HU188861B - Process for producing new lipophyl muramyl-peptides - Google Patents

Description

A találmány tárgya új lipofil muramil-peptidek, ezek fém- és ammóniumsói, valamint az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárása, amelyek az immunitás növelésére alkalmazhatók.

Az új muramil-peptidek az (I) általános képletnek felelnek meg, a képletben X jelentése karbonilcsoport,

Rj jelentése rövidszénláncú alkilcsoport vagy fenilcsoport,

R₃ jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,

R_s jelentése rövidszénláncú alkilcsoport,

Aj jelentése aminocsoport és

A₂ (II) általános képletű csoportot képvisel, ahol

T jelentése HN= vagy — Ο —,

Y jelentése rövidszénláncú alkiléncsoport vagy (lile) általános képletű csoport, melyben Yj és Y₂ egymástól függetlenül rövidszénláncú alkiléncsoportot képvisel, mimellett Yj és Y₂ együtt több mint 2 szénatomot tartalmaz, és

Z jelentése olyan 1,2 - dihidroxi - etil - vagy 2 hidroxi - etil - csoport, amelyekben legalább az egyik hidroxilcsoport egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 12-22 szénatomos alifás karbonsavval észterezett vagy egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 10-22 szénatomos alifás alkohollal éterezett.

A rövidszénláncú alkilcsoport egyenes vagy elágazó láncú és tetszés szerinti helyzetben kapcsolódik.

Az Y által képviselt rövidszénláncú alkiléncsoport előnyösen 2 vagy 3 szénatomos,

A 12-22 szénatomos alifás karbonsavak 1- vagy 2 kettős kötéssel rendelkezhetnek és egyenes vagy elágazó láncúak lehetnek; ezek közül a 16-22 szénatomosak előnyösek. A 10-22 szénatomos alifás alkanolok szintén 1- vagy 2 kettős kötést tartalmazhatnak és ugyancsak egyenes vagy elágazó szénláncúak; előnyösek azok az alkanolok, amelyek 12-18 szénatomot tartalmaznak és amelyeknek a hidroxilcsoportja véghelyzetben van.

A leírásban és az igénypontokban használt „rövidszénláncú” megjelölés olyan csoportokra és vegyületekre vonatkozik, amelyek előnyösen legfeljebb 4 szénatommal rendelkeznek.

A vegyületnevekben szereplő „sn” jelölés a „stereospezifische Numerierung” rövidítése és a konfiguráció közelebbi megjelölésére szolgál.

Az előzőekben és a következőkben az általános megjelölések a következő jelentéssel rendelkeznek:

Rövidszénláncú alkilcsoport például az n-propil, η-butil-, izobutil-, szek-butil- vagy terc-butilcsoport, és elsősorban a metil- vagy etilcsoport.

Rövidszénláncú alkoxicsoport például az npropoxi-, η-butoxi-, izobutoxi-, szek-butoxi- vagy terc-butoxí-csoport és elsősorban a metoxi- vagy etoxicsoport. Halogénatom fluor- vagy brómatom, előnyösen klóratom.

A találmány szerinti eljárással előállítható új vegyületek izomerelegyek vagy tiszta izomerek formájában létezhetnek.

A találmány szerinti eljárással előállítható új lipofil muramil-peptidek egy sor értékes farmakológiái tulajdonsággal rendelkeznek, különösen immunnövelő hatásuk jelentős.

Ezekkel a vegyületekkel in vivő az egerek antitestképző képessége jelentős mértékben növelhető.

NMRI egereket 10 pg precipitátum-mentes BSA-nak intraperitoneális injektálásával a 0. napon immunizálunk. Ezt követően a 9., 15. és 29. napon szérumpróbát veszünk és passzív haemagglutinációs módszerrel meghatározzuk az egyes próbák anti - BSA - antitest - tartalmát. Az alkalmazott dózisban az oldható BSA a kezelt állatok számára az immunhatár alatt van, azaz egyáltalán nem okoz, vagy csak nagyon csekély antitesttermelést idéz elő. Az egerek pótlólagos kezelése bizonyos immunhatásnövelő anyagokkal az antigén beadása előtt vagy után az antitest-titer emelkedéséhez vezet a szérumban. A kezelés hatását az elért Score-érték, azaz a log₂ titerkülönbségek összege által fejezzük ki, amelyeket a három vérzési napon észleltünk.

Ennél a kísérletnél az (I) általános képletű vegyületek abban a helyzetben vannak, hogy 0,5 - 5 mg/ kg állatsúly adag intraperitoneális vagy szubkután alkalmazásánál öt egymást követő napon, BSA-val történő immunizálás után a BSA-val szembeni antitesttermelést jelentős mértékben fokozzák. Ilyen vonatkozásban ezek a vegyületek a hagyományos hípofil muramil-pepíideket messze felülmúlják.

Kísérleteink során az alábbi vegyületek hatását vizsgáltuk: .

a) intraperitoneális alkalmazás esetén:

N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

- L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil - etil - amid („A” jelzésű vegyület);

N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

- γ - oxi - metil - karbonil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil

- sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid („B” jelzésű vegyület);

N - acetil - muramii - L - α - amino - butíril - D izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2 - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid („C” jelzésű vegyület);

N - acetil - demetilmuramil - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alaniii - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid;

N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

- L - alanin - 2 - (3’ - palmitoil - rác - glicero - 1’

- foszforil) - etil - amid („D” jelzésű vegyület);

N - propionil - demetilmuramil - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil sn - glicero - 3' - foszforil) - etil - amid („E” jelzésű vegyület);

-2188 86!

Ν - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutamin

- 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

- etil - amid;

N - acetil - demetilmuramil - L - alanil - D - izoglutaminil - 2 - (T,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid és

N - acetil - demetilmuramil - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (3’ - palmitoil - rác - glicero

- Γ - foszforil - etil - amid.

b) szubkután alkalmazás esetében:

Az „A”, „B”, „C” és „D” jelzésű vegyületet vizsgáltuk.

A sejtközvetítö immunitás megnyilvánulása az említett vegyületek útján in vivő ugyancsak fokozható:

Míg tengeri malacoknak BSA-val nem teljes Freund-féle adjuvánsban való szenzibilizálása csupán humorális antitestképzéshez vezet, addig a találmány szerinti lipofil muramil-peptideknek 5 - 50 pg dózistartományban való hozzákeverése az antigén olajemulzióhoz később jelentkező túlérzékenységet okoz BSA-val szemben: 3 héttel az immunizálás után BSA-nak bőrbe való befecskendezése ezeknél az állatoknál bőrpirosodással és bőrmegvastagodással járó helyi gyulladásos reakcióhoz vezet, amely 24 - 48 óra alatt maximumot ér el. Ezek a később jelentkező típusú reakciók mennyiségileg és minőségileg megfelelnek azoknak a reakcióknak, amelyeket szokásos módon BSAval való immunizálás útján teljes Freund-féle adjuvánsban (azaz mikrobaktériumok hozzáadásával) kapunk. Az ED₅₀ értékek nagysága 10-20 pg [egy 200 pl nagyságú reakcióvolumen-különbség kiváltásához szükséges mennyiség pg/állat mértékben (bőrpirosodásos felület x bőrmegvastagodás) kezelt és kezeletlen állatoknál, 24 órával a kiváltás után]. A kísérletek során az „A”, „B”, „C”, „D” és „E” jelzésű vegyületeket vizsgáltuk.

! Különösen ki kell emelni ilyen lipofil muramilpeptideknek azt a képességét is, hogy BSA-val együtt liposomákban (tojáslecitin : koleszterin =4 : 1; 4 mg/állat) és a toxikus ásványolajkomponens nélkül való alkalmazásával később jelentkező típusú túlérzékenységet képes előidézni BSAval szemben. Mennyiségileg és minőségileg ugyancsak azonosak ezek a később jelentkező típusú reakciók azokkal a reakciókkal, amelyeket BSAval teljes Freund-féle adjuvánsban kapunk. Az ED_S0-értékek 100-300 pg/állat nagyságúak. A vizsgálat az „A” jelzésű vegyületre terjed ki.

Az új (I) általános képletű vegyületek a hidrofil muramilpeptidekkel összehasonlítva további minőségjavulásokat mutatnak.

Balb/c egereket 2 x 10⁴ P815 masztocitomsejtekkel a 0. napon immunizálunk. A 15. napon az így immunizált állatok lépsejtjeit in vitro citosztatikus, P815 masztocitomsejtek ellen ható, T-limfociták jelenlétére megvizsgáljuk. Erre a célra a P815 célsejteket ^5,Cr-rel jelöljük és a citotoxikus reakció mértékét a radioaktivitás mérésével meghatározzuk a tenyészetben. Az alkalmazott adagban a P815 masztocitomsejtek a befogadó egerekre nézve az immunhatár alatt vannak, azaz nem vagy csak csekély mértékben segítik a citosztatikus T-sejtek képződését. Az „A” jelzésű (1) általános képletű muramilpeptidek 1 - 50 pg mennyiségben történő egyidejű intraperitoneális alkalmazása a citotoxikus T-sejtek képződésének jelentős növekedéséhez vezet (10-30-as faktor a kezeletlen egerekkel szemben).

Az új (I) általános képletű vegyületek immunitást fokozó tulajdonságai adjuvált autoblasztok által immunizált átültetési antigének elleni fajlagos immuntűrés előidézése esetében is kimutathatók egereknél.

Valamely kevert limfocitatenyészetben annak az egérnek (C57B1/6J egerek), amelybe a jövőben átültetést végzünk (befogadó), a léplimfocitáit olyan egér (CBA/J egerek) lépsejtjeivel, amelyből a jövőben az átültetés történik (adó vagy donor) együtt inkubáljuk. Olyan fajlagos receptorokkal, amelyek a donor-állat szövetösszeférhetőségéért felelősek, rendelkező T-limfociták burjánzanak és blasztokká alakulnak. Ezek ülepítéssel elválaszthatók más sejtektől. A fajlagos blasztok exprimálják a membránreceptorok fontos idiotipikus sajátosságait és a teljes Freund-féle adjuvánssal (CFA), mint autoimmunogénnel való javítás után a fajlagos tűrés kiváltása céljából az átültetési antigének ellen a prospektív fogadóállatba (C57 B1/6J) befecskendezzük. Az immunizálást négyszer végezzük négyhetes időközökben autolog anti-CBA/J T-limfoblasztokkal. Az új (I) általános képletű vegyüíetekkel adszorbeált T-autoblasztok (10⁹ blaszt 20 mg anyag 20 ml PBS-el készített oldatában szuszpendálva, majd a sejteket két óra hosszat inkubáljuk, ezt követően centrifugáljuk éá PBS-el kétszer mossuk) olyan helyzetben vannak, hogy fajlagos immunösszeférhetőséget létesítenek CFA távollétében, mimellett az adszorbeált anyagok ugyanolyan hatásúak, mint a limfoblasztok a CFA-ban. A vizsgálatot az „A” jelzésű vegyülettel végeztük.

Ezen túlmenően az új (I) általános képletű vegyületek 0,5- 100 pg/ml koncentrációkban normális egerek lépsejt-tenyészeteiben képesek antitestképző sejtek kialakulását elősegíteni (19S-pestisképző sejtek 10-30-as faktorral való növekedése a kontrollértékhez képest) stimuláló anyagok távollétében. Ily módon az említett vegyületek távollétében például birkavörösvérsejtek ellen ható fajlagos antitestek képződnek anélkül, hogy a tenyészetekhez birkavörösvérsejteket tettünk volna immunizálás végett. Másrészt az említett anyagok ugyanabban a koncentrációtartományban örökölt thymushiányos nu/nu egereknél a T-sejtekben elszegényedett lépsejttenyészetek immunológiai reaktivitását is képesek növelni valamely normális körülmények között thymustól függő antigénnel szemben (birkavörösvérsejtek) (10-30-as faktor a kezeletlen kontroli-tenyészetekhez viszonyítva). Az említett vegyületek in vitro azonban közvetlenül vagy közvetve nemcsak a B-limfociták (azaz a hatásos antitestképző cellák) szaporító- és szintézisteljesítményét segítik, hanem a T-limfocitákra (amelyekhez a szabályozó aktív segítő- és gátlósejtek,

-3188 861 valamint a citotoxikus effektorsejtek tartoznak) hatásait is közvetítik. így például az említett vegyületek 1 - 20 pg/ml koncentrációtartományban a kortizonrezisztens thymussejtek reaktivitását jelentős mértékben (10-szeres nagyságig) képesek növelni hasonló szerkezetű besugárzott stimuláló limfocitákkal szemben. (Vizsgáiat az „A” jelzésű vegyülettel).

A fent említett hatások valószínűleg közvetve jönnek létre azáltal, hogy ilyen lipofil muramilpeptidek makrofágokat aktiválnak, amelyek a maguk részéről T- és B-Iimfociták reaktivitását segítik. Valójában kimutatható, hogy az említett vegyületek már kis koncentrációkban (0,5— 10 pg/ml) nagy mennyiségű „colony stimulating activity” (CSA) felszabadítanak egérmakrofágokból (7 nap alatt 10⁵ egér-csontvelősejtből származó 150 — 200 kolónia indukciója, 24 óra alatt az anyaggal inkubált, makrofág-tenyészetből származó 20 % fennmaradó rész hozzáadása után, míg a kezeletlen nakrofág-tenyészetek maradékának a hozzáadásakor 0 — 5 kolónia indukciója következik be). A CSA egy biológiai közvetítő, amely csontvelő-törzssejteknek makrofágokra és polimorf-maggal rendelkező leukocitákra való szétválasztásához szükséges. Ezzel az említett vegyületek olyan sejtek megnövekedett pótlását segítik, amelyek a nem-fajlagos ellenállás és a fajlagos (limfocitaközvetítő) immunreakciók indukciója, növelése és expressziója szempontjából központi jelentőségűek.

Az új vegyületek immunhatásfokozó képességét in vivő a következő módon bizonyítjuk: egy találmány szerinti eljárással előállított murapiípeptid polipeptid-származékát 3-9 órán belül addig fecskendezzük be egereknek, ameddig a CSA-koncentráció a szérumban magas szintre nem emelkedik (120 kolónia 10⁵ egér-csontvelősejíben, kloroformmal extrahált szérum hozzáadása után [5 % végkoncentráció], míg a kezeletlen állatoknál 0 - 5 kolónia). Ennek megfelelően ugyanezeknek a vegyületeknek in vivő beadásánál az egerek antitestképző képessége jelentős mértékben megnövekszik. (Vizsgálat az „A” jelzésű vegyülettel.)

Az (I) általános képletű vegyületek immunhatás fokozó tulajdonságait tumormodelleken is bemutathatjuk, így például Ehrlich Ascites tumoron egérnél.

10⁶ syngen Ehrlich Ascites tumorsejt intraperitoneális befecskendezése Balb/c egereknél átlagosan 18 nap alatt az állatok pusztulásához vezet. Amennyiben az egereknek intraperitoneálisan olyan 10⁷ (1. csoport), 10⁶ (2. csoport) és 10⁵ (3. csoport) Ascites tumorsejtet fecskendezünk be, amelyhez (1) általános képletű új vegyületeket adtunk (10⁹ Ascites tumorsejtet 40 mg vizsgálandó anyag 20 ml foszfáttal pufferolt fiziológiás konyhasóoldattal (PBS) készített oldatában szuszpendálunk és kétszer PBS-el mosunk; a sejtek ennél a kezelésnél a vizsgálandó vegyületet a sejthártyájukba kebelezik be), így 18 nap alatt nem jön létre tumornövekedés. A 19. napon az állatokba 10® natív Ehrlich Ascites tumorsejtet viszünk be intra4 peritoneálisan. Ekkor a következő hatások figyelhetők meg:

1. csoport: 8-10 állat a 80. napot túléli

2. csoport: 6-10 állat a 80. napot túléli

3. csoport: az állatok elpusztulnak 18 nap után, ahogy a kontroli-állatok (Vizsgálatok az „A” jelzésű vegyülettel).

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek ezenkívül csak kissé toxíkusak: 5-szöri íntraperitoneális alkalmazást is tünetmentesen viseltek ei láthatóan az egerek 100 mg/kg/nap dózis esetén öt egymást követő napon történő beadás esetén. Mivel az immunhatás fokozásához szükséges adagok nagyon kicsik, azért az új vegyületek terápiás tartománya nagyon széles. Kísérleteink során az „A”, „B”, „C”, „D” és „E” jelzésű vegyületeket vizsgáltuk.

A találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek a sejtimmunitást és különösen a humorális immunitást jelentős mértékben képesek növelni, mégpedig mind az antigénnel magával (adjuvánshatás szűkebb értelemben) elegyben, mind pedig időben és helyileg az antigéninjekciótól elkülönített bevitelnél (szisztémiás immunhatásnövelés).

A találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek adjuvánsokként oltóanyagokkal együtt az oítás sikerességének a javítására használhatók, ezenkívül arra is alkalmazhatók, hogy a humorális antitestek és/vagy a sejtimmunitás által a közvetített fertőzés elleni védelmet javítsák baktérium, vírusos vagy parazita kórokozókkal szemben.

Végül a találmány szerinti eljárással előállított új vegyületek alkalmasak különböző antigénekkel, mint adjuvánsokkal elegyben terápiás és diagnosztikai antiszérumok kísérleti és ipari előállításánál, valamint immunológiailag aktivált limfocitaszaporodás indukálásánál sejtátviteli eljárásokra.

Ezen túlmenően az új vegyületek egyidejű antigénbevitel nélkül is használhatók arra, hogy a már küszöbérték alá kerülő immunreakciókat segítsék embernél és állatnál egyaránt. A vegyületek eszerint különösen alkalmasak a test védekezőképességének fokozására, például krónikus és akut fertőzéseknél vagy szelektív (antigén-fajlagos) immunológiás károsodásoknál, valamint veleszületett, de örökölt, általános (azaz nem antigén-fajlagos) immunológiai hibaállapotoknál is, amelyek öregkorban, súlyos megbetegedések első időszakában és mindenek előtt ionizáló sugarakkal vagy immunszupresszív hatású hormonokkal való terápia után fellépnek. Az említett anyagok így előnyösen antibiotikumokkal, kemoterápiás szerekkel vagy más gyógyítóeljárásokkal kombinációban is alkalmazhatók annak érdekében, hogy immunológiai károsodások ellen hassanak. Végül a leírt anyagok fértőzéses megbetegedések általános megelőzésére is alkalmasak embernél és állatnál egyaránt.

A találmány elsősorban azokra az (I) általános képletű vegyületek, valamint fém- vagy ammóniumsói előállítási eljárására vonatkozik, amelyek képletében X karbonilcsoport, R₃ valamely 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport, R₃ hidrogénatom vagy metilcsoport, R₅ 1-3 szénatomos

188 861 alkilcsoport, és A_z (II) általános képletű csoport, ahol T jelentése = NH vagy - Ο —, Y valamely 2-3 szénatomos alkiléncsoport vagy (lile) általános képletű csoport, ahol Y, és Y₂ jelentése egymástól függetlenül egy-egy 1-3 szénatomos alkiléncsoport, Z 1,2-dihidroxi-etil- vagy 2-hidroxi-etil-csoport, amelyben a hidroxilcsoportoknak legalább egyike valamely, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 16-20 szénatomos alifás karbonsavval észterezve van és Aj aminocsoportot jelent.

Különösen kiemeljük a példákban leírt, találmány szerinti eljárással előállított muramil-peptideket.

Az (I) általános képletű muramil-peptidek önmagukban ismert módon állíthatók elő, például úgy, hogy

a) valamely (VII) általános képletű vegyületet ahol X, Ri és R₃ jelentése a fenti és R_e, R,_o és R,, hidrogénatomot vagy egy könnyen lehasitható védőcsoportot jelent - vagy ennek reakcióképes karbonsavszármazékát egy (VIII) általános képletű vegyülettel — ahol R₅, A, és A₂ jelentése a fenti — vagy ennek származékával kondenzálunk és a jelenlevő védöcsoporto(ka)t lehasítjuk.

A kondenzálást például oly módon végezzük, hogy a (VII) általános képletű savat aktivált formában a (VIII) általános képletű aminovegyülettel reagáltatjuk vagy a (VII) képletű savat olyan (VIII) képletű vegyülettel reagáltatjuk, amelynek az aminocsoportja aktivált formában van jelen. Az aktivált karboxilcsoport például egy savanhidrid, előnyösen vegyes savanhidrid, így például szénsav (rövidszénláncú) - alkil - észter, így szénsav-etilvagy -izobutil-észter, egy savazid, savamid, így imidazolid, vagy egy aktivált észter lehet. Aktivált észterekként a következők nevezhetők meg: ciano

- metil - észter, karboxi - metil - észter, p - nitrofenil

- tio - észter, p - nitrofenil - észtem 2,4,5 - triklór fenil - észter, pentaklór - fenil - észter, N - szukcininpid - észter, N - ftálimid - észter, 8 - kinolin - észter,

- hidroxi - 1,2 - dihidro - 1 - etoxi - karbonil kjinolin - észter, N - hidroxi - piperidin - észter vagy qlyan enolészterek, amelyeket N - etil - 5 - fenil izoxazolium - 3’ - szulfonáttal képezünk. Aktivált észtereket adott esetben karbodiimiddel is képezhetünk, N - hidroxi - szukcinimid vagy egy helyettesítetlen vagy például halogénatommal vagy metoxicsoporttai helyettesített 1 - hidroxi -benzotriazol,

- hidroxi - 4 - oxo - 3,4 - dihidro - benzo[d] -1,2,3

- triazin hozzáadásával.

Az aminocsoportot például egy foszfitamiddal való reakció útján aktiváljuk.

Az aktivált savakkal való reakciót alkalmazó módszerek közül az N - etil - 5 - fenil - izoxazolium

- 3’ - szulfonáttal (Woodward-reagens K) vagy a 2

- etoxi - 1,2 - dihidro - 1 - karboetoxi - kinolinnal vagy a karbodiimiddel dolgozó módszereket említjük meg.

A könnyen lehasitható védőcsoportok a peptidkémiából, illetve a cukorkémiából ismert csoportok. Karboxicsoportok számára különösen a tercier-butil-, benzil- vagy benzhidrilcsoportot, a hidroxicsoportokra pedig különösen az acilcsoportokat, például a rövidszénláncú alkanoilcsoportokat, így az acilcsoportot, az a roi (csoportokat, így a benzoilcsoportot és mindenek előtt a szénsav származékokból leszármaztatható csoportokat, így a benziloxi - karbonil - csoportot vagy a rövidszénláncú alkoxi - karbonil - csoportot, vagy az alkilcsoportot, különösen a terc-butilcsoportot, az adott esetben nitrocsoporttal, rövidszénláncú alkoxicsoporttal vagy halogénatommal helyettesített benzilcsoporíot, adott esetben a halogénatommal vagy rövidszénláncú alkoxicsoporttal, így metoxicsoporttal helyettesített trifenil - metil - csoportot vagy a tetrahidropiranolt vagy az adott esetben helyettesített alkilidéncsoportokat, amelyek az oxigénatomokat 4-es vagy 6-os helyzetben kapcsolják, kell megnevezni. Ilyen alkilidéncsoportok különösen a rövidszénláncú alkilidéncsoportok, elsősorban a menüdén-, izopropilidén- vagy a propiüdéncsoport vagy egy, adott esetben helyettesített, előnyösen p-helyzetben helyettesített benzilidéncsoport.

Ezeket a védőcsoportokat önmagában ismert módon -- így savas hidrolízissel — hasíthatjuk el, a benzil- vagy benzilidéncsoportokat hidrogenolítikusan is eltávolíthatjuk, például hidrogénnel, valamely nemesfémkatalizátor, így palládium- vagy platinakatalizátor jelenlétében.

Az alkalmazott kiindulási anyagok ismertek vagy önmagában ismert módon előállíthatok.

Az új vegyületeket úgy is előállíthatjuk, hogy

b) valamely (IX) általános képletű vegyületet — ahol X, R,, R₃ és R₅ jelentése a fenti és R₉, R,_o és R,i hidrogénatomot vagy könnyen lehasítható védőcsoportot jelent — vagy reakcióképes karbonsavszármazékát egy (X) általános képletű vegyülettel - ahol A, és A₂ jelentése a fenti - kondenzá-. lünk és a jelenlevő védőcsöporto(ka)t lehasítjuk.

A kondenzálást például úgy végezzük, hogy a (IX) általános képletű savat aktivált formában reagáltatjuk a (X) általános képletű aminovegyülettel, vagy a (IX) általános képletű savat olyan (X) általános képletű vegyülettel reagáltatjuk, amelynek az aminocsoportja aktiválva van. Az aktivált karboxicsoport például egy savanhidrid, előnyösen vegyes savanhidrid, egy savamid vagy aktivált észter lehet. Ilyen vegyületek ként a fent megnevezett savanhidrídek, amidok vagy észterek jönnek számításba. Az aminocsoportot például égy foszfitamiddal való reakció útján aktiváljuk.

A könnyen lehasítható védőcsoportok is megfelelnek a fent már megnevezett csoportoknak. Ezeket a csoportokat önmagában ismert módon hasíthatjuk le, így savas hidrolízissel, a benzil- és benzilidéncsoportokat hidrogenolitikusan is, példáui hidrogénnel valamely nemesfémkatalizátor, így palládium- vagy platinakatalizátor jelenlétében.

A kiindulási anyagokat önmagában ismert módon állíthatjuk elő. így például a megfelelő 3-as helyzetben helyettesítetlen cukrokat halogén - R₃ acetamido - R₄ - ecetsavval reagáltatjuk, vagy egy (VII) általános képletű vegyületet amino - R₅ ecetsawal, amelynek a karboxiesoportja védve van, az előzőekben megadott módon reagáltatunk és a védöcsoportokat lehasítjuk.

<

188 861

Egy más eljárásváltozat szerint az olyan (I) általános képletű vegyületeket, ahol a (II) általános képletű csoportban T jelentése = NH, úgy állítjuk elő, hogy

c) valamely (XI) általános képletü vegyületet — ahol X, R_n R₃, R_s és Aj jelentése a fenti, R₉, R_I0 és Rj, hidrogénatomot vagy könnyen lehasitható védőcsoportot jelent és a - COA° általános képletű csoport aktivált karbonsavcsoportot képvisel — egy (XII) általános képletű vegyülettel - ahol Y és Z jelentése a fenti — kondenzálunk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítiuk.

A — COA° aktivált karbonsavcsoport például egy savanhidrid, például szénsav - (rövidszénláncú)

- alkil - észterrel, így szénsav-etil-, vagy- izobutilészterrel képezett, egy savazid, savamid, így imidazolid, izooxazolid vagy valamely aktivált észter lehet. Aktivált észterekként különösen a következődet említjük meg: ciano - metil - észter, karboxi metil - észter, p - nitrofenil - tio - észter, metoxi etil - tio - észter, acetil - amino - etil - tio - észter, p - nitrofenil - észter, 2,4,5 - trikiór - fenil - észter, N - szukcinimid - észter, N - ftálimid - észter, 8 kinolin - észter, N - piperidin - észter. Aktív észteredet adott esetben egy karbodiimiddel, N - hidroxi szukcinimid hozzáadásával vagy egy helyettesítetlen vagy például halogénatommal, metil- vagy metoxicsoporttal helyettesített 1 - hidroxi - benzotriazollal vagy 3 - hidroxi - 4 - oxo - 3,4 - dihidro benzo[d] - 1,2,3 - triazinnal is kaphatunk.

Aktivált észterekként előnyben részesülnek az

N - hidroxi - szukcinimiddel vagy ennek C-szubsztitúciós termékeivel, így az N - hidroxi - metil - vagy

- dimetil - szukcinimiddel aktivált észterek, vagy karbodiimiddel így karbodiimiddel magával vagy 1 - etil -3-(3- dimetil - amino - propil) - karbodiimiddel való reakcióban kapott termékek.

Az ehhez alkalmazott kiindulási anyagok ismertek vagy önmagában ismert módon előállíthatók.

Amennyiben az új vegyűletekben a (II) általános Képletű csoportban T jelentése - O ~, akkor ezeket úgy is előállíthatjuk, hogy

d) valamely (Xla) általános képletű vegyületet ahol X, Rj, R₃, R_s és Aj jelentése a fenti, R₉, R_l0 és R,, hidrogénatomot vagy egy könnyen lehasíthaó védőcsoportot és Αθ hidroxilcsoportot jelent 3gy (Xlla) általános képletű vegyülettel - ahol Y és Z jelentése a fenti - észterezünk, emellett a (Xla) általános képletű sav vagy a (Xlla) általános képletű alkohol reakcióképes alakban van jelen, és az adott esetben jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehajtjuk.

A reakciót úgy végezzük, hogy a szabad savat az ilkohollal valamely vízlehasító szer, így egy karbodiimid, például diciklohexii-karbodiimid és egy amin, így piridin vagy dimetil - amino - piridin, trialkil-amin, például trimetil-amin jelenlétében észterezzük. A karbonsavat azonban sója - így nátrium- vagy káliumsója - alakjában is reagáltathatjuk az alkohol reakcióképes észterével, például egy erős szervetlen vagy szerves savval, így hidrogén-halogeniddel, például hidrogén-kloriddal, 6 bromiddal vagy jodiddal vagy egy szerves szulfonsavval, így p-toluolszulfonsawal vagy metán- vagy etánszulfonsawal alkotott észterrel.

Lehetőség van továbbá arra is, hogy az alkoholt adott esetben sóként, például nátrium- vagy káliumsóként, valamely aktivált karbonsavval reagált issük. Aktivált karbonsavak különösen az anhidridek, elsősorban a vegyes anhidridek, így valamely savazid vagy halogenid vagy egy aktivált észter, így a ciano - metil - észter, karboxi - metil - észter, p

- nitrofenil - tio - észter, p - nitrofenil - észter, 2,4,5

- trikiór - fenil - észter, pentaklór - fenil - észter, N szukcinimid - észter, N - ftálimid - észter, 8 - kinolinészter, 2 - hidroxi - 2 - dihidro - 1 - etoxi - karbonil

- kinolin - észter, N - piperidin - észter vagy az enolészterek, amelyek N - etil - 5 - fenil - izoxazolium - 3’ - szulfonáttal kaphatók. Aktivált észtereket kaphatunk adott esetben karbodiimiddel is, N hidroxi - szukcinimid hozzáadásával vagy helyettesi tetlen vagy például halogénatommal, metil - vagy metoxicsoporttal helyettesített 1 - hidroxi - benzotriazollal, 3 - hidroxi - 4 - oxo - 3,4 - dihidro benzo[d] - 1,2,3 - triazinnal is.

A könnyen lehasítható védőcsoportok a peptidkémiából, illetve a cukorkémiából ismert csoportok. Karboxicsoportokra különösen a terc-butil-, benzil- vagy bénzhidrilcsoportok és a hidroxicsoportok számára különösen az acilcsoportok, például a rövidszénláncú alkanoilcsoportok, így az acetilcsoport, az aroilcsoportok, így a benzoilcsoport és mindenek előtt a szénsavból levezethető csoportok, így a benziloxi - karbonil - csoport vagy a rövidszénláncú alkoxi - karbonil - csoport, vagy az alkil-, különösen a tere - butil - csoport, adott esetben nítrocsoporttal, rövidszénláncú alkoxicsoporttal vagy halogénatommal helyettesített benzilcsoport, adott esetben halogénatommal vagy rövidszénláncú alkoxicsoporttal, így metoxicsoporttal helyettesített trifenil-metil- vagy tetrahidropiranilcsoport vagy az adott esetben helyettesített alkilidéncsoportok, amelyek az oxigénatomokat 4es és 6-os helyzetben kötik, nevezhetők meg. Ilyen alkilidéncsoportok különösen a rövidszénláncú alkilidéncsoportok, elsősorban az etilidén-, izopropilidén- vagy propilidéncsoportok vagy egy adott esetben helyettesített, előnyösen p-heíyzetben helyettesített benzilidéncsoport.

Ezek a védőcsoportok önmagában ismert módon - így savas hidrolízissel - hasíthatok le, a benzil- vagy benzilidéncsoportok hidrogenolitikusan is, például hidrogénnel nemesfémkatalizátor, így palládium- vagy platinakatalizátor jelenlétében.

Az (I) általános képletü vegyületeket - ahol Y a (II) általános képletű csoportban a (lile) általános képletű csoportot jelenti, úgy is előállíthatjuk, hogy

e) az olyan (I) általános képletü vegyületek előállítására, amelyekben Y jelentése (lile) általános képletű csoport, ahol Y,, Y₂ és R„ jelentése a fenti, valamely (XIV) általános képletű vegyületet ahol X, Rj, R₃, R₅ és A, jelentése a fenti, és Aj jelentése (XV) általános képletű csoport, amelyben T és Υ, a fentiekben megadottakat jelenti és M_t karbonsavcsoportot vagy ennek aktivált származé-61

188 86!

kát képviseli — egy (XVÍ) általános képletű vegyülettel — ahol M₂ jelentése szabad aminocsoport vagy ennek aktivált származéka, és Y₂ és Z jelentése a fenti, emellett a Z szubsztituensben jelenlevő hidroxilcsoport(ok) adott esetben könnyen lehasítható védőcsoporttal védett(ek) — kondenzálunk és az adott esetben jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk.

A könnyen lehasítható védőcsoportok azok, amelyek a peptidkémiából illetve a cukorkémiából ismertek. Karboxicsoportok számára különösen a tere - butil - csoportot, a butilcsoportot, adott esetben halogénatommal vagy rövidszénláncú alkoxicsoporttal, így metoxicsoporttal helyettesített trifenil - metil - csoportot vagy a benzhidrilcsoportot, míg a hidroxiesoportok számára különösen az acílcsoportokat, például a rövidszénláncú alkanoilcsoportokat, így az acetilcsoportot, az aroilcsoportokat, így a benzoilcsoportot és mindenek előtt a szénsavból származtatható csoportokat, így a benziioxi - karbonil - csoportot vagy a rövidszénláncú alkoxi - karbonil - csoportot, vagy az alkilcsoportokat, különösen a tere - butil - csoportot, az adott esetben nitrocsoporttal, rövidszénláncú alkoxicsoporttal vagy halogénatommal helyettesített benzilcsoportot vagy a tetrahidropiranilcsoportot vagy az adott esetben helyettesített alkilidéncsoportokat, amelyek az oxigénatomokat 4-es vagy 6-os helyzetben kapcsolják, nevezzük meg. Ilyen alkílidéncsoportok különösen a rövidszénláncú alkilidéncsoportok, elsősorban az etilidén-, izopropilidén- vagy a propilidéncsoport vagy egy, adott esetben helyettesített, előnyösen p-helyzetben helyettesített benzilidéncsoport.

A védőcsoportokat önmagában ismert módon

- így savas hidrolízissel - hasíthatjuk le, a benzil

- vagy benzilidéncsoportot hidrogenolitikusan is, például hidrogénnel nemesfémkatalizátor, így palládium- vagy platinakatalizátor jelenlétében is eltávolíthatjuk.

Az alkalmazott kiindulási anyagok ismertek vagy önmagában ismert módon előállíthatok.

A kondenzálást például úgy végezzük, hogy a (XIV) általános képletnek megfelelő vegyületet aktivált karbonsav formában a (XVI) általános képletű aminovegyülettel reagáltatjuk vagy a (XIV) képletű savat olyan (XVI) képletű aminovegyülettel reagáltatjuk, amelynek az aminocsoportja aktivált formában van jelen. Az aktivált karboxilcsoport például egy savanhidrid, előnyösen vegyes savanhidrid, így például szénsav - rövidszénláncú - alkilészterrel, így szénsav-etil- vagy -izobutil-észterrel képezett, egy savazid, savamid, így imidazolid, izoxazolid vagy aktivált észter lehet. Aktivált észterekként különösen a következőket nevezzük meg: ciano - metil - észter, karboxi - metil - észter, p nitrofenil - tio - észter, p - nitrofenil - észter, 2,4,5

- triklór - fenil - észter, N - szukcinimid - észter, N ftálimid - észter, 8 - kinolin - észter, 2 - hidroxi - 1,2

- dihidro - 1 - etoxi - karbonil - kinolin - észter, N piperidin - észter vagy az olyan enolészterek, amelyek N - etil - 5 - fenil - izoxazolium - 3’ - szulfonáttal kaphatók. Aktivált észterek kaphatók adott esetben egy karbodiimiddel is, N-hidroxiszukcinimid hozzáadásával vagy valamely helyettesítetlen vagy például halogénatommal, metil- vagy metoxicsoporttal helyettesített 1 - hidroxi - benzotriazol1 al, 3 - hidroxi - 4 - oxo - 3,4 - dihidro - benzofd]

- 1,2,3 - triazinnal.

Az aminocsoport például foszfitamiddal való reakció útján aktiválható.

Az aktivált savakkal való reakciót alkalmazó módszerek közül különösen az N - etil - 5 - fenil izoxolium - 3’ - szulfonáttal (Woodward reagens K) vagy a 2 - etoxi - 1,2 - dihidro - 1 - etoxi - karbonil

- kinolinnal vagy karbodiimiddel dolgozó módszereket kell megemlíteni.

Egy további eljárásváltozat az (I) általános képletű új vegyületek előállítására abban áll, hogy

f) valamely (XX) általános képletű vegyületet — ahol X, R_n R₃, R_s és A, jelentése a fenti, R₉, R₁₀ és R,, jelentése könnyen lehasítható védőcsoport és Aj” szubsztituens jelentése — T- Y-OH általános képletű csoport, amelyben Y és T jelentése a fenti

- egy, a (XXI) általános képletű csoportot leadó vegyülettel - ahol M_s = jelentése elektronpár vagy oxocsoport és Z jelentése a fenti, emellett adott esetben az ezekben jelenlevő hidroxilcsoport(ok) könnyen lehasítható védőcsoporttal védett(ek) — reagáltatunk, és amennyiben M₅= elektronpárt képvisel, gyenge oxidálószerrel oxidálunk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk.

(XXI) általános képletű csoportot leadó vegyületként különösen a (XXII) általános képletű vegyületet említjük meg, ahol W, Z és M_s a fentiekben megadott jelentéssel rendelkezik, M_e egy könynyen lehasítható védőcsoport és M₇ adott esetben reakcióképes átalakított hidroxiesoport.

Könnyen lehasítható M_e védőcsoport különösen valamely rövidszénláncú alkilcsoport, így a metilvagy etilcsoport, rövidszéláncú alkenilcsoport, így az etenil- vagy az 1 - metil - propenil - csoport vagy a benzilcsoport.

Valamely, adott esetben reakcióképesen átalakított M₇ hidroxiesoport különösen a szabad hidroxicsoport, egy erős szervetlen vagy szerves savval észterezett hidroxiesoport, így valamely hidrogénhalogeniddel, rövidszénláncú alkánkarbonsawal vagy aril- vagy alkilán-szulfonsawal, például ptoluolszulfonsavval, metán- vagy etánszulfonsavval észterezett hidroxiesoport, de fenoxi- vagy rövidszénláncú alkoxiesoportot is jelenthet.

Ezeket a reakciókat előnyösen valamely savmegkötőszer, így piridin, tri - (rövidszénláncú) - alkil amin, például trietil-amin vagy trimetil-amin, imidazol, vagy valamely szervetlen bázis, így nátriumvagy kálium-hidroxid, vagy nátrium- vagy káliuma:koholát jelenlétében végezzük, mimellett oldószerként valamely protonmentes oldószert, így dimetil-szulfoxidot vagy acetonitrilt részesítünk előnyben.

Amennyiben a kapott vegyületekben Mj elektronpár, akkor például valamely persavval, így benzoepersavval vagy alkil-hidrogénperoxiddal oxidálunk.

Valamely M₆ védőcsoport lehasítását többnyire

188 861 a többi védőcsoport lehasításával együtt végezzük. Ezeket ismert módon, például hidrogenoliílkusan, így hidrogénnel valamely nemesfémkatalizátor, például palládium- vagy platinakatalizátor jelenlétében vagy savas hidrolízis útján távolíthatjuk el.

A kiindulási anyagok ismertek vagy önmagában ismert módon, például az előzőekben említett megfelelően módosított módszerek egyikével állíthatók elő.

Az (I) általános képletű vegyületeket továbbá úgy is előállíthatjuk, hogy

g) valamely (XXVI) általános képletű vegyűletet

- ahol X, Ri, R₃, R_s és Aj jelentése a fenti, R₉, R₁₀ és R_u könnyen lehasítható védőcsoportot jelent és AJ jelentése (XXVII) általános képletű csoport, amelyben T és Y jelentése a fenti, emellett a (XXVII) általános képletű csoportban jelenlevő szabad funkcionális csoportok a reakcióban résztvevő hidroxilcsoport(ok) kivételével adott esetben Könnyen lehasítható csoporttal védettek és Z’jelentése megfelel a Z fentiekben megadott jelentésének, azzal a megkötéssel, hogy a

-CH₂

I

Z’ alakban van jelen — egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 12-22 szénatomos alifás karbonsavval vagy ennek reakcióképes származékával észterezünk, vagy egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 10-22 szénatomos alifás alkohollal vagy ennek reakcióképes származékával éterezünk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk.

Az észterezést és az éterezést Önmagában ismert módon végezzük, így az említett savat és alkoholt valamely reakcióképes származéka formájában így anhidridje, előnyösen vegyes anhidridje, például hidrogén-halogeniddel képezett anhidridje, vagy észtere, ugyancsak például egy hídrogén-halogeniddel alkotott észtere - alakjában alkalmazzuk.

Az előzőeknek megfelelő védőcsoportok lehasítását szokásos módon végezzük, elsősorban hidrogenolitikusan vagy savas hidrolízissel.

A kiindulási anyagok ismertek vagy az előzőekben megadott, átalakított módszerekkel előállíthatók.

Az előzőekben leírt eljárásváltozatokat önmagában ismert módszerekkel végezzük, előnyösen hígí• őszerek vagy oldószerek jelenlétében vagy oldósze”ek nélkül, szükség esetén hűtés vagy melegítés közben, nagyobb nyomáson és/vagy közömbösgáz

- így nitrogéngáz — atmoszférában.

Emellett a molekulákban található valamennyi helyettesítő figyelembe vételével főképpen könnyen hidrolizálható O-acilcsoportok jelenléte esetén, különösen kímélő reakciókörülményeket, így rövid eakcióidőket, kis koncentrációjú gyenge savas vagy bázikus szereket, sztöchiometrikus mennyiségi arányokat, alkalmas katalizátorokat, oldószereket, hőmérséklet- és/vagy nyomásviszonyokat alkalmazunk.

A találmány kiterjed azon gyógyszerkészítmények előállítási eljárására is, amelyek az (I) általános képletű vegyületeket vagy ezek sóit tartalmazzák. Ezek a gyógyszerkészítmények melegvérííeknek enterálisan, így orálisan, nazálisán, vagy rektáhsan, valamint parenterálisan adhatók be; a gyógyszerkészítmények a hatóanyagot valamely gyógyszerészetileg alkalmas vivőanyaggal együtt tartalmazzák. A készítmények hatóanyagtartalma függ e melegvérű fajtától, a korától, az egyed állapotától, valamint az alkalmazás módjától.

A találmány szerinti új gyógyszerkészítmények körülbelül 10-95 % hatóanyagot előnyösen kb. 20-90 % hatóanyagot tartalmaznak. Ezek a gyógyszerkészítmények például adagolási egységformákban, így drazsék, tabletták, kapszulák, kúpok vagy ampullák alakjában képezhetők ki.

Az említett gyógyszerkészítmények önmagában ismert módon, például hagyományos keverő-, granuláló-, oldó- vagy liofilizáló eljárásokkal állíthatók elő. Az előzőekben említett alkalmazási módokon kívül a gyógyszerkészítmények főként orális beadásra, úgy állíthatók elő, hogy a hatóanyagot szilárd vivőanyagokkal kombináljuk, a kapott elegyet adott esetben granuláljuk és az elegyet, illetve granulátumot kívánt vagy szükséges esetben megfelelő segédanyagok hozzáadása után tablettákká ''agy drazsémagokká feldolgozzuk. Ennek során ezeket a műanyag hordozókba is beépíthetjük, amelyek a hatóanyagokat fokozatosan adják le ' agy diffundáltatják.

Alkalmas vivőanyagok különösen a töltőanyagok, így a cukor, például a laktóz, szacharóz, mannít vagy szorbit, cellulózkészítmények, és/vagy a kalcium-foszfátok, például a trikalcium-foszfát, továbbá a kötőanyagok, így a keményítőcsiriz, például kukorica-, búza-, rizs- vagy burgonyakeményítőből készült csiriz, zselatin, tragant, metilcellulóz, hidroxipropil-metilcelluíóz, nátriurnkarboxi-metilcellulóz és/vagy polivinilpirrolidon, és/vagy kívánt esetben szétesést elősegítő szerek, így a fent megadott keményítők, továbbá a karboximetilkeményítő, térhálósított polivinilpirrolidon, agar, alginsav vagy ennek valamely sója, így a nátriumalginát. Segédanyagokként elsősorban a folyást szabályozó- és kenőanyagok, például a kovasav, talkum, sztearinsav vagy ennek sója, így magnézium- vagy kalcium-sztearát, és/vagy polietilén-glikol jönnek számításba. A drazsémagokat alkalmas, adott esetben a gyomorsavnak ellenálló, bevonatokkal látjuk el, ennek során többek között olyan tömény cukoroldatokat alkalmazunk, amelyek adott esetben arabmézgát, talkumot, polivinil-pirrolidont, polietilénglikolt, és/vagy titán-dioxidot tartalmaznak, bevonhatjuk továbbá alkalmas szerves oldószerekben vagy oldószereiegyben oldott lakkoldatokkal, vagy gyomorsavnak ellenálló bevonatok előállításához megfelelő cellulózkészítményeket, így acetilcellulózftalát vagy hidroxipropilmetilcellulózftalát oldatokat alkalmazunk. A tablettákhoz vagy a drazsébevonatokhoz színezékeket vagy pigmenteket is adhatunk a különböző hatóanyagadagok azonosítására vagy jelölésére.

188 86!

A következő példák a találmány szerinti eljárás, bemutatására szolgálnak, de a találmány köre nem korlátozódik a példákban leírtakra. A hőmérsékletet Celsius-fokokban adjuk meg.

Az (I) általános képletnek megfelelő vegyületek nem jellemezhetők olvadáspontjukkal, de spektroszkópiai adatok, így NMR- és IR-spektrumok sem alkalmasak a pontos jellemzésre.

A finomjellemzéshez nem megfelelő az Rf-értékek megadása sem, a lipidrészek domináló természete miatt.

Mivel azonban a kiindulási anyagok szerkezete pontosan ismert (1. 25 55 500 számú NSZK-beli nyilvánosságrahozatali irat; a mindenkor alkalmazott foszfolipidkomponens kereskedelmi termék) és mivel a foszfolipid és a muramil-peptid kapcsolódása egyértelmű, ezáltal a végtermékben az építőelemek szekvenciája és a végtermék szerkezete is egyértelműen rögzített.

Az (1) általános képletű vegyületekben az oxigénatomon keresztül a foszforhoz kapcsolódó proton bázisokkal könnyen lehasítható. Az (I) általános képletű vegyületek rendszerint a szabad vegyületek és sóik elegyeként vannak jelen. így a következő 1-12. példában leírt (I) általános képletű muramilpeptidek körülbelül 40 — 55 %-ban sóként vannak jelen. Ezek a sók ugyancsak a találmány körébe tartoznak.

1. példa

1,4 mmól 1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 foszforií - etanol - amin és 2,5 mmól trietil-amin 25 ml 65 ; 25 ;4 arányú kloroform - metanol - víz eleggyel készített oldatához hozzácsepegtetjük 2 mmól N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutamin - N - hidroxi - szukcinimidészter 6,5 ml dimetilacetamiddai készített oldatát. Az oldatot 18 óra hosszat 20°C-on keverjük és utána csökkentett nyomáson körülbelül 15 ml-re betöményítjük, eközben emulzió képződik. Ezt az emulziót 200 ml vízzel hígítjuk és fagyasztva szárítjuk. A maradékot 30 ml vízben szuszpendáljuk és vízzel szemben extenzíven dializáljuk. A belső dializátumot, amely a kívánt terméket tartalmazza, fagyasztva szárítjuk. Az N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutamiqil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforií) - etil - amidot kromatográfiás úton egy Sephadex LH-20 oszlopon tisztítjuk. Az eluálást 25 : 15 ; 4 : 2 arányú kloroform - metanol - ecetsav - viz - eleggyel végezzük. A vegyület vékonyrétegkromatográfiában szilikagélen a következő Rfértékeket mutatja: 0,31 (kloroform - metanol - víz, 65 : 25 : 4), illetve 0,64 (kloroform - metanol - ecetsav - víz, 25 : 15 :4 : 2).

Az új vegyületet analitikailag azzal jellemezzük, hogy az építőelemeket, így az N - acetil - muraminsavat, palmitinsavat, foszfátot, L-alanint és a Dglutaminsavat, mennyiségileg meghatározzuk; az N - acetil - muraminsavat a Morgan - Elsőn reakció J. M. Ghuysen és mtsai. által módosított változata segítségével spektroszkópiás úton [„Methods in Enzymology” 8, 629 (1966)].

A foszfátot Lowry és munkatársai szerint menynyiségileg meghatározzuk [J. Bioi. Chem. 207, 1 (1954)].

A palmitinsavat és az aminosavakat teljes hidrolizátumban (6 n HC1, 24 óra 110 °C) gázkromatográfiásán, illetve aminosavanalizátor segítségével pentadekánsav illetve Norleucia mint belső szabvány alkalmazása mellett mennyiségileg meghatározzuk.

A talált moláris viszonyok a foszfátra vonatkoztatva a következők:

PO₄”’: N - acetil - muraminsav : L - alanin ; D glutaminsav : palmitinsav= 1 :0,92 :0,91 ; 0,95 : 2,18.

Az N - acetil - murami! - L - alanil - D - izoglutamin - N - hidroxi - szukcinimid - észtert, amelyet kiindulási anyagként alkalmazunk, például a következő módon állítjuk elő:

mmól N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglutamint, 2,2 mmól N - hidroxi - szukcinimidet és 2,2 mmól diciklohexil - karbodiimidet 6,5 ml dimetil - acetamidban oldunk és az oldatot 18 óra hosszat 20 °C-on keverjük. A kivált diciklohexil karbamidot elkülönítjük és az oldatot közvetlenül felhasználjuk a foszfolipiddel való kondenzáláshO2.

Az 1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 - foszforií - etanol - amin, amelyet kiindulási anyagként alkalmazunk, egy kereskedelmi forgalomban levő szintetikus készítmény.

2. példa

Az 1. példában leírt módszerhez hasonló módon állítunk elő N - acetil - demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn glicero - 3’ - foszforií) - etil - amint 1,2 - dipalmitoil -,sn - glicero - 3 - foszforií - etanol - aminból és N acetil - demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutamin - N - hidroxi - szukcinimid - észterből kiindulva. Az Rf értékek szilikagélen a következők; 0,29 (kloroform - metanol - víz, 65 ; 25 : 4), illetve 0,65 (kloroform - metanol - eceísav - víz, 25 :15:4:2) Analízis: L - alanin : D - glutaminsav : palmitinsav= 1 : 0,94 : 2,09.

3. példa.

Az 1. példában leírtakhoz hasonló módon kapunk N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - γ - oxi - metil - karbonil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforií) - etil - amidot 1,2

- dipalmitoil - sn - glicero - 3 - foszforií - etanol aminból és N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglulamin - γ - karboximetilészter - N - hidroxi

- szukcinimid - észterből kiindulva. IR (KBr): 3400, (O, NH), 2920, 2855; 1745 (C = O), 1665 (C=O), 1550 (C = O), 1470, 1380, 1240 (P = O), 1170, 1100, 1065, 720 cm^-1.

A vegyület vékonyrétegkromatogramban szili9

188 861 kagélen a következő Rf-értékeket mutatja: 0,28 (kloroform - metanol - víz, 65 - 25 - 4) illetve 0,68 (kloroform - metanol - ecetsav - víz, 25 : 15 : 4 : 2).

4. példa

Az 1. példában leírt módon kapunk N - acetil muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil

- 2 - (1 *,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

- etil - amidot 1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 foszforil - etanol - aminból és N - acetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - N hidroxi - szukcinimid - észterből. Az Rf-érték a vékonyrétegkromatogramban szilikagélen: 0,3 (kloroform - metanol - víz - rendszer, 65 : 25 : 4). IR (KBr): 3400, 2920, 2850, 1740 (C = O), 1660 ÍC = O), 1545 (C=O), 1465, 1455, 1380, 1240 _S'P = O), 1165, 1100, 1065, 960, 720 cm-'.

5, példa

Az 1. példában leírt módon állítunk elő N - acetil

- demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

- 2 - (l’,2’ - O - di - hexadecil - sn - glicerol - 3’ oszforil) - etil - amidot 1,2 - O - di - hexadecil - sn

- glicero - 3 - foszforil - etanol - aminból és N - acetil

- demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutamin

- N - hidroxi - szukcinimid - észterből kiindulva. Az Rf-érték a vékonyrétegkromatogramban szilikagélen: 0,43 (kícroform-metanol-víz, 65 : 25 : 4).

A kiindulási anyagként alkalmazott 1,2 - O dihexadecil - sn - glicero - 3 - foszforil - etanol amin egy kereskedelmi forgalomban levő szintetikus készítmény.

6. példa

Az 1. példában leírt módon állítunk elő N - acetil

- demetil - muramii - L - alanil - D izoglutaminil

- 2 - (3’ - palmitoil - rác - glicero - 1’ - foszforil) etil - amidot 3 - palmitoil - rác - glicero -1 - foszforil

- etanol - aminból és N - acetil - demetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutamin - N - hidroxi - szukcinimid · észterből. Az Rf-érték vékonyrétegkromatogramban szilikagélen: 0,47 (kloroform-metanol-víz, 65 : 25 : 4).

Analízis; L - alanin : D - glutaminsav : palmitinsav= I : 1,03 : 0,97.

A 3 - palmitoil - rác - glicero -1 - foszforil - etanol

- amin, amelyet kiindulási anyagként alkalmazunk, egy kereskedelmi forgalomban levő szintetikus készítmény.

7. példa

Az 1. példában leírt módon állítunk elő N - acetil

- demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

- 2 - (1’ - palmitoil - 2’ - oleoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amidot ΐ - palmitoil - 2 - oleoil sn - glicero - 3 - foszforil - etanol - aminból és N acetil - demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutamin - N - hidroxi - szukcinimid - észterből kiindulva. Az Rf-érték a vékonyrétegkromatogramban szilikagélen: 0,33 (kloroform - metanol - víz, 65 : 24 : 4).

Analízis: L - alanin : D - glutaminsav : palmitinsav : olajsav = 1 :0,95 : 1,04 : 1,07.

Az 1 - palmitoil - 2 - oleoil - sn - glicero - 3 ¹θ oszforil - etanol - amin, amelyet kiindulási anyagként használunk, egy kereskedelmi forgalomban evő szintetikus készítmény.

8. példa

Az 1. példában leírt módon állítunk elő N - acetil

- demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

2₀ - 2 - (Γ - palmitoil - propándiol - 3’ - foszforil) - etil

- amidot 1 - palmitoil - propándiol - 3 - foszforil etanol - aminból és N - acetil - demetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutamin - N - hidroxi - szukcinimid - észterből kiindulva.

Az Rf-érték vékonyrétegkromatogramban szilikagélen : 0,49 (kloroform - metanol - víz, 65 : 25 : 4). Analízis: L - alanin : glutaminsav : palmitinsav= 1 : 1,06 : 1,08.

Az 1 - palmitoil - propándiol - 3 - foszforil 30 etanol - amin, amelyet kiindulási anyagként alkalmazunk, egy kereskedelmi forgalomban levő szintetikus készítmény.

9. példa

Az előző példákban leírt módszerhez hasonló módon állítunk elő N - acetil - muramii - L - alanil

- D - izoglutaminil - glicero - foszfolipid - származé40 kokat N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminnak a következő foszfolipidekkel való kondenzálása útján: 1,2 - O - hexadeciíidén - sn - glicero

- 3 - foszforil - etanol - amin,

- palmitoil - 2 - oleoil - sn - glicero - 3 - foszforil 4$ - etanol - amin,

- palmitoil - rác - glicero - 1 - foszforil - etanol amin,

- palmitoil - propándiol - 3 - foszforil - etanol 10. példa

Az előző példákban leírt módszerhez hasonló módon állítunk elő N - acetil - muramii - L - alanil

- D - izoglutaminil - L - alanil - glicero - foszfolipid

- származékokat N - acetil - muramii - L - alanil D - izoglutaminil - L - alanínnak a következő foszfolipidekkel való kondenzálása útján:

1,2 - O - hexadeciíidén - sn - glicero - 3 - foszforil

- etanol - amin,

- palmitoil - 2 - oleoil - sn - glicero - 3 - foszforil

- etanol - amin,

-101

188 861

- palmitoil - rác - glicero - 1 - foszforil - etanol amin,

R_f=0,22 (kloroform : metanol: víz = 65 : 25 : 4)

- palmitoil - propándiol - 3 - foszforil - etanolamin.

11. példa

Az előző példákban leírt módszerhez hasonló módon állítunk elő N - acetil - demetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - glicero

- foszfolipid - származékokat N - acetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutaminil - L - alaninnak a következő foszfolipidekkel való kondenzálása útján:

1,2 - dipalmitoil - sn - glicero - 3 - foszforil - etanol

- amin,

R_f=0,39 (kloroform : metanol: víz 2 65 : 25 : 4)

1,2 - O - hexadecilidén - sn - glicero - 3 - foszforil

- etanol - amin,

- palmitoil - 2 - oleoii - sn - glicero - 3 - foszforil

- etanol - amin,

- palmitoil - rác - glicero - 1 - foszforil - etanol amin,

R_f=0,16 (kloroform : metanol : víz =65 : 25 : 4)

- palmitoil - propándiol - 3 - foszforil - etanol amin.

A kiindulási anyagokat a következő módon állítjuk elő: _

A) 6 g (10 mmól) α - benzil - N - acetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutamin és 1,75 ml (11 mmól) bróm - ecetsav - benzil - észter 100 ml dimetilformamiddal készített oldatához a nedvesség kizárása mellett és erőteljes keverés közben hozzáadunk 1,87 ml (11 mmól) N,N - diizopropil - etil

- amint, 50 ml dimetil-formamidban oldva, 1 1/4 óra leforgása alatt cseppenként. A reakcióelegyet éjszakán át keverjük szobahőmérsékleten, utána nagyvákuumban eltávolítjuk a dimetil-formamidot és a maradékhoz 100 ml vizet adunk. A kiváló olaj gyorsan megszilárdul és kikristályosodik. A szuszpenziót jeges fürdőben keverjük, majd leszívatjuk, a kapott kristályokat kevés vízzel mossuk és foszfor-pentoxid felett szárítjuk.

A kristályokat petroléterben ismét szuszpendáljuk, utána szűréssel elkülönítjük és 50 °C-on szárítjuk. Ily módon 6,2 g színtelen kristályokat kapunk, amelyeknek az olvadáspontja: 194-198°. Kitermelés az elméleti hozam 85 %-a. [a]2₀=97° ±1° (c= 1,3; metanol).

B) 6,5 g (8,85 mmól) α - benzil - N - acetil muramíl - L - alanil - D - izoglutamin - γ - benziloxi

- karbonil - metil - észtert 200 ml 1 : 1 arányú metanol - víz - elegyben 0,5 g Pd-szén(10 %-os)katalizátor jelenlétében 40 óra hosszat 40 °C-on hidrogénnel kezelünk.

A reakcióelegyet a katalizátortól szokásos módon szűréssel különítjük el, és a szűrletet szárazra pároljuk.

A keletkező olajat 75 ml, szek-butanollal telített vízben oldjuk, 6-szor 50-50 ml-nyi, vízzel telített szek-butanollal, 1-szer pedig ecetsavetilészterrel extraháljuk. A szerves fázisokat a fentiekben említett vízzel visszaextraháljuk és a tisztított vizes fázisokat szénnel (darco G 60) való kezelés után szárazra pároljuk. A maradékot vízzel kétszer elegyítjük, bepároljuk, végül liofilizáljuk. Ily módon 4,0 g fehér liofilizátumot kapunk. Kitermelés az elméleti hozam 82 %-a.

(ujj/⁰ + 34 ± Γ (c = 0,8; víz).

C) 6,1 g α - benzil - N - acetil - muramii - L - alanil

- D - izoglutamint és 3,5 g L - alanin - benzil - észter

- hidrokloridot 30 ml dimetil-formamidban oldunk és az oldatot 0°-ra lehűtjük, majd egymás után összekeverjük 1,4 ml trietil-aminnal, 1,1 g N - hidroxi - szukcinimiddel és végül 2,3 g diciklohexil karbodiimiddel.

A szuszpenziót 48 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük, utána szűrjük, a csapadékot kevés dimetil-formamiddal mossuk és a szűrletet nagyvákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml vízben 0°-on szuszpendáljuk, a csapadékot szűréssel elkülönítjük és szárítás után metanol - víz elegyből átkristályosítjuk.

Ily módon 5,5 g terméket kapunk. Kitermelés az elméleti hozam 74 %-a.

[a]p + 70 + Γ (c=0,5; metanol).

D) 3,4 g α - benzil - N - acetil - muramii - L alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - benzil észtert 100 ml 2 : 1 arányú metanol - víz - elegyben oldunk és Pd-szén(10 %-os)katalizátor jelenlétében 40 óra hosszat hidrogénnel kezeljük. A katalizátort leszívatással elkülönítjük, a szűrletet majdnem szárazra pároljuk és a maradékot 40 ml-nyi szek-butanollal telített vízben oldjuk, majd 40-40 ml, vízzel telített szek-butanollal háromszor extraháljuk. A szerves fázisnak 3 * 40 ml, fentiek szerinti vízzel való visszaextrahálása után az egyesített vizes kivonatokat bepároljuk és liofilizáljuk. Ily módon 2,2 g terméket kapunk színtelen.por alakjában. Kitermelés az elméleti hozam 80 %-a.

[α]ο+ 9± Γ (c= 1,1; víz).

12. példa

Hasonló módon állítjuk elő a következő vegyületeket is. (Az elemzési értékek megállapítása az 1. példában megadottakhoz hasonló módon történik).

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminoil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramíl - L - alanil - D - izoglutaminil - 2 - (Γ - palmitolil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

- etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutamintl - 2 - (1’ - palmitoil - propándiol - 3' - foszforil)

- etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutamínil - 2 - (l’,2’ - dihexadecil - rác - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid,

-111

188 861

Ν - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - 2 - (Γ - hexadecíl - rác - glicero - 3’ - foszforil)

- etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - analil - D - izoglutaminil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil - glicero - 2’ - foszforil)

- etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid, R_r=0,48 (kloroform : metanol :víz=65 :25 :4), IR (KBr): 3400 (OH, NH), 2925, 2855, 1740 (C = 0), 1655 (C = 0), 1545 (C = 0), 1470, 1460, 1380; 1240 (P = 0), 1170, 1100, 1070, 720, 700 cm”¹.

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izogluíaminii - L · alanil - 2 - (Γ - palmitoil sn - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil - propándiol - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2* - dihexadecil - rác - glicero 7,3’ - foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - hexadecíl - rác - glicero 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil - glicero - 2’

- foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramil - L - alanil - D - glutaminil

- L - alanil - 2 - (í’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - glutaminil

L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - glutaminil

- L - alanil - 2 - (1’ - palmitoil - propándiol - 3’ foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - glutaminil

- L - alanil - 2 - (Γ,2’ - dihexadecil - rác - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - glutaminil

- L - alanti - 2 - (1' - hexadecíl - rác - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - muramii - L - alanil - D - glutaminil

- L - alanil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil - glicero - 2’ foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetilmuramil - L - szeril - D izoglutamini! - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetilmuramil - L - szeril - D izoglutaminil - 2 - (Γ - palmitoil - sn - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - szeril - D izoglutaminil - 2 - (Γ - palmitoil - propándiol - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - szeril - D izoglutaminil - 2 - (1 ’,2’ - dihexadecil - rác - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - szeril - D izoglutaminil - 2 - (1*> hexadecíl - rác - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - szeril - D 12 izoglutaminil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil - glicero - 2’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - szeril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2* - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetilmuramil - L - szeril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil - sn

- glicero - 3’ - etil - amid, .

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dihexadecil rác - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - hexadecíl - rác

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ,3’ - dipalmitoil glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid, .

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (1’ - palmitoil - propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dihexadecil - rác

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - hexadecíl - rác glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - szeril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - 2 - (1 ’,2’ - dipalmitoil - sn

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - 2 - (Γ - palmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - 2 - (Γ - palmitoil - propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - 2 - (l’,2’ - dihexadecil - rác

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - 2 - (Γ - hexadecíl - rác glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ,2’ -. dipalmitoil - szin - glicero - 3’ - foszforil) - etil amid,

N - acetil - demetil - muramil - L - α - aminobutiril - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (1’ - palmitoil

- sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

-121

188 861

Ν - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - izoglutamínil - L - alaníl - 2 - (Γ - palmitoil

- propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - izoglutamínil - L - alanil - 2 - (Γ,2’ - 5 dihexadecil - rác - glicero - 3’ - foszforil) - etil amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - a - aminoburiril - D - izoglutamínil - L - alanil - 2 - (1’ - hexadecil

- rác - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid, ¹⁰

N - acetil - demetil - muramii -1. - a - aminobutiril - D - izoglutamínil - L - alanil - 2 - (Γ,2* dipalmitoil - glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil ¹⁵

- sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil

- sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid, _2Q

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - glutaminil - L - alanil - 2 - (1’ - palmitoil

- propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - glutaminil - L - alaníl - 2 - (Γ,2’ - dihexade- 25 cil - rác - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - glutaminil - L - alanil - 2 - (1’ - hexadecil

- rác - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobuti- 30 ril - D - glutaminil - L - alanil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil

- glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid, 35

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izoglutamínil - 2 - (Γ - palmitoil - sn - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - a - aminobutiril - D izoglutaminil - 2 - (1’ - palmitoil - 3’ - foszforil) - ⁴⁰ etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - 2 - (l’,2’ - dihexadecil - rác - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - ⁴⁵ izoglutaminil - 2 - (Γ - hexadecil - rác - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izogiutannnil - 2 - (l’,3’ - dipalmitoil - glicero - 2’ __η

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramíl - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid, R_r= 0,32 (kloroform ; metanol ; víz = 65 : 25 ; 4) 55 [n]o=+9° (metilén - klorid : etanol = 1 .1, c = 0,415,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid, θθ

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D 65 izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dihexadecil rác - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - hexadecil - rác

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramíl - L - α - aminobutiril - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ,3’ - dipalmitoil glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - a - aminobutiril -D glutaminil - L - alanil - 2 - (1/,2⁵ - dipalmitoil - sn

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - palmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid, _

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (1’ - palmitoil - propándiol - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ.2’ - dihexadecil - rác

- glicero - 3’ - foszforil - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ - hexadecil - rác glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D glutaminil - L - alanil - 2 - (Γ,3* - dipalmitoil glicero - 2’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - alanil - D glutaminil - α - glicinamid - γ - 2 - (Γ,2⁵ - dipalmitoil

- sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - alanil - D glutamil - a - glicin - amid - α - L - alanil - 2 - (l’,2’

- dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - alanil - D glutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2⁵ - dipalmitoil - sn

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - alanil - D glutaminil - 2 - (l’,2⁵ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - szeril - D glutaminil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - demetil - muramii - L - α - aminobutiril - D - glutaminil - 2 - (Γ,2* - dipalmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - α - aminobutiril - D glutaminil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’

- foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - valil - D - izoglutaminil

- 2 (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

- et 1 - amid,

N - acetil - muramii - L - valil - D - izoglutaminil

- L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - propionil - normuramil - L - alanil - D izoglutaminil - 2 - (l’,2⁵ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - propionil - normuramil - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2⁵ - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) etil - amid,

R_f=0,16 (kloroform : metanol ; víz=65 : 25 : 4),

N - acetil - muramii - L - pirolil - D - izoglutami13

-13188 861 nil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - pirolil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - normuramil - L - a - aminobutiril

- D - izoglutaminil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - benzoil - normuramil - L - a - aminobutiril

- D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - treonil - D - izoglutaminil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid,

N - acetil - muramii - L - treonil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid.

13. példa

1,5 mmól N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanin - N - hidroxi - szukcinimid

- észter 5 ml dimetil-acetamiddal készített oldatát szobahőmérsékleten cseppenként adjuk 0,692 g (l mmól) 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid és 3,5 mmól N-etil-morfolin 25 ml, 65 : 25 : 4 arányú, kloroform - metanol - víz

- eleggyel készített oldatához. Szobahőmérsékleten (körülbelül 22 °C-on) 8 órán keresztül végzett keverés után a reakció befejeződött, ekkor a reakcióelegyhez 130 ml vizet adunk.

A szerves oldószerek csökkentett nyomáson végzett eltávolítása után a kapott vizes oldatot, amely még kevés metanolt is tartalmazhat, teflonból készült Millipore-szűrőn (5 pm) átszűrjük. A kevert szűrletet Amicon ultraszűrő cellában Amicon YM 10 membránon (gyártó: Amico Corporation, Danvers, Massachusetts, USA, a membrán poliszacharid, amelynek kizárási határa 10 000 Dalton molekulasúlynál van) keresztül dializáljuk, egymás után 400 ml vízzel, 200 ml vizes 0,1 mólos nátrium foszfát - pufier - 0,1 mólos nátrium - kiorid - oldattal (pH = 7) és 800 ml vízzel szemben, dializáló szűrés keretében. A belső dializátumot 0,45 pm-os pórusnagyságú Millipore-szűrőn szűrjük, majd a terméket fagyasztva szárítjuk. N - acetil - muramii

- L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’

- dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil amid. 3 H₂O-t kapunk, amely főleg vagy teljes egészében nátriumsója alakjában van jelen.

A termék elemanalízisének adatai (az értékeket 100 % nátriumsóra vonatkoztatva, amely egy molekula sóra számítva 3 molekula vizet tartalmaz): C₅₉H₁₁₄N₆O₂₂P Na (1315,55)

C% H% számított: 53,59 8,75 talált: 53,89 8,63

N%	P%	Na%
számított: 6,40	2,36	1,75
talált: 6,40	2,22	1,58
Rf=0,45 (acetonitril-víz=3 :	1)
Aminosavelemzés:
A glutaminsavhoz	(=D	viszonyítva

nin = 1,8 A norleucinhoz (= 1) mint belső standardhoz viszonyítva glutaminsav = 0,9 értéket kapunk. IR(KBr): 3400, 2920, 2850, 1740 (C = 0), 1660 (C = 0), 1545 (C = 0), 1465,1455,1380,1240 (P=0), 1165, 1100, 1065, 960, 720 cm-',

14. példa

A 13. példában leírtakkal analóg módon állíthatjuk elő a következő vegyületeket is:

a) N - Acetil - muramii - L - alanin - D - izoglutamin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 2,49 H₂O) C₅₆H_l03N₅O₁₈P Na · 2,49 H₂O (1233,3)

	C%	H%	N%
számítolt:	54,49	8,35	5,68 ·
talált:	54,63	8,25	5,87
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,51	1,86	3,63
talált:	2,40	1,59	3,63

b) N - Acetil -demetil - muramii - L - alanil - D izogiutamin - 2 - (1 ’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 2,8 H₂O) C₅₅H₁₀₁N₅O₁₈P Na 2,8 H₂O (1224,9)

	C%	H%	N%
számított:	53,88	8,25	5,71
talált:	53,67	8,16	5,93
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,53	1,88	4,11
talált:	2,40	1,71	4,11

c) N - Acetil - murami! - L - alanil - D - izoglutaminil - γ - oxi - metil - karbonil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid nátriumsó (· 3,1 H₂O)

C₅₈H₁₀₆N₅O₂₀P Na · 3,1 H₂O (1303.28)

számított: talált:	C% 53,40 53‘,21	H% 8,13 8,09	N% 5,37 5,18
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,38	1,76	4,28
talált:	2,21	1,58	4,28

-141

188 861

d) Ν - Acetil - demetíl - muramii - L - alanil - D izoglutamin - 2 - (3’ - palmitoil - rác - glicero - Γ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 3,2 H₂O) C,₉H₇₂N₅O₁₇P Na · 3,2 H₂O (994,!)

	C%	H%	N%
számított:	47,08	7,24	7,04
talált;	47,22	7,17	7,31
	P%	Na%	H2O%
számított:	3,12	2,31	5,79
talált:	3,01	2,14	5,79

e) N - Acetil - demetil - muramii - L - alanil - D izoglutamin - 2 - (Γ - palmitioil) - 2’ - oleil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó ( 2,9 H₂O),

C₅₇H₁₀₃N_sO₁₈P Na · 2,9 H₂O (1252,7)

C% H% P% számított; 54,60 8,22 2,47 talált: 54,81 8,32 2,38

Na% H₂O%N% számított: i,84—4,-17—5,59 talált: 1,69 4,17 5,31

f) N - Acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (3’ - palmitoil - rác - glicero - Γ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 3,1 H₂O) C„H₇₈N₆O₁₈P Na · 3,1 H₂O (1076,9)

	C%	H%	N%
számított:	47,92	7,24	7,80
talált:	47,71	7,81	7,55
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,88	2,14	5,18
talált:	2,71	2,01	5,18

g) N - Acetil - demetil - muramii - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 3 H₂O)

C₅₈H₁₀₆N_eO₁₉P Na · 3 H₂O (1301,55)

	C%	H%	N%
számított:	53,47	8,14	6,45
talált:	53,68	8,02	6,38
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,38	1,77	4,15
talált:	2,24	1,60	4,15

h) N - Acetil - demetil - mu'í’.mil - L - D izoglutaminil - L - alanin - 2 - (3’ - palmitoil - rác - glicero - Γ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 2,8 H₂O)

C₄₂H₇₆N₆O₁₈P Na · 2,8 H₂O (1057,5)

	C%	H%	N%
számított:	47,66	7,19	7,94
talalt:	47,48	7,09	7,80
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,93	2,17	4,77
talált:	2,71	2,01	4,77

i) N - Acetil - muramii - L - a - amino - butiril - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoi* - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid nátriumsó (· 3,93 H₂O)

C_MH_ll0N₆O₁₉P Na · 3,93 H₂O (1344,34)

	C%	H%	N%
számított:	53,56	8,18	6,25
talált:	53,74	8,23	6,04
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,31	1,71	5,26
talált:	2,18	1,54	5,26

j) N - benzoil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó ( 3,1 H₂O) (^Η,,θΝ^,,Ρ Na · 3,1 H₂O (1377,5)

	C%	H%	N%
számított:	55,75	7,99	6,10
talált:	55,61	7,88	5,95
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,25	1,67	4,05
talált:	2,04	1,49	4,05

k) N - propionil - normuramil - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó (· 3,5 H₂O)

C₅₉H_l08N₆O₁₉P Na· 3,5 H₂O (1322,5)

	C%	H%	N%
számított:	53,53	8,17	6,35
talált:	53,31	8,26	6,14
	P%	Na%	H2O%
számított:	2,34	1,74	4,76
talált:	2,15	1,55	4,76

15. példa

0,386 g (0,75 mmól) N - acetil - muramii - L alanil - D - izoglutamin. 1,2 H_?O-t és 0,172 g (1,5 mmól) N - hidroxi - szukcinimidet 3 ml vízmentes dirnetil-acetamidban oldunk és 0 °C-on 0,232 g (1,13 mmól) diciklohexil-karbodümiddel elegyit-15188 86^; jük. Ugyanezen a hőmérsékleten végzett 8 órás keverés után ( = előaktiválás) hozzáadjuk 0,382 g (0,5 mmól) L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid és 0,07 ml (0,5 mmól) trietil - amin 12 ml olyan oldószereleggyel készített oldatát, amely kloroform - metanol - víz 65 : 25 : 4 térfogatarányú elegye. Szobahőmérsékleten (körülbelül 22 °C-on végzett 24 órás keverés után a reakció befejeződött________

A reakcióelegyhez 60 ml etil-acetátot adunk, jégfürdőben végzett rövid keverés után az oldatlan részt leszűrjük és a szűrletet 65 ml vízzel elegyítjük. A könnyen illő komponenseknek vákuumban való elpárologtatása után visszamaradó vizes oldatot keverés közben Amicon ultraszűrő cellában Amicon YM 10 membránon keresztül dializáljuk, 200 ml vízzel, 100 ml 0,1 mólos nátrium - foszfát luffer — 0,1 mólos nátrium - klorid - oldattal 'pH = 7) és végül 425 ml vízzel szemben. A belső dializátumot Millipore szűrőn (0,45 μ) szűrjük és agyasztva szárítjuk.

A kapott N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanin - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó 3 mól vizet tartalmaz.

A vegyület ugyanazon fizikai azonosítási adatokkal rendelkezik, mint a 13. példa szerint előállított vegyület.

16. példa

a) 1 mmól 1 - α - benzil - N - acetil - 4,6 izopropilidén - muraminsav, 0,9 mmól L - alanil D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (1 ’,2’) - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil - etil - amidhoz 15 ml dimetil-formamidból, 10 ml tetrahidrofuránból és 2 ml piridinböl képezett keverékben oldva

1,2 mmól diciklohexil - karbodiimidet és 1,3 mól N - hidroxi - szukcinimidet adunk. Szobahőmérsékleten 24 óra múlva befejeződik a reakció. Ezután néhány csepp vizet adunk a reakciókeverékhez, a képződött diciklohexil - karbamidot leszívatjuk és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot kromatográfiásan tisztítjuk, Merckíéle Kieselgelen, kloroform és metanol7 : 3 arányú keverékének alkalmazásával. A kívánt végterméket tartalmazó frakciók vékonyréteg lemezen (Kieselgel, Merck) pozitív reagálnak a V. E. Vaskovsky és Ε, Y. Kostetsky szerinti foszfátreagenssel [(J. Lipid. Rés. 9, 396 (1968)] és pozitívan reagálnak 2n kénsavval is, melegítésre (a cukor barna színeződése). A kapott frakciókat bepároljuk, majd a védőcsoportok eltávolítására először 12 ml jégecetből és 8 ml vízből képezett elegyben 1 órán keresztül 50 °C-on tartjuk, majd szobahőmérsékleten 10 %os, szénre felvitt palládium alkalmazásával normál nyomáson hidrogénezzük. 20 óra múlva az α benzil - csoport lehasad; a katalizátort leszűrjük és a szürletet vákuumban szirupsűrűségűre bepároljuk. Az N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil 16 sn - glicero - 3’ - foszforil - etil - amid pirimidiniumsójának szirupszerű maradékát kapjuk, amit 150 ml vízben oldunk.

A vizes oldatot teflonból készült Milliporeszűrőn (pórusnagyság 5μ) szűrjük. A szűrletet egy kevert Amicon ultraszűrő cellában Amicon YM 10 membránon keresztül diaszűrési eljárással először vízzel, (400 ml) ezután 0,1 mólos nátrium-foszfát puflfer - 0,1 mólos nátrium - klorid - oldattal pH = 7 (200 ml) és végül vízzel (850 ml) szemben dializáljuk. A belső dializátum, ami az N - acetil muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil

- 2 - (1 ’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

- etil - amid - nátriumsót tartalmazza, Milliporeszürőn (pórusnagyság 0,45 pm) szűrjük és fagyasztva szárítjuk.

A kapott vegyület fizikai állandói megegyeznek a 13. példa szerint előállított termékével.

17. példa

1,245 g (2 mmól) N - acetil - 1 - α - O - benzil 4,6 - di - O - izopropilidén - muramii - L - alanil D - izoglutamint, 1,500 g (2 mmól) glikolsav - 2 (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil - etil

- amidot és 0,279 ml (2 mmól) trietil-amint 12 ml, dimetil-formamid és kloroform (3 : 1) térfogatarányú elegyében oldunk. 0,613 g (4 mmól) 1 - hidroxi

- benztriazol és 0,244 g (2 mmól) 4 - dimetil - amino

- piridin hozzáadása után 0,454 g (2,2 mmól) diciklohexil - karbodiimidet adunk hozzá, és 24 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. A kivált diciklohexil - karbamidot leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A védőcsoportok eltávolítására a maradékot 40 ml 80 %-os ecetsavval felvesszük, az oldatot először 1 órán keresztül 60 ’C-on tartjuk, majd szobahőmérsékleten 10 %-os, szénre felvitt palládium jelenlétében normál nyomáson hidrogénezzük. 24 óra után az α - benzil - csoportot lehasítottuk. A katalizátort leszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A képződött trietil-ammóniumsót kétszer desztillált vízzel felvesszük és szokásos módon, pufferolt nátrium - klorid - oldattal szemben pH = 7-nél, majd vízzel szemben végzett dialízissel nátriumsóvá alakítjuk át. A Millipore-szűrőn (pórusnagyság 0,45 pm) átszűrt cellatartalom fagyasztva szárítása után N - acetil - muramii - L alanil - D - izoglutaminil - γ - oximetilkarbonil - 2

- (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) etil - etilamidot kapunk nátriumsója alakjában, laza, poralakú termékként. A vegyület azonos a 14. c. példa szerint előállított vegyülettel.

18. példa

2,50 g (2,5 mmól) 1,4,6 - O - tribenzil - muramii

- L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (sn

- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amidot 20 ml, vízmentes piridin és metilén-klorid (4:1, térfogatarányú) elegyében oldjuk. Hozzáadunk 0,061 g (0,5 mmól) 4 - dimetil - amino - piridint (DMAP),

-161

188 861 majd nedvesség kizárása mellett 1,82 ml (6 mmól) palmitinsav-kloridot adunk hozzá, 5 ml metilénkloridban oldva, ennek során a hőmérsékletet 15 és 20 °C között tartjuk. Szobahőmérsékleten való 20 órás állás után a reakcióelegyet 2 ml metanollal elegyítjük és fél órás keverés után szárazra pároljuk. A maradékot kloroformmal felvesszük, a piridint és a DNAP-ot hideg, In hidrogén - klorid oldattal végzett extrahálással, a részben még jelenlevő palmitinsavat pedig híg kálium - hidrogén karbonát - oldattal végzett óvatos kezeléssel eltávolítjuk. A kloroformos oldatot nátrium-szulfáttal végzett szárítás után bepároljuk, két térfogatrész dimetil - formamiddal elegyítjük, majd a benzilcsoportokat 30 óra alatt palládiumozott szén (10 %os) katalizátor jelenlétében hidrogénezve lehasítjuk. A katalizátort leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot petroléterrel végzett többszörös digerálás után kétszer desztillált vízzel felvesszük (1-2 %-os oldat) és szokásos módon először pufferolt nátrium - klorid - oldattal szemben pH = 7-nél, majd vízzel szemben dializáljuk, és Millipore-szűrőn (0,45 μ) végzett szűrés után liofilizáijuk. A kapott N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglutamil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó azonos a 13. példa szerint előállított vegyülettel.

19. példa

0,693 g (1 mmól) 1,2 - dipalmitoil - sn - glicero

- 3 - foszforsav - dinátriumsóból, 1,332 g (2 mmól) N - acetil - Ια - O - benzil - 4,6 - O - izopropílidén

- muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil

- etanol - amidből és 0,908 g (3 mmól) 2,4,6 - triizopropil - benzol - szulfokloridból álló keveréket amelynek minden komponense nagymértékben szárított -, 25 ml vízmentes piridinben oldunk, és a reakciókeveréket nedvesség kizárása és keverés közben rövid ideig 35 — 40 °C-ra melegítjük. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten való 5 órás állás után 5 ml vízzel elegyítjük, majd további fél órás állás után szárazra pároljuk. Feldolgozás és a védőcsoportoknak a 17. példa szerinti eltávolítása után N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil- L- alanil - 2- (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

- 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsót kapunk, amely azonos a 13. példa szerint előállított vegyülettel.

20. példa

0,89 g (1 mmól) D - izoglutaminil - L - alanin 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

- etil - amid és 3,5 mmól N - etil - morfolin 25 ml, 65 : 25 :4 arányú kloroform - metanol - víz oldószereleggyel készített oldatához 1,5 mmól N - acetil

- muramii - L - alanin - N - hidroxi - szukcinimid

- észter 5 ml dimetil-acetamiddal készített oldatát csepegtetjük. Szobahőmérsékleten végzett 8 órás keverés után a reakció befejeződik. A reakcióelegyet 130 ml vízzel elegyítjük. A kloroformot és a metanol egy részét a csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A vizes oldatot teflonból készített Millipore-szűrő (pórusnagyság 5 pm) szűrjük. A szűrletet keverés közben egy Amicon ultraszűrő cellában diaszűrési eljárás keretében Amicon YM 10 membránon keresztül először vízzel, (400 ml) majd 0,1 mólos nátrium - foszfát - puffer 0,1 mólos nátrium - klorid - oldattal, pH = 7 (200 ml), és végül vízzel (850 ml) szemben dializáljuk. A belső dializátumot egy Millipore-szűrőn (pórusnagyság 0,45 pm) szűrjük és fagyasztva szárítjuk, így N acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L aíanin - 2 - (l’,2* - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid - nátriumsó - hidrátot kapunk, amely fizikai állandóit tekintve meg - egye zik a 13. példa szerint előállított vegyületével.

Claims (13)

1. Szabadalmi igénypontok

   1. Eljárás az (I) általános képletű muramil-peptidek - a képletben X jelentése karbonilcsoport,

   Rj jelentése rövidszénláncú alkilcsoport vagy fenilcsoport,

   R₃ jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,

   R₅ jelentése rövidszénláncú alkilcsoport,

   Aj jelentése aminocsoport és

   A₂ (II) általános képletű csoportot képvisel, ahol

   T jelentése HN= vagy -O~,

   V jelentése rövidszénláncú alkiléncsoport vagy (lile) általános képletü csoport, amelyben Y, és Y₂ egymástól függetlenül rövidszénláncú alkiléncsoportot képvisel, mimellett Y₃ és Y₂ együtt több mint 2 szénatomot tartalmaz, és

   Z jelentése olyan 1,2 - dihidroxi - etil - vagy 2 hidroxi - etil - csoport, amelyekben legalább az egyik hidroxilcsoport egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 12-22 szénatomos alifás karbonsavval észterezett vagy egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 10-22 szénatomos alifás alkohollal éterezett és ezek fém- vagy ammóniumsóí előállítására, azzal jellemezve, hogy

   a) valamely (VII) általános képletű vegyületet — , ahol X, R, és R₃ jelentése a fenti és R₉, R_I0 és R_n hidrogénatomot vagy egy könnyen lehasitható védőcsoportot jelent — vagy ennek reakcióképes karbonsavszármazékát egy (VIII) általános képletü vegyülettel - ahol R₅, A, és A₂ jelentése a fenti - vagy ennek származékával kondenzálunk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   b) valamely (IX) általános képletű vegyületet — ahol X, Rí, R₃ és R₅ jelentése a fenti és R₉, R₁₀ és R,, hidrogénatomot vagy könnyen lehasítható védőcsoportot jelent — vagy reakcióképes karbonsavszármazékát egy (X) általános képletű vegyülettel — ahol A, és A₂ jelentése a fenti — kondenzálunk és jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   -171

   188 86!

   c) valamely (XI) általános képletű vegyületet ahol Y, Rj, R₃, R₅ és Aj jelentése a fenti, R₉, R₁₀ és R,, hidrogénatomot vagy könnyen lehasítható védőcsoportot jelent és a — COA° általános képletű csoport aktivált karbonsavcsoportot képvisel egy (XII) általános képletű vegyülettel — ahol Y és Z jelentése a fenti — kondenzálunk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   d) valamely (Xla) általános képletű vegyületet ahol X, R„ R₃, R_s és Aj jelentése a fenti, R₉, R_J0 és Rj; hidrogénatomot vagy egy könnyen lehasítható védőcsoporlot és A₂ hidroxilcsoportot jelent egy (Xlla) általános képletű vegyülettel - ahol Y és Z jelentése a fenti - észterezünk, emellett a (Xla) általános képletű sav vagy a (Xlla) általános képletű alkohol reakcióképes alakban van jelen, és az adott esetben jelenlevő védöcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   e) az olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, amelyekben Y jelentése (lile) általános képletű csoport ahol Y,, Y₂ jelentése a fenti, valamely (XIV) általános képletű vegyületet - ahol X, Rj, R₃, R_s és Aj jelentése a fenti, és A₂ jelentése (XV) általános képletű csoport, amelyben T és Y, a fentiekben megadottakat jelenti és M, karboxilcsoportot vagy ennek aktivált származékát képviseli - egy (XVI) általános képletű vegyülettel ahol M₂ jelentése szabad aminocsoport vagy ennek aktivált származéka és Y₂ és Z jelentése a fenti, emellett a Z szubsztituensben jelenlevő hidroxilcsoport(ok) adott esetben könnyen lehasítható védőcsoporttal védett(ek) — kondenzálunk és az adott esetben jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   f) valamely (XX) általános képletű vegyületet — ahol X, Rj, R₃, R_s és Aj jelentése a fenti, R₉, R_l0 és R,, jelentése könnyen lehasítható védőcsoport és A₂”’ szubsztituens jelentése - T - Y - OH általános képletű csoport, amelyben Y és T jelentése a fenti - egy, a (XXI) általános képletű csoportot leadó vegyülettel - aholM₅= jelentése elektronpár vagy oxocsoport és Z jelentése a fenti, emellett adott esetben az ezekben jelenlevő hidroxilcsoport(ok) könnyen lehasítható védőcsoporttal védetlek) — reagáltatunk, és amennyiben M₅= elektronpárt képvisel, gyenge oxidálószerrel oxidálunk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   g) valamely (XXVI) általános képletű vegyületet - ahol X, Rj, R₃, Rj és Aj jelentése a fenti, R₉, R_l0 és R_tl könnyen lehasítható védőcsoportot jelent és A₂ jelentése (XXVII) általános képletű csoport, amelyben T és Y jelentése a fenti, emellett a (XXVII) általános képletű csoportban jelenlevő szabad funkcionális csoportok a reakcióban résztvevő hidroxilcsoport(ok) kivételével adott esetben könnyen lehasítható csoporttal védettek és Z’jelentése megfelel Z fentiekben megadott jelentésének, azzal a megkötéssel, hogy a

   -CH₂

   I

   Z’ csoportban legalább egy hidroxilcsoport szabad alakban van jelen — egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 12-22 szénatomos alifás karbonsavval vagy ennek reakcióképes származékával észterezünk, vagy egy, adott esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 10-22 szénatomos alifás alkohollal vagy ennek reakcióképes származékával éterezünk és a jelenlevő védőcsoporto(ka)t lehasítjuk, vagy

   h) valamely (I) általános képletű vegyületben, amelyben egy vagy több funkcionális csoport védőcsoporttal védett, ez(eke)t a védőcsoporto(ka)t lehasítjuk és kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületet fém- vagy ammóniumsójává alakítjuk át.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (I) általános képletű muramil-peptidek előállítására, amelyek képletében Y jelentése 2-3 szénatomos alkilént söpört és a többi helyettesítő jelentése az 1. igénypontban megadottakkal azonos, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (I) általános képletű muramil-peptidek vagy ezek fémvagy ammóniurosói előállítására, amelyek képletében X karbonilcsoport, R, valamely 1-3 szénatouos alkilcsoport vagy fenilcsoport,. R₃ hidrogénltom metil-csoport vagy R₅ 1-2 szénatomos alkilcsoport, A₂ (II) általános képletű csoport, ahol T jelentése = NH vagy - Ο -, Y valamely 2-3 szénatomos alkiléncsoport vagy (lile) általános képletű csoport, ahol Y, és Y₂ egymástól függetlenül egyegy 1-3 szénatomos alkiléncsoport, és Z egy, 1,2-dihidroxietil- vagy 2 - hidroxi - etil - csoport, amelyben a hidroxilcsoportok legalább egyike, egy adott* esetben egyszeresen vagy kétszeresen telítetlen, 1620 szénatomos alifás karbonsavval észterezett és A, jelentése aminocsoport, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
4. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, olyan (I) általános képletű muramil-peptidek vagy ezek fémvagy ammóniumsói előállítására, amelyek képletében X karbonilcsoport, Rj rövidszénláncú alkilcsoport, R₃ hidrogénatom vagy metil-csoport, R_s metil-, etilcsoport, Aj aminocsoport és A₂ (II) általános képletű csoport, ahol T jelentése — NH vagy

   - Ο -, Y egy (lile) általános képletű csoport, ahol Y, és Y₂ egymástól függetlenül rövidszénláncú alkiléncsoportot jelent és Z olyan 1,2 - dihidroxi - etil

   - csoportot jelent, amelyben mindkét hidroxilcsoport palmitinsavval, sztearinsawal vagy olajsawal észterezett, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
5. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - acetil muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil

   - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

   - etil - amid vagy fém- vagy ammóniumsója előállí-18188 I tására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
6. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az N - acetil - muramilsavat vagy ennek 5 aktivált savszármazékát L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

   - 3’ - foszforil) - etil - amiddal reagáltatjuk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
7. 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzaljellemez- 10 ve, hogy az N - acetil - muramii - L - alanint vagy ennek aktivált savszármazékát D - izoglutaminil L - alanil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’

   - foszforil) - etil - amiddal reagáltatjuk. ‘ (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
8. 8. Az 5. igénypont szerinti eljárás', azzal jellemezve, hogy az N - acetil - muramii - L - alanin - D izoglutamint vagy ennek aktivált savszármazékát L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’

   - foszforil) - etil - amiddal reagáltatjuk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
9. 9. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az N - acetil - muramii - L - alanil - D izoglutaminil - L - alanint vagy ennek aktivált sav- 25 származékát 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil) - etil - amiddal reagáltatjuk.

   (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
10. 10. Az 1. igénypont i) eljárása, azzal jellemezve, hogy olyan (I) általános képletű vegyületből, 30 amelyben X karbonilcsoport, R_l5 i<₃ és R₅ metilcsoport, R₂, R₄, R₆ és R₇ hidrogénatom, A! aminocsoport és A₂ jelentése ch₃ o I -11

    -NH- CH -C-NH-CH₂-CH₂ (L) képletű csoport, és ahol legalább egy hidroxilcsoport és/vagy a foszforsavcsoport védőcsoporltal védett, vagy egy ilyen vegyület fém- vagy ammóniumsójából a jelenlevő védőcsoportokat lehasítjuk.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
11. 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - acetil muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - 2 - (l’,2’

    - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.)
12. 12. Az 1.' igénypont szerinti eljárás N - acetil demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil)

    - etil - amid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

    ___ (Elsőbbsége: 1979. július 25.)

    18. Az 1 — 17. igénypont bármelyike szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy valamely (I) általános képletű vegyületben, ahol a cukorrész 1-es, 4-es és/vagy 6-os helyzetében a hidroxilcsoportok védőjellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.)

    14. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - acetil demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil 2 - (1’ - palmitoil - 2’ - oleil - sn - glicero - 3’ foszforil) - etil - amid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk. ' ’ -ί ^: + (Elsőbbsége: 1979. július 25.)

    15. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - acetil demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil 2 - (1’ - palmitoil - propándiol - 3’ - foszforil) - etil

    - amid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.)

    16. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - acetil muramii - L - a - aminobutiril - D - izoglutaminil

    - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil) - etil - amid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

    (Elsőbbsége: 1980. július 24.)

    17. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - propionil

    - demetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil

    - L - alanil - 2 - (Γ,2’ - dipalmitoil - sn - glicero 3’ - foszforil) - etil - amid előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási anyagokat alkalmazunk.

    (Elsőbbsége: 1980. július 24.)

    O

    II

    -Ο-P-O-CH,

    II

    OH OH-O —palmitoil

    I

    CH - 0 - palmitoil
13. 13. Az 1. igénypont szerinti eljárás, N - acetil muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - γ - oxi ¹ metil - karbonil - 2 - (1 ’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero

    - 3’ - foszforil) - jetii - amid előállítására, azzal csoportokkal védve vannak, ezeket a védőcsoportokat lehasítjuk.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.) * 19. Az 1 — 17. igénypont bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a védőcsoportok lehasítását savval való kezeléssel végezzük.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.) . 20. Az 1-17. igénypont bármelyike szerinti eljá’ rás, azzal jellemezve, hogy kiindulási vegyületként egy vagy több, olyan védett hidroxicsoporttal rendelkező vegyületet alkalmazunk, ahol a hidroxicsoport vagy -csoportok a - amino - aril - (rövidszénj láncú) - alkil - csoportokkal vagy acetálképző csoportokkal van vagy vannak védve.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.)

    21. Az 1-17. igénypont bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemez ve, hogy kiindulási vegyületként 5 egy vagy több, olyan védett hidroxicsoporttal ren19

    -191

    188 861 delkezö vegyületet alkalmazunk, ahol a hidroxicsoport vagy -csoportok adott esetben helyettesített : benzilcsoporttal van vagy vannak védve.

    | (Elsőbbsége: 1979. július 25.) í 22. Az 1. igénypont a) —e) és g) eljárásának,

    L valamint a 2-17. igénypont bármelyike szerinti ' eljárás, azzal jellemezve, hogy kiindulási vegyületj ként egy vagy több, olyan aktivált karboxicsoporttal rendelkező vegyületet alkalmazunk, ahol a karboxiesoport vagy -csoportok aktivált észterként van vagy vannak jelen.

    (Elsőbbsége: 1979. július 25.)_ 23. Á 22. igénypont szerinti eljárás, azzal jeíle5 mezve, hogy N - hidroxi - szukcinimid - észtert vagy karbodiimiddel N - hidroxi - szukcinimid hozzáadása mellett vagy 1 - hidroxi - benztriazollal való reakció útján kapott észtert alkalmazunk.