FI72733B - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt verkande glukosderivat samt mellanprodukter anvaenda vid foerfarandet. - Google Patents

Description

72733

Menetelmä farmakologisesti vaikuttavien glukoosi johdannaisten valmistamiseksi ja menetelmässä käytettävät välituotteet - Förfarande för framställning av farmakologiskt verkande glukosderivat samt mellanprodukter använda vid förfarandet 5 Keksinnön kohteena on menetelmä farmakologisesti vaikut tavien glukoosi johdannaisten valmistamiseksi sekä välituotteina käytetyt dipeptidijohdannaiset.

Keksinnön kohteena on siten menetelmä farmakologisesti vaikuttavien, kaavan I

CH-OR, I 2 6

•---O

ι/' \i • 0 »(H, OR.) (I), IV /1 R/° I / y\ 1/ / ---· o

*3—, I I II

l°K s « /

C-NH-CH-C-NH-CH-CH -CH -C

/ I I 2 2 \ 0 R» C R. _ (Q /\ 10 mukaisten glukoosi johdannaisten valmistamiseksi, jossa kaavassa Ri, R4 ja Rg tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä tai alempialkanoyyliä, R2 on alempialkyyli tai fenyyli, R3 on vety tai alempialkyyli, 15 Rg on alempialkyylitähde, jossa on oksikarbonyyli- tai mer-kaptokarbonyyliryhmä, joka on sitoutunut alifaattiseen hii-livetytähteeseen R0, joka voi olla katkaistu yhdellä tai kahdella iminokarbonyylillä ja jossa täytyy olla enemmän kuin 5 C-atomia, kun R]_, R4 ja Rg ovat vetyjä, ja 20 R9 ja Rio tarkoittavat toisistaan riippumatta mahdollisesti 2 72733 alempialkyylillä eetteroityä hydroksia tai aminoa tai R]_g tarkoittaa bentsyylioksia tai difenyylimetoksia, ja kaavan I mukaisten yhdisteiden, joissa on ainakin yksi suolaa muodostava ryhmä, suolojen valmistamiseksi.

5 EP-hakemusjulkaisussa 4512 esitetään muramyvlipeptidien estereitä, jotka kuitenkin poikkeavat rakenteeltaan tämän keksinnön mukaisista yhdisteistä siten, että yhdisteissä ei esiinny tähdettä R0, joka on osa tämän keksinnön mukaisen kaavan (I) substituentista Rg. Lisäksi tämän keksinnön mukai-10 nen tähde Ηχο eroaa viitejulkaisussa esitetystä vastaavasta tähteestä, so. ryhmän -(A)n-Z osalta kaavassa (I) viitejulkai-sun sivulla 7 tai vastaavasti vaatimuksessa 1. Lisäksi vaikka EP-hakemuksessa 4512, sivulla 6, riveillä 23-38, esitetään, että siinä kuvattujen yhdisteiden etu on niiden lisään-15 tyneessä anti-infektioaktiivisuudessa ei N-asetyyli-muramyy-li-L-alanyyli-D-isoglutamiinin v-butyyliesterillä (MDP-y-but) havaittu olevan mitään erityistä antiviraalista aktiivisuutta, kuten käy ilmi tähän hakemukseen liitetystä koeselostuk-sen II otteesta, sivulta 12 ja taulukosta 9. MDP-y-but on EP-20 hakemuksessa 4512, sivulla 15, esitetty edullisena yhdisteenä .

Artikkelissa Microbiology and Immunology, voi. 23, n:o 8, Uemiya, M. et ai. s. 821-823 esitetään N-asetyylimuramyy-lipeptideitä, joissa kuitenkin esiintyy aivan erityinen täh-25 de, joka on mykolihapon johdannainen ja sen rakenne poikkeaa siten huomattavasti tämän keksinnön mukaisen tähteen Rg rakenteesta .

Suomalaisessa patentissa 66 878 esitetään muramyylipep-tidijohdannaisia, jotka eroavat tämän keksinnön mukaisista 30 yhdisteistä tähteen Rg suhteen eikä viitejulkaisussa esitetä mitään spesifisiä yhdisteitä, jotka sisältäisivät tämän hakemuksen mukaisesti määritellyn tähteen Rg. FI-patentin mu-ramyylipeptidikomponenttia on kuvattu myös FI-patentissa 64 164, jonka mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita samassa tes-35 tissä annosalueella 100-300 mg/kg FI-patentin 64 164 s. 4, r. 7 alhaalta), kun taas tämän hakemuksen mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita jo annosalueella 0,5-5 mg/kg. Tähän seli-

II

3 72733 tykseen liitetty koeselostus I osoittaa, että keksinnön mukaisesti saatavilla yhdisteillä (B ja C) on ylivoimaisia ominaisuuksia verrattuna analogiseen yhdisteeseen (A), jossa ei ole tähdettä R0, samoin kuin verrattuna yhdisteeseen (D), 5 jossa ei myöskään ole tähdettä R0.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat olla puhtaina isomeereinä tai isomeeriseoksina. Esimerkiksi sokeriosan C-l asemassa voi olla a- tai P-konfiguraatio. Asymmetrisissä substituutioissa ovat konfiguraatiot C-R3-asemassa (D), C-R8-ase-10 massa (L), ja CH-C(=0)-Rg-asemassa (D).

Muramyyliyhdisteet sisältävät C-R3~asemassa (D)-konfiguraation. Muramiinihappo on 2-amino-2-deoksi-3-0-(l-karbok-sietyyli)-D-glukoosi. Normuramiinihappo on 2-amino-2-deoksi- 3-0-karboksimetyyli-D-glukoosi.

15 Tässä esityksessä sisältävät sanonnalla "alempi” merki tyt tähteet ja yhdisteet mieluimmin enintään 7, ensisijassa enintään 4 hiiliatomia. Substituoidut tähteet voivat sisältää yhden tai useanroan samanlaisen tai erilaisen substituen-tin. Tähteet, joiden yhteydessä ei ole mainittu atomien lu-20 kumäärää, eivät sisällä enempää kuin 90, erityisesti eivät enempää kuin 30 ja mieluimmin vähemmän kuin 20 C-atomia.

Alempialkanoyyli R]_, R4 tai Rg tarkoittaa esimerkiksi asetyyliä.

Mieluimmin tarkoittaa tähde R3 vetyä tai metyyliä.

25 Substituentissa Rg on alempialkyylitähde suoraketjuinen tai haarautunut. Alempialkyylitähde Rg sisältää substituent-

0 O

" M

tina oksikarbonyyli-(-OC-) tai merkaptokarbonyyli-(SC-)-ryhmän, jolloin liittymiskohtana kysymukseen tulevat sekä hap-30 pi- että rikkiatomi samoinkuin karbonyyliryhmän C-atomi. He-teroatomi liittyy mieluimmin alempialkyyliosaan, kun taas karbonyyliryhmän C-atomi on sitoutunut hiilivetytähteeseen. Tämä oksikarbonyyli- tai merkaptokarbonyyliryhmä on sitoutunut hiilivetytähteeseen R0, joka on pitkäketjuinen ja jossa 35 tulee olla useampi kuin 5 hiiliatomia, kun R3, R4 ja Rg tarkoittavat vetyä. Jos taas esimerkiksi R]_, R4 ja/tai Rg tarkoittavat alempialkanoyylitähdettä, esim. asetyylitähdettä, 4 72733 voi edellä mainittu hiilivetytähde sisältää myös vähemmän kuin 5 hiiliatomia.

Pitkäketjuinen, alifaattinen hiilivetytähde R0 sisältää esim. enintään 90, mieluimmin enintään 30 hiiliatomia. Se 5 voi olla haarautunut tai suora, tyydyttynyt tai tyydyttymä-tön ia on tällöin erityisesti alkyyli- tai alkenyylitähde. Tämä tähteet voivat myös olla yhden tai kahden iminokarbonyy-liryhmän katkaisemia. Ensimmäisen ja mahdollisesti esiintyvän toisen katkaisujäsenen välillä oleva alifaattinen tähde 10 on erityisesti suora tai haarautunut alkyleeni- tai alkeny-leenitähde, jossa on mieluimmin 1-15 hiiliatomia.

Tässä selityksessä voivat edellä mainitut yleiset määritelmät tarkoittaa seuraavaa:

Alkyyli tarkoittaa mm. alempialkyyliä, esim. metyyliä, 15 etyyliä, n-propyyliä, isopropyyliä, n-butyyliä, isobutyyliä tai tert.-butyyliä, myös n-pentyyliä, isopentyyliä, neopen-tyyliä, n-heksyyliä tai n-heptyyliä, tai myös korkeampaa al-kyyliä, kuten suoraketjuista tai haarautunutta oktyyliä, no-nyyliä, dekyyliä, undekyyliä, dodekyyliä, tridekyyliä, tet-20 radekyvliä, pentadekyyliä, heksadekyyliä, heptadekyyliä, no-nadekyyliä tai heneikosyyliä sekä triakontyyli-, tetrakon-tyyli-, pentakontyyli-, heksakontyyli-, heptakontyyli-, ok-takontyyli- tai nonakontyylisarjojen korkeampia alkyylitäh-teitä.

25 Alkenyyli on mm. alempialkenyyli, esim. allyyli tai met- allyyli, tai korkeampialkenyyli, esim. dekenyyli.

Kaavojen (I) ja (II) mukaisissa yhdisteissä suolaa muodostavat ryhmät ovat erityisesti mahdollisesti esiintyviä karboksyyliryhmiä. Kaavan (I) mukaiset yhdisteet, jotka si-30 sältävät tällaisia ryhmiä, voivat sen tähden olla suolojen muodossa, erityisesti farmaseuttisesti käyttökelpoisten suolojen, kuten metalli-, erityisesti alkali- tai maa-alkalime-talli-, esim. natrium-, kalium-, kalsium- tai magnesiumsuo-lojen tai ammoniumsuolojen, esim. ammoniakin tai orgaanisten 35 amiinien, kuten alempialkyyliamiinin, esim. trietyyliamiinin kanssa saatujen suolojen muodossa. Kaavojen (I) ja (II) mukaiset yhdisteet, jotka sisältävät emäksisen ryhmän, esim.

5 72733 aminoryhmän, voivat muodostaa happoadditiosuoloja.

Erikoisesti keksintö koskee menetelmää kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jossa kaavassa R]_, R4 ja Rö tarkoittavat vetyä, R2 tarkoittaa alempialkyyliä, joka 5 sisältää enintään 4 hiiliatomia, tai fenyyliä, R3 tarkoittaa vetyä tai alempialkyyliä, joka sisältää ensintään 4 hiiliatomia, erityisesti metyyliä, Rg tarkoittaa alempialkyylitäh-dettä, joka sisältää 1-4 hiiliatomia, jossa on substituent-tina oksikarbonyyli- tai merkaptokarbonyyliryhmä, joka puo-10 lestaan on sitoutunut alkyyli- tai alkenyylitähteeseen R0, joka sisältää useamman kuin 10 ja enintään 50 hiiliatomia, jolloin tällaiset tähteet voivat myös olla 1 tai 2 iminokar-bonyyliryhmän katkaisemia, R9 tarkoittaa aminoa ja R^q tarkoittaa hydroksia, ja tällaisten yhdisteiden suolojen, eri-15 tyisesti farmaseuttisesti käyttökelpoisten suolojen valmistamiseksi .

Keksintö koskee aivan ensisijassa menetelmää esimerkeissä esitettyjen yhdisteiden valmistamiseksi.

Keksintö koskee myös kaavan (I) mukaisten pyranoosijoh-20 dannaisten valmistuksessa käytettäviä lähtöaineita tai välituotteina saatuja peptidejä, joiden kaava (II) on

Il (o) J* H,N-CH-C-NH-CU-CH,-CH,-(r (II) R \ ^0 U) <f\ jossa kaavassa Rg on alempialkyylitähde, jossa on oksikarbonyyli- tai merkaptokarbonyyliryhmä, joka on sitoutunut ali-faattiseen hiilivetytähteeseen R0, jossa on enemmän kuin 5 25 C-atomia ja joka voi olla katkaistu yhdellä tai kahdella imi-nokarbonyylillä, ja Rg ja R^q tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyylillä eetteröityä hydroksia tai aminoa tai R^o tarkoittaa bentsyylioksia tai difenyylimetoksia, ja niiden suoloja.

10 Kaavan (T) mukaiset uudet yhdisteet voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla. Ne valmistetaan esim. siten, et- 72733 tä kaavan Ia mukaisesta yhdisteestä, CH-OR,· I 3 6 ι/' \l .

• 0 *(H, ORj ) (Ie) R» 8° / / 4 A 1/ / ·--· o

a3-t I I II

f[A NH-C-R.

\ ω! (o) ί

C-NH-CR-C-NH-CB-CB -CH -C

//le I 2 3 \ .

° R c R. * //\ . 10 0 *9 jossa kaavassa R].a, R4a ja Rga tarkoittavat toisistaan riippumatta samaa kuin R]_, R4 ja vastaavasti Rg edellä, tai ne 5 tarkoittavat hydroksisuojaryhmää, R2/ R3 ja Rs tarkoittavat samaa kuin edellä ja ryhmät -CO-Rga ja -CO-Rioa tarkoittavat samaa kuin tähde -CO-R9 ja vastaavasti tähde -CO-R^o edellä tai ne tarkoittavat karboksyylisuojaryhmällä suojattuja kar-boksiryhmiä, jolloin vähintään yhden tähteistä R^a, R4a, R6ar 10 -CO-Rga ja -CO-R]_oa täytyy tarkoittaa hydroksisuo jaryhmää tai vastaavasti suojattua karboksia, lohkaistaan ne hydrok-si- tai karboksyylisuojaryhmät, jotka eivät esiinny halutussa kaavan I mukaisessa lopputuotteessa.

Tällaisia suojaryhmiä sekä niiden poislohkaisua on ku-15 vattu esimerkiksi julkaisussa "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York, 1973, myös julkaisussa "The Peptides", voi. I, Schröder and Liibke, Academic Press, London, New York, 1965, sekä julkaisussa "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4. painos, nide 15/1, 20 Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974.

Niinpä ovat karboksyyliryhmät, kuten karboksyyliryhmä 7 72733 o 11 -C-Rio tavallisesti suojattu esteröidyssä muodossa, jolloin tällaiset esteriryhmittymät ovat lievissä olosuhteissa helposti poislohkaistavissa. Tällä tavalla suojatut karboksyyli-ryhmät sisältävät esteröivinä ryhminä ensisijassa 1-asemassa 5 haarautuneita tai 1- tai 2-asemassa sopivasti substituoituja alempialkyyliryhmiä. Mieluimmin esteröidyssä muodossa olevat karboksyyliryhmät ovat mm. tert,-alempialkoksikarbonyylejä, esim. tert.-butyylioksikarbonyyli, aryylimetoksikarbonyyle-jä, jotka sisältävät yhden tai kaksi aryylitähdettä, jolloin 10 nämä tarkoittavat mahdollisesti esim. alempialkyylillä, kuten tert.-alempialkyylillä, hydroksilla, halogeenilla, esim. kloorilla ja/tai nitrolla mono- tai polysubstituoituja fenyy-litähteitä, kuten mahdollisesti esim. jo edellä mainittuja, substituoituja bentsyylioksikarbonyylejä, esim. 4-nitro-bent-15 syylioksikarbonyyli tai 4-metoksi-bentsyylioksikarbonyyli tai mahdollisesti esim. jo edellä mainittuja substituoituja difenyylimetoksikarbonyylejä, esim. di fenyylimetoksikarbo-nyyli tai di-(4-metoksifenyyli)-metoksikarbonyyli, 1-alempi-alkoksialempialkoksikarbonyylejä, kuten metoksimetoksikarbo-20 nyyli, 1-metoksietoksikarbonyyli tai 1-etoksimeto1-. ;· ·rbo-nyyli, 1-alempialkyylitioalempialkoksikarbonyylejä, kuten 1-metyylitiometoksikarbonyyli tai 1-etyylitioetoksikarbonyy-li, aroyylimetoksikarbonyylejä, joissa aroyyliryhmä tarkoittaa mahdollisesti esim. halogeenilla, kuten bromilla substi-25 tuoitua bentsoyyliä, esim. fenasyylioksikarbonyyli, 2-halo- geenialempialkoksikarbonyylejä, esim. 2,2,2-trikloorietoksi-karbonyyli, 2-bromietoksikarbonyyli tai 2-jodietoksikarbonyy-li tai 2-(trisubstituoituja silyyli )-etoksikarbonyyle jä , joissa substituentit tarkoittavat toisistaan riippumatta kukin 30 mahdollisesti substituoitua, esim. alempialkyylillä, alempi-alkoksilla, aryylillä, halogeenilla ja/tai nitrolla substi-tuoitua alifaattista, aralifaattista, sykloalifaattista tai aromaatista hiilivetytähdettä, joka sisältää enintään 15 hiiliatomia, kuten vastaavia, mahdollisesti substituoituja alem-35 pialkyylejä, fenyylialempialkyylejä, sykloalkyylejä, tai fe-nyylejä, esim. 2-trialempialkyylisilyylietoksikarbonyylejä, 8 72733 kuten 2-trimetyylisilyylietoksikarbonyyli tai 2-(di-n-butyy-li-metyyli-silyyli)-etoksikarbonyyli, tai 2-triaryylisilyy-lietoksikarbonyylejä, kuten 2-trifenyylisilyylietoksikarbo-nyyii.

5 Edelleen esteröidyssä muodossa olevat suojatut karbok- syyliryhmät ovat vastaavia silyvlioksikarbonyyli-, erityisesti orgaanisia silyylioksikarbonyyliryhmiä, myös vastaavia stannyvlioksikarbonyyliryhmiä. Näissä sisältää pii- tai tina-atomi mieluimmin alempialkyylin, erityisesti metyylin, myös 10 alempialkoksin, esim. metoksin ja/tai halogeenin, esim. kloorin, substituenttina. Sopivia silyyli- tai stannyylisuojaryh-miä ovat ensisijassa trialempialkyylisilyylit, erityisesti trimetyylisilyyli , myös dimetyyli-tert. -butyyli-silyyli , alem-pialkoksi-alempialkyyli-halogeeni-silyylit, esim. metoksi-15 metyyli-kloori-silyyli tai dialempialkyyli-halogeeni-silyy-lit, esim. dimetyyli-kloori-silyyli, tai vastaavasti substi-tuoidut stannyyliyhdisteet, esim. tri-n-butyyli-stannyyli.

Mieluimmin suojatut karboksyyliryhmät ovat tert.-alem-pialkoksikarbonyylejä, kuten tert.-butyylioksikarbonyyli ja 20 ensisijassa mahdollisesti esim. jo edellä mainittuja, subs-tituoituja bentsyylioksikarbonyylejä, kuten 4-nitro-bentsyy-lioksikarbonyyli tai difenyylimetoksikarbonyyli.

Hydroksisuojaryhmät R^, R4 ja/tai Rg ovat esim. määrättyjä asyylitähteitä, kuten mahdollisesti esim. halogeenilla 25 substituoituja alempialkanoyylejä, kuten 2,2-diklooriasetyy- li, tai hiilihappopuoliestereiden asyylitähteitä, erityisesti tert.-butyylioksikarbonyyli, mahdollisesti substituoituja bentsyylioksikarbonyylejä, esim. 4-nitro-bentsyylioksikarbo-nyyli tai difenyylimetoksikarbonyyli, tai 2-halogeeni-alempi-30 alkoksikarbonyylejä, kuten 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli, myös trityyli tai formyyli, tai orgaanisia silyyli- tai stan-nyylitähteitä, myös helposti poislohkaistavissa olevia, eet-teröityjä ryhmiä, kuten tert.-alempialkyylejä, esim. tert.-butyyli, 2-oksa- tai 2-tia-alifaattisia tai -sykloalifaatti-35 siä hiilivetytähteitä, ensisijassa 1-alempialkoksialempial-kyylejä tai 1-alempialkyyli-tio-alempialkyylejä, esim. me-toksimetyyli, 1-metoksietyyli, 1-etoksietyyli, 1-metyylitio- tl 9 72733 metyyli, 1-metyylitioetyyli tai 1-etyylitioetyyli, tai 2-oksa- tai 2-tia-sykloalkyylejä, joissa on 5-7 rengasatomia, esim. 2-tetrahydrofuryyli tai 2-tetrahydropyranyyli tai vastaavia tia-analogeja, sekä mahdollisesti substituoituja 1-5 fenyyli-alempialkyylejä, kuten mahdollisesti substituoitu bentsyyli tai difenyylimetyyli, jolloin fenyylitähteiden subs-tituentteina kysymykseen tulevat esim. halogeeni, kuten kloori, alempialkoksi, kuten metoksi ja/tai nitro.

Edellä mainitut orgaaniset silyyli- tai stannyylitäh-10 teet sisältävät pii- tai tina-atomin substituenttina mieluimmin alempialkyylin, erityisesti metyylin. Vastaavia silyyli-tai stannyyliryhmiä ovt ensisijassa trialempialkyylisilyy-lit, erityisesti trimetyylisilyyli, myös dimetyyli-tert.-bu-tyylisilyyli tai vastaavasti substituoidut stannyylit, esim. 15 tri-n-butyylistannyyli.

Edullisia hydroksisuojaryhmiä R4 ja Rg ovat mahdollisesti substituoidut alkylideenitähteet, joilla on happiatomi sitoutuneena 4- ja 6-asemaan. Alkylideenitähteitä ovat erityisesti alempialkylideenit, ensisijassa etylideeni, isopropy-20 lideeni tai propylideeni tai myös mahdollisesti substituoitu bentsylideenitähde. Edullinen hydroksisuojaryhmä Rg on bentsyyli.

Vedyllä korvattavissa olevien ryhmien poislohkaiseminen suoritetaan lievissä, useimmissa tapauksissa heikosti happa-25 missä, silloin tällöin myös neutraaleissa tai heikosti emäksisissä solvolyysiolosuhteissa, hydrogenolyyttisesti tai fo-tolyyttisesti. Silyyliryhmät voidaan lohkaista pois myös fluoridi-ioneilla tai niitä luovuttavilla yhdisteillä.

Tietyt eetteröidyt hydroksiryhmät, kuten tert.-butyyli-30 oksi tai tetrahydro-2-pyranoyylioksi, voidaan lohkaista pois solvolyyttisesti, erityisesti käsittelemällä happamella rea-genssilla, tert,-butyylioksi esim. käsittelemällä vahvalla, orgaanisella karboksyylihapolla, kuten trifluorietikkahapol-la, ja tetrahydro-2-pyranyylioksi esim. käsittelemällä mine-35 raalihapolla, kuten kloorivedyllä. Muut, kuten mahdollisesti substituoidut 1-fenyylialempialkoksit, esim. bentsyylioksi tai di fenyylimetoksi, voidaan muuttaa hydrogenolyyttisesti, 10 727 3 3 esim. käsittelemällä katalyyttisesti aktivoidulla vedyllä, kuten vedyllä jalometalli-, esim. palladium-katalysaattorin läsnäollessa, vapaaksi hydroksiryhmäksi. Asyylioksiryhmät voidaan lohkaista pois solvolyyttisesti (esim. tert.-butyy-5 lioksikarbonyyli tai difenyylimetoksikarbonyyli käsittelemällä vahvalla, orgaanisella karboksyylihapolla, kuten trifluo-rietikkahapolla), pelkistäen (esim. 2,2,2-trikloorietoksikar-bonyyli tai 2-jodietoksikarbonyyli, tavallisesti sen jälkeen kun tämä on muodostettu vastaavasta 2-bromietoksi-johdannai- 1 0 sesta, käsittelemällä pelkistävällä metallilla, kuten sinkillä 90 %:isen vesipitoisen etikkahapon läsnäollessa) tai hyd-rogenolyyttisesti (esim. bentsyylioksikarbonyyli tai difenyylimetoksikarbonyyli käsittelemällä katalyyttisesti aktivoidulla vedyllä, kuten vedyllä jalometalli-, esim. palla-15 dium- tai platina-katalysaattorin läsnäollessa). Suojatut karboksyyliryhmät voidaan vapauttaa eri tavoin riippuen aina suojaryhmästä, joka yleensä on esteröity ryhmä, tert.-butyy-lioksikarbonyyli tai difenyylimetoksikarbonyyli mm. solvolyyttisesti esim. käsittelemällä vastaavaa esteriyhdistettä 20 vahvalla orgaanisella karboksyylihapolla, kuten tr if luorietik-kahapolla, 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli tai 2-jodietoksi-karbonyyli (muodostettu tavallisesti ennen lohkaisua vastaavasta 2-bromietoksikarbonyyliryhmästä, esim. käsittelemällä vastaavaa esteriyhdistettä metallijodidilla, kuten natrium-25 jodidilla) pelkistäen, esim. käsittelemällä esteriyhdistettä pelkistävällä metallilla, kuten sinkillä 90 %:isen vesipitoisen etikkahapon läsnäollessa, ja 1-fenyyli-alempialkoksi-karbonyylit, esim. bentsyylioksikarbonyyli tai difenyylimetoksikarbonyyli, hydrogenolyyttisesti, esim. käsittelemällä 30 esteriyhdistettä katalyyttisesti aktivoidulla vedyllä, kuten vedyllä jalometalli-, kuten palladium- tai platina-katalysaattorin läsnäollessa.

Keksinnön mukaisesti saatavat kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa toisiksi tämän kaavan mukaisiksi yh-35 disteiksi. Niinpä voidaan esim. vapaa hydroksiryhmä muuttaa asyylioksiryhmäksi sinänsä tunnetulla tavalla, mm. kuten jäljempänä esitetään, kuten käsittelemällä asyylitähdettä vas- 11 727 3 3 taavalla orgaanisella karboksyylihapolla tai mieluimmin sen sopivalla johdannaisella, kuten anhydridillä, mukaan lukien seka-anhydridi, tai hapon aktivoidulla esterillä.

Siten voidaan kaavan (I) mukaiset yhdisteet valmistaa 5 myös siten, että kaavan (Ib) mukainen yhdiste CH2°R6b i · —0 ι/' \l ,, o »(H, 0R.b) (Ib) -M / / » —* o R3-t I 1 11 (Oh V*} x ;\ Il ίο) //

C-NH-CH-C-NH-CR-CH--CH -C

/ I. I \ - 0 R A Rio L) //\ b jossa kaavassa vähintään yksi tähteistä R^b, R4b ja Rgb tarkoittaa vetyä ja muut tähteistä Rib, R4b ja Rgb tarkoittavat alempialkanoyyliä tai hydroksisuojaryhmää, R2, R3 ja Rq tar-10 koittavat samaa kuin edellä ja tähteet -CO-R9b ja Rio13 tarkoittavat samaa kuin tähteet -CO-R9 tai vastaavasti -CO-R^g edellä tai tarkoittavat karboksyylisuojaryhmällä suojattua karboksia, asyloidaan alempialkaanihapolla tai sen reaktio-kykyisellä johdannaisella ja lohkaistaan yllämainitut suoja-15 ryhmät.

Kaavan (I) mukaiset suolaa muodostavia ryhmiä sisältävät yhdisteet voidaan sinänsä tunnetulla tavalla muuttaa suoloiksi, esim. vastaava karboksyyliryhmän sisältävä yhdiste käsittelemällä sopivalla emäksisellä aineella, kuten alkali-20 metalli- tai maa-alkalimetallihydroksidilla tai -karbonaatilla tai sopivalla alkalimetallialkanoaatilla.

12 72733

Keksinnön mukaisesti saatavat kaavan (I) mukaisten yhdisteiden isomeeriseokset voidaan sinänsä tunnetulla tavalla erottaa yksittäisiksi isomeereiksi, esim. kaavan (I) mukaisen, karboksyyliryhmän sisältävän yhdisteen vastaava rase-5 maatti , muodostamalla suola optisesti aktiivisen emäksen kanssa, erottamalla diastereoisomeeristen suolojen seos ja muuttamalla erotetut suolat vapaaksi hapoksi.

Uudet kaavan (I) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa myös siten, että 10 kaavan (Ie) mukainen yhdiste, fVRec •-o ι/' \| .

• 0 *(H, OR, ) (Ie) JV /' 4 A I/ / *- · o

«3—. I I II

pk Tc'*2 \ (L) Il (0) /

C-NH-CH-C-NH-CH-CH -CH -C

// I e I 2 2 \ c 0 R» c Rm 8 //\ c 10 0 X, jossa kaavassa R]_c, R4C ja Rgc tarkoittavat toisistaan riippumatta hydroksisuojaryhmää, alempialkanoyyliä tai poikkeustapauksessa vetyä, R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, R8c on alempialkyyli , joka on substituoitu mahdollisesti kul-15 loinkin reaktiokykyisessä muodossa esiintyvällä hydroksilla tai merkaptolla, ja r9 ja Rioc tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyylillä eetteröityä hydroksia tai aminoa tai R]_0C tarkoittaa bentsyylioksia tai difenyylimetoksia tai tähteet -CO-R9c ja -CO-Rioc tarkoittavat toisistaan riippumatta 20 karboksyylisuojaryhmällä suojattua karboksia, saatetaan reagoimaan kaavan Ro-C00H mukaisen karboksyylihapon, jossa kaa- 13 72733 vassa R0 tarkoittaa samaa kuin edellä, tai sen reaktiokykyi-sen karboksyylihappojohdannaisen kanssa, ja lohkaistaan yllämainitut suojaryhmät, tai kaavan Id mukainen yhdiste, CH,ORAd I 2 6 •—-o ι/' \l • 0 *(H, 0R,d) (Id) „iy /1 4 A 1/ / ·-· o

»3—x I I II

PK Tc'Rj \ (D n (o) n

C-NH-CH-C-NH-CH-CH -CH.-C

/ I i I \ d 0 Rft C Rin el” /\ d

H-N-R- -C-0 0 RQ

2 8 I, 9 0 5 jossa kaavassa R]_d, R^ ja Rg^ tarkoittavat toisistaan riippumatta hydroksisuojaryhmää, alempialkanoyyliä tai vetyä, R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, Rgd ja Rge tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyleeniä ja Rg^ ja Rio^ tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyylillä eette-10 röityä hydroksia tai aminoa tai Riod tarkoittaa bentsyyliok-sia tai di fenyylimetoksia tai tähteet -CO-Rgd ja -CO-R^o^ tarkoittavat toisistaan riippumatta karboksyylisuojaryhmällä suojattua karboksia, saatetaan reagoimaan kaavan Ro^-C00H mukaisen karboksyylihapon, jossa kaavassa R0d tarkoittaa ali-15 faattista hiilivetytähdettä, joka voi olla katkaistu imino-karbonyylillä, jolloin tähde

O

n -R8e~NH-C-R0d vastaa yllämainittua tähdettä R0, tai sen reaktiokykyisen karboksyylihappojohdannaisen kanssa ja lohkaistaan yllämai- 14 V~. .

72733 nitut suojaryhmät.

Tällöin kysymykseen tulee asylointireaktio.

Suojaryhminä kysymykseen tulevat erityisesti peptidi-ja/tai sokerikemiassa tavalliset! käytetyt, helposti pois-5 lohkaistavissa olevat hydroksi- ja/tai karboksi-suojaryhmät, jolloin tavalliseen tapaan valitaan esim. solvolyyttisesti tai pelkistäen poislohkaistavissa olevat suojaryhmät, jotka ovat poislohkaistavissa mieluimmin neutraaleissa tai happa-missa, mahdollisesti heikosti emäksisissä olosuhteissa. Hyd-10 roksisuojaryhmiä ovat erityisesti hydroksiryhmän eetteröivät suojaryhmät, kuten sopivat, mahdollisesti substituoidut alem-pialkyylit tai fenyylialempialkyylit, erityisesti 1-asemassa monihaarautuneet alempialkyylit, esim. tert.-butyyli, tai mahdollisesti substituoidut 1-fenyylialempialkyylit, esim.

15 bentsyyli, difenyylimetyyli tai trityyli, myös yhdessä hydroksiryhmän happiatomin kanssa asetaali- tai puoliasetaali-ryhmittvmän muodostavat eetteröivät ryhmät, erityisesti 2-oksasykloalkyylit, kuten 2-tetrahydrofuranyyli tai 2-tetra-hydropyranyyli, myös oksohappiatomin viereisen, mieluimmin 20 ei pääteasemassa olevan hiiliatomin välityksellä sitoutunut oksa-alempialkyyli, esim. 3-oksa-2-n-pentaani, sekä mahdollisesti substituoidut alkylideenitähteet, jotka liittävät viereiset happiatomit, kuten 4- tai 6-asemassa olevat. Alky-lideenitähteitä ovat erityisesti alempialkylideeni, ensisi-25 jassa metylideeni, isopropylideeni tai propylideeni tai myös mahdollisesti substituoitu bentsylideenitähde. Muita hydrok-sisuojaryhmiä ovat esteröivät suojaryhmät, kuten sopivat, mahdollisesti substituoidut alempialkoksikarbonyylit, erityisesti a-asemassa oksiryhmään nähden monihaarautuvat, tai 30 "-asemassa oksiryhmään nähden haarautuvat, halogeenin sisältävät alempialkoksikarbonyylit, esim. tert.-butyylioksikar-bonyyli, 2,2,2-trikloorietoksikarbonyyli tai 2-bromi- tai 2-jodietoksikarbonyyli tai sopivat, mahdollisesti substituoidut fenyylialempialkoksikarbonyylit, kuten 1-fenyylialempi-35 alkoksikarbonyylit, esim. bentsyylioksikarbonyyli tai dife-nyylimetoksikarbonyyli.

Karboksiryhmä on mieluimmin suojattu esteröidyn karbok- 15 72733 siryhmän muodossa; suojaryhminä karboksyyliryhmille tulevat kysymykseen mm. sopivat, mahdollisesti substituoidut alempi-alkyylit, erityisesti α-asemassa monihaarautuneet tai P-ase-massa halogeenin sisältävät alempialkyylit, esim. tert.-bu-5 tyyli, 2,2,2-trikloorietyyli tai 2-bromi- tai 2-jodietyyli tai sopivat, mahdollisesti substituoidut fenyylialempialkyy-lit, erityisesti 1-fenyyli-alempialkyylit, kuten bentsyyli tai difenyylimetyyli.

Lähtöaineet, jotka sisältävät johdettuja hydroksyyli-, 10 merkapto- tai aminoryhmiä tähteessä Rg, ovat vastaavat johdannaiset, joita voidaan käyttää vapaiden hydroksi-, merkapto- tai aminoyhdisteiden sijasta asylointireaktioihin. Tällöin kysymykseen tulevat esim. 0-, S- tai N-silyylijohdannaiset, kuten 0-, S- tai N-organosilyyli-, esim. trialempialkyy-15 lisilyyli-, erityisesti trimetyylisilyylijohdannainen.

Muita lähtöaineiden sopivia johdannaisia ovat sellaiset, joissa hydroksi- tai merkaptoryhmä on reaktiokykyisenä este-röitynä hydroksi- tai merkaptoryhmänä; sopivia reaktiokykyi-siä esteröityjä hydroksiryhmiä ovat epäorgaanisilla hapoilla 20 esteröidyt hydroksiryhmät, kuten halogeeni-, esim. kloori-, bromi- tai jodiatomit, tai vahvoilla orgaanisilla hapoilla, kuten vastaavilla sulfonihapoilla esteröidyt hydroksiryhmät, esim. alempialkyylisulfonyylioksi, erityisesti metyylisulfo-nyylioksi, tai aryylisulfonyylioksit, erityisesti p-metyyli-25 fenyylisulfonyylioksi.

Mahdollisesti tähteessä Rg olevan johdetun hydroksi-, merkapto- tai aminoryhmän asylointi voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla käyttäen tähteen Ro-C0 liittäviä aineita. Näitä ovat ensisijassa vastaavat hapot tai mieluimmin 30 niiden reaktiokykyiset johdannaiset.

ie 727 Näiden happojen reaktiokykyisiä johdannaisia ovat ensisijassa näiden happojen reaktiokykyiset aktivoidut esterit tai reaktiokykyiset anhydridit, myös reaktiokykyiset sykliset amidit sekä niiden suolat, jolloin tällaisissa 5 hapoissa mahdollisesti esiintyvät funktionaaliset ryhmät voivat olla suojatut, esim. edellä esitetyllä tavalla. Tällöin tällaisten happojen reaktiokykyiset johdannaiset voidaan muodostaa myös in situ.

Kaavan R -COOH mukaisten happojen aktivoituja este-10 reitä ovat erityisesti esteröivän tähteen liitoshiiliato-missa tyydyttymättömät esterit, esim. vinyy1iesterityyppi-set, kuten varsinaiset vinyyliesterit (joita voidaan saada esim. esteröimällä uudelleen vastaava esteri vinyyli-asotaatilla; aktivoidun vinyyliesterin menetelmä), karba-15 moyylivinyyliesterit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa iso-oksatoliumreagenssilla; 1,2-oksatsolium- tai Woodward-menet.elmä) , tai 1 -alempialkoksi-vinyyliesterit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa alempialkoksiasetyleenillä; etoksiasety-20 leeni-menetelmä), tai amidinotyyppiset esterit, kuten N,N'-disubstituoidut amidinoesterit (joita voidaan valmistaa esim. käsittelemällä vastaavaa happoa, ioka käytettäessä happoadditiosuolaa, esim. hydrokloridia, voidaan myös lisätä suolan, kuten ammonium-, esim. bentsyylitriroetvyli-25 ammoniumsuolan muodossa, sopivalla N,N'-disubstituoidulla karbodi-imidillä, esim. N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imi-dillä; karbodi-imidi-menetelmä), tai N,N-disubstituoidut amidinoesterit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa N,N-disubstituoidulla syaaniamidilla; 30 svaaniamidi-menetelinä) , sopivat aryyliesterit, erityisesti elektroneja puoleensa vetävillä substituenteilla sopivasti substituoidut fenvyliesterit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa sopivasti substituoidulla 72733 1 7 fenolilla, esim. 4-nitrofenolilla, 4-metyvlisulfonyyii-fc-nolilla, 2,4,5-trikloorifenolilla, 2,3,4,5,6-pentakloori-fenolilla tai 4-fenyylidiatsofenolilla, kondensaatioaineen, kuten N,N'—disykloheksyyli—karbodi—imidin läsnäollessa; 5 aktivoitujen aryyliestereiden menetelmä), syaanimetyylies-terit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa klooriasetonitriilillä emäksen läsnäollessa; syaa-nimetyyliesteri-menetelmä), tioesterit, erityisesti mahdollisesti esim. nitrolla substituoidut fenyylitioesterit 10 ( joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa hap poa mahdollisesti esim. nitrolla substitoiuduilla tiofeno-leilla, mm. anhydridi- tai karbodi-imidi-menetelmän avulla; aktivoitujen tioestereiden menetelmä), tai amino- tai amidoesterit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vas-15 taavaa happoa N-hydroksi-amino- tai N-hydroksi-amido-yhdis-teellä, esim. N-hydroksi-piperidiinillä, N-hydroksi-suk-kiini-imidillä, N-hydroksi-ftaaii-imidillä tai 1-hydroksi-bentstriatsolilla, esim. anhydridi- tai karbodi-imidi-menetelmän mukaisesti; aktivoitujen N-hydroksiestereiden me-20 netelmä).

Kaavan Ro~COOH mukaisten happojen anhydridit voivat olla näiden happojen symmetrisiä tai mieluimmin seka-anhyd-ridejä, niinpä niitä ovat esim. anhydridit epäorgaanisten happojen kanssa, kuten happohalogenidit, erityisesti hap-25 pokloridit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa tionyylikloridilla, fosforipentakloridilla tai oksalyylikloridilla; happokloridi-menetelmä), atsidit (joita voidaan saada esim. vastaavasta happoesteristä vastaavan hydratsidin ja tämän typpihapoke-käsittelyn kautta; 30 atsidi-menetelmä), anhydridit hiilihappopuolijohdannaisten, kuten vastaavien estereiden kanssa, esim. hiilihappo-alem-pialkyylipuoliesterit (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa halogeeni-, kuten kloorimuurahais-happo-alempialkyyliestereillä tai 1-alempialkoksikarbonyy-35 li-2-alempialkoksi-1,2-dihydro-kinoliinilla, esim. 1-alem-pialkoksi-karbonyyli-2-etoksi-1,2-dihydrokinoliinilla; seka-O-alkyyli-hiilihappo-anhydridien menetelmä) tai anhyd- 18 72733 ridit dihalogenoitujen, erityisesti dikloorattujen fosfo-rihappojen kanssa (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa fosforioksikloridilia; fosforioksiklo-ridi-menetelmä) tai anhydridit orgaanisten happojen kanssa, 5 kuten seka-anhydridit orgaanisten karboksyylihappojen kanssa (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa mahdollisesti substituoidulla alempialkaani- tai fenyyli-alkaanikarboksyylihappohalogenidilla, esim. fenyylietikkahappo-, pivaliinihappo- tai trifluorietikkahappokloridilla; seka-10 karboksyylihappoanhydridien menetelmä) tai anhydridit orgaanisten sulfonihappojen kanssa (joita voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavan hapon suolaa, kuten alkalimetalli-suolaa sopivalla orgaanisella sulfonihappohalogenidilla, kuten alempialkaani- tai aryyli-, esim. metaani- tai p-15 tolueenisulfonihappokloridilla; seka-sulfonihappoanhydri- dien menetelmä) sekä symmetriset anhydridit (joita voidaan saada esim. kondensoimalla happo karbodi-imidin tai 1-di-etyyliaminopropiinin läsnäollessa; symmetristen anhydri-dien menetelmä).

20 Sopivia syklisiä amideja ovat erityisesti amidit aromaattisluontoisten viisijäsenisten diatsasyklien, kuten amidit, imidatsolien, esim. imidatsoli, kanssa (joista voidaan saada esim. käsittelemällä vastaavaa happoa Ν,Ν'-kar-bonyylidi-imidatsolilla; imidatsolidi-menetelmä) tai pyrat-25 solien, esim. 3,5-dimetyyli-pyratsolin kanssa (joita voidaan saada esim. happohydratsidin kautta käsittelemällä asetyyliasetonilla; pyratsolidi-menetelmä).

Kaavan Ro~COOH mukaisten happojen suoloja ovat erityisesti metallisuolat, kuten alkalimetalli-, esim. nat-30 rium- tai kaliumsuolat.

Mahdollisesti johdetun hydroksiryhmän asylointiin käytetään erityisesti aktivoituja estereitä, ensisijassa amino- tai amidoestereitä, edelleen myös anhydridejä, erityisesti seka-anhydridejä. Lähtöaineet, jotka sisältävät 35 reaktiokykyisessä esteröidyssä muodossa olevan hydroksiryhmän, saatetaan tavallisesti reagoimaan jonkin kaavan Rc~C00H mukaisten nappojen suolan kanssa.

1 9 7 2 7 3 3

Kuten jo mainittiin, voidaan happojen johdannaiset muodostaa in situ. Niinpä voidaan esim. N,N'-disubsti-tuoidut amidinoesterit muodostaa in situ siten, että lähtöaineen ja kaavan Ro~COOH mukaisen hapon seos saatetaan 5 reagoimaan sopivan N,N'-disubstituoidun karbodi-imidin, esim. Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa.

Myös voidaan amino- tai amidoesterit muodostaa asylointi-reaktioon käytettävän lähtöaineen läsnäollessa siten, että toivotun hapon ja vastaavan lähtöaineen seos saatetaan rea-10 goimaan N,N'-disubstituoidun karbodi-imidin, esim. N ,N' - disykloheksyylikarbodi-imidin ja N-hydroksi-amiinin tai N-hydroksi-amidin, esim. N-hydroksi-sukkiini-imidin läsnäollessa, mahdollisesti sopivan emäksen, esim. 4-dimetyvli-aminopvridiinin läsnäollessa.

15 Asylointireaktiot voidaan suorittaa sinänsä tunnetul la tavalla, jolloin reaktio-olosuhteet riippuvat ensisijassa käytetyn asylointiaineen lajista, tavallisesti reaktiot suoritetaan sopivan liuottimen tai laimennusaineen tai tällaisten seosten läsnäollessa ja tarvittaessa kondensaatio-20 aineen läsnäollessa, joka esim. käytettäessä asylointi- aineena anhydridiä, mahdollisesti voi myös olla happoa sitova aine, jäähdyttäen tai lämmittäen, esim. lämpötila-alueella, joka on noin -30 - noin +150°C, suljetussa astiassa ja/tai inerttikaasu-, esim. typpiatmosfäärissä.

25 Edellä esitetyissä menetelmissä käytetyt lähtöaineet ovat tunnettuja tai niitä voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla, asylointiaineet esim. edellä mainitulla tavalla .

Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan myös val-30 mistaa siten, että yhdisteessä, jonka kaava (IV) on 20 72733 CH_0R, I 2 6 •-0 ι/' \l • ο ·(H, OR.) (IV) -^1 /

*3-· I I II

(D)\ NH-C-R^

C-OH

II

0 jossa substituentit tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin vapaat funktionaaliset ryhmät mahdollisesti ovat suojatussa muodossa, ja jossa karboksiryhmä voi olla johdannais-muodossa, karboksiryhmä mahdollisesti vaiheittain amidoi-5 daan aineella, joka liittää tähteen, jonka kaava (IVa) on H Rg 0=C-R9

- N - CH - C - NH - CH - CH2 - CH2 - C - R10 (IVa) (L) 0 (D) O

jossa substituentit tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin funktionaaliset ryhmät mahdollisesti ovat suojatussa muodossa, ja tarvittaessa saadussa yhdisteessä suojatut funktionaaliset ryhmät muutetaan vapaiksi funktionaalisiksi 10 ryhmiksi.

Kaavan (IV) mukaisessa lähtöaineessa tai kaavan (IVa) mukaisessa tähteessä funktionaaliset ryhmät, jotka mahdollisesti ovat suojatussa muodossa, ovat ensisijassa hydrok-si- tai karboksyyliryhmiä, jotka yllä esitetyllä tavalla 15 voivat olla suojatussa muodossa.

Mahdollisesti johdetun karboksiryhmän keksinnön mukainen amidointi kaavan (IV) mukaisessa lähtöaineessa voidaan suorittaa yhdessä vaiheessa tai useammassa vaiheessa; ts. kaavan (IVa) mukainen ryhmä voidaan liittää kokonaise-20 na tai myös osaryhmänä, esim. amidoimalla mahdollisesti

II

21 72733 johdettu karboksiryhmä kaavan (IV) mukaisessa lähtöaineessa aineella, joka luovuttaa ryhmän, jonka kaava on 1 fs -N - C - C - OH (IVb) I !! H 0 jossa karboksiryhmä voi olla funktionaalisesti muunnetussa muodossa ja mahdollisesti esiintyvät funktionaaliset ryh-5 mät voivat olla suojatussa muodossa, ja jälkeen päin ami-doimalla karboksiryhmä välituotteessa, jonka kaava (V) on ---o l/' \l • o »(H, OR.) (V) l\/ /1 1 4 A 1/ / -- o

r3 - | I II

(D)\ mtfr

C-NH-CH-COOH

11 0 8 jossa karboksiryhmä voi olla reaktiokykyisessä johdannais-muodossa ja mahdollisesti esiintyvät funktionaaliset ryhmät voivat olla suojatussa muodossa, aineella, joka luovut-10 taa tähteen, jonka kaava (Va) on

0-C-R

1 9 1 . .

- N - CH - CH„ - CH?- C - R.n (Va), I (D) 2 Z M 10 H 0 jossa mahdollisesti esiintyvät funktionaaliset ryhmät voivat olla suojatussa muodossa.

Mahdollisesti johdetun karboksiryhmän amidointi kaavan (IV) mukaisessa lähtöaineessa tai kaavan (V) mukaises-15 sa välituotteessa tai lähtöaineessa voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, jolloin tavallisesti lähdetään 22 72733 kaavan (IV) tai (V) mukaisista yhdisteistä, joissa karbok-syyliryhmä on reaktiokykyisessä johdannaismuodossa. Ami-doivana aineena käytetään edellä esitettyjä kaavojen (IVa), (IVb) tai (Va) mukaisia tähteitä vastaavia dipeptidejä, 5 joiden kaava on (IVaa)

H R 0=C—R

"" ‘ V ST kr CH2 ‘ CV f? - R10 '"aa) (L) 0 tai aminohappoja, joiden kaavat (IVba) tai (Vaa) ovat H Ro 0®C-Rn II8 I 9

HN - C - C - °H vast. H,N - CH - CH, - CH,-C - R

1 11 II | 10 a.)0 ° (IVba) (Vaa) joissa esiintyvät karboksyyliryhmät mahdollisesti ovat suojatussa muodossa ja joissa amidointireaktioon osaaottava aminoryhmä mahdollisesti voi olla reaktiokykyisessä 10 johdannaismuodossa.

Karboksiryhmät ovat tavallisesti suojatut esteröidvssä muodossa. Sopivia esteröiviä suojaryhmiä karboksyylille ovat helposti, mieluimmin lievissä, mieluimmin neutraaleissa tai happamissa, mahdollisesti heikosti emäksissä olosuhteissa 15 solvolyyttisestä tai pelkistäen poislohkaistavissa olevat ryhmät, kuten liitoshiiliatomissa haarautuneet ja/tai aryy-lin tai aroyylin, kuten mahdollisesti esim. halogeenilla, kuten kloorilla tai bromilla, alempialkoksilla, esim. Eetoksilla ja/tai nitrolla substituoidun fenyylin, bifenyy-20 Un tai bentsoyylin sisältävät alempialkyylit, esim. tert.-butyyli, bentsyylif difenyylimetyyli, 2-bifenylyyli-2-pro- 23 72733 pyyli tai fenasetyyli, tai liitoshiiliatomin viereisessä hiiliatomissa sopivasti substituoidut, kuten halogeenin, esim. kloorin, bromin tai jodin, tai orgaanisen silyyli-ryhmän, esim. trimetyylisilyylin sisältävät alempiaikyylit, 5 kuten 2-halogeeni-alempialkyyli, esim. 2,2,2-trikloorietyy-li, 2-bromietyyli tai 2-jodietyyli tai 2-trimetyylisilyy-lietyyli.

Reaktiokykyiset, johdannaismuodossa olevat aminoryh-mät kaavan (IVaa) mukaisissa dipeptideissä tai kaavojen 10 (IVba) ja (Vaa) mukaisissa aminohapoissa ovat ensisijassa silyloituja aminoryhmiä, jotka sisältävät johdannaisen muodostavana tähteenä esim. trimetyylisilyylin.

Kaavan (IV) mukaisten lähtöaineiden tai kaavan (V) mukaisten välituotteiden tai lähtöaineiden reaktiokykyiset 15 johdannaiset ovat ensisijassa kaavojen (IV) tai (V) mukaisten happojen reaktiokykyisiä aktivoituja estereitä tai reaktiokykyisiä anhydridejä, myös reaktiokykyisiä syklisiä amideja, jolloin tällaiset reaktiokykyiset johdannaiset voidaan myös muodostaa in situ. Sopivia aktivoituja este-20 reitä ovat esim. edellä mainitut esterit, kuten esteröivän tähteen liitoshiiliatomissa tyydyttymättömät esterit, esim. vinyyliesterityyppiset, kuten varsinaiset vinyyliesterit, karbamoyylivinyyliesterit tai 1-alempialkoksivinyylieste-rit, amidinotyyppiset esterit, kuten N,N'- tai N,N-disubs-25 tituoidut amidinoesterit, aryyliesterit, erityisesti elektroneja puoleensa vetävillä substituenteilla sopivasti substituoidut fenyyliesterit, syaanimetyyliesterit, tioesterit, erityisesti mahdollisesti esim. nitrolla substituoidut fe-nyylitioesterit tai amino- tai amidoesterit. Kaavojen (IV) 30 ja (V) mukaisten happojen reaktiokykyiset anhydridit voivat olla näiden happojen symmetrisiä ja mieluimmin seka-anhydridejä, esim. edellä mainittuja anhydridejä epäorgaanisten happojen kanssa, kuten vastaavat happohalogenidit, erityisesti kloridit, atsidit, anhydridejä hiilihappopuo-35 lijohdannaisten, kuten vastaavien estereiden, esim. hiili-happo-alempialkyylipuoliestereiden kanssa, tai anhydridejä dihalogenoitujen, kuten dikloorattujen fosforihappojcn ___________- -· 1.

24 72733 kanssa, tai anhydridejä orgaanisten happojen kanssa, kuten seka-anhydride j M orgaanisten karboksyyli- tai sulronihappojen kanssa tai symmetrisiä anhydridejä. Sopivia syklisiä amideja ovat esim. edellä esitetyt ja ne tarkoittavat erityi-5 sesti amideja, jotka sisältävät viisijäsenisiä, aromaat-tisluontoisia diatsasyklejä, kuten amideja, imidatsolien tai pyratsolien kanssa.

Kuten mainittiin, voidaan kaavojen (IV) ja (V) mukaisten happojen johdannaiset muodostaa myös in situ. Niin-10 pä voidaan esim. N,N1-disubstituoidut amidinoesterit muodostaa in situ siten, että kaavan (IV) tai (V) mukaisen hapon ja kaavan (IVaa) mukaisen dipeptidin tai kaavan (IVba) mukaisen aminohapon tai kaavan (Vaa) mukaisen aminohapon seos saatetaan reagoimaan N,N'-disubstituoidun karbodi-imi-15 din, esim. N,N'-disykloheksyylikarbodi-imidin läsnäollessa. Edelleen voidaan kaavojen (IV) tai (V) mukaisten happojen amino- tai amidoesterit muodostaa kaavan (IVaa) mukaisen dipeptidin tai kaavan (IVba) tai kaavan (Vaa) mukaisen aminohapon läsnäollessa siten, että toivotun hapon ja vastaa-20 van dipeptidi- tai vastaavan aminohappo-yhdisteen seos saatetaan reagoimaan N,N'-disubstituoidun karbodi-imidin, esim. N ,N'-disykloheksyylikarbodi—imidin ja N-hydroksi-amiinin tai N-hydroksi-amidin, esim. N-hydroksi-sukkkiini-imidin läsnäollessa, mahdollisesti sopivan emäksen, esim.

25 4-dimetyyliamino-pyridiinin läsnäollessa.

Amidointireaktiot voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, jolloin reaktio-olosuhteet riippuvat ensisijassa käytetyn, kaavan (IV) tai (V) mukaisen hapon johdannaisesta, tavallisesti reaktiot suoritetaan sopivan liuotti-30 men tai laimennusaineen tai tällaisten seosten läsnäollessa ja tarvittaessa kondensaatioaineen läsnäollessa, joka esim. käytettäessä anhydridiä kaavan (IV) tai (V) mukaisen hapon johdannaisena, voi mahdollisesti myös olla happoa sitova aine, jäähdyttäen tai lämmittäen, esim. lämpötila-35 alueella, joka on noin -30 - noin +150°C, suljetussa astiassa, ja/tai inerttikaasu-, esim. typpiatmosfäärissä.

Edellä esitetyissä menetelmissä käytetyt lähtöaineet 25 72733 voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla esim. asyloi-malla tähteessä Rg vapaa hydroksi- tai merkaptoryhmä edellä esitetyllä tavalla.

Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmis-5 taa myös siten, että yhdiste, jonka kaava (VII) on CH.OR..

| 2 6 •-0 ι/' \l • /(H, OR ) (VII) l\ /1 1 4 \l 1/ •-0 0

I I II

NH-C-R2 jossa substituentit tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin funktionaaliset ryhmät mieluimmin ovat suojatussa muodossa, tai tämän reaktiokykyinen johdannainen saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava (VIII) on *3 *8 0=C-R9 Y - CH - C - NH - CH - C - NH - CH - CH2 ~ CH2 - C - R10 O (L) ö <D> ö (VIII) 10 jossa Y tarkoittaa reaktiokykyistä, esteröityä hydroksiryh-mää ja muut substituentit tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin funktionaaliset ryhmät mieluimmin ovat suojatussa muodossa, ja tarvittaessa saadussa yhdisteessä muutetaan suojatut funktionaaliset ryhmät vapaiksi funktionaalisiksi 15 ryhmiksi.

Kaavojen (VII) ja (VIII) mukaisissa lähtöaineissa funktionaaliset ryhmät, jotka mahdollisesti ovat suojatussa muodossa, ovat ensisijassa edellä mainittuja, jotka voivat esitetyllä tavalla olla suojatussa muodossa.

Lähtöaineena käytetyn, kaavan (VII) mukaisen sekundäärisen alkoholin reaktiokykyinen johdannainen on ensisijassa vastaava metalli-, orityisosti alkalimeta1Ii-, esim.

26 72733 litium-, natrium- tai kaliumyhdiste.

Reaktiokykyinen esteröitv hydroksirynmä Y on vahvalla hapolla, kuten vastaavalla epäorgaanisella hapolla, esim. halogeenivetyhapolla tai vastaavalla orgaanisella hapolla, 5 kuten orgaanisella sulfonihapolla esteröity hvdroksiryhmä. Ryhmä Y tarkoittaa täten ensisijassa halogeenia, erityisesti bromia, myös klooria tai jodia.

Edellä esitetty reaktio, jossa kaavan (VII) mukaista lähtöainetta mieluimmin käytetään johdannaisen, kuten al-10 kalimetalliyhdisteen muodossa, voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, esim. liuottimen tai laimennusaineen, kuten dimetyyliformamidin ja/tai kondensaatioaineen läsnäollessa, ja haluttaessa tai tarvittaessa jäähdyttäen tai lämmittäen, esim. lämpötila-alueella, joka on noin -30 -15 noin +150°C, suljetussa astiassa ja/tai inerttikaasu-, esim. typpiatmosfäärissä.

Lähtöaineet ovat tunnettuja tai niitä voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla, esim. edellä esitetyllä tavalla asyloimalla tähteessä Rg vapaa hydroksi- 20 tai merkaptoryhmä kaavan R - C mukaisella hapolla.

° ^OH

Keksinnön mukaiset kaavan (II) mukaiset välituotteet valmistetaan vastaavalla tavalla kuin edellä on esitetty, esim. haluttaessa lohkaisemalla pois helposti vedyllä korvattavissa olevat ryhmät, ennen kaikkea tähteissä R^ 25 tai R-| q f tai haluttaessa johtamalla vapaat funktionaa liset ryhmät tai liittämällä kaavojen (IVba) ja (Vaa) mukaisia aminohappoja.

Edelleen on myös mahdollista saada uusia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä, joissa R^, R^ ja Rg tarkoittavat ve-30 tyä, kun yhdisteessä, jonka kaava on '2 7 72733 V/}/ \ / °\/° Λ ίχΙΙΙ) A / 0 f ·—·

/ I

/ . N==€—R

'· ψ ., \ I8 I 9

CONH - CH - CONH - CH - CH„CH - C-R

(L) (D) 2 2 | 10 jossa η on alkylideeni- tai sykloalkylideeniryhmä ja tnuut substituentit tarkoittavat samaa kuin edellä, oksatsoliini-ja dioksolaanirengas lohkaistaan happamesti, ja mahdollisesti esiintyvät suojaryhmät lohkaistaan pois.

5 Alkylideeni on tällöin erityisesti alempialkylideeni, kuten isopropylideeni ja sykloalkylideeni on ensisijassa syklopentylideeni tai sykloheksylideeni.

Tämä lohkaisu suoritetaan myös sinänsä tunnetulla tavalla, esim. happamella ioninvaihtajalla, erityisesti 10 sellaisella, joka sisältää sulfonihapporyhmiä, kuten

Amberlite IR-120 (styreenihartsi, joka sisältää vahvasti happamia sulforyhmiä) tai Dowex 50 (polystyreenisulfoni-happo) tai vahvalla epäorgaanisella tai orgaanisella hapolla, kuten suolahapolla, bromivetyhapolla, rikkihapolla tai 15 jollain sulfonihapolla, esim. metaanisulfonihapolla, tai mahdollisesti aromaattisessa renkaassa substituoidulla fenyylisulfonihapolla, kuten p-tolueenisulfonihapolla tai trifluorietikkahapolla. Jos tällöin työskennellään veden läsnäollessa, saadaan 1-asemassa vapaa hydroksiryhmä. Jos 20 myös jokin karboksyyliryhmistä CORg tai COR^q on esteröity alkoholilla, erityisesti alempialkanolilla, voidaan ne erityisesti korotetussa lämpötilassa saippuoida vesipitoisella hapolla.

Saaduissa yhdisteissä voidaan suojaryhmät peptiditäh-25 teessä lohkaista pois jälkeen päin esim. hydrogenolyysi1lä, 28 72733 kuten esim. katalyyttisesti aikaansaadulla vedyllä, tai hydrolyysillä.

Tällöin käytettyjä lähtöaineita voidaan saada esim. kun vastaavaan oksatsoliiniin, joka sisältää vapaan hyd-5 roksiryhmän sokeritähteen 3-asemassa, liitetään yhdessä tai useammassa vaiheessa R^-asetamidopeptiditähde.

Uudet kaavan (I) mukaiset lipofiili-set glukoosijohdannaiset, ennen kaikkea muramyyli- ja nor-muramyylipeptidit ja näiden suolat omaavat joukon arvok-10 kaita farmakologisia ominaisuuksia, erityisesti niillä on huomattava immuniteettia tehostava vaikutus.

Siten kohotetaan näiden yhdisteiden avulla in vivo huomattavasti hiirten vasta-aineiden muodostuskykyä.

MMRI-hiiret immunisoidaan 0. päivänä intraperitoneaa-15 iisesti ruiskuttamalla 10 ug sakatonta naudanseerumialbu-miinia (BSA). 9. 15 ja 29 päivää myöhemmin otetaan seeru- mikokeet ja tutkitaan niiden anti-BSA-vasta-ainepitoisuut-ta passiivisella hemagglutinaatiotekniikalla. Käytetyssä annoksessa on liukeneva BSA subimmunogeeninen vastaanotta-20 jaeläimille, so. se ei pysty tuottamaan ollenkaan tai vain hyvin vähän vasta-aineita. Hiirten ylimääräinen käsittely määrätyillä immuniteettia kohottavilla aineilla ennen antigeenin antamista tai sen jälkeen saa aikaan vasta-aine-tiitterin kohoamisen seerumissa. Käsittelyn teho ilmais-25 taan saadun score-arvon avulla, so. 'tiitteriero',::us'!:en summan avulla kolmena verenottopäivänä.

Tässä testissä kaavan (I) yhdisteet pystyvät annettaessa niitä intraperitoneaalisesti tai subkutaanisesti 0,5-5 mg/eläimen paino-kg viitenä peräkkäisenä päivänä 30 BSA:11a tapahtuvan immunisoinnin jälkeen kohottamaan huomattavasti vasta-ainetuotantoa BSA:ta vastaan. Ne ovat tässä suhteessa huomattavasti parempia kuin tavanomaiset hydrofiiliset muramyylipeptidit.

Solujen välittämän immuniteetin manifestaatioita voi-35 daan kohottaa myös mainituilla yhdisteillä in vivo:

Marsujen herkistäminen epätäydellisessä Freund'in adjuvantissa olevalla BSA:11a johtaa vain humoraa1 isoon li 29 72733 vasta-ainemuodostukseen, kun taas keksinnön mukaisten li-pofiilisten myramyylipeptidien lisääminen 5-50 yg:n annoksina antigeeni-öljyemulsioon indusoi viivästynyttä yliherkkyyttä BSA:n suhteen: 3 viikkoa immunisoinnin jälkeen 5 BSA:n intrakutaaninen injektio aiheuttaa näissä eläimissä paikallisen tulehdusreaktion, jolloin esiintyy punoitusta ja ihon paksuuntumia, mikä reaktio saavuttaa 24-48 tunnin kuluessa maksiminsa. Nämä viivästyneet reaktiot vas taavat kvantitatiivisesti ja kvalitatiivisesti niitä, jot-10 ka saadaan tavanomaisesti immunisoitaessa täydellisessä

Freund'in adjuvantissa olevalla BSA:11a (so. lisäämllä my-kobakteereita). ED^Q-arvot (tarvittava yg/eläin 200 ul:n reaktiotilavuuden (punoituspinta x ihon paksuudenkasvu) erotuksen induktiota varten käsitellyissä ja käsittelemät-15 tömissä eläimissä, 24 tuntia aiheuttamisen jälkeen) ovat 10-20 ug.

Erityisesti on korostettava myös tällaisten pyranoo-sijohdannaisten kykyä annettaessa niitä yhdessä BSA:n kanssa liposomeissa (valkuaislesitiini:kolesteroli 4:1 tai 20 pelkkä valkuaislesitiini, 4 mg/eläin) ja ilman toksisia mineraaliöljykomponentteja indusoida marsuissa viivästynyttä . yliherkkyyttä BSA:ta vastaan. Kvantitatiivisesti ja kvalitatiivisesti nämä viivästyneet reaktiot ovat samoin identtisiä niiden kanssa, jotka saadaan immunisoitaessa täy-25 dellisessä Freund 1 in adjuvantissa olevalla BSA:11a. ED5q-arvot ovat 100-300 yg/eläin.

Kaavan (I) mukaiset uudet yhdisteet osoittavat muita ylimääräisiä laadun parannuksia verrattuna hvdrofiilisiin muramyylipeptideihin.

30 Balb/c-hiiret immunisoidaan antamalla niille intra- 4 peritoneaalisena injektiona 2 x 10 P815 mastocytomsoluja 0. päivänä. 15. päivänä tutkitaan näin immunisoitujen eläinten pernasolut in vitro solutoksisten, P815 mastocytom- soluja vastaan suunnattujen T-lymfosyyttien esiintymisen 51 35 suhteen. Tätä varten leimataan P815 kohdesolut Cr:lla ja sytotoksisen reaktion laajuus selvitetään mittaamalla radioaktiivisuus viljelyn päällä olevassa osassa. Käyte- 30 72733 tyssä annoksessa ovat P815 mastocytomsolut subimmunogeene-ja vastaanottajahiirille, so. ne eivät indusoi mitään tai vain aivan vähäistä solutoksisten T-solujen muodostumista. Annettaessa samanaikaisesti intraperitoneaalisesti 5 1-50 yg kaavan (I) mukaisia mainittuja muramyvlipeptidejä tämä saa aikaan huomattavaa solutoksisten T-solujen muodostuksen kohoamista (kerroin 10-30 käsittelemättömiin hiiriin verrattuna).

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden im-10 muniteettia kohottavat ominaisuudet voidaan esittää myös erityisen immuunitoleranssin induktiossa transplantaatio-antigeenejä vastaan immunisoimalla hiiret adjuvantilla käsitellyillä autoblasteilla:

Seka-lymfosyyttiviljelyssä inkuboidaan tulevan kudos-15 siirrännäisen vastaanottajan (C57B1/6J hiirten) pernalymfo-svyttejä tulevan kudossiirrännäisen antajan (CBA/J hiirten) säteilytetyillä pernasoluilla. T-lymfosyytit, jotka sisältävät antajan kudossopivuusantigeenejä varten erityisiä reseptoreita, lisääntyvät ja kehittyvät blasteiksi. Nämä 20 voidaan erottaa muiden solujen sakkautumisen avulla. Spesifiset blastit pusertavat ulos membraanireseptorien relevantit idiotyyppiset spesifisyydet ja ne ruiskutetaan täydellisellä Freund'in adjuvantilla (CFA) käsiteltyinä auto-immunogeeneinä spesifisen toleranssin indusoimiseksi ky-25 seisiä kudossiirrännäisantigeeneja vastaan prospektiivisiin kudossiirrännäisen vastaanottajiin (C57B1/6J). Immunosoin-ti tapahtuu neljä kertaa neliviikkoisin välein autologisil-la anti-CBA/J T-lymfoblasteilla. T-autoblastien adsorbaa- 9 tit kaavan (I) mukaisten yhdisteiden kanssa (10 blastia 30 suspendoidaan liuokseen, jossa on 20 mg substanssia 20 ml: ssa PBS:a. Kaksituntisen inkuboinnin jälkeen solut sentri-fugoidaan ja pestään kaksi kertaa PSBrllä) pystyvät indusoimaan spesifisen immuunitoleranssin CFA:n puuttuessa, jolloin adsorbaatit ovat yhtä tehokkaita kuin lymfoblastit 35 CFA:ssa.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet pystyvät tämän lisäksi konsentraation ollessa 0,5-100 Ug/ml normaalien 31 72733 hiirten pernasoluviljelyissä indusoimaan vasta-ainetta tuottavien solujen muodostumista (19S-täpliä muodostavien solujen lisääntyminen kertoimella 10-30 kontrolliarvon yli (stimuloivien substanssien puuttuessa)): siten muodostuu 5 mainittujen yhdisteiden läsnäollessa esim. spesifisiä vasta-aineita lampaan erytrosyyttejä vastaan, ilman että vil-jelyihin lisätään lampaan erytrosyyttejä immunisointia varten. Toisaalta pystyvät mainitut substanssit samalla kon-sentraatioalueella myös kohottamaan (kongenitaalisten 10 athymisten nu/nu-hiirten) T-soluköyhien pernasoluviljelyi-den immunologista reaktiivisuutta verrattuna normaalisti thymus-riippuvaiseen antigeeniin (lampaan erytrosyytit) (kerroin 10-30 suhteessa käsittelemättömiin kontrollivil-jelyihin). Mainittujen yhdisteiden avulla ei indusoida 15 kuitenkaan in vitro suoraan tai välillisesti vain B-lymfo-syyttien (so. potentiaalisesti vasta-ainetta muodostavien solujen) uudiskasvu- ja synteesisuorituksia, vaan niiden avulla vaikutetaan myös T-lymfosyytteihin (joihin kuuluvat regulatoorisesti aktiivit apu- ja suppressorisolut sekä 20 sytotoksiset efektorisolut). Siten mainitut yhdisteet pystyvät esim. konsentraatioalueella 1-20 ug/ml kohottamaan huomattavasti (jopa 10-kertaisesti) kortisoniresistenttien thymus-solujen reaktiivisuutta verrattuna allogeeneihin säteilytettyihin stimulaattorilymfosyytteihin.

25 Yllä esitetyt vaikutukset tapahtuvat todennäköisesti välillisesti siten, että sellaiset lipofiiliset yhdisteet aktivoivat makrofageja, jotka puolestaan edistävät T- ja B-lymfosyyttien reaktiivisuutta. Voidaan itse asiassa osoittaa, että mainitut yhdisteet vapauttavat jo vähäisis-30 sä konsentraatioissa (0,5-10 yg/ml) suuria määriä "colony stimulating activity" (CSA) hiiren makrofageista (150-200 pesäkkeen induktio 7 päivän kuluessa 10b hiirten luuydin-soluista, sen jälkeen kun on lisätty 20 % 24 tunnin ajan substanssilla inkuboitujen makrofagiviljelyiden päällä ole-35 vaa osaa, verrattuna 0-5 pesäkkeeseen lisättäessä käsittelemättömien makrofagiviljelyiden päällä olevia osia). CSA on biologinen välittäjä, joka on tarpeellinen .1 uuydinkanta- 32 72733 solujen differentioimiseksi makrofageiksi ja liuskatumaisiksi (polymorphkernig) leukosyyteiksi. Siten mainitut yhdisteet saavat aikaan solujen kohotetun lisäyksen, jotka solut ovat keskeisesti merkittäviä ei-spesifiselle resis-5 tenssille ja spesifisten (lymfosyyttien välittämien) immuunireaktioiden induktiolle, amplifikaatiolla ja ilmaisulle .

Uusien yhdisteiden immuniteettia kohottava vaikutus voidaan osoittaa in vivo: Siten saa keksinnön mukaisen kaa-10 van (I) muramyylipeptidijohdannaista sisältävä injektio 3-9 tunnin kuluessa aikaan seerumin CSA-konsentraation huomattavan nousun (aina 120 pesäkkeeseen/103 hiiren luuydin-solua sen jälkeen, kun on lisätty kloroformilla uutettua seerumia (5 % loppukonsentraatio) verrattuna 0-5 pesäkkee-15 seen käsittelemättömissä eläimissä). Tämän mukaisesti antamalla samoja yhdisteitä kohotetaan huomattavasti in vivo hiirten vasta-aineen muodostuskykyä.

Kaavan (I) mukaisten uusien yhdisteiden immuniteettia kohottavat ominaisuudet voidaan osoittaa myös tuumori-mal-20 leissa, esim. hiiren Ehrlich Ascites-tuumorissa.

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat lisäksi vähän toksisia: hiiret kestivät jopa 5-kertaisen intraperitoneaali-sen annostuksen annoksen ollessa 100 mg/kg/päivä viitenä peräkkäisenä päivänä ilmeisesti oireettomasti. Koska im-25 muniteetin stimulointia varten tarvittavat annokset ovat hyvin pienet, on uusien yhdisteiden terapeuttinen ulottuvuus hyvin suuri.

Keksinnön mukaiset uudet yhdisteet voivat siten kohottaa huomattavasti sellulaarista ja etenkin humoraalista 30 immuniteettia, nimenomaan sekä seoksena itse antigeenin kanssa (adjuvantti-efekti ahtaammassa mielessä) että myös ajallisesti ja paikallisesti antigeeni-injektiosta erillisenä annettuna (systeeminen immuniteetin kohottaminen).

Keksinnön mukaisia uusia yhdisteitä voidaan siten 35 käyttää adjuvantteina sekoitettuna rokotteisiin rokotuksen tuloksen parantamiseksi ja humoraalisten vasta-aineiden ja/ tai sellulaarisen immuniteetin välittämän infektiosuojän 33 72733 parantamiseksi bakteeri-, virus- tai parasiitti-taudinaiheuttajiin nähden.

Koeselostus I

Seuraavat yhdisteet on tutkittu oleellisesti alla esite-5 tyllä menetelmällä.

A = N-asetyyli-normuramyyli-L-seryyli-D-isoglutamiini, B = N-asetyyli-normuramyyli-L-(0-behenoyyli)-seryyli-D-iso-glutamiini ja C = N-asetyyli-muramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglu-10 tamiini

Yhdiste B on kuvattu tämän hakemuksen esimerkissä 11 ja yhdisteellä A on analoginen molekyylirakenne B:n kanssa, mutta siitä puuttuu seryylitähteen behenoyylisivuketju. Yhdiste C on kuvattu esimerkissä 7.

15 10 hiiren ryhmiä (kontrolliryhmä: 20) [naaraspuolisia

Tif: MF 2f(SPF)-hiiriä, joiden paino oli 14-16 g] käsiteltiin intranasaalisesti (10 mg/kg) kullakin em. yhdisteellä A, B ja C. Seitsemän päivän kuluttua hiiret infektoitiin 2 x 10^-1 x 10^ pfutlla (plaque forming units) influenssavirusta 20 A/Texas/1/77 (H3N2). 20 päivän kuluttua infektiosta vain 5-10 % eläimistä oli elossa ei-käsitellystä 20 hiiren kontrolliryhmästä, kun taas 40 %, 80 % ja 100 % hiiristä oli elossa yhdisteillä A, B ja vastaavasti C käsitellyistä ryhmistä. Useita samanlaisia testejä kuin yllä on selitetty, on 25 suoritettu vielä yhdellä yhdisteellä D, so. N-asetyyli-mura-myyli-L-alanyyli-D-isoglutamiini, joka on hyvin tunnettu mu-ramyylipeptidi, joka tunnetaan alalla lyhenteellä MDP. Näissä testeissä ei tällä yhdisteellä havaittu olevan minkäänlaista virusinfektioiden vastaista aktiivisuutta.

30 Yllä esitetyt koetulokset osoittavat selvästi tämän kek sinnön mukaisten yhdisteiden B ja C ylivoimaisuuden yhdisteisiin A ja D nähden.

34 7 2 7 3 3

Koeselostus II, ote - 12 - 7. Erilaisten MDP- tai nMDpl^-johdannaisten vaikutus hiiriin, jotka on infektoitu ihmisen influenssaviruksella 5 7.1» MDP:n γ- ja α-butyyliesterit (CGP 25601E ja CGP 26866E).

Kuvioissa 9 ja 10 esitetyissä kokeissa yhdisteet annettiin kerran intranasaalisesti viikkoa ennen influenssaviruksilla suoritettua infektiota. Verrattuna MTP-PE:hen nämä yhdisteet olivat joko inaktiivisia tai niillä oli ainoastaan kohtalainen suojaava aktiivisuus, joka ei koskaan ollut niin 10 suuri, että se olisi ollut tilastollisesti merkittävä. Samoin MDP:n «-butyylijohdannainen oli inaktiivinen yhden oraalisen, eri aikavälein infektion jälkeen tapahtuneen annostuksen jälkeen (taulukko 8 ja kuvio 11). Lisäksi tämä yhdiste oli inaktiivinen, kun annostettiin i.v. päivänä -7 tai 15 päivänä -1, mutta ne osoittivat hieman marginaalista aktiivisuutta, joka ei kuitenkaan ollut tilastollisesti merkittävä, annoksilla 10 - 100 mg kun annostettiin kerran i.v. joko päivänä 0 tai päivänä +1 (kuvio 12). MDP:n butyylijohdannaisilla saadut tulokset on koottu taulukkoon 9. Voidaan nähdä, 20 että yhdellekään näistä yhdisteistä ei voitu määrittää MED-arvoa.

1) nMDP: nor-MDP, jossa MDP:n maitohappo-osa on korvattu gly-kolihapolla.

tl 35 72733

Taulukko 9 ΜΡΡ-α-but;n (CGP 26866E), ΜΡΡ-γ-buttn (CGP 25601E) ja MTP-PE:n vaikutus erilaisilla ihmisen influenssa A- ja B-viruk-silla infektoiduissa hiirissä: yksi anto

5 Käsittely MED (mg/kg)D

päivä anto MDP- -but MDP- -but MTP-PE

-14 i.n. 0 (100)1 2 0 (10) °'1 _ 10 - 7 i.n. 0 (100) 0 (10) 0,1 - 1 + 3 p.o. 0 (100) n.t. < 1 1C + 7 p.o. 0 (100) n.t. 1-4 - 7 i.v. 0 (100) n.t. 7 - 70 - 2 i.v. 0 (100) 0 (100) 1-7 - 1 i.v. 0 (100) 0 (100) 1-7 0 i.v. 0 (100) 0 (100) 0,2 - 1 15 +1 i.v. 0 (100) 0 (100) 1-10 + 2 i.v. 0 (100) 0 (100) 8-15 minimal significant effective dose, pienin merkittävä tehokas annos 2 suluissa annetulla annoksella ei saavutettu MED-arvoa, n.t.

20 =not tested, ei testattu 36 72733

Lopuksi soveltuvat esitetyt yhdisteet sekoitettuina erilaisten antigeenien kanssa adjuvanteiksi terapiaan ja diagnostiikkaan tarkoitettujen antiseerumien kokeelliseen ja teolliseen valmistukseen ja immunologisesti aktivoitujen lymfo-5 syyttipolulaatioiden induktioon solunsiirtomenetelmiä var ten .

Tämän lisäksi voidaan uusia yhdisteitä käyttää ilman että lisätään samanaikaiset! antigeenejä, edistämään ihmisten ja eläinten jo tiedottomasti tapahtuvia immuunireaktioi-10 ta. Yhdisteet soveltuvat siten etenkin ruumillisen torjunnan stimuloimiseksi, esim. kroonisissa tai akuuteissa infektioissa tai selektiivisissä (antigeeni-spesifisissä) immunologisissa puutoksissa, sekä synnynnäisissä, mutta myös hankituissa yleisissä (so. ei antigeeni-spesifisissä) immunologisis-15 sa puutostiloissa, kuten ne esiintyvät ikäännyttäessä, vai-kessa primäärisairauksissa ja ennen kaikkea ionisoivilla säteillä tai immunosuppressiivisesti vaikuttavilla hormooneil-la tapahtuvan terapian jälkeen. Mainitut aineet voidaan siten antaa mieluimmin myös yhdistettynä antibiootteihin, ke-20 moterapeuttisiin aineisiin tai muihin lääkeaineisiin. Esite tyt aineet soveltuvat myös ihmisten ja eläinten infektiosairauksien yleiseen profylaksiaan (ennakkoehkäisyyn).

Kaavan (I) mukaisten glukoosijohdannaisten yhdistäminen antibiootteihin saa aikaan antibiootin aktiviteetin kohoami-25 sen.

Menetelmä antibioottien antibioottisen aktiviteetin kohottamiseksi tunnetaan siitä, että kaavan (I) mukaista pyra-noosijohdannaista, erityisesti muramyyli- tai normuramyyli-yhdistettä annetaan yhdessä antibiootin kanssa. Tällöin voi-daan pyranoosijohdannainen antaa korkeintaan 24 tuntia ennen tai jälkeen antibioottia, mieluimmin kuitenkin suunnilleen samanaikaisesti antibiootin kanssa. Yhdistelmässä käytetään erityisesti yllä edullisiksi mainittuja muramyyli- ja normu-ramyyliyhdisteitä.

37 7 2 7 3 3

Antibioottien antaminen tapahtuu tavanomaista tietä, siis subkutaanisti, laskimoon tai oraalisesti, kun taas mura-myylipeptidit annetaan useimmiten subkutaanisti, etenkin silloin kun niitä ei anneta yhdessä antibioottien kanssa.

5 Keksinnön mukaisten pyranoosijohdannaisten kanssa yh distettäväksi sopivia antibiootteja ovat etenkin sellaiset, jotka kuuluvat ryhmiin β-laktaamiantibiootit, aminoglyko-sidit, tetrasykliinit, makrolidit, linkomysiinit, polyeeni-antibiootit, polypeptidi-antibiootit, antrasykliinit, klor-10 tai tiamfenikolit, sykloseriinit, fusidiinihapot tai rifa-mysiinit.

Parhaimpana pidettyjä antibiootteja ovat β-laktaa-meista penisilliinit, kefalosporiinit, peneemit, nokardi-siinit, tienamysiinit ja klavulaaniyhdisteet, esim. klavu-15 laanihappo.

Penisilliini-antibiooteista mainittakoon ensisijassa amoksisilliini, ampisilliini, karbenisilliini, kloksasil-liini, syklasilliini, dikloksasilliini, mesillinaami, meti-silliini, penisilliini G, penisilliini V, pivampisilliini, 20 sulbenisilliini, atslosilliini, tikarsilliini, metslosil- liini, pivmesillinaami tai 6-(4-endo-atsatrisykloi5.2.2.

0 ' )undek-8-enyyli)-metyleeniamino-penisillaanihappo.

Kefalosporiinien ryhmästä mainittakoon esim. kefa-kloori, kefatsafluuri, kefatsoliini, kefadroksiili, kefok-25 sitiini, kefurcksiimi, kefasetriili, kefaleksiini, kefalo-glysiini, kefaloridiini, kefalotiini, kefamandoli, kefano-ni, kefapiriini, kefatritsiini, kefradiini, kefroksadiini (7β-(D-2-amino-2-(1,4-sykloheksadienyyli)-asetamido)-3-metoksi-3-kefem-4-karboksyylihappo = CGP 9000), kef sulodiini , 20 kefotaksiimi, kefotiami, keftetsoli tai kefatsedoni.

Nokardisiineista mainittakoon esim. nokardisiini A ja tienamysiineistä ja klavulaanihapoista mainittakoon esim. tienamysiini tai vast, klavulaanihappo.

Aminoglykosideista mainittakoon etenkin streptomysii- 72733 38 nit (esim. streptomysiini ja streptomysiini Λ) , neomysii-nit (esim. neomysiini B), tobramysiinit (esim. tobramysii-ni tai debekasiini) , kanamysiinit (esim. kanamysiini A:n, B:n ja C:n seokset), sekä amikasiinit, gentamvsiinit (esim.

5 gentamysiini A:n, C^:n, C2 = n tai :n seokset) tai siso- misiinit (esim. sisomisiini tai netalmisiini), edelleen li-vidomysiini, ribokamysiini tai paromomysiini.

Tetrasykliineistä mainittakoon etenkin tetrasykliini, doksisykliini, klooritetrasykliini, oksitetrasykliini tai 10 metasykliini.

Makrolideista mainittakoon esim. maridomysiini, spi-ramysiinit, esim. spiramysiini I, II ja III, ervtromysiinit, esim. erytromysiini, oleandomysiinit, esim. oleandomysiini ja tetra-asetyylioleandomysiini, ja linkomysiineistä mar's 5 nittakoon esim. linkomysiini ja klindamysiini.

Polyeeni-antibiooteista mainittakoon etenkin amfo-terisiini B ja sen metyyliesterit tai nystatiini.

Polypeptidi-antibiooteista mainittakoon etenkin esim. kolistiini, gramisidiini S, polymyksiini B, virginiamysii-20 ni, tyrotrisiini, viomysiini tai vankomysiini.

Yllämainitut yhdistelmävalmisteet sisältävät annosyksikköä kohti tavalliset määrät antibioottia, esim. 50-1000 mg, yleensä 100-500 mg. Pyranoosijohdannaisen määrä riippuu käytettävästä annostustavasta. Niinpä se on 25 oraalisesti annettavia valmisteita varten korkeampi kuin ruiskutettavia valmisteita varten. Oraalisesti annettavat valmisteet sisältävät 1 mg:sta aina korkeintaan puolet an-tibioottimäärästä kaavan (I) mukaista pyranoosijohdannaista, yleensä 5-50 mg. Mahanesteresistenttejä päällystetab-30 lettejä varten voi annostus olla myös pienempi kuin 1 mg (aina 0,01 mg) muramyylipeptidiä tablettia kohti. Ruiskutettavat valmisteet sisältävät 10 ym - 50 mg, mieluimmin 100 yg - 10 mg pyranoosijohdannaista. Nämä valmisteet voivat, erityisesti silloin kun niitä käytetään oraalises-35 ti sisältää vielä tavanomaisia määriä farmakologisia kantaja-aineita, jatko- ja/tai laimennusaineita. Erityisesti ruiskutettavia valmisteita varten ovat myös liposomaaliset 72733 39 annostusmuodot sopivia.

Erityisen maininnanarvoisia ovat farmaseuttiset tai eläinlääketieteelliset valmisteet sekä rehuaineet tai re-hunlisäaineet, jotka sisältävät tehokkaan annoksen tai te-5 hokasta annosta pienemmän annoksen mainittuja antibiootteja ja lisäksi kaavan (I) mukaista muramyylipeptidiä.

yllämainitussa menetelmässä käytetään tehokas ta annosta tai tehokasta annosta pienempää annosta antibioottia, aina riippuen viimemainituista, esim. noin 10-10 1000 mg, erityisesti noin 50 - noin 500 mg yksikköannosta kohti.

Kaavan (I) mukaisten pyranoosijohdannaisten ja niiden suolojen annostus riippuu annostustavasta, ja vastaa farmaseuttisia valmisteita varten mainittuja annostuksia ja 15 ovat esimerkiksi noin 70 kg painavalle lämminveriselle 1 mg - 100 mg päivittäin (oraalisesti).

Uusien valmisteiden ja uuden menetelmän korkea antibioottinen vaikutus voidaan osoittaa "in vivo"-kokeilla, jotka suoritetaan eri eläinlajeilla, etenkin nisäkkäillä, 20 esim. hiirillä. Tätä varten eläimet tartutetaan patogeenisen mikro-organismin letaalisella tai subletaalisella annoksella ja annetaan sitten mainittu uusi valmiste tai vast, muramyylipeptidin ja antibiootin yksittäiset annokset. Vaikutus määritetään ED^-arvona, joka on se annos, 25 joista 50 % eläimistä jää eloon.

Nyt havaittiin yllättäen että estetään ja torjutaan erittäin suuressa määrin infektiota, joka on aiheutettu patogeenisillä taudinsiemenillä, etenkin vähemmän vaikutettavilla gramnegatiivisilla bakteereilla, kuten esim.

30 Aerobakter-, Brucella-, Escherichia-, Klebsiella-, Malleo-myces-, Neisseria-, Pasteurella-, Proteus-, Pseudomonas-, Shigella- ja Vibrio-kannoilla, mutta myös grampositiivi-silla bakteereilla, kuten Aktinomycetes-, Clostridia-, Corynebacterium-, diplokokki-, mykobakteeri- tai stafylo-35 kokki-kannoilla, tai sienillä, kuten Candida Albicans,

Cryptokokkus neoformans, Plastomyces dermititides tai Hys-toplasma capsulatum.

72733 40 Tämän hakemuksen mukaiset farmaseuttiset valmisteet ovat mieluimmin tabletteja tai liivatekapseleita, jotka sisältävät aktiiviaineen yhdessä laim nnusaineiden, esim. laktoosin, dekstroosin, sakkaroosin, manniitin, sorbiitin, 5 selluloosan ja/tai glukoosin kanssa ja voiteluaineiden, esim. piimään, talkin, steariinihapon tai sen suolojen, kuten magnesium- tai kalsiumstearaatin, ja/tai polyetylee-niglykolin kanssa. Tabletit sisältävät myös sideaineita, esim. magnesiumaluminiumsilikaattia, tärkkelyksiä, kuten 10 maissi-, vehnä-, riisi- tai arrowjuuritärkkelystä, liivatetta, traganttia, metyylisellulosaa, natriumkarboksime-tvylisellulosaa ja/tai polyvinyylipyrrolidonia ja haluttaessa hajotusaineita, esim. tärkkelyksiä agaria, algiini-happoa tai sen suolaa, kuten natriumalginaattia ja/tai 15 kuohuseoksia, tai adsorptioaineita, väriaineita, makuai neita ja makeutusaineita. Injektoitavat valmisteet ovat mieluimmin isotonisia, vesipitoisia liuoksia tai suspensioita. Suppositoriot, salvat tai voiteet ovat ensisijassa rasvaemulsioita tai -suspensioita. Farmaseuttiset valmis-20 teet voivat olla steriloituja ja/tai ne voivat sisältää apuaineita, esim. säilöntä-, stabilointi-, kostutus- ja/tai emulgointiaineita, liukoisuutta edistäviä aineita, suoloja osmoottoisen paineen säätämiseksi ja/tai puskureita. Nämä farmaseuttiset valmisteet, jotka haluttaessa voivat sisäl-25 tää muita farmakologisesti arvokkaita aineita, valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla esim. tavallisen sekoitus-, granulointi- tai rakeistamismenetelmän avulla, ja ne sisältävät noin 0,1 % noin 70 %, erityisesti noin 1 % noin 50 % mainittua aktiiviainetta.

30 Tämän hakemuksen mukaiset oraalisesti annostettavat valmisteet voivat myös olla päällystetyt mahanestettä kestävällä päällysteellä.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä sitä millään tapaa rajoittamatta.

35 Yleistä: Annetut R^-arvot saadaan Merck'in piihappo- geeliohutkerroslevyillä. Ajoliuoksen pitoisuus käytetyssä ajoliuosseoksessa on annettu tilavuusosissa (til./til.).

Il 72733 41 Lämpötilat on annettu Celsius-asteina.

Esimerkki 1:

Liuokseen, jossa on 1,9 g N-asetyyli-1a-0-bentsyyli- 4,6-0-isopropylideeni-normuramyyli-L-0-(N-behenoyyli-gly-5 syyli)-seryyli-D-isoglutamiini-tert.butyyliesteriä liuotettuna 20 ml:aan abs. etikkahappoetyyliesteriä, lisätään huoneen lämpötilassa, samalla hämmentäen ja kosteudelta suojaten, 20 ml 4,5 normaalista kloorivetyhappoliuosta samassa liuottimessa. Muutaman minuutin kuluttua kiteisenä 10 saostuvaan tuotteeseen lisätään, sen jälkeen kun sitä on hämmennetty tunnin ajan, 30 ml eetteriä, sakka imusuodate-taan, pestään ja kuivataan natronasbestilla, saanto 1,6 g Rf-arvo 0,55 (kloroformi;metanoli:vesi = 70:30:5).

1 g (1,05 mmoolia) edellä saatua tuotetta liuotetaan 15 20 ml:aan dimetoksietaani/vettä 10:1 ja hydrataan 0,2 g:n

Pd-hiiltä (10 %) läsnäollessa 20 tuntia 20°:ssa ja 24 tuntia 35°:ssa. Katalysaattori suodatetaan pois, pestään samalla liuotinseoksella ja suodos, joka ohutkerroskromato-grafian mukaan sisältää ainoastaan sivutuotteita, heite-20 tään pois.

Tuote (0,53 g) saadaan uuttamalla tarkasti katalysaattori kloroformi/etikkahappoetyyliesterillä 1:1 ja meta-nolilla, ja se puhdistetaan edelleen kromatografoimalla piihappogeelillä (1:100) systeemissä kloroformi/metanoli/ 25 vesi 70:30:5 (3 ml fraktiot). Fraktioissa 66-125 saostunut aine, osittain Na-suolana (=piihappogeelistä), liuotetaan veteen, laitetaan vahvasti happamaan ioninvaihtopyl-vääseen (Dowex 50, H-muoto) ja eluoidaan ensin vedellä, sen jälkeen dimetoksietaani/vedellä 1:1 (2 ml fraktiot).

30 Eluaatit yhdistetään ja dimetoksietaani haihdutetaan tyhjössä. Tämä suspensio muutetaan liuokseksi lisäämällä tert.-butanolia, suodatetaan Millipore-suodattimella (teflon; 0,2 y) ja lyofilisoidaan.

Jäljelle jää 0,327 g (36 %) N-asetyyli-normuramyyli-35 L-(O-(N-behenoyyli-glysyyli))-seryyli-D-isoglutamiinia pehmeänä jauheena, jonka R^ = 0,19 (kloroformi:metanoli:vesi = 70:30:5), R^ = 0,38 (asetonitriili:vesi = 3:1), R^ = 0,45 72733 42 (etikkahappoetyyliesteri:n-butanoli:pyridi ini :jääetikka : vesi = 42:21:21:6:10).

Tässä esimerkissä käytettyä lähtöainetta voidaan saada seuraavalla tavalla: 5 2,3 g N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylidee- ni-normuramyyli-L-(O- (N-karbobentsoksi-glysyyli])-seryyli-D-isoglutamiini-tert.butyyliesteriä liuotetaan 50 ml:aan dimetoksietaani/vettä 20:1 ja lisätään 0,5 g Pd-hiiltä (10 %), jonka jälkeen käsitellään vedyllä 20 minuutin ajan.

10 Liuoksen pH pidetään pH-arvossa 5 lisäämällä C,1N KCl:ää (vesipitoinen). Katalysaattori suodatetaan pois, reaktio-liuos haihdutetaan ja jäännös kuivataan fosforipentoksidil-la. 2 g näin saatua ainetta liuotetaan 20 ml:aan pyridii-niä, lisätään 0,26 g N-metyylimorfoliinia ja C°:ssa lisä-15 tään samalla hämmentäen 1,9 g beheenihappokloridia liuotettuna 1 ml:aan metyleenikloridia.

Hämmennetään 4 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen pyridiini haihdutetaan alennetussa paineessa, jäännös liuotetaan 200 ml:aan etikkahappoetyyliesteriä ja uute-20 taan joka kerta 20 ml:n annoksella seuraavasti: 2 kertaa vedellä, sen jälkeen 2 kertaa natriumbikarbonaattiliuoksel-la (0,3 %) ja lopuksi vielä 3 kertaa vedellä. Kuivataan natriumsulfaatilla, jonka jälkeen liuotin haihdutetaan ja jäännös kromatografoidaan piihappogeelillä (1:50) systee-25 missä kloroformi/isopropanoli = 95:5 (15 ml fraktiot).

Vastaavat fraktiot (265-370) yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin ja saadaan 2,0 g N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-0-isopropylideeni-normuramyyli-L-O-(N-behenoyyli-glysyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-tert-butyyliesteriä heikosti kel-30 lertävänä vaahtona, = 0,85 (kloroformi:metanoli:vesi = 70:30:5), = 0,27 (kloroformi:isopropanoli:jääetikka = 70:8:2).

2,5 g (3,7 mmoolia) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-0-isopropylideeni-normuramyyli-L-seryyli-D-isoglutamiini-35 tert.butyyliesteriä, 0,75 g karbobentsoksiglysiiniä, 0,45 g dimetyyliaminopyridiiniä ja 1,0 g 1-hydroksibentstriatso-lia liuotetaan 25 mitään dimetyyliformamidia. Jäähdyte-

II

43 72733 tään 0°:seen, lisätään 0,85 g disvkloheksyylikarbodi-imidiä ja hämmennetään seosta 22 tuntia huoneen lämpötilassa. Suspensio suodatetaan ja sakka pestään etikkahappoetyylieste-rillä. Suodokset yhdistetään ja niiden tilavuus säädetään 5 250 ml:aan lisäämällä vielä etikkahappoetyyliesteriä, pes tään 3 kertaa, joka kerta 20 ml:11a vettä, 3 kertaa, joka kerta 20 ml:11a 2 % natriumbikarbonaattiliuosta ja lopuksi 4 kertaa vedellä. Kuivataan natriumsulfaatilla, jonka jälkeen liuotin haihdutetaan ja jäännös kromatografoidaan pii- 10 happogeelillä seoksessa kloroformi/isopropanoli = 9:1 (10 ml fraktiot). Fraktiot 75-190 yhdistetään, haihdutetaan kuiviin ja väritön vaahto kiteytyy sen jälkeen kun se liuotetaan 20 ml:aan etikkahappoetyyliesteriä ja tähän lisätään 20 ml eetteriä ja 100 ml petrolieetteriä. Imusuodatetaan 15 ja tyhjössä kuivaamisen jälkeen jäljelle jää 2,7 g (87 %) N-asetyyli-1 cx-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-normuramyy-li-L-(O-(N-karbobentsoksi-glysyylil)-seryyli-D-isoglutamii-ni-tert.-butyyliesteriä, jonka hajoamispiste on 104°, (a)j^ = -75 + 1° (c = 0,9, etikkahappoetyyliesteri), R^ = 0,78 20 (kloroformitmetanoli:vesi = 70:30:5), Rf = 0,30 (kloroformi: isopropanoli: jääetikka = 70:8:2).

7,0 g (14,35 mmoolia) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-normuramiinihappo-Na-suolaa suspendoi-daan 70 ml:aan dimetyyliformamidia, lisätään 4,7 g L-seryy-25 li-D-isoglutamiini-tert.-butyyliesteri-hydrokloridia ja 4,3 g N-etoksikarbonyyli-2-etoksi-1,2-dihydrokinoliinia ja seosta hämmennetään 19 tuntia huoneen lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin, laitetaan jäännös piihappogeelipylvää-seen (1:20), pestään muodostunut kinoliini alas klorofor-30 millä ja eluoidaan tuote kloroformi/metanolilla = 95:5, 5 ml:n fraktioihin. Fraktioissa 35-100 saatu puhdas aine yhdistetään. Saadaan 6,6 g (68 %) N-asetyyli-1α-0-bentsyy-li-4,6-O-isopropylideeni-normuramyyli-L-seryyli-D-isoglu-tamiini-tert.-butyyliesteriä värittömänä vaahtona, jolla 35 on (°0p^ = + 81 t 1° (c = 1 , metanoli) .

Esimerkki 2: 2,5 g N-asetyyli-1 cx-O-bentsyyli-4,6-0-isopropylidee- 72733 44 ni-normuramyyli-L- (O-behenoyyli) -seryyli-D-isoglutamiini-tert.-butyyliesteriä lohkaistaan etikkahappoetyyliesterik-si esimerkissä 1 esitetyllä tavalla 40 ml:11a 2N HCL:ää. Hämmennetään tunnin ajan huoneen lämpötilassa, jonka jäl-5 keen tuote saostetaan lisäämällä 50 ml abs. eetteriä, hämmennetään 15 minuuttia, jonka jälkeen suodatetaan kylmässä ja sakka kuivataan natronasbestilla, Rf = 0,43 (klorofor-miimetanoli:vesi = 70:30:5).

Heikosti epäpuhdasta tuotetta hydrataan 25 ml:ssa di-10 metoksietaani/vettä = 20:1 palladium-bariumsulfaatti-kata-lysaattorin (10 %) läsnäollessa 65 tunnin ajan. Katalysaattori suodatetaan pois, pestyt ja yhdistetyt suodokset haihdutetaan kuiviin (0,8 g). Jäännös kromatografoidaan 2 kertaa piihappogeelillä (1;50) systeemissä kloroformi/ 15 metanoli = 7:3 (5 ml fraktiot), vastaavat fraktiot yhdistetään ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan dime-toksietaani/veteen 1:1 ja kuten edellä, poistetaan suola 10 ml:11a Dowex 50, H-muodossa. Eluaatti haihdutetaan, lisätään tert.-butanolia ja suodatetaan Millipore-suodatti-20 mella (Teflon, 0,2 u), jonka jälkeen lyofilisoidaan. Saadaan 0,246 g N-asetyyli-normuramyyli-L-(0-behenoyy1i)-se-ryyli-D-isoglutamiinia värittömänä pulverina. R*. = 0,23 (kloroformi-.metanoli:vesi = 70:30:5), Rf = 0,59 (aseto-nitriili:vesi = 3:1), = 0,39 (etikkahappoetyyliesteri: 25 n-butanoli:pyridiini:jääetikka:vesi = 42:21:21:6:10).

Lähtöaine saadaan seuraavasti: 1,5 g N-asetyy1i — 1a-O-bentsyyli-4,6-0-isopropylidee-ni-normuramyyli-L-seryyli-D-isoglutamiini-tert.-butyyliesteriä liuotetaan 15 ml:aar. pyridiiniä, jäähdytetään 0°: seen 30 ja lisätään 1,6 g behenhappokloridia liuotettuna 0,5 ml:aan dikloorimetaania. Hämmennetään 22 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen pyridiini tislataan pois alennetussa paineessa. Kellertävä öljy liuotetaan 200 ml:aan etikka-happoetyyliesteriä ja pestään kylmässä 2 kertaa, joka ker-35 ta 15 ml:11a 1N sitruunahappoliuosta, 2 kertaa, joka kerta 15 ml: 11a vettä, sen jälkeen 2 kertaa 5 'h: i soi la natriumbi-karbonaattiliuoksella ja taas vedellä. Kuivataan natrium- li 72733 45 sulfaatilla, jonka jälkeen liuotin poistetaan. Saadaan 2,5 g N-asetyyli-1a-0-bentsyyli-4,6-0-isopropylideeni-nor-muramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglytamiini-tert.-butyyliesteriä, jonka Rf = 0,85 (kloroformirmetanoli:vesi 5 = 70:30:5), Rf = 0,43 (kloroformi:isopropanoli:jääetikka = 70:8:2). (a)p0 = +43° (c = 0,611, kloroformi).

Esimerkki 3:

Liuosta, jossa on 0,40 g N-asetyyli-1α-0-bentsyyli-muramyyli-L-(O-(N-(DL-2-n-heksadekanoyyliamino-n-heksade-10 kanoyyli}-L-alanyyli])-treonyyli-D-isoglutamiini^-bentsyy-liesteriä 30 ml:ssa dimetyyliasetamidia, käsitellään vedyllä 8 päivää 2 g:n palladium-barium-katalysaattoria (10 %) läsnäollessa. Katalysaattori suodatetaan pois, suodos haihdutetaan kuiviin ja jäännös kromatografoidaan jäljellä ole-15 van disykloheksyylikarbamidin poistamiseksi piihappogee-lillä (1:100) systeemissä kloroformi/metanoli 8:2 (2 ml fraktiot). Fraktioissa 225-257 oleva debentsyloitu aine haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan veteen, joka on tislattu kahteen kertaa, suodatetaan teflon-suodattimella 20 (Millipore, 0,2 u) ja liuos lyofilisoidaan.

Näin saadaan N-asetyyli-muramyyli-L-O-(N-{DL-2-n-heksadekanoyyliamino-n-heksadekanoyyli}-L-alanyyli)-treo-nyyli-D-isoglutamiinia pehmeänä jauheena (0,17 g) natrium-suolan muodossa, (a)^° = +1 ± 1° (c = 0,5, vesi), = 0,33/ 25 0,30 (diastereomeeripari, kloroformi/metanoli/vesi = 70:30: 5) ja = 0,75 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyri-diini/jääetikka/vesi = 42:21:21:6:10).

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Liuokseen, jossa on 0,38 g DL-2-n-heksadekanoyyli-30 amino-n-heksadekaanihappoa ja 0,173 g N-hydroksi-sukkiini-imidiä seoksessa, jossa on 5 ml 1,2-dimetoksietaania, 2 ml dimetyyliformamidia ja 2 ml kloroformia, lisätään 0,185 g disykloheksyylikarbodi-imidiä. Hämmennetään puoli tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen lisätään 0,622 g N-35 asetyyli-1a-O-bentsyyli-muramyyli-L-(O-L-alanyyli)-treo- nyyli-D-isoglutamiini-y-bentsyyliesteri-trifluoriasetaattia ja 0,09 ml N-metyylimorfoliinia ja huuhdotaan 2 ml:11a edel- 72733 46 lä mainittua seosta- Hämmennetään 23 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen suspensio laimennetaan 10 ml:11a etikkahappoetyyliesteriä, hämmennetään 30 minuuttia jää-hauteessa ja suodatetaan. Suodosjäännöstä hierretään use-5 aan kertaan metanolin, veden ja taas metanolin kanssa, jonka jälkeen saadaan 0,7 g N-asetyyli-1 ct-O-bentsyyli-muramyy-li-L-O-(n-{DL-2-n-heksadekanoyyliamino-n-heksadekanoyyli}-L-alanyyli)-treonyyli-D-isoglutamiini-y-bentsyyliesteriä, joka vielä sisältää epäpuhtautena disykloheksyy1ikarbarci-10 dia, R^ = 0,35/0,31 (diastereoisoraeeriseos, kloroformi/me-tanoli 9:1).

1 g N-asetyyli-1 ct-O-bentsyyli-4,5-0-isopropylideeni-muramyyli-L-O-ftert.-butyyiioksikarbonyyli-L-alanyyli)-treonyyli-D-isoglutamiini-v-bentsyyliesteriä liuotetaan 15 15 ml:aan trifluorietikkahappoa, annetaan seistä 90 minuut tia huoneen lämpötilassa. Reaktioliuos haihdutetaan voimakkaasti 25°:ssa pyöröhaihduttimessa ja tuote saostetaan lisäämällä 20 ml dietyylieetteriä. Sakan päällä oleva liuos dekantoidaan pois, jäännöstä hierretään uuden eette-20 rin kanssa ja joka taas kaadetaan pois. Sama operaatio toistetaan ja jäännös kuivataan natronasbestilla (Merck AG), jonka jälkeen saadaan 0,74 g N-asetyyli-1a-0-bentsyyli-muramyy-li-L-(O-L-alanyyli)-treonyyli-D-isoglutamiini-y-bentsyyli-esteri-trifluoriasetaattia värittömänä jauheena, jonka R^ 25 = 0,40 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5) ja = 0,52 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/jääetikka/ vesi = 42:21:21:6:10).

2,2 g N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylidee-ni-muramyyli-L-treonyyli-D-isoglutamiini-γ-bentsyylieste-30 riä, 0,57 g N-BOC-L-alaniinia, 0,367 g dimetyyliaminopyri-diiniä ja 0,811 g N-hydroksibentstriatsolia liuotetaan peräjälkeen seokseen, jossa on 10 ml dimetyyliformamidia ja 5 ml dikloorimetaania. Jäähdytetään 0°:seen, jonka jälkeen lisätään 1,24 g disykloheksyylikarbodi-imidiä ja seos-35 ta hämmennetään 25 tuntia huoneen lämpötilassa. Jatkotyöskentelyä varten laimennetaan etikkahappoetyyliesterillä (250 ml), liukenematon disykloheksyy1ikarbamidi imusuodate- 72733 47 taan ja suodos uutetaan käyttäen joka kerta 20 ml:n annoksia (3 kertaa), vedellä, 0,6N sitruunahappoliuoksella, kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja taas vedellä.

Liuottimen haihduttamisen jälkeen L-alaniinin osit-5 täisen rasemisoimisen takia diastereomeeriseoksena saostuva tuote voidaan taas erottaa komponentteihin kromatogra-fisesti piihappogeelilla (1:50) kloroformi/metanolissa = 95:5. Ohutkerroskromatografiässä nopeammin etenevä L-alaniinin sisältävä diastereomeeri (pääosa, 1 g) on N-asetyy-10 li-1α-0-bentsyyli-4,6-0-isopropylideeni-L-(O-(tert.-butyy-lioksikarbonyyli-L-alanyyli))-treonyyli-D-isoglutamiini-γ-bentsyyliesteri, jonka = 0,52, D-alaniinin sisältävän isomeerin = 0,48 (systeemi: kloroformi/metanoli = 9:1).

8,9 g N-asetyyli-1a-bentsyyli-4,6-O-isoproylideeni-15 muramiinihappo-Na-suolaa, 6,8 g L-treonvyli-D-isoglutarr.ii-ηϊ-γ-bentsyyliesterihydrokloridia ja 4,2 g N-hydroksisuk-kiini-imidiä suspendoidaan seokseen, joka muodostuu 30 ml: sta dimetyyliformamidia ja 6 ml:sta dikloorimetaania. Jäähdytetään 0°:seen, lisätään 4,51 g disykloheksyylikarbodi-20 imidiä ja hämmennetään seosta 16 tuntia huoneen lämpötilassa. Paksu suspensio laimennetaan 50 ml:11a etikkahappo-etyyliesteriä, sakka imusuodatetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin. Näin saatu jäännös liuotetaan 300 ml:aan etikka-happoetyyliesteriä ja kylmässä pestään tavalliseen tapaan 25 vedellä, 0,6N sitruunahappoliuoksella, kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja taas vedellä.

Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäljelle jäävä öljy kromatografoidaan piihappogeelillä (1:20) systeemissä kloroformi/metanoli 95:5. Fraktiot 25-47 sisältävät 9,7 g 30 (70 % teor.) puhdasta N-asetyyli-1a-0-bentsyyli-4,6-0-iso- propylideeni-muramyyli-L-treonyyli-D-isoglutamiini-y-bent-syyliesteriä, edelleen voidaan saada 10 % kromatografoimal-la uudelleen seosfraktiot, (a)^° = +92° ± 1° (c = 1; me-tanoli), R^ = 0,84 (kloroformi/metanoli/vesi = 75:30:5) ja 35 Rf = 0,49 (kloroformi/metanoli =9:1).

9,12 g N-BOC-L-treonyyli-D-isoglutamiini-y-bentsyy-liesteriä liuotetaan 150 ml:aan kuivaa etikkahappoetyyli- 72733 48 esteriä ja tähän lisätään huoneen lämpötilassa samalla hämmentäen ja kosteudelta suojaten yhtä suuri tilavuus 4,5-normaalista suolahapon liuosta etikkahappoetyyliesterissä. Lohkeamistuotteen heti alkava erottuminen on tapahtunut 5 täydellisesti 1 1/4 tunnin kuluttua 200 ml:n dietyylieet-teri-lisäyksen jälkeen. Sakka suodatetaan pois, pestään eetterillä ja kuivataan tyhjössä natriumasbestilla (Merck AG). Saadaan 7,4 g (95 % teor.) L-treonyyli-D-isogluta-miini-v-bentsyyliesteri-hydrokloridia värittömänä jauheena, 10 hajoamispiste 196-198°, (a)j^ = +13° ± 1° (c = 1; metano- li), = 0,71 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5) ja = 0,80 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/jää-etikka/vesi = 42:21:21:6:10).

Lähtöaine saadaan seuraavasti: 15 5,48 g BOC-L-treoniinia ja 6,82 g D-isoglutamiini-v- bentsyyliesteri-hydrokloridia suspendoidaan seokseen, jossa on 10 ml dimetyyliformamidia ja 50 ml etikkahappoetyy-liesteriä ja lisätään 2,78 ml N-metyylimorfoliinia ja 6,18 g 1-etoksikarbonyyli-2-etoksi-1,2-dihydrokinoliinia (EEDQ), 20 jonka jälkeen hämmennetään 7 tuntia huoneen lämpötilassa. Oranssin keltainen suspensio liuotetaan 300 ml:aan etikka-happoetyyliesteriä ja pestään tavalliseen tapaan. Liuottimen poishaihduttamisen jälkeen jäljelle jäävä neutraali-aine puhdistetaan kromatografisesti piihappogeelillä (1:25) 25 systeemissä kloroformi/metanoli = 95:5. Puhtaat fraktiot yhdistetään. Saadaan 10,2 g N-BOC-L-treonyyli-D-isogluta- miini-v-bentsyyliesteriä värittömänä hartsina, J J k 1 546 nm = -13 ± 1° (c = 1; metanoli), = 0,65 (kloroformi/meta noli/vesi = 70:30:5) ja = 0,80 (asetonitriili/vesi = 30 3:1).

Esimerkki 4:

Vastaavalla tavalla kuin on esitetty edellä olevissa esimerkeissä voidaan saada, lähtemällä vastaavista lähtöaineista, seuraavat yhdisteet: 35 N-bentsoyyli-normuramyyli-L-(O-stearoyyli)-seryyli-D-iso- « 72733 glutamiini, N-asetyyli-muramyyli-L-(O-(ω-n-stearoyyliamino-n-undekano-yyli))-treonyyli-D-isoglutamiini, N-asetyyli-muramyyli-L-(S-stearoyyli)-kysteinyyli-D-iso-glutamiini, 10 N-asetyyli-muramyyli-L-(c )-(tetrakosyyliamino-glysyyli)-glutamyyli-D-isoglutamiini, N-asetyyli-muramyyli-L-((C )-lauryyli)-glutamyyli-D-isoglutamiini , N-asetyyli-normuramyyli-L-(γ-stearoyyliamino)-a-amino-bu-15 tanoyyli-D-isoglutamiini.

Esimerkki 5: 1,09 g (3 mmoolia) 2-fenyyli-4,5-(3-O-karboksimetyy- 2 li-5,6-O-isopropylideeni-D-glukofurano)-Δ -oksatsoliinia ja 0,35 g N-hydroksisukkiini-imidiä liuotetaan 6 ml:aan di-20 metyylitormamidia, jäähdytetään jäähauteessa ja lisätään 0,74 g (3,6 mmoolia) disykloheksyylikarbodi-imidiä. 30 mi nuutin kuluttua lisätään 0,45 ml trietyyliamiinia ja tiputetaan hitaasti, samalla hyvin hämmentäen liuos, jossa on 1,7 g L-(O-stearoyyli)-seryyli-D-glutamiinihappodimetyyli-25 esteri-hydrokloridia 10 ml:ssa dimetyyliformamidia. Hämmennetään vielä 0,5 tuntia jäähauteella jäähdyttäen ja 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktiotuotteella on = 0,64 ja se puhdistetaan seuraavalla tavalla:

Reaktioliuos haihdutetaan öljytyhjössä, jonka jälkeen 30 jäännös liuotetaan kloroformiin, ravistellaan kolme kertaa vedellä ja uutetaan vesipitoinen faasi CHCl^.-lla. CHCl^-faasin kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen puhdistetaan jäännös kromatografisesti piihappogeelillä G, Merck (elu-ointi kloroformilla ja CHCl^:asetonilla = 9:1). Saadaan 35 1,9 g (72,5 % teor.) puhdasta, suojattua muramyylipeptidiä amorfisena jauheena.

1,28 g tätä yhdistettä hydrolysoidaan 17 tunnin ajan 72733 50 40°:ssa seoksessa, jossa on 20 ml 0,1N suolahappoa ja 40 ml tetrahydrofuraania. Sen jälkeen neutraloidaan NaHC03~ liuokseila ja haihdutetaan tyhjössä. Näin saatu jäännös kromatografoidaan piihappogeelillä G, Merck, eluointi pe-5 räkkäin CHCl^rlla, CHCl^:asetonilla = 9:1, CHC10:asetonilla = 7:3 ja CHC13 :n\etanolilla = 9:1.

Saadaan 0,54 g (43,5 % teor.) N-bentsoyyli-normura-myyli-L-(O-stearoyyli-L-seryyli)-D-glutamiinihappo-dime-tyyliesteriä, jonka = 0,65 (CHCl3:metanoli = 85:15).

10 Saostamalla uudelleen eetteri/petrolieetteristä saadaan mikrokiteistä jauhetta, jonka sulamispiste on 56-61°, (α)ρ° = +25 ± 1° (c = 1; DMSO).

Lähtöaineena käytettyä O-stearoyyli-L-seryyli-D-gly-tamiinihappo-dimetyyliesteri-hydrokloridia saadaan seuraani 5 vasti:

Liuokseen, jossa on 4,1 g (2 mmoolia) tert.-butyyli-oksikarbonyyli-L-seriiniä, 4,23 g (2 mmoolia) D-glutamii-nihappo-dimetyyliesteri-hydrokloridia ja 1,01 g (2 mmoolia) N-metyylimorfoliinia 40 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisä-20 tään 5,4 g (2,2 mmoolia) 2-etoksi-N-karboetoksi-1,2-dihyd-rokinoliinia (EEDQ). Hämmennetään 16 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen muodostunut suspensio suodatetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin. öljymäinen jäännös liuotetaan 150 ml:aan etikkahappoetyyliesteriä ja kylmässä pestään 5 25 kertaa, joka kerta 50 ml:11a 2N sitruunahappoliuosta, sen jälkeen 2 kertaa, joka kerta 50 ml:11a vettä. Orgaaninen faasi kuivataan, haihdutetaan noin 40 ml:aan ja kiteytetään lisäämällä annoksittain 150 ml eetteri/petrolieetteriä = 2:1. Saadaan 4,95 g (79 %) tert.-butyylioksikarbonyyli-L-30 seryyli-D-glutamiinihappodimetyyliesteriä värittöminä neulasina, joiden sul.p. on 90-92°, Rf = 0,69 (asetonitriili/ vesi = 3:1), = 0,60 (n-butanoli/etikkahappo/vesi = 75: 75:21).

Liuokseen, jossa on 3,63 g (10 mmoolia) tert.-butyy-35 lioksi-L-seryyli-D-glutamiinihappodimetyyliesteriä 100 ml: ssa abs. pyridiiniä, lisätään tipoittain 15 minuutin kuluessa samalla hämmentäen, 3,03 g (10 mmoolia) steariini- 72733 51 happokloridia liuotettuna 30 ml:aan abs. 1 , 2-dimetoksietaa-nia. Annetaan seistä 30 tuntia 4°:ssa, jonka jälkeen saostunut pyridiinihydrokloridi suodatetaan pois, suodos haihdutetaan suurtyhjössä ja kuivataan (5,9 g).

5 5,5 g (8,7 mmoolia) vahamaista massaa liuotetaan 100 ml:aan abs. etikkahappoetyyliesteriä ja lisätään samalla hämmentäen ja kosteudesta suojaten 0°:ssa 40 ml kylmää 4,5N HCl:ää etikkahappoetyyliesterissä. Hämmennetään 45 minuuttia, jonka jälkeen etikkaesterifaasi uutetaan 4 kertaa, jo-10 ka kerta 50 ml:11a kylmää vettä, kuivataan ja liuottimen poishaihduttamisen jälkeen lyofilisoidaan 100 ml:sta tert.-butanolia. Saadaan 4,8 g O-stearoyyli-L-seryyli-D-gluta-miinihappo-dimetyyliesteri-hvdrokloridia vahvasti hygroskooppisena jauheena, (ct)p0 = +11 * 1° (c = 1,2; metanoli), 15 Rj - 0,46 (n-butanoli/etikkahappo/vesi = 75:7,5:21), = 0,83 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/etikka-happo/vesi = 42:21:21:6:10).

Esimerkki 6: 1,45 (4 mmoolia) 2-fenyyli-4,5-(3-O-karboksimetyyli- 2 20 5,6-isopropylideeni-D-glukofurano)-Δ -oksatsoliinia, 0,78 g hydroksibentstriatsolia, 1,07 g N-etyyli-N'-(3-dimetyy-liamino-propyyli)-karbodi-imidi-hydrokloridia ja 3 g L-O-behenoyyli-seryyli-D-isoglutamiini-γ-bentsyyliesteri-hydro-kloridia (4,4 mmoolia) liuotetaan 40 ml:aan abs. dimetyyli-25 formamidia ja pH-arvo säädetään 2,2 ml:11a trietyyliamiinia arvoon 7. 18 tunnin kuluttua huoneen lämpötilassa haihdu tetaan tyhjössä siirapiksi, liuotetaan etikkaesteriin ja ravistellaan vedellä, NaHCO^-liuoksella ja vielä vedellä. Na2SO^:llä kuivatusta orgaanisesta faasista saadaan haih-30 duttamisen jälkeen 2,5 g raakatuotetta, joka puhdistetaan kromatografisesti 80 g:11a Merck'in piihappogeelia, eluoin-ti CHCl^/metanolilla = 95:5. Saadaan 1,2 g suojattua mura-myylipeptidiä puhtaassa muodossa amorfisena aineena, jonka Rf = 0,55.

35 Oksatsoliinirenkaan avaamiseksi ja isopropylideeni- ryhmän poislohkaisemiseksi hydrolysoidaan 1,1 g suojattua muramyylipeptidibentsyyliesteriä seoksessa, jossa on 23 ml 72733 52 tetrahydrofuraania ja 17 ml 0,1N suolahappoa, 17 tunnin ajan 45 :ssa. Tämän jälkeen säädetään reaktioliuoksen pH NaHCO^-liuoksella arvoon 6 ja haihdutetaan tyhjössä kuiviin. Jäännös liuotetaan CHCl-^: etanoliin = 9:1, suodate-5 taan epäorgaaniset suolat Millipore-suodattimella ja saadaan 6G0 mg, 58 % teor., N-bentsoyyli-normuramyyli-L-(0-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-y-bentsyyliesteriä värittöminä kiteinä, joiden hajoamisalue on 170-180°, = 0,21 (CHCl3:metanoli = 9:1), (α)^° = +18 ± 1° (c = I; di- 10 metyylisulfoksidi).

500 mg saatua bentsyvliesteriä hydrataan 100 mg:11a 10 %:sta Pd/BaSO^ 10 ml:ssa dimetoksietaani/F^O = 9:1. Katalysaattorin erottamisen ja reaktioliuoksen haihduttamisen jälkeen saadaan hiertämällä jäännöstä lämpimän asetonin 15 kanssa 350 mg (77 % teor.) N-bentsoyyli-normuramyyli-L-(0-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiinia värittöminä kiteinä, jotka hajoavat alueella 166-172°, = 0,18 (CHCl3:metano- 11 = 7:1), (a)p° = +18 + 1° (c = 1, DMSO).

Lähtöaineena käytettyä L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-20 isoglutamiini-y-bentsyyliesteri-hydrokloridia valmistetaan seuraavasti: 16,4 g (80 mmoolia) N-tert.-butyylioksikarbonyyli-L-seriiniä, 21,81 g (80 mmoolia) D-isoglutamiini-v-bentyyli-esteri-hydrokloridia, 8,9 ml (80 mmoolia) N-metyylimorfo-25 liinia ja 21,7 g EEDQ:ta liuotetaan 250 ml:aan dimetyyli-formamidia ja hämmennetään huoneen lämpötilassa yön yli. Punertava suspensio haihdutetaan 30°:ssa pyöröhaihduttimes-sa, jäännös liuotetaan 1 litraan etikkahappoetyyliesteriä ja uutetaan 4 kertaa, joka kerta 200 ml:11a vettä. Kuivat-30 tu etikkaesterifaasi haihdutetaan noin 100 ml:aan ja tuote saostetaan lisäämällä 1 litra eetteri/petrolieetteriä (1:1). Sakan päällä oleva liuos dekantoidaan pois, öljymäistä ainetta hierretään useaan kertaan eetterin kanssa, jolloin se kiinteytyy. Kiteyttämällä etikkahappoetyyliesteri/pet-35 rolieetteristä (1:10) saadaan 27 g (79 %) N-tert.butyyli-oksikarbonyyli-L-seryyli-D-isoglutamiini-Y-bentsyyliesteriä, sul.p. 83-85°, (°0p^ = -9 “ 1 ° (c = 1 ; metanoli) , Rf

II

72733 53 = 0,14 (kloroformi/isopropanoli/etikkahappo = 70:8:2), = 0,90 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/etik-kahappo/vesi = 42:21:21:6:10).

Vastaavalla tavalla saadaan karbobentsoksi-D-serii-5 nistä ja D-isoglutamiini-y-tert.-butyvliesteristä karbo-bentsoksi-D-seryyli-D-isoglutamiini-y-tert.butyyliesteriä 70 %:n saannolla, sul.p. 126-128°, (a)^ = -7 + 1° (c = 2; etikkahappo), = 0,59 (kloroformi/metanoli/vesi - 70:30: 5), Rf = 0,17 (kloroformi/isopropanoli/etikkahappo = 70:8: 10 2) .

10,0 g (23,6 mmoolia) t-butyylioksikarbonyyli-L-seryyli-D-isoglutamiini-v-bentsyyliesteriä liuotetaan 60 ml:aan abs. pyridiiniä ja lisätään huoneen lämpötilassa 11,0 g (30,7 mmoolia) beheenihappokloridia 50 ml:ssa abs. 1,2-dimetok-15 sietaania. Tätä seuraavan reaktion (1 tunti) jälkeen reak-tioliuokseen lisätään 50 ml metanolia, 3 tunnin seisotta-misen jälkeen haihdutetaan ja liuotetaan 400 ml:aan etikka-happoetyyliesteriä, uutetaan 4 kertaa, joka kerta 50 ml:11a vettä. Etikkaesterifaasi kuivataan, haihdutetaan vähän ja 20 annetaan kiteytyä yön yli kylmässä. Saadaan 16,5 g (94 %) O-behenoyyli-N-tert.-butyylioksikarbonyyli-L-seryyli-D-iso-glutamiini-y-bentsyyliesteriä, sul.p. 56-57°, (a)^° = +3 t 1° (c = 0,25; metanoli), R^ = 0,54 (kloroformi/isopropano-li/etikkahappo = 70:8:2), R^ = 0,73 (n-butanoli/etikkahap-25 po/vesi = 75:75:21).

11,0 g (14,7 mmoolia) O-behenoyyli-N-tert.-butyyli-oksikarbonyyli-L-seryyli-D-isoglutamiini-y-bentsyyliesteriä suspendoidaan 50 ml:aan abs. etikkahappoetyyliesteriä ja 0°:ssa ja kosteudelta suojaten, lisätään 100 ml 2N HCl:ää 30 etikkaesterissä. Hämmennetään 1 tunti 0°:ssa ja liuotin haihdutetaan pois 25°:ssa. öljymäinen jäännös hierretään toistuvasti petrolieetterin kanssa, sakan päällä oleva liuos dekantoidaan pois ja jauhemainen jäännös kuivataan huolellisesti natronasbestilla (Merck). Saadaan 9,3 g (93 %) L- 35 (O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-y-bentsyyliesteri- 2 0 hydrokloridia vahvasti hygroskooppisena jauheena, (a)D = + 3 1° (c = 1,1; metanoli), R^ = 0,43 (n-butanoli/etikka- 54 727 33 happo/vesi - 75:7,5:21), = 0,68 (etikkahappoetyylieste- ri/n-butanoli/pyridiini/etikkahappo/vesi = 42:21:21:6:10). Esimerkki 7: 1,922 g (2 mmoolia) N-asetyyli-4,6-O-isopropylideeni-5 isomuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-γ- bentsyyliesteriä liuotetaan 40 ml: aan 60 %:sta etikkahappoa ja jätetään seisomaan huoneen lämpötilaan 16 tunniksi. Lisätään 2,0 g palladium-bariumsulfaatti-katalysaattoria (10 %) ja seos käsitellään vedyllä. 1 tunnin kuluttua kataly-10 saattori suodatetaan pois, reaktioliuos laimennetaan etik-kahapolla ja lyofilisoidaan. Jäännös liuotetaan 60 ml:aan tert.-butanoli/vettä = 95:5, liuos suodatetaan PTFE-.Milli-pore-suodattimella (0,2 y) ja lyofilisoidaan. Saadaan Να se tyvi i-isomuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isogluta-15 miinia pehmeänä jauheena, = 0,53 (kloroformi/metanoli/ vesi = 70:30:5), Rf = 0,64 (etikkahappoetyyliesteri/n-buta-noli/pyridiini/etikkahappo/vesi = 42:21:21:6:10).

Lähtöaine saadaan seuraavalla tavalla:

Seokseen, jossa on 1,05 g (2,6 mmoolia) N-asetyyli-20 4,6-isopropylideeni-isomuramiinihappo-natriumsuolaa, 1,80 g (2,6 mmoolia) L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-v-bentsyyliesteri-hydrokloridia ja 0,60 g (5,2 mmoolia) N-hydroksisukkiini-iminiä 22 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisätään 0,65 g (3,17 mmoolia) disykloheksyylikarbodi-imidiä 25 ja seosta hämmennetään 16 tuntia huoneen lämpötilassa.

Suspensio laimennetaan 80 ml:11a etikkahappoetyyliesteriä ja suodos haihdutetaan kuiviin 30°:ssa. öljymäinen jäännös kromatografoidaan piihappogeelillä (1:30) kloroformi/meta-nolissa = 9:1. Ohutkerroskromatografiän mukaan yhtenäiset 30 fraktiot yhdistetään. Saadaan N-asetyyli-4,6-0-isopropyli-deeni-isomuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamii-ni-y-bentsyyliesteriä, R^ = 0,46 (kloroformi/metanoli = 9:1).

Vastaavalla tavalla saadaan N-asetyyli-muramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryvli-D-isoglutamiinia, (a)D = +29 + 1° 35 (c = 0,115; vesi), = 0,82 (etikkahappoetyyliesteri/n- butanoli/pyridiini/etikkahappo/vesi = 42:21:21:6:10), R^ = 0,23 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5).

ti 72733 55 Lähtöaineet saadaan seuraavalla tavalla: 10 g (21 mmoolia) N-asetyyli-1a-0-bentsyyli-4,6-0-isopropylideeni-isomuramiinihappo-natriumsuolaa (NaCl-pi-toinen) liuotetaan 100 mitään seosta, jossa on 1,2-dimetok-5 sietaani/vettä = 2:1, ja käsitellään 50 tuntia vedyllä 5 g palladium-hiili-katalysaattoria (10 %) läsnäollessa. Katalysaattori suodatetaan pois, suodos haihdutetaan ja jäännös kuivataan fosforipentoksidilla. Saadaan 8,1 g väritöntä jauhetta, joka sisältää 2,09 mmoolia N-asetyyli-4,6-0-10 isopropylideeni-isomuramiinihappo-natriumsuolaa grammassa (NaCl-pitoinen), = 0,67 (etikkahappoetyyliesteri/n-buta- noli/pyridiini/etikkahappo/vesi = 42:21:21:6:10), Rf = 0,25 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5).

Vastaavasti saadaan N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-0-15 isopropylideeni-muramiinihappo-natriumsuolasta N-asetyyli- 4,6-O-isopropylideeni-muramiinihappo-natriumsuolaa, Rf = 0,60 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/etikka-happo/vesi = 42:21:21:6:10), = 0,32 (kloroformi/metano li/vesi = 70:30:5), ja lopuksi saadaan 20 N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-nor- muramiinihappo-natriumsuolaa (NaCl-pitoinen), R^ = 0,48 (etikkahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/etikkahappo/ vesi = 42:21:21:6:10), Rf = 0,22 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5).

25 N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-iso- muramiinihappo-natriumsuola saadaan seuraavalla tavalla: 14,6 g (32,4 mmoolia) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-isomuramiinihappoetyyliesteriä liuotetaan 150 inhaan metanolia, lisätään 24,3 ml 2N natronlipeää ja 30 annetaan seistä huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Reaktio-liuos haihdutetaan sen jälkeen kun siihen on lisätty 8,1 ml 2N suolahappoa, ja jäännös kuivataan fosforipentoksidilla. Saadaan 15,53 g väritöntä jauhetta, joka sisältää 2,09 mmoolia N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-isomu-35 ramiinihappo-natriumsuolaa grammassa (NaCl-pitoinen), R^ = 0,54 (kloroformi/metanoli/etikkahappo = 85:13:1,5:0,5),

Rf = 0,6 (kloroformi/metanoli = 85:5).

72733 56

Esimerkki 8: 3,02 g (5 mmoolia) N-asetyyli-4,6-O-isopropylideeni-muramyvli-D-seryyli-D-isoglutamiini-y-tert.-butyyliesteriä saatetaan tavalliseen tapaan reagoimaan 1,25 ekvivalentin 5 kanssa öljyhappokloridia (Fluka) pyridiinissä. Seisotetaan 30 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen lisätään 50 ml metanolia, seosta hämmennetään 2 tuntia ja sen jälkeen haihdutetaan 30°:ssa. Jäännöksestä poistetaan sivutuotteet pylväässä, joka sisältää 100 g UPC^2~Piihappogeeliä (4 ker-10 taa laskettu; ANTEC), eluoimalla kloroformilla, ja tuote eluoidaan kloroformi/metanolilla = 95:5 (2,2 g).

1,1 g fraktioissa 22-50 olevaa ainetta liuotetaan kylmässä 8 ml:aan 95 %:sta trifluorietikkahappoa, liuos haihdutetaan 2 tunnin 0°:ssa seisottamisen jälkeen, jäännös 15 liuotetaan 20 ml:aan tert.-butanolia ja lyofilisoidaan.

Raakatuote puhdistetaan kuten edellä 100 g:11a UPC12-Pii-happogeeliä systeemissä kloroformi/isopropanoli/etikkahap-po = 70:8:2 (10 ml fraktiot). Fraktioihin 21-60 sisältyvä N-asetyyli-muramyyli-D-(O-oleoyyli)-seryyli-D-isoglutamii-20 ni liuotetaan 95 %:iseen tert.-butanoliin, suodatetaan PTFE-Millipore-suodattimella (0,2 u) ja lyof ilisoidaan, (a)^ = +26 ± 1° (c = 0,395, metanoli), R^ = 0,22 (kloroformi/me-tanoli/vesi = 70:30:5), R^ = 0,62 (asetonitriili/vesi = 3:1) .

25 Lähtöaine saadaan seuraavasti: 5,08 g (12,3 mmoolia) karbobentsoksi-D-seryyli-D-iso-glutamiini-y-tert.-butyyliesteriä liuotetaan 300 ml:aan metanolia ja käsitellään 1 g palladium-hiili-katalysaattoria (10 %) läsnäollessa 30 minuutin ajan vedyllä, jolloin pH 30 pidetään arvossa 3,5 lisäämällä metanolista suolahappoa (^ 0,7N). Tavalliseen tapaan työskentelemällä saatu ja natronasbestilla (Merck) kuivattu vaahto liuotetaan 40 ml: aan dimetyyliformamidia, lisätään 4,24 g (2,3 mmoolia) N-asetyyli-4,6-O-isopropylideeni-muramiinihappo-natriumsuolaa 35 (2,9 mmoolia/g) ja 3,34 g (13,5 mmoolia) EEDQ:ta ja häm mennetään yön yli huoneen lämpötilassa. Suspensio haihdutetaan 30°:ssa, jäännös jaetaan 300 ml:aan etikkahappoetyy- 72733 57 liesteriä ja 50 ml:aan kyllästettyä kaliumkloridiliuosta. Vesipitoinen faasi lasketaan pois ja orgaaninen faasi uutetaan vielä 3 kertaa, joka kerta 50 ml :11a kyllästettyä kaliumkloridiliuosta. Etikkaesterifaasi kuivataan, haihdute-5 taan noin 30 rahaan ja kiteytetään lisäämällä annoksittain 150 ml eetteriä. Saadaan 5,4 g (73 %) N-asetyyli-4,6-0- isopropylideeni-muramyyli-D-seryyli-D-isoglutamiini-y-tert.

o n butyyliesteriä, (ot)^ = +29° (c = 0,782, metanoli) , Rf = 0,40 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5), R^ = 0,60 (ase-10 tonitriili/vesi = 3:1).

Esimerkki 9:

Liuokseen, jossa on 1,4 g (1,43 mmoolia) N-asetyyli-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-γ-difenyylimetyyliesteriä 15 ml:ssa abs. pyridiiniä, lisätään 15 tipoittain 0,48 g (4,72 mmoolia) etikkahappoanhydridiä liuotettuna 15 ml:aan pyridiiniä ja seoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Lisätään 1 ml vettä ja 15 minuutin kuluttua liuotin haihdutetaan pois. Jäännös liuotetaan 60 ml:aan etikkahappoetyyliesteriä, etikkaeste-20 rifaasi uutetaan 5 kertaa, joka kerta 20 ml:11a vettä ja kuivataan. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäljelle jäävä jäännös (1,4 g) liuotetaan 20 ml:aan 1 ,2-dimetoksietaa-ni/vettä = 95:5 ja käsitellään vedyllä 30 minuutin ajan palladium—bariumsulfaatti-katalysaattorin (10 %) läsnäol-25 lessa. Katalysaattori suodatetaan pois, suodos haihdutetaan ja jäännös lyofilisoidaan tert.-butanoli/vedestä = 9:1. Kiinteätä ainetta hierretään toistuvasti eetterin kanssa, liuotetaan uudestaan 20 ml:aan tert.-butanoli/vet-tä = 9:1, suodatetaan PRFE-Millipore-suodattimella (0,2 y) 30 ja lyofilisoidaan. Jäljelle jää 1,1 g N-asetyyli-1,4,6-0-triasetyyli-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglu-tamiinia, (a)^ = +33 ± 1° (c = 0,53; metanoli), R^ = 0,38 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5), R^ = 0,77 (etikkahap-poetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/etikkahappo/vesi = 42: 35 21:21:6:10).

Lähtöaine saadaan seuraavasti: 1,5 g (1,84 mmoolia) N-asetyyli-normuramyyli-L-(O- 58 727 33 behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiinia liuotetaan 40 ml:aan metanoii/1,2-dimetoksietaania = 2:1, lisätään 0,7 g (3,7 mmooiia) difenyylidiatsometaania ja hämmennetään 3 tuntia huoneen lämpötilassa. Punainen suspensio haihdutetaan 30°: 5 ssa, öljymäinen jäännös hierretään 200 ml:n kanssa eetteri/ petrolieetteriä = 1:2 ja liukenematon aine suodatetaan pois. Sakka pestään värittömäksi, liuotetaan 50 ml:aan metanolia ja kiteytetään lisäämällä eetteriä. Suodattamisen, pesemisen ja kuivaamisen jälkeen jäljelle jää 1,6 g (89 %) N-10 asetyyli-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isogluta-miini-y-difenyylimetyyliesteriä värittöminä kiteinä, sul.p.

165° (haj.) , Rjj. = 0,5 (kloroformi/metanoli/vesi = 70: 30:5).

Vastaavasti saadaan N-asetyyli-normuramyyli-L-seryy-li-D-isoglutamiini-v-difenyylimetyyliesteristä N-asetyyli-15 1,4,6-O-triasetyyli-normuramyyli-L-(O-asetyyli)-seryyli-D- isoglutamiini, = +15° (c = 0,5; kloroformi), RF = 0,20 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5), Rc = 0,57 (etik-kahappoetyyliesteri/n-butanoli/pyridiini/etikkahappo/vesi - 42:21:21:6:10), {α}^° = +38° (c = 1? vesi).

20 Esimerkki 10: 0,89 g (1 mmooli) N-asetyyli-4,6-O-isopropylideeni-muramyyli-L-(S-stearoyyli)-kysteinyyli-D-isoglutamiini-tert.-butyyliesteriä liuotetaan kylmässä 10 ml:aan 95 %:sta trifluorietikkahappoa. Seisotetaan kaksi tuntia 0°:ssa, 25 jonka jälkeen haihdutetaan varovasti, jäännökseen lisätään tert.-butanolia ja viimeksi mainittu haihdutetaan pois (2 kertaa). Liuotetaan tert.-butanoli/veteen = 95:5, suodatetaan Teflon-Millipore-suodattimella (0,2 u) ja lyofilisoi-daan. Saadaan N-asetyyli-muramyyli-L-(S-stearoyyli)-kys-30 teinyyli-D-isoglutamiinia värittömänä jauheena.

Rf = 0,38 (n-butanoli/etikkahappo/vesi = 75:7,5:21),

Rf = 0,43 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5), sul.p. 170-173°.

Lähtöaine saadaan seuraavasti:

Liuokseen, jossa on 1,29 g (1,5 mmooiia) N-asetyyli- 4,6-O-isopropylideeni-muramyyli-L-(S-trityyli)-kysteinyyli-D-isoglutamiini-y-tert.butyyliesteriä liuotetaan seokseen, jossa on 10 ml etikkahappoetyyliesteriä ja 5 ml metanolia, lisätään 0,526 g (1,65 mmooiia) elohopea-II-asetaattia (Merck). Hämmennetään 4 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka 72733 59 jälkeen merkaptidi hajotetaan johtamalla seokseen 10 minuuttia rikkivetyä. Hiutaleinen, hyvin suodatettavissa oleva elohopeasulfidi imusuodatetaan, suodos haihdutetaan ja merkaptoryhmä asyloidaan abs. pyridiiniin liuottamisen 5 jälkeen tavalliseen tapaan 1,1 ekvivalentilla steariini-happokloridia. Raakatuote puhdistetaan kromatografisesti piihappogeelillä. Saadaan N-asetyyli-4,6-0-isopropylidee-ni-muramyyli-L-(S-stearoyyli)-kysteinyyli-D-isoglutamiini-tert.butyyliesteriä.

10 Täysin suojattu tuote saadaan seuraavalla tavalla: 1,74 g (2,2 mmoolia) N,S-ditrityyli-L-kysteinyyli-D-isoglutamiini-y-tert.butyyliesteriä liuotetaan 35 mlraan 90 %:sta trifluorietanolia ja huoneen lämpötilassa titra-taan 0,1N HCl:n 90 %:sella trifluorietanoli-liuokseila pH-15 arvoon 3,5 (pH-mittari) (kulutus: 19,8 ml). Heikko suspensio laimennetaan etikkahappoetyyliesterillä ja tert.buta-nolilla, ja haihdutetaan voimakkaasti tyhjössä 30°:ssa. Lisätään tert.-butanolia kaksi kertaa ja haihdutetaan, jonka jälkeen taas liuotetaan tert.-butanoliin ja lyofilisoi-20 daan, = 0,66 (asetonitriili/vesi = 3:1).

Edellä saatu raakatuote liuotetaan 6 ml:aan dimetyyli-formamidia, lisätään 0,79 g (2,2 moolia) N-asetyyli-4,6-0-isorpopylideeni-muramiinihappo-natriumsuolaa, 0,544 g (2,64 mmoolia) disykloheksyylikarbodi-imidiä ja 0,506 g (4,4 mmoo-25 lia) N-hydroksisukkiini-iminiä. Huuhdotaan 2 ml:11a ase- tonitriiliä ja hämmennetään seosta 20 tuntia huoneen lämpötilassa. Suspensio laimennetaan nelinkertaisella määrällä etikkahappoetyyliesteriä, liukenematon aine suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan kuiviin 30°:ssa. Raakatuot-30 teestä poistetaan pääosa epäpuhtauksista piihappogeelillä (1:50) systeemissä kloroformi/isopropanoli = 95:5 (10 ml fraktiot), ja eluoidaan kloroformi/isopropanolilla = 85:15. Saadaan 1,35 g 4,6-O-isopropylideeni-N-asetyyli-muramyyli-L-(S-trityyli)-kysteinyyli-D-isoglutamiini-y-tert.butyyli-35 esteriä, R^ = 0,57 (asetonitriili/vesi = 3:1), R^ = 0,69 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5).

Suojattu dipeptidijohdannainen saadaan seuraavalla 72733 60 tavalla:

Liuokseen, jossa on 3,03 g (15 mmoolia) D-isogluta-miini-y-tert.-butyyliesteriä liuotettuna seokseen, jossa on 27 ml dimetvyliformamidia ja 3 ml asetonitriiliä, lisä-5 tään 10,54 g (15 mmoolia) N,S,-ditrityyli-L-kysteiini-sukkiin i-imidi e s teriä ja seoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 29 tuntia. Kellertävä liuos laimennetaan 300 ml: 11a etikkahappoetyyliesteriä ja uutetaan 10 kertaa, joka kerta 30 ml: 11a \rettä. Orgaaninen faasi kuivataan ja liuo-10 tin haihdutetaan. Väritön jäännös liuotetaan 35 ml:aan kuumaa asetonia, lisätään 1 ml metanolia ja samalla hämmentäen 5 ml vettä. Tuote saostuu jäähdytettäessä värittöminä neulaskimppuina. Saadaan 9,7 g (82 %) N,S-ditrityyli-L-kysteinyyli-D-isoglutamiini-y-tert.-butyyliesteriä, hajoa-15 misalue 206-207°, (α)^° = +58 + 1° (c = 1,275; kloroformi), R- = 0,78 (asetonitriili/vesi = 3:1), R^ = 0,65 (klorofor-mi/isopropanoli/etikkahappo = 70:8:2).

Esimerkki 11: 1,09 g (1 mmooli) N-bentsyylioksikarbonyyli-1a-O-20 bentsyyli-4,6-isopropylideeni-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-tert.-butyyliesteriä hydrataan huoneen lämpötilassa ja normaalipaineessa noin tunnin ajan 0,5 g:lla palladium-bariumsulfaatti-katalysaattoria (10 %) , 10 ml:ssa 5 %:sta vesipitoista dioksaania, pitämällä pH-ar-25 vossa 7. Katalysaattori suodatetaan pois ja normuramiini-hapon vapaa aminoryhmä asyloidaan lisäämällä 0,3 ml asetan-hydriaiä ja 6 ml 5 %:sta NaHCO^-liuosta. Seisotetaan 2 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen liuos haihdutetaan tyhjössä ja jäännökseen lisätään 20 ml 2N HCl:ää etikkaes-30 terissä. Hämmennetään tunti huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen saostetaan vastaava amorfinen N-asetyyli-1α-0-bent-syyli-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamii-ni 50 ml:11a eetteriä, = 0,43 (CHCl3/metanoli/H20 = 70: 30:5). Tämä yhdiste hydrataan 0,5 g:lla Pd/BaS04 15 ml:ssa 35 5 %:sta vesipitoista dioksaania, 60 tunnin ajan. Kataly saattori suodatetaan pois, jonka jälkeen haihdutetaan tyhjössä kuiviin, kromatografoidaan piihappogeelillä (Merck) ti 72733 61 CHCl^/metanolissa = 7:3, ja poistetaan suola puhtaista 'f' fraktioista Dowex-50 H :11a, dimetoksietaani/H20:ssa = 1:1. Suodos haihdutetaan, liuotetaan tert.-butanoliin, suodatetaan Millipore-suodattimella (0,2 y) ja jäähdytyskuivataan, 5 jolloin saadaan N-asetyyli-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiinia värittömänä, amorfisena jauheena, R^ = 0,23 (kloroformi/metanoli/vesi = 70:30:5), R^ = 0,59 (asetonitriili/vesi = 3:1); R^ = 0,39 (etikkahappoetyyli-esteri/n-butanoli/pyridiini/jääetikka/vesi = 42:21:21:6:10). 10 Lähtöaine saadaan seuraavalla tavalla:

Esimerkin 7 mukaisesti kondensoidaan 1,0 g (2 mmoolia) N-bentsyylioksikarbonyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-G-isopropyli-deeni-normuramiinihappo-Na-suolaa 1,3 g:n (2 mmoolia) kanssa L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-y-tert.-butyy-15 liesteri-hydrokloridia, 0,6 g:n kanssa N-hydroksisukkiini-imidiä ja 0,65 g:n kanssa disykloheksyylikarbodi-imidiä 25 ml:ssa abs. dimetyyliformamidia. 24 tunnin kuluttua huo neen lämpötilassa imusuodatetaan disykloheksyylivirtsa-aine pois, haihdutetaan öljytyhjössä kuiviin ja jäännös kromato-20 grafoidaan piihappogeelillä (Merck) CHCl^/metanolilla = 9:1. Näin saadaan N-bentsyylioksikarbonyyli-1a-O-bentsyyli-4,6- O-isopropylideeni-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D- 2 0 isoglutamiini-y-tert.-butyyliesteriä, (aj^ = + 75 (c = ^' dimetyyliformamidi), = 0,55 (CHCl^/metanoli = 9:1).

25 Esimerkki 12:

Liuosta, jossa on 3,5 g (3,85 mmoolia) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-normuramyyli-L-(O-behenoyyli) -seriinibentsyyliesteriä liuotettuna 50 ml:aan 1,2— dimetoksietaani/vettä = 95:5, käsitellään vedyllä 3 tuntia 30 sen jälkeen kun siihen on lisätty 2 g palladium-bariumsul-faatti-katalysaattoria. Haihduttamisen ja kuivaamisen jälkeen jäljelle jäänyt jäännös liuotetaan 12 ml:aan dimetyy-liformamidi/kloroformia = 3:1. Lisätään kylmässä 0,78 g (3,85 mmoolia) D-isoglutamiini-y-tert.-butyyliesteriä, 35 0,531 g (4,63 mmoolia) N-hydroksisukkiini-imidiä ja lopuk si 0,952 g (4,62 mmoolia) disykloheksyylikarbodi-imidiä ja seosta hämmennetään 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Sus- 62 72733 pensioon lisätään 0,5 ml etikkahappoa, 30 minuutin kuluttua laimennetaan 60 ml:11a etikkahappoetyyliesteriä ja sakka imusuodatetaan. Suodos käsitellään esimerkin 2 mukaisesti ja raakatuote lisäksi puhdistetaan piihappogeelillä (1:30) 5 systeemissä kloroformi/isopropanoli = 95:5. Saadaan 2,6 g N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-normuramyy-li-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini-y-tert.-butyyli-esteriä, = 0,85 (kloroformi/metanoli/vesi = 70;30:5), = 0,43 (kloroformi/isopropanoli/etikkahappo = 70:8:2).

10 Lähtöaine saadaan seuraavasti: 3,52 g (6 mmoolia) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-0-isoprcpylideeni-normuramyyli-L-seriinibentsyyliesteriä asy-loidaan behenhappokloridilla abs. pyridiinissä esimerkin 2 mukaisesti. Saadaan 3,93 g (72 %) N-asetyyli-1α-0-bentsyy-15 li-4,6-0-isopropylideeni-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-se-riini-bentsyyliesteriä, = 0,85 (asetonitriili/vesi = 3:1), R^ = 0,35 (etikkahappoetyyliesteri).

Lähtöaineyhdiste saadaan seuraavasti: 4,24 g (12,3 mmoolia) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-20 O-isopropylideeni-normuramiinihappo-natriumsuolaa, 2,85 g (12,3 mmoolia) L-seriinibentsyyliesteri-hydrokloridia ja 3,34 g (13,5 mmoolia) EEDQ:ta saatetaan reagoimaan esimerkin 8 mukaisesti dimetyyliformamidissa. Liuotin poistetaan tyhjössä, jäännös liuotetaan 150 ml:aan etikkahappoetyyli-25 esteriä ja uutetaan kylmässä ensin kaksi kertaa 15 ml :11a vettä, sen jälkeen kylmällä 1N HCl:llä (4 kertaa), kyllästetyllä natriumbikarbonaattiliuoksella ja taas vedellä (2 kertaa). Liuottimen poishaihduttamisen jälkeen saadaan 5 g (70 %) N-asetyyli-1a-O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-30 normuramyyli-L-seriinibentsyyliesteriä värittömänä vaahtona, (a)^0 = +75° (c = 1 ; kloroformi), R^ = 0,6 (kloroformi/ metanoli = 15:1), R^ = 0,5 (etikkahappoetyyliesteri).

Il 72733 63

Esimerkki 13: N-asetyyli-4,6-0-isopropylideeni-muramiinihappo-nat-riumsuola ja Ne-tert.butyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-D-glu-tamiinihappodimetyyliesteri-hydrokloridi yhdistetään esimer-5 kin 7 mukaisesti. Suojaryhmien asidolvyttisen poislohkai- sun ja palmitiinihappo-N-hydroksisukkiini-imidiesterillä tapahtuneen asyloinnin jälkeen saadaan N-asetyyli-muramyy-li-L- (Ne:-palmitoyyli) -lysyyli-D-glutamiinihappo-dimetyyli-esteriä.

10 Esimerkki 14: 5 °C;seen jäähdytetty suspensio, jossa on 0,53 g (22 mmoolia) natriumhydridiä 10 ml:ssa absoluuttista tetrahydro-furaania, lisätään tipoittain kymmenen minuutin aikana, hyvin 15 sekoittaen ja sulkien kosteuden pois, 3,53 g:aan (10 mmoolia) 2-asetyyliamino-l-0-bentsyyli-4,6-0-isopropylideeni-2-deok-si-a-D-glukopyranosidia, joka on liuotettu 25 mitään absoluuttista tetrahydrofuraania. Suspensio lämmitetään kahden tunnin aikana 40 °C:seen, sitten jäähdytetään 0 °C:seen ja 20 lisätään tipoittain -10 °C:seen jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 7,8 g (10 mmoolia) N-jodiasetyyli-O-behenoyyli-L-seryy-li-D-isoglutamiini-Y-tert-butyyliesteriä, siten, että lämpötilaa 0 °C ei ylitetä (25 minuuttia). Kolmen tunnin sekoittamisen jälkeen 0-5 °C:ssa reaktio on kulunut loppuun. Lisä-25 tään 10 ml metanolia, neutraloidaan muutaman minuutin kuluttua etikkahapolla ja haihdutetaan koko seos kuiviin. Jäännös jaetaan metyleenikloridin ja veden välille, pestään orgaaninen faasi vedellä ja kuivataan se natriumsulfaatilla. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäävä jäännös puhdistetaan pii-30 happogeelillä (1:50) järjestelmässä kloroformi/isopropanoli = 95:5 (v/v). Tuotteen sisältävät fraktiot yhdistetään ja liuotin haihdutetaan. Saadaan 5,92 g (60 %) N-asetyyli-1-α- O-bentsyyli-4,6-O-isopropylideeni-normuramyyli-L- (O-behenoyy-li)-seryyli-D-isoglutamiini-tert-butyyliesteri, joka on sama 35 yhdiste kuin esimerkissä 2 saatu.

Claims (8)

1. 64 Patenttivaatimukset; ι *- / u o
2. 1. Analogiamenetelmä farmakologisesti vaikuttavien kaavan I Ch20r6 •-0 1/ \l • o *(H, OR.) (I), *v(i / / o-- 0 r3 ·. I I II >a n / C-NH-CH-C-NH-CH-CH -CH„-C // I I 2 2 \ o R« c Rln (Q /\ mukaisten glukoosijohdannaisten valmistamiseksi, jossa kaavassa Ril , R4 ja Rg tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä tai alempialkanoyyliä, R2 on alempialkyyli tai fenyyli, R3 on vety tai alempialkyyli, *8 on alempialkyylitähde, jossa on oksikarbonyyli- tai mer-kaptokarbonyyliryhmä, joka on sitoutunut alifaattiseen hiili vetytähteeseen R0, joka voi olla katkaistu yhdellä tai kahdella iminokarbonyylillä ja jossa täytyy olla enemmän kuin 5 C-atomia, kun R^, R4 ja Rg ovat vetyjä, ja Rg ja R^o tarkoittavat toisistaan riippumatta mahdollisesti alempialkyylillä eetteröityä hydroksia tai aminoa tai R^g tarkoittaa bentsyylioksia tai difenyylimetoksia, ja kaavan I mukaisten yhdisteiden, joissa on ainakin yksi suolaa muodostava ryhmä, suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että SS 72733 a) kaavan Ia mukaisesta yhdisteestä, CH.OR * I 2 6 •--o i^O \(H, OR.*) <Ia> Ά? / v\ i 1 11 (lA NH-C-R, i}\ (o! (0) / C-NH-CH-C-NH-CH-CH-CH-C //U i \ ·
3. 0 R /A . 10 o r9 jossa kaavassa Ria, R4a ja Rga tarkoittavat toisistaan riippumatta samaa kuin R^, R4 ja vastaavasti Rg edellä, tai ne tarkoittavat hydroksisuojaryhmää, R2r R3 ja Rg tarkoittavat samaa kuin edellä ja ryhmät -CO-Rg3 ja -CO-Rioa tarkoittavat samaa kuin tähde -CO-Rg ja vastaavasti tähde -CO-R^q edellä tai ne tarkoittavat karboksyylisuojaryhmällä suojattuja kar-boksiryhmiä, jolloin vähintään yhden tähteistä Ria, R4a, R6a, -CO-Rg3 ja -CO-R^oa täytyy tarkoittaa hydroksisuojaryhmää tai vastaavasti suojattua karboksia, lohkaistaan ne hydrok-si- tai karboksyylisuojaryhmät, jotka eivät esiinny halutussa kaavan I mukaisessa lopputuotteessa, tai 72733 66 b) kaavan Ib mukainen yhdiste CH,OR.b I 2 6 i/ \l . • O «(H, OR. ) (Ib) »biV /'
4. 4 A 1/ / -- o · I I Il 0)\ T "). \ Il (o) / C-NH-CH-C-NH-CH-CH--CH„-C //Is I \ b O R° G Rln (L) t\ b 1 ' o r9 jossa kaavassa vähintään yksi tähteistä R^b, R4b ja Rgb tarkoittaa vetyä ja muut tähteistä Rxb, R4b ja Rgb tarkoittavat alempialkanoyyliä tai hydroksisuojaryhmää, R2, R3 ja Rg tarkoittavat samaa kuin edellä ja tähteet -CO-R9b ja -CO-Rio*3 tarkoittavat samaa kuin tähteet -CO-R9 tai vastaavasti -CO-RlO edellä tai tarkoittavat karboksyylisuojaryhmällä suojattua karboksia, asyloidaan alempialkaanihapolla tai sen reak-tiokykyisellä johdannaisella ja lohkaistaan yllämainitut suo-jaryhmät, tai 67 72733 c) kaavan le mukainen yhdiste, CH 0R,C i2 6 --o ι/' \l . • O .(H, OR.C) (Ie) 'Ml / f ·-- o *5—. I ! Il (D)\ \ (ύ il (o) n C-NH-CH-C-NH-CH-CH,, -CH„-C // I t I 2 2 \ c 0. c «,» 8 //\ c 10 o B,C jossa kaavassa Ric, R4C ja Rgc tarkoittavat toisistaan riippumatta hydroksisuojaryhmää, alempialkanoyyliä tai poikkeustapauksessa vetyä, R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, R8c on alempialkyyli, joka on substituoitu mahdollisesti kulloinkin reaktiokykyisessä muodossa esiintyvällä hydroksilla tai merkaptolla, ja R^ ja ^10 tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyylillä eetteröityä hydroksia tai aminoa tai Rioc tarkoittaa bentsyylioksia tai difenyylimetoksia tai tähteet -C0-R9c ja -CO-R^g0 tarkoittavat toisistaan riippumatta karboksyylisuojaryhmällä suojattua karboksia, saatetaan reagoimaan kaavan Ro-C00H mukaisen karboksyylihapon, jossa kaavassa R0 tarkoittaa samaa kuin edellä, tai sen reak-tiokykyisen karboksyylihappojohdannaisen kanssa, ja lohkaistaan yllämainitut suojaryhmät, tai . _____— - Τ' --- 68 72733 d) kaavan Id mukainen yhdiste, CU,OR/ I 2 6 e-o l/1 \! . • O *(H, OR, ) (Id) / ·-· o R3—v I I II pk \ (L) Il (O) // C-NH-CH-C-NH-CH-CH.-CH.-C / Id I \ d o r“ c r e I8 /\ d H,N-R_ -C-0 O Rq 2. li 9 O jossa kaavassa R^d, R4d ja Rgd tarkoittavat toisistaan riippumatta hydroksisuojaryhmää, alempialkanoyyliä tai vetyä, R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä, Rgd ja Rge tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyleeniä ja Rgd ja Rio^ tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyylillä eette-röityä hydroksia tai aminoa tai Riod tarkoittaa bentsyyliok-sia tai difenyylimetoksia tai tähteet -CO-Rgd ja -CO-Riod tarkoittavat toisistaan riippumatta karboksyylisuojaryhmällä suojattua karboksia, saatetaan reagoimaan kaavan Rod-C00H mukaisen karboksyylihapon, jossa kaavassa R0d tarkoittaa ali-faattista hiilivetytähdettä, joka voi olla katkaistu imino-karbonyylillä, jolloin tähde 0 ff -Rge-NH-C-R0d vastaa yllämainittua tähdettä R0, tai sen reaktiokykyisen karboksyylihappojohdannaisen kanssa ja lohkaistaan yllämainitut suojaryhmät, tai 69 7 2 7 3 3 e) kaavan IV mukaisessa yhdisteessä CH.OR, i2-6 •-0 ι/' \l • o »(H, OR.) *"Xi /' / --- o *3-\ I I II (D)\ ***-*2 C-OH II o jossa substituenteilla on yllämainitut merkitykset, jolloin vapaat funktionaaliset ryhmät esiintyvät mahdollisesti suojatussa muodossa, ja jossa karboksiryhmä voi esiintyä joh-dannaismuodossa, karboksiryhmä, mahdollisesti vaiheittain, amidoidaan kaavan IVa mukaisen tähteen liittävällä yhdisteellä H Rg 0=C-R9 - N - CH - C - NH - CH - CH2 ~ CH2 - C - R10 (IVa) (L) O (D) O jossa kaavassa substituenteilla on yllämainitut merkitykset, jolloin funktionaaliset ryhmät esiintyvät mahdollisesti suojatussa muodossa, ja mikäli tarpeellista, saadussa yhdisteessä suojatut funktionaaliset ryhmät vaihdetaan vapaiksi funktionaalisiksi ryhmiksi, tai 72733 70 f) kaavan VII mukainen yhdiste, CH,OR, i2 6 «-O ι/' \| • ·<Ht OR.) (VII) l\ /! R.O \ OH / 4 \l 1/ •-- o I I II NH-C-r2 jossa substituenteilla on yllämainitut merkitykset, jolloin funktionaaliset ryhmät esiintyvät edullisesti suojatussa muodossa, tai sen reaktiokykyinen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan VIII mukaisen yhdisteen kanssa, R3 Rg 0=C-Rg Y - CH - C - NH - CH - C - NH - CH - CHo - CH? - C - Ri0 5 <L> δ (D) δ (VIII) jossa kaavassa Y tarkoittaa reaktiokykyistä esteröityä hyd-roksiryhmää ja muilla substituenteilla on yllämainitut merkitykset, jolloin funktionaaliset ryhmät esiintyvät edullisesti suojatussa muodossa, ja mikäli tarpeellista, saadussa yhdisteessä suojatut funktionaaliset ryhmät vaihdetaan vapaiksi funktionaalisiksi ryhmiksi, tai g) kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, jossa kaavassa R4 ja Rg tarkoittavat vetyä, ja muilla substituenteilla on yllämainitut merkitykset, tai niiden suolojen valmistamiseksi, kaavan XIII mukaisesta yhdisteestä, n 72733 71 o Ο—· / \ V/i/ \/ O · O · (XIII) V Λ \J 0 / ~ / N=C-Ä R, - CH (fj) \P) r8 o=c-r, CONH - CH - CONH - CH - CH„CH„ - C-R,^ (L) (O) 1 2 5 jossa kaavassa R]^ on alkylideeni- tai sykloalkylideeniryh-mä, ja muilla substituenteilla on yllämainitut merkitykset, lohkaistaan oksatsoliini- ja dioksolaanirengas happamasti, ja lohkaistaan mahdollisesti esiintyvät suojaryhmät, ja haluttaessa, menetelmävaihtoehtojen a) - e) suorittamisen jälkeen, menetelmän mukaisesti saatava kaavan I mukainen yhdiste muutetaan toiseksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai, haluttaessa, menetelmän mukaisesti saatava, suolaa muodostavan ryhmän sisältävän kaavan I mukaisen yhdisteen suola muutetaan vastaavaksi kaavan I mukaiseksi vapaaksi yhdisteeksi tai toiseksi suolaksi, ja/tai, haluttaessa, menetelmän mukaisesti saatava, suolaa muodostavan ryhmän sisältävä kaavan I mukainen yhdiste muutetaan suolaksi.
5. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N-asetyyli-normuramyyli-L-O-beheno-yyli-seryyli-D-isoglutamiini tai sen suola. 1 Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan N-asetyyli-muramyyli-L-O-behenoyyli-seryyli-D-isoglutamiini tai sen suola. T" . 72 72733
6. 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan N-asetyyli-1,4,6-0-tri-asetyy-li-normuramyyli-L-(O-behenoyyli)-seryyli-D-isoglutamiini tai sen suola.
7. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan N-asetyyli-1,4,6-0-tri-asetyy-li-normuramyyli-L-(O-asetyyli)-seryyli-D-isoglutamiini tai sen suola.
8. 6. Kaavan II mukaiset yhdisteet S (o) J* H-N-CH-C-NH-CH-CH.-CH.-C (II) 1 1 \o K P (L> O''*, jossa kaavassa Rg on alempialkyylitähde, jossa on oksikarbo-nyyli- tai merkaptokarbonyyliryhmä, joka on sitoutunut ali-faattisen hiilivetytähteeseen R0, jossa on enemmän kuin 5 C-atomia ja joka voi olla katkaistu yhdellä tai kahdella imi-nokarbonyylillä, ja Rg ja R^q tarkoittavat toisistaan riippumatta alempialkyylillä eetteröityä hydroksia tai aminoa tai R^q tarkoittaa bentsyylioksia tai difenyylimetoksia, ja niiden suolat kemiallisessa synteesissä käytettävinä välituotteina . 72733 73