CS196053B1 - Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 - Google Patents
Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 Download PDFInfo
- Publication number
- CS196053B1 CS196053B1 CS619777A CS619777A CS196053B1 CS 196053 B1 CS196053 B1 CS 196053B1 CS 619777 A CS619777 A CS 619777A CS 619777 A CS619777 A CS 619777A CS 196053 B1 CS196053 B1 CS 196053B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- corynebacterium glutamicum
- microorganism
- lysine
- ccm
- hours
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 7
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 title claims description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical class NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 20
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 17
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 claims description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 claims description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 claims description 2
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 3
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N L-thialysine Chemical compound NCCSC[C@H](N)C(O)=O GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 2
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 2
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 2
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 2
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 1
- 101100351256 Caenorhabditis elegans ccm-3 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002756 Erythrina berteroana Nutrition 0.000 description 1
- 244000088811 Erythrina rubrinervia Species 0.000 description 1
- 235000002753 Erythrina rubrinervia Nutrition 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000284708 Sarcophaga alpha Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- PPCXFTKZPBHXIW-UHFFFAOYSA-N ethyl ethanesulfonate Chemical compound CCOS(=O)(=O)CC PPCXFTKZPBHXIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 ethyl methanesulfonyl Chemical group 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález 8týká způsobu šlechtění mikroorganismu .Cooynebacterium glutamicum a kmene mikroorganismu Corynebacterium glutaoicum CCM 3 . 287 , produkujícího L-lysio, rezistentního k analogu lysinu a dependentního na ho^ossr^in.
Do roku 1970 byly nejěaateji používanými mutantami při fermentační výrobě lysinu mutanty auKoorooni, především muuanty dependentní na homoseein. Sáno a Shiio /J. Gen, Appl. Míccooio1. 16, 373, 1970/ popsali mutanty druhu Brevibacteríum flavum, které v přítoonooti tirného analogu lysinu S-/2-amc^ost^lil/-L·-cysteί^ni /AEC/ a threoni.nu rostly, zatímco výchozí prststssfoí kmen byl inhibován. Tyto rezistentní muuanty /AECr-muuanty/ hromadily v médiu lysin v mnooství okolo 32 g/1.
Schopnost rezistentních muuant hrommcl^ vysoká mnDoství lysinu není specifická jen pro výše uvedený druh, ale byla . zaznamenána i u dalších druhů známých jako potenciální producenti lysinu. V případě tohoto druhu je rezistence k S-/2-aminosjhyl/-L-cystelou většinou kombinována ještě s auxotrofií. Z kmenů s touto chaaakUeristUkoi lze jmenovat například Corynebacterium glutaoicuo ATCC 21 526 /AECr, Homoosr“, Leu“, produkce 32,5 . g/litr/,Cooynebacteríuo glutamicum ATCC 21 543 /AECr, Homossr, Leu“, produkce 32,0 g/l7 a kmeny uvedené v NSR pat. spise č. 2 321 461, vyznaačjící se kromě rezistence k AEC také dependencí na aminookys líny /serin, ptoIío, l^cio, alaoio/, vitaminy /viaaoin Bj 2/ a komponenty nukleových kyselin /guanini,.které hromadí v médiu 30 až 40 g/1 lysinu.
Pro ekonomickou průmyslovou feroentačoí výrobu lysinu jsou ovšem uvedená mmoství nízká. Byla proto hledána mošnoot, jak získat kmen, popřípadě ouuantu, s maximální produkcí.lysinu v přijatelné době, bez mimořádných nároků oa základní složky oód.ia a jejich, onošssví.
Produkcí lysinu převyšuje dosud známé zmíněné kmeny nový kmen Cooynebocteríum glutomi.cum, uložený v československé sbírce mкroorgao:tmů Uniireesity J. E. Purkyoě v Brně, třída Obránců mru 10, pod označením CCM 3 287, který je předmětem vynálezu.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob šlechtění m.krsssgaoί.mu Corynebacterium glutamicum, ktei^^^o se nový kmen získává a jehož podjata spočívá v tom, že se oa kulturu výchozího protofiího mhoorgaoimu působí roztokem0,05 M ethyloethansulfooátu po dobu 18 hodin, . načež se izolují .zds-kané muuanty, vyrostlé po eysčkování suspenze· po působení m^uageou, oa minimálním médiu s přísadou 10 og/ol S-^-aoinoe thy1/-L- <
-cysteinu . a 0,001 og/ol L-hoDoosriou. S výhodou se používá 0,05 M roztoku .ethyliaethansulfonátu ve fosfáovvéo pufru s hodnotou PH 7,2.
Hlavní výhodou nového.kmene podle vynálezu je poddtatně zvýšená produkce lysinu, podmíněna jednak rezistencí oa analog lysinu, jednak dependencí oa ho^osno. Zvýšená produkce je patrná při dvoustupňové ^u^vací tohoto kmene v produkčním oédiu se sacharosou, kyselým hydrolyzáteo arašídové kukuřičným výluhem a ойогйпОoi solemi ve fermeotačním tanku, při vhodném míchání a vzdušněni, při stáléo udržo196053
Λ
96053 vání pH v rozmezí 6,8 až 7,2 pomocí čpavku a za teploty 29 °C. Za uvedených podm.nek se po 96 hodinách kultivace dosáhne produkce lysinu kolem 60 g/1 média.
Nový kmen Cooynebacterium glutamicum CCM 3 287 je charakterizován následujícími moofologicko-kuutivačnimi a fyziologikkými vlastnostmi: Grampozittvni, nepohyHivé s nespoorlující kokky až krátké tyčinky, velikosti 1,6 x 1,9 až 3,5 n^i, s metachromatickými granuly, vyskkyuuicí se jednoolivě, v párech i v nepravidelných shlucích.
Na masopeptonovém agaru tvoří okrouhlé, hladké, lesklé, krémově lilé kolonie, s rovnými okraji.
Na masopeptonovém šikmém agaru vytváří intenzívní lilý nárůst po celém povrchu agaru, k pigmennaci nedot^l^i^i^í.
Při růstu tohoto organismu v lujonu lze zaznam^i^í^t zákal a sedímenn, llanka se netvoří.
Na krevním agaru tvoří kulaté, hladké, šedé kolonie, s rovnými lkrají, nnhnm)lyzuj ící.
Fyziologické vlastnosti:
Optimální teplota: 27 až 32 °C. Optimm^! pH: 7,0 až 7,2
Termplrnisuence: 56 °C 1 hod., °C 10 min.
Aerobní organismus.
Žeeatinu nezte^^je. Lakmusové mléko odbarvuue, ale nesráži. Glukosu, f^kt^u a sacharosu zkvašuje. škrol hydrolyzuje jen slalě.
Celulosu nerozkládá. Duuičnany neredukuje. Sirovodík netvoří.
Indol netvoří.
Test na katalázu: p^z^ittivní.
Test na methylenovou modř: negativní. Vooin-Prosrauerův test: negativní.
K růstu vyžaduje z vitamínů li^in a z aminokryenin hш^olee:ín.
Při způsolu šlechtění podle vynálezu se zpravidla postupuje tak, že se výchozí trltltrlfní mkroorganísmus Cooynebacterium glutamicum nejprve ruUtiolje 24 hodin v kompletním méďu, potom se luněčná suspenze promyje fosfálovýp pufrem 8 hodnotou pH 7,2 a vystaví půsolení mutagenu, v tomto případě 0,05 M roztoku ethylmmehannsufonátu, nejlépe opět v pufru s hodnotou pH 7,2. Po této operaci se suspenze promytá destilovanou vodou kultivuje na minimálním médiu s přísadou S-/2-apinolnhylZ-L-cysteinu a L-holpplseinu. ШопПп, které vyrostou, se vyočkuuí na šikmé masopeptonové agary a testují na stupeň rniisl^¢^icn na analog, na dependenci na hω^olenin a na schopnost produkovat lysin.
РоИгоЬпс»^! vynálezu vyplývaáí z následujíiích příkladů provedeni. .
Příklad 1 /roztok solí je roztok 0,5 g heptahydrátu síranu železného ve 100 ml vody/.
Inkuluje se na reciproké třepačce /počet kyvů 91/min, délka kyvu 9 cm/ při 28 °C 24 hodin. Buněčná suspenze se potom promyje fosfáoovým pufrem /pH 7,2/ a po promyyi se vystaví 18 hodin půsolení 0,05 M ethyl-methanSilfliáUl. Potom se luněčná suspenze promuje 2x sterilní destilovailu vodou, zředí a zředěnou suspenzí' se očkuuí plotny s tímto médiem /v g/:
glukosa. '1,0 cítronan sodný0,4 prim, fosforečnan draselný7 0) sek. fosforečnan draselný2^ síran amonný1 »0 síran hořečnatý kryst.00 roztok solí /j ako výše/1 ml roztok 0,02 g ve 100 ml deešil, vody 0,02 g agar25,0 destikvaná voda 1 000 ml
Médium se doplní 10 mg/ml S-/2-aminoethyly-L-cysteinu a 0,001 mg/ml L-homooeeinu. Plotny se inkubuui při 28 °C 120 hodin a kolω^in, které se po ' této době objeví na povrchu ploten, se vyočkuuí na šikmé masopepuonooé agary. Izoláty vyrostlé na agarech se testují na stupeň rezistence na analog, depen^^ntci na hl^olen:ín ' a schopnost produkovat lysin. '
PPíklad 2
K^Hturou kmene Corynebacteríum gl-utamicum CCM 3 287 , 24 hodin starn,. se očkuje 60 ml íiokulačníhl módia v 750 ml Erlenmayerově laňce tohoto složení /v g/:
sacharosa 25,0 kukuřičný výluh /65 Z sušiny/ 30,0 voda 1 000 ml pH 7,0; sterilizace při 120 °C 30 min. Zaočkovaná půda se inkuluje na reciproké třepačce /91 kyvů/min, délka kyvu 9 cm/ při 28 °C 18 až 24 hodin. Naaostlou kulturou v ímlství 50 ml se očkuje 800 ml produkčního média ve dvou li tmém feroniUačnío tanku, tohoto složení /v g/:
sacharosa180,0 kyselý hydrolyzát arašídové mouky 300,0ml kukuřičný výluh /65 % sušiny/10,0 primární fosforečnan draselný2,0 síran hořečnatý kryst.0,3 uhličitan vápenatý20,0 síran železnatý kryst.0^2 síran mannanatý kryst.0 li^in0,004 sójový olej1 ml voda 1 000 ml pH7,.0
Protltrofníp mikroorganipmem Cooynnelaterium glutamicum se naočkuje 60 ml módia v 750 ml Erlenmayerově laňce, tohoto složení /v g/:
| glukosa | 0,5 |
| hydrolyzát kaseinu | 10,0 |
| výluh z droždí | 5,0 |
| prim, fosforečnan draselný | 3,0 |
| sek. fosforečnan draselný | 1 ,o |
| roztok sHí | 1 ml |
| řasový agar | 25,0 |
| voda | 1 000 |
Sterilizace 3x po 30 min při 121,5 kPa. Vzduuněni 0,8 1/m.n, míchání 800 (эЬг./oíí, teplota 29 °C. OOpěňování lěhem kultivace sójovým olejem. pH se upravuje v šnetílldinových intervalech čpavkovou vodou na 7 ,0. Během kultivace se přidává roztok sacharlsy, a to 50 ml 70Z roztoku ve 30., 42., 54., 66. a 74. hodině kultivace. Doba kultivace 96 hodin. OOsah lysinu se stanovuje oonn>lotrtcky s použitím dekarloxylásy lysinu. Produkce lysinu po 96 hodinách kultivace je 61,5 gramůM.
Claims (3)
- P ft E D M Ě Т1. Způsob šlechtění mikroorganismu Corynebacterium glutamicum, vyznačují se tím,že se na kulturu výchozního prototrofního mikroorganismu působí 0,05 M roztokem ethylmethansulfonátu po dobu 18 hodin, načež se izolují získané mutanty, vyrostlé po vyočkování suspenze po působeni mutagenu na minimálním mediu s přísadou 10 mg/ml S-/2-aminoethyl/-L-cysteinu a 0,001 mg/ml L-homoser inu.VYNÁLEZU
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se působí 0,05 M roztokem ethylmethansulfona tu ve fosfátovém pufru s hodnotou pH 7^2«
- 3. Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3287, produkující lysin, rezistentní к analogu lysinu a dependentní na homoserin, získaný způsobem podle bodu 1
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS619777A CS196053B1 (en) | 1977-09-24 | 1977-09-24 | Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 |
| HU78SO1232A HU175838B (hu) | 1977-09-24 | 1978-09-22 | Sposob dlja selekcii stoka mikroorganizma corynebacterium glutami-cum |
| DD20804178A DD140056A1 (de) | 1977-09-24 | 1978-09-22 | Verfahren zur herstellung von lysin mit hilfe von mikroorganismen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS619777A CS196053B1 (en) | 1977-09-24 | 1977-09-24 | Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS196053B1 true CS196053B1 (en) | 1980-02-29 |
Family
ID=5408447
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS619777A CS196053B1 (en) | 1977-09-24 | 1977-09-24 | Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS196053B1 (cs) |
| DD (1) | DD140056A1 (cs) |
| HU (1) | HU175838B (cs) |
-
1977
- 1977-09-24 CS CS619777A patent/CS196053B1/cs unknown
-
1978
- 1978-09-22 DD DD20804178A patent/DD140056A1/de not_active IP Right Cessation
- 1978-09-22 HU HU78SO1232A patent/HU175838B/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU175838B (hu) | 1980-10-28 |
| DD140056A1 (de) | 1980-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR960016135B1 (ko) | L-이소로이신(l-isoleucine)의 제조법 | |
| SU1190992A3 (ru) | Способ получени 2,5-дикето- @ -глюконовой кислоты | |
| KR100198039B1 (ko) | 발효에 의한 l-글루탐산의 제조방법 | |
| US4652527A (en) | Process for culturing methylophilus methylotrophus | |
| EP0595163B1 (en) | Process for producing L-isoleucine | |
| CS196053B1 (en) | Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 | |
| HU202590B (en) | Process for producing l-treonine | |
| AU690633B2 (en) | Modification of filamentous microorganisms | |
| JPH01277495A (ja) | Ｌ―チロシン及びｌ―フエニルアラニンの２，５―ジヒドロキシフエニル酢酸への生物学的変換法 | |
| US3087863A (en) | Amino acid synthesis | |
| Hagino et al. | L-Lysine production by mutants of Bacillus licheniformis | |
| Sen et al. | Extracellular lysine production from hydrocarbons by Arthrobacter globiformis | |
| US3293141A (en) | Fermentation process for producing l-tryptophan | |
| KR100317901B1 (ko) | 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법 | |
| CS196052B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3286 | |
| Figueiredo et al. | L-malic acid production using immobilized Saccharomyces cerevisiae | |
| CS240712B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Brevibacterium flavum CCM 3736, produkující lysin | |
| HUT61598A (en) | Process for producing l-threonine | |
| KR0161147B1 (ko) | 오르니틴의 제조방법 | |
| KR920005749B1 (ko) | 신균주 코리네박테리움 글루타미쿰 mwex-46 및 이를 이용한 l-아르기닌의 제조방법 | |
| KR900007948B1 (ko) | 글루타민산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루타민산의 제조방법 | |
| CS250361B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3867 | |
| KR100317902B1 (ko) | 글루탐산을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 글루탐산의제조방법 | |
| CS199998B1 (cs) | Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 | |
| CS246669B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3800 |