CS202371B1 - Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 - Google Patents
Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 Download PDFInfo
- Publication number
- CS202371B1 CS202371B1 CS734578A CS734578A CS202371B1 CS 202371 B1 CS202371 B1 CS 202371B1 CS 734578 A CS734578 A CS 734578A CS 734578 A CS734578 A CS 734578A CS 202371 B1 CS202371 B1 CS 202371B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- corynebacterium glutamicum
- indole
- tryptophan
- medium
- microorganism
- Prior art date
Links
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 title claims description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 21
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 244000286779 Hansenula anomala Species 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 3
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 3
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 3
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 235000014683 Hansenula anomala Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 238000009651 Voges-Proskauer test Methods 0.000 description 1
- 241000319304 [Brevibacterium] flavum Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu šlechtění mikroorganismu Corynebacterium glutamicum a kmene mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3358, rezistentního k vyšším koncentracím indolu a produkujícího v mediu s vhodným zdrojem uhlíku, dusíku a minerálních živných solí, jež je během kultivace doplňováno indolem, relativně vysoká množství L-triptofanu.
Fermentačně lze tryptofan připravit buď aplikací vhodných kmenů kvasinek (kmeny druhu Hansenula anomala), izolovaných z přirozených materiálů a schopných přeměňovat metabolické prekurzory tryptofanu (kyselina anthranilová, Indol) na L-tryptofan (Enatsu se sp., J. Ferment. Technol. 41, 500, 1963] nebo použitím mutant bakterií (mutanty Escherichia coli, Brevibacterium flavum), rezistentních k analogům tryptofanu nebo k analogům tryptofanu a fenylalaninu, které v mediu s vhodným zdrojem uhlíku, dusíku a s minerálními živnými solemi hromadí přímo L-tryptofan (Lim-Mateles, Science 140, 388, 1963; Shiio se sp., Agr. Biol. Chem. 39, 627, 1975). Nicméně produkce zaznamenané jak při aplikaci kvasinek tak při aplikaci mutant bakterií jsou relativně nízké (3 až 6 g/litr J a tedy neperspektivní z hlediska fermentační přípravy tryptofanu v provozním měřítku. Byl proto hledán produkční organismus s relativně vysokou produkcí L-troptofanu, které by byío možno dosáhnout v poměrně krátké době.
Výší produkce tryptofanu převyšuje výše zmíněné a dosud známé produkční mikroorganismy nový kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum, uložený v Československé sbírce mikroorganismů University J. E. Purkyně v Brně, třída Obránců míru 10, pod označením CCM 3358, jenž je předmětem vynálezu.
Předmětem vynálezu je také způsob šlechtění mikroorganismu Corynebacterium glutamicum, jímž byl nový kmen získán a jehož podstata spočívá v tom, že se na kulturu výchozího prototrofního mikroorganismu působí 0,05 M roztokem ethylmethansulfonátu po dobu 18 hodin, načež se izolují získané mutanty vyrostlé po vyočkování suspenze po působení mutagenu na minimálním mediu s obsahem 500 ,ug/ml indolu.
Hlavní výhodou nového kmene podle vynálezu je podstatné zvýšení produkce tryptofanu, podmínění rezistencí na indol a z toho plynoucí zvýšená asimilace indolu. S tímto kmenem byl vypracován postup fermentační přípravy tryptofanu, ověřený v měřítku 5000-litrových fermentačních tanků, při němž bylo za aerobních podmínek při kultivaci v mediu s vhodnými zdroji uhlíku, dusíku a minerálních živných solí s doplňovaného v průběhu kultivace indolem, při udržování pH na neutrální hodnotě, po 54 hodinách trvání, dosaženo průměrné produkce L-tryptofanu 10 g/litr.
202 371
202 371
4
Nový kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 je charakterizován následujícími morfologickými, kultivačními a fyziologickými vlastnostmi: grampozitivní, nepohyblivé a nesporulující kokky až krátké tyčinky, velikosti 1,6 X 1,9 až 3,5 mm, s metachromatickými granuly, vyskytující se jednotlivě, v párech i nepravidelných shlucích. Na masopeptonovém agaru tvoří okrouhlé, hladké, lesklé, krémově bílé kolonie, s rovnými okraji. Na masopeptonovém šikmém agaru vytváří intenzivní bílý nárůst po celém povrchu agaru, k pigmentaci nedochází. Při růstu v bujónu lze zaznamenat zákal a sediment, blanka se netvoří. Na krevním agaru tvoří kulaté, hladké, šedé kolonie, s rovnými okraji, nehemolyzující.
Fyziologické vlastnosti:
Optimální teplota: 27 až 32 °C
Optimální pH: 7,0 až 7,2
Termorezistence: 56 °C 1 hod., 80 °C 10 min. Aerobní organismus Želatinu neztekucuje
Lakmusové mléko odbarvuje, ale nesráží Glukosu, fruktosu, sacharosu a maltosu zkvašuje
Škrob hydrolyzuje slabě
Celulózu nerozkládá ,
Dusičnany neredukuje
Sirovodík netvoří
Indol netvoří
Test na katalázu: positivní
Test na methylenovou modř: negativní Voges-Proskauerův test: negativní K růstu Vyžaduje biotin
Při způsobu šlechtění podle vynálezu se postupuje tak, že se výchozí prototrofní organismus Corynebacterium glutamicum kultivuje 24 hodin v kompletním mediu a narostlá buněčná suspenze — po promytí fosfátovým pufrem o pH 7,2 — se vystaví působení mutagénu, v tomto případě 0,05 M roztoku ethylmethahsulfonátu ve fosfátovém pufru (pH = 7,2). Suspenze po působení mutagénu se promyje destilovanou vodou; pr omytá a vhodně zředěná suspenze se očkuje na plotny s minimálním mediem obsahujícím 500 ^ug/ml indolu. Kolonie vyrostlé na plotnách se očkují na šikmé masopeptonové agary a vyrostlé izoláty se testují na stupeň rezistence na indol a na schopnost produkovat tryptofan.
Podrobnosti vynálezu vyplývají z následujících příkladů provedení.
Příklady provedení Příklad 1
Prototrofním organismem Corynebacterium glutamicum se očkuje 60 ml media v 750 ml Erlenmayerově baňce tohoto sloroztok solí 0,1 (% obj.) řašový agar 2,5 (roztok solí je roztok 0,5 g heptahydrátu síranu železnatého a 0,5 g tetrahydrátu síranu manganatého ve 100 ml vody).
Po zaočkování se kultura inkubuje na reciproké třepačce (počet kyvů 91 za min., délka kyvu 9 cm) 24 hodin při 28 °C. Buněčná suspenze se potom promyje fosfátovým pufrem (pH = 7,2) a po promytí se vystaví na dobu 18 hodin působení 0,05 M roztoku ethylmethansulfonátu ve fosfátovém pufru (pH = 7,2). Potom se buněčná suspenze promyje 2-krát sterilní destilovanou vodou a po vhodném zředění se použije k očkování ploten s minimálním mediem tohoto složení (v % hmotn.):
glukosa 0,1 citronan sodný 0,04 prim. fosforečnan draselný 0,7 sek. fosforečnan draselný 0,2 síran amonný 0,1 síran hořečnatý kryst. 0,01 roztok solí (jako výše] 0,1 (% obj.) biotin 0,002 agar 2,5
Medium se doplní 500 ,ug/ml indolu. Plotny še inkubují' 120 hodin při 28 °C a kolonie vyrostlé na plotnách se vyočkují na šikmé masopeptonové agary. Izoláty vyrostlé na agarech se testují na stupeň rezistence na indol a na schopnost produkovat tryptofan.
žení (v % hmotn.): glukosa 0,05 hydrolyzát kaseinu 1,0 výluh z droždí 0,5 prim. fosforečnan draselný 0,3 sek. fosforečnan draselný 0,1
Příklad 2
Inokulační medium, obsahující 2 % hmotn. sacharosy, 1,5 °/o hmotn. kukuřičného výluhu (65 % hmotn. sušiny], pH = 7,0, umístěné v 750 ml Erlenmayerově baňce, se očkuje 24 hodin starou kulturou kmene Corynebacterium glutamicum CCM 3358, vyrostlou na šikmém masopeptonovém agaru a inkubuje se na reciproké třepačce (počet kyvů 91 za min.J, délka kyvu 9 cm/24 hodin při 28 °C.
Vyrostlou kulturou se očkuje 10 litrů inokulačního media, obsahujícího 2 % hmotn. sacharosy, 1,5 % hmotn. kukuřičného výluhu (65 % sušiny], 0,003 % technického biotinu (1 % účinné látky) a 0,1 % hmotn. sojového oleje, pH = 7,8, umístěného v očkovacím tanku o objemu 20 litrů a v němž probíhá kultivace při 29 °C a vzdušnění 0,6 objemu vzduchu/objem media/min. a míchání 400 ot/min. po dobu 14 hodin.
Získaným inokulem se v množství 1 litr očkuje 10 litrů produkčního media v dalším tanku o objemu 20 litrů, tohoto složení (v % hmotn.) sacharosa 20,0 kukuřičný výluh (65% sušiny) 6,0 chlorid amonný 2,4 prim. fosforečnan draselný 0,24 síran hořečnatý kryst. 0,012 techn. biotin (1 % úč. látky) 0,003 sojový olej 0,2 pH 7,0 až 7,2
202 371
Kultivace ve fermentačním tanku probíhá při 29 °C a vzdušnění 0,6 objemu vzduchu/ /objem media/min. a míchání 400 ot/min. V průběhu kultivace se upravuje pH ve dvouhodinových intervalech čpavkem na hodnotu 7,2 až 7,5. Od 18. hodiny kultivace se dávkuje 25% roztok indolu v oleji v množství 0,1 % hrnotn./objem, v hodinových intervalech, a to tolik dávek, aby hladina indolu, analyticky sledovaná, nepřevýšila koncentrami 1 mg/ml. V průběhu kultivace se též podle výsledků analýz přidává sacharosa ve formě 70% roztoku, a to v množství 3 % hmotn./objem media. Podle potřeby se kultivační medium odpěňuje sojovým olejem. Doba kultivace je 54 hodin. Produkce L-tryptofanu, stanovená spektrofotometricky, činí 10,8 g/litr.
Claims (2)
- PŘEDMĚT1. Způsob šlechtění mikroorganismu Corynebacterium glutamicum vyznačující se tím, že se na kulturu výchozího prototrofního mikroorganismu působí 0,05 M roztokem ethylmethansulfonátu po dobu 18 hodin, načež se izolují získané mutanty, vyrostlé po vyočkování suspenze po působení mutagenu na minimálním mediu s obsahem 500 ,ttg/ml indolu.
- 2. Kmen mikroorganismu Corynebacterium glutamicum CCM 3358, získaný způsobemVYNÁLEZU bodu 1, který je rezistentní k indolu a vhodný pro fermentační přípravu L-tryptofanu při submerzní aerobní kultivaci v mediu s vhodným zdrojem uhlíku a dusíku a s minerálními živnými solemi, při neutrální hodnotě pH po celou dobu kultivace, s použitím indolu jako prekurzoru L-tryptofanu, produkující nejméně 10 g L-tryptofanu v 1 litru media.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS734578A CS202371B1 (cs) | 1978-11-10 | 1978-11-10 | Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS734578A CS202371B1 (cs) | 1978-11-10 | 1978-11-10 | Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202371B1 true CS202371B1 (cs) | 1981-01-30 |
Family
ID=5422420
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS734578A CS202371B1 (cs) | 1978-11-10 | 1978-11-10 | Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS202371B1 (cs) |
-
1978
- 1978-11-10 CS CS734578A patent/CS202371B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4734775B2 (ja) | エシェリヒア・コリのアルギニン生産菌及びそれを用いたｌ−アルギニンの製造法 | |
| KR100249532B1 (ko) | L-트레오닌의 제조방법 | |
| JP3966583B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法 | |
| KR890003681B1 (ko) | 미생물에 의한 l-페닐 알라닌의 제조방법 | |
| CA1168999A (en) | Method for preparing 2,5-diketo-d-gluconic acid | |
| JPH03232497A (ja) | 発酵法によるｌ―グルタミンの製造方法 | |
| Izumi et al. | Pyruvic acid production from 1, 2-propanediol by thiamin-requiring Acinetobacter sp. 80-M | |
| EP0595163B1 (en) | Process for producing L-isoleucine | |
| SU521849A3 (ru) | Способ получени цефалоспорина с | |
| US4745059A (en) | Process for the preparation of L-phenylalanine | |
| JPS58158185A (ja) | 生育の改善されたアミノ酸生産菌の育種方法 | |
| Rode et al. | Adaptation of Rhodopseudomonas sphaeroides to Growth on d-(—)-Tartrate and Large-Scale Production of a Constitutive d-(—)-Tartrate Dehydratase During Growth on dl-Malate | |
| Crombach | Morphology and physiology of coryneform bacteria | |
| US4106988A (en) | Method of cultivating Methylomonas probus on methanol containing medium | |
| CS202371B1 (cs) | Způsob šlechtění mikroorganismu Corynemacterium glutamicum a kmen Corynebacterium glutamicum CCM 3358 | |
| JP2578474B2 (ja) | Ｌ−グルタミン酸の製造法 | |
| Hagino et al. | L-Lysine production by mutants of Bacillus licheniformis | |
| RU2312140C2 (ru) | Штамм corynebacterium ammoniagenes - продуцент 5'-ксантиловой кислоты и способ получения 5'-ксантиловой кислоты | |
| US3293141A (en) | Fermentation process for producing l-tryptophan | |
| Vojtisek et al. | Penicillinamidohydrolase in Escherichia coli: II. Synthesis of the enzyme, kinetics and specificity of its induction and the effect of O2 | |
| JP3029868B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| JPS6125358B2 (cs) | ||
| KR920005749B1 (ko) | 신균주 코리네박테리움 글루타미쿰 mwex-46 및 이를 이용한 l-아르기닌의 제조방법 | |
| KR890001127B1 (ko) | 푸럭토 올리고(Fructo-oligo)당의 제조방법 | |
| HU215248B (hu) | Eljárás L-lizin előállítására |