FI66878B - Foerfarande foer framstaellning av nya antigenderivat - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av nya antigenderivat Download PDF

Info

Publication number
FI66878B
FI66878B FI790584A FI790584A FI66878B FI 66878 B FI66878 B FI 66878B FI 790584 A FI790584 A FI 790584A FI 790584 A FI790584 A FI 790584A FI 66878 B FI66878 B FI 66878B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
carbamoyl
deoxy
propyl
glucose
ethyl
Prior art date
Application number
FI790584A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI66878C (fi
FI790584A (fi
Inventor
Gerhard Baschang
Felix M Dietrich
Roland Gisler
Jaroslav Stanek
Albert Hartmann
Lajos Tarcsay
Original Assignee
Ciba Geigy Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27173419&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI66878(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ciba Geigy Ag filed Critical Ciba Geigy Ag
Publication of FI790584A publication Critical patent/FI790584A/fi
Publication of FI66878B publication Critical patent/FI66878B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI66878C publication Critical patent/FI66878C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H9/00—Compounds containing a hetero ring sharing at least two hetero atoms with a saccharide radical
    • C07H9/02—Compounds containing a hetero ring sharing at least two hetero atoms with a saccharide radical the hetero ring containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H9/04—Cyclic acetals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H23/00—Compounds containing boron, silicon, or a metal, e.g. chelates, vitamin B12
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • C07K9/005—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure containing within the molecule the substructure with m, n > 0 and m+n > 0, A, B, D, E being heteroatoms; X being a bond or a chain, e.g. muramylpeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6062—Muramyl peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

ΓηΊ Μ4\ KUULUTUSJULKAISU ,,ηΠΟ jSSTa m ου uTLÄCGNiNGssumiFT 6 68 / o (51) K*.lfc/lm.Ct3 C 07 G 7/00, A 6l K 39/00 SUOMI—FINLAND (21) r**«tm.k.nw-p«Mnt»n.&fcnifl* 79058^+ Ρ,Η-»*»—21.02.79 v / (23) Alkupthrt—Gl(tfgh«t»d*j 21.02.79 (41) Tulta Julkteksl — MlvM offumNf 2 5.08.79
Patentti- ja rakisterihallitut (44) ΝίΜΜΜρνιοη |a kuuL|iillaiMn p*m.— ? i q8.84
Patent- och f^iltintjfFlIilll Amttkan (iCkfd odt utLikrlfUA pubHcwvtf (32)(33)(31) I·χτ<·«Τ «wellww—t*|M prtorHet 24.02.78 07.04.78, 18.05.78 Sveitsi-Schweiz(CH) 2035/78-0, 3777/78-5, 5394/78-0 (71) Ciba-Geigy AG, CH-4002 Basel, Sveitsi-Schweiz(CH) (72) Gerhard Baschang, Bettingen, Felix M. Dietrich, Basel,
Roland Gisler, Binningen, Jaroslav Stanek, Birsfelden, Sveitsi-Schweiz(CH), Albert Hartmann, Grenzach, Lajos Tarcsay, Grenzach-Wyhlen,
Saksan Liittotasava1ta-FÖrbundsrepubliken Tyskland(DE) (74) Oy Jalo Ant-Wuor i nen Ab (54) Menetelmä uusien antigeenijohdannaiSten valmistamiseksi -Förfarande för framstä11 ning av nya antigenderivat
Keksintö koskee menetelmää uusien antigeenijohdannaisten valmistamiseksi, jotka koostuvat antigeenistä, johon antigeenimolekyyliä kohden on sitoutunut ainakin yksi ja enintään niin monta muramyyli-peptidimolekyyliä, että antigeeninen luonne säilyy, sekä mahdollisesti siltajäsenistä ja kantaja-aineesta, jolloin sitoutumattomassa muodossa olevalla muramyylipeptidillä on kaavan II mukainen rakenne CH2OR6 / N - X - R2 (II) R3 - CH (D) R13 R8 R10 R11 CON - CH - CON - CH - CH0CH - R. 0 1 <ö t (D) R7 R9 2 66878 jossa X on karbonyyli- tai karbonyylioksiryhmä, R.j , R^j ja Rg ovat toisistaan riippumatta vety tai trimetyylisilyyli, R2 on fenyylitähde tai substituoimaton tai hydroksilla, karboksilla, alempialkoksilla ja/tai alempialkoksikarbonyylillä substituoitu alempialkyyli,
Rg, R-j, Rg ja R^ 2 ovat toisistaan riippumatta vety tai alempialkyyli, Rg on vety, fenyylitähde tai substituoimaton tai hydroksilla, halogeenilla, aminolla, merkaptolla tai fenyylitähteellä substituoitu alempialkyyli, tai R^ ja Rg yhdessä ovat alkyleeni, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia, ja RlO» R-] 1 ja R12 toisistaan riippumatta ovat karboksi, trimetyylisi-lyylioksikarbonyyli, substituoimaton tai fenyylitähteellä substituoitu alempialkoksikarbonyyli, tai karbamoyyli, joka on substituoimaton tai on typpiatomissa substituoitu substituoimattomal-la tai karboksilla, alempialkoksikarbonyylillä tai karbamoyyIillä substituoidulla alempialkyylillä, tai Rl 1 on myös vety, edellyttäen, että kaavan II mukaisessa lähtöyhdis-teessä on läsnä ainakin yksi vapaa hydroksi-, amino-, merkapto-tai karboksiryhmä.
Näitä uusia antigeenijohdannaisia ovat siten yhdisteet, jotka muodostuvat antigeenistä ja ainakin yhdestä, siihen mahdollisesti silta jäsenellä kovalenttisesti sitoutuneesta muramyylipeptidistä, jolla on yllämainittu rakenne. Näitä uusia antigeenijohdannaisia voidaan lähemmin kuvata esim. kaavalla A‘[Z°'1 J° (1)
Siinä on A antigeenin tähde, Z siltajäsen (Spacer), MP yllämainitun muramyylipeptidin tähde ja n on kokonaisluku, joka on suurempi kuin 0.
Tällöin ymmärretään antigeenillä orgaanista ainetta, jonka fysiologinen väliaine, ts. ihmisen tai eläimen elimistä, tunnistaa immu-nologisesti vieraaksi tai voidaan sopivilla edellytyksillä tunnistaa vieraaksi.
Antigeeneihin kuuluvat ensisijassa kaikki aineet, jotka aikaansaavat elävän spesifisen immuunisuuden tarttuvia taudinaiheuttajia 3 66878 tai ei-toivottuja reaktioita, kuten allergista herkistymistä tai siirretyn vieraan kudoksen hylkäämistä vastaan. Erityisesti kuuluvat näihin antigeenit rokotteiden komponentteina.
Toisaalta rokotteina tulevat kysymykseen sellaiset, joita klassisessa rokotusmenetelmässä voidaan käyttää spesifisen immunologisen suojan aikaansaamiseksi infektiosairauksia vastaan. Tällaisiin rokotteisiin sisältyvinä antigeeneinä tulevat kysymykseen heikentyneet elävät tai kuolleet, modifioidut tai hajotetut infektiosairauksien aiheuttajat, näistä taudinaiheuttajista muodostuneet toksoidit tai luonnollisesti tai synteettisesti valmistetut taudinaiheuttajan ja toksoidien osakomponentit. Taudinaiheuttajien luokkina on erityisesti mainittava: virukset, klamydiat, rikketsiat, bakteerit, prototsooat tai matatsoiset parasiitit. Edullisia antigeenejä ovat sellaiset, jotka ovat sopivia rokotteiden aineosina hoidettaessa esim. influenssa A:ta ja B:tä, parainfluenssa 1-3:a, respiratorisella syncytial-viruksella, rhinoviruksilla tai adenoviruksilla aiheutettuja hengityselin-sairauksia, sytomegaliaa, vihurirokkoa, tuhkarokkoa, sikotautia, hinkuyskää, poliomyelitistä, Herpes simplex 1:tä tai 2:ta, vesirokkoa ja vyöruusua, rotavirus-sairauksia, hepatitis A:ta, B:tä ja muita, vesikauhua, suu- ja sorkkatautia, trakomaa, luumätää, me-ningokokkien A, B ja C aiheuttamaa aivokalvontulehdusta, pneumokokeilla, H.influenzae'11a, streptokokeilla (erityisesti reumaattista kuumetta), Psodomonas1 elia ja Proteus'ella aiheutettuja sairauksia, ty-fusta, paratyfusta ja muita enterobakteereilla aiheutettuja ripuli-sairauksia, tippuria, syfilistä, malariaa, trypanosoomatauteja (uni-taudit ja Chagas-tauti), leismaniatautia, rihmamatotautia, halko-matotautia, koukkumatotautia ja muita matosairauksia.
Toisaalta on mainittava uudenlaiset rokotteet, jotka eivät suuntaudu infektiosairauksien aiheuttajia vastaan, vaan joko elimistölle ominaisia aineosia, ts. normaaleja ja poikkeavia autoantigeenejä vastaan tai herkistäviä ympäristöantigeeneja, ts. allergeeneja vastaan.
Joissakin tapauksissa pyritään immunisoimalla normaaleja ja poikkeavia autoantigeenejä vastaan, laukkauttamaan elimistölle ominaisten molekyylien (esim. hormonien, muiden välittäjäaineiden ja humo-raali- ja solureseptorien) toiminnot tai poikkeavien, erityisesti neoplastisten solulinjojen leviäminen tai jatkuvuus. Edullisia antigeenejä tällaisten rokotteiden aineosina ovat esim. ihmisen korion- 4 66878 gonadotropiinin osasekvenssit tai siittiöiden aineosat hedelmällisyyden välittäjäaineita vastaan tarkoitettuun iirununointiin ja täten lisääntymistoimintojen immunologiseen estämiseen; tulehdusilmiön välittäjät, erityisesti puhdistetussa muodossa, mm. lymfosyyteistä eristetyt lymfokiinit, erityisesti MIF (macrophage migration inhibitory factor) tulehdussairauksien immunologiseen ehkäisyyn; lymfosyyttien ja vasta-aineiden immunologisesti spesifiset antigeenireseptorit (fraktioidut, antigeenispesifiset lymfosyytit, näistä lymfosyyteistä uutetut tai erotetut antigeenireseptorit, fraktioidut antigeenispe-sifiset vasta-aineet tai vasta-ainefragmentit) anti-idiotyyppiseen immunointiin (immunointi antigeenireseptori-rakenteelle luonteenomaisia autoantigeenejä vastaan) tarkoituksena spesifisten immuunireaktioiden estäminen taudinaiheuttavien immuuniprosessien, kuten auto-immuniteetin eliminoimiseksi (esim. synoviaaliantigeenia ja immuno-globuliineja vastaan primäärisessä kroonisessa polyartriittiksessa, myeliinikomponentteja vastaan keskushermoston rappeutumissairauksissa, TSH-reseptoreja vastaan autoimmuunisessa kilpirauhastulehduksessa, poikkijuovaisen lihaksiston asetyylikoliini-reseptoreita vastaan Myasthenia gravis*essa, haimasolukomponentteja vastaan nuoruudenaikaisessa sokeritaudissa) tai allergiassa (esim. heinäsiitepölyä, pölyä tai lääkkeitä vastaan allergisessa astmassa, allergisessa nuhassa tai lääkeaineyliherkkyydessä) tai sinänsä normaalien, mutta ei-toivottujen immuunireaktioiden välttämiseksi (esim. immuunitolerans-sien indusoimiseksi siirrettyjen vieraiden elimien ja kudoksien hyl-käämisreaktion estämiseksi); autologiset tai niiden kanssa ristiin-reagoineet homologiset tai heterologiset kasvainsolut, kasvainsolu-fragmentit tai -membraanikomponentit, mukaanluettuna onkornavirus-koodatut glykoproteiinit, kuten GP 70, kasvainspesifiseen immunointiin syöpäsairauksien ehkäisyssä ja hoidossa.
Muissa tapauksissa, immunoimalla allergeeneja vastaan, on pyritty indusoimaan patogeneettisesti relevantin IgE-vasta-ainevasteen sijasta etupäässä tai riittävässä määrin IgG- ja IgA-vasta-aineita herkistäviä ympäristöantigeeneja vastaan ja siten vangitsemaan verenkierrossa ja eritteissä allergeeneja spesifisillä vasta-aineilla, ennenkuin ne voivat reagoida syöttösoluihin (Mastzellen) sitoutuneiden IgE-vasta-aineiden kanssa ja täten laukaista allergisten välittäjien vapautumisen. Tässä antigeenispesifisessä desensibilisoinnis- 66878 5 sa ovat allergeenit itsessään, ts. esim. heinäsiitepöly, tomu tai lääkeaine, rokotteen antigeeniaineosana.
Antigeenit voivat, erityisesti kun ne ovat pienimolekyylisiä, olla myös kokonaan ja edullisesti kovalenttisesti sitoutuneena suuri-molekyyliseen kantaja-aineeseen. Kantaja-aineena on erityisesti mainittava maitohapon polymeerit ja niiden johdannaiset, joilla on ket-junpäässä vapaa karboksyyliryhmä, kuten niiden esterit glykolihappo-jen, polymaitohappoamidien tai maitohappopolyesteriamidien kanssa, kuten esim. englantilaisessa patenttijulkaisussa 932 382 on esitetty, edelleen algiinihappo, polygalakturonihappo, pektiinihappo, karboksi-metyyliselluloosa tai agaroosi. Edelleen tulevat kantaja-aineena kysymykseen emäksiset, neutraalit tai happamet polyaminohapot, jotka eivät itsessään ole immunogeeneja, kuten polyasparagiinihappo, poly-glutamiinihappo, polylysiini tai polyornitiini. Kantaja-aineena tulevat kysymykseen myös mitkä tahansa muut antigeenit edellä annetun määritelmän tai esitettyjen esimerkkien puitteissa, mikäli immuuni-reaktio näitä vastaan voi tulla kysymykseen tai on jopa toivottava. Näin voi esim. HCG-peptidi olla kovalenttisesti sitoutunut tetanus-toksoidiin, kantajana.
Uusien yhdisteiden eri osat ovat kovalenttisesti toisiinsa sitoutuneet, ts. antigeeni on ainakin yhdellä funktionaalisista ryhmistään sitoutunut peptidikemiassa tavanomaisella liittymisellä muramyylipep-tidin tähteeseen, suoraan tai siltajäsenen välityksellä (Spacer).
Siltajäseneksi (Spacer) sopivat erityisesti alifaattisten yhdisteiden bivalenttiset tähteet, esim. sellaisten yhdisteiden tähteet, joissa on vähintään kaksi aminoryhmää, vähintään yksi aminoryhmä ja yksi karboksi- tai tiokarboksiryhmä, tai vähintään kaksi karboksi-tai tiokarboksiryhmää, kuten alifaattiset diamiinit, amino-tiokarbo-nihapot, neutraalit, emäksiset tai happamet alifaattiset aminohapot di- tai oligopeptidit.
Siltajäsenenä on erityisesti mainittava α,ω-diaminoalkaanit, varsinkin α,ω-diaminoalempialkaanit, kuten etyleenidiamiini, propyleeni-diamiini, tetrametyleenidiamiini, alkyyli-dikarbonihapot, kuten meri-pihkahappo tai glutaarihappo, α, β tai γ-aminoalkaanikarbonihapot, erityisesti α-amino-alempialkaanikarbonihapot, varsinkin luonnolliset a-amino-alempialkaanikarbonihapot, kuten glysiini, β-alaniini, L-alaniini, α-amino-isovoihappo, väliini tai leusiini.
6 66878
Kovalenttisina liitoselementteinä on erityisesti mainittava kar-boksyylihappoesteri-, karboksyylihappoamidi-, tiokarboksyylihappo-esteri- tai tiokarboksyylihappoamidiryhmät.
Mainitut uudet yhdisteet voivat sisältää useamman kovalenttisen liitoselementin, riippuen aina käytetyn siltajäsenen luonteesta. Täten voi edellä esitetty kaava I esim. olla seuraavassa yksityiskohtaisemmassa muodossa
f A “I
Jjj f i I - [r·-*··']^-*··-,^ <m) L I J 0-1 m *- \h i _LT Jo-i jossa A on antigeenin tähde, T on kantaja-aineen tähde, MP on mura-myylipeptidin tähde, Z' ja Z" ovat bivalenttisia siltajäseniä, ja X', X", X'" ja X1V ovat kovalenttisia liitoselementtejä ja m ja n ovat kokonaislukuja, jotka ovat suurempia kuin 0.
Alkyyli on suoraketjuinen tai haarautunut, mielivaltaisesta asemasta sitoutunut alkyyli, jossa on korkeintaan 18 hiiliatomia, mieluimmin kuitenkin alempialkyyli.
Substituoitu alkyylitähde, kuten alempialkyylitähde voi sisältää yhden, kaksi tai useamman samanlaisen tai erilaisen substituentin.
Tämän selityksen ja patenttivaatimusten yhteydessä sanonnalla "alempi" varustetut tähteet ja yhdisteet sisältävät mieluimmin enintään 7, ja ensisijassa enintään 4 hiiliatomia.
Edellä olevassa sekä jäljempänä seuraavassa voivat yleiskäsitteet saada seuraavat merkitykset:
Alempialkyyli on esim. n-propyyli, n-butyyli, isobutyyli, sek.-butyyli tai term.-butyyli, myös n-pentyyli, n-heksyyli, isoheksyyli tai n-heptyyli ja ensisijassa metyyli tai etyyli. Fenyylialempialkyy-lissä alempialkyylitähde on erityisesti metyyli tai etyyli.
Alempialkoksi on esim. n-propoksi, n-butoksi, isobutoksi, sek.-butoksi tai tert.-butoksi ja ensisijassa metoksi tai etoksi.
Alempialkanoyyli on erityisesti propionyyli tai butyryyli, ensi- 66878 7 sijassa kuitenkin asetyyli.
Uudet antigeenijohdannaiset voivat olla isomeerien seoksien muodossa tai puhtaiden isomeerien muodossa.
On tunnettua, että muramyylipeptidit ovat hyviä apuaineita, jotka sopivasti sekoitettuina antigeenien kanssa voivat sisätä niiden immunogeniteettia. On kylläkin havaittu, että niillä on ainoastaan lyhytaikainen vaikutus, koska ne erittyvät suhteellisen nopeasti ihmisen tai eläimen elimistöstä. Ennenkaikkea ne pystyvät vain tietyissä, kliinisiä tarkoituksia varten sopimattomissa olosuhteissa, nimittäin seoksina antigeenien kanssa mineraaliöljyemulsiossa, indusoimaan in vivo soluvälitteisen immuniteetin liukoisia antigeenejä vastaan.
Tämän keksinnön mukaiset uudet yhdisteet aikaansaavat nyt immuunivasteen selvän voimistumisen antigeenissä, erityisesti myös soluvälitteisen immuniteetin kliinisesti hyväksyttävissä annostusolosuh-teissa, kuten seuraavassa esitetyt koejärjestelyt osoittavat: 1. Soluvälitteisen immuniteetin tehostaminen in vivo:
Viivästyneen yliherkkyyden kohoaminen naudan seerumialbumiinia (BSA) ja lampaan erytrosyyttejä (SRBC) vastaan marsuissa.
Pirbright-marsuja immunoidaan 0-päivänä 1 mg:11a BSA:ta tai 1 mg:11a SRBC-haamusoluja ("Ghosts") (SRBCG) täydellisessä Freund'in apuaineessa· injektoimalla kulloinkin 0,1 mg antigeeni-apuaine-seosta molempiin takakäpäliin. 3 viikkoa myöhemmin laukaistaan ihoreaktioita injektoimalla ihonalaisesti 100 yg BSA:ta tai vast. 100 yg SRBCG: tä liuotettuna 0,1 ml:aan puskuroitua fysiologista suolaliuosta ja 24 tunnin kuluttua saadaan reaktiovoimakkuus punoittavan ihottuman alan ja ihonpaksuuden lisääntymisen perusteella. 24 tunnin kuluttua (viivästynyt reaktio) havaittua reaktiovoimakkuuden antigeenispesi-fistä lisääntymistä pidetään soluvälitteisen immuniteetin mittana.
BSA ja SRBCG ovat liian heikkoja immunogeeneja indusoidakseen viivästyneen reaktion yksistään tai vesi-öljy-emulsiona epätäydellisen Freund'in apuaineen kanssa (10 osaa BSA-liuosta, vastaavasti RSNCG-suspensiota 0,9 %:ssa NaCl sekoitetaan 8,5 osan kanssa Bayol F:ää @ (parafiiniöljy, kiviöljyn hiilivetyjae) ja 1,5 osan kanssa Arlacel A:ta (mannitaani-mono-oleaatti)), vaan tehokkaan immunoinnin saavuttamiseksi niitä on käytettävä täydellisessä apuaineessa, johon on lisätty mykobakteereita (5mg kuolleita ja lyofilisoituja M.butyricum' ia /10 ml Bayol F/Arlacel A).
8 66878
Mykobakteerien sijasta käytetään uusia yhdisteitä, jotka sisältävät antigeeninä BSA:ta (1 mg BSA, 60 yg MDP/eläin) tai antigeeninä SRBCG:tä (1 mg SRBCG, 25 yg MDP/eläin), joko antigeeni-öljy-seoksena tai suspensoituna karboksimetyyliselluloosaan (CMC). Uudet yhdisteet indusoivat mykobakteerien poissaollessa, viivästyneen reaktion edellä esitetyssä koejärjestelyssä.
Viivästyneen reaktiviteetin merkittävä tehostuminen BSA:ta ja SRBCG:tä vastaan voidaan myös saavuttaa siten, ettei uusia yhdistei-yhdistetä tä/epätäydelliseen Freund'in apuaineeseen, vaan ne annetaan CMC:hen suspendoituina. Erityisen tehokkaaksi on osoittautunut tässä tapauksessa lihakseen antaminen. Näissä olosuhteissa oli vapaan muramyyli-peptidin yhtäsuuri määrä, joka oli sekoitettu CMC-seokseen, olennaisesti vähemmän aktiivinen kuin uusi aktiiviaine. Täten osoitettiin, että uudet yhdisteet kliinisesti hyväksyttävissä annostusolosuhteis-sa, ts. annettaessa niitä yhdessä keholle ystävällisten lisäaineiden kanssa, voivat indusoida soluvälitteistä immuniteettia jopa liukoista proteiiniantigeenia vastaan.
2. Soluvälitteisen immuniteetin tehostaminen in vivo:
Viivästyneen yliherkkyyden voimistaminen BSA:ta ja SRBCG:tä vastaan hiirellä.
MAG-koirashiiriä immunoitiin 0-päivänä asteittaisilla annoksilla antigeeniä (BSA-agaroosi tai SRBCG), jotka eivät olleet konjugoitu-neet muramyylipeptidin kanssa tai muramyylipeptidiin konjugoituneita antigeenejä (BSA-agaroosi tai SRBCG). BSA-agaroosi-valmisteet annettiin subkutaanisesti 0,1-100 yg:n annoksena (vastaten 0,0029-6 yg:n aktiiviaineannosta uusilla yhdisteillä yhdessä muramyylipeptidien kanssa eläintä kohden) 0,2 ml:n tilavuudessa puskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta. SRBCG-valmisteet annettiin 0,01-3 mg:n annoksena (vastaten 0,25-75 yg:n aktiiviaineannosta uusilla yhdisteillä yhdessä muramyylipeptidien kanssa eläintä kohden) intraperitoneaali-sesti 0,5 ml:n tilavuudessa puskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta ja vastaavasti 0,05 ml:n tilavuudessa ihonsisäisesti jaettuna kolmeen käpälään.
4-20 päivää myöhemmin laukaistaan viivästyneitä reaktioita injek-
Q
toimalla vasempaan takakäpälään 100 yg BSA:ta, vastaavasti 10 SRBC: tä 20 yl:ssa puskuroitua fysiologista suolaliuosta ja 24 ja 48 tunnin kuluttua määritetään reaktiovoimakkuus käpälien paisumisen pe- 66878 9 rusteella. Käpälien tilavuuden havaittua antigeenispesifistä lisääntymistä pidetään soluvälitteisen immuniteetin mittana.
Alkaen 14. päivästä immunoinnista BSA-agaroosi-MDP-yhdisteillä esiintyi myös jo huomattavasti alhaisemmilla annoksilla 0,1 yg; vastaten 0,006 yg aktiiviainetta) selvät viivästyneet reaktiot. Päinvastoin vapaa BSA-agaroosi ei pysty herkistämään viivästyneitä reaktioita. Samoin pystyvät SRBCG-MDP-yhdisteet - etenkin ihonsisäisesti annettaessa - indusoimaan viivästyneen reaktiivisuuden, joka on huomattavasti selvempi kuin se, joka voidaan saada herkistämällä SRBCGrllä, joka ei ole sitoutunut muramyylipeptidiin.
Täten on myös osoitettu, että uudet yhdisteet voivat huomattavasti kohottaa soluimmuniteettia.
3. Humoraalisen immuniteetin tehostaminen in vivo:
Vasta-ainetuotannon kohoaminen BSA:ta vastaan hiirellä.
NMRl-hiiret immunoitiin intraperitoneaalisesti injektoimalla 0,1-100 yg BSA:ta, joka oli sitoutunut muramyylipeptidiin (0,0014-6,0 yg aktiiviainetta) 0 päivänä 10, 17 ja 28 päivää myöhemmin otettiin seeruminäytteet ja niistä tutkittiin anti-BSA-vasta-ainepitoisuus passiivisella hemagglutinaatio-tekniikalla. Käytetyillä annoksilla on vapaa BSA vastaanottajaeläimissä subimmunogeeninen, ts. se ei kykene aikaansaamaan minkäänlaista vasta-ainetuotantoa tai aikaansaa vain hyvin merkityksettömän vasta-ainetuotannon. Yhdiste, jossa BSA on yhdessä muramyylipeptidin kanssa, mahdollistaa 2-3 kertaisen vasta-ainetiitterin nousun seerumissa (log2 tiitteri-eroavaisuuksien tiit-teri-summa kolmena verikoepäivänä). Huomattavaa on sen lisäksi, että uudet yhdisteet, jotka vielä kytkettiin agaroosiin, joka on kantaja-aineena, ovat intraperitoneaalisesti tai subkutaanisesti annettaessa vielä voimakkaammin immunogeeneja.
Tämä koe osoitti, että keksinnön mukaiset uudet yhdisteet voivat huomattavasti kohottaa myös humoraalista immuniteettia.
Uudet antigeenijohdannaiset ovat uudenlaisia tai parannettuja tunnettuja rokotusaineita ja niitä voidaan käyttää uudenlaisissa ro-kotusmenetelmissä tai käyttökelpoisten rokotusmenetelmien yksinkertaistamiseksi (jolloin esim. rokotusten lukumäärää, joka on tarpeellinen pitempiaikaisemman suojan ylläpitämiseksi, voidaan vähentää).
Keksintö koskee erityisesti menetelmää uusien antigeenijohdannaisten valmistamiseksi, jotka sisältävät antigeeniä parasiitteja, 10 66878 bakteereita, viruksia, kasvainsoluja, fysiologisia keholle ominaisia aineosia, niiden modifioituja muotoja tai niiden alayksikköjä vastaan tarkoitettujen rokotteiden komponenttina, mahdollisesti siltajäsenien välityksellä kovalenttisesti sitoutuneita, kaavan II mukaisiin mura-myylipeptideihin, jossa R1, Rg, R4# Rg ja R? ovat vety, X on karbo-nyyli ja R2 mahdollisesti hydroksilla tai alempialkoksilla substituoi-tu alempialkyyli tai fenyyli ja Rg, Rg, R1Q, R11, R12 ja R.j 3 tarkoittavat samaa kuin edellä.
Keksintö koskee erityisesti menetelmää uusien antigeenijohdannaisten, jotka sisältävät antigeeniä parasiitteja, bakteereita, viruksia, kasvainsoluja, fysiologisia keholle ominaisia aineosia, niiden modifioituja muotoja tai niiden alayksikköjä vastaan tarkoitettujen rokotteiden komponentteina, mahdollisesti siltajäsenien välityksellä kovalenttisesti sitoutuneina kaavan II mukaisiin muramyylipeptideihin, joissa , R4, Rg ja R^ ovat vety, X on karbonyyli, R2 mahdollisesti hydroksilla tai alempialkoksilla substituoitu alempialkyyli tai fenyyli ja R3 on metyyli ja Rg, Rg, R-jq/ ri' Ri 2 3a R13 tarkoittavat samaa kuin edellä.
Keksintö koskee ensisijassa menetelmää uusien antigeenijohdannaisten valmistamiseksi, joka sisältävät kovalenttisesti sitoutuneina kaavan II mukaisia muramyylipeptideitä, joissa R^, R4, Rg ja R^3 ovat vety, X on karbonyyli, R2 mahdollisesti hydroksilla tai nietoksilla substituoitu alempialkyyli tai fenyyli, Rg on vety tai metyyli, R7 ja Rg ovat vety, Rg alempialkyyli, hydroksialempialkyyli tai fenyyli ja R^, R^ ja R^ ovat karboksyyli, alempialkoksikarbo-nyyli tai karbamoyyli ja R^ on myös vety.
Keksintö koskee ennen kaikkea menetelmää uusien antigeenijohdannaisten valmistamiseksi, joka sisältävät kovalenttisesti sitoutuneina kaavan II mukaisia muramyylipeptideitä, joissa R^, R4, Rg ja R^3 ovat vety, X karbonyyli, R2 mahdollisesti hydroksilla tai nietoksilla substituoitu alempialkyyli tai fenyyli, Rg ja Rg ovat vety tai metyyli, Rg metyyli, etyyli, n-propyyli, i-propyyli, 2-metyylipropyyli, hydroksimetyyli, hydroksietyyli tai fenyyli ja R1Q, R-j-j ja R12 ovat karboksi, alempialkoksikarbonyyli tai karbamoyyli, R^ ^ on myös vety.
Keksintö koskee myös menetelmää uusien antigeenijohdannaisten valmistamiseksi, jotka sisältävät antigeeniä bakteereita, viruksia, 1 1 66878 kasvainsoluja, fysiologisia keholle ominaisia aineosia, niiden modifioituja muotoja tai niiden alayksikköjä vastaan tarkoitettujen rokotteiden komponentteina, mahdollisesti siltajäsenien välityksellä kovalenttisesti sitoutuneina kaavan II mukaiseen muramyylipeptidiin, joissa R.j, R^, Rg ja R^ ^ ovat vety, X on karbonyyli, R^ ja Rg ovat yhdessä propyleeni tai butyleeni ja R£, R^, R^, Rio' R11 R12 tar“ koittavat samaa kuin edellä.
Siltajäsenet edellä esitetyissä määritelmissä ovat erityisesti a,ω-diamino-alempialkaanit, alempialkyyli-di-karboksyylihapot, luonnolliset a-amino-alempialkaanikarboksyylihapot.
Keksintö koskee erityisesti menetelmää uusien, esimerkeissä esitettyjen antigeenijohdannaisten valmistamiseksi.
Uudet yhdisteet voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä.
Keksinnön mukaiselle uusien antigeenijohdannaisten valmistusmenetelmälle on tunnusomaista, että mahdollisesti siltajäseniin liittynyt antigeeni kondensoidaan muodostamalla kovalenttisia sidoksia ok-sikarbonyyli-, iminokarbonyyli- tai karbonyylitioryhmien kanssa, mahdollisesti siltajäseniin liittyneisiin kaavan II mukaisiin muramyyli-peptideihin, jolloin toisella näistä osista on ainakin yksi vapaa amino-, hydroksi- ja/tai merkaptoryhmä, ja toisella ainakin yksi kar-boksyylihapporyhmä, ja saatu yhdiste edellä selitetyllä tavalla haluttaessa kondensoidaan niinikään muodostamalla kovalenttisia sidoksia oksikarbonyyli-, iminokarbonyyli- tai karbonyylitioryhmien kanssa mahdollisesti siltajäseniin sitoutuneeseen kantaja-aineeseen.
Kondensaatiot suoritetaan tällöin esim. siten, että aktivoidun karboksyylihapon muodossa oleva yhdiste saatetaan reagoimaan toisen yhdisteen kanssa vapaan amino-, hydroksi- tai merkaptoyhdisteen muodossa. Aktivoitu karboksyyliryhmä voi olla esim. happoanhydridi, mieluimmin happoatsidi, happoamidi, kuten imidatsolidi, iso-oksatsolidi tai aktivoitu esteri. Aktivoituina estereinä on erityisesti mainittava syaanimetyyliesteri, karboksimetyyliesteri, p-nitrofenyylitio-esteri, metoksietyylitioesteri, asetyyliaminoetyylitioesteri, p-nit-rofenyyliesteri, 2,4,5-trikloorifenyyliesteri, N-hydroksisukkinimidi-esteri, N-hydroksiftaali-imidiesteri, 8-hydroksikinoliiniesteri, N-hydroksipiperidiiniesteri. Aktiivisia estereitä voidaan myös saada mahdollisesti karbodi-imidistä N-hydroksisukkinimidin tai substituoi-mattoman tai esim. halogeenilla, metyylillä tai nietoksilla substi- 12 66878 tuoidun 1-hydroksibentsotriatsolin tai 3-hydroksi-4-okso-3,4-dihydro-bentso(d)-1,2,4-triatsiinin kanssa.
Näissä kondensaatioissa käytettyjen poistoryhmien täytyy olla myrkyttömiä tai hyvin poistettavissa sen välttämiseksi että suurimo-lekyylisimmät yhdisteet adsorptiolla pidättävät myrkyllisiä osia.
Sen vuoksi suositetaan aktiivisina estereinä sellaisia, jotka saadaan N-hydroksisukkinimidin tai sen C-substituutiotuotteiden, kuten N-hydroksimetyyli- tai -dimetyylisukkinimidin kanssa tai reaktiolla karbodi-imidin, kuten karbodi-imidin itsensä tai 1-etyyli-3-(3-dime-tyyliaminopropyyli)-karbodi—imidin kanssa.
Edellä esitetyt reaktio suoritetaan tavanomaiseen tapaan joko ilman laimennus-, kondensaatio- ja/tai katalyyttisiä aineita tai niiden läsnäollessa, tarvittaessa alennetussa tai korotetussa lämpötilassa. Mieluimmin työskennellään, jotteivät antigeenit tuhoutuisi, vesipitoisessa väliaineessa ja pH-alueella 6-9, ensisijassa pH-alueella 7-8.
Keksintö koskee myös menetelmien suoritustapoja, joissa reaktio-komponentti mahdollisesti on johdannaistensa muodossa, kuten suolana ja/tai isomeeriseoksien tai puhtaiden isomeerien muodossa.
Tarkoituksenmukaisesti käytetään keksinnön mukaisten kondensaa-tioiden suorittamiseen sellaisia lähtöaineita, jotka johtavat aluksi erityisen toivottuihin lopputuotteiden ryhmiin ja ennen muita erityisesti esitettyihin ja parhaana pidettyihin lopputuotteisiin.
Käytetyt lähtöaineet ovat tunnettuja tai niiden ollessa uusia niitä voidaan valmistaa sinänsä tunnetuilla menetelmillä.
Keksinnön mukaisia uusia antigeenijohdannaisia voidaan käyttää myös farmaseuttisina valmisteina. Keksinnön mukaiset farmaseuttiset valmisteet ovat sellaisia, joita annetaan lämminverisille enteraali-sesti, kuten oraalisesti tai rektaalisesti, sekä myös parenteraali-sesti, ja jotka sisältävät pelkkää farmakologisita aktiiviainetta tai tätä yhdessä farmaseuttisesti käyttökelpoisen kantaja-aineen kanssa.
Uudet farmaseuttisest valmisteet sisältävät noin 10 - noin 95 %, edullisesti noin 10 - noin 90 % aktiiviainetta. Keksinnön mukaiset farmaseuttiset valmisteet ovat annosyksikkömuodoissa, kuten rakeina, tabletteina, kapseleina, suppositorioina tai ampulleina.
Edullinen käyttömuoto muodostuu uusien antigeenijohdannaisten liuoksesta tai suspensiosta, joka sisältää mieluimmin korkeintaan 10 painoprosenttia karboksimetyyliselluloosaa.
13 6687 B
Täten käytetään uusia rokotusaineita tunnettujen rokotusmenetel-mien yhteydessä hyväksyttyä ja tunnettua annostusta vastaavasti paino- tai kansainvälisinä yksikköinä, esim. annetaan varhaisimusoluja sisältävät antigeenijohdannaiset annoksina, jotka sisältävät injek-6 10 tiota kodhen 10-10 soluorganismia 2-8 viikon väliajoin 1-6 kertaa. Tällöin on edullista, että jokainen mg proteiinia sisältää 5-200 mikrogrammaa muramyylipeptidiä.
Mieluimmin käytetään immunointiin liukenevien yhdisteiden kanssa vastaavaa määrää antigeenijohdannaista Falz-liuoksessa (BSS), jossa on 0,14 g kalsiumkloridia, 0,8 g keittosuolaa, 0,2 g magnesiumsulfaatti -71^0: ta, 0,2 g magnesiumkloridi * 61^0: ta, 0,6 g kaliumdivetyfosfaattia ja 0,24 g dinatriumvetyfosfaattia*21^0:ta litrassa vettä.
Mikäli pyritään depetvaikutukseen (esim. paikallisessa, intrader-maalisessa tai intramolekulaarisessa annostuksessa) voidaan näin liuotettuun antigeenijohdannaiseen vielä lisätä karboksimetyyliselluloo-saa (loppukonsentraatio mieluimmin 5 %).
Ei-liukenevat makromolekulaariset antigeenijohdannaiset annetaan mieluimmin suspensioina BSS:ssä käytäen karboksimetyyliselluloosaa stabilisaattorina (loppukonsentraatio mieluimmin 5 %). Pysyvän suspension valmistamiseksi käsitellään jäällä jäähdytettyä seosta edullisesti konsentroidusti ultraäänellä.
Antigeelijohdannaiset, joissa on soluja, annetaan ensisijassa kullekin solutyypille erityisen sopivassa kudosviljelyväliaineessa (esim. lymfosyyteille EAGLE'S high amino acid medium) (click et ai., Cell. Immunol, voi. 3, s. 264-276 (1972)).
Uudet, lähtöaineina käytettävät kaavan II mukaiset muramyylipep-tidit, joissa X on karbonyyliryhmä, ja Rg ovat toisistaan riippumatta vety, vähintään yksi tähteistä R^, Rg ja R^^ on alempi-alkyyli, ensisijassa metyyli ja muut ovat vetyjä, ja muilla substi-tuenteilla on yllämainitut merkitykset, voidaan valmistaa kondensoi-malla sinänsä tunnetulla tavalla yhdiste, jonka kaavan IV on 14 66878 CHo0R? J—\ K Λ >^0 ' R1 (IV> _/ / y -x - r2
R, - CH (D) R
\
COOH
jossa X, R2, ja R^ 2 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R°, R° ja R° ovat tähteet R^, R4 tai Rg tai helposti poislohkaistavissa oleva suojaryhmä, tai sen johdannainen yhdisteen kanssa, jonka kaava V on
R° R0 rO
,8 ,10 ,11 HN - CH - CON - CHCH^CH - R° (V) r7 (l) r9 jossa R°, R°Q, ja R°2 tarkoittavat samaa kuin Rg, R1^ ja R^2> edellyttäen, että näissä tähteissä esiintyvät karboksi- ja haluttaessa vapaat hydroksyyliryhmät on suojattu helposti poistettavissa olevilla suojaryhmillä, ja mahdollisesti lohkaisemalla esiintyvät suo-jaryhmät pois.
Kondensaatio suoritetaan tällöin esim. sillä tavalla, että kaavan IV mukainen yhdiste aktivoidun karboksyylihapon muodossa saatetaan reagoimaan kaavan V mukaisen aminoyhdisteen kanssa, tai kaavan IV mukainen happo saatetaan reagoimaan kaavan V mukaisen yhdisteen kanssa, jonka aminoryhmä on aktivoidussa muodossa. Aktivoitu karboksyyli-ryhmä voi olla esim. happoanhydridi, mieluimmin sekahappoanhydridi, kuten happoatsidi, happoamidi, kuten imidatsoli, iso-oksatsolidi tai aktivoitu esteri. Aktivoituina estereinä on erityisesti mainittava syaanimetyyliesteri, karboksimetyyliesteri, p-nitrofenyylitioesteri, p-nitrofenyyliesteri, 2,4,5-trikloorifenyyliesteri, pantakloorifenyy-liesteri, N-hydroksisukkinimidiesteri, N-hydroksiftaali-imidiesteri, 8-hydroksikinoliiniesteri, 2-hydroksi-1,2-dihydro-1-karboetoksi-kino-liiniesteri, N-hydroksipiperidiiniesteri tai enoliesteri, joka saadaan N-etyyli-5-fenyyli-iso-oksatsolium-3'-sulfaatin kanssa. Aktivoi 15 66878 tuja estereitä voidaan myös saada mahdollisesti karbodi-imidin kanssa lisäämällä N-hydroksisukkinimidiä tai substituoimatonta tai esim. halogeenilla, metyylillä tai nietoksilla substituoitua 1-hydroksi-bentsotriatsolia, 3-hydroksi-4-okso-3,4-dihydro-bentso(d)-1,2,3-tri-atsiinia.
Aminoryhmä aktivoidaan esim. reaktiolla fosfiittiamidin kanssa.
Menetelmistä, joissa reaktio tapahtuu aktivoidun esterin kanssa, on mainittava erityisesti reaktiot N-etyyli-5-fenyyli-iso-oksatso-lium-3'-sulfonaatin (Woodward reagens K) tai 2-etoksi-1,2-dihydro-1-karboetoksi-kinoliinin tai karbodi-imidin kanssa.
Helposti pois lohkaistavissa olevia suojaryhmiä ovat sellaiset, jotka ovat tunnettuja peptidi- tai sokerikemiasta. Karboksiryhmille voidaan erityisesti mainita tert.-butyyli, bentsyyli tai bentshydryy-li ja hydroksiryhmille erityisesti asyylitähteet, esim. alempialka-noyylitähteet, kuten asetyyli, aroyylitähteet, kuten bentsoyyli ja ennenmuita hiilihaposta johdetut tähteet, kuten bentsyylioksikarbo-nyyli, tai alempialkoksikarbonyyli tai alkyyli, erityisesti tert.-butyyli, mahdollisesti nitrolla, alempialkoksilla tai halogeenilla substituoitu bentsyyli tai tetrahydropyranyyli tai mahdollisesti substituoidut alkylideenitähteet, jotka sitovat happiatomit 4- ja 6-asemassa. Tällaisia alkylideenitähteitä ovat erityisesti alempialky-lideeni-, ensisijassa etylideeni-, isopropylideeni- tai propylidee-nitähde tai myös mahdollisesti substituoitu, mieluimmin p-asemassa substituoitu bentsylideenitähde.
Nämä suojaryhmät voidaan sinänsä tunnetulla tavalla lohkaista pois. Ne voidaan poistaa hydrogenolyyttisesti, esim. vedyllä jonkin jalometalli-, kuten palladium- tai platinakatalyytin läsnäollessa.
Käytetyt lähtöaineet ovat tunnettuja tai niitä voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla.
Uudet, lähtöaineina käytettävät kaavan II mukaiset muramyylipep-tidit, joissa X on karbonyyliryhmä, R1, R4 ja Rg on trialempialkyyli-silyyli, ensisijaisesti trimetyylisilyyli, ja muilla substituenteilla on yllämainitut merkitykset, voidaan saada saattamalla tunnetulla tavalla yhdiste, jonka kaavan XI on 16 66878
CH2OH
/~°> HM—r / N - X - R2 <XI) R3 - CH (D) R13 \ i8 i10 iu CON - CH - CON - CH - CH0CH - R, „ I r 2 12
R (L> R
R7 · R9 reagoimaan tri-alempialkyylisilyyliyhdisteen reaktiokykyisen esterin kanssa.
tri-alempialkyylisilyyliyhdisteen reaktiokykyisinä estereinä on erityisesti mainittava trialempialkyyli-silyylihalogenidit, erityisesti -kloridit tai -bromidit, bis-alempialkyyli-silyyli-asetamidi tai -sulfamidi.
Reaktio suoritetaan mieluimmin liuottimessa, joka ei sisällä reaktiokykyisiä hydroksi- tai aminoryhmiä, kuten dimetyyliformamidis-sa, dioksaanissa, tetrahydrofuraanissa, dimetoksietaanissa tai kloroformissa.
Seuraavat esimerkit kuvaavat edellä esitettyä keksintöä; lämpötilat on annettu Celsius-asteina.
Esimerkki 1:
Liuokseen, jossa on 1 g naudanseerumialbumiinia 100 ml:ssa 0,1 M natriumvetykarbonaatti-0,5M keittosuolaliuosta, lisätään samalla hämmentäen 500 mg 1-asetamido-3-O-{(L-1-(D-1-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksikarbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyy-li}-2-deoksi-D-glukoosia. Liuosta hämmennetään 4 tuntia huoneen lämpötilassa ja sen jälkeen suodatetaan steriilisti (MF-Millipore, 0,45 ym suodatin). Konjugoitu naudanseerumialbumiini erotetaan diaali-suo-datusmenetelmässä käyttäen Amikon UM-10 suodatinta (ultrasuodatus-membraani, jonka nimellinen erotyskyky 10 000 Daltonia, valmistaja Amicon Corp.) pienimolekyylisistä reaktiotuotteista tai suoloista ja kylmäkuivataan.
Naudanseerumialbumiiniin sitoutuneen muramyylipeptidin kvanti- 17 66878 tatiivinen määritys suoritetaan Morgan-Elson reaktiolla J.M.Ghuysen et ai'in esittämän sovellutuksen mukaan (julkaisussa "Methods in Enzymology" 8, (1966) 629). Keskimäärin havaittiin 60 ug:n muramyy-lipeptidiä sitoutuneen 1 mg:aan naudanseerumialbumiiniyhdistettä.
Lähtöaineena käytetty sukkiini-imidoesteri valmistetaan esim. seuraavasti: 1 mmooli 2-asetamido-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-D-glu-koosia, 1 mmooli disykloheksyylikarbodi-imidiä ja 1,1 mmooli N-hyd-roksisukkiini-imidiä liuotetaan 3 ml:aan absoluuttista dimetyyliform-amidia ja hämmennetään 20 tuntia kosteudelta suojaten suljetussa astiassa. Saostunut disykloheksyylikarbamidi erotetaan, liuotin haihdutetaan suurtyhjössä ja jäännös käsitellään eetterillä, sen jälkeen imusuodatetaan ja kuivataan. Näin saatua sukkiini-imido-oksiesteriä voidaan säilyttää kosteudelta suojattuna esim. typpiampullissa. Esimerkki 2:
Esimerkissä 1 valmistetun antigeenijohdannaisen kondensaatio aktivoidun agaroosin kanssa; tällöin käytetään BIO-RAD'n kaupallisesti saatavaa agaroosijohdannaista, Affi-Gel 10:tä. Se sisältää agaroosiperusrungossa N-alkyyli-sukkiiniamidien eetterisivuketjuja ("Spacer arms"), jotka on esteröity N-hydroksisukkiini-imidillä.
Liuotetaan 120 mg esimerkin 1 mukaisesti valmistettu naudan-seerumialbumiinijohdannaista 1,25 ml:aan 0,1 M fosfaattipuskuria, pH 7,3, 4°:ssa. Sen jälkeen 500 mg Affi-Gel 10:tä suspendoidaan liuokseen ravistelemalla ja ravistellaan edelleen 4 tuntia 4°:ssa. Vielä jäljellä olevat aktiiviset esteriryhmät muutetaan käsittelemällä 30 minuutin ajan 1 M etanoliamiini.HC1-0,1 M fosfaattipuskuri-liuoksella (pH 7,3). Sen jälkeen täytetään pylväs geelillä ja pestään ensin 200 ml:11a 0,1 M fosfaattipuskuri-1 M keittosuolaliuoksella (pH 7,3), sen jälkeen 20 ml:lla fysiologista keittosuolaliuosta.
Affi-Gel 10:eenkondensoituneen naudanseerumialbumiini-muramyy-lipeptidiyhdisteiden määritys suoritetaan sopivien naudanseerumialbu-miini-aminohappojen kvantitatiivisella analyysillä määrättyjen gee-linäytteiden kokonaishydrolyysissä. Keskimäärin sitoutuu 9,10 mg naudanseerumialbumiini-muramyylipeptidijohdannaista 1 mg:aan turvotettua Affi-Gel 10:tä.
Esimerkki 3:
Lampaan erytrosyyttimembraania saadaan tuoreesta lampaanveres-tä menetelmällä, jonka on esittänyt Dodge, J.I. et ai (Arch,Biochem. Biophys. 100 (1963) s. 114-180). Suspensioon, jossa on 500 mg lam- 66878 18 paan erytrosyyttimembraania 50 ml:ssa 0,1 M natriuravetykarbonaatti- 0. 1 M keittosuolaliuosta, lisätään samalla hämmentäen 400 mg 2-aset-amido-3“0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksikarbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-D-glu-koosia ja seosta hämmennetään 4 tuntia huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen erytrosyyttimembraanikonjugaatti sedimentoidaan tunnin mittaisella ultrasentrifugoinnilla 90 000 g:ssa ja 4°:ssa. Sedimentti pestään kolme kertaa, joka kerta uudelleensuspendoimalla ja ultra-sentrifugoimalla, fosfaattipuskuroidulla keittosuolaliuoksella ja kerran tislatulla vedellä. Pesty erytrosyyttimembraani—konjugaat-ti suspendoidaan tislattuun veteen ja kylmäkuivataan.
Lampaan erytrosyytteihin sitoutuneen muramyylipeptidin määritys suoritetaan Morgan-Elson reaktiolla ja saadaan 25 yg muramyylipepti-diä per 1 mg lampaan erytrosyyttimembraania.
Esimerkki 4: 100 mg Neisseria meningitidis'in ryhmän C polysakkaridia ja 110 mg (0,2 mmoolia) 2-asetamido-3-0-{ (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-ami-noetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-me-tyyli}-2-deoksi-D-glukoosi-HCl:ää liuotetaan 10 ml:aan tislattua vettä, liuoksen pH-arvo säädetään laimella suolahapolla arvoon 5.
19,2 mg l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)-karbodi-imidi. HCl:ää lisätään liuokseen samalla hämmentäen. Seosta hämmennetään 1 tunti huoneen lämpötilassa, pH-arvo - lisäämällä laimennettua nat-ronlipeää - pidetään 5:ssä, tämän jälkeen lisätään 5 ml 2 M natrium-asetaatti-puskuriliuosta, pH 5, ja hämmennetään edelleen 30 minuutin ajan. Sen jälkeen säädetään pH arvoon 7 natronlipeällä. Liuos suodatetaan steriilisti ja 4°:ssa dialysoidaan tislattua vettä vastaan ja sen jälkeen jäähdytyskuivataan.
C polysakkaridiin kytkeytyneen desmetyylimuramyylipeptidin kvantitatiivinen määritys suoritetaan kuten on esitetty esimerkissä 1, Morgan-Elson reaktiolla ja saadaan 80 yg desmetyylimuramyylipep-tidiä per 1 mg polysakkaridia.
Käytetty 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyy-li-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi-hydrokloridi valmistetaan esim. seuraavasti: 1 mmooli 2-asetamino-3-o-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glu-koosia ja 2 mmoolia N-etyyli-N'-(3-dimetyyli-aminopropyyli)-karbodi-imidi. HCl:ää liuotetaan 10 ml:aan vettä ja pH säädetään arvoon 5 suo- 1 9 66878 lahapollaj tämän jälkeen lisätään liuos, jossa on 5 mmoolia etyleeni-diamiinihydrokloridia 10 ml:ssa vettä. Sakkaa hämmennetään pH-arvos-sa 5, huoneen lämpötilassa, 6 tuntia. Seos viedään heikosti happa-meen kationi-ioninvaihtopylvääseen - Amberlite CG 50 II, 2,5 x 45 cm ja eluoidaan lineaarisella gradientilla, 0,05 M pyridiiniasetaatista, pH 6 (300 ml) aina 0,5 M pyridiiniasetaattiin, pH 3,7 (300 ml). Valmistetun 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desok-si-D-glukoosi-asetaatin sisältävät fraktiot - fraktiot testataan ja tunnistetaan ninhydriinillä tai suurjännite-elektroforeesilla -kylmäkuivataan. Muuttaminen hydrokloridimuotoon tapahtuu seuraavasti: lyofilisaatti liuotetaan 6 ml:aan 0,2 N HCl:ää ja kroma- tografoidaan Bio-Gel®P2-pylväällä (molekyylisiivilä polyakryyliamidis- vesi.
ta„ erotusväli 100-1800 Daltonia, valmistaja Bio-Rad), 2,5 x 90 an, eluointiaineena/ 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi-hydrokloridia sisältävät fraktiot jäähdytyskuivataan. Valmiste on yhtenäinen suurjännite-elektroforeesissa. Rakenteen määrityksessä kokonaishydrolysoinnissa havaitaan molekyylisuhde 1 muramiini-happorl L-alaniini: 1 D-glutamiinihappo: 1 etyleenidiamiini.
Samalla tavalla valmistetaan lähtemällä vastaavista muramyyli-peptideistä vastaavat 8’-aminoetyyliamidi.HCl-yhdisteet, nimittäin: 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamo-yyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l- (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi.HC1, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karba-moyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HC1, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyyli-metyyli-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli >-2-desoksi-D-glukoosi.HC1, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karba- · moyyli-propyyli) -karbcimoyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desok-si-D-glukoosi.HCl, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karba-moyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HC1, 20 66878 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyy-li-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-asetyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyy-li-propyyli)-karbamoyyli-2-hydroksietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l (tai 3)-karboksi-3 (tai l)-N-amino-etyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli }-2-desoksi-D-glukoosi .HCl , 2-bentsoyyliamino-3-CH (l-1-(D-l-N-karbamoyyli-metyyli-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karboksi-3-N-aminoetyyli-karbamoyy-li-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-asetamino-3-0-{ (L-1- (D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(1-N-aminoetyyli-karba-moyyli)-etyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli} -2-desoksi-D-glukoosi .HCl , 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karboksi-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.HCl, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karbamoyyli-propyyli) -karbamoyyli-etyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi.HCl tai 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-N-aminoetyyli-karba-moyyli-propyyli)-karbamoyyli-21-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli } -2-desoksi-D-glukoosi .HCl .
Nämä yhdisteet kondensoidaan kuten edellä esitettiin Neisseria meningitidis'in ryhmän C polysakkaridin kanssa.
Esimerkki 5: Välittömästi eristämisen jälkeen malariaa aiheuttavan Plasmodium knowlesi'n Merotsoiitin koko saanto infektoidun reesusapinan verestä (merotsoiittien valmistusmenetelmä: kts. G.H.Mitchel et ai.
21 66878 (1975), Immunology, 29, 397) suspendoidaan liuokseen, jossa on 100 mg (0,17 mmoolia) 2-asetamino-3-0-{ (l-1- (D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksi-karbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)- karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-D-glukoosia 15 ml:ssa fysiologista purskuriliuosta pH 7,2. Suspensiota inkuboidaan tunnin ajan 37°:ssa. Sen jälkeen konjugaatti saostetaan sentrifugoimalla. Sakka pestään uudelleen-suspendoimalla fysiologiseen puskuriliuokseen ja sentrifugoimalla uudelleen. Pestyt merotsoiitti-konjugaatit suspendoidaan G.H. Mitchell'n mukaan (kts. edellä esitetty viite) 10 %: seen autologi-seen reesusapinaseerumiin ja kylmäkuivataan.
Merotsoiitteihin kytkeytyneen muramyylipeptidin kvantitatiivinen määritys suoritetaan Morgan-Elson reaktiolla ja saadaan 40-60 yg muramyylipeptidiä per 1 mg merotsoiittiä.
Esimerkki 6:
Liuokseen, jossa on 200 mg (0,34 mmoolia) 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksi-karbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-D-glukoosia 20 ml: ssa fosfaattipuskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta, pH 7,2, o suspendoidaan 10 T-varhaisimusolua CBA/J hiiristä. (T-varhaisimu-solut valmistettiin "mixed lymphocyte culture"-viljelyssä C57BL/6 hiiren stimulaattorisoluja vastaan, LC.Anderson et ai., (1977), The Journal of Experimental Medicine, 146, 1124). Suspensiota inkuboidaan 90 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen varhaisimusolu-konjugaatit saostetaan sentrifugoimalla ja pestään uudelleensuspen-doimalla fosfaattipuskuroituun fysiologiseen keittosuolaliuokseen ja sentrifugoidaan uudelleen.
T-varhaisimusoluihin liittyneen muramyylipeptidin kvantitatiivinen määrittäminen suoritetaan Morgan-Elson reaktiolla (kts. esimerkki 1) ja saadaan 6-70 yg muramyylipeptidiä per 10^ T-varhaisimusolua. Esimerkki 7;
Vastaavalla tavalla kuin edellä esitetyissä esimerkeissä saadaan naudanseerumialbumiinia liittyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-deoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-deoksi-a,3-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-a,3-D-glukoosi, 2-asetamido-3-0-{ (L-1-(D-l-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-deoksi-D-glukoo-si, 22 66878 2- bentsamido-2-deoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-D-glukopyranoosi, 3- 0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-deoksi-2-propioniamido-D-glukoosi ja 2-asetamido-3-o-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-lipropyyli)-karbamoyyliraetyyli}-2-deoksi-D-glukoosi.
2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-deoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-deoksi-D-glukoosi, 2-bentsyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi > 2-asetamino-3-0-{(D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)fkarbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-21-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 8:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 3 saadaan lampaan erytro-syyttimemebraaneja liittyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-[l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-[l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{ [L-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) - 23 66878 karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli )-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy lipropyyli ) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-kar bamoyy1imetyy1i}-2-desoks i-D-g1ukoos i, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksietyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l, 3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 9;
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 5 saadaan malariaa aiheuttavan Plasmodium knowlesi'n merotsoiitteja liittyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar- 24 66878 bamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3~0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli }-2-desoksi-D-glukoosi , 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-l-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli } -2-desoksi-D-glukoos i , 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyylipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli )-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoos i, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-21-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksietyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2 1-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
25 66878
Esimerkki 10:
Liuokseen, jossa on 100 mg 2-asetamino-3-0-{D-1-(l-1-(D-l-karba-moyyli-3-sukkiini-imido-oksikarbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosia 10 mlrssa fosfaattipusku- g roitua fysiologista keittosuolaliuosta, pH 7,2, suspendoidaan 10 koiran nisäsyöpäsolua (Kasvainsolut valmistettiin menetelmä mukaan, jonka ovat esittäneet H. H.Sedlacek, H.Messmann ja F.R.Seiler, Behring Inst. Mitt., No 55, 349-355 (1974)). Suspensiota inkuboidaan 90 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen saostetaan kasvainsolu-muramyylipeptidi-konjugaatit sentrifugoimalla ja pestään uudelleen-suspendoimalla fosfaattipuskuroituun fysiologiseen keittosuolaliuokseen ja sentrifugoidaan uudelleen.
Kasvainsoluihin liittyneen muramyylipeptidin kvantitatiivinen määritys suoritetaan Morgan-Elson reaktiolla (kts. esimerkki 1) ja 7 saadaan 60-80 yg muramyylipeptidiä per 10 nisäsyöpäsolua.
Esimerkki 11:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 10 saadaan koiran nisäsyö-päsoluja liittyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyylipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyyliraetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 26 66878 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-1i-2'-metyy1i-propyy1i)-karbamoyy1imetyy1i}-2-desoks i-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-1-karbamoyyli-d-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyy li-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-Ιΐ-Ν,Ν-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2’-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 12: 10 ml:aan suu- ja sorkkatauti-viljelmän rokotesuspensiota Beringwerke fosfaattipuskuroidussa fysiologisessa keittosuolaliuoksessa, lisätään 100 mg 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksi-karbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karba-moyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosia. Suspensiota ravistellaan 4 tuntia 4°:ssa. Sen jälkeen virus-muramyylipeptidi-konjugaatti ste-riilisuodatetaan, erotetaan dialyysillä vettä vastaan pienimolekyylisistä reaktiotuotteista ja kylmäkuivataan. Viruksiin liitty neen muramyylipeptidin kvantitatiivinen määritys suoritetaan Morgan-Elson reaktiolla (kts. esimerkki 1).
Esimerkki 13:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 12 saadaan suu- ja sorkka-tautirokotetta liittyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-O-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 27 66878 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli )-karbamoyy1imetyy1i}-2-desoksi-D-glukoos i, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoos i, 2-bentsoyyliamino-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyylaimino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyylipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-{D-l,3·—dekarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyylimetyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li- 21-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksietyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-21-metyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli }- 2-desoksi-D-glukoos i, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyy1i-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyy1i-metyy1i}-2-desokdi-D-glukoos i, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
28 66878
Esimerkki 14:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 6 saadaan CBA/J hiirien T-varhaisimusoloja kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli ) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{ (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyylipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-1i-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyylimetyyli }-2-desoksi-D-glukoosi/ 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboks i-propyy1i)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoks i-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2’-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-21-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 29 66878 2-asetamino-3-0-{ (l-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyy-li-etyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-nropyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, Esimerkki 15; 1 mg naiidanseerumialbumiini-2-asetamino-3-0-{ (l-1-(D-l-karba-moyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi-konjugaattia liuotetaan 0,1 ml:aan fosfaatti-puskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta (PBS); liuoseen sekoitetaan 0,1 ml karboksimetyyliselluloosan 5 %:sta suspensiota PBS:ssä.
Tämä seos annetaan kahtena yhtä suurena annoksena lihaksensisäisesti hamsterille.
Esimerkki 16: — 10 T-varhaisimusolu-2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi-konjugaattia (kts. esimerkki 6) suspendoidaan 0,5 ml:aan fosfaattipuskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta (PBS); suspensioon sekoitetaan 0,5 ml karboksimetyyliselluloosan 5 %:sta suspensiota PBS:ssä. Tätä seosta annetaan subkutaanisesti 0,1 ml hiirtä kohden.
Esimerkki 17: 10 ml:aan vesikauhu-HDC-rokotesuspensiota Behringwerke fosfaat-tipuskuroidussa fysiologisessa keittosuolaliuoksessa, lisätään 100 mg (0,17 mmoolia) 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksi-karbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli- 7 metyyli}-2-desoksi-D-glukoosia. Viruskonsentraatio on 2 x 10 ld^q/ hiiri 1 ml:ssa suspensiota. Suspensiota ravistellaan 4 tuntia 4°:ssa. Sen jälkeen muramyylipeptidi-vesikauhu-HDC-rokote-konjugaatti suodatetaan steriilisti, erotetaan dialyysillä vettä vastaan pienimolekyylisistä reaktiotuotteista ja kylmäkuivataan.
Esimerkki 18:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 17 saadaan vesikauhu-HDC-rokotetta Behringwerke kytkettynä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 30 66878 2-bentsoyyliamino-3-0-((l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-s i-propyy1i)-karbamoyy1ietyy1i)-karbamoyylimetyyli}-2-desoks i-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy lipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l, 3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksietyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-N ,N-tetrametyleeni) -karbamoyyli-metyyli }-2-desoksi-D-glukoosi/ 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2- asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2 '-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 19: 10 ml:aan suspensiota, jossa on uutettua influessa-virus-anti-geenia Typ A/Victoria)3/75 fosfaattipuskuroidussa fysiologisessa keittosuolaliuoksessa, lisätään 100 mg (0,17 mmoolia) 2-asetamino- 3- 0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksi-karbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosia.
31 66878 (Virus-antigeeni valmistettiin Tween/eetteri-lohkaisumenetelmän mu- p kaisesti, Behringwerke, Marburg, BRD - Begrivac S1n valmistusta vastaavasti? konsentraatio on 4000 I.E. 1 ml:ssa suspensiota). Suspensiota ravistellaan 4 tuntia 4°:ssa. Sen jälkeen erotetaan virus-antigeeni-muramyylipeptidi-konjugaatit dialyysillä fosfaattipusku-roitua keittosuolaliuosta vastaan pienimolekyylisistä reaktiotuotteista; dialysoitu suspensio jäädytetään ja varastoidaan -20°:ssa kunnes sitä käytetään.
Esimerkki 20;
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 19 saadaan influenssa-virus-antigeenia liittyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyylipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbaraoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-21-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 32 66878 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoo9i, 2-bentsoyyliainino-3-0-{ (l-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyyli-21-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetaxnino-3-0-{ (l-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyy-li-etyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2 '-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 21: 2 ml:aan liuosta, jossa on tetanustoksoidia fosfaattipuskuroi-dussa fysiologisessa keittosuolaliuoksessa, lisätään 10 mg 2-asetami-do-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-sukiiniimido-oksi-karbanyyli-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-D-glukoosia. Toksoidikonsentraatio on 3 mg/ml. Liuosta hämmennetään 4 tuntia 4°: ssa. Sen jälkeen tetanustoksoidi-muramyylipeptidi-konjugaatti erotetaan ultrasuodatuksella pienimolekyylisistä reaktiotuotteista; ultrasuodatettu liuos jäädytetään ja varastoidaan -20°:ssa käyttöön asti. Kvantitatiivinen määritys (Morgan-Elson-reaktio) antaa noin 50 pg muramyylipeptidiä per 1 mg tetanustoksoidi-muramyylipeptidi-konjugaattia.
Esimerkki 22:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 21 saadaan tetanustoksoidia kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 33 66878 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyylipropyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarabksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyy1i-propyy1i)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoks i-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-metyylikarbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2 '-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 23: 10 ml:aan liuosta, jossa on koleratoksoidia, Vibrio cholerae'sta fosfaattipuskuroidussa fysiologisessa keittosuolaliuoksessa, lisätään 50 mg 2-asetamido-2-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-sukkiini-imido-oksikarbonyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-deoksi-D-glukoosia. Proteiinikonsentraatio liuoksessa on 0,6 mg/ml. Liuosta hämmennetään 4 tuntia 4°:ssa. Tämän jälkeen koleratoksoidi-muramyylipeptidi-konjugaatti erotetaan ultrasuodatuksella pienimolekyylisistä reaktiotuotteista? ultrasuodatettu liuos jäädytetään ja varastoidaan -20°:ssa käyttöön asti. Kvantitatiivinen määritys (Morgan-Elson-reaktio) antaa 40-50 yg muramyylipeptidiä per 1 mg ko-leratoksoidi-muramyylipeptidi-konjugaattia.
34 66878
Esimerkki 24:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 23 saadaan tetanustoksoi-dia kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-propyyli)-karbamoyy lipropyy li) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy-li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyyli-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyyli-etyyli) -karbcimoyylimetyyli} -2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-1-(L-1(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-propyyli)-karbamoyy-li-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 66878 35 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbeunoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 25: 20 mg synteettistä eikosapeptidiä, joka on identtinen ihmisen koriongonadotropiinin C-päätteisen sekvenssin kanssa (HCD) (Viite: C.H.Schneider, K.Blaser, Ch.Pfeuti ja E.Gruden, Febs. Letters, 50, 272 (1975)) ja 30 mg 2-asetamido-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-sukkii-ni-imido-oksi-karbanyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosia liuotetaan 2 ml:aan natriumfosfaatti-puskuriliuosta, pH 7,2. Liuosta hämmennetään 6 tuntia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen eikosapeptidi-muramyylipeptidi-konjugaatti eristetään kromatograafisesti Sephadex G-25 pylväässä (1,4 x 40 cm) eluointiaineena vesi ja kjjtlmäkuivataan. Kvantitatiivinen amino- happoanalyysi osoittaa, että 1-muramyylipeptidimolekyyli on sitoutunut 1-eikosapeptidimolekyyliin.
Esimerkki 26:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 25 saadaan ihmisen koriongonadotropiinin C-päätteinen eikosapeptidi-fragmentti kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-N-karbamoyylimetyylikarbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetyyliamino-3-0-{ (L-1- (D-l-karbcimoyyli-3ekarboksi-propyyli) -kar-bamoyylipropyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyy- 36 66878 li-2-hydroksietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-propionyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{ (l-1- (D-l-N-karbamoyylimetyy li-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksifpropyyli)-karbamoyy-li-2'-metyyli-propyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-dikarboksi-rpopyyli)-karbamoyyli-2'-metyyli-propyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2 '-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyy-li-21-metyyli-propyyli)-karbamoyylietyyli}-2-desoksi-D-glukoosi. Esimerkki 27:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 1 saadaan naudanseerumi-albumiinia kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylimetyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 37 66878 2-asetamino-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{ (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli )-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosif 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l- (L-1- (D-l-karbcimoyyli-3-karboks;i-propyyli) -karbamoyyli-N/N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy-li)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli- 2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desokdi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 38 66878 2-(8-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli -etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(8-karbometoksi-sukiiniamido)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trimetyy-lisilyyliesteriryhmä nopeasti saippuoituu), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyy-likarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2’-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2’-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 39 66878 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoos Esimerkki 28;
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 3 saadaan lampaan erytro-syyttimembraaneja kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0- {((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-etyyli} -2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbcimoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoos i, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-1- (D-l-karbamoyyli-3-ikarboksi-propyyli) -kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbcimoyyli-etyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 40 66878 2-asetamino-3-O-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-O-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni) -karbamoyyli-etyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-roetyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fe-nyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-((L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(3-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(g-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa tri-metyylisilyyliesteriryhmä nopeasti saippuoituu), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyyli-silyy-likarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetcunino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar- 41 66878 bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-2 '-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 29;
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 4 saadaan Neisseria meningitidis 'in ryhmän C polysakkaridia kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 42 66878 2-asetamino-3-0-{ (L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni) -karbamoyyli-metyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-baraoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-etyyli} -2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentamido-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbaraoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-raetyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliaraino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 43 66878 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-s i-propyy1i)-karbamoyy1i-etyy1i) -karbamoyy1i-metyy1i}- 2-desoks i-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-( D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa tri-metyylisilyyliesteriryhmä nopeasti saippuoituu), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyy-likarboksi-propyyli) -karbamoyyli-etyyli) -karbamoyylimetyyli} -1,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-1-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy 1 i-propyy li) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-2 '-hydroksi-propyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-( D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2 (p-hydroksi-fenyyli) -etyyli) -karbcimoyyli-etyyli} -2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-( D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-N ,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{[L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-((L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-(D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-((L-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syy1ikarboks i-propyy1i)-karbamoyy1i-etyy1i)-karbamoyy1imetyy1i}-2-desoksi-D-glukoosi, 44 66878 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 30:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 5 saadaan malariaa aiheuttavan Plasmodium knowlesi'n merotsoiitteja kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-' moyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-N ,N-pentametyleeni) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-1i-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoks i-D-glukoos i, 2-asetamino-3-O-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-etyy li) -N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li -propyyl i )-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l- (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-propyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 45 66878 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyΙΐ-Ν,Ν-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy1i)-karbamoyy1i-metyy1i}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-2-metyyli-merkapto-etyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-(β-karbometoksi-sukiiniamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi- D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisilyyliesteriryhmä nopeasti saippuoituu), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li-propyyli ) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy li -2 '-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 46 66878 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N ,N~tetrametyleeni) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli--etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi/ 2-asetamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-21-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-21-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-dikarboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyy-li-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 31:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 6 saadaan CBA/K-hiirien T-varhaisimusoluja kytkeytyneenä yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-(((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,Ν-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 66878 2-bentsoyyliamino-3-0-[ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi~D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-fp-l- ((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbaraoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbeunoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bainoyy li-N ,N-pentamety leeni) -karbamoyyli-etyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-me-tyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-metyyli-fe-nyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi/ 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbcimoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-1- (D-l-karbcimoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli) -karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi/ 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 48 66878 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisilyyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{ (L-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-a set amino-3-0- {D-l- (L-1- (D-l-karbamoyyli-3-:karboksi-propyyli) -kar-bamoyyli-21-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,Ν-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l- (l-1- (D-l-karbcimoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbamoyyli-etyyli).-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-(L-l-karboksietyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino~3-0-{(L-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
49
Esimerkki 32: 6 6 8 7 8
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 12 saadaan suu- ja sorkka-tauti-viljelmä-rokotetta Behringwerke kytkeytyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{ ((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli}-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli>-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyl i-karbcimoyyli-etyy li } -2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 50 66878 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyylifenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy-li)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0- { (L-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamino)—3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-kar-boksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karbcimoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbcunoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosetuksessa veden kanssa timetyy-lisilyyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 51 66878 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbaiaoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(b-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-21-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-21 -(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 33:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 17 saadaan vesikauhu-HDC-rokotetta Behringwerke kytkeytyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylimetyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ (l-1- (D-l-karbcimoyyli-3-karboksi-propyyli) -karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-noyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 52 66878 2-bentsoyyliamino-3-0- { (L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbaraoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli )-N-metyyli-karbainoyyli-e tyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (l-1- (D-l-karbeimoyyli-3-karboksi-propyyli) -kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli)-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli) -karbamoyyli-metyyli }-2-desoksi-D-glukoosi , 2-bentsamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-((L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karbok- 53 66878 si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-kar-boksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisilyyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0- {.D-l- (L-l- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-(D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{ (L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ (L-l- (D-l-karbcimoyyli-3-karboksi-propyyli) -karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba- 54 66878 moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi,
Esimerkki 34t
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 19 saadaan influenssavirus-antigeeniä Typ A/Victoria/3/75 kytkeytyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{ (l-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,Ν-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-(D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi/ 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 55 66878 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbaraoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-me-tyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy-li)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli- 2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2- (β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisilyyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyyli-silyy-likarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-aasetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2’-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar- 56 66878 bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-(D-l-[L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l- (L-l- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -kar-bamoyyli-2 '-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syy1ikarboksi-propyy1i)-karbamoyy1i-etyy1i)-karbamoyy1imetyy1i}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 35;
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 21 saadaan tetanustoksoi-dia kytkeytyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbeunoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli) -N-metyyli-karbamoyyli-metyyli }-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 57 66878 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{[L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli )-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli >-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyly-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli) -karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy-li)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli) -karbeimoyyli-metyyli }-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 66878 58 2-(8-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamino)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisilyyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2’-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syy 1 ikarboksi-propyy 1 i) -karbamoyyli-etyyli) -karbamoyy 1 imetyy 1 i }r-2-desoksi-D-glukoosi, 59 66878 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karbamoyy-li-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 36:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 23 saadaan Vibrio cholerae'n koleratoksoidia kytkeytyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3ekarboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,Ν-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyy1i-etyyli)-N-propyy1i-karbamoyy1i-etyy1i}-2-desoks i-D-glukoosi, 60 66878 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N~pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D“glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu- koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-me-tyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy-li)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylidmetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(β-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisilyyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karabamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-O-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi 2-asetamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karabamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 61 66878 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-21-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-(L-1-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bent-syylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Esimerkki 37:
Vastaavalla tavalla kuin esimerkissä 25 saadaan synteettistä eikosapeptidiä, joka on identtinen ihmisen koriongonadotropiinin C-päätteisen sekvenssin kanssa, kytkeytyneenä seuraaviin yhdisteisiin: 2-asetamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-propyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 62 66878 2-asetamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-metyy-li-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-(D-l~ ((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -karba-moyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-11)-1-((D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-metyyli)-N-metyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli) -N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi , 2-asetamino-3-0-{D-l- (l-1- (D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli) -kar-bamoyyli-propyyli)-N-raetyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamido-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-N-etyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-etyyli)-N-propyyli-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli J-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-N,N-pentametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-[D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-N-me-tyyli-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-((L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsoyyliamino-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-metyyli-fenyy-li)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-metyyli-merkapto-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2-kloorietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-“0-(D-l- (l-1- (D-l-karbamoyyli-3,3-dikarboksi-propyyli) -karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(6-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karbok-si-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(3-karbometoksi-sukkiiniamido)-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3- 63 66878 karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-bentsamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi (kosketuksessa veden kanssa trime-tyylisillyliesteriryhmä saippuoituu nopeasti), 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tris-trimetyylisilyyli-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-hydroksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-21-(p-hydroksi-fenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-N,N-tetrametyleeni)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-glykolyyliamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyy-li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-(N-metyyli-asetamino)-3-0-(D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli >-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-kar-bamoyyli-2'-fenyylietyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karba-moyyli-2'-(p-hydroksifenyyli)-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-bents-yylikarboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-des-oksi-D-glukoosi, 2-asetamino-3-0-{(L-1-(D-l,3-di-karboksi-propyyli)-N-metyyli-karba-moyyli-etyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosi.
Useat edellä mainituista muramyylipeptideistä tai niiden spacer' ien välityksellä kytkeytyneistä muodoista ovat uusia. Niitä voidaan valmistaa esim. seuraavissa esimerkeissä esitetyillä tavoilla: 64 66878
Esimerkki 38;
Liuos, jossa on 3,4 g bentsyyli-2-asetamino-3-0-(D-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3- (L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyy-li-etyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-a-D-glukopyranosidi-bentsyy-liesteriä 100 ml:ssa metanoli/tislattua vettä 2/1, hydrataan katalysaattorina 0,3 g 10 %:sta palladium-hiiltä, normaalipaineessa ja 45°:ssa 24 tunnin kuluessa. Katalysaattori suodatetaan pois ja suo-dos haihdutetaan. Jäännös liuotetaan 40 ml:aan vettä ja tämä liuos uutetaan 3 kertaa, joka kerta 40 ml:11a, vedellä kyllästettyä sek.-butanolia. Orgaaniset faasit pestään vielä 3 kertaa 40 ml:11a sek.-butanolilla kyllästettyä vettä. Vesiliuos yhdistetään, haihdutetaan, jäännös liuotetaan pieneen määrään tislattua vettä ja kylmäkuiva-taan. Saadaan 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboks i-etyy1i-karbamoyy1i)-propyyli)-karbamoyy1i-etyy1i}-karbamoyy-li-etyyli'-2-desoksi-D-glukoosia valkeana pulverina, jonka (a)D = +9° + 1° (tisl. vettä, c = 1,090).
Käytetty lähtöaine valmistetaan seuraavasti:
Liuokseen, jossa on 6,1 g bentsyyli-2-asetamino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyy-li-etyyli}-2-desoksi-a-D-glukopyranosidi-monohydraattia ja 3,5 g L-alaniinibentsyyliesteri-p-tolueenisulfonaattia 30 ml:ssa N,N-dimetyy-liformamidia, lisätään 1,4 ml trietyyliamiinia, 1,1 g N-hydroksi-sukkiini-imidiä ja 2,3 g disykloheksyylikarbokdi-imidiä ja hämmennetään 48 tuntia huoneen lämpötilassa. Kiteytynyt disykloheksyylikarba-midi suodatetaan pois ja pestään 10 ml:11a N,Ν-dimetyyliformamidia ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös suspendoidaan 100 ml:aan vettä, hämmennetään 1 tunti 0°:ssa, liukenematon aine suodatetaan pois, pestään pienellä määrällä jäävettä ja kuivataan. Tuote liuotetaan vielä metanoliin, saostetaan kaksinkertaisella määrällä etikka-esteriä, suodatetaan, pestään pienellä määrällä etikkaesteriä ja kuivataan: (a)^ = +72° + 1° (metanoli, c = 0,998).
Vastaavalla tavalla saadaan lähtemällä bentsyyli-2-asetamino- 3-0-i(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyyli-etyyli)- karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-cx-D-glukopyranosidista 2-asetamino-3-0- / {L—1—(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-' \ karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyyli'-2-desoksi-D-glukoosia.
Lähtemällä bentsyyli-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-2-propio-niamino-a-D-glukopyranosidistä ja glysiinibentsyyliesteri-p-tolueeni- 65 66878 sulfonaatista valmistetaan 3-0-|D-l-{L-l-|D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyyli) -propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-etyyli] -2-desoksi-2-propioniamino-D-glukoosia.
Vastaavasti valmistetaan: 2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyy-li)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyy-li-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-etyyli]-2-desoksi-D-glukoosia, 2- butyroyyliamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 3- 0-I{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-metyyli]-2-desoksi-2-propioniamino-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli{-karbamoyyli-metyyli] -2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli}-karbamoyyli-etyyli j -2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyy-li-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-metyylipropyyli{-karbamoyyli-metyyli] -2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-metyylipropyyli{-karba-moyyli-etyylij-2-desokjsi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0- j{L-l- (D-l-karbamoyyli-3- (karboksi-metyyli-karbamoyyli) -propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-metyyli]-2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyyli) -propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-metyyli]-2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-etyyli] -2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyy-li-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli{-karbamoyyli-metyyli]-2-desoksi-D-glukoosia, 66 66878 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-iso-butyroyyliamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-propyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-me-tyyli]-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyy-li)-propyyli)-karbamoyyli-2-metyylipropyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-kar-bamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-metyylipropyyli}-karbamoyyli-etyy-lij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-metyylipropyyli}-karbamoyyli-metyy-li|-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyy1i)-propyyli)-karbamoyy1i-2-metyylipropyyli}-karbamoyy1i-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-propyyli-kar-bamoyy1i)-propyyli)-karbamoyy1i-2-metyy1i-propyy1i}-karbamoyy1i-me-tyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-|{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-butyy-li-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli}-karbamoyyli-etyylij -2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-!5-0- j{L-l- (D-l-karbamoyyli-3- (L-l-karboksi-etyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-des-oksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksimetyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli}-karbamoyyli-etyyli|-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyy-li)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli}-karbamoyyli-metyyli|-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-propyyli-kar-bamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-des-oksi-D-glukoosia, 67 66878 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-propyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyylij-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-2-metyylipro-pyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyylij-karbamoyyli-metyyli|-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0- |d-1-{ L-l-(D-l-karbamoyyli-3- (L-l-karboksi-2-metyyli-propyy1i-karbamoyy1i)-propyy1i)-karbamoyy1i-etyy1i}-karbamoyy1i-etyy-lij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-({L-l-(D-l-karbamoyyli-3-)L-1-karboksi-butyyli-karba- ' \ moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi- D-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-|{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-kar-bamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-des-oksi-D-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-(d-1-{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-pro-pyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-({L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-propyy- ' \ li-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyylij-karbamoyyli-metyylij- 2-desoksi-D-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-2-metyyli-propyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyy li-etyylij-2-desoksi-glukoosia, 2-butyroyyliamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-2-metyy-li-propyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli- metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, / / 2-bentsoyyliamino-3-0- {L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-bentsoyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-bentsoyyliamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyy1i)-propyyli)-karbamoyy1i-propyyli}-karbamoyy1i-metyyli\-2-desoksi-D-glukoosia, 2-bentsoyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-propyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 68 66878 2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-N,N-tetrametyleeni}-karbamoyyli-metyy-lij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-N,N-tetrametyleeni}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karbamoyy-li)-propyyli)-karbamoyyli-N,N-tetrametyleeni}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(karboksi-metyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-N/N-tetrametyleeni}-karbamoyyli-etyyli» -2-desoksi-D-glukoosia, • / 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karba-moyy1i)-propyyli)-karbamoyy1i-2-hydroksi-etyyli}-karbamoyy1i-metyy-lij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-hydroksi-etyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-bentsoyyliamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-hydroksi-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-bentsoyyliamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-etyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-2-hydroksi-etyyli}-karba-moyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(L-1-karboksi-metyyli)-kar-bamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-karboksi-metyyli-kar-bamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-metyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|d-1-{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-metyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-karbamoyyli-etyylij-2-desoksi-D-glukoosia, 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-l-karboksi-metyyli-karba-moyyli)-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-karbamoyyli-metyyli|-2-desoksi-D-glukoosia.
69 66878
Esimerkki 39:
Liuos, jossa on 4,2 g bentsyyli-2-asetamino-3-0-j{L-l-(ϋ-1-kar-bamoyyli-3-(L-5-bentsyylioksikarbonyyliamino-5-karbamoyyli-pentyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-a-D-glukopyranosidia 100 mlsssa metanoli/vettä 2/1, hydrataan katalysaattorina 0,5 g 10 %:sta palladium/hiiltä, normaalipaineessa ja huoneen lämpötilassa. Tällöin pidetään reaktioseoksen pH-arvo 6:ssa lisäämällä 1-n suolahappoa. Vedyn kulutuksen loputtua suodatetaan katalysaattori pois ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan pieneen määrään tislattua vettä ja kylmäkuivataan.
Saadaan 2-asetamino-3-0-|{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-5-amino-5-karba-moyyli-pentyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyy-li-metyylij-2-desoksi-D-glukoosi-hydrokloridia valkeana pulverina.
Käytetty lähtöaine voidaan valmistaa seuraavasti:
Liuos, jossa on 15 g a-karbobentsoksi-e-t-butoksi-karbonyyli-L-lysiini-metyyliesteriä 100 ml:ssa kyllästettyä metanolista ammoniak-kiliuosta, jätetään seisomaan 48 tunnin ajaksi huoneen lämpötilaan ja haihdutetaan kuiviin. Tuote, α-karbobentsoyyli-e-t-butoksikar-bonyyli-L-lysiiniamidi, kiteytetään uudelleen metanoli/eetteristä, sul.p. 142°, (a)£° = -3° + 1° (metanoli, c = 1,018).
Liuosta, jossa on 3 g a-karbobentsoksi-s-t-butyylioksikarbonyy-li-L-lysiiniamidia 25 ml:ssa trifluorietikkahappoa ja joka on jäähdytetty 0°:seen, hämmennetään 1 tunti ja sen jälkeen haihdutetaan kuiviin. Jäännökseen lisätään 20 ml kyllästettyä keittosuolaliuosta ja jäätä, tehdään alkaliseksi konsentroidulla ammoniakkiliuoksella ja uutetaan etikkaesterillä. Orgaaninen faasi pestään vielä kyllästetyllä keittosuolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan α-karbobentsoksi-L-lysiiniamidia valkeana vaahtona.
Liuokseen, jossa on 5,6 g bentsyyli-2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-me-tyylij-2-desoksi-a-D-glukopyranosidia ja 2,8 g a-karbobentsoksi-L-lysiiniamidia 30 mlrssa Ν,Ν-dimetyyliformamidia, lisätään 1,1 g N-hydroksisukkiini-imidiä ja 2,2 g disykloheksyylikarbodi-imidiä ja hämmennetään 40 tuntia huoneen lämpötilassa. Kiteytynyt disyklohek-syylikarbamidi suodatetaan pois ja pestään 10 ml:11a Ν,Ν-dimetyyliformamidia. Suodos haihdutetaan kuiviin ja jäännöstä uutetaan 30 minuutin ajan 100 ml:11a tislattua vettä. Liukenematon aine suodatetaan pois, pestään vedellä, kuivataan ja saadaan bentsyyli-2-aset-amino-3-O- |{L-1-(D-l-karbamoyyli-3-(L-5-bentsyylioksikarbonyyliamino- 70 66878 -5-karbamoyy1i-pentyy1i-karbamoyy1i)-propyy1i)-karbamoyy1i-etyy1i } -karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-a-D-glukopyranosidia. Tuote kiteytetään uudelleen metanoli/etikkaesteristä.
Vastaavasti valmistetaan: 2-asetamino-3-0-j{L-l-(D-l-karbamoyyli-3-(5-amino-L-l-karbamoyyli-pentyyli-karbamoyyli)-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-me-tyylij-2-desoksi-D-glukoosi-hydrokloridia.
Esimerkki 40:
Liuos, jossa on 2,8 g bentsyyli-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboks i-propyy1i)-karbamoyy1i-propyy1i)-karbamoyy1i-metyyli}-2-des-oksi-2-isobutyroyyliamino-a-D-glukopyranosidia 80 ml:ssa metanoli/ tislattua vettä 1/1, hydrataan, katalysaattorina 0,3 g 10 %:sta pal-ladium/hiiltä, normaalipaineessa ja 45°:ssa. Jäännöksen edelleen-käsittelyn ja kylmäkuivaamisen jälkeen saadaan 3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-isobutyroyyliamino-D-glukoosia valkeana pulverina.
Käytetty lähtöaine valmistetaan seuraavasti:
Liuoksien seos, jossa on 21,0 g bentsyyli-2-amino-2-desoksi- 4,6-0-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidia 150 ml:ssa kloroformia ja 9,0 g kaliumvetykarbonaattia 150 ml:ssa tislattua vettä, jäähdytetään samalla hämmentäen, 0°:seen ja lisätään tipoittain 8,5 ml iso-voihappokloridia. 1 tunnin hämmentämisen jälkeen huoneen lämpötilassa erotetaan orgaaninen faasi, pestään jääkylmällä 0,5-n suolahapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja uudelleen vedellä, kuivataan ja haihdutetaan. Tuote, bentsyyli-2-desoksi-2-isobutyyliamino-4,6-O-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidi, kiteytetään 150 mlrsta eetteriä, sul.p. 82°, (a)^ = +109° + 1° (kloroformi, c = 1,017) .
Liuokseen, jossa on 15,1 g bentsyyli-2-desoksi-2-isobutyroyyli-amino-4,6-0-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidia 150 ml:ssa absoluuttista asetonitriiliä, lisätään, typpiatmosfäärissä kosteudelta suojaten ja samalla hämmentäen, 1,9 g natriumhydridiä (Fluka, pract.) ja hämmennetään 1,5 tuntia 40°:ssa. Sen jälkeen reaktioseos jäähdytetään -10°:seen ja lisätään 5,6 ml bromietikkahappometyyliesteriä. Hämmennetään vielä 15 minuuttia jäähauteessa ja lisäksi 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Edelleenkäsittelyn jälkeen saadaan bentsyyli-2-desoksi-2-isobutyyliamino-4,6-0-isopropylideeni-3-0-metoksikarbo-nyyli-metyyli-a-D-glukopyranosidia, joka kiteytetään uudelleen eette- 66878 71 ri/petrolieetteristä, sul.p. 119-120°, (α)^ = +152° + 1° (klorofor mi, c = 0,963).
Liuos, jossa on 3,16 g bentsyyli-2-desoksi-2-isobutyroyyliami-no-4,6-0-isopropylideeni-3-0-metoksikarbonyylimetyyli-a-D-glukopyra-nosidia 30 mlsssa metanolia ja 10 ml 1-n natronlipeää, jätetään seisomaan huoneen lämpötilassa 1 tunnin ajaksi. Lisätään 3 ml 1-n suolahappoa ja liuos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan 50 ml:aan Ν,Ν-dimetyyliformamidia ja lisätään 2,26 g L-ot-aminobutyroyyli-D-iso-glutamiini-tert.-butyyliesteri-hydrokloridia ja 1,75 g EEDQ:ta ja jätetään seisomaan 24 tunniksi huoneen lämpötilaan. Lisätään vielä 0,2 g EEDQrta ja annetaan seoksen edelleen seistä 24 tunnin ajan. Liuotin tislataan pois ja jäännös liuotetaan etikkaesteri/veteen. Orgaaninen faasi erotetaan ja pestään jääkylmällä 1-n suolahapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Näin saadaan bentsyyli-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-li-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-isobutyyliamino-4,6-0-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidi-tert.-butyyliesteriä valkeana vaahtona.
Tämä tuote liuotetaan 60 ml:aan jääetikkaa, lisätään samalla hämmentäen 60 ml vettä, ja jätetään seisomaan 24 tunnin ajaksi huoneen lämpötilaan. Tämä liuos haihdutetaan kuiviin vesisuihkutyhjös-sä ja jäännös liuotetaan etanoliin. Suodatetaan aktiivihiilen kanssa ja haihdutetaan taas kuiviin. Näin saadaan bentsyyli-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyy-li-metyyli}-2-desoksi-2-isobutyroyyliamino-a-D-glukopyranosidi-tert.-butyyliesteriä, joka on valkeaa amorfista ainetta, jonka (a)D = +74° + 1° (metanoli, c = 0,950).
Liuosta, jossa on 3,9 g tätä tert.-butyyliesteriä 40 ml:ssa 98 %:sta trifluorietikkahappoa ja joka on jäähdytetty 0°:seen, hämmennetään 1 tunti 0°:ssa ja kaadetaan 500 ml:aan absoluuttista eetteriä. Kiteytynyt tuote suodatetaan pois, pestään eetterillä ja kuivataan tyhjössä. Saatu pulveri liuotetaan 40 ml:aan vesi/tetrahydro-furaania 1/1 ja hämmennetään 30 minuuttia 50' ml:n kanssa ioninvaih-tohartsia Dowex 3 (asetaattimuoto). Ioninvaihtohartsi suodatetaan pois ja pestään 500 ml:11a tetrahydrofuraani/l-n etikkahappoa. Suo-dos haihdutetaan kuiviin ja tuote kiteytetään metanoli/eetteristä, sul.p. 205-206°.
72 66878
Esimerkki 41;
Liuos, jossa on 3,1 g bentsyyli-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-isobutyroyyliamino-a-D-glukopyranosidia 40 ml:ssa metanoli/vettä 1/1, hydrataan katalysaattorina 10 %:nen palladium/hiili, normaalipaineessa ja 45°:ssa. Edelleenkäsittelyn jälkeen saadaan kylmä-kuivaamalla valkeana pulverina 3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-iso-butyroyyliamino-D-glukoosia.
Käytettyä lähtöainetta valmistetaan samalla tavalla kuin esimerkissä 40 on esitetty:
Bentsyyli-3-O-karboksi-metyyli-2-desoksi-2-isobutyroyyliamino- 4,6-O-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidi-natriumsuolan kondensoituessa L-alanyyli-D-isoglutamiini-tert.-butyyliesteri-hydrokloridin kanssa muodostuu bentsyyli-3-0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-pro-pyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-isobuty-royyliamino-4,6-O-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidi-tert.-butyyli-esteri, joka on valkeaa vaahtoa. 4,6-O-isopropylideeniryhmän hydro-lyysi tuottee bentsyyli-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksipropyy- li)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-isobutyroyy- 2 0 liamino-a-D-glukopyranosidi-tert.butyyliesteriä, jonka (a)D = +71° + 1° (metanoli, c = 0,956).
Tert.-butyyliesteri lohkeaa pois trifluorietikkahapolla. Näin saadaan bentsyyli-3-0-{(L-l-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-isobutyroyyli-amino-a-D-glukopyranosidia valkeana amorfisena tuotteena.
Esimerkki 42:
Liuos, jossa on 4,2 g bentsyyli-2-asetyyli-N-metyyl.i-amino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukopyranosidia 75 ml:ssa metanoli/ vettä 1/1, hydrataan katalysaattorina 0,5 g 10 %:sta palladium/hiiltä normaalipaineessa ja 45°:ssa. Katalysaattori suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan pieneen määrään tislattua vettä ja kylmäkuivataan. Tällöin saadaan 2-asetyyli-N-me-tyyli-amino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyy-lietyyli)-karbamoyylimetyyli}-2-desoksi-D-glukoosia valkeana pulverina.
Käytettyä lähtöainetta valmistetaan seuraavasti:
Liuokseen, jossa on 8,5 g bentsyyli-2-asetamino-2-desoksi-4,6-O-isopropylideeni-3-O-metoksikarbonyylimetyyli-a-D-glukopyranosidia 73 66878 80 inlissa absoluuttista asetonitriiliä, lisätään typpiatxnosfäärissä samalla hämmentäen ja kosteudelta suojaten, 0,75 g natriumhydridiä (Fluka, pract.) ja hämmennetään 1 tunti 40°:ssa. Reaktioseos jäähdytetään sen jälkeen huoneen lämpötilaan ja lisätään tipoittain 4 tunnin aikana liuos, jossa on 6,0 g metyylijodidia 50 ml:ssa absoluuttista asetonitriiliä. Kolmen tunnin kuluttua reaktioseos suodatetaan ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan etikkaeste-riin, tämä liuos pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan bentsyyli-2-asetyyli-N-metyyli-amino-2-desoksi-4,6-0-isopropylideeni-3-0-metoksi-karbonyyli-metyyli-a-D-glukopyranosidia kellertävänä öljynä, jonka Rf-arvo on 0,45 pii-happo-ohutkerroslevyllä systeemissä metyleenikloridi/etikkaesteri 85/15.
Liuos, jossa on 4,4 g bentsyyli-2-asetyyli-N-metyyli-amino-2-desoksi-4,6-0-isopropylideeni-3-0-metoksikarbonyyli-metyyli-a-D-glukopyranosidia 60 ml:ssa metanolia ja 15 ml IN natronlipeää, jätetään seisomaan 1 tunniksi huoneen lämpötilaan, lisätään 5 ml IN suolahappoa ja haihdutetaan kuiviin. Saatu bentsyyli-2-asetyyli-N-me-tyyli-amino-3-0-karboksimetyyli-2-desoksi-4,6-0-isopropylideeni-a-D-glukopyranosidi-natriumsuola liuotetaan 50 ml jaan N,N-dimetyyli-formamidia ja kondensoidaan 3,2 g:n kanssa L-alanyyli-D-isoglutamii-ni-tert.-butyyliesteri-hydrokloridia, 2,5 g:n EEDQrta läsnäollessa. Liuos haihdutetaan tyhjössä kuiviin ja jäännös liuotetaan etikkaes-teriin. Liuos pestään vedellä, jääkylmällä IN suolahapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin. Saadaan bentsyyli-2-asetyyli-N-metyyli-amino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-pro-pyyli)-karbamoyylietyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-4,6-0-iso-propylideeni-a-D-glukopyranosidi-tert.butyyliesteriä kellertävänä vaahtona. Tämä tuote liuotetaan 45 ml:aan 0°:seen etukäteen jäähdytettyä 95 %:sta trifluorietikkahappoa ja hämmennetään 1 tunti 0°:ssa. Reaktioseos kaadetaan 400 ml:aan absoluuttista eetteriä, saostuva tuote suodatetaan pois, pestään eetterillä ja kuivataan. Käsittelemällä tätä ainetta ioninvaihtohartsillä, Dowex-3-asetaatti-muoto, saadaan trifluorietikkahappo-vapaata bentsyyli-2-asetyyli-N-metyyli-amino-3-θ-ί(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyylietyyli) -karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-a-D-glukopyranosidia valkeana pulverina.
Vastaavalla tavalla valmistetaan: 74 66878 2-asetyyli-N-metyyli-amino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoo-sia, 2-asetyyli-N-metyyli-amino-3-0-{D-l-(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glu-koosia, 2-asetyyli-N-metyyli-amino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glu-koosia, 2-asetyyli-N-metyyli-amino-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-pro-pyyli)-karbamoyyli-2-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glukoosia, 2- asetyyli-N-metyyli-amino-3-0-{D-l-(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-21-metyyli-propyyli)-karbamoyyli-etyyli}-2-desoksi-D-glukoosia, 3- 0-{(L-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-2-propionyyli-N-metyyli-amino-D-glu-koosia, 2-butyryyli-N-metyyli-amino-3-0-((l-1-(D-l-karbamoyyli-3-karboksi-propyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-2-desoksi-D-glu-koosia.
Esimerkki 43:
Trimetyylisilyylieetteri voidaan valmistaa esim. seuraavasti: 0,3 g 2-bentsamido-2-desoksi-3-0-{(l-1-(D-l-karbamoyyli-3-kar-boksipropyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyyli-metyyli}-D-glukoosia liuotetaan 3 ml:aan dimetyyliformamidia ja lisätään 0,4 ml bis-tri-metyylisilyyliasetamidia. 5 tunnin kuluttua 35°:ssa haihdutetaan tyhjössä siirapiksi, josta voidaan erottaa muodostunut asetamidi liuottamalla absoluuttiseen eetteriin tai absoluuttiseen etikkaesteriin. Uuden haihdutuksen jälkeen saadaan väritön siirappi, jonka (a)D = +15° (c = 0,1, dioksaani).
Vastaavasti saadaan siirappimainen 2-asetamino-2-desoksi-3-0-{ (l-1-(D-l-karbamoyyli-3-trimetyylisilyyli-karboksi-propyyli)-karba-moyylietyyli)-karbamoyylimetyyli}-l,4,6-tri-trimetyylisilyyli-D-glu-koosi, jonka (a)^ = -10° (c = 0,91, dioksaani).
Kosketuksessa veden kanssa saippuoituu trimetyylisilyyliesteri-ryhmä nopeasti, niin että myös nämä johdannaiset ovat sopivia kytkentään.
66878
Esimerkki 44:
Bentsyyli-2-asetamido-3-0-j{L-l-(d-1-(L-l-karboksi-etyyli)-kar-bamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyy-lij-2-desoksi-a-D-glukopyranosidin 5 %:nen liuos tetrahydrofuraani/ vedessä 2/1 hydrataan katalysaattorina 10 %:nen palladium/hiili normaalipaineessa ja huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen kun teoreettinen määrä vetyä on kulunut, suodatetaan katalysaattori pois ja suo-dos kylmäkuivataan. Tällöin saadaan 2-asetamido-3-0-j{L-l-(d-1- (L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyyli-etyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-D-glukoosia valkeana pulverina. Rf-arvo ohutkerroskromatogrammissa = 0,21 (etikkahappoetyyli-esteri/n-butanoli/pyridiini/etikkahappo/vesi 42:21:21:6:10) .
Vastaavalla tavalla valmistetaan johdannainen aidon muramiini-hapon kanssa.
Lähtöaine voidaan valmistaa seuraavasti: 5,68 g N-tert.-butoksikarbonyyli-L-alanyyli-D-y-bentsyyli-glu-tamyyli-L-alaniinibentsyyliesteriä liuotetaan seokseen, jossa on 5 ml trifluorietikkahappoa ja 5 ml 1,2-dikloorietaania, ja jätetään seisomaan 16 tunnin ajaksi huoneen lämpötilaan kosteudelta suojaten. Laimennetaan tämä liuos 50 ml:11a tetrahydrofuraania, jäähdytetään jäähauteessa ja neutraloidaan trietyyliamiinilla. Sen jälkeen kun on lisätty liuos, jossa on 3,7 g bentsyyli-2-asetamido-3-karboksi-metyyli-2-desoksi-a-D-glukopyranosidia ja 1,38 ml trietyyliamiinia 100 ml:ssa tetrahydrofuraania, lisätään 2,6 g 2-etoksi-N-etoksikarbo-nyyli-1,2-dihydrokinoliinia ja annetaan seistä 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäännös liuotetaan kloroformi/metanoliin 9/1, pestään vedellä, jääkylmällä 2-n suolahapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vedellä, suodatetaan ja poistetaan liuotin. Näin saadaan bentsyyli-2-asetamido-3-0-|{l-1-(d-1-(L-l-karboksi-etyyli)-karbamoyyli-3-kar-boksi-propyyli)-karbamoyylietyyli}-karbamoyyli-metyylij-2-desoksi-α-D-glukopyranosidia värittömänä pulverina, Rf-arvo = 0,48 (identtisessä systeemissä).
Käytettyä lähtöainetta voidaan valmistaa seuraavasti: 7,15 g N-tert.-butoksikarbonyyli-L-alanyyli-D-glutamiinihappo-γ-bentsyyliesteriä ja 6,15 g L-alaniinibentsyyliesteri-p-tolueenisul-fonaattia liuotetaan 100 ml:aan vedetöntä dimetyyliformamidia. Jäähdytetään jäähauteessa ja lisätään, samalla hämmentäen, peräkkäin 4,03 g N-hydroksisukkiini-imidiä, 3,61 g disykloheksyylikarbodi-imi- 76 66878 diä ja lopuksi 1,95 ml N-metyylimorfoliinia. Hämmennetään 6 tuntia 0°:ssa ja 15 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen suspensio jäähdytetään, sakka (disykloheksyylikarbamidi- ja morfoliinihydroklo-ridi) suodatetaan pois ja suodos haihdutetaan. Jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin, pestään useaan kertaan vedellä, 1-n sitruunahapolla ja 1-n natriumvetykarbonaattiliuoksella ja vielä vedellä. Etikka-esteriliuos kuivataan, haihdutetaan ja kiteinen jäännös kiteytetään uudelleen etikkaesteri/petrolieetteristä 1/1, sul.p. 135-136°, (a)^ = -9° +1° (c = 1, metanoli), Rf-arvo = 0,82 (edellä esitetyssä systeemissä) ja 0,86 (asetonitriili/vesi 3:1).
Alaniinin asemasta voi suojattu dipeptidi vastaavasti pidentyä muilla luonnollisilla aminohapoilla.
Esimerkki 45: g 7,5 x 10 kuolleita Trypanosoma cruzi-parasiitteja (Chagas-sairauden aiheuttaja) suspendoidaan liuokseen, jossa on 50 mg 2-asetamino-3-O-j(L-l-(D-karbamoyyli-3-karboksipropyyli)-karbamoyyli-etyyli)-karbamoyylimetyylij-2-desoksi-D-glukoosi-N-hydroksisukkiini-imidiesteriä 6 ml:ssa fysiologista puskuriliuosta. Suspensiota inku-boidaan kaksi tuntia 37°:ssa. Sen jälkeen muramyylipeptidiin konju-goituneet parasiitit saostetaan sentrifugoimalla. Sakka pestään uudelleensuspendoimalla se fysiologiseen purskuriliuokseen ja sentrifugoimalla uudelleen. Pestyt parasiitti-muramyylipeptidi-konjugaa-tit suspendoidaan fysiologiseen purskuriliuokseen ja käytetään immu-nointiin.
Trypanosomeihin kytkeytyneen muramyylipeptidin kvantitatiivinen määritys suoritetaan kuten esimerkissä 1 Morgan-Elson-reaktiolla ja saadaan 50-70 mg muramyylipeptidiä per mg trypanosomeja.

Claims (8)

77 66878
1. Menetelmä uusien antigeenijohdannaisten valmistamiseksi, jotka koostuvat antigeenistä, johon antigeenimolekyyliä kohden on sitoutunut ainakin yksi ja enintään niin monta muramyylipeptidimolekyy-liä, että antigeeninen luonne säilyy, sekä mahdollisesti siltajäse-nistä ja kantaja-aineesta, jolloin sitoutumattomassa muodossa olevalla muramyylipeptidillä on kaavan II mukainen rakenne CH2OR6 vi>*' ! N - x - r2 (II) r3 - ch (D) r13 \ *8 flO fu CON - CH - CON - CH - CH2CH - R12 jossa 17 © R, © X on karbonyyli- tai karbonyylioksiryhmä, , R4 ja Rg ovat toisistaan riippumatta vety tai trimetyylisilyyli, R2 on fenyylitähde tai substituoimaton tai hydroksilla, karboksilla, alempialkoksilla ja/tai alempialkoksikarbonyylillä substituoitu alempialkyyli, Rg, R7# Rg ja R^2 ovat toisistaan riippumatta vety tai alempialkyyli, Rg on vety, fenyylitähde tai substituoimaton tai hydroksilla, halogeenilla, aminolla, merkaptolla tai fenyylitähteellä substituoitu alempialkyyli, tai Ry ja Rg yhdessä ovat alkyleeni# jossa on 3 tai 4 hiiliatomia, ja R10, R1^ ja 2 toisistaan riippumatta ovat karboksi, trimetyylisi-lyylioksikarbonyyli, substituoimaton tai fenyylitähteellä substituoitu alempialkoksikarbonyyli, tai karbamoyyli, joka on substituoimaton tai on typpiatomissa substituoitu substituoimatto-malla tai karboksilla, alempialkoksikarbonyylillä tai karbamoyy-lillä substituoidulla alempialkyylillä, tai R.j ^ on myös vety, edellyttäen, että kaavan II mukaisessa lähtöyhdis- 78 66878 teessä on läsnä ainakin yksi vapaa hydroksi-, amino-, merkapto- tai karboksiryhmä, tunnettu siitä, että mahdollisesti siltajäseniin liittynyt antigeeni kondensoidaan muodostamalla kovalenttisia sidoksia oksi-karbonyyli-, iminokarbonyyli- tai karbonyylitioryhmien kanssa, mahdollisesti siltajäseniin liittyneisiin kaavan II mukaisiin muramyy-lipeptideihin, jolloin toisella näistä osista on ainakin yksi vapaa amino-, hydroksi- ja/tai merkaptoryhmä, ja toisella ainakin yksi kar-boksyylihapporyhmä, ja saatu yhdiste edellä selitetyllä tavalla haluttaessa kondensoidaan niinikään muodostamalla kovalenttisia sidoksia oksikarbonyyli-, iminokarbonyyli- tai karbonyylitioryhmien kanssa, mahdollisesti siltajäseniin sitoutuneeseen kantaja-aineeseen.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään kaavan II mukaista muramyylipeptidiä, jossa merkitsee vetyä ja muilla substituenteilla on patenttivaatimuksessa 1 annetut merkitykset.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että toinen yhdiste saatetaan reagoimaan aktivoidun kar-boksyylihapon muodossa vapaana amino-, hydroksi tai merkaptoyhdistee-nä olevan toisen yhdisteen kanssa.
4. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että karboksyylihappokomponentti ennen kondensaa-tiota aktivoidaan esteröimällä N-hydroksisukkinimidin kanssa.
5. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että patenttivaatimuksen 1 mukaisena kantaja-aineena käytetään maitohapon korkeamolekylääristä polymeeriä tai sen johdannaisia, jotka ketjunpäässä sisältävät vapaan karboksyyliryhmän, algiinihappoa, polygalakturonihappoa, pektiiniä, karboksimetyylisel-luloosaa, agaroosia tai emäksistä, neutraalia tai hapanta polyami-nohappoa.
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että siltajäsen on typpiatomin välityksellä sitoutunut a,ω-diamino-alempialkaani, alkaanidikarbonyyli, tai aminoalkaa-nikarbonyyli, josta sidos lähtee typpiatomista.
7. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään patenttivaatimuksen 1 kaavan I mukaista muramyylipeptidiä, jossa , R^, Rg, R^ ja R^ ^ ovat vety, X on karbonyyli, R2 on fenyyli tai mahdollisesti hydroksilla tai alem- 79 66878 pialkoksilla substituoitu alempialkyyli, ja tarkoittaa vetyä tai metyyliä ja Rg, Rg/ R1Q, R^-j ja R12 tarkoittavat samaa kuin patenttivaatimuksessa 1.
8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään patenttivaatimuksen 1 kaavan II mukaista muramyylipeptidiä, jossa R^, R^, Rg, R^, Rg ja R1^ on vety, X karbonyyli, R2 on fenyyli tai mahdollisesti hydroksilla tai nietoksilla substituoitu alempialkyyli, R^ on vety tai metyyli, Rg alempi-alkyyli, hydroksialempialkyyli tai fenyyli ja R-jq/ R-j ^ ja R^2 ovat karboksyyli, alempialkoksikarbonyyli tai karbamoyyli tai R^ on myös vety.
FI790584A 1978-02-24 1979-02-21 Foerfarande foer framstaellning av nya antigenderivat FI66878C (fi)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH203578 1978-02-24
CH203578 1978-02-24
CH377778 1978-04-07
CH377778 1978-04-07
CH539478 1978-05-18
CH539478 1978-05-18

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI790584A FI790584A (fi) 1979-08-25
FI66878B true FI66878B (fi) 1984-08-31
FI66878C FI66878C (fi) 1984-12-10

Family

ID=27173419

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI790584A FI66878C (fi) 1978-02-24 1979-02-21 Foerfarande foer framstaellning av nya antigenderivat

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0003833B2 (fi)
JP (1) JPS54141718A (fi)
AR (1) AR223833A1 (fi)
AT (1) AT364718B (fi)
AU (1) AU527549B2 (fi)
CA (1) CA1138436A (fi)
DD (1) DD141616A5 (fi)
DK (1) DK161026C (fi)
ES (2) ES477977A1 (fi)
FI (1) FI66878C (fi)
GB (1) GB2015534A (fi)
GR (1) GR77615B (fi)
HU (1) HU182011B (fi)
IL (1) IL56724A (fi)
NO (2) NO151201C (fi)
NZ (1) NZ189756A (fi)
PL (1) PL123315B1 (fi)
PT (1) PT69281A (fi)
SU (1) SU1055312A3 (fi)
ZA (1) ZA79893B (fi)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS54130516A (en) * 1978-03-31 1979-10-09 Yuuichi Yamamura Acyllnnacetylmuramylpeptide derivativeeantigen combination
FR2428051A1 (fr) * 1978-06-05 1980-01-04 Anvar Nouveaux composes du type muramyl-peptide et medicaments les contenant
FR2428050A1 (fr) * 1978-06-05 1980-01-04 Anvar Oligomeres de composes du type muramyl-peptide et medicaments les contenant
EP0013856B1 (en) 1978-12-22 1983-03-09 ANVAR Agence Nationale de Valorisation de la Recherche New compounds associating peptidyl or aminoacyl residues to lipophilic groups and pharmaceutical compositions containing said new compounds
FR2446292A1 (fr) * 1979-01-12 1980-08-08 Anvar Muramyl-peptides fixes sur polymeres peptidiques et medicaments les contenant
FR2449697A1 (fr) 1979-02-20 1980-09-19 Anvar Nouveaux muramyl-peptides substitues sur un azote peptidique et medicaments les contenant
JPS5618996A (en) * 1979-06-21 1981-02-23 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd Muramyldipeptide derivative
DK156252C (da) * 1979-07-31 1989-12-18 Fujisawa Pharmaceutical Co Analogifremgangsmaade til fremstilling af di-, tri- eller tetrapeptidderivater eller salte deraf
US4406889A (en) * 1980-02-15 1983-09-27 Ciba-Geigy Corporation Derivatives of aldohexoses, intermediates, processes for their manufacture, preparations containing such compounds, and their use
EP0038153A3 (en) * 1980-04-15 1982-12-22 Beecham Group Plc Modified allergens
US4368190A (en) * 1980-04-17 1983-01-11 Merck & Co., Inc. Immunologically active dipeptidyl 4-O-,6-O-acyl-2-amino-2-deoxy-D-glucose derivatives and methods for their preparation
US4497729A (en) * 1980-12-01 1985-02-05 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Peptide, process for preparation thereof and use thereof
FR2522967B1 (fr) * 1982-03-15 1986-03-07 Anvar Conjugues d'haptenes et de muramyl-peptides, doues d'activite immunogene et compositions les contenant
US4587046A (en) * 1982-05-18 1986-05-06 The Regents Of The University Of California Drug-carrier conjugates
FR2558165B1 (fr) * 1984-01-17 1986-07-04 Anvar Nouveaux conjugues d'oligo-muramylpeptides et compositions biologiques les contenant pour l'activation des macrophages
FR2569984B1 (fr) * 1984-09-12 1987-08-14 Anvar Molecule synthetique contenant une pluralite d'epitopes distincts, procede pour son obtention et application a la production de polyvaccins
JPWO2020111238A1 (ja) * 2018-11-30 2021-10-21 中外製薬株式会社 ペプチド化合物、またはアミド化合物の脱保護法および固相反応における脱樹脂方法、並びにペプチド化合物の製造方法
JP2024511067A (ja) 2021-03-19 2024-03-12 トレインド セラピューティクス ディスカバリー，インコーポレーテッド 訓練された免疫を調節するための化合物およびその使用方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH453269A4 (fi) * 1968-03-29 1973-01-31
US4186194A (en) * 1973-10-23 1980-01-29 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Water soluble agents effective as immunological adjuvants for stimulating, in the host the immune response to various antigens and compositions, notably vaccines containing said water soluble agents
CH613709A5 (en) * 1975-12-10 1979-10-15 Ciba Geigy Ag Process for the preparation of glucosamine derivatives
GB1573126A (en) * 1976-03-10 1980-08-13 Anvar Immunising and anti-infectious adjuvant agents comprising peptide derivatives of muramic acid
FR2343482A1 (fr) * 1976-03-10 1977-10-07 Anvar La 2- (2-acetamido-2-deoxy-3-o-d-glucopyranosyl) -d-propionyl-l-seryl-d-isoglutamine et medicaments la contenant

Also Published As

Publication number Publication date
NO151201C (no) 1985-02-27
NO151088C (no) 1985-02-06
IL56724A0 (en) 1979-05-31
GR77615B (fi) 1984-09-25
ZA79893B (en) 1980-03-26
EP0003833A3 (en) 1980-02-06
JPH0130809B2 (fi) 1989-06-22
SU1055312A3 (ru) 1983-11-15
PL213696A1 (fi) 1980-07-14
NZ189756A (en) 1982-05-31
AR223833A1 (es) 1981-09-30
DD141616A5 (de) 1980-05-14
NO790626L (no) 1979-08-27
EP0003833A2 (de) 1979-09-05
AU527549B2 (en) 1983-03-10
ATA142079A (de) 1981-04-15
CA1138436A (en) 1982-12-28
JPS54141718A (en) 1979-11-05
AT364718B (de) 1981-11-10
AU4454679A (en) 1979-08-30
NO151088B (no) 1984-10-29
DK161026C (da) 1991-10-28
NO151201B (no) 1984-11-19
HU182011B (en) 1983-12-28
DK79779A (da) 1979-08-25
GB2015534A (en) 1979-09-12
NO793993L (no) 1979-08-27
FI66878C (fi) 1984-12-10
PL123315B1 (en) 1982-10-30
DK161026B (da) 1991-05-21
ES477977A1 (es) 1980-01-16
PT69281A (de) 1979-03-01
EP0003833B2 (de) 1990-12-19
EP0003833B1 (de) 1983-07-20
FI790584A (fi) 1979-08-25
IL56724A (en) 1982-12-31
ES483558A1 (es) 1980-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI66878B (fi) Foerfarande foer framstaellning av nya antigenderivat
US4397844A (en) Antigen derivatives and processes for their preparation
FI75578C (fi) Analogifoerfarande foer framstaellning av farmakologiskt verkande lipofila fosfatidylmuramylpeptider.
FI64164B (fi) Foerfarande foer framstaellning av 2-(2-acylamino-2-desoxi-(d)-glukosyl-3-0)-alkankarboxylsyrapeptid-derivat
US4396607A (en) Muramyl peptide derivatives and pharmaceutical compositions
US4639512A (en) Conjugates of haptenes and muramyl-peptides, endowed with immunogenic activity and compositions containing them
GB1590659A (en) Immunological adjuvant constituted by the p-aminophenyl derivative of n-acetylmuramyl-l-alanyl-d-isoglutamine
FI72733B (fi) Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt verkande glukosderivat samt mellanprodukter anvaenda vid foerfarandet.
EP0041896B1 (en) Immunologically active dipeptidyl 2-amino-1,2-dideoxy-d-glucose derivatives and methods of preparation
US4461761A (en) Oligomers of compounds of the muramyl-peptide type and medicaments containing them
EP0038750A1 (en) Immunologically active dipeptidyl 4-0-, 6-0-acyl-2-amino-2-deoxy-D-glucose derivatives and methods for their preparation
US4427659A (en) Muramyl peptide substituted on a peptide nitrogen and medicaments containing the same
US11420993B2 (en) Semi-synthetic meningococcal conjugate vaccine
WO2004041310A1 (en) Preparation of chemically well-defined carbohydrate dendrimer conjugates
EP0014159B1 (en) Immunologically active dipeptidyl saccharides and methods of preparation
US4693998A (en) Novel compounds of the muramyl peptide
US4574058A (en) Antigen derivatives and processes for their preparation
US4377570A (en) Immunologically active dipeptidyl saccharides and methods of preparation
IE47994B1 (en) Novel antigen derivatives and processes for their preparation
KR830002059B1 (ko) 멀아밀-펲타이드형태인 신규 화합물의 제조방법
CN112603996A (zh) 一种脂磷壁酸疫苗制剂及其应用
IE48735B1 (en) Muramyl-peptide ester compounds and their application in pharmaceutical compositions and laboratory reagents
ITUB20159533A1 (it) Immunoadiuvanti vaccinali
CZ407492A3 (cs) Farmaceutický prostředek

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: CIBA-GEIGY AG