CS276965B6

CS276965B6 - Novel lipophilic muramyl peptides and process for preparing thereof

Info

Publication number: CS276965B6
Application number: CS805262A
Authority: CS
Inventors: Lajos Dr Tarcsay; Gerhard Dr Baschang; Albert Dr Hartmann; Jaroslav Dr Stanek
Original assignee: Ciba Geigy Ag
Priority date: 1979-07-25
Filing date: 1980-07-25
Publication date: 1992-11-18
Also published as: IL60676A; EP0025495A1; US4406890A; DK161025B; FI802294A7; HU188861B; MY8700554A; IE50145B1; MX9203368A; FI75578B; PL225870A1; SU1277905A3; IL60676A0; DD153843A5; DK161025C; SG38187G; NO157177C; EP0025495B1; KR840001617B1; ES8105971A1

Description

Nové lipofilní muramylpeptidy a způsob jejich výroby

Oblast techniky

Vynález se týká nových lipofilních muramylpeptidů, způsobu jejich výroby a farmaceutických přípravků určených ke stimulaci imunity, které takové sloučeniny obsahují.

Podstata vynálezu

Muramylpeptidy podle vynálezu mají obecný vzorec I

(D) (L) (D) kde

X znamená karbonylovou skupinu,

Rj znamená alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenyl,

R2/R4 a Rg znamenají atomy vodíku,

R₃ znamená atom vodíku nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

Rg znamená alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

R₇ znamená atom vodíku,

A₂ znamená zbytek obecného vzorce II

-T-Y-O-P

- CH

OH Z (II), kde

T znamená skupinu -NH nebo -0,

Y znamená alkylen se 2 nebo 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 3 atomy uhlíku, který může být přerušen oxykarbonylem nebo iminokarbonylem,

W znamená atom vodíku,

Z- znamená 1,2-dihydroxyethylovou nebo 2-hydroxyethylovou skupinu, ve kterých alespoň jedna z hydroxyskupin je esterifikována popřípadě nenasycenou alifatickou karboxylovou kyselinou s 12 až 22 atomy uhlíku nebo etherifikována alifatickým alkoholem s 10 až 22 atomy uhlíku, který je popřípadě nenasycen, nebo

W a Z znamenají každý hydroxymethylovou skupinu, esterifikovanou popřípadě nenasycenou alifatickou karboxylovou kyselinou s 12 až 22 atomy uhlíku nebo etherifikovanou alifatickým alkoholem s 10 až 22 atomy uhlíku, který je popřípadě nenasycen a

A^ znamená aminoskupinu.

Tyto sloučeniny, stejně jako jejich soli, jsou předmětem vynálezu.

Alifatickou karboxylovou kyselinou s 12 až 22 atomy uhlíku se rozumí kyselina popřípadě obsahující 1 nebo 2 dvojné vazby, jejíž řetězec může být přímý nebo rozvětvený. Výhodné jsou kyseliny s 16 až 22 atomy uhlíku.

Alifatickým alkoholem s 10 až 22 atomy uhlíku se rozumí alkohol popřípadě obsahující 1 nebo 2 dvojné vazby, s přímým nebo rozvětveným řetězcem. Výhodné jsou alkoholy s 12 až 18 atomy uhlíku a s koncovou hydroxyskupinou.

Alkylem s 1 až 4 atomy uhlíku je například n-propyl, • n-butyl, isobutyl, sekundární nebo terciální butyl a především methyl nebo ethyl.

Nové sloučeniny podle vynálezu se vyskytují jako směs isomerů nebo ve formě čistých isomerů.

Nové lipofilní muramylpeptidy podle vynálezu mají řadu cenných farmakologických vlastností, zejména zvyšující imunitu.

In vivo tyto sloučeniny podstatně zvyšují tvorbu protilátek u myší, jak je možno prokázat následujícím způsobem.

Myši NMR1 se imunizují intraperitoneálni injekcí 10 μg BSA, prostého sraženiny, v den 0. Po 9, 15 a 29 dnech se odebírají vzorky séra a zkoumá se obsah protilátek proti BSA pasivním srážením krve. Při použité dávce je rozpustný BSA pro tato zvířata subimunogenní, to znamená, že nevyvolává žádnou nebo jen malou produkci protilátek. Z tohoto důvodu vede podání látek, které zvyšují imunitní reakci u těchto myší k vzestupu titru protilátek v krevním séru. Účinek tohoto ošetření je možno vyjádřit součtem log₂ rozdílů v titru ve třech následujících dnech.

Při provádění tohoto pokusu jsou sloučeniny obecného vzorce I při intraperitonálním nebo podkožním podání v dávce 0,5 až 5 mg/kg pět po sobě jdoucích dnů po imunizaci BSA schopny statisticky významně zvýšit produkci protilátek proti BSA. Pokud jde o tento účinek, jsou daleko účinnější než dosud známé hydrofilní muramylpeptidy.

K dosažení významného účinku, který byl empiricky stanoven jako 10 při odběru krve 18. a 28. dne, je zapotřebí následující množství některých muramylpeptidů:

a) Při intraperitoneálním podání:

0,1 mg/kg N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid (sloučenina I),

0,6 mg/kg N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-oxmethylkarbonyl-2-(l',2’-dipalmitoyl-anglycero-3’-fosforyl)ethylamid (sloučenina II),

0,8 mg/kg N-acetyl-muramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1’,2’-dipalmitoyl-anglycero-3'-fosforyl)ethylamid (sloučenina III),

0,9 mg/kg N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1',2'-dipalmitoyl-anglycero-3'-fosforyl)ethylamid,

2,0 mg/kg N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2(3'-palmitoyl-rac-glycero-1’-fosforyl)-ethylamid (sloučenina IV),

2,5 mg/kg N-propionyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-alanin-2-(1 *,2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid (sloučeniny V),

3,8 mg/kg N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid, mg/kg N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(l', 2 ' -dipalmitoyl-sn-glycero-3-' -fosforyl)ethylamid nebo mg/kg N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(3'-palmitoyl-rac-glycero-1'-fosforyl)ethylamid,

b) při podkožním podání:

0,3	mg/kg	sloučeniny	I
0,8	mg/kg	II	III
1,5	mg/kg	II	II nebo
1,5	mg/kg	II	IV

Sloučeninami, vyrobenými způsobem podle vynálezu, je také možno zvýšit imunitu, zprostředkovanou buňkami.

Senzibilizace morčat BSA v nekompletním Freundově adjuvans vede pouze k tvorbě protilátek, avšak v případě, že se přidají lipofilní muramylpeptidy, vyrobené způsobem podle vynálezu, v dávce 5 až 50 μg k emulzi antigenu v oleji, je možno prokázat 3 týdny po imunizaci při nitrokožní injekci BSA u těchto zvířat místní zánětlivou reakci, spojenou s překrvením a ztluštěním pokožky, tato reakce dosahuje svého maxima za 24 až 48 hodin. Tato opožděná reakce odpovídá kvantitativně i kvalitativně reakci, kterou je možno vyvolat imunizací DSA v kompletním Freundově adjuvans, to znamená za přítomnosti mikrobakterií. Hodnoty ED₅₀ vyjádřené jako μg/zvíře, nutné k indukci rozdílu v ploše

CS 276965 Β6 4 zánětu a ztluštění kůže u ošetřených a neošetřených zvířat 24 hodin po vyvolání reakce, jsou 10 až 20 μ9·

Hodnoty ED₅₀ muramylpeptidu/zvíře) jsou například 7 pro sloučeninu III a pro sloučeninu V, 15 pro sloučeninu II a 25 pro sloučeniny I a IV.

Velmi cenná je schopnost lipofilních muramylopeptidů vyvolat při současném podání s BSA v liposomech (vaječný lecitin k cholesterolu =4:1, 4 mg/zvíře) bez toxických složek minerálního oleje pozdní přecitlivělost proti BSA. Kvantitativně i kvalitativně je tato opožděná reakce totožná s reakcí, kterou je možno vyvolat imunizací pomocí BSA v kompletním Freundově adjuvans, přičemž hodnoty ED₅₀ jsou 100 až 300 μg/zvíře.

Nové sloučeniny obecného vzorce I jsou ve srovnání se známými hydrofilními muramyldipeptidy výhodnější.

Myši Balb/c byly imunizovány intraperitoneální injekcí x 10⁴ buněk mastocytomu P815 v den 0. 15. dne byly buňky sleziny takto imunizovaných zvířat zkoumány in vitro na přítomnost lymfočytu T, které jsou průkazem cytotoxického účinku shora uvedených buněk. K tomuto účelu byly buňky nádoru označeny ⁵¹Cr a velikost cytotoxické reakce byla pak měřena radioaktivitou supernatantu kultury. Při použité dávce jsou uvedené nádorové buňky subimunogenní, to znamená, že nevyvolávají žádnou nebo jen velmi malou tvorbu T-buněk. Při současném intraperitoneálním podání 1 až 50 μg muramylpeptidu obecného vzorce I dojde ke statisticky významnému vzestupu tvorby T-buněk, faktor 10 až 30 proti kontrolám.

Vlastnosti nových sloučenin obecného vzorce I na vzestup imunity je možno prokázat také na případě vyvolání specifické imunity proti transplantačním antigenům imunizací autoblasty za přítomnosti pomocného činidla u myši.

Ve smíšené kultuře lymfocytů se inkubují lymfocyty ze sleziny myši, která má přijmout transplantát (C57B1/6J) s ozářenými slezinnými buňkami budoucího dárce transplantátu (myši CBA/J). T-lymfocyty se specifickými receptory pro antigeny histokompatibility dárce proliferují a stávají se z nich blasty. Tyto buňky je možno oddělit od ostatních buněk usazením. Specifické blasty jsou vyjádřením idiotypické specificity membránových receptorů a jejich počet je možno zvýšit přidáním kompletního Freundova adjuvans (CFA) jako autoimunogenu k indukci specifické tolerance proti transplantačním antigenům u myší, které myjí přijmout transplantát. Imunizace se provádí čtyřikrát v čtyřtýdenním odstupu autologními protilátkami proti lymfoblastům dárce. Adsorbát T-autoblastů s novými sloučeninami obecného vzorce I může indukovat specifickou imunotoleranci i v nepřítomnosti CFA, přičemž adsorbát je stejně účinný jako lymfoblasty v CFA. Adsorbát se získá tak, že se 10⁹ blastů uvede v suspenzi v roztoku 20 mg účinné látky v 20 ml PBS. Po 2 hodinové inkubaci buňky odstředí a dvakrát se promyjí PBS.

Nové sloučeniny obecného vzorce I mají mimoto schopnost vy§ volat v koncentraci 0,5 až·100 μg/ml v kultuře buněk ze sleziny normálních myší tvorbu buněk, produkujících protilátky. Jde o zmnožení 19S-buněk 10 až 3Okřát oproti kontrolním buňkám v nepřítomnosti jiných stimulujících látek. V přítomnosti shora uvedených látek je možno vyvolat například tvorbu specifických protilátek proti červeným krvinkám ovce, aniž by tyto krvinky byly ke kultuře přidány k imunizaci. Jinak mohou shora uvedené sloučeniny v tomtéž koncentračním rozmezí také zvýšit imunologickou reaktivitu kultury buněk sleziny s malým množstvím T-buněk, například v případě myší, které byly vypěstovány tak, že se rodí bez brzlíku (nu/nu myši) oproti normálním antigenům u myší, které brzlík mají. Reaktivitu je možno zvýšit 10 až 30krát oproti kontrolním kulturám. Sloučeninami, vyrobenými způsobem podle vynálezu je možno nejen vyvolat proliferaci syntézu B-lymfocytů, které tvoří protilátku, ale je možno řídit také T-lymfocyty, které se účastní i cytotoxicity a jsou pomocnými buňkami při imunitních projevech. Je tedy možno potencovat shora uvedenými sloučeninami v koncentraci 1 až 20 μg/ml reaktivitu brzlíkových buněk, odolných proti kortizonu oproti allogenem ozářeným stimulačním lymfocytům až desetkrát.

Kromě shora uvedených účinků je samozřejmé, že lipofilní muramylpeptidy také aktivují makrofágy, které podporují reaktivitu lymfocytů T a B. Je možno prokázat, že tyto sloučeniny již v malých koncentracích 0,5 až 10 μg/ml vyvolávají u makrofágů myší colony stimulating activity·', což vede k indukci 150 až 200 kolonií v průběhu 7 dní při použití 10⁵ buněk myší kostní dřeně po přidání 20 % supernatantu z kultury makrofágů, která byla pěstována 24 hodin spolu s účinnou látkou, u kontrol dochází k vzniku O až 5 kolonií při přidání supernatantu z neošetřené kultury makrofágů. CSA je biologický mediátor, který je nutný k diferenciaci základních buněk kostní dřeně na makrofágy a leukocyty. Sloučeniny podle vynálezu způsobují přesun směrem k buňkám, jichž je zapotřebí pro nespecifickou odolnost a pro vyvolání a vyjádření specifické imunitní reakce, zprostředkované lymfocyty.

Imunologický účinek nových sloučenin je možno prokázat také in vivo. Injekce fosfolipidového derivátu muramylpeptidu podle vynálezu vede v průběhu 3 až 9 hodin k vysokému vzestupu koncentrace CSA v krevním séru, vzniká až 120 kolonií při použití 10⁵buněk myší kostní dřeni po přidání séra, extrahovaného chloroformem do konečné koncentrace 5 % ve srovnání se vznikem 0 až 5 kolonií u neošetřených zvířat. Je tedy zřejmé, že uvedené sloučeniny zvyšují podstatným způsobem i schopnost tvorby protilátek u živých myší.

Imunologické vlastnosti nových sloučenin obecného vzorce I je možno prokázat také na nádorech, například na Ehrlichově ascitickém tumoru u myši.

Při intraperitoneálním podání 10⁶ syngenních Ehrlichových buněk ascitického tumoru dojde u myší Balb/σ k uhynutí průměrně za 18 dnů. V případě, že se myším vstřikne intraperitoneálně 10⁷ (skupina 1), 10⁶ (skupina 2) a 10^ (skupina 3) těchto buněk, které byly předem pěstovány spolu se sloučeninami obecného vzorce I, a to tak, že 10⁹ buněk uvedeného nádoru bylo uvedeno v suspenzi se 40 mg účinné látky ve 20 ml fyziologického roztoku kuchyňské soli, smísené s fosfátovým pufrem a po 2 hodinové inkubaci při teplotě 37 °C byly buňky odstředěny a dvakrát promyty PBS, při tomto postupu dochází ke včlenění zkoumaných látek do buněčné membrány. Po 18 dnech dochází ke vzestupu nádoru. 19. dne byly buňky znovu zatíženy intraperitoneální injekcí 10⁶ neošetřených buněk téhož nádoru. Došlo k následující reakci:

Skupina 1: 8 z 10 zvířat přežívá 80. den.

Skupina 2: 6 z 10 zvířat přežívá 80. den.

Skupina 3: zvířata hynou stejně jako kontrolní zvířata po 18 dnech.

Sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu, jsou málo toxické. Po pětinásobném intraperitoneálním podání dávky 100 mg/kg/den po 5 po sobě následujících dní nebylo možno u myší pozorovat žádné příznaky toxicity. Protože dávky, nutné k vyvolání imunity jsou velmi malé, je terapeutická šíře veliká.

Nové sloučeniny, vyrobené způsobem podle vynálezu, mohou tedy zvýšit buněčnou i humorální imunitu a je tedy možno je užít ve směsi s antigenem jako pomocné činidlo ve vlastním významu nebo také odděleně od antigenu, přičemž dochází k systemickém zvýšení imunity.

Nové sloučeniny podle vynálezu je možno užít jako pomocná činidla ve směsi s očkovacími látkami ke zlepšení jejich účinku a také ke zvýšení imunity proti infekcím, a to bakteriálním, virovým i parazitálním.

Sloučeniny podle vynálezu je možno užít jako pomocná činidla ve směsi s různými antigeny také při výzkumu a průmyslové výrobě antisér pro léčbu a diagnostiku a při vyvolávání imunologicky aktivovaných populací lymfocytů pro přenos buněk.

Sloučeniny podle vynálezu je také možno užít bez současného přívodu antigenu ke zlepšení imunologické reakce u lidí i u zvířat. Jde zejména o případy chronických i akutních infekcí nebo u zcela zvláštních imunologických poruch, například u poruch vrozených i získaných, tak jak vznikají především ve stáří, při průběhu těžkých primárních chorob a především při léčbě ionizačním zařízením nebo hormony, které potlačují imunologické reakce. Sloučeniny podle tohoto vynálezu je možno s výhodou užít spolu s antibiotiky, jinými chemoterapeutickými látkami k zamezení poklesu imunity. Tyto látky je možno užít i k všeobecné profylaxi infekčních chorob u myší i u jiných zvířat.

Zvláště výhodou sloučeninou podle tohoto vynálezu je N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid, tedy sloučenina obecného vzorce I, ve kterém R-j_ znamená methylovou skupinu, R₂ znamená atom vodíku, R₃ znamená methylovou skupinu, R ₄ znamená atom vodíku, R₅ znamená methylovou skupinu, R₆ a R₇ představují atomy vodíku, X znamená karbonylovou skupinu, A^ znamená aminoskupinu a A₂ znamená zbytek obecného vzorce II, kde T představuje skupinu vzorce - NH, Y představuje skupinu vzorce -CH(CH₃)-CO-NH-CH₂-CH₂-, W znamená atom vodíku a Z představuje

I„2-dipalmitoyloxyethylovou skupinu, jakož i jeho soli.

Obzvláště významné jsou farmacentické soli sloučeniny obecného vzorce I uvedeného v předcházejícím odstavci. Z těchto sloučenin si zvláštní pozornost zaslouží pro své farmacentické vlastnosti sodná sůl.

Předmětem vynálezu je také způsob výroby sloučenin obecného vzorce I.

Vynález je zaměřen zejména na způsob výroby muramylpeptidů popsaných v příkladech. Nové sloučeniny obecného vzorce I je možno získat známými způsoby.

Podle vynálezu způsob výroby, muramylpeptidů obecného vzorce I a jejich solí spočívá v tom, že se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce III

- H

kde m_o a n znamenaj í nezávisle na

A₂ znamená hydroxyskupinu sobě číslo 0 nebo 1, nebo zbytek obecného vzorce IV

- Τ · Υ_χ - M₁ (IV), kde

Υχ znamená methylenovou skupinu, popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 3 atomy uhlíku,

M-l znamená karboxylovou skupinu a zbývající substituenty mají shora uvedený význam, za předpokladu, že ve sloučenině obecného vzorce III jsou funkční skupiny s výCS 276965 B6 jímkou skupiny A₂ účastnící se reakce popřípadě chráněny snadno odštěpitelnou ochrannou skupinou, nebo derivát sloučeniny obecného vzorce III, v němž se nachází skupina A₂ v reaktivní formě, se sloučeninou obecného vzorce V

q_aa r (L) c = o

H - CH - CH, (3)

R_c

Rz o

CH - C ž

R~ (V) znamenají nezávisle na sobě číslo 0 nebo 1, znamená zbytek obecného vzorce II ve svrchu uvedeném významu nebo zbytek obecného vzorce VI

M₂ - Y₂ “ ⁰ “ ^p “ ⁰ ^CH (VI),

OH kde ^y2

W a Z znamená iminoskupinu nebo atom kyslíku, znamená alkylen se 2 atomy uhlíku a mají shora uvedený význam, za předpokladu, že zbytek, který vzniká spojením zbytků Y^ a Y₂přes oxykarbonylovou nebo iminokarbonylovou skupinu, odpovídá zbytku Y a ostatní substituenty mají shora uvedený význam za předpokladu, že ve sloučenině obecného vzorce V se mohou H-N, H-N, H-T nebo H - M₂, vyskytovat v aktivované formě a jsou popřípadě chráněny snadno odštěpitelnými ochrannými skupinami za předpokladu, že r a q znamenají 1 a A₂ představuje zbytek obecného vzorce II v případě, že ve sloučenině obecného vzorce III m znamená 0 a A₂ má odlišný význam od zbytku obecného vzorce IV, nebo r znamená 1, q znamená 0 a A? představuje zbytek obecného vzorce II v případě, že m znamená I, n znamená 0 a A₂ má význam odlišný od obecného vzorce IV, nebo r znamená 0 a A₂ znamená zbytek obecného vzorce II v případě, zeman znamenaj ί 1 a A₂ znamená hydroxyskupinu nebo r znamená 0 a a| znamená zbytek obecného vzorce VI v případě, že man znamenají číslo 1 a A₂ znamená zbytek obecného vzorce IV, načež se popřípadě odštěpí přítomné ochranné skupiny a získaná sloučenina obecného vzorce I se podle potřeby převede na svou sůl.

Reaktivní esterifikovanou hydroxyskupinou je zejména hydroxyskupina, esterifikovaná silnými anorganickými nebo organickými kyselinami, především halogenvodíkovou kyselinou, jako kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou nebo s výhodou jodovodíkovou.

Snadno odštěpitelnou ochrannou skupinou je zejména skupina, známá z chemie peptidů a cukrů.

Tyto snadno odštěpitelné ochranné skupiny je možno odštěpit známým způsobem. Je možno užít kyselé hydrolýzy, benzylové nebo benzylidenové zbytky je možno odštěpit také hydrogenolýzou, například působením vodíku za přítomnosti ušlechtilého kovu, například palladia nebo platinového katalyzátoru.

Výhodný je způsob výroby soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2’-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosfory 1)ethylamidu, vyznačující se tím, že se N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin nebo jeho aktivovaný ester uvede do reakce s 1,2,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforyl-ethanolaminem v přítomnosti vhodné báze.

Jiný výhodný je způsob výroby soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosfory 1 ) ethylamidu , vyznačující se tím, že se N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin nebo jeho aktivovaný ester uvede do reakce s L-alanin-2-(1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforyl)ethylamidem v přítomnosti vhodné báze.

Další výhodný je způsob výroby soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1', 2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamidu, vyznačující se tím, že se karboxylové kyselina obecného vzorce III, v němž X znamená karbonyl, Rj,_o znamená methyl, R₂ znamená atom vodíku, R₃ znamená methyl, A₂ znamená hydroxyskupinu a m znamená číslo 0, nebo aktivovaný derivát této karboxylové kyseliny uvede do reakce se sloučeninou obecného vzorce V ve formě soli, v němž q a r znamenají číslo 1, R₄znamená atom vodíku, R₅ znamená methyl, R₆ znamená atom vodíku, Aj znamená aminoskupinu, R₇ znamená atom vodíku a A₂ znamená zbytek obecného vzorce VI, v němž M₂ znamená iminoskupinu, Y₂ znamená zbytek vzorce

CHo

I

- CH - CO - NH - CH₂ - CH₂ -, W znamená atom vodíku a Z znamená

1,2-dipalmitoyloxyethylovou skupinu, v případě potřeby za přítomnosti báze.

Při způsobu podle tohoto vynálezu se účelně jako výchozí látka použije sloučenina obecného vzorce III, kde X znamená karbonyl, Rj_ znamená methyl, R₂ znamená atom vodíku, R₃ znamená methyl, R₄ znamená atom vodíku, R₅ znamená methyl, A₂ znamená hydroxyskupinu, m je 1 a n značí číslo 0 nebo aktivovaný derivát této karboxylové kyseliny a sloučenina obecného vzorce V, v němž q představuje číslo 0, r představuje číslo 1, Rg znamená atom vodíku, A^ znamená aminoskupinu, R₇ znamená atom vodíku a A| znamená zbytek obecného vzorce VI, v němž M₂ znamená iminoskupinu, Y₂ znamená zbytek vzorce

CHq

I

- CH - CO - NH - CH₂ - CH₂ - ,

W znamená atom vodíku a Z znamená

1,2-dipalmitoyloxyethylovou skupinu.

S výhodou se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem reaktivních esterifikovaných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je tato hydroxyskupina nebo v níž jsou tyto hydroxyskupiny esterifikovány silnou anorganickou kyselinou nebo kyselinou sulfonovou.

Účelem je také, pokud se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem reaktivních esterifikovaných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je hydroxyskupina nebo v níž jsou hydroxyskupiny esterifikovány halogenovodíkovou kyselinou.

Je výhodné, pokud se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem chráněných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je hydroxyskupina nebo v níž jsou hydroxyskupiny chráněny acylovým zbytkem, aroylovým zbytkem nebo zbytkem odvozeným od derivátů kyseliny uhličité nebo alkylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku rozvětveným v poloze a nebo α-mono-, a-di- nebo a-tirarylalkylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku v alkylové části, nebo zbytkem tvořícím acetal.

Při jiném výhodném provedení se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem chráněných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je hydroxyskupina nebo v níž jsou hydroxyskupiny chráněny alkanoylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku, benzoylovým zbytkem, benzoyloxykarbonylovým zbytkem, alkoxykarbonylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku v alkoxylové části, terč.butylovým zbytkem nebo popřípadě substituovaným benzylovým zbytkem, trifenylmethylovým zbytkem nebo tetrahydropyranylovým zbytkem.

Při dalším výhodném provedení se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem aktivovaných karboxylových skupin použije sloučenina, v níž se karboxylová skupina nebo karboxylové skupiny nachází ve formě anhydridů, azidu, aktivovaného amidu nebo aktivovaného esteru.

S výhodou se jako anhydridy kyseliny použijí anhydridy s nižšími alkylestery kyseliny uhličité, jako amidy kyseliny se použijí imidazolidy nebo isoxazolidy a jako aktivované estery se použijí kyanmethylester, karboxymethylester, acetylaminoethylthioester, p-nitro-nebo 2,4,5-trichlorfenyl-ester, N-sukcinimid-, N-ftalimid- nebo N-piperidinester, 8-chinolinester, methoxyethylthioester nebo ester získaný reakcí s karbodiimidem za přídavku N-hydroxysukcinimidu, 1-hydroxybenzotriazolu nebo

3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobenzo-[d]-l,2,3-triazinu.

Výchozí látky jsou známé nebo je možno je získat známým způsobem.

Předmětem tohoto vynálezu jsou také farmaceutické přípravky, které obsahují sloučeninu obecného vzorce I nebo její sůl, společně s farmaceuticky snášenlivým nosičem.

Sloučeniny podle vynálezu je možno zpracovávat na farmaceutické přípravky. Jde o přípravky pro enterální podání, například perorální, nazální nebo rektální, jakož i o parenterální podání u teplokrevných živočichů? všechny tyto přípravky obsahují účinnou látku jako takovou nebo jsou ve směsi s nosičem, přijatelným z farmaceutického hlediska. Dávka účinné látky závisí na živočišném druhu, na stáří a na podmínkách onemocnění i na cestě podání.

Nové farmaceutické přípravky obsahují 10 až 95 %, s výhodou 20 až 90 % účinné látky. Může jít o běžné lékové formy, jako jsou dražé, tablety, kapsle, čípky nebo ampule.

Farmaceutické přípravky s obsahem účinných látek, vyrobených způsobem podle vynálezu je možno získat běžným míšením, granulací, dražováním, výrobou roztoků nebo lyofilizací. S výhodou se získávají farmaceutické přípravky pro perorální podání, v nichž je účinná látka smísena s pevným nosičem, získaná směs se popřípadě granuluje a směs, popřípadě granulát se po přidání dalších pomocných látek zpracovává na tablety nebo dražé. V tomto případě je možno užít jako nosičů také plastických hmot, které uvolňují účinnou látku v průběhu delšího časového období.

Vhodnými nosiči jsou především plnidla, například cukr jako laktóza, sacharóza, mannit nebo sorbit, deriváty celulózy a/nebo fosforečnany vápníku, například fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále škrob, například kukuřičný škrob, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, želatina, tragant, methylcelulóza, hydroxypropylmethylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy a/nebo polyvinylpyrrolidon, dále je možno užít látky ke zvýšení objemu, jako škroby, karboxymethylderivát škrobu, zesítněný polyvinylpyrrolidon, agar, alginovou kyselinu nebo některou z jejích solí, například alginát sodný, pomocnými činidly jsou zejména kluzné látky, jako kyselina křemičitá, mastek, kyselina stearová nebo její soli, jako stearan hořečnatý nebo vápenatý a/nebo polyethylenglykol. Jádra dražé se opatřují povlakem, popřípadě odolnými proti působení žaludeční šťávy, jde například o koncentrované cukerné roztoky, které popřípadě obsahují mastek, arabskou gumu, polyvinylpyrrolidon, polyethylenglykol a/nebo kysličník titaničitý, roztoky laků ve vhodném organickém rozpouštědle nebo ve směsi rozpouštědel, nebo v případě výroby povlaků, odolných proti působení žaludeční šťávy, může jít o roztoky vhodných derivátů celulózy, například oftalát acetylcelulózy nebo ftalát hydroxypropylmethylcelulózy. Tablety nebo povlaky dražé mohou obsahovat také barviva, nebo pigmenty například pro identifikaci nebo rozlišení různých dávek účinné látky.

Následující příklady slouží k osvětlení způsobu podle vynálezu, nemají však vynález v žádném směru omezovat. Teploty jsou uvedeny ve stupních Celsia.

Sloučeniny obecného vzorce I není možno charakterizovat jejich teplotami tání ani spektroskopickými údaji, například NMR-spektry nebo spektry v infračerveném světle.

K další charakteristice sloučenin podle vynálezu by zásadně bylo možno užít také hodnot Rf, vzhledem velkému podílu lipidů však je tato charakteristika nevhodná.

Struktura výchozích látek je však známa zvláště z NSR patentu 2 655 500, fosfolipidová složka vyrobená způsobem podle tohoto vynálezu se běžně dodává a spojení fosfolipidu a muramylpeptidu je jednoznačné, v důsledku toho je jednoznačné i postavení jednotlivých stavebních kamenů ve výsledném produktu a struktura tohoto produktu.

Ve sloučeninách obecného vzorce I může proton, vázaný přes atom kyslíku, být odštěpen zásadami, což znamená, že v následujících příkladech 1 až 12 se může určité procento výsledných látek nacházet ve formě soli, i když to není výslovně uvedeno. Tyto soli, například sodné soli, rovněž spadají do oboru vynálezu.

Vynález se rovněž týká solí sloučenin obecného vzorce I s jinými skupinami, které jsou schopné tvořit soli, například s volnými karboxyskupinami. Především však jde o netoxické soli, přijatelné z farmaceutického hlediska, například soli s kovy nebo amonné soli.

Příklad 1

K roztoku 1,4 molu l,2-dipalmitoyl-an-glycero-3-fosforylethanolaminu a 2,5 mmolu triethylaminu ve 25 ml směsi chloroformu methanolu a vody v poměru 65:25:4 se po kapkách přidá roztok 2 mmolů N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-soglutamin-N-hydroxysukcinimidesteru v 6,5 ml dimethylacetamidu. Po 18 hodinách míchání při teplotě 20 °C se roztok za sníženého tlaku odpaří na objem 15 ml, čímž vznikne emulze. Tato emulze se zředí 200 ml vody a lyofilizuje. Odparek se uvede v suspenzi ve 30 ml vody a dialyzuje se proti vodě. Vnitřní dialyzát obsahuje výsledný produkt. Tento dialyzát se lyofilizuje a získaný N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(2’,2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-foforyl)ethylamid se čistí chromatografii na sloupci Sephadex LH-20. jako rozpouštědlo se užije směsi chloroformu, methanolu, kyseliny octové a vody v poměru 25:15:4:2. Při chromatografii na tenké vrstvě na silikagelu má sloučenina následující Rf: při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4 je Rf 0,31, při použití směsi chloroformu, methanolu, kyseliny octové a vody v poměru

25:15:4:2 je Rf 0,64.

Nové sloučeniny je možno analyticky charakterizovat tak, že se kvantitativně stanoví stavební kameny, a to kyselina N-acetylmuraminová, palmitová, fosforečná, L-alanin a D-glutamová kyselina. Kyselina N-acetylmuraminová se stanoví Morgan-Elsonovou reakcí podle modifikace, uvedené v publikaci J.

M. Ghuysen a další, [(in Methods in Enzymology 8, 629 (1966)] spektrofotometrickým způsobem.

Fosfát se kvantitativně stanoví způsobem, uvedeným v publikací Lowry a další [J. Biol. Chem. 207. 1 (1954)].

Kyselina plamitová a aminokyselina se stanoví v celkovém hydrolyzátu, získaném při použití 6 N kyseliny chlorovodíkové za 24 hodiny při teplotě 110 °C plynovou chromatografií nebo analyzátorem aminokyselin při použití kyseliny pentadekanové nebo norleucinu jako vnitřního standardu.

Získané molární poměry, vztažené na fosfát jsou následující: pdj:N-acetylmuraminové kyselina:L-alanin:D-glutamová kyselina: palmitová kyselina = 1:0,92:0,91:0,95:2,18.

N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-N-hydroxysukcinimidester, který je výchozí látkou se získá například následujícím způsobem:

mmoly N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminu, 2,2 mmolu N-hydroxysukcinimidu a 2,2 mmolu dicyklohexylkarbodiimidu se rozpustí v 6,5 ml dimethylacetamidu a směs se míchá 18 hodin při teplotě 20 °C. Vysrážená dicyklohexylmočovina se oddělí a roztok se přímo užije ke kondenzaci s fosfolipidem.

l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolamin, který se užije jako výchozí látka je syntetický preparát, který se běžně dováží.

Příklad 2

Obdobným způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetyldemethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1', 2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3 *-fosforyl)ethylamin z 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolamidu a N-acetyldemethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-N-hydroxysukcinimidesteru, výsledný produkt má na silikagelu následující hodnoty Rf:

0,29 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4 a 0,65 při použití směsi chloroformu, methanolu, kyseliny octové a vody v poměru 25:15:4:2.

Kyselina glutamová: alanin : kyselina palmitová = 1:1:2,7.

Příklad 3

Obdobným způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-T-oxy-methylkarbonyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid, z 1,2-diplamiíoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolaminu a z N-hydroxysukcinimidesteru N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-T-karboxymethylesteru.

Při chromatografií na tenké vrstvě silikagelu má výsledná látka následující hodnoty R_f: 0,28 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4 a 0,68 při použití směsi chloroformu, methanolu, kyseliny octové a vody v poměru 25:15:4:2.

Kyselina glutamová: alanin : kyselina palmitová = 1:0,8:2.

Příklad 4

Analogickým způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' , 2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)ethylmid z 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolaminu a N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-N-hydroxysukcinimidesteru. Výsledný produkt má při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu hodnotu R_f 0,3 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4.

Kyselina glutamová: alanin : kyselina palmitová = 1:1,9:1,9.

Příklad 5

Analogickým způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminy1-2-(1',2'-O-di-hexadecyl-sn-glycerol-3'-fosforyl)ethylamid, z 1,2-0-hexadecyliden-sn-glycerol-3-fósforylethanolaminu a N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-N-hydroxysukcinimidesteru. Výsledný produkt má při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu hodnotu R_f 0,43 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4.

l,2-0-dihexadecyl-sn-glycero-3-fosforylethanolamin, který se užívá jako výchozí látka je syntetický preparát, který se běžně dodává.

Příklad 6

Analogickým způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(3'-palmitoyl-rac.-glycero-1'-fosforyl)ethylamid z 3-palmitoyl-rac.-glycero-l-fosforylethanolaminu a N-acetyldesamethylmuramyl-L-alanyl-D-isoblutamin-N-hydroxysukcinimidesteru. Výsledný produkt má při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu hodnotu Rf 0,47 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4.

(3-palmitoyl-rac-glycero-l-fosforylethanolamin, který se užije jako výchozí látka je syntetický preparát, který se běžně dodává.)

Kyselina glutamová: alanin : kyselina palmitová = 1:1:1,1. Příklad 7

Analogickým způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoyl-2'-oleoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)ethylamid z l-palmitoyl-2-oleyl-sn-glycero-3-fosforylethanolaminu a N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-N-hydroxysukcinimidesteru. Výsledný produkt má při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu hodnotu R_f 0,33 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:24:4.

Kyselina glutamová: alanin : kyselina palmitová = 1:1:1,1.

l-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolamin, který se užije jako výchozí látka je syntetický preparát, který se běžně dodává.

Příklad 8

Analogickým způsobem jako v příkladu 1 se získá N-acetyldementhylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1’-palmitoylpropan15 diol-3’-fosforyl)ethylamid z l-palmitoylpropandiol-3-fosforylethanolaminu a N-acetyldemethylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-N-hydroxysukcinimidesteru. Výsledný produkt má při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu hodnotu R_f 0,49 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4.

l-palmitoylpropandiol-3-fosforylethanolamin, který se užívá jako výchozí látka je syntetický preparát, který se běžně dodává. Příklad 9

Analogicky jako v předchozích příkladech je možno získat N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminylglycerofosfolipidové deriváty kondenzací N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminu s následujícími fosf©lipidy:

1,2,-O-hexadecyliden-sn-glycero-3-fosforylethanolamin, l-palmitoyl-2“Oleoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolamin,

3-palmitoyl-rac-glycero-l-fosforylethanolamin, l-palmitoylpropandiol-3-fosforylethanolamin.

Příklad 10

Obdobným způsobem jako v předchozích příkladech je možné získat N-acetylmuramyl-L-alanyl-Ď-isoglutaminyl-L-alanyl-glycerofosfolipidové deriváty kondenzací N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-soglutaminyl-L-alaninu s těmito fosfolipidy:

1.2- 0-hexadecyliden-sn-glycero-3-fosforylethanolaminem, l-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolaminem,

3-palmitoyl-l-rac.-glycero-l-fosforylethanolaminem (kyselina glutamová : alanin : kyselina palmitová = 1:1,5:1), l-palmitoylpropandiol-3-fosforylethanolaminem.

Příklad 11

Analogickým způsobem jako v předchozích příkladech se získají N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-soglutaminyl-L-alanylglycerofosfolipidové deriváty kondenzací N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alaninu s těmito fosfolipidy:

1.2- dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolaminem (kyselina glutamová : alanin : kyselina palmitová = 1:1,7:1,3),

3-palmitoyl-rac.-glycero-l-fosforylethanolaminem (kyselina glutamová : alanin : kyselina palmitová = 1:1,6:1,1), l-palmitoylpropandiol-3-fosforylethanolaminem.

Výchozí látku je možné získat způsobem, který se popisuje dále.

A) K roztoku 6 g (10 mmolů) a-benzyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminu s 1,75 ml (11 mmolů) benzylesteru kyseliny bromoctové ve 100 ml dimethylformamidu sa za vyloučení vlhkosti a energického míchání po kapkách přidá roztok 1,87 ml (11 mmolů) Ν,Ν-diisopropylethylaminu v 50 ml dimethylformamidu v průběhu 75 minut. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a pak se dimethy lformamid odpaří ve vakuu a odparek se smísí se 100 ml vody. Vyloučí se olej, který tuhne a krystalizuje. Po míchání v ledové lázni se suspenze odfiltruje za odsávání, získané krystaly se promyjí malým množstvím vody a vysuší kysličníkem fosforečným.

Krystaly se znovu uvedou v suspenzi v petroletheru, odfilCS 276965 B6 trují a vysuší při teplotě 50 °C, čímž se ve výtěžku 85 % teoretického množství získá 6,2 g bezbarvých krystalů o teplotě tání 194, 195 až 198 °C [α]£^θ + 1° (c = 1,3, methanol).

B) 6,5 g (8,85 itunolu) a-benzyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin-T-benzyloxykarbonylmethylesteru se zpracovává ve 200 ml směsi methanolu a vody v poměru 1:1 za přítomnosti 0,5 g 10% paladia na aktivním uhlí 40 hodin při teplotě 40 °C působením vodíku.

Reakčni směs se pak oddělí od katalyzátoru filtrací a filtrát se odpaří dosucha.

Získaný olej se rozpustí v 75 ml vody, nasycené sekundárním butanolem, promyje se šestkrát 50 ml sekundárního butanolu, nasyceného vodou a pak se extrahuje ethylesterem kyseliny octové. Organické fáze se extrahují vodou a čištěné vodné fáze se po zpracování aktivním uhlím (Darco G 60) odpaří, dosucha. Odparek se smísí dvakrát s vodou, pak se odpaří a lyofilizuje.

Ve výtěžku 82 % teoretického množství se získá 4,0 g bílého lyofilizátu. [α]2θ+ 34 ± 1° (c = 0,8, voda).

C) 6,1 g a-benzyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin a 3,5 g L-alaninbenzylesterhydrochlorid se rozpustí ve 30 ml dimethylformamidu, roztok se zchladí na 0 °C a pak se přidá 1,4 ml triethylaminu, 1,1 g N-hydroxysukcinimidu a nakonec 2,3 g dicyklohexylkarbodiimidu.

Po 48 hodinovém míchání při teplotě místnosti se suspenze zfiltruje, sraženina se promyje malým množstvím dimethylformamidu a filtrát se odpaří dosucha ve vakuu. Odparek se uvede v suspenzi ve 100 ml vody při teplotě 0 °C, sraženina se oddělí filtrací a po usušení se nechá překrystalovat ze směsi methanolu a vody.

Ve výtěžku 74 % teoretického množství se tímto způsobem získá 5,5 g produktu. [a]2° + 70 + 1° (c 0,5, methanol).

D) 3,4 g a-benzyl-N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alaninbenzylesteru v roztoku ve 100 ml směsi methanolu a vody v poměru 2:1 se redukuje za přítomnosti 10% paladia na aktivním uhlí 40 hodin vodíkem. Pak se katalyzátor oddělí filtrací za odsávání, filtrát se odpaří téměř dosud a odparek se rozpustí ve 40 ml sekundárním butanolem nasycené vody a pak se třikrát extrahuje 40 ml sekundárního butanolu nasyceného vodou. Po zpětné extrakci organické fáze třikrát 40 ml vody se vodné extrakty slijí, odpaří a lyofilizují.

Ve výtěžku 80 % teoretické množství se tímto způsobem získá

2,2 g bezbarvého prášku. [<x]2° .+ 9 ± 1° (c = 1,1, voda). Příklad 12

Stejným způsobem jako v předchozích příkladech je možno získat i následující sloučeniny, jejich analytické hodnoty je možno získat stejným způsobem jako v příkladu 1.

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1',2’-dipalmioyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(l'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl“L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1' , 2 ' -dihexadecyl-rac.-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2“(1'-hexadecyl-rac.-glycero-3’-fosfory!)ethylamid

N“benzoylmuramyl-L-alanyl”D-isoglutaminyl”2-(1',3'-dipalmitoylglycero-2 '-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' , 2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid, kyselina glutamová : alanin : kyselina palmitová =1:1,9:2,3,

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dihexadecyl-rac.-glycero-3’-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alany1-2-(1'-hexadecyl-rac.-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',3'-dipalmitoylglycero-2’-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)-ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid,

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-L-alányl-2-(1',2'-dihexadecyl-rac-glycero-3’-fosforylethylamid

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3’-fosforyl)ethylamid,

N-benzoylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1',3'-dipalmitoylglycero-2'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-2-(1’,2'-dihexa decyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-2-(1’-hexadecyl -rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid,

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-2-(1',3’-dipalmitoylglycero-2'-fosfory1)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(l', 2’-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1 ’ -palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(l', 2'-dihexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3'fosfory1)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1', 3'-dipalmitoylglycero-2'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(l',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid,

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-pal mitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(l'-pal mitoyl-propandiol-3'-fosforyl)-ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1', 2' -dihexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1' , 3 ' -dipalmitoylglycero-2'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1', 2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1',

2'-dihexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2- (1' -hexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1', 3'-dipalmitoylglycero-2'-fosfory!)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1’,2'-dixadecyl-rac-giycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3’-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',3'-dipalmitoylglycero-2'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(l’,2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dihexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1',3·-dipalmitoylglycero-2'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminy1-2-(1'-palmitoyl -sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-palmitoyl propandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminy1-2-(1',2'-dihexa decyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-hexadecyl

-rac.-glycero-3’-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1',3'-dipalmitoylglycero-2 '-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' ,

2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid; kyselina glutamová: alanin : kyselina palmitová : kyselina aminomáselná = =1:0,8:1,8:0,9

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)-ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' -palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

I

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',

2'-dihexadecyl-rac.-glycero-3’-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' -hexadecyl-rac.-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1’,

3'-dipalmitoylglycero-2’-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1'-hexade-cyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',

2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid,

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' -palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)-ethylamid

N-acetylmuramyl-L-<x-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',

2'-dihexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1’,

3'-dipalmitoylglycero-2'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1' , 2 ' -dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutamiňyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-palmitoylpropandiol-3 '-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'21 ”dihexadecyl-rac“glycero“3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1'-hexadecyl-rac-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-L-alanyl-2-(1',3'-dipalmitoylglycero-2'-fosfory!)-ethylamid,

N-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl-a-glycinamid-T-2 -(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyl-desmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutamyl-a-glycinamid-T-L-alanyl-2-(1' , 2 ’-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl“L-alanyl-D-glutaminyl“L-alanyl-2-(1', 2¹ -dipalmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-alanyl-D-glutaminyl-2-(1',2'-dipalmi” toyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-seryl-D-glutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3 '-fosforyl)ethylamid

N-acetyldesmethylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-2-(1',2' -dipalmitoyl-sn-glycero-3‘-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-a-aminobutyryl-D-glutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3 '-fosforyl)ethylamid,

N-acetylmuramyl-L-valyl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn -glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-valyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1' , 2'-dipalmi toyl-sn-glycero-3 '-fosforyl)ethylamid

N-propionylnormuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-propionylnormuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1’, 2' -dipalmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)-ethylamid, kyselina giutamová: alanin : kyselina palmitová = 1:2:2,4

N-acetylmuramyl-L-propyl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-propyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'- di palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)-ethylamid

N-benzoylnormuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmi toyl-sn-glycero-3 '-fosforyl)-ethylamid

N-benzoylnormuramyl-L-a-aminobutyryl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2’-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutaminyl-2-(1',2'-dipalmitoyl -sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid

CS ί276965 B6

N-acetylmuramyl-L-threonyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-di palmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)-ethylamid.

Příklad 13

Roztok 1,5 mmolů N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-N-hydroxysukcinimidesteru v 5 ml dimethylacetamidu se po kapkách přidá k roztoku 1 mmol 2-(l',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamidu a 3,5 mmolů N-ethylmorfolinu ve 25 ml směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4 při teplotě místnosti. Směs se míchá 8 hodin při teplotě 22 °C, po této době je reakce ukončena. K reakční směsi se pak přidá 130 ml vody.

Organická rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a výsledný vodný roztok, který ještě může obsahovat určité množství methanolu se zfiltruje teflonovým filtrem (5 μιη). Filtrát se za míchání dialyzuje v ultrafiltračním přístroji Amicon membránou Amicon YM 10 postupně proti 400 ml vody, 200 ml 0,1 M vodnému roztoku pufru s fosforečnanem sodným s 0,1 M chloridu sodného o pH 7a 850 ml vody. Dialyzát se zfiltruje filtrem Millipore (0,45 μιη) a lyofilizuje, čímž se získá N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1',2'-dipalmitoyl-xn-glycero-3'-fosforyl) ethylamid převážně nebo úplně ve formě sodné soli.

Analýza byla vypočítána pro 100% sodnou sůl s obsahem 3 molů vody na 1 mol soli.

Analýza pro C_5gH₁₁₄NgO₂₂P Na, molekulová hmot. 1315,55 vypočteno: 53,59 % C, 8,75 % H, 6,40 % N, 2,36 % P, 1,75 % Na; nalezeno: 53,89 % C, 8,6*3 % H, 6,40 % N, 2,22 % P, 1,58 % Na. Příklad 14

a) Κ 1 mmolů la-O-benzyl-N-acetyl-4,6-0-isopropylidenmuraminové kyseliny, 0,9 mmolům L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamidu ve směsi 15 ml dimethylformamidu, 10 ml tetrahydrofuranu a 2 ml pyridinu se přidá 1,2 mmolů dicyklohexylkarbodiimidu a 1,3 mmolů N-hydroxysukcinimidú. Po 24 hodinách při teplotě místnosti je reakce ukončena. Přidá se několik kapek vody, vzniklá dicyklohexylmočovina se odfiltruje za odsávání a filtrát se odpaří ve vakuu dosucha. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu (Merck) při použití směsi chloroformu a methanolu v poměru 7:3. Frakce, které obsahují požadovaný výsledný produkt, reagují při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu (Merck) pozitivně s fosfátovým činidlem podle publikace V. E. Vaskovsky a Ε. Y. Kostetsky, J. Lipid. Res. 9, 396, (1968) a mimoto reagují pozitivně s 2 N kyselinou sírovou za tepla, kdy se cukr barví do hnědá. Materiál se odpaří a za účelem odstranění ochranných skupin se nejprve zahřívá ve směsi 12 ml ledové kyseliny octové a 8 ml vody hodinu na teplotu 50 °C a pak se nechá stát při teplotě místnosti s 10% palladiem na aktivním uhlí za atmosférického dojde k hydrogenací. Po 20 hodinách je a-benzylová straněna, katalyzátor se ofiltruje a filtrát se odpaří ve vakuu na sirupovitou kapalinu. Tímto způsobem se získá pyridinová sůl N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3 ' -fosforyl ) ethylamidu, která se rozpustí ve 150 ml vody.

tlaku, čímž skupina od23

Vodný roztok se zfiltruje filtrem Millipore z teflonu s velikostí pórů 5 μιιι. Filtrát se podrobí v přístroji Amicon diafiltraci přes membránu Amicon YM 10 nejprve proti 400 ml vody, pak proti 200 ml pufru s fosforečnanem sodným o koncentraci 0,1 Mas chloridem sodným o koncentraci 0,1 M při pH 7 a nakonec proti 850 ml vody. Dialyzát, který obsahuje N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid ve směsi s jeho sodnou solí se nechá projít filtrem Millipore o velikosti pórů 0,45 μιη a pak se lyofilizuje. R_f=0,30 při použití směsi chloroformu, methanolu a vody v poměru 65:25:4.

Nové sloučeniny se analyticky charakterizují tak, že se stanoví kvantitativně stavební kamery, a to kyselina N-acetylmuraminová, kyselina palmitová, fosfát, L-alanin a kyselina D-glutamová. Kyselina N-acetylmuraminová se stanoví pomocí Morgen-Elsonovy reakce v modifikaci, popsané J. M. Ghuysenem a dalšími v Methods in Enzymology 8, 629 (1966) spektrometrieky.

Fosfát se stanoví kvantitativně způsobem podle publikace Lowry a další [J. Biol. Chem.207, 1 (1957)].

Kyselina palmitová a aminokyseliny se stanoví v celkovém hydrolyzátu, získaném působením kyseliny chlorovodíkové o koncentraci 6 N po dobu 24 hodin při teplotě 110 °C plynovou chromatograf ií, popřípadě pomocí analyzátoru aminokyselin při použití kyseliny pentadekanové nebo norleucinu jako vnitřního standardu. Stanovení je kvantitativní.

Zjištěné molární poměry, vztažené na fosfát jsou následující:

PO4': kyselina N-acetylmuraminová: L-alanin: D-glutamová kyselina:kyselina palmitová = 1:0,92:1,80:0,96:2,18.

L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn -glycero-3'-fosforyl)ethylamid, který je výchozí látkou, se získá z 2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylaminu, který se běžně dodává, a z L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alaninu známým způsobem.

Příklad 15

Způsobem podle příkladů 13 a 14 je možno získat sloučeniny obecného vzorce I, uvedené v příkladech 1 až 3 a 5 až 12, převážně nebo úplně ve formě odpovídajících sodných solí.

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1. Muramylpeptid obecného vzorce I kde

X znamená karbonylovou skupinu,

R-j. znamená alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenyl,

R₂,R₄ a Rg znamenají atomy vodíku,

Ro znamená atom vodíku nebo alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

R₅ znamená alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

R₇ znamená atom vodíku,

a₂ znamená zbytek obecného vzorce II 0 li -T-Y-O-P-O I W 1 - CH (II), 1 OH 1 z kde T X znamená skupinu - NH nebo - 0, znamená alkylen se 2 nebo 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovaný alkylem s I až 3 atomy uhlíku, který

může být přerušen oxykarbonylem nebo iminokarbonylem,

W znamená atom vodíku,

Z znamená 1,2-dihydroxyethylovou nebo 2-hydroxyethylovou skupinu, ve kterých alespoň jedna z hydroxy§ skupin je esterifikována popřípadě nenasycenou alifatickou karboxylovou kyselinou s 12 až 22 atomy uhlíku nebo etherifikována alifatickým alkoholem s 10 až 22 atomy uhlíku, který je popřípadě nenasycen , nebo

W a Z znamenají každý hydroxymethylovou skupinu, esterifikovanou popřípadě nenasycenou alifatickou karboxylovou kyselinou s 12 až 22 atomy uhlíku nebo etherifikovanou alifatickým alkoholem s 10 až 22 atomy uhlíku, který je popřípadě nenasycen a

A^ znamená aminoskupinu, jakož i soli této sloučeniny.
2. N-Acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1’,2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamid, obecného vzorce

I podle nároku 1, ve kterém R^ znamená methylovou skupinu, R₂ znamená atom vodíku, R₃ znamená methylovou skupinu, R₄ znamená atom vodíku, R₅ znamená methylovou skupinu, R_g a R? představují atomy vodíku, X znamená karbonylovou skupinu, A^ znamená aminoskupinu a A₂ znamená zbytek obecného vzorce II, kde T představuje skupinu vzorce -NH, Y představuje skupinu vzorce -CH(CH₃)-CO-NH-CH₂-CH₂-, W znamená atom vodíku a Z představuje

1,2-dipalmitoyloxyethylovou skupinu, jakož i jeho soli.
3. Farmaceuticky snášenlivá sůl sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 2.
4. Sodná sůl sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 2.
5. Způsob výroby muramylpeptidů obecného vzorce I a jejich solí podle nároku 1, vyznačující se tím, že se uvede v reakci sloučenina obecného vzorce III

CH^CS ' fl kde man znamenají nezávisle na sobě číslo O nebo 1,

A? znamená hydroxyskupinu nebo zbytek obecného vzorce

IV

- T - Y_T - Μ_χ (IV), kde

Y-L znamená methylenovou skupinu, popřípadě substituovaný alkylem s 1 až 3 atomy uhlíku, znamená karboxylovou skupinu a zbývající substituenty mají svrchu uvedený význam, za předpokladu, že ve sloučenině obecného vzorce III jsou funkční skupiny s výjimkou skupiny A₂ účastnící se reakce popřípadě chráněny snadno odštěpitelnou ochrannou, skupinou, nebo derivát sloučeniny obecného vzorce III, v němž se nachází skupina A₂v reaktivní formě, se sloučeninou obecného vzorce V kde q a r znamenají nezávisle na sobě číslo 0 nebo 1,

A? znamená zbytek obecného vzorce II ve svrchu uvedeném významu nebo zbytek obecného vzorce VI

0 W

OH Z kde

M₂ znamená iminoskupinu nebo atom kyslíku,

V2 znamená alkylen se 2 atomy uhlíku a

W a Z mají shora uvedený význam, za předpokladu, že zbytek, který vzniká spojením zbytků Υ_χa Y₂ přes oxykarbonylovou nebo iminokarbonylovou skupinu, odpovídá zbytku Y a ostatní substituenty mají shora uvedený význam za předpokladu, že ve sloučenině obecného vzorce V se mohou přítomné funkční skupiny s výjimkou skupin

H - N, H - N, H-T nebo H - M₂,

I I ^R4 ^R6 vyskytovat v aktivované formě a jsou popřípadě chráněny snadno odštěpitelnými ochrannými skupinami za předpokladu, že r a q znamenají 1 a A₂ představuje zbytek obecného vzorce II v případě, že ve sloučenině obecného vzorce III m znamená O a A₂ odlišný význam od zbytku obecného vzorce IV, nebo r znamená 1, q znamená 0 a A^ představuje zbytek obecného vzorce II v případě, že m znamená 1, n znamená 0 a A₂ má význam odlišný od obecného vzorce IV, nebo r znamená 0 a A₂ znamená zbytek obecného vzorce II v případě, že man znamenají číslo 1 a A₂ znamená hydroxyskupinu, neboř znamená 0 a A^, znamená zbytek obecného vzorce VI v případě, že m a n znamenají číslo 1 a A^ znamená zbytek obecného vzorce IV, načež se popřípadě odštěpí přítomné ochranné skupiny a získaná sloučenina obecného vzorce I se podle potřeby převede na svou sůl.
6. Způsob podle nároku 5, pro výrobu soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2’-dipalmitoyl-sn-glycero-3'-fosforyl)ethylamidu, vyznačující se tím, že se karboxylová kyselina obecného vzorce III, v němž X znamená karbonyl, R^ znamená methyl, R₂ znamená atom vodíku, R₃ znamená methyl, A₂ znamená hydroxyskupinu a m znamená číslo 0, nebo aktivovaný derivát této karboxylové kyseliny uvede do reakce se sloučeninou obecného vzorce V ve formě soli, v němž q a r znamenají číslo 1, R₄ znamená atom vodíku, R₅ znamená methyl, Rg znamená atom vodíku, A® znamená aminoskupinu, R₇ znamená atom vodíku a A^ znamená zbytek obecného vzorce VI, v němž M₂ znamená iminoskupinu, Y₂ znamená zbytek vzorce ^ch3

- CH - CO - NH - CH₂ - CH₂ -, W znamená atom vodíku a Z (L) znamená 1,2-dipalmitoyloxyethylovou skupinu, v případě potřeby za přítomnosti báze.
7. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se užije jako výchozí látka sloučenina obecného vzorce III, kde X znamená karbonyl, R^ znamená methyl, R₂ znamená atom vodíku, R₃ znamená methyl, R₄ znamená atom vodíku, R₅ znamená methyl, A₂ znamená hydroxyskupinu, m je 1 a n značí číslo 0 nebo aktivovaný derivát této karboxylové kyseliny a sloučenina obecného vzorce V, v němž q představuje číslo 0, r představuje číslo 1, Rg znamená atom vodíku, A^ znamená aminoskupinu, R? znamená atom vodíku a A^ znamená zbytek obecného vzorce VI, v němž M₂znamená iminoskupinu, Y₂ znamená zbytek vzorce

CHo

I

- CH - CO - NH - CH₂ - CH₂ -, (L)

W znamená atom vodíku a Z znamená

1,2-dipalmitoyloxyethylenovou skupinu, v případě potřeby za přítomnosti báze.
8. Způsob podle nároku 5, pro výrobu soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)ethylamidu, vyznačující se tím, že se

N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanin nebo jeho aktivovaný ester uvede do reakce s 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforylethanolaminem v přítomnosti vhodné báze.
9. Způsob podle nároku 5, pro výrobu soli N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-soglutaminyl-L-alanyl-2-(1',2'-dipalmitoyl-sn-glycero-3’-fosforyl)ethylamidu, vyznačující se tím, že N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutamin nebo jeho aktivovaný ester uvede do reakce s L-alanin-2-(l,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-fosforyl)ethylamidem v přítomnosti vhodné báze.
10. Způsob podle nároků 5 až 7, vyznačující se tím, že se ochranné skupiny odštěpí působením kyseliny.
11. Způsob podle nároků 5 až 7, vyznačující se tím, že se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem reaktivních esterifikovaných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je tato hydroxyskupina nebo v níž jsou tyto hydroxyskupiny esterifikovány silnou anorganickou kyselinou nebo kyselinou sulfonovou.
12. Způsob podle nároků 5 až 7, vyznačující se tím, že se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem reaktivních esterifikovaných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je hydroxyskupina nebo v níž jsou hydroxyskupiny esterifikovány halogenovodíkovou kyselinou.
13. Způsob podle nároků 5 až 7, vyznačující se tím, že se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem chráněných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je hydroxyskupina nebo v níž jsou hydroxyskupiny chráněny acylovým zbytkem, aroylovým zbytkem nebo zbytkem odvozeným od derivátů kyseliny uhličité nebo alkylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku rozvětveným v poloze a nebo a-mono, a-di nebo a-triarylalkylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku v alkylové části nebo zbytkem tvořícím acetal.
14. Způsob podle nároků 5 až 7, vyznačující se tím, že se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem chráněných hydroxyskupin použije sloučenina, v níž je hydroxyskupina nebo v níž jsou hydroxyskupiny chráněny alkanoylovým zbytkem s 1 áž 7 atomy uhlíku, benzoylovým zbytkem, benzoyloxykarbonylovým zbytkem, alkoxykarbonylovým zbytkem s 1 až 7 atomy uhlíku v alkoxylové části, terč. butylovým zbytkem nebo popřípadě substituovaným benzylovým zbytkem, trifenyImethylovým zbytkem nebo tetrahydro-pyranylovým zbytkem.
15. Způsob podle nároků 5 až 7, vyznačující se tím, že se jako sloučenina s jednou nebo větším počtem aktivovaných karboxylových skupin použije sloučenina, v níž se karboxylová skupina nebo karboxylové skupiny nachází ve formě anhydridu, azidu, aktivovaného amidu nebo aktivovaného esteru.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že se jako anhydridy kyseliny použijí anhydridy s nižšími alkylestery kyseliny uhličité, jako amidy kyseliny se použijí imidazolidy nebo isoxazolidy a jako aktivované estery se použijí kyanmethylester, karboxymethylester, acetylaminoethylthioester, p-nitro- nebo

2,4,5-trichlorfenylester, N-sukcinimid-, N-ftalimid- nebo

N-piperidinester, 8-chinolinester, methoxyethylthioester nebo ester získaný reakcí s karbodiimidem za přídavku N-hydroxysukcinimidu, 1-hydroxybenzotriazolu nebo 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydrobezo/d/-l,2,3-triazinu.
17. Farmaceutický přípravek obsahující sůl podle nároku 3 nebo 4, společně s farmaceuticky snášenlivým nosičem.

Konec dokumentu