm) na Hr lymfocytů (2) + = stim iulace 12% nebo větší ve srovnání s neléčenou kon- trolou

Tabulka 4 Účinek na mitogeny indukovanou proliforací lymfocytů Kontrolní %hodnota(l) změny proti kontrole Aktivita^2) Dávka (yug/ml) 0 1 2£ é 10 2£ . 100 Sloučenina Odpověď T-buněk (PHA) AIT-08D 127,374 7 4 3 16 4 11 + AIT-110 110,110 0 0 -8 11 9 10 0 AIT-082 148,687 7 7 2 12 12 11 + AIT-065 129,487 11 8 8 19 2 -5 + AIT-1000 131,487 2 2 9 6 7 11 0 Odpověď B-buněk (POI) AIT-080 109,134 24 3 2 11 8 0 + AIT-110 91,960 18 4 -3 -3 5 4 + AIT-082 116,251 4 2 5 9 1 -4 0 AIT-065 80,251 13 16 22 19 14 7 + AIT-1000 102,252 3 5 0 6 8 -3 0 c (1) Počet za minutu (cpm) na Kr lymfocytů (2) + = stimulace 12% nebo větší ve srovnání s neléčenou kontrolou 52 -

Další obrázek ilustruje jedinečné vlastnosti sloučenin po-pisovaného řaSeaí, které jsou na dávce závislé, ve srovnání sblízkými sloučeninami, předcházející data mohou být sumarizo-vána na základě imunologické a neurologické odpovědi v ' j ná-sledovně :

Tabulka 5 Přehled biologické aktivity T-bunka B-bunka Místo Poznávací funkce (2).

Sloučenina Stimo Stim. učinku ' Λ soráv.Mot iv .Vý- akt iv ita^ kon AIT-OOl 100 ICO tb 0 0 0 0 AIT-060 10 1 TB 4- _ 1 - 4* AIT-110 0 1 B •ř - 0 0 AIT-062 10 0 T + 0 0 0 AIT-083 <7 0 T + 0 + AIT-IOOO 0 0 0 + - 0 AIT-034 0 0 0 0 — 0 AIT-065 10 1 TB 0 0 - + (1) Dávkování v m ákrogramech/ml, oři kterých je vrc hol stimu- lacního efektu pozorován in vitro Místo účinku: t = slabá stimulace T-buňky; T = silná stimulace T-buňky; slabá stimulace B -buňky; B = silná stimulace B-buňky (2) % správnosti: + = výsledek u léčené skupiny je > kon- trolní při 50 % Motivace: - Čas latence u léčené skupiny je 3x> kontrolní — čas latence u léčené skupiny je 5-X kontrolní Výkon: - čas běhu bludištěm u léčené skupiny je než u kontrolní

Pohybová aktivita: + = aktivita u léčené skupiny je podstat-ně vyšší než u kontrolní skupiny - 53 - Z předcházejících informací může být zřejmé na základězkušeností, že uvedené sloučeniny, popisované ve vynálezu,jsou diskutovány v souvislosti s kombinacerneuroimunologic-kých na dávce závislých vlastností. Například, jak ukazuje ta-bulka č. 5, sloučenina AIT-080 zvyšuje proliferaci T-lymfocytůve střední dávce (10 yUg/ml), a ještě působí zvýšení funkce B--lymfocytů v poměrně nízké dávce (1 yUg/ml). AIT-080 navíczvýšilo pamětovou funkci stejně jako pohybovou aktivitu v re-lativně nízké dávce (0,5 mg/kg in vivo).

Odpovídající a jedinečné funkční vlastnosti jsou vyjádře-ny u sloučeniny AIT-083. V relativně nízké dávce (ϊ/Ug/ml) tatosloučenina pouze stimuluje proliferaci T-lymfocytů, ale nemážádný účinek na proliferaci B-lymfocytů. Ve střední dávce(1 mg/kg in vivo) nemá. žádný účinek na funkci paměti, nicménězvýší její funkci v nižší dávce při 0,5 mg/kg. Očekávalo se, že analogy blízké aktivním jádrům sloučeninAIT-083 se projeví podobnými vlastnostmi. Jak jasně však demon-strovaly výsledky v tabulce č. 5> hypoxantin (AIT-001) aDIB-Bac-BA (AIT-1000) se projevily jednotlivě značně rozdílný-mi aktivitami a to jak v kvantitě tak i v charakteru než uve-dené sloučeniny předloženého vynálezu (AIT-082 a AIT-083). Naširoké škále bylo ' < zjištěno, že uvedené sloučeniny se mo- hou projevit navzájem společnými vlastnostmi, zejména tehdy,jestliže se jedná o. látky, které jsou biodegradací převedeny nasložky s podobnými aktivními jádry. Například AIT-110 se můžedegradovat do formy AIT-080 a/nebo AIT-001, stejně tak jakoAIT-083 se může degradovat do formy AIT-082 a/nebo AIT-001.Nicméně v přímém kontrastu k těmto doměnkám, předcházející vý-sledky, týkající se biologické aktivity, seřazené v tabulceč. 5, jasně ukazují, že uvedené sloučeniny mají neočekávaněrozdílné.vlastnost i a oblasti působení.

Takto je v souhlase s poznáním uvedeného vynálezu možnézměnit funkci B nebo T-lymfocytů, s doprovodným nebo bez dopro-vodného zvýšení poznávací funkce, určitou dávkou jednotlivésloučeniny, uvedené ve vynálezu (v přímém kontrastu k očekáva-ným vlastnostem sloučenin známým ze stavu techniky). Tyto jedi-nečné, na dávce závislé kombinace vlastností částečně umožňují 54 - použít sloučeniny popisované va vynálezu k léčení takovýchneuroimunologických onemocnění, jako jsou AIDS, Alzheimero-va choroba, onemocnění imunitního systému, infekční onemoc-nění a projevů stáří. Ačkoliv jsou jednotlivá dávka, její složení a způsobpodání k dosažení těchto výsledků jedinečné pro každého pa-cienta a zájem ošetřujícího lékaře, z předcházejících údajůo sloučeninách v popisovaném vynálezu vyplývá jejich plné vy-užití jako neuroimunologických sloučenin. Obecně, když užije-me k léčení neuroimunologických onemocnění vhodný farmaceutic-ký přípravek, popisovaný ve vynálezu, optimální dávka k léče-níjonemocnění jednotlivých pacientů bude stanovena^nodif ikacípočáteční dávky.

Tyto sloučeniny jsou využity u pacientů (savců) pro léče-ní neuroimunologických stavů a buď samostatně nebo v kombinacijako farmaceutické sloučeniny využívající farmaceuticky přija-telné nosiče, jako jsou inertní pevné nosiče, vodné roztoky nebo netoxická organická rozpouštědla. Pokud si přejeme, můžemetyto farmaceutické sloučeniny dále studovat s ochrannými astabilizujícími Činidly apod.

Ha základě příkladů uvedených v popise vynálezu by mohlybýt odvozeny i další modifikace sloučenin, které mohou spadatdo rámce vynálezu, například jiné isomery, analogy a homology.Rozsah vynálezu je definován a ohraničen následujícími nároky0 - 55 -

yUpropionové kyseliny

AIT - 0029 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-W-[(l--ethylpyrrolidin-2-yl)methyl]propanamid - 56 -

AIT - 0031 3“(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2--(4-morfolinyl)ethyl]propanamid

AIT - 0033 3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-(l·-benzylpiperidin-4-yl)propanamid

AIT - 0034 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-U-[3-(2 -oxopyrrolidin-l-yl)propyl]propanamid - 57

AIT - 0035 3-(I,6-dihydro-6-oxo-3H-purin-3-yl)--N-[2-(l- -msthylpyrxol-2-yl)ethyl]propanamid

AIT - 0037 3-(l,6-dihydxo-6~oxo-9K-puxin-9-yl)“-N-[3-(l-imidazolyl)pxopyl]pxopanamid

AIT - 0043 3-(l,6-dihydxo-6-oxo-9H-puxin-9-yl)--N-[3-(4-morfolinyl)pxopyl]pxopanamid - 58 -

AIT - 0044 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-pur in-S-y1)-Ν-[3--(2-methylpiparidin-l-yl)propyl]propanamid

AIT - 0045 3-(1,6-ά ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl) - II- [ 2-methylpyrrolidin-2-yl)athyl]propanamid Η-Ν’

0 -0H2-c-bh-ch2ch2oh AIT - 0046 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2-

AIT - 0047 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(2--hydrojxyethoxy )ethyl] propanamid - 59--

ΑΙΤ - 0048 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2-[(2-hydroxyethyl)amino]ethyl]propanamid H-

g -1¾ AIT - 0049 3-(l,6-di.hydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-lT-[2-(4- -aminosulfonylfenyl)ethyl]propana[nid

AIT - 0050 3-(l,6-dihydxo-6-oxo-SH-purin-9-yl)-IT-[(2--hydroxy-l-methyl-2-fenyl)ethyl] propanátnld 0

AIT - 0051 3-(l,6-dihydro-6-o5:o-9H-purin-9-yl)-lí-C2- -[(l-o^oethyl)amino]ethyl]propanamid - 60 -

AIT - 0052 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-y1)-1-(1,4 d ioxa-8-sza sp iro[4,5]de c.-8-y1]pro panohΉ

Η^-Ο-ΗΗ-^ hydrazid 3-(l»6-dihydro-6-ozo-9H-purin--9-yl)propanové kyseliny AIT - 0056

2-0¾-C-KH-CHg 3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-(2·-aminoe thyl)propanamid AIT - 0058

OH (¾ -CHg-C-HH-CHg-CH-OH^ - 0059 3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2. -hydroxypropyl)propanamid - 61

O

ΑΙΤ - OO6O 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[(2-fu ranyl)methyl)] propanamid

ATT - 0062 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-Ií-(2,3« -d ihydroxyprop-l-yl)propanamid

0 OHg -CH2 -C-NH-CHg

3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N--[ (2-pyridinyl)mat;hyl]propananiid ATT - 0063

ATT - 0064 \ θ /¾¾ X 0¾-CIL, -S-RH-CH2 -CH2 ^0¾ ch3 3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-y 1)-ϊϊ-[2·-(d iethylamino)ethyl]pro panamid - 62

AIT - 0065 3-(l,6-dihydxo-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-[[2-(2-oxopyrrolidin-l-yl)-l-oxoethyl]aminojet-

AIT - 0066 3-(l,6-dihydro~6-oxo-9H-purin-9-yl)-IT-pipa-ronylpropanamid

O

AIT - 0068 3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l?--C (l-pyrrdlid inyDethyl] propanamid - 63 -

ΑΙΤ - 0069 Ιί,Ν ,Η” -tri[2-[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)-l-óxopropylJaminoethyl]amin

ΑΙΤ - 0070 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-U-[[2-(l- —ρiperidiny1)]ethyljpropanamid

AIT - 0071

\ o ^CH2CH20H

CHp -CH? -C-EH-CIL· -OHp -IL ^gh2ch2oh 3-(l,6-dihydro-6-cxo-9H-purin-9-yl)-N-[2-(2,2-diethanolamino)athyl]propanamid - 64 -

AIT - 0072 3-(l,6-dihydro-6-oxo~9H-purin-9-yl)-N-[2-(lKindol-3-yl)ethyl]pxopanamid

ΑΙΤ - 0073 methyldiestex 2-[(6-amino-9H-puxin-9-yl)niethyljbutandiové kyseliny

AIT - 0074 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)“N-(3 -aminopxopyDpxopanamid - 65 -

ΑΙΤ - 0075 methyldiester 2-[(1,6-dihydro-6-oxo-SH-pu-rin-9-yl)methyl]butandiové kyseliny

0 C-0-CH2CH3 AIT - 0079 ethylester 4-[ [3-( 1,6-d ihydro-6-o.xo-SH-pu-rin-9-yl)-l-oxopropyl]amino]benzoové kyse-liny

AIT - 0080 3-(l,6-dihydro-6-o.xo-9H-purin-9-yl)-propanová kyselina - 66 -

ΑΙΤ - 0081 4-nitrofenylester 3-( 1»6-dihydro-6-oxo-9H--purin-9-yl)propanové kyseliny 0

AIT - 0082 4-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9K-purin-9-yl)- -1-oxopropyl]amino]benzoová kyselina

AlT - 0083 4-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l--oxópropyl]amino]benzoová kyselina kombino-vaná s l-(dimethylamino)-2-propanolem (1:1) - 67 -

ΑΙΤ - 0084 l-(dimethylamino)-2-propylester 4-[[3-íl,6--dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-oxopropyl]-amino]benzoové kyseliny 0

AIT - 0085 methýle ster 2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H- purin-9-yl)-l-o.xopropyl]amino]-3-fenyl-propanové kyseliny

AIT - 0086 2-[[3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l- -oxopro pyl]amino]3-fsnylpropanova kyselina - 68 —

C^-CÍ^-C-HH AIT - 0087 3-(1,6-dihydϊο-6-oxo-9H-purin-9-y1)-N-[2--(2-deoxyglukopyranosyl)]propanamid H- .r>

Cl'

OH CH2-OH2-C-im-CH2-CH2-WH-C-CH2-CH-CH2-N+(CH3)3 4-[[2-[[3-(l,6-dihydxo-6-oxo-9H-purin-9-yl)--l-oxopíopylJamino]etb^l]amino]-2-hy<3roxy-4--oxo-N,N,H-tximethylTl-rbutanaminiumchlor íd AIT - 0090

AIT - 0092 metbyleater 4“CÍ3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H·-purin-9-yl)-l-óxopropyl]amino]butanové

AIT - 0093 3-[C 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl)--l-óxopropyl]amino]propansulfonové kyselina - 69 -

AIT - 0094 1-[2-[[3-(1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl)-l--oxopřopyl]hydra zino-2-oxoethyl]pyr íd iniumchlo-

AIT - 0095 4-[[3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l- -oxópropyl]amíno]-Ií-[2-(d iethy lamino )ethyl)-

AIT - 0096 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-N-(2-oxo thiaolan-3--yl)p*opanamid - -70 -

AIT - 0097 3-(1,6-dihydro-6-oxo-9H-puxin-9-yl)-H-[2- -(3,4-d ihydxoxyf enyl)-2-hydroJcya thyl] pxo-panamid

AIT - 0098 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-puxin-9-yl)-1-(1- -fanyl-4-oxo-l,3,8-txiazaspixo[4,5]dec-8-yl)-

AIT - 0099 3-(l,6-dih^dxo-6-oxo-9H-purin-9-yl)-l-(l,2,3,4 -tetrahydro-2-azakarbazo-2-yl)propanon -71 -

AIT - 0100 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-H-[2- -(3,4-dihydroxyfenyl)-2-hydxoxyethyl]-3J--mathylpxopanamid

AIT - 0102 3-( 116-d ihydxo-6-oxo-9H-pux in-9-yl)-1-(2-fanyl-imidazo-l-yl) pxopanon

0 c-o-ch2-ch3 AIT - 0103 J J.O o U VJ J_ V —U XA.ÁJr Μ X V — V-» — v Λ V —-/**— **— -9-yl)-l-oxopxopyl]-3-pipexidinkaxboxy- xin

0 lí

C-O-CH-CH^-KH ÓH.

Cl* OH. OH. AIT - 0105 l-(dimathylaniino)-2-pxopylastaxmonohydxochloxid 4-[ [ 3-( 1,6-0 ibydio-S-oxo-^H-ourln-9-yl)-l--oxopxopyljaminojbanzoove kyseliny - 12 -

CH. 'CH-, AIT - 0106 l-(dimethylamino)-2-propylester 3-(l»6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)propanové kyseliny Η-ΪΤ

.1 \ho-< o tl CH,

I

,-C.OH

i2-ch2 -c-o' ·( ch3 )23t-ch2-CΗ H AIT 0110 3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-puiin-9-yl)propanová kyselina kombinovaná s l-(dimethylamino)-2-

Ž AIT-0111 2-[ [3-( 1,6-d ihydro-6-oxo-9H-pur in-9-yD-l-ozo- propyl]amino]-2-(5-hydroxyl-lH-indol-3-yl)pro-pionová kyselina 0 ^3

8-0’ <CH3)2jj+_CH2_jj_oH

ch3-8-hh \\ // AIT - 1000 4-(ácetylamino)benzoová kyselina kombinovanás l-(dimethylamino)-2-propanolem (1:1)

Claims

- 73 -

č u j í c í se t í m , že obsahuje alespoň první bio-logicky aktivní chemickou Část a druhou biologickou aktiv-ní chemickou Část, spojené alespoň jednou chemickou skupi-nou tvořící můstkovou vazbu.
2. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 1,vyznačující se tím, že každé chemickáčást je vybrána ze skupiny obsahující sloučeniny projevují-cí biologickou aktivitu v následujících terapeutických tří-dách: analgetika, antihelmintika, protivředové látky, anti-bakteriální činidla, antibiotika, antikonvulsiva, protiplís-ňová činidla, antihypertonika, antimalarika, protinádorováčinidla, antiarthritika, bronchodilatátory, kardiovaskulár-ní činidla, imunologika, antidepresiva,'diuretika, inhibito-ry diureticko-karbonové anhydrásy, myorelaxancia, neuro-logika, neurotransmitační činidla, antiparkinsonika, psycho-stymulancia nebo sympathomimetika.
3. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 1,vyznačující se tím, že první a druhé bio-logicky aktivní chemické části jsou navzájem odlišné.
4. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 1,vyznačující se tím, že chemická skupinatvořící můstkovou vazbu je vybrána ze skupiny zahrnující pro-panovou kyselinu, butanovou kyselinu nebo jejich deriváty.
5. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 4,vyznačující se tím, že první biologicky ak-tivní chemická část je imunologicky aktivní sloučenina. - 74 -
6. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle náro-ku 5, vyznačující se tím, že druhá bio-logicky aktivní chemická část je neurologicky aktivní slou-čenina o
7. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 5,vyznačující se tím, že imunologicky aktiv-ní sloučenina je vybrána ze skupiny zahrnující hypoxanthinnebo jeho deriváty.
8. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 7,vyznačující se tím, že obsahuje 3-(l,6-di-hydro-6-oxo-9H-pur in-9-yl)-Ií-[ 3-( 2-oxopyrrolid in-l-yl)pro-pyljpropanamid.
9. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 7,vyznačující se tím, že obsahuje 3-(1,6- -d ihydro-6-oxo-9H-pur in-S-yl)-lf-[2-[ ^-(2-oxo-l-pyrrolidinyl)--l-»oxoethyljamino] ethyl] propanamid.
10. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 7,vyznačující se tím, že obsahuje 4-CC3-(1,6--d ihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropylJamino]benzoovoukyselinu.
11. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 7,vyznačující se tím, že obsahuje 4-[[3-(l,6--dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)-1-oxopropyljamino]benzoovou ky-selinu v kombinaci s l-(dimethylamino)-2-propanolem přibližněv poměru 1:1.
12. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle náro-ku 7, vyznačující se tím, že obsahuje3-(l,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-S-yl)pro panovou kyselinu vkombinaci s l-(dimethylamino)-2-propanolem přibližně v po-měru 1:1. - 75 -
13. Vícefunkční farmaceutická sloučenina, vyzna-čující se tím, že obsahuje imunologicky aktivnísloučeninu vázanou chemickou skupinou tvořící můstkovou vaz-bu k neurologicky aktivní sloučenině.
14. Vícefunkční farmaceutická sloučenina podle nároku 13, vyznačující se tím, že imunologicky ak-tivní sloučenina je vybrána ze skupiny obsahující hypoxanthinnebo jeho deriváty.
15. Farmaceutickýkých nemocí u savců, vže prostředek obsahujetické sloučeniny podle prostředek pro léčení neuroimunologieyznačující se tím,účinné množství vícefunkční farmaceu- nároku 13 a farmaceuticky použitelný nosič.
16. Farmaceutický prostředek pro léčení Alzheimerovy na-moci u savců, vyznačující se tím, že ob-sahuje účinné množství vícefunkční farmaceutické sloučeninypodle nároku 13 a farmaceuticky použitelný nosič. v yné
17. Způsob léčení neuroimunologických poruch u savců,značující se tím, že se savci podá účin-množství vícefunkční farmaceutické sloučeniny podle náro- ku 13.
18. Způsob léčení Alzheimerovy nemoci u savců, vy-značující se tím, že savci je podáno účinnémnožství vícafunkční farmaceutické sloučeniny podle nároku 13.
19. Farmaceutický prostředek pro léčení degenerativnínemoci u savců, vyznačující se tím, že pro-středek obsahuje účinné množství vícefunkční farmaceutickésloučeniny podle nároku 1 a farmaceuticky použitelný nosič.
20. Způsob léčení degenerativní nemoci u savců, vy-značující se tím, že savci je podáno účinnémnožství vícafunkční farmaceutické sloučeniny podle nároku 1.