CS199998B1 - Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 - Google Patents
Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 Download PDFInfo
- Publication number
- CS199998B1 CS199998B1 CS296378A CS296378A CS199998B1 CS 199998 B1 CS199998 B1 CS 199998B1 CS 296378 A CS296378 A CS 296378A CS 296378 A CS296378 A CS 296378A CS 199998 B1 CS199998 B1 CS 199998B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- lysine
- homoserine
- corynebacterium glutamicum
- strain
- ccm
- Prior art date
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 title 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical class NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 20
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 18
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 3
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 claims description 3
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical class [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000003588 threonines Chemical class 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- REKYPYSUBKSCAT-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxypentanoic acid Chemical compound CCC(O)CC(O)=O REKYPYSUBKSCAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FMHKPLXYWVCLME-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-valeric acid Chemical compound CC(O)CCC(O)=O FMHKPLXYWVCLME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 2
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 2
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 2
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N L-thialysine Chemical compound NCCSC[C@H](N)C(O)=O GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- LGVJIYCMHMKTPB-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxynorvaline Chemical compound CCC(O)C(N)C(O)=O LGVJIYCMHMKTPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABSTXSZPGHDTAF-UHFFFAOYSA-N 4-amino-pentanoic acid Chemical compound CC(N)CCC(O)=O ABSTXSZPGHDTAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- PPWHTZKZQNXVAE-UHFFFAOYSA-N Tetracaine hydrochloride Chemical compound Cl.CCCCNC1=CC=C(C(=O)OCCN(C)C)C=C1 PPWHTZKZQNXVAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009651 Voges-Proskauer test Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu Šlechtění mikroorganismu druhu Corynebacterium glutamioum a kmene Corynebacterium glutamioum CCM 3392, produkujícího lysin v mediu s ethanolem, resistentního k analogu lysinu a k analogu threoninu a dependentního na homoserin,
Nakamori a Shiio (Agr. Biol. Chem. 37,635*1973)* isolujíce producenty threoninu, získali mutanty druhu Brevibaoterlum flavum, resistentní k analogu lysinu* t.j. k S-/2-aminoethyl/-L-cysteinu a k analogu threoninu* t.j. ke kyselině oí-amino-/3-hydroxyvalerové* která kromě vyšších množství threoninu (10 aš 15 gA) hromadily v mediu také relativně vysoké množství lysinu (9 až 12 g/l). Z produoentů lysinu, sohopnýoh produkovat lysin v mediu s ethanolem jako hlavním zdrojem C, byly používány jednak mutanty auxotrofhí, dependentnf na homoserin* threonln a/nebo methionin a schopné hromadit v mediu s ethanolem maximálně 11 až
16*5 gA lysinu (FR pat. 5. 2 021 688), jednak mutanty současně resistentní k analogu lysinu a auxotrofhí na aminokyseliny* vitaminy nebo deriváty nukleovýoh kyselin, při čemž věak ethanol nebyl jediným zdrojem C (DE pat. 8. 2 321 461).
Při hi*>aánf vhodných produoentů lysinu v mediu s ethanolem jako hlavním zdrojem C byla ověřována možnost aplikace mutant reslstentníoh k analogu lysinu a k analogu threoninu. Ryla proto u mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3287* resistentního k S-/2-aminoethyl/—L-oysteinn, dependentního na homoserin a hxomadíoího v mediu se saoharosou relativně vysoká množství lysinu* indukovaná působením ethylmethansulfonátu resistence na kyselinu cL -amlno-/3-hydroxyvalerovou.
199 998
199 998
Produkcí lysinu v mediu s ethanolem převyšuje dosud známé výše zmíněné kmeny nový kmen Corynebacterium glutamioum, uložený v Československé sbíroe mikroorganismů University J. E. Purkyně v Brně, třída Obránoů míru 10, pod označením CCM 3392, který je předmětem vynálezu· Předmětem vynálezu je rovněž způeob ěleohtění mikroorganismu druhu Goxyaebaoterium glutamioum, kterým se nová mutanta získává a jehož podstata spočívá v tom, že se na kulturu výchozího organismu resistentního na analog lysinu a dependentního na homoserin působí roztokem 0,05 M ethylmethansulfonátu po dobu 18 hod., načež se isolují mutaaty vyrostlé ze suspenze po působení mutagenu vyočkováním na plotny s minimálním mediem doplněným 10 mg/ml kyseliny oí -amino-/3-hydrozyvalerové a 0,001 mg/ml L-homoserlnu. S výhodou se používá 0,05 M roztoku ethylmethansulfonátu ve fosfátovém pufru o pH 7,2.
Hlavní výhodou nového kmene podle vynálezu je relativně vysoká produkoe lysinu v mediu s ethanolem jako hlavním zdrojem C. Při dvoustupňové kultivaoi tohoto kmene v produkčním mediu s ootanem sodným, kyselým hydrolysátem arašídové mouky, kukuřičným výluhem a minerálními solemi, doplňovaným během kultivace ethanolovou směsí bylo po 96 hodinách kultivace dosaženo produkoe 20 až 25 g/1 lysinu. Předností tohoto kmene je i zvýšená geaetioká stabilita, podmíněná jednak resistenoí ke 2 analogům, jednak auzotrofií, která umožňuje použít s výhodou tento kmen při kontinuální fermentační přípravě lysinu, využívající přediností kontinuální kultlvaoe produkčního organismu.
Nový kmen Corynebaoterium glutamioum CCM 3392 je oharakterisován následujíoíml morfologioko-kultlvačníml a fyslologiokými vlastnostmit
Qrampositivní, nepohyblivé a nesporulujíoí kokky až krátké tyčinky, velikosti 1,6 x x 1,9 až 3,5 mp, s metaehromatiokými granuly, vyskytující se jednotlivě, v párech i v nepravidelných shlucích.
Na masopeptonovém agaru tvoří okrouhlé, hladké, lesklé, krémově bílé kolonie s rovnými okraji.
Na masopeptonovém šikmém agaru vytváří intensivní bílý nárůst po oelém povrohu agaru, k pigmentaci nedoohází.
Při růetu tohoto organismu v bujónu lze zaznamenat zákal a sediment, blanka ee netvoří.
Na krevním agaru tvoří kulaté, hladké, šedé kolonie, s rovnými okraji, nehemolysujíoí
Pyeiologioké vlastnosti:
Optimální teplota: 27 až 32 °C
Optimální pH: 7*0 až 7,2
Thermoresistenoe: 56 °C 1 hod., 80 °C 10 min.
Aerobní organismus želatinu neztekuouje.
Lakmusové mléko odbarvujo, ale nesráží.
Glukosu, fruktosu a saeharosu zkvašuje.
Škrob hydrolysuje jen slabě.
Celulosu nerozkládá.
Dusičnany neredukuje.
199 998
Sirovodík netvoří.
Indol netvoří.
Test na katelásut positivní
Test na methylenovou modři negativní
Voges-Proskauerův testi negativní
K růstu vyžaduje z vitaminů hiotin a z aminokyselin homoserin.
Při způsobu šlechtění podle vynálezu se zpravidla postupuje tak, že se výohozí organismus Corynebaoterium glutainioum CCM 3287, resistentní k S-/2-aminoethyl/-L-cysteinu a dependentní na homoserin, nejprve kultivuje 24 hodin v kompletním mediu, potom se buněčná suspense promyje fosfátovým pufrem o pH 7,2 a vystaví působení mutagenu, v tomto případě působení 0,05 M roztoku ethylmethaasulfonátu 18 hodin ve fosfátovém pufru o pH 7,2. Po proběhnutí inkubace se suspenzí promytou destilovanou vodou očkují plotny s minimálním mediem s 10 mg/ml <4 -amlno-/3 -hydroxyvalerové kyseliny a 0,001 mg/ral L-homoserinu. Kolonie, které na plotnáoh vyrostou, se očkují na šikmé masopeptonové agary. Vyrostlé isoláty se testují na stupeň resietenoe k S-/2-aminoethyl/-L-oysteinu a ke kyselině Λ -amine-fi -hydroxyvalerové, na dependenol na homoserin a na schopnost produkovat lysin v mediu s ethanolem jako hlavním zdrojem C.
Podrobnosti vynálezu vyplývají z následujících příkladů provedení.
Příklady provedení
Příklad 1
Mikroorganismem Corynebaoterium glutamloum CCM 3287 reeieteatním k S-/2-aminoethyl/-L-oysteinu a dependentním na L-homoeerin, se naočkuje 60 ml media v 750 ml Erlenmayerově baňoe náeledujíoího složení (v g)s
| glukosa | 0,5 |
| hydrolysát kaseinu | 10,0 |
| výluh z droždí | 5,0 |
| prim. fosforečnan draselný | 3,0 |
| sek. fosforečnan draselný | 1.0 |
| roztok solí | 1,0 ml |
| rasový agar | 25,0 |
| voda | 1000 nů |
(roztok solí je roztok 0,5 g heptahydrátu síranu železnatého a 0,5 g tetrahydrátu síranu manganatého ve 100 ml vody).
Zaočkovaná baňka se inkubuje na reoiproké třepačce (počet kyvů - 91/min., délka kyvu - 9 om) při 28 °C 24 hodin'· Buněčná suspense se potom promyje fosfátovým pufrem (pH a 7,2) a po promyti se vystaví 18 hodin působení 0,05 M roztoku ethylmethaasulfonátu. Potom se buněčná suspense promyje 2x sterilní, destilovanou vodou, zředí a zředěnou auspensí se očkují plotny β tímto mediem (v g)i glukosa 1,0
199 9B8 citran sodný 0,4 prim· fosforečnan draselný 7,0 sek. fosforečnan draselný 2,0 síran amonný 1,0 síran hořečnatý kryst. 0,1 rostok solí (jako výše) 1 na biotin 2 jug/ml agar 25,0 destilovaná voda 1000 ml
Medium se doplní 10 mg/ml kyseliny «6 -amino-/4 hydroxyvalerové a 0,001 mg/ml L-homoserinu. Plotny so lakubují při 28 ®C 120 hodin a kolonie, která se objeví na povrohu ploten, se očkují na Šikmá masopeptonová agary. Isoláty vyrostlá na agareoh se testují na stupeň resistenoe k S-/2-aminoethyl/-L-oysteinu a ks kyselině & -amino-/3 -hydroxyvalerové, na dependenci na L-homoserin a aa sohopnost produkovat lysin v mediu s ethanolem jako hlavním zdrojem C.
Příklad 2
Kulturou kmene Corynebacterium glutamioum CCM 3392 24 hodin starou, se očkuje 60 ml lnokulačního media v 500 oCL vaxnýoh baňkách následujícího složení (v g)i
| ootan sodný | 15,0 |
| saoharosa | 20,0 |
| kukuřičný výluh (60% suž.) | 30,0 |
| voda | 1000 m |
| pH | 7,0 |
Sterlllsaoe při 120 °C 30 min. Zaočkovaná baňky se inkuhují na rotační třepačoe (240 obr·/ /min·* výstředník - 2,5 om) po dobu 18 hodin při 29 °C. Narostlou kulturou se v množství 2 ml (10% obj.) očkují 500 ml varná baňky s 20 ml produkčního media následujícího složení (v g)»
| ootan sodný | 20,0 |
| kukuřičný výluh (60 % suž.) | 10,0 |
| kyselý hydrolysát arašídová | 150,0 aú |
| síran amonný | 10,0 |
| prim. fosforečnan amonný | 1.0 |
| síran hořečnatý kryst. | 0,1 |
| uhličitan vápenatý mletý | 30,0 |
| voda | 1000 nO. |
| PH | 7,0 |
Sterilisaoe při 120 °C 30 min. Zaočkovaná banky se inkuhují na rotační třepačoe (počet obrátek a výstředník - viz výše) při 29 °C po dobu 96 hodin. Po 6 až 8 hodináoh kultivaoe, kdy se spotřebuje aoetát a pH kultivační tekutiny dosáhne hodnot 7,8 až 8,0, se přidává do
199 998 baněk v ótihodinovýoh intervaleoh τ množství 0,5 až 0,7 ml ethanolová směs, dodávající nejen zdroj 0, ale současně i upravující pH kultivační tekutiny na hodnoty 6,8 až 7,0. Tato ethanolová směs ee eterilieuje filtrací přes filtr G5 (Jena-Glass) a má následující složeni»
| ethanol čistý | 60,0 ml |
| kyselina octová ledová | 10,0 ml |
| saoharosa | 6,6 g |
| voda | 100 ml |
Produkce lysinu v 96. hodině kultivace je 25 g/1.
Claims (3)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob šlechtění mikroorganismu druhu Corynebaoterium glutamieum, vyznačující se tlm, že se na kulturu výohozího mikroorganismu reslstentního k analogu lysinu a dependentního na homoserin působí 0,05 M roztokem ethylmethansulfonátu po dobu 16 až 20 hodin, načež se isolují získaná mutanty, vyrostlá po vyočkování suspense po působení mutagenu na minimálním mediu doplněném 10 mg/ml kyseliny & -amino- fi -hydroxyvalerová a 0,001 mg/ml L-homoserinu.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se působí 0,05 M roztokem ethylmethansulfonátu ve fosfátovém pufru o hodnotě pH 7,2,
- 3. Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamieum CCM 3392, produkujíeí lysin v mediu s ethanolem jako hlavním zdrojem C, resistentní k analogu lysinu a k analogu threoninu a dependentní na homoserin, získaný způsobem podle bodu 1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS296378A CS199998B1 (cs) | 1978-05-10 | 1978-05-10 | Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS296378A CS199998B1 (cs) | 1978-05-10 | 1978-05-10 | Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199998B1 true CS199998B1 (cs) | 1980-08-29 |
Family
ID=5368337
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS296378A CS199998B1 (cs) | 1978-05-10 | 1978-05-10 | Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199998B1 (cs) |
-
1978
- 1978-05-10 CS CS296378A patent/CS199998B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2077307C (en) | Process for producing l-threonine | |
| KR960016135B1 (ko) | L-이소로이신(l-isoleucine)의 제조법 | |
| WO2014200126A1 (ko) | Ｌ-이소루신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 ｌ-이소루신 제조방법 | |
| KR910002857B1 (ko) | 폴리-d-(-)-3-하이드록시부티르산의 제조방법 | |
| FR2661191A1 (fr) | Procede de production de l-lysine par fermantation et mutant pour la mise en óoeuvre du procede. | |
| CN109112122A (zh) | 一种酪氨酸酚裂解酶发酵过程中的诱导表达方法 | |
| Terracciano et al. | Enhancement of chemotaxis in Spirochaeta aurantia grown under conditions of nutrient limitation | |
| EP0595163B1 (en) | Process for producing L-isoleucine | |
| AU654488B2 (en) | Proteinaceous compositions from filamentous microorganisms, the branching of which is regulated by calcium ion concentration | |
| CS199998B1 (cs) | Způeob ěleohtění mikroorganismu Corynebacterium glutamioum a kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamioum CCM 3392 | |
| HU202590B (en) | Process for producing l-treonine | |
| AU690633B2 (en) | Modification of filamentous microorganisms | |
| KR920005749B1 (ko) | 신균주 코리네박테리움 글루타미쿰 mwex-46 및 이를 이용한 l-아르기닌의 제조방법 | |
| JP2001517429A (ja) | 繊毛虫（原生動物）の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質を生産する発酵法 | |
| CS240712B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Brevibacterium flavum CCM 3736, produkující lysin | |
| FI70592B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av uricase | |
| WO2000017379A2 (en) | An l-lysine-producing microorganism and a method for producing l-lysine using said microorganism | |
| CS202371B1 (cs) | Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 | |
| RU2099423C1 (ru) | Способ получения лимонной кислоты | |
| KR0142891B1 (ko) | 고농도 셀레니움 함유 효모 균주 및 이의 제조방법 | |
| CS196053B1 (en) | Process for improving microorganism corynebacterium glutamicum and microorganism strain corynebacterium glutamicum ccm 3287 | |
| JPH03143398A (ja) | イプシロン―ポリ―ｌ―リシンの製造方法 | |
| JPS58220692A (ja) | 発酵法ｌ−ロイシンの製造方法 | |
| CS196052B1 (cs) | Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3286 | |
| SU859441A1 (ru) | Способ получени лимонной кислоты |