CS244697B2

CS244697B2 - Production method of 2-amono-9-(2-hydroxyethoxymethyl)purine derivatives

Info

Publication number: CS244697B2
Application number: CS846319A
Authority: CS
Inventors: Howard J Schaeffer; Thomas A Krenitsky; Lilia M Beauchamp
Original assignee: Wellcome Foundation Lmd
Priority date: 1982-10-14
Filing date: 1984-08-21
Publication date: 1986-08-14
Also published as: GR79681B; JPH0549674B2; PT79813B; JPS5989682A; KR840006483A; EP0108285A3; NO833722L; KR890001487B1; ZW22283A1; PT77494A; EP0108285B1; EP0158847B1; ATE33654T1; CA1308714C; PL143208B1; GB8421849D0; DE3376326D1; FI833730L; IE832409L; EP0108285A2

Description

Tento vynález se týká protivirově účinných derivátů purinu obsahujících acyklický řetězec v poloze 9.

Britský patent č. 1 523 865 popisuje řadu derivátů purinu obsahujících v poloze 9 acyklický postranní řetězec. Bylo zjištěno, že tyto deriváty purinu mají protivirovou účinnost proti různým třídám DNK virů, zvláště proti herpes virům, jako je Herpes simplex.

Mezi těmito deriváty byl zjištěn zvláště dobrý účinek proti herpes virům, jako Herpes simplex, u 9-(2-hydroxyetoxymetyl)guaninu (obecně označovaného jako acyklovir). Avšak zatímco acyklovir byl shledán jako zvláště účinný proti virům při lokálním nebo parenterálním podávání, je pouze prostředně absorbován při orálním podávání při odpovídajících hladinách léku v plasmě; je jasné, že při léčení vnitřních poruch orálním podáváním léku je žádoucí, aby byl lék dobře absorbován z gastrointestinálního traktu a dosahoval vysokých hodnot obsahu v plasmě.

Nyní bylo s překvapením zjištěno, že deriváty purinu, chrakterizované přítomností atomu vodíku v poloze 6 purinového jádra, mohou být snadno převedeny in vivo účinkem enzymů molybdo-flavo-proteinového typu (zvláště xanthinoxidázou/dehydrogenázou nebo aldehydoxidázou) na odpovídající deriváty 6-hydroxypurinu s protivirovým účinkem. Kromě toho pokusy na krysách ukázaly, že orální podávání takového 6-hydrogenovaného derivátu má za následek účinnou absorpci z gastrointestinálního traktu a vysoké hladiny odpovídající 6-hydroxysloučeniny v plasmě, přičemž je tato sloučenina vytvářena enzymatickou přeměnou 6-hydrogenované sloučeniny.

Výše uvedenou skupinu derivátů 6-hydrogenpurinu vyjadřuje obecný vzorec I

СН_эХСНСН_о0Н ² I ² (I), l²kde x představuje atom kyslíku nebo atom síry a

R znamená atom vodíku nebo hydroxymetylovou skupinu nebo jde o fyziologicky přijatelné soli těchto sloučenin nebo o fyziologicky přijatelné estery u jiných sloučenin obecného vzorce I než sloučenin, kde X znamená atom kyslíku a R představuje atom vodíku.

Sloučeniny obecného vzorce I ve formě solí, které se mohou používat к terapeutickým účelům, zahrnují fyziologicky snášenlivé soli organických kyselin, jako je kyselina mléčná, kyselina jablečná, kyselina octová nebo kyselina p-toluensulfonová a fyziologicky snášenlivé soli minerálních kyselin, jako je kyselina chlorovodíková nebo kyselina sírová.

Estery sloučenin obecného vzorce I zahrnují estery obsahující formyloxyskupinu nebo alkanoyloxyskupinu s 1 až 16 atomy uhlíku, například s 1 až 6 atomy uhlíku, například acetoxyskupinu nebo propionyloxyskupinu, popřípadě substituovanou aralalkanoyloxyskupinu, například fenylalkanoyloxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkanoylové části, jako je fenylacetoxyskupina nebo podle potřeby substituovanou aroyloxyskupinu, například benzoyloxyskupinu nebo naftoyloxyskupinu v jedné nebo obou koncových polohách 9 postranního řetězce sloučenin vzorce I. Výše uvedené aralkanoyloxyskupiny a aroyloxyskupiny esteru mohou být substituovány například jedním nebo několika atomy halogenu, například chloru nebo bromu nebo aminoskupinou, nitrilovou skupinou nebo sulfamidovou skupinou, přičemž arylová část skupiny obsahuje výhodně 6 až 10 atomů uhlíku.

Tento vynález se týká rovněž bioprekurzorů sloučenin obecného vzorce I a jejich fyziologicky snášenlivých solí a esterů, to znamená sloučenin, které jsou přeměňovány in vivo na sloučeniny obecného vzorce I a jejich svrchu popsané deriváty.

2-amino-9-(2-benzoyloxyetoxymetyl)purin, to jest benzoát sloučeniny obecného vzorce I, kde X značí atom kyslíku a Y značí atom vodíku, je popsán v US patentu č. 4 199 547. žádný z bodů definice předmětu vynálezu se však netýká samotné sloučeniny. Uvedený US patent se rovněž nezmiňuje ani nanaznačuje skutečnost, že tato sloučenina může být převedena in vivo na odpovídající 6-hydroxyanalog.

Zjištění, že 6-hydrogenpurin se může snadno převést na svůj odpovídající 6-hydroxyanalog je překvapivé, neboř v předchozích stucfiích s xanthinoxidázou z kravského mléka /Hilettre a kol., Biochem. Pharmacol., 16, 1 747 až 1 755 (1967); T. A. Krenitsky a kol., Arch. Biophys., 150, 484 až 599 (1972)/, bylo doloženo, že 9-substituce zeslabuje nebo značně zmenšuje rychlost, kterou se oxidují různé puriny. Z hlediska pozorování bylo překvapivé zjištění, že tento enzym rychleji oxidoval například 6-deoxyacyklovir, 9-substituovaný derivát 2-aminopurinu, než 9-nesubstituovaný purin, jak bylo shledáno při enzymatických studiích.

Vysoká hodnota absorpce sloučeniny vzorce I z gastrointestinálního traktu je zvláště výhodná při orální aplikaci této sloučeniny, například při léčení chorob způsobených různými DNK viry, jako jsou infekce herpesu, například Herpes simplex, varicell a nebo zoster, cytomegalovirus, stejně jako choroby způsobené hepatidou В nebo Epstein-Barrovým. Sloučenina vzorce I se může také použít pro léčení nebo profylaxi papilloma nebo infekcí viru bradavic.

Kromě jejího použití v humánní medicíně může být sloučenina vzorce I podávána zvířatům, například savcům, při léčení nebo proxylaxi virových chorob. Například sloučeniny vzorce I ve které Y značí hydroxymety1, jsou zvláště vhodné pro -léčení equine rhinopneumonitis. Podávání sloučeniny vzorce I nebo její fyziologicky snášenlivé soli nebo esteru, zvláště orální podávání, přináší vynikající výsledky při léčení uvedených chorob.

Vynález se pro použití při jako je člověk.

dále týká sloučeniny vzorce I a jejich fyziologicky snášenlivých solí léčení nebo profylaxi virových onemocnění u živočichů, například savců,

Vynález se rovněž týká způsobu léčení nebo profylaxe virových chorob u živočichů, například savců, jako člověka, který spočívá v podávání protivirově účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její fyziologicky snášenlivého soli či esteru.

Sloučeniny vzorce I a jejich fyziologicky snášenlivé soli (dále budou sloučeniny této skupiny označovány jako účinné látky) mohou být podávány jakýmkoli způsobem, vhodným pro daný způsob léčení, mezi které se zahrnuje orální, rektální, nasální, lokální (včetně bukálního a sublinguálního) , vaginální a parenterální (včetně subkutánního, intramuskulárního, intravenózního, intradermálního, intratekálního a epidurálního) způsobu. Je zřejmé, že vhodný způsob se bude řídit například stavem příjemce.

Množství požadované účinné látky závisí u každého z.e shora uvedených způsobů použití a indikací na mnoha faktorech, včetně bolestivosti ošetřovaného stavu a jednotlivém příjemci a nakonec závisí na rozhodnutí ošetřujícího lékaře nebo veterináře. Obecně však pro každé z těchto použití a indikací je účinná dávka v rozmezí od 0,1. do 250 mg na kilogram tělesné hmotnosti příjemce za den, výhodně v rozmezí od 1 do 100 mg na kilogram tělesné hmotnosti za den a zvláště v rozmezí od 5 do 20 mg na kilogram tělesné hmotnosti za den. Optimální dávka je asi 10 mg na kilogram tělesné hmotnosti za den. (Pokud nebude uvedeno jinak, jsou všechny hmotnosti účinné látky přepočteny na sloučeninu vzorce I jako takovou; pro soli této sloučeniny se hodnoty proporcionálně zvětší). Požadovaná dávka se výhodně podá ve dvou, třech, čtyřech nebo více dílčích dávkách, podávaných ve shodných intervalech během dne. Tyto dílčí dávky mohou být podávány v podobě dávkových jednotek, například obsahujících 10 až 1 000 mg, výhodně 20 až 500 mg a nejlépe 100 až 400 mg účinné látky v jedné dávkové jednotce.

I když je možno podávat účinnou látku samotnou, je lepší jí podávat ve formě farmaceutických prostředků. Prostředky jak pro veterinární, tak humánní použití podle vynálezu obsahují alespoň jednu účinnou složku, společně s jedním nebo více vhodnými nosiči účinné složky a podle potřeby dalšími terapeutickými přísadami. Nosič nebo nosiče musí být snášenlivé ve smyslu snášenlivosti s ostatními přísadami prostředku a nesmí být škodlivé pro příjerce.

Prostředky zahrnují formy vhodné pro orální, rektální, nasální, lokální (včetně subkutánního, intramuskulárního a intravenosního, intradermálního, intratekálního a epidurálního) podání. Prostředky mohou být výhodně přítomny v dávkových jednotkách a mohou se připravovat metodami dobře známými v oboru farmacie. Takové metody zahrnují stupeň míšení účinné látky s nosičem, který obsahue jednu nebo více doplňkových přísad. Obecně se prostředky vyrábějí homogenním dokonalým smísením účinné látky s kapalnými nosiči nebo jemně rozmělněnými pevnými nosiči s případným vytvarováním produktu.

Prostředky podle vnálezu, vhodné pro orální podávání, jednotek, například kapslí, oplatek se speciálním uzávěrem obsahuje stanovené množství účinné látky, jako prášek nebo ve vodné nebo nevodné kapalině, nebo jako emulze oleje ve vodé nebo vody v oleji. Účinná složka může být rovněž přítomna ve formě velké měkké pilulky, lektvaru nebo pasty.

mohou být ve formě dávkových nebo tablet, z nichž každá granule, jako roztok nebo suspenze

Tablety se mohou připravovat lisováním nebo odléváním podle potřeby společně s jedním nebo více doplňkovými přísadami. Lisované tablety se mohou ve vhodném zařízení stlačovat z účinné látky v sypké formě, jako prášku nebo granulí, popřípadě smísené s pojivém, mazadlem, inertním ředidlem, ochranným prostředkem a povrchově aktivní nebo dispergační látkou. Odlévané tablety mohou být připraveny ve vhodném zařízení odléváním směsi práškové sloučeniny zvlhčené inertním kapalným ředidlem. Tablety mohou být výhodně opatřeny povlakem nebo rýhou a sestaveny tak, aby bylo zajištěno pomalé nebo regulovatelné uvolňování účinné látky.

Při infekci očí nebo jiných vnějších tkání, například úst nebo kůže, se prostředky aplikují výhodně jako lokální masti nebo krémy, které obsahují účinnou přísadu v množství například 0,075 až 20 % hmotnostních, výhodně 0,2 až 15 % hmotnostních a nejlépe 0,5 až 10 % hmotnostních. Při použití v masti se účinné látky mohou použít bud s parafinovým základem nebo s vodou mísitelným masťovým základem. Alternativně se mohou účinné látky formulovat do krému s krémovým základem na bázi oleje ve vodě.

V případě potřeby může vodná fáze krémového základu obsahovat například 30 % hmotnostních vícemocného alkoholu, to znamená alkoholu se dvěma nebo více hydroskupinami, jako je propylenglykol, 1,3-butandiol, mannitol, sorbitol, glycerol a polyetylenglykol a jejich směsi. Lokální prostředky mohou v případě potřeby obsahovat sloučeninu, která usnadňuje absorpci nebo pronikání účinné látky do kůže nebo jiné zasažené oblasti. Příkladem takových kožních penetračních prostředků je dimetylsulfoxid a jeho analogy.

Olejová fáze emulzí podle vynálezu může být tvořena známými přísadami a může se vyrábět známým způsobem. I když může tato fáze obsahovat pouhý emulgátor (jinak označovaný jako emulgent), je výhodné, aby obsahovala směs alespoň jednoho emulgátoru s tukem nebo olejem nebo jak tukem, tak olejem. Výhodně se použije hydrofilního emulgátoru společně s lipofilním emulgátorem, který působí jako stabilizátor. Je také výhodné, aby tato fáze obsahovala jak olej, tak tuk. Emulgátor nebo emulgátory se stabilizátorem nebo stabilizátory nebo bez stabilizátoru či stabilizátorů vytvářejí tak zvaný emulgační vosk. Tento vosk vytváří společně s olejem a/nebo tukem tak zvaný emulgační masťový základ, který tvoří olejovou disperzní fázi krémových prostředků.

Emulgátory a emulzní stabilizátory, vhodné pro použití ve směsích podle vynálezu, zahrnujíc Tween 60, Spán 80, cetostearylalkohol, myristylalkohol, glycerylmonostearát a laurylsíran sodný.

Volba vhodných olejů nebo tuků pro prostředky se řídí požadovanými kosmetickými vlastnostmi, neboť rozpustnost účinné sloučeniny ve většině olejů, připadajících v úvahu pro použití ve farmaceutických prostředcích, je velmi nízká. Krém by měl být výhodně nemastný a bez skvrn a měl by být omyvatelný s vhodnou konzistencí bránicí unikání z tub nebo jiných obalů. Je možno použít přímé nebo rozvětvené mono- nebo lialkylestery, jako je diisoadipát, isocetylstearát, propylenglykoldiester kokosové mastné kyseliny, isopropylmyristát, decyloleát, isopropylpalmitát, butylstearát, 2-etylhexylpalmitát nebo směs rozvětvených esterů, která je známá jako Cromadol CAP. Výhodné jsou tři posledně uvedené estery. Tyto látky mohou být použity samotné nebo ve směsi v závislosti na požadovaných vlastnostech produktu. Alternativně mohou být použity lipidy o vysoké teplotě tání, jakož i bílý měkký parafin a/nebo kapalný parafin nebo jiné minerální oleje.

Prostředky vhodné pro lokální podávání do oka zahrnují rovněž oční kapky, ve kterých je účinná látka rozpuštěna nebo suspendována ve vhodném nosiči, zvláště ve vodném rozpouštědle pro účinnou látku. Takové prostředky obsahují výhodně účinnou látku у koncentraci 0,5 až 20 % hmotnostních, výhodně 0,5 až 10 % hmotnostních a zvláště asi 1,5 % hmotnostních.

Prostředky vhodné pro lokální podávání do úst zahrnují pokroutky s obsahem účinné látky v chuťové bázi, obvykle sacharózu a akácii nebo tragant. Pastilky obsahují účinnou látku v inertním základě, jako je želatina nebo vody obsahují účinnou látku ve vhodném kapalném g^ly^cerⁱn nebo sac^haróza a a^kácie. Ústní nosiči.

ve formě čípků s vhodným základem, obsaProstředky k rektálnímu podávání mohou být hujícím například kokosové máslo nebo salicylát.

Prostředky vhodné pro nasální podávání, ve kterých je nosič ve formě pevné·látky,_ zahrnují hrubé prášky s velikostí částic například v rozmezí 20 až 500 mikrometrů, které se aplikují šňupáním, to znamená rychlou inhalací nosním kanálem ze·zásobníku prášku, přidržovaného v blízkosti nosu. Vhodné prostředky, ve kterých je nosičem kapalina, pro podávání například v podobě nosního spreje nebo nosních kapek, zahrnují vodné nebo olejové roztoky účinné látky.

Prostředky vhodné pro vaginální podávání mohou být ve formě pesarů, tamponů, krémů, želé, past, pěn nebo sprejů, obsahujících kromě účinné látky nosiče, které jsou v oboru známé jako vhodné.

Prostředky účelné pro parenterální podávání zahrnují vodné a nevodné sterilní injekční roztoky, které mohou obsahovat antioxidační činidla, pufry, bakteriostatika a solutanty, zlepšující ^so^nickou příbuznost prostředku s krví příjemce, a vodné a nevodné sterilní suspenze, které mohou obsahovat suspendační prostředky a zahušEovadla. Prostředky mohou být uchovány v jednorázových nebo vícedávkových zásobnících, například zatavených ampulích a fiolách, přičemž se mohou skladovat v lyo^lizovaném stavu, a bezprostředně před použitím se připraví pouhým přidáním sterilního kapalného nosiče, například vody pro injekce.

Extemporánní injekční roztoky a suspenze se mohou připravovat za sterilních prášků, granulí a tablet výše popsaného druhu. Vhodné prostředky ve formě jednotkové dávky obsahují denní dávku účinné látky nebo jednotkou denní dílčí dávku účinné látky, jak bylo uvedeno' výše, nebo vhodný jejich podíl. ,

Je třeba rozumět, že kromě složek jednotlivě uvedených výše, prostředky podle vynálezu mohou obsahovat jiné přísady běžné v oboru s ohledem na typ příslušného prostředku. Např. prostředek vhodný pro orální podání může obsahovat ochucovadla.

Vynález se dále , · týká veterinárních prostředků, které obsahují alespoň jednu účinnou látku, uvedenou v předchozím popisu, společně s vhodným veterinárním nosičem.

Veterinární nosiče jsou látky vhodné pro účely podávání prostředků a mohou být ve formě pevných, kapalných nebo plynných materiálů, které jsou jinak inertní nebo snášenlivé z veterinárního hlediska a mísitelné s účinnou látkou. Veterinární prostředky mohou být podávány orálně, parenterálně nebo jiným vhodným způsobem.

Pro orální podávání mohou být prostředky v podobě tablet, granulí, smáčecího roztoku, oplatky se speciálním uzávěrem, kapsle nebo krmného'doplňku. Granule se mohou připravovat známými postupy granulací za mokra, předlisováním nebo sekáním. Zvířatům mohou být podávány v inertním kapalném vehikulu ve formě smáčecího roztoku nebo v suspenzi s vodným nebo olejovým základem. Výhodně se použijí doplňkové složky, jako je dispergační látka. Takové prostředky obsahují výhodně 15 až 85 % hmotnostních účinné látky.

suspendováním účinné může použít společně látky v kapalném ředidle. Zhutňovací se zvlhčovacím prostředkem nebo smáy je vhodné použití

Pasta může být připravena nebo zahuštovací prostředek se čedlem, pokud je kapalným ředidlem voda. Při přípravě emulzní past; jednoho nebo více povrchově aktivních prostředků. Účinná látka v těchto pastových prostředcích může tvořit 25 až 80 % hmotnostních.

V krmných doplňcích je účinná látka přítomna obecně ve větších množstvích vzhledem к vedlejším složkám a tyto krmné doplňky se mohou podávat přímo nebo po smíchání nebo zředění. Příklady doplňkových složek pro takové prostředky jsou například pevné, orálně aplikovatelné nosiče, jako je kukuřičná mouka, sojová mouka, pšeničná krmná mouka, sojová drň, jedlé zeleninové materiály a fermentační zbytky. Účinná látka je obvykle obsažena v jedné nebo více doplňkových složkách a důkladně a rovnoměrně dispergována drcením, bubnovým míšením nebo promísením v běžném zařízení. Pro přidávání do krmiv jsou vhodné prostředky, které obsahují 1 až 90 % hmotnostních účinné látky.

Pro léčení infekcí herpes viru u koní může být vhodná orální nebo parenterální dávka 0,1 až 250 mg na kilogram tělesné hmotnosti za den, výhodně od 2 do 100 mg na kilogram a den. Tato dávka může být rozdělena do dílčích dávek, podávaných v pravidelných intervalech během dne a opakována po dobu 14 dnů nebo do odeznění infekce. U virových infekcí jiných zvířat závisí dávka na velikosti zvířete a jeho metabolismu. Prostředky mohou být podávány ve formě dávkových jednotek, jako jsou tablety, několikrát denně, přičemž je obsah účinné přísady 10 až 1 000 mg na dávkovou jednotku.

Sloučenina vzorce I a její fyziologicky snášenlivé soli mohou být připraveny postupy, popsanými pro výrobu sloučenin obdobné struktury, například způsobem popsaným v britském patentu Č. 1 523 865.

Předmětem vynálezu je způsob výroby sloučenin vzorce I a jejich fyziologicky snášenlivých solí a esterů, který spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce II

M (II)

CH₂XCHCH₂OH

2’

kde

mají výše uvedený význam, znamená atom halogenu a představuje aminoskupinu.

nebo sůl nebo ester této sloučeniny podrobí katalytické hydrogenaci a je-li výsledným produktem ester sloučeniny obecného vzorce I, tento ester se popřípadě hydrolýzuje na základní sloučeninu obecného vzorce I nebo se získaný produkt převede na fyziologicky přijatelnou adiční sůl s kyselinou nebo na rozdílný fyziologicky přijatelný ester této sloučeniny.

Při výhodném provedení způsobu podle tohoto vynálezu se vychází ze sloučeniny obecného vzorce II, kde M znamená atom halogenu a ostatní symboly mají výše uvedený význam a tato sloučenina se podrobí hydrogenaci v přítomnosti palladia jako katalyzátoru.

Při způsobu podle tohoto vynálezu se též účelně vychází ze sloučeniny obecného vzorce II 2 kde Μ, X a G mají výše uvedený význam a R znamená atom vodíku, nebo jejího esteru nebo soli. Získají se tak zvláště výhodné sloučeniny obecného vzorce I, nebo jejich fyziologicky snášenlivé soli nebo estery.

Způsob podle tohoto vynálezu je společně s dalšími běžnými postupy popsán v publikaci Fused Pyrimidines, část II, Puriny, vyd. D. J. Brown (1971), Wiley-Interscience.

Výchozí sloučeniny, použité při výše uvedeném postupu, se mohou připravovat způsobem, například podle způsobu popsaného ve výše zmíněném britském patentu č.

běžným

523 865.

Následující příklady slouží k .ilustraci tohoto vynálezu.

Příklad 1

Způsob výroby 2-amino-9-(2-hydroxyetylthiometyl)-9H-purinu

Do jednolitrové baňky s kulatým dnem, vybavené magnetickou míchací tyčkou a chlorkaciovou sušicí trubicí, se vnese 5,0 g (29,50 mmol) '2-amino-6-chlorpurinu, 6,8 g (29,50 mmol) ^Q2-(chlorπletylthⁱo)etyí^|Ьenzoátu^{, 4,07 g} (2^9,5° mmol) uh^ličitanu draselného a ⁷⁵⁰ ml 'bezvodého dimetylformamidu. Reakční směs se míchá za teploty místnosti 16 hodin, načež se při^dá ^dal^ší množs^tv^{í 2,0 g} (8^ mmol) ^[2-(^lhlormety^lthio)et^i^l^] benzoá^ s 1,2 ^g (8,⁷ mmol) uhličitanu .draselného a v míchání se pokračuje další 24 hodiny za teploty místnosti. Reakční směs se potom filtruje přes vrstvu Celitu v odpaří za sníženého tlaku na viskózní žlutý nálevce ze slinutého skla a na rotační odparce olej.

Měrek 60 a tato předadsorbována fáze se nanese

Olej se adsorbuje na 20,0 g silikagelu na hlavu kolony plněné silikagelem Měrek 60. Promytí kolony pomocí směsi etylactátu a benzenu v poměru 6:4 poskytne 2-amino-9-(2-benzoyloxyetylthiometyl)-6-chlor-9H-purin ve formě bělavé pevné látky tvořící jednotný materiál při chromatigrafii na tenké vrstvě silikagelu za použití etylacetátu a hexanu v poměru 8:2. 'H NMR CDC^ 8,0 až 7,15, 6H, multiplet; 5,1, 4H, široký singlet; 4,5, 2H, triplet 2,985, 2H triplet.

0,98 g (2,70 mmol) takto získaného produktu se umístí v 500 ml Parrově hydrogenační baňce společně s 2,5 g hydroxidu palladnatého, jako katalyzátoru, 50 ml trietylaminu a 200 ml metanolu. Reakční směs se v Parrově hydrogenačním přístroji třepe za tlaku vodíků 34 kPa hodin při teplotě místnosti. Chromatografie hydrogenolyzačního produktu na tenké vrstvě silikagelu s 8% metanolem v etylacetátu ukazuje pouze částečný průběh reakce. Katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu v nálevce ze slinutého skla, potom se přidá 2,0 g čerstvého hydroxidu palladnatého, jako katalyzátoru, a 7,0 ml trietylaminu a reakční směs se opět třepe za tlaku vodíku 34 kPa po dobu 20 hodin. Nyní chromatografie na tenké vrstvě ukazuje dokončenou reakci. Katalyzátor se odfiltruje stejným způsobem jako je popsáno výše a metanol se odstraní na rotační odparce za sníženého tlaku. Získá se látka charakteru čistého skla, která se vyjme do 100 ml směsi metanolu a vody v poměru 1:1, obsahující 20 % metylaminu. Výsledný roztok se míchá za teploty místnosti 4 hodiny a odpaří podíl se na hlavu se získá 124 °C.

na rotační odparce za sníženého tlaku, za vzniku amorfního pevného podílu. Pevný adsorbuje na 10,0 g silikagelu Měrek 60 a tato kolony naplněné silikagelem Měrek 60. Eluování a hexanu za vzniku titulní sloučeniny ve formě předadsorbována fáze se přenese kolony 10% metanolem v etylacetátu jehliček, teplota tání 122 až

Chromatografie na tenké vrstvě:

skvrna na silikagelu s 15% metanolem v etylacetátu,

NMR DMSO-d₆ 8,59, 1H singlet;

singlet, 4,83, 1H triplet, 3,49, 2H

8,15, 1H sing*let, 6,56, 2H široký singlet, 5,24, 2H multiplet, 2,69, 2H, multiplet.

Analýza:

vypočteno: 42,65 % C 4,92 % H nalezeno: 42,00 0 C* 4,94 % H

31,09 % N,

31,04 % N.

ad 2

Příkl

a) Z^půso^b výroby 2-amino-9-[(2-benzoyloxy-l-benzoyloxymetyletoxy)metyl]-6-chlor-9H-purinu

Směs

7,0 g (41,2 mol) 2-amino-6-chlor-9H-purinu, 4,55 g (34,4 nunol) síranu amonného a 200 ml hexametyldisilazanu se nechá reagovat v atmosféře dusíku pod zpětným chladičem za míchání pět hodin. Směs se.odpaří v tenké vrstvě a potom se přidá 8,8 2-O-(acetylmetyl)-1,3-bip-(0-benzoyl)glycerolu v asi 10 ml benzenu. Směs diny na olejové lázni a za podtlaku vodní vývěvy se zapojenou destilační se směs ochladí na teplotu mísnosti. Ke směsi umístěné na parní lázni po se přidá metanol. Směs se poté promyje vodou a extrahuje třikrát etylacetátem. Organická vrstva se suší bezvodým síranem hořečnatým po dobu asi 30 minut. Potom se směs přefiltruje, sůl promyje etylacetátem a odpaří v tenké vrstvě. Mžiková sloupcová chromatografie za promývání směsí metylenchloridu a acetonu v poměru 6:1 poskytne požadovanou sloučeninu ve ^form^ě analytⁱc^{ky č}ist^é bHé ^pevn^{é lá}t^ky o teplotě ^tání ¹³⁰ a^{ž 131} °C.

g (23,6mmol) se.zahřívá 1,5 hohlavou. Poté dobu 30 minut ^b) Zp^osob . výro^{by 2}-amⁱno-9^- [^-benzoyloxy-l-benzoytoxyrnety^toxyjmet^J^H^ur^u

Směs ^{3,393 g} (7»⁰⁴ mmol) ²-amⁱno-9- [(2-benzoyloxy-l-benzoy^lox^ymet^yletox^y)met^ylJ-⁶-chlor-9H-purinu, 100 ml etanolu, 100 ml tetrahydrofuranu a 1,9 ml trietylaminu se přidá k 0,600 g palladia na uhlí, jako katalyzátoru, v Parrově baňce. Směs se rou vodíku 24 hodin. Palladium na uhlí se odfiltruje přes vrstvu Celitu i přidá 0,650 g čerstvého palladia na uhlí. Hydrogenace se nechá probíhat chromatografie za použití 100% metylenchloridu, směsi metylenchloridu a < ⁴:¹ a ¹⁰⁰% acetonu pos^kytne titu^ln^í stoučeninu o teptot-ě ^tán^{í 132} až ¹³³ třepe pod atmosféa k reakční směsi 4 dny. Sloupcová acetonu v poměru I °C.

Příklad 3

Z^působ výro^by ^am^o^^U-tydrox^^hytoox^et^etox^met^l^^purinu

Směs ^{0,844 g} (l,⁸⁸ mmo¹) ²-amⁱno^-9-[(^2-benzo^y^ox^y-l^-benzo^ylox^ymet^yletox^y)net^yl]^-9Hmístnosti 30 minut.

-purinu a 100 ml 40% vodného roztoku metylaminu se míchá za teploty

Směs se odpaří v tenké vrstvě na žlutý olej, který se potom ' promyje vodou. Vodná vrstva se poté dvakrát extrahuje netylenchloridem. Vodná. vrstva obsahující odpaří v tenké vrstvě na světle žlutý olej. Rekrystalizace oleje v horkém acetonitrilu ^pos^kytne tⁱtuln^í sbuČeiúnu jato anal^ytic^{ky č}istou ^pevnou látto barv^y stanovi-ny. Te^plo^ta ^tání ^činí ¹⁴⁸ produkt, se následně až 151 °C.

Pří ^k 1 a a

Způsob výroby ⁹-(2-acetoxyetox^ymetyl)-2-amino-9H-purinu

Směs 0,82 g (3,92 mmol)

9-(2-h^ydrox^yetoxymetyl)-2-amino-9H-purinu, 48 mg (0,392 mmol) ⁴-dinet^ylaninopyridinu a 0,75 ml (7,84 mmol) anhydridu kyseliny octové v 18 ml suchého dinet^ylfornanidu se míchá za teploty místnosti po dobu dvou dnů.

Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku a odparek rozpustí v etylacetátu a absorbuje na silikagelu. Rozpouštědlo se odstraní odpařením na tenké vrstvě a odpařený prášek přenese na sloupec připravený pro mžikovou chromatografií. Eluování 5% metanolem v dichlormetanu poskytne 1,0 g pemikryptalíckého oleje, který po rekrystalizaci ze směsi benzenu poskytne ana^lytⁱc^{ky č}istý 9-(2-acetoxyetox^ymet^yl)-²-amⁱno^-9H-purin o ^te^plot^ě tání ^llř až ^1Í8 °C.

Způ^sob ^{výroby 2}-aimⁱno^-9-[(²-acetox^y-l-acetox^ymet^yl^et^oxy)^met^yl]-9^H^-^purinu

Směs 0,45 ^g (1,88 rnrnol) 2-amino-9-f(2-hydroxy-l-hydroxymetyletoxy)metyl]-9H-purinu, 1,15 ^{g (}11,^{30 mmol)} a^nhyd^ridu tyseUny octov^é a 23 m^g (0Д88 rnrnol) 4-di^metyla^mi^nopyrid^inuv 10 ml suchého dimetylformamidu se míchá za teploty místnosti 18 hodin. Roztok se odpaří za ^{sníženého tlaku} a o^dp^{arek roz}p^{ustí v} metanol a ^předabsorbuj^e na. ^silik^agel^u.

Rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku a prášek přenese na slopec připravený mžikovou chromatografii. Eluování 10% metanolem v dichlormetanu poskytne po odpaření pro požadovaný produkt. Rekrystalizace ze směsi etylacetátu a hexanu poskytne analyticky čistý ^-amino-9-^f(²-acetoxy^-l-acetoxymetyletoxy)metyl]^-9H^-purin.

íla

Způsob výroby 9-(2-acetoxyetylthiometyl)-2-amino-9H-purinu

Do 100 ml baňky, opatřené magnetickou míchací tyčinkou a kalciumchloridovou sušicí trubičkou se vnese 1,0 g (4,4 mmol) 2-amino-9-(2-hydroxyetylthiometyl)-9H-purinu, 0,054 g (0,44 mmol) 4-dimetylaminopyridinu, 0,9 ml (8,8 mmol) anhydridu kyseliny octové a 20 ml suchého dimetylformamidu. Roztok se míchá 24 . hodin za teploty místnosti a poté se reakce přeruší 5 ml metanolu. Roztok se odpaří za sníženého tlaku při teplotě lázně ⁴⁰ °C a ta^kto získaný hn^ědý o^lej se chromáto^gra^fuje sloupce 1,5% metanolem v etylacetátu poskytne žlutý žluté krystaly se rozpustí v roztoku 25% metanolu v G-60. Metanol se odpaří z toluenového roztoku, Čímž krystalů.

m^žikovou chroma^to^gra^fií. E^luov^án^íolej, který stáním krystaluje. Světle toluenu a zpracují s 0,05 g Darco se dosáhne vysrážení světležlutých

Produkt se su^{ší 16} hodin ^při

120,5 °<

tání 119 až

C.

te^plot^ě ⁷⁸ °C za vzni^ku titu^ln^í sloučenⁱn^y o te^plotě

Analýza pro ^C10^H13^N5^O2^S: vypočteno: nalezeno:

44,93 %

44,97 %

41,9 % H

4,96 % H

215,2%

26,17

N,

N.

¹H NMR v

J = 6,36 % Hz),

DMSO₆

2,89 (2Hz J .

8, 59 (1HS) . 8^% (1SS) % . = 6,36 Hz), 1,99 (3Hs).

6,22 (2H široký sin^glet), 5^,26 (2Hs), 4^,15 (2Ht

Příklad

Způsob výroby2-amino-9-(2-benzoyloxyetylthiometyl)-9H-purinu

Pětilitrová trojhrdlá baňka se opatří motorkem ke vzduchovému míchání, skleněnou míchací tyčinkou s teflonovou lopatkou a zařízením pro vyčerpání vzduchu a naplnění baňky bud plynným dusíkem nebo vodíkem. Baňka se naplní 7,0 g (0,019 mol) 2-amino-9-(2-benzoyloxy etylthiometyl)-6-chlor-9H-purinu, 14,0 g hydroxidu palladnatého na uhlí, 12,0 ml (0,163 mol) trietylaminu, 75,0 ml vody a 3,0 litry metanolu. Baňka se potom uzavře a vyčerpá vzduch při použití vodní vývěvy, naplní plynným dusíkem, opět vyčerpá a tento postup se opakuje třikrát. Baňka se vyčerpá, naplní plynným vodíkem, vyčerpá a znova naplní plynným vodíkem.

Potom se zapne míchací motorek a reakční směs se míchá pod vodíkem čtyři dny při teplotě místnosti

Roztok se přefiltruje nálevkou ze slinutého skla a katalyzátor promyje 800 ml metanolu. Metanolový roztok se odpaří za sníženého tlaku za vzniku 6,0 g světle žluté pevné látky. Pevná látka se absorbuje na 18,0 g silikagelu 60 a tato předabsorbována fáze přenese na hlavu kolony naplněné silikagelem 60.

Promytí sloupce mžikovým postupem při použití 5% metanolu v etylacetátu poskytne bílou pevnou látku, která se rekrystalizuje ze směsi etylacetátu a hexanu. Produkt se su^{ší př}i te^plot^{ě 7}8 °C za tla^ku ¹³³ Pa na b^ílé vloč^ky o teplot t^án^í l²⁰ a^{ž 1}2¹ °C.

¹H NMR v DMSO d, 8,60 (1H, s), 8,19 (1H, s), 8,0 až 7,5 (5H, m), 6,55 (2H, s) 5,32» (2H, s), 4,52 (2H, t), 3,06 (2H, t).

Analýza:

vypočteno: · 54,69 · % C 4,59 % H 21,26 % N, nalezeno: 54,68 % C 4,64 % H 21,24 % N.

2-amino-9-(2-h^ydroxyet^ylthiomet^yl)-9H-purin se získá kontinuálním promýváním kolony popsané výše.

Příklad 8

Z^působ výrob^y /2-L(⁽--mino-9H-purin-9-^yl)metox^yletyl/^piva^látu

Směs ^{1,92 g} (^9,15 romo^l) ²-[(^2-amⁱno^-9H-^purⁱn-⁹-yl)me^toxyJe^tanolu a ²⁹ m^l suc^hého dimetylformamídu se po ochlazení na teplotu místnosti smíchá s 2,2ml suchého pyridinu, 0,34 g '4-diemt^ylaminop^yridínu a 5,6 ml anhydrídu kyseliny pivalové.·Roztok se míchá za teploty místnosti 18'hodin, mžikově odpaří a čistí na sloupci silikagelu. Sloupec se postupně eluuje 20 % a potom 50 % acetonem v éteru a nakonec čistým acetonem, · přičemž poslední dva eluáty se odpaří na 2,25 g požadovaného produktu, který se rekrystaluje ze směsi. ^benzenu a texanu. Zís^ká se ^{1,72 g (}64 %^{) /2}-í⁽2-amino-⁹H-purⁱn^-9-yl)me^tox^y]e^tyl/pⁱva^lá^tu o te^plot^ě tání ¹13^,5 a^ž Ш °C. ¹H N^MR s^pe^ktrum je shodn^é s kafovanou st^ru^kturou.

Příklad ⁹ Z^působ výrob^y /2-^£(2-amino-⁹H^-purin-9-^ylImetox^ et^yl/hexano^átu

Sm^ěs 3,0 ^g (14 mmol) 2-^[(2-arnino-^-9-ppuin-⁹-^yl)rne^xý] e^tano^lu a ⁴⁰ m¹ suchého dwetylformamidu se míchá s 6,5 ml (28 mmol) anhydrídu kyseliny hexanové, 1,8 ml (22,26 mmol) pyridinu a 1,5 g (12 mmol) dimet^ylamioopyridiou a potom se míchá pod dusíkem za teploty místnosti takřka ⁷ hodin. Roztok se promyje vodou a produkt extrahuje z vodného roztoku etylacetátem. Etylacetátová vrstva se suší síranem hořečnatým, potom filtruje a odpaří, aby se získala málo viskozní* kapalina. Ta se rozpustí v etylacetátu a přidává se pentan, dokud se objevuje zákal. Jako bílá pevná látka o hmotností 3,6 g (11,71 mmol) se ve výtěžku 84 % z^íská analytňck^{y či}stý ^/2-[2-amⁱno-9H-^purⁿn-9-^yl⁾metox^y2 etynhexanoáit, který m^{á t}e^plo^tu ^tání ¹⁰⁵ a^{ž 107} °C. ^{1 H NMR} s^pe^ktrum je shodné s ^poža^dovanou s^utourou.

Příklad 10

Z^působ výrob^y /3-[(2-ch^lor^-9H-purⁱn^-9-^yl)me^t-x^y] ^prop^yl/ace^tátu

Směs 0,68 g (8,3 mmol) octanu sodného ve 2 ml vody, 50 ml za tlaku vodíku 34 kPa a měří se spotřebovaný vodík. K ^pře^dk-n^denz-vaoé směsi se přidá 1,0 g (3,0 mmol) 9-(3--acetox^ypro^pox^ymetyl)-2,6-dichl-r^purinu ve 30 ml absolutního etanolu. Reakční směs se třepe za teploty místnosti za počátečního tlaku vodíku 17 kPa 84 minuty.

Reakční směs se> vyjme z přístroje, filtruje přes vrstvu Celitu a filtrát se odpaří za sníženého tlaku na bílou pevnou látku. Tato pevná látka se extrahuje vroucím acetonem a acetonové extrakty se odpaří a čistí na sloupci silikagelu, eluují zpočátku dichlormetanem a potom směsí s postupně zvyšovaným podílem éteru v dichlormetanu, 100% éterem a nakonec acetonem. Metylenchloridové eluáty a eluáty s obsahem 10 až 20 % etanolu v metylenchloridu poskytnou 0,2 g výchozího materiálu a eluáty s obsahem 30 % a více etanolu v metylenchloridu poskytnou po odpaření odparek, který se rekrystaluje ze směsi benzenu a hexanu. Získá se 245 mg titulní sloučeniny, jako analyticky čistého materiálu, o teplotě tání 79 až 81 ^,OC. Vý^těžek ³⁶ % je vz^ta^žen na množství redukovaném výc^hoz^ího materiálu.

Příklad 11

Způsob výroby /2--^(2-amino^H-purin^-ylJmetox}] etyl/hydrogensukcinátu

Směs 0,95 g (4,5 mmol) ²-amino-9-(2-hydroxyetoxymetyl)purinu a suchého dimetylformamidu, 55 mg (0,45 mmol) 4-dimetylaminpyridinu a 0,9 g (9,0 mmol) anhydridu kyseliny jantarové se míchá za teploty místnosti 4 dny. Čirý roztok se odpaří za sníženého tlaku a výsledný odpařený olej se trituruje s etylacetátem, rekrystaluje z horkého metanolu, absorbuje na silikagelu a podle Sloupec se eluuje 20% nolu. Získá se o te^plot^ě t^ání odpařování přidává na sloupec připravený pro mžikovou chromatografii. metanolem v dichlormetanu a odpařené eluáty se rekrystalují z meta(23 %) titulní sloučeniny, jako analytický čistého materiálu (semihydrátu) l²³ °C. 'h N^mr a ^UV s^pe^ktra jsou s^ho^dn^é s ^přisouzenou s^utourou.

320 mg

120 až

Příklad

Z^půso^b výro^by /3-& 2-az ido—9 ^^^-^urⁱn-⁹-^yl)me^toxy]^prQ^pyl/ace^tátu

K refluxované směsⁱ Ш m^g (0^,35 mmol) ^/3- ^f(22-hlor-9H-purⁱn-⁹-^yl⁾metox^y] ^pro^pyl/acetátu v 10 ml směsi etanolu a vody v objemovém poměru 1:1 se přidá najednou 23 mg (0,36 mmol) azidu sodného. Směs se refluxuje 4 hodiny, odpaří se vakuu a trituruje vodou. ' Odparek se rekrystaluje z etanolu na titulní sloučeninu.

Příklad

Způsob výroby 2-amino-9- f(³-h^ydrox^ypropoxy)mety_f|-9H-purinu

Směs 0^,8 g (2,75 mmol) /3~f(²-azido-⁹H-^purin-⁹-yl)metoxyJ ^pro^pyl/acetátu a ^{0,4 g 5}% palladia na aktivním uhlí ve 300 ml metanolu se třepe v Parrově hydrogenačním přístroji za počátečního tlaku 34 kPa po dobu 18 hodin za teploty místnosti. Směs se filtruje přes vrstvu Celitu a použitá vrstva se promyje dalším metanolem. Spojené filtráty a promývací kapaliny se zahřívají na parní lázni ve 40 ml 40% vodného metylaminu po dobu 30 minut a potom se odpaří za sníženého tlaku. Reakrystalizací odparku z etanolu se získá titulní sloučenina ¹H NMR a UV spektrum jsou shodné s očekávanou strukturou.

Příkl ad 14

a) Způsob výroby 2-amino-9- [(2-benzyloxyetox^y) metylJ-6-chlor-9H-purinu

Směs

5,0 g (16,6 mmol) 2-amino-6-chlorpurinu, 4,07 g uhličitanu draselného, 4,66 g (23,2 mmol) 2-benzyloxyetoxymetylchloridu a 100 ml suchého dimetylformamidu se míchá za teploty místnosti 7 dní. Reakční směs se filtruje, pevná ^látka se promyje éterem a spojené filtráty a promývací kapaliny se odpaří za sníženého tlaku. Zbývající olej se čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu a požadovaný isomer 9 se eluuje 10% metanolem v dichlormetanu. Frakce se monitorují chromatografií na tenké vrstvě, spojí se a odpaří, aby se získala bílá pevná látka, která se rekrystaluje ze směsi benzenů a hexanu na titulní sloučeninu NMR spektrum je shodné s očekávanou strukturou.

b) Způsob výroby ²-amino-l,9-dihydro-⁹- ^2-benzyloxyetoxy)metyl)-⁶H-purin-⁶-thionu

Směs 1,2^{2 g} (3,66 mmoU Zaláno-⁹- Q²—^ennz^yl-oxyetoxy^b6bchlor^b9Hb^purinu, ⁴⁰ m^{o i}so^pro^pano^lu a 0,²8 ^{g thi}omoěovⁱn^y sušnné ^{1 h}o^dinu za ^tn^p0o^{ty 10}O °C, sn rn^f0uxujn na parní lázni 1 1/2 hodiny. Rnakční směs sn odpaří za znížnného tlaku, triturujn vodou a rnkrystalujn z ntanolu na titulní sloučeninu.

c) Z^půsotH výrofcjy ²bamⁱno~⁹b Q^bbnzyloxyntoxy)matiy^-Í^Hbpurinu

Sm^ěs 0^,79 ^g (2,38 mmol) 2bamino-l^,9bdⁱh^ydrob9b Qj-benzYlox^tox^rnety^ b5Hb^purⁱnb6b bthionu, 4 g Rannyova niklu, 100 ml vody, 3 ml koncnntrovaného hydroxidu amonného a 20 ml ntanolu sn -rnfluxujn za míchání 18 hodin. Směs sn filtrujn a zachycnný nikl nxtrahujn horkým ntanolnm. Spojnný filtrát a ntanolové nxtrakty sn odpaří za snížnného tlaku a odparnk mkrystulujn z isopropanolu na titulní sloučnninu. Elnmnntární analýza a ¹H NMR spnktrum jsou shodné s přisuzovanou strukturou.

PŘEDMĚT VYNALEZU

Claims

1. Způsob výroby 2baminob9b(hydroxyntoxymety0)^purinových dnrivátů obncného vzorcn I ch₂xchch₂oh kdn

X přndstavujn atom síry nnbo atom kyslíku, a

R znamnná atom vodíku nnbo hydroxymntylovou skupinu, a jnjich fyziologicky přijatnlných solí a nstnrů u jiných sloučnnin nnž sloučnnin obncného vzorcn I, kdn X znamnná atom kyslíku a R přndstavujn atom vodíku, vyznačující sn tím, žn sn sloučnnina obncného vzorcn II (II) kdn

R má výše uvndnný význam,

M představuje atom halogen, a

X má výše uvndnný význam a

G znamená aminoskupinu, nnbo sůl nnbo nstnr této sloučnniny podrobí katalytické hydrognnaci a Unb0i Hvýslndným produktnm nstnr sloučnniny obncného vzorcn I, tnnto nstnr sn popřípadě hydrolýzujn na základní sloučnninu obncného vzorcn I nnbo зв získaný produkt přnvndn na fyziologicky přijatelnou adiční sůl s kyselinou nebo na rozdílný fyziologicky . přijatelný ester této sloučeniny.

2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se vychází ze sloučeniny obecného vzorce II, kde M znamená atom halogenu a ostatní symboly mají výše uvedený význam, a tato sloučenina se podrobí hydrogenaci v přítomnosti palladia jako katalyzátoru.

3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako výchozí látky použije sloučeniny 2 obecného vzorce II, kde X, M a G mají význam uvedený v bodě 1 a R znamená atom vodíku, nebo jejího esteru nebo soli.