CS691A3

CS691A3 - R-enantiomers of n-propargyl-1-aminoindane compounds, method of their preparation and pharmaceutical preparations that they contain

Info

Publication number: CS691A3
Application number: CS916A
Authority: CS
Inventors: Moussa B H Youdim; John P M Finberg; Ruth Levy; Jeffrey Sterling; David Lerner; Tirtsah Berger-Paskin; Haim Yellin
Original assignee: Teva Pharma; Technion Res & Dev Foundation
Priority date: 1990-01-03
Filing date: 1991-01-03
Publication date: 1991-08-13
Also published as: NL300206I1; RO107552B1; DE69102288T2; CA2031714A1; HU215451B; LU91195I2; HU908051D0; EP0436492A2; US5786390A; US5387612A; US5519061A; US5576353A; IL92952A0; DK0436492T3; AU6772490A; IE62371B1; CA2031714C; DE69102288D1; CZ288222B6; HK1008017A1

Description

Předložený vynález se týká oblasti selektivních irre-verzibilních inhibitorů enzymu monoaminoxidázy (dále MAO)a týká se R(+) enantiomeru N-propargyl-1-aminoindanu (dálePAI), který je selektivním irreverzibilním inhibitorem B-fcrmy enzymu monoaminoxidázy (dále MAO-B). Vynález se takétýká farmaceutických přípravků, obsahujících R(+) PAI, kte-rý je zvláště vhodný pro léčení Parkinsonovy choroby, po-ruch paměti a demence Alzheimerova typu (DAT), deprese ahyperaktivního syndromu u dětí.

Parkinsonova choroba se obecně pokládá za následekdegradace presynaptických dopamingerních neuronů v mozkus následnými sníženími množství neurotransmitéru dopaminu,který se uvolňuje. Nedostatečné uvolňování dopaminu protovede k nástupu poruch samovolné svalové kontroly symtoma-tických pro Parkinsonovu chorobu. Různé postupy7 pro léčení Parkinsonovy7 choroby bylyvyvinuty a v širokém rozsahu se běžně používají, např. po-dávání L-Dopy spolu s inhibitorem dekarboxylázy jako jeL-carbidopa aebo benzerazid. Inhibitor dekarboxylázy chrá-ní molekulu L-Dopy před periferní dekarboxylací a tak za-jištuje příjem L-Dopy zbývajícími dopaminergními neuronymozkovým striatem. Zde se L-Dopa převede na dopamin, cožmá za následek zvýšení hladiny dopaminu v těchto neuronech.Následkem fyziologických imp3j^;ů těchto neuronů je protoschopnost uvolnění většího množství dopaminu, které se bií- -2- ží normálním požadovaným hodnotám. Toto léčení proto mírnísymptomy této choroby a přispívá k dobrému stavu pacientů.

Nicméně léčení L-Dopou mé své nevýhody, hlavní znich je, že účinnost léčení je optimální pouze v několikaprvních letech po zéhajení léčby. Po této úvodní perioděklinická odezva mizí a je doprovázena něžádoucími vedlej-šími účinky, které zahrnují diskinézu, výpadek účinnostipřes den ("efekt on-off") a psychiatrické symptomy, jakojsou stavy zmatenosti, paranoia a halucinace. Tento vý-padek účinku pří léčbě L-Dopou se přičítá mnoha fakto-rům, zahrnujícím přirozenou progresi choroby, změnu dopa-minových receptorů v důsledku zvýšení produkce dopaminunebo zvýšené hladiny metabolitů dopaminu a farmakokinetic-ké problémy spojené s absorpcí L-Dopy (souhrn uvádí Youdinva spol., Progress in Medicinal Chemistry, sv„21, kapito-la 4, str. 138 - 167 (1984), vyd. Ellis and West, Else-vier, Amsterodam).

Aby se překonaly nevýhody léčení L-Dopou, byly navr-ženy různé léčebné postupy, ve kterých je L-Dopa kombino-vána s inhibitory MAO s cílem metabolického rozrušení no-vě vzniklého dopaminu (viz např. patent US 4826S75). MAO existuje ve dvou formách známých jako MAO-A aMAO-B, které jsou selektivní pro různé substráty a inhi-bitory. Např. MAO-B metabolizuje účinněji substráty jakoje 2-fenylethylamin a je selektivně a irreverzibilně in-hibován (-)-deprenylem (jak je popsáno níže). -3-

Je třeba uvést, že však kombinace L-Dopy s inhibito-ry jak MAQ-A tak MAO-B vede k nežádoucím vedlejším účin-kům, tykajících se zvýšení hladiny katecholaminu přesneuraxon. Dále je kompletní inhibice 3A0 také nežádoucí,protože potencuje účinek symptomimetických aminů jako jetyramin, což vede k tav. "sýrovému efektu" ("chees-effekt")Souhrn viz Youdim a spol., Hondbook of Sxperimental Fhar-macology, sv.90, kap.3 (1988), vyd. Trendelenburg and'.'.'einer, Springer-Verlag). Oeiikož MAC-3 se ukázala býtpredominantní formou MAO v mozku, považují se selektivníinhibitory této formy za možný způsob dosažení snížení rozrušení dopaminu na jedné straně a společně s minimaliza-cí systemických účinků celkové inhibice MAO na stranědruhé.

Jedním z těchto selektivních inhibitorů MAO-B je-(-)-deprenyl, který byl v širokém rozsahu studován a bylpoužit jako inhibitor MAO-B k doplnění léčby L-Dopu. To-to léčení (-)-deprenylem je obecně výhodné, jelikož ne-působí "sýrový efekt" při dávkách působících téměř kom-pletní inhibici MAO-B (Elsworth a spol., fhyschopharmaco-logy, 5J7, 33 (1 978). Dále přídavek (-)-deprenylu ke kom-binaci L-Dopy a inhibitoru dekarboxylázy pacientům s Par-kinsonovou chorobou vede ke zlepšení akinézy a celkovéfunkční kapacity rovněž jako k eliminaci výpadků typu"on-off" (viz Birkmayer and Riederer v "Parkinson*s Di-sease" str. 138-149, Springer-Verlag (1983)). -4-

Tak tedy (-)-deprenyl zvyšuje a prolonguje účinekL-Dopy a umožňuje snížení dávek L-Dopy, čímž jsou omeze-ny nežádoucí vedlejší účinky léčení L-Dopou.

Nicméně (-)-deprenyl není bez svých vlastních nežá-doucích účinků, které zahrnují aktivaci preexistujícíchžaludečních vředů a občasné hypertenzivní příhody. Dále(-)-deprenyl je derivátem amfetaminu a je metabolizovénza tvorby amfetaminu a methamfetaminů, které mohou véstk nežádoucím vedlejším účinkům spojených s těmito látka-mi jako je např. zvýšená srdeční frekvence (Simpson, Bio-chemical Pharmacology,27. 1591 (1978); Finberg a spol.,v "Monoamine Oxidase -‘-nhibitors - Lhe State of the Art",str.31-43, vyd. Youdim a Paykel, (1981) Wiley).

Další sloučeniny, které jsou selektivními irrever-zibilními inhibitory MAO-B, které jsou prosté nežádoucíchvedlejších účinků spojených s (-)-deprenylem, již bylypopsány. Dednou takovou sloučeninou je N-prcpargyl-1-aminoindan.HGl (racemický PAI.HC1) popsaný v patentech GB1003686 a GB 1037014 a US 3513244. ue to účinný selektivníirreverzibilní inhibitor MAO-B, který není metabolizovénna amfetaminy a nevzniká při něm zvýšení nežádoucích sym-patomimetických účinků.

Ve srovnávacích testech na zvířatech se prokázalo, že racemický PAI má značné výhody ve srovnání s (-)-depre- nylem, např. racemický PAI nevyvolává žádnou významnou ta- -5- chykardii, nepůsobí zvýšení krevního tlaku (účinky vyvo-lané dávkami 5 mg/kg (-)-deprenylu), nevyvolává kontrakcevíček ani zvýšení srdeční frekvence v dávkách až do 5 mg/kg(účinky působené (-)-deprenylem v dávkách nad 0,5 mg/kg),dále racemický PAI.IICl nepotencuje kardiovaskulární účinkyt.yraminu (Finberg a spol. v "Enzvmes and Neurotransmittersin ivíental Disease", str. 205-119 (1980), vyd. Usdin a spol.,pub. John V/iley and sons,NY$ Finberg a spol (1981) v ”Mo-noamine Oxidase Inhibitors - '^he State of the Art", ibidjFinberg a Youdim, British Journal Pharmacol.,85 451 (1985)).

Jedním cílem předloženého vynálezu je separovat ra-cemické sloučeniny PAI a vyrobit enantiomer s inhibičníaktivitou MAO-B.

Jelikož deprenyl má podobnou strukturu jako PAI a jeznámo, že (-)-enantiomer deprenylu tj. (-)-deprenyl, jeznačně farmaceuticky aktivnější než (+)-enantiomer, odborní-ci předpokládali, že pouze (-)-enantiomer PAI by mohl býtúčinným inhibitorem MAO-B.

Avšak na rozdíl od těchto předpokladů bylo po roz-štěpení obou en^ntiomerů zjištěno, v souladu s tímto vyná-lezem, že účinným inhibitorem ΜΑΟ-ΰ bylý (+)-PAl en^ntio-mer, zatímco (-)-enentiomer vykázal extrémně nízkou inhibič-ní účinnost MAG-3. Déle ( + )-PAI enantiomer měl také překva-pivě vyšší stupeň selektivity pro inhibici MAO-B než odpo-vídající racemická forma a může tak mít méně nežádoucíchvedlejších účinků při léčení indikované choroby. Tato -6- zjištění jsou založena jak na in vitro tak in vivo experi-mentech a detailněji jsou prezentována déle. Následně bylo zjištěno, že (+)-PAI mé absolutní kon-figuraci R. To bylo také překvapující vzhledem k očekávanéstrukturální analogii s deprenylem a amfetaminy.

Vysoký stupeň stereoselektivity farmakologické účin-nosti mezi R(+).PAI a S(-)-enantiomerem je také pozoru-hodný. Sloučeniny R(+)-PAI je téměř o čtyři rády aktiv-nější než S(-)-enantiomer při inhibici MAO-B. Tento poměrje významně vyšší než byl pozorován mezi dvěma enentiome-ry deprenylu (Knoll a Magyar, Adv.Biochem.Physchopharmacol.,5_. 393 (1972); Wagy&r a spol., Acta Physiol.Acad.Sci.Hung.,32, 377 (1967)). Dále v některých fyziologických testechse o (+)-deprenylu uvádí, že má stejnou nebo dokonce vyššíúčinnost než (-)-enantiomer (TSkes a spol., Pol.J.Pharma-col.Pharm.4Q, 653 (1988)). N-Methyl-N-propargyiaminoindan (MPAI) je účinnějšíinhibitor MAO, ale s nižší selektivitou pro MAO-B oprotiMAO-A (Tipton a spol., Biochem.Pharmacol., 3J_> 1250 (1982)).Překvapivě v tomto případě autoři vynálezu zjistili, žejsou pouze malé rozdíly v relativních účinnostech dvouenantiomerů, což dále zdůrazňuje pozoruhodnost případuR(+)-PAI (viz tabulka I).

Dalším cílem předloženého vynálezu je poskytnout po- -7- prvé použití farmaceuticky účinného PAI-engntiomeru sa-motného (bez L-Dopy) pro léčení Park4>nsonovy choroby, de-mence a deprese (viz Youdim a spol v Handbook of Experi-mental Pharmacology, sv. 90/1,(1988), kap.3, vyd.Trende-lenberg and Wiener).

Ještě dalším cílem vynálezu je poskytnout použitífarmaceuticky účinného PAI-engntiomeru pro předléčbu^ tosamotného nebo spolu se synergistickými látkami, pro Par-kinsonovu chorobu tak, aby se oddálila léčba L-Dopou as ní spojené nežádoucí vedlejší účinky. Tento přístup bylstudován s ohledem na (-)-deprenyl, který se ukázal býtúčinný podávaný samotný v ranných stadiích parkinsonismua může mít také u těchto pacientů synergistický účinek přispolečném podání s alfa-tokoferolem (derivátem vitaminu A),(The ?arkinsonzs Study Group, New England J.Med., 321 (20),1364-1371 (1989)).

Kromě své vhodnosti při léčení Parkinsonovy chorobyse (-)-deprenyl také ukázal být velmi vhodný pro léčenípacientů trpících demencí Alzheimerova typu (DAT) (Tariota spol., Psychopharmacology, 91 . 489-495, 1987) a při lé-čení deprese (Mandelewicz a Youdim, Brit«J.Psychiat.142,508-511, 1983). Z toho vyplynulo použití R(+)-PAI slouče-niny, u které se prokázala účinnost,při obnovení paměti,možnosti léčení poruch paměti a zvláště vhodné použití pro -8- léčbu Alzheimerovy choroby a pro léčbu hyperaktivníhosyndromu u dětí.

Předložený vynález tak poskytuje novou sloučeninuR(+)-enantiomer N-propargyi-1-aminoindanu /R(+)PAI)/vzorce I

H a její farmaceuticky přijatelné adiční sole s kyselina-mi. Předložený vynález se také týká přípravy R(+)PAI, far-maceutických přípravků, obsahujících sloučeninu R(+)PAI spolu s vhodnými nosiči a použití R(+)FAI pro léčení lidskýchpacientů trpících Parkinsonovou chorobou, poruchami pa-měti, demencí Alzheimerova typu a hyperaktivním syndromem. R(+)PAI může být získán optickým rozštěpením race-mické směsi R a S-enantiomeru PAI. Tato rozštěpení můžebýt provedeno jakoukoliv běžnou metodou pro rozštěpení,která je dobře známa odborníkům, jako jsou metody popsanév "Enantiomers, Racemates and Resolutions" J.Jacquesem, -9- A.Jolletem a S .’A'ilenem,Pub. John Vviley and Sons, NY,19S1.Například resoluce může být provedena preparativní chro-mát opraťií na chirální koloně. Jiným příkladem vhodnéhozpůsobu optického štěpení je příprava diastereomerníchsolí s opticky aktivními kyselinami jako je kyselina vin-né, jablečné, mandlová nebo N-acetylderiváty aminokyselinjako je K-acetylleucin, s následující rekrystalizací proizolaci diastereomerní sole požadovaného R-enantiomeru <,

Racemická směs R a S enentiomerů může být připravenanapř. jak je popsáno v GB patentech 1 003676 a C-B 1 03701 4.^acemická směs PAI může být také připraveny reakcí 1-chlorindanu nebo 1-bromindanu s propargylaminem. Alternativně mže být racemát připraven reakcí propargylaminu s 1-indano-nem za vzniku odpovídajícího iminu s následující redukcídvojné vazby uhlík-dusík v iminu vhodným činidlem, jakoje borohydrid sodný. V souladu s předloženým vynálezem může být R ensntio-mer PAI také připraven přímo z opticky aktivního R-enantiomeru 1 -aminoindanu reakcí s propargylbromidem nebo propar-gylchloridem za přítomnosti organické nebo anorganickébáze a popřípadě za přítomnosti vhodného rozpouštědla.

Vhodnými organickými nebo anorganickými bázemi propoužití ve výše uvedené reakci jsou např. triethylamin, pyridin, uhličitany nebo hydrogenuhličitany alkalických ko-vů atd. Jestliže se reakce provádí za přítomnosti rozpouš- -1 0- štědla, může být toto zvoleno ze skupiny zahrnující např.toluen, methylenchlorid a acetonitril. Výhodná metodapřípravy výše uvedených sloučenin zahrnuje reakci meziR-1-aminoindanem a propargylchloridem za použiti hydrogen-uhličitanu draselného jako báze a acetonitrilu jako roz-pouštědla.

Uvedená reakce 1-aminoindanu obecně vede ke směsi nezrea-govaného primárního aminu, požadovaného sekundárního ami-nu a terciárního aminu Ν,Ν-bispropargylaminového produktu,dožadovaný sekundární amin, t.j. N-propargy1-1-aminoindan,může být z této směsi oddělen jakoukoliv obvyklou separač-ní metodou jako je chromatografie, destilace, selektivníextrakce atd.. Výchozí R-1-aminoindan může být připraven způsoby zná-mými z literatury, např. jak uvádí Lawson ayí Rao, Sioche-mistry (1980) 1 9. 2133 a zde citované odkazy, a evropskýpatent č. 235590. R-1-Aminoindan také může být připraven optickým rozšVžě-pením racemické směsi R a S enantiomerů, např. tvorbou dia-stereomerních solí s opticky aktivními kyselinami, nebo ji-nou známou metodou, jako je metoda uvedená ve výše citova-né publikaci "Enantiomers, ^acemates an(j esolutions" od J.Uacquese a spol., jBub.John Wiley and Sons, NY,1981. Alterna-tivněs výchozí R-1-aminoindan může být připraven reakcí1-indanonu s opticky aktivním aminem s následující redukcídvojné vazby uhlík-dusík ve výsledném iminu hydrogenací nad -11- vhodným katalyzátorem jako je palladium na uhlí, oxid pla-tičitý, Haney-nikl a podobně. Výhodnými opticky aktivní-mi aminy jsou například jeden z antipodů fenethylaminu neboester aminokyseliny jako je valin nebo fenylalanin. Benzy-lová N-C vazba může být následně rozštěpena hydrogenacíza mírných podmínek.

Dalšími metodami pro přípravu R-1-aminoindanu jsouhydrogenace,jak je popsána výše, indan-1-onoximatherů, ukterých alkylová část etheru obsahuje opticky čisté chirál-ní centrum. Alternativně, nechirélní deriváty indan-1-onuobsahující dvojnou vazbu uhlík-dusík, jako je imin nebooxim, mohou být redukovány chirálním redukčním činidlem,např. komplexem lithiumaluminiumhydridu a efedrinu.

Pro přípravu farmaceuticky přijatelných adičních solísloučeniny R(+)PAI se volná báze nechá reagovat s požado-vanými kyselinami za přítomnosti vhodného rozpouštědle ob-vyklými metodami. Podobně adiční soli s kyselinami mohoubýt převedeny na volné báze známými metodami. V souladu s předloženým vynálezem může být sloučeninaB(+)PAI připravena jako farnaceutické kompozice zejménavhodné pro léčení Parkinsonovy choroby, demence Alzheime-rova typu (DAT) nebo deprese. Takové přípravky mohou obsa-hovat sloučeninu R(+)PAI nebo farmaceuticky přijatelné adicní sole s kyselinami těchto sloučenin, spolu s farmaceu-ticky přijatelnými nosiči a/nebo přísadami. Například tyto -12- přípravky mohou být připraveny jako léčiva, která mohoubýt podávána orálně, parenterálně, rektálně nebo trans-dermálně. vhodné formy pro orální podání zahrnují tablety,lisované nebo potažené pilulky, dražé, sáčky, tvrdé neboměkké želatinové kapsle, sublinguální tablety, sirupy asuspenze; pro parenterální podání vynález poskytuje ampulenebo lahvičky obsahující vodný nebo nevodný roztok neboemulze; pro rektální podání jsou určeny čípky s hydrofilní-mi nebo hydrofobními vehikuly; a pro topickou aplikaci jsouto masti a transdermální přenos je uskutečněn vhodnýmtransportním přenosem známým v oboru. Výše uvedené přípravky mohou být použity samotné proléčení Parkinsonovy choroby, Alzheimerovy choroby nebodeprese, nebo alternativně, v případě Parkinsonovy chorobymohou být použity jako přídavek k obvyklé léčbě L-Dopou. Výhodné dávky účinné složky, tj. R-PAI sloučenin, vevýše uvedených přípravcích jsou v následujících rozmezích:pro orální nebo čípkové přípravky 2 až 20 mg na dávkovoujednotku na den, a výhodně 5 až 10 mg na dávkovou jednotkuna den; pro injekční přípravky 1 až 10 mg/ml dávkové jednot-ky na den a výhodněji 2 až 5 mg/ml na dávkovou jednotku naden.

Popis obrázků:

Obr.1. představuje grafické znázornění výsledků podle pří- kladu 19. -13-

Obr. 2 představuje příkladu 19. grafické znázornění výsledků podle Obr .3 představuje kladu 19. grafické znázornění výsledků podle pří- Obr. 4 představuje grafické znázornění. výsledků podle příkladu 20»

Obr .5 představuje kladu 20. grafické znázornění výsledků podle pří- Obr. 6 představuje grafické znázornění výsledků podle příkladu 20, O'or. 7 představuje grafické znázornění výsledků podle pří- kladu 20.

Obr.8. představuje grafické znázornění výsledků podlepříkladu 20.

Obr.9 představuje grafické znázornění výsledků podle pří-kladu 20.

Obr.10 představuje grafické znázornění výsledků podlepříkladu 20.

Obr.11 představuje grafické znázornění výsledků podle příkladu 20.

Obr.12 představuje grafické znázornění výsledků podlepříkladu 21.

Obr.13 představuje grafické znázornění výsledků podle pří kladu 21.

Obr.14 představuje grafické znázornění výsledků podle příkladu 21. -14-

Obr.15 představuje grafické znázornění výsledků podlepříkladu 21.

Obr.16 představuje grafické znázornění výsledků podlepříkladu 22.

Vynález je blíže detailněji popsán v následujícíchpříkladech, tabulkách a obrázcích, které jej však nijakneomezují. Příklad 1

Eacemický hydrochlorid N-propargyl-1-aminoindanu

Racemický 1-aminoindan (10,0 g) a 10,4 g uhličitanudraselného se přidá ke 75 ml acetonitrilu. Výsledná směsse zahřívá na 60 °G a po kapkách se přidá 4,5 g propargyl-chloridu.

Směs se míchá při 60 °G po 16 hodin, pak se nejtě-kavější látky odstraní destilací ve vakuu. Zbytek se rozdě-lí mezi 10% vódný hydroxid sodný a methylenchlorid.

Organická fáze se suší a rozpouštědlo se odstranídestilací. Zbytek se podrobí rychlé chromatografii na sili-kagelu s eluci 40% ethylacetem/60 % hexanem. Frakce, obsa-hující titulní sloučeninu jako volnou bázi se spojí a elučníčinidlo se nahradí etherem. Etherový roztok se zpracuje splynným chlorovodíkem, vytvořená sraženina se izoluje odsá-ním a rekrystalizuje z isopropanolu, získá se 7,3 g titulní -15- sloučeniny, t.t. 182 až 184 °C.

Chromatografické a spektroskopické hodnoty jsou vsouladu s literaturou (US 3513244) a autentickým vzorkem. NMR ( & ,CDG13): 2,45 (2H, m), 2,60 (1H, t), 2,90 (1H,m), 3,45 (1H, m), 3,70 (2H, d), 4,95 (1H, t), 7,5 (4H, m)ppm. Příklad 2

Hydrochlorid S-(-)-N-propargy1-1-aminoindanu ^itulní sloučenina ve formě volné báze se izoluje optickým rozštěpením racemické směsi volné báze z příkladu 1 napreparativní HPLG koloně Chiracelu OJ (celulóza tris/p-methylbenzoát/) elucí 10 % isopropanolu/90 % hexanu a shro-mážděním prvního eluovaného hlavního píku. Výsledný olej sepřevede na titulní sloučeninu (hydrochlorid) zpracováníms 10% diethylethertfjvy-ého roztoku oleje plynným chlorovodí-kem a odsátím výsledné sraženiny. / / -29,2° (1%, ethanol), t.t. 182 až 184 °G. Další chromatografické a spektroskopické údaje jsou identické shydrochloridovóu solí z příkladu 1 o Příklad 3 hydrochlorid R-(+)-N-propargy1-1-aminoindanu

Titulní sloučenina se připraví stejná jako ve výšeuvedeném příkladu 2 s tím rozdílem, že se oddělí druhý eluo-vaný pík z preparativní HPLG: / + 29,1° (0,8%, etha- -16- nol), t.t. 179 až 181 °C. ^alší chromátografické a spektro-skopické údaje jsou identické s hydrochloridovou solíz příkladu 1. Příklad 4 ^ydrochlorid R-(+)-N-propargyl-1-aminoindanu R-(-)-1-Aminoindan (12,4 g) a 12,9 g uhličitanu dra-selného se přidá k 95 ml acetonitrilu. Výsledná suspenzese zahřívá na 60 °C a přikape se 5,6 g propargylchlori-du. Směs se míchá při 60 °C po dobu 16 hodin, odstraní se Λ nejtěkavější látky ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi 10% vod-ný hydroxid sodný a methylenchlorid.

Organická fáze se suší a rozpouštědlo se odstraníve vakuu, zbytek se chromatografuje rychlou chromatogra-fií na silikagelu za eluce směsí 40 % ethylacetátu/60 %hexanu. Frakce, obsahující volnou bázi titulní sloučeninyse spojí a rozpouštědlo se nahradí etherem. Etherový roztokse zpracuje s plynným chlorovodíkem a výsledná sraženina seizoluje odsátím a rekrystalizuje z isopropanolu. Získáse. 6,8 g titulní sloučeniny, t.t. 183 až 185 °G //&+30,90° (2%, ethanol). Spektrální vlastnosti jsou shodnés vlastnostmi uvedenými pro sloučeninu z příkladu 1· -17- Příklad 5 / uydrochlorid S-(-)-N-propargy1-1-aminoindanu 1 Titulní sloučenina se připraví metodou podle příkladu 4 s tím rozdílem, že se jako výchozí látka použije S-(+)- 1-aminoindan. Produkt vykazuje /*X /p -30,3° (2%, ethanol),t.t. 183 až 185 °Ge Spektrální vlastnosti jsou identickés vlastnostmi uvedenými pro sloučeninu z příkladu 1· « < Příklad 6

Di (E-(+)-N-propargyl-1-aminoindan)L-tartrát K roztoku L-vinné kyseliny (4,4 g) ve 48 ml vroucího methanolu se přidá roztok R-(+)-N-propargyl-1-aminoindano-vé volné báze (5,0 g) v methanolu (48 ml). Roztok se zahří-vá na teplotu^pětného toku a během 20 min se přidá 284 mlterč.butylmethyletheru. Směs se zahřívá dalších 30 minut,ochladí a výsledná sraženina se odsaje, získá se tak 6,7 gtitulní sloučeniny, t.t. 175 až 177 °G. /<á/d (1,5, H2O)= +34,3; elementární analýza pro G28H32°6N2vypočteno: 68,26 % G, 6,56% H, 5,69 % N, nalezeno 68,76 %C, 6,57 % H, 5,61 % N. Příklad 7

Hydrochlorid R-(+)-N-methyl-N-propargy1-1 -aminoindanu

Volná báze R-(+)-N-propargy1-1-aminoindanu z příkladu 4 (1,2 g), uhličitanu draselného (0,97 g) a methyljodidu -18- (1 g) se přidá k 15 ml acetonu a výsledná suspenze se zahří-vá na teplotu zpětného toku pod atmosférou dusíku po 8hodin. Pak se těkavé látky odstraní za sníženého tlakua zbytek se rozdělí mezi 10 % vodný hydroxid sodný (30 ml)a methylenchlorid (30 ml). Organická fáze se suší a roz-pouštědlo se odstraní ve vakuu. Zbytek se zpracuje rych-lou chromatografií na silikagelu s elucí směsí 40% ethyl-acetátu/60 % hexanu, ^rakce, obsahující titulní sloučeni-nu ve formě volné báze se spojí a rozpouštědlo se nahra-dí diethylethere, Etherový roztok se zpracuje s plynnýmchlorovodíkem, těkavé podíly se odstraní ve vakuu a zby-tek se rekrystalizuje z isopropanolu, získá se 400 mg ti-tulní sloučeniny ve formě bílé krystalické pevné látky,t.t. 134 až 136 °G, /b</D +31,40 (ethanol). NMR ( ScDC^):2,55 (2H, m), 2,7 (1K, šir.s), 2,8 (3H, s), 3,0 (1H,m), 3,4 (1H, m), 3,9 (2H, šir.s), 5,05 (1H,m), 7,7 (4H, m) ppm. Příklad 8

Hydrochlorid S-(-)-N-methyl-N-propargyl-l -aminoindanu

Titulní sloučenina se připraví jako v příkladu 7 výše s tím rozdílem, že se jako výchozí látka použije S-(-)-N-propargyl-1-aminoindan (volná báze) z příkladu 5. Všech-ny fyzikální a spektrální vlastnosti titulní sloučeninyjsou shodné s těmito vlastnostmi z příkladu 7 s výjimkou/c</d-34,9® (ethanol). -19- Příklad 9Složení tablet

Hydrochlorid R(+)-N-propargy1-1-aminoindanu 5,0 mg předželatinovaný škrob 47,0 mg laktoza nesušené 66,0 mg mikrokrystalická celulóza 20,0 mg škrobový glykolát sodný 3,0 mg talek 1 ,5 mg stearát hořečnatý 0,7 mg

Pro granulaci se přidá potřebné množství předčištěné vody. Příklad 10

Složení tablet

Hydrochlorid R(+)-N-propargy1-1-aminoindanu 1,0 mg laktoza nesušená 50,0 mg předželatinovaný škrob 36,0 mg mikrokrystalická celulóza 14,0 mg škrobový glykolát sodný 2,2 mg talek 1,0 mg stearát hořečnatý 0,5 mg

Pro granulaci se přidá potřebné množství předčištěné vody. Příklad 1Í

Složení kapslí

Hydrochlorid R(+)-N-propargyl-1-aminoindanu 5,0 mgpředželatinovaný škrob 10,0 mg -2 0- škrob 44,0 mg λ mikrokrystalické celulóza 25,0 mg ethylceluloza 1,0 mg talek 1 ,5 mg

Pro granulaci se pfiiiá potřebné množství předčištěné vody. Příklad 12

Složení injekcí

Hydrochlorid R(+)-N-propargy1-1-aminoindanu 5,0 mgbezvodá dextroza 44,0 mg HG1 do pH 5 Přidé se čištěná voda v množství potřebném pro 1 ml. Příklad 13

Složení injekcí hydrochlorid R(+)-N-propargyl.1-aminoindanu 1,0 mgchlorid sodný 8,9 mg HC1 do pH 5 Přidá se čištěná voda do 1 ml. Příklad 14

Složení injekcí

Hydrochlorid R(+)-N-propargyl-1-aminoindanu 2,0 mgchlorid sodný 8,9 mg HC1 do pH 5 Přidá se čištěná voda podle potřeby do 1 ml. -21- Příklad 15Složení sirupu

Hydrochlorid R(+)-N-propargyl-1-aminoindanu 5,0 mg sacharoza 2250,0 mg sodná sůl sacharinu 5,0 mg methylparaben 6,0 mg propylparaben 1 ,0 mg chutové přísady 20,0 mg glycerin USP 500 mg alkohol 95% USP 200 mg Přidá se čištěná voda v množství potřebném do 5,0 ml. Příklad 16 Suhlinguální tablety nydrochlorid R(+)-N-propargyl-1-aminoindanu 2,5 mg mikrokrystalická celulóza 20,0 mg nesušená laktoza 5,0 mg předželatinovaný škrob 3,0 mg povidone 0,3 mg barvící přísada Q · 5 · ochucovadla q.s. sladidla q.s. talek 0,3 mg -22-

Směs přísad a aktivní látky se granuluje s ethanolo— vým roztokem Povidonu. Po sušení a odvážení se smísí s kem a lisuje. Příklad 17 PAI sublinguální tablety Hydrochlorid R(+)-N-propar gyl-1-aminoindanu 5,0 mg mikrokrystalické celulóza 15,0 mg předželatinovaný škrob 12,0 mg ethylceluloza • 0,3 mg talek 0,3 mg Podle potřeby granulace se přidá čištěná voda. Příklad 18 Složení tablet Hydrochlorid R( + )-N-propar, gyl-1-aminoindanu 5,0 mg levodopa 100,0 mg Carbidopa 25,0 mg předželatinovaný škrob 24,0 mg škrob 40,0 mg mikrokrystalické celulóza 49,5 mg barva D^G Yellow č.1 0 0,5 mg barva D^C Yellow č.o 0,02 mg

Alkohol USP se přidá podle potřeb granulace. -23- Následující příklady a připojené tabulky a obrázky sevztahují k biologickým pokusům provedeným v souladu s tím-to vynálezem. Příklad 19 inhibice aktivity MAO in vitro

Experimentální protokol:

Zdrojem MAO enzymu byl homogenát mozku krys v 0,3Msacharoze, který byl odstřelován při 600 g po dobu 15 mi-nut. Supernatant byl zředěn zhruba v 0,05M fosfátovém pufrua předinkubován se seroivými ředěními sloučenin obecnéhovzorce I: R(+)-PAI, S(-)-PAI a racemický-PAI (kde A zna-mená vodík) po 20 minut při 37 °C. Pak se přidají ^C-znače-né substráty (2-fenylethylamin, dále PEA, 5-hydroxytrypta-min, dále 5-HT) a v inkubaci se pokračuje dalších 20 min(PEA) nebo 30-45 min (5-HT). Použité koncentrace substrá-tu byly 50 yuM (PEA) a 1 mM (5-HT). V případě PEA bylakoncentrace enzymu volena tak, že se během reakce nematabo-lizuje více než 10 % substrátu, ^eakce se pak ukončí pří-davkem tranylcyprominu (do konečné koncentrace 1 mM) a in-kubát. se zfiltruje přes malý sloupec Amberlitu CG—50, pufro-vaného na pH 6,3. Sloupec se promyje 1,5 ml vody, eluáty sespojí a obsah radioaktivity se stanoví kapalinovou scintilační spektrometrií.Protože je aminový substrát zcela zachy-cen na sloupci, dokládá radioaktivita v eluátu produkci -24- neutrélních a kyselých metabolitů vytvořených následkemMAO aktivity.Aktivita MAO ve vzorku byla vyjádřena jakoprocenta aktivity kontroly za nepřítomnosti inhibitorů, poodečtení příslušných hodnot slepých pokusů. Aktivita sta-novená za použití PEA jako substrátu je označena jakoMAO-B a za použití 5-HT jako MAO-A. Výsledky:

Inhibiční aktivity R(+)-PAI, S(-(-PAI a racemickýhh PAI sloučenin vzorce I byly odděleně zkoušeny in vitroa výsledky typických pokusů jsou uvedeny na obr. 1 a 2.Pokus byl opakován třikrát. koncentrace inhibitoru, vy-kazující 50% inhibici substrátového metabolismu (IC-50)byla vypočtena z inhibičních křivek jak je uvedeno v ta-bulce 1 . Z těchto údajů je zřejmé, že: a) R(+)-PAI je dvakrát aktivnější než racemét pro inhibiciMAO-B, b) R(+)-PAI je 29krát aktivnější pro inhibici MAO-B nežMAO-A, c) S(-)-PAI *é pouze 1/6800 aktivity R(+)-PAI pro inhi-bici MAO-B a vykazuje malou nebo žádnou selektivitumezi MAO-B a IvIAO-A. -25-

Tabulka 1 IC-50 (nM) hodnoty pro inhibici MAO-A a MAO-B racemickýmPAI a jeho R( + ) a S(-) enantíomery v homogenátu krysíchmozků in vitro IC-50 (nM)

MAO-A MAO-B

SlouSe-

nina: S(-)PAI R(+)PAI Rac S(-)PAI R(+)PAI Rac 26000 73 140 17000 2,5 5 Výsledky stejného pokusu za použití R(+) a S(-)-MPAI (N-methyl-N-propargyl-1-aminoindan) jsou uvedeny v tabul-ce 1A. Každý z enantiomerů MPAI je méně selektivní meziinhibici MAO-B a MAO-A než R(+)PAI. Dále je R(+) pouze pětkrát aktivnější než S(-)MPAI při MAOBB inhibici, na rozdílod R(+)PAI, který je asi 7000krát aktivnější než S(-)PAIv tomto pokuse.

Tabulka IA IC-50 (nM) hodnoty pro inhibici MAO-A a MAO-B R(+) a S(-)enantíomery MPAI v homogenátu krysích mozků in vitro IC-50 (nM) MAO-A_____MAO-B_

Slouče-nina: S(-)MPAI R(+)MPAI 70 S(-)MPAI R(+)MPAI50 10 -26- tejné pokusy byly také provedeny s lidskou cerebrálníkůrovou tkání, získanou 6 hodin po úmrtí a zpracovanouvýše popsaným způsobem. Výsledky těchto pokusů jsou uve-deny na obr.3 (kde R(+)PAI, S(-)PAI a racemické PAI slou-čeniny jsou ekvivalentní vzorci I). Příklad 20

Inhibice MAO aktivity in vávo: akutní léčení

Experimentální protokol:

Krysy (samci Sprague-Dawley) o hmotnosti 250+20 g bylyošetřeny jedním z enantiomerů nebo racemickou formou PAIintraperitoneální injekcí (Ig) nebo orální sondou (gS) adekapitovány 1 nebo 2 hodiny po podání. Pro každou hodnotudávky inhibitoru byly použity skupiny tří krys a MAO ak-tivita byla stanovena v mozku a jitrech za použití obecnétechniky popsané dříve, božství proteinu v každé inkuba-ci bylo stanoveno za použití Folin-Lowryho metody a akti-vita enzymu byla vypočtena jako nmol substrátu metaboli-zovaného za hodinu inkubace na kažýý mg proteinu. Aktivi-ta MAO v živočišných tkáních živočichů ošetřených inhibi-tory byla vyjádřena jako procenta enzymové aktivity veskupině kontrolních zvířat,kterým bylo podáno vehikulum(voda pro orální podání, 0,9% salinický roztok pro ip. in-jekce) a usmrceným výše uvedeným způsobem. -27- Výsledky: Žádné z použitých dávek použitá s inhibitorovými lé-čivy nevykazuje zřejmé změny chování. Výsledky jsou zná-zorněny na obr. 4 až 11. ip podání sloučeniny R(+)-PAIdosahuje 90% inhibici mozkové MAO-B aktivity při dávce0,5 mg/kg. Stejná dávka dosahuje pouze 20% inhibice MAO-Aaktivity. Při orálním podání stejná dávka R(+)-PAI dosahuje80% inhibice MAO-B s nedetegovatelnou inhibici MAO-A. V podstatě stejné výsledky byly dosaženy pro inhibici ja-terního BO jako pro mozkový MAO. Dávky dosahující 50%inhibici MAO-A a MAO-B (10-50) byly vypočteny z inhibičníchkřivek a jsou uvedeny v tabulce 2. z těchto údajů je zřej-mé, že: a) inhibiční aktivita MAO sloučenin R(+)-PAI je nachová-na in vivo u krys,

b) selektivita inhibice MAO-B vzhledem k MAO-A pro R(+)-PAI in vivo je zachována, c) mnohem větší aktivita (+)-je vzhledem k (-)-enantiome-ru zachována in vivo, d) sloučeniny jsou účinněji absorbovány po orálním podání a e) sloučeniny účinněji procházejí bariérou krev-mozek aúčinněji inhibují mozkový MAO. Skutečnost, že R(+)-PAIje asi dvakrát aktivnější než racemické sloučenina proinhibici MAO-B je odrazem extrémně nízké aktivity S(—)—PAI pro inhibici MAO-B. -28- f·

Tabulka 2 IC-50 hodnoty (mg/kg) pro inhibici MAO-A a MOA-B pomocíR(+)-PAI, S(-)-PAI nebo racemického PAI, u krys s násle-dujícím intraperitoneálním (IP) injekčním nebo orálním(PO) podáním IC-50 (mg/kg)

___MAO-A___________MAO-B

SlouČe- nina: S(-)PAI R(+)PAI Rac S(-)PAI >10 >1 0 R(+)PAI 0,07 0,06 Rac 0,22 0,11 IP IP mozek játra >10 >10 1,2 5 2,5 5 PO mozek >10 >5 >5 7Ί 0 0,17 0,29 PO játra >1 0 >5 r5 >1 0 0,05 0,09 Příklad 21 xnhibice MAO aktivity in vivo: chronické léčení

Experimentální protokol:

Krysy(specifikace jako v příkladu 20: 4 zvířata projednu hodnotu dávky) se ošetří sloučeninou R(+)-PAI neboracemickou formou při třech hladinách dávky (0,05, 0,1 a0,5 mg/kg) orálním podáním, jedna dávka denně po 21 dní apak se dekapitují 2 hodiny po poslední dávce. Aktivita MAO -29- typů A a B byla stanovena v mozku a játrech postupem po-psaným v příkladu 20. Výsledky: Dávka 0,1 mg/kg denně sloučeniny R(+)-PAI poskytujedobrý stupeň selektivní inhibice s více než 80% inhibicímozkového MAO-B a 20% nebo nižší inhibicí mozkového MAO-A.Při vyšší dávce 0,5 mg/kg denně je MAO-A stéle inhibovénméně než 50 % (obr.12 a 13). Jaterní MAO vykazuje stej-ný stupeň selektivní inhibice (obr.14 a 15)· SloučeninaR(+)-PAI je vždy účinnější než racemické forma inhibito-ru, s faktorem asi dvojnásobným. V případě mozkového MAO,má R(+)tPAI lepší stupeň selektivity pro inhibici MAO-Bnež racemické forma.

Tyto výsledky ukazují, že selektivita MAO-B inhibicemůže být udržována následujícím chronickým léčením pomo-cí uvedených sloučenin. Jako u jiných irreverzibilníchinhibitorů je stupeň inhibice enzymu vyšší při chronic-kém ošetřování než při jednotlivé dávce léčiva. SloučeninaR(+)-PAI vykazuje lepší stupeň selektivity inhibice moz-kového MAO než racemické sloučenina. Příklad 22

Irreverzibilní charakter MAO inhibice

Experimentální protokol:

Jednotlivá dávka sloučenina R(+)-PAI (1 mg/kg) byla -30- podána ip injekcí skupinám 4 krys a zvířata byla usmrcenao 2, 6, 18, 24, 48 a 72 hodin později. Aktivita MAO-Bbyla stanovena v celé mozkové tkáni jak ke popsáno výše.Výsledky’· Výsledky jsou znázorněny na obr.16. ^aximální inhi-bice MAO-B byla dosažena 6 hodin po injekci. lvIAO aktivitabyla navrácena na 30 % aktivity kontroly po 72 hodináchpo injekci. Tento pokus dokládá irreverzibilní charakterMAO inhibice sloučeniny R(+)-PAI. Příklad 23

Zesílení vlivu tyraminu na tlak u krys při vědomí

Experimentální protokol:

Krysy byly anestetizovány směsí pentobarbitalu (30mg/kg) a chlorálhydrátu (120 mg/kg) intraperitoneálníinjekcí. Levá karotida a jugulární žíla byly kanyloványjemnou polythenovou trubičkou (arterie) nebo jemnou tiubič·kou ze silikonového kaučuku připojenou k polyethylenovétrubičce (žíla), jejich vzdálenější konec byl zaveden podkůži da krkem. Trubičky byly naplněny heparinizovanýmsolným roztokem a uzavřeny zátkou z jemné oceli. Zvířatabyla ošetřena 20 mg chloramfenikolu intramuskulérní injek-cí a ponechána přes noc v klidu po operaci. -Další den bylykrysy umístěny do vysokostěnného kontejneru umožňujíhovolný pohyb, ^-rteriální katetr byl spojen s tlakovým -31- snímačem 100 cm dlouhou, solným roztokem naplněnou polyethy-lenovou trubičkou jemné světlosti a žilní katetr byl při-pojen k 1 ml stříkačce trubičkou stjné délky, kteráspolu se stříkačkou, obsahuje roztok hydrochloridu tyra-minu v solném roztoku (1 mg/ml). Následuje rovnovážné perioda 30 až 40 minu$ podá seinjekce tyraminu (50 nebo 100 /Ug) a zaznamenává se krev-ní tlak. Mezi injekcemi se udržuje interval alespoň 15minut po návratu krevního tlaku na kontrolní hodnotu,kontrolní tlakové odezvy byly stanoveny a pak bylo jednoléčivo injektováno intraperitoneálně a tyraminová odezvabyla opakována za další 4 hodiny. Byla vyhodnocena plochapod křivkou tlakové odezvy a poměr této plochy po ošetřeník ploše stanovené před ošetřením byl stanoven za použitíprůměru ze 3 až 4 hodnot získaných v kontrolní perioděa 1 až 3 hodiny po injekci sloučenin. Výsledky: Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3. Sloučenina R(+)-PAI při dávce 1 mg/kg (která působí 40 až 50% inhibiciMAO-A v mozku a játrech a úplnou inhibici MAO-S v těchtotkáních) nevyvolává výrazné zesílení tyraminové tlakovéodezvy. Při vyšší dávce R(+)-PAI 5 mg/kg (která vyvoláváextenzivnější inhibici MAO-A v mozku a periferii), výraznězvyšuje odezvu tlaku na tyramin, které byla do jisté mírystejná s odezvou vyvolanou stejnou dávkou deprenylu a menší -32- než odezva vyvolaná clorgylinem (při dávce, která inhi-buje jaterní MAO-A aktivitu nad 85 %). ^abulka 3

Zvýšení vlivu tyraminu na tlak u živých krys působenímMAO inhibitorů xnhibitor dávka počet krys(mg/kg) (n) poměr plochy podkřivkou odezvytlaku; po/pred

SEM solný roztok 12 1,25 0,28 Clorgyline 2 6 10,39 2,13 (-)deprenyl 1 2 1,15 (-)deprenyl 5 3 2,36 0,16 R(+)PAI 1 3 1 ,38 0,7 R(+)PAI 5 3 3,49 0,98 Z tohoto pokusu vyplývá, že R(+)-PAI nevyvolávázvýšení účinku tyraminu na tlak v dávce, která je účin-ná pro inhibici MAO-B. Příklad 24 z

^otlačení MPTP-indukované dopaminergní toxicity R(+)-PAI 1-Methyl-4-feny1-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP) je neurotoxinem proto, že poškozuje nigrostjiatální dopaminerg -33- ní neurony u některých druhů savců, zahrnujících myši apůsobí parkinsonický syndrom u lidí a primátů. Rozhodu-jící počáteční krok v mechanismu jeho neurotoxicity vyvo-lává konverze MPTP na jeho toxický metabolit 1-methyl-4-fenylpyridiniuaý ion (MPP+). Tato reakce je katalyzovánaenzymem MAO-B a pravděpodobně probíhá' mimo dopaminergníchneuronů, zejména v gliu. Je známo, že MPTP je substrá-tem a irreverzibilním inhibitorem MAO-B. Předchozí ošetře-ní pokusných zvířat MAO-B inhibitory jako je deprenyl nebopargylin chrání před MPTP-vyvolaným ohrožením nigrostria-tálních neuronů, protože je blokována oxidační konverzeMPTP na MPP+. Jedna z hlavních obecných hypotéz předpo-kládá, že progresivní nigrostriatální degenerace v parkin-sonismu může být vyvolána expozicí MPTP-podobných neuro-toxinů, odvozených z životního prostředí. V takovém pří-padě je další silnou indikací k zahájení udržující léčbyMAO-B inhibitorem již ve velmi časných stadiích Parkinso-novy choroby, kdy je naděje, že bude neutralizovat škodli-vé účinky těchto dosud ještě domnělých toxinů podobnýchMPTP a tím zamezit nebo zpomalit progresi choroby. O uspěšném použití MAO-B inhibitoru jako léčiva se předpokládá, Že je působeno jeho schopností blokovat MPTP-indukované poškození nigrostriatálních dopaminergních neuronů in vivo

Proto byly testovány (-) a (+) enantiomery PAI na jejich účinnost při zabránění nebo omezení MPTP-indukováných -34- striatálních dopaminových deplecí u myší.

Experimentální protokol: samci G57 černých myší (20 až 25 g hmotnosti byliinjektovéni MPTP-HC1 (30 mg/kg, rozpuštěno v destilovanévodě, s.c.) nebo samotným vehikulem nebo jednu hodinupřed ošetřením (-) nebo (+) isomery PAI (2,5 mg/kg, i.p.)nebo deprenylem (5 mg/kg, i.p.) a dekapitovány o pět dnípozději. Mozky byly vyjmuty a těleso striata bylo vypitvá-no na ledem chlazenou skleněnou desku a zmraženo suchým le-dem. Striatální tkáně byly homogenizovány v 0,1M kyseliněchloristé a deproteinizované podíly obsahující dihydroxyben-zylamin jako vnitřní standard byly analyzovány na dopamina jeho hlavní metabolit 3,4-dihydroxy-fenyloctovou kyseli-nu (DOPAC) za použití HPLC s elektrochemickou detekcí.Výsledky:

Tabulka 4 ukazuje výsledky z tohoto pokusu. Ošetření sMPTP samotným poskytuje značné dopaminové (DA) a DOPAC deple-ce. Ošetření (-) a (+) enantiomery PAI nebo s (-)depreny-lem neovlivňuje striatální DA koncentrace. Předchozí ošet-ření (-) isomerem PAI neovlivňuje MPTP-indukované DA aDOPAC hladiny ve striatu. (+)-Isomer PAI podaný před MPTP,kompletně zamezil redukci striatální DA a DOPAC hladiny pro-dukované toxinem. V dávce 2,5 mg/kg byl stejně účinný jak_o(-)-deprehyl (5 mg/kg) pokud se jedná o ochranný účinek. -35- ^abulka 4

Vliv předcházejícího ošetření (-) a (+) enantiomery MAO-Binhibitoru PAI na deplece striatální DA a DOPAC vyvolané.MPTP u myší in vivo

DA DOPAC (ng/mg proteinu) kontrola 162,8+7,2 θ,4±0,5 (-)-PAI 174,0+4,8 7,5+0,2 (-)-PAI + MPTP 53,4+6,9 7,0+0,6 (+)-PAI 185,0+6,9 3,3+0,3 (+)-PAI + MPTP 177,8+14,4 6,0+0,3 (-)deprenyl 170,6+7,1 5,6+0,3 (-)depreny1+MPTP 197,0+8,0 6,4+0,5 MPTP 53,1+6,2 3,2+0,3 Výše uvedené hodnoty DA a DOPAC jsou vyjádřeny jako hodno-ta průměru+S.E.M, a počet krys n= 7 - 11 v každé skupině. Z těchto výsledků je zřejmé, že R(+)-PAI je vynikají-cí MAO-B inhibitor in vivo a je zvláště účinný při léčeníParkinsonovy choroby. I když byl vynález popsán výše uvedenými příklady a souvisejícími tabulkami a obrázky, není jimi omezen. Jsou možné různé modifikace a aplikace vynálezu, například slou- -36- čeniny obecného vzorce mohou být kombinovány synergickýmzpůsobem s -tokoferolem (derivát vitaminu E) pro léče-ní Parkinsonovy choroby. Příklad 25

Vliv PAI enantiomerů na amfetaminem indukované chovánísenescentních krys θ amfetaminu je známo, že indukuje stereotypní chová-ní (Sulser F. a Sanders-Bush,E.Ann.Rev.Pharmacol. 11:209-230 (1971)) mobilizaci endogenního dopaminu. Amfetaminnení metabolizován MAO-B. xnhibice MAO-B účinným inhibi-torem a podání amfetaminu vyvolává uvolnění dopaminu, kterýnebude procházet degradací inhibovaným MAO-B. Je tak očeká-váno zvýšení synaptického dopaminu po podání amfetaminua účinného MAO-B inhibitoru, které vede ke zvýšení ve stereo-typním chování- potenciace amfetaminového účinku. Rozsahtohoto chování je hodnocen podle poctu laterélních pohy-bů hlavy během 1 minuty.

Experimentální protokol:

Testované sloučenina byla podána v dávce 0,5 mg/kg/denv pitné vodě, 24 hodin před vyvoláním hypoxie (92 % dusíku + 8 % kyslíku za 6 hodin) Dále se injektuje amfetamin s.c.v dávce 0,5 mg/kg o 45 min později, počítají se laterál-ní pohyby hlavy. Výsledky: Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny v tabulce 5· -37-

Tabulka 5

Vliv PAI isomerů na amfetaminem indukované stereotypníchování senescentních krys (kontrolované a s vyvolanouhypoxií)

Skupina ošetření stereotypní cho-vání krys kontrola (6) - 87+1 0 kontrola (5) (+)PAI 126+16- kontrola (4) (-)PAI 94+18 vyvolaná hypoxie (5) - 93+12 vyvolaná hypoxie (o) (+)PAI 143i 6- Čísla v závorkách znamenají počet testovaných zvířatF < 0,001 vzhledem k neošetřené skupině s hypoxií nebo neošetřené skupině kontrolní Výsledky v tabulce 5 ukazují, že (+) vyvolává vý-razné zvýšení amfetaminem indukovaného stereotypního cho-vání u krys s vyvolanou hypoxií i u kontrolních zvířat.(-)PAI byl z tohoto hlediska zcela neúčinný. xyto výsledky chování in vivo potvrzují předcházející biochemickézjištění, že (+)PAI je účinným inhibitorem KAO-B v mozku,zatímco (-) je z tohoto hlediska neúčinný. -38- Příklad 26

Vliv R(+)PAI na zlepšení nebo obnovení paměti

Nově narozená krysí mlááata byla podrobena popsanémupokusu s anoxii a pak jim bylo umožněno pokračování vývo-je normálním způsobem, přičemž se vyvinuly dlouhodobé poru-chy paměti (Speiser a spol., Behav.Brain.Res«30:89-94.1988).Tato porucha paměti je vyjádřena jako zhoršení průběhupasivního testu s překážkami.

Vliv R(+)PAI a S(-))PAI na zlepšení nebo obnovenípaměti byl hodnocen pomocí pasivního testu s překážkami.Jestliže je léčivo účinné zvyšuje latentní odezvu na vstupdo tmavého prostoru nebo prostoru, kde mohou testovanékrysy tak jako dříve, dostat elektrický šok. Latence ma-ximální odezvy je 300 sekund.

Experimentální protokol:

Mladé krysy byly podrobeny post-natální anoxii jakje popsána v příkladu 27. R(+)PAI nebo S(-)PAI byly podánypodle jednoho z následujících protokolů:

Protokol A - Kojícím matkám byla podána dávka buá jednohonebo druhého isomeru 1 až 1,5 mg/kg/den v pitné vodě aždo odstavení po 21 dnech. Rak bylo odstavené potomstvopřímo dávkováno stejnou dávkou po dobu 20 dnů. Ošetřeníbylo ukončeno 40 den a test byl proveden 60 den, tj. 20dní po poslední dávce léčiva. -39-

Protokol B - Dávka podávaná kojícím matkám byla sníženana 0,5 mg/kg/den až do odstavení 21.den a přímo pak po-dávána mlááatům krys až do 60.dne, kdy byl proveden testPasivní test s překážkami

Zařízení obsahuje světlou komůrku s připojenou tma-vou komůrkou a posuvná dvířka, oddělující tyto komůrkyořři tréninku byly krysy umístěny do osvětlené komůrky nadobu 30 sekund a pak bylgt dvéřka otevřena. Krysy pak přesídlily do tmavé komůrky se zpožděním, které bylo zazna-menáno. Po vstupu krys do tmavého prostoru byla dvířkauzavřena a krysy dostaly šok do packy po dobu 3 s 0,3 mÁ

Retence (pamět) po 48 hodinách byla stanovena opa-kováním testu a zaznamenáním zpoždění přechodu ze světlédo tmavé komůrky maximální odezvě 300 s. Výsledky: Výsledky těchto pokusů jsou uvedeny v tabulce 6. -40

Tabulka 6

Vliv PAI isomerů na pasivní odezvu překonání překážek umladých krys (stáří 60 dnů)

Protokol A

Skupina ošetření před elektrošokem Po elektrošoku kontrola - 49+13 201+111 kontrola (+)PAI 49+19 220+100(+9%)X kontrola (-)PAI 48+13 192+116 vyvolaná anoxie - 45+11 183+109 vyvolaná anoxie (+)PAI 49+1 0 239+99(+19%)x vyvolaná anoxie (-)PAI 55+27 179+123 Protokol B Skupina ošetření před po elektrošokem elektrošoku kontrola - 53+20 104+101 kontrola (+)PAI 48+11 128+119(+23%) vyvolaná anoxie - 45+8 1 19+105 vyvolaná anoxie (+)PAI 52+12 137+126(+15%) vyvolaná anoxie (-)PAI 48+1 9 112+112 -41- - Obrázky představují zpoždění v sekundách před vstupemdo tmavé komůrky, kde testované krysy již měly prvnízkušenost s elektrošokem. x Uvedená procenta zvýšení.jsou vztažena na skupinu kryss anoxií nebo kontrolní skupinu.

Experimentální výsledky ukazují, že (+)PAI ne (-)PAIje účinný pro zlepšení paměti krys s anoxií a kontrol-ních krys. Léčiva v tomto testu aktivní je možno pokládatza účinná pro léčení různých poruch paměti, demence azejména senilní demence Alzheimerova typu. Příklad 27

Vliv R(+)PAI na anoxií indukovaný hyperaktivní syndrommladých krys

Krysy byly vystaveny postnatální anoxii a pak ponechá-ny vývoji za normálních podmínek, který ukázal zvýšenoumotorickou aktivitu v otevřeném prostoru ve stáří 10 až42 dní (Hertshkowitz a spol., Dev.Brain Res.7:145-155(1983))·

Vliv R(+)PAI a R(-)PAI na tento hyperaktivní syndrombyl sledován.

Experimentální protokol:

Anoxie byla vyvolána u krysích mláďat první postna-tální den. Byly umístěny do skleněné komůrky a působeno na -42- ně 100% dusíkem po dobu 25 minut. Pak byly krysy resusci-továny občasnou masáží jemně aplikovanou na hrudník a paknavráceny příslušným matkám. Kontrolní krysy byly ošetřenystejně s tím, že byl použit místo dusíku vzduch.

Kojícím matkám byl podán R(+)PAI nebo S(-)PAI (0,5mg/kg/den) v pitné vodě, tak aby došlo k převodu mlékemkojeným mláďatům.

Lokomoce byla měřena v šesti plně komputerizovánýchklecích (28 x 28 cm) zaznamenáváním počtu přechodů za da-nou dobu. Přerušení mřížky infračervených paprsků ve 4cmintervalech iniciuje elektrické impulzy přenášené do po-čítače. Záznamy motorická aktivity byly provedeny ve stáří15 a 20 dnů po dobu 15 minut. Výsledky:

Experimentální výsledky jsou uvedeny v tabulce 7. -43-

Tabulka 7

Vliv jednotlivých isomerů na anoxií vyvolaný hyperaktivnísyndrom

Skupina ošetření krysy staré 1 5 dnů krysy staré 2 0 dnů kontrola - 414+)92(11) 808+212(12) kontrola (+)PAI 254+149(1 1 )c 719+110(13) vyvolané anoxie - 482+119(7) 858+ 96(9) vyvolaná anoxie (+)PAI 276+186(15)a 737+150(16), vyvolaná anoxie (-)PAI 334+196(5) 778+232(6) Čísla v závorkách znamenají počet testovaných zvířat.-Obrázky představují počet přerušení mřížky infračervených paprsků v klícce pro měření aktivity během doby 15 minut,a P< 0,001 ve srovnání s neošetřenou skupinou s anoxiíb P<0,05 ve srovnání s neošetřenou skupinou s anoxiíc P<0,05 ve srovnání s kontrolní skupinou.

Tyto výsledky ukazují, že chronické orální ošetřeníR(+)PAI v dávce 0,5 mg/kg podávané kojícím matkám a mléčnoupotravou tak kojeným mlááatům výrazně zlepšuje hyperaktivnísyndrom. Z toho vyplývá, že R(+)PAI je potenciálním účinnýmléčivem pro léčení hyperaktivního syndromu u dětí.

Claims

-44- PATENTOVE NÁROKY S.- 1. R (+)-N-Fropargy1-1-aminoindan vzorce I

(I) nebo jeho farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyseli-nami .
2. -toužit í R(+)-N-propargyl-1 -aminoindanu pro léčenílidí trpících Farkinsonovou chorobou, poruchami paměti,demencí A^heimerova typu (DAT) depresí a hyperaktivnímsyndromem.
3. řoužití R(+)-N-propargy1-1-aminoindanu pro výrobufarmaceutických přípravků pro léčení lidí trpících Farkin-sonovou chorobou, poruchami paměti, demencí Alzheimerovatypu (DAT), depresí a hyperaktivním syndromem. -45-
4. Farmaceutický přípravek pro léčení lidí trpícíchParkinsonovou chorobou, poruchami paměti, demencí Alzhei-merova typu (DAT), depresí a hyperaktivním syndromem u dětí,vyznačující se tím, že obsahuje jako aktivní složku R(+)-N-propargyl-1-aminoindan podle bodu 1.
5. Farmaceutický přípravek podle bodu 4, vyznačujícíse tím, že je ve formě vhodné pro orální podání.
6. Farmaceutický přípravek podle bodu 4, vyznačující se tím, že je ve formě injektovatelného roztoku nebo emulze*
7. Farmaceutický přípravek podle bodu 4, vyznačujícíse tím, že je ve formě čípků pro rektální podání.
8. Farmaceutický přípravek podle bodu 4, vyznačujícíse tím, že je ve formě vhodné pro transdermální podání.
9. Farmaceutický přípravek podle bodu 5 nebo 7, vy-značující se tím, že dávková jednotka obsahuje 2 až 20 mgúčinné složky.
10. Farmaceutický přípravek podle bodu 9, vyznačujícíse tím, že obsahuje 5 až 10 mg aktivní složky v dávkovéjednotce. -46-
11. Farmaceutický přípravek podle bodu 6, vyznaču- jící se tím, že dávková jednotka této formy obsahuje 1 až 10 mg/ml účinné složky.
12. Farmaceutický přípravek podle bodu 11, vyznaču- jící se tím, že obsahuje 2 až 5 mg/ml účinné složky na dávkovou jednotku.
13. Farmaceutický přípravek pro orální podání ve $ formě tablet nebo kapslí vyznačující se tím, že obsahujeR(+)-N-propargyl-1-aminoindan, Levadopu a inhibitor de-karboxylázy.
14. Přípravek podle bodu 13, vyznačující se tím, že obsahuje P(+)-N-propargyl-1-aminoindan, 50 až 250 mg Le- vadopy a 10 až 25 mg L-Carbidopy.
15. Přípravek podle bodu 13, vyznačující se tím, že obsahuje 2 až 10 mg R(+)-N-propargyl-1-aminoindanu, 50 až 200 mg Levadopy a 12,5 až 50 mg henserazidu. ·
16. Způsob přípravy R(+)-N-propargy1-1-aminoindanu a jeho adičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že senechá reagovat 1-aminoindan s propargylbromidem nebo propar- -47- gylchloridem za přítomnosti organické nebo anorganické bázepopřípadě za přítomnosti vhodného rozpouštědla a izolujese R(+)-enantiomer N-propargyl-1-aminoindanu chromato-grafií, destilací, selektivní extrakcí a je-li to žádoucí,převede se volná báze takto připravená, na své adiční solis kyselinami.
17. Způsob přípravy R(+$«N-propargyl-1-aminoindanu a jeho edičních solí s kyselinami, vyznačující se tím, že se f nechá reagovat racemický 1-aminoindan s propargylbromidem nebo propargylchloridem za přítomnosti organické! neboanorganické báze popřípadě za přítomnosti vhodného rozpouš-tědla a izoluje se R(+)-enantiomer N-propargyl-1-amino-indanu chromátografií, destilací, selektivní extrakcí aje-li to žádoucí, převede se takto získané volná báze nasvé adiční sole s kyselinami.
18. Způsob podle bodu 17, vyznačující se tím, že zahr-nuje reakci volné báze s opticky aktivní kyselinou za vzni-ku dvou diastereomerních solí, oddělení požadované soliR(+)-N-propargyl-1-aminoindanu známými postupy a je-li tožádoucí, regeneruje se volná báze. -48-
19. Způsob podle bodu 18, vyznačující se tím, že odděla-ní soli R(+)-N-propargy1-1-aminoindanu se provede frakčníkrystalizací. Zastupuje: MP—1620-90-Če *