CN86106757A

CN86106757A - 卤虫饲料

Info

Publication number: CN86106757A
Application number: CN86106757.6A
Authority: CN
Inventors: 北川清弘; 小岛荣司; 濑户明; 酒本秀一; 野泽卓尔
Original assignee: Oriental Yeast Co; Nisshin Oil Mills Ltd
Current assignee: Oriental Yeast Co; Nisshin Oil Mills Ltd
Priority date: 1985-10-11
Filing date: 1986-10-09
Publication date: 1987-07-15
Also published as: DE3673760D1; CN1017679B; EP0222169B1; US4906479A; EP0222169A1

Abstract

卤虫已被作为一种饲养鱼苗和甲壳类幼虫的饲料，而本发明则为养殖卤虫提供了一种饲料，该饲料的获得需对单细胞水藻的细胞壁进行破碎处理。使用这种饲料可使卤虫存活率提高，虫体长度也由此增加，且其总脂肪酸中的EPA和DHA含量也更高于常规饲料喂养条件下的相应值。

Description

本发明涉及一种可用来有效地养殖卤虫（Artemia）的饲料，而这种养殖的卤虫可被用来生产鱼苗和甲壳动物的幼虫。

近年来水产养殖技术已有迅速发展，同时很大一部分食用性鱼类已可通过人工养殖来获得，特别是在鱼苗产率飞速提高的背景情况下，适用于不同鱼类的人工饲料和活饲料均已得到发展。

目前，一些活饲料，如盐泽昆虫、卤虫、溞属蚤虫等，已被成功地用来饲喂刚从卵中孵化出的鱼苗。但投喂哪种活饲料则须根据鱼体的长度决定。然而迄今为止，尚未找到任何一种大小适宜的活饲料可用来继卤虫之后喂养鱼苗，故采用了从天然海水中收集的浮游生物。但收集天然浮游生物必须依据季节和气候来进行，因而收集量很难得到稳定的保证。由此想到要养殖卤虫，而且试图养殖出比通常的个体要大些的卤虫。

但迄今已制造出一些有前途的小麦面粉、黄豆粉、面包酵母、米糠或混合物，并被作为卤虫的养殖饲料而采用。然而采用这中间的任何一种饲料，都会在养殖过程中导致很高的卤虫死亡率。

该本发明之目的是为降低卤虫在养殖过程中的死亡率而提供一种卤虫饲料。

发明者已进行过广泛的研究，发现只有将单细胞藻类的细胞壁通过不同方法破碎之后，才能获得能达到上述目的的卤虫饲料。

该发明物是一种卤虫饲料，此饲料的获得要通过对单细胞藻类进行细胞壁的破碎处理。

图1中的图形表示实例一中卤虫存活率的变化。

图2中的图形表示实例二中卤虫存活率的变化。

图3和图4中的图形分别表示卤虫存活率和身体长度的变化。

图5和图6中的图形分别表示实例四中的卤虫存活率和身体长度的变化。

本发明涉及的卤虫是以盐泽卤虫为代表的海洋浮游动物，即那些通常被用作养殖活饲料的浮游动物。可用于本发明的单细胞藻类包括淡水和海水中的单细胞藻类，如淡水小球藻，海洋小球藻，眼虫海藻纲（Euglenophyceae），硅藻纲（Diatomeae），四孢藻（Tetraselmis），蓝藻纲（Cyanophyceae）等藻类。

本发明所用的淡水小球藻在分类上通常归属于小球（绿）藻（chlorella valgaris）、拟椭圆小球藻（chlorella ellipsoidea）、粉核小球藻（chlorella pyrenoidosa）、寄生小球藻（chlorella parasitica）、群聚小球藻（chlorella conglomerata）、杂色小球藻（chlorella variegata）、异养小球藻（chlorella antotrophica）、变异性小球藻（chlorella mutabilis）、小球（夜）藻（chlorella nocturna）、嗜光小球藻（chlorella photophila）等。

本发明对海洋小球藻的采用虽无特殊的种属限定，但指出最好采用那些含有二十碳五烯酸（EPA）或二十二碳六烯酸（DHA）的藻类，而且那些在分类上通常属于微细小球藻（chlorella minutissima）、小球（绿）藻等的藻类也被采用。由于可以吞食囟虫的鱼苗大多是海洋鱼类，因此，养殖体内含有的二膦酸酯EPA或DHA即一种ω-3多不饱和脂肪酸就成为决定其营养价值的重要因素。正因为海洋小球藻富含上述多不饱和脂肪酸，故其更为适用。

另外，关于海洋小球藻的分类，已有人报道，大意是指出这些藻类归于矮小缘藻属（Nannochloropsisgenus，日本植物学会，第50届大会演讲摘要集第143页），而那些属于微细小球藻，小球（绿）藻等的藻类，也都包含于该属海藻之内（日本水产科学学会公报，1978年，44卷10期，1109-1114页;同上，1979年45卷7期，883-889页;同上，1979年45卷8期，955-959页;《油类化学》（Oil Chemistry）1982年，81卷2期，77-90页）

四孢藻（Tetraselmis）在分类上归属于四光点四孢藻（Tetraselmis）等。硅藻纲藻（Diatomeae）藻类在分类上归属于那些定名为弯杆线藻的藻类等。眼虫海藻指那些分类上属于细线眼虫（海）藻（Euglena gracilis）的藻类等。

关于破碎细胞壁的方法，例如，一种或多种喷雾干燥处理，超声波处理，均浆处理，电磁波处理和细胞壁溶解酶的处理，上述方法都可采用。但采用上面任何一种方法时，都要先将培养液中的单细胞藻类漂洗数次，然后再将这些湿细胞进行处理。

喷雾干燥处理用一种湿细胞溶液来进行，先将溶液中固体含量调在2～10%，最好为3～5%，进气温度大致在140℃～160℃，排气温度大致为100℃～130℃。

超声波处理在市售超声波发生器上进行，湿细胞溶液中固体含量同上，但处理要在温度降至60℃或更低的冷却条件下进行。

匀浆处理时，先将海砂、玻璃球或其相似物与其湿细胞溶液相混，再通过粉碎装置如匀浆混合器（homoblender）将此混合物匀浆;或以某种高压浆器、多回旋匀浆器（polytron homogenizer）或类似装置将细胞壁破碎。

作为细胞壁的溶解酶，蛋白酶（由Amano Seiyaku公司生产的木瓜蛋白酶，或其它类似商品）、纤维素酶（Onozuka 纤维素酶R10为Yakult Yakuhin公司产品的商品名;Meicellase为Meicellase为Meijiseika公司出产的商品，或其它同类商品酶）、半纤维素酶（Macellozyme为Yakult Yakuhin公司出产的商品，或其它类似商品酶）、果胶酶（pectriase，此为seishin seiyaku公司产品之商品名，或同类商品酶）、等等，都可以一种单一物质或混合物质形式被采用，但对酶的种类无特殊限定。另外，上述酶类的作用条件（pH值、温度、时间等）则依不同的酶而改变，因此，要尽可能选择最适宜的条件来满足不同的酶的需要。

如果必要，还应进一步加水至已被破碎了细胞壁的单细胞藻类中。然后，再向其中加入一种磷脂如黄豆卵磷脂;一种甾醇如胆固醇、植物甾醇等;一种糖脂或三十二烷基磷酸，加入物的重量为百分之一到百分五十，最好大致为百分三到百分之十，然后将这些添加物均匀分散，以获得一种更稳定的分散体系。

在采用喷雾干燥法来破碎细胞壁的情况下，最好按下述方法对材料进行分散处理：

将这样的单细胞藻类的干燥产物放入水中分散，以使这一分散体系中固体物的重量大约为百分五至百分之十五，随后用高压匀浆器（输送压力：300～500公斤/平方厘米），多回旋匀浆器（polytron homogenizer）或其它匀浆器来处理这种分散体系，从而迫使单细胞水藻由处理前的几百个细胞形成的聚集体分散为单个细胞或被处理成为仅由几个细胞构成的聚集体，从而使其易被囱虫吞食。

此外，这种情况也可能适宜于按前述方法向细胞壁破碎产物中添加磷脂，甾醇或其它相应物质，然后按上述方法迫使细胞分散。

根据本发明之方法获饲料既可单独使用，又可和常规饲料混合使用。

本发明将通过实例来加以更详细的说明，但将要谈到的这些细节不应被认为是对本发明的某种限定。

实施例一：

将卤虫胞体（干产物）放入天然海水孵化24小时以上，收集刚孵出的卤虫幼虫并用来进行下述饲料的养殖试验。按离心分离法从淡水小球藻的培养液中收集细胞，洗涤三次，然后按下列A、B、C或D步骤将其进行处理：

A：按喷雾干燥法干燥和破碎细胞壁。

B：将A之喷雾干燥产物与重量为其十五倍的水混合，用高压匀浆器处理此混合物（500公斤/平方厘米），使其中的干燥产物再分散。

C：在冷却条件下用超声波细胞粉碎机处理，间断进行，共计十五分钟。

D：洗过的细胞（湿细胞重：20克）与海砂（100克）相混，再将其在冷却条件下用匀浆混合器（homoblender）粉碎处理10分钟。

另外，与此同时，还要用①活酵母、②黄豆粉、③米糠作对照控制实验。上述每种对照物调制成直径为50至200微米大小的颗粒。

刚孵出的卤虫体长约为500微米，且以其含量为30个/毫升时开始喂养。

另外，关于投喂的饲料量，应事先检查后再喂，以便投喂以充足的饲料（即使饲料投量充足到这种程度，以致于24小时后，即次日投料时，还能观察到一定量的剩余饲料）。本发明在采用破碎了细胞壁的淡水小球藻时，每天在每升培养液中的投料为2毫升，其细胞含量为1.5×10¹⁰毫升。

另一方面，活酵母含量为百分之五的液体饲料的投量为3毫升/升/天;固体含量为百分之五的黄豆粉液体或米糠液体的投量则为0.4毫升/升/天。

卤虫的养殖结果（养殖天数和存活率）用图1表示，图1中的不同图形分别说明下例不同实验结果。

实验分组：

①…活酵母、

②…米糠、

③…黄豆粉、

④…淡水小球藻，本发明中其细胞壁被破碎。

A…喷雾干燥处理、

B…继A之后，高压匀浆处理、

C…超声波处理

D…海砂处理

实施例二：

采用与例一相同的方法孵化卤虫幼虫，用其进行下述饲料的养殖试验：

④Tetraselmis水藻的活细胞，按离心分离法从培养液中收集而得，将其漂洗三次;

⑤活细胞和溶解酶的混合产物：在上面④之tefraselmis活细胞溶液（浓度：1.5×10细胞/毫升）中加入重量为百分之三的木瓜蛋白酶（Amano seiyaku公司生产的蛋白酶），及百分之零点五的Onozuka Cellulose（R10）（Yakult Yakuhin公司生产的纤维素酶）和百分之一的半纤维素酶（Tokyo Kasei公司之产品），然后将此混合物在pH6，30℃条件下进行破碎细胞壁的处理，时间为2小时。

⑥下述几种物质的混合产物：例一中的喷雾干燥产品，黄豆卵磷脂溶液和溶入己烷-乙醇（2∶1）试剂的胆固醇，三者先混合相溶后，再加入水中分散，此四者之间的重量比为100∶5∶5∶1500，最后用高压匀浆器处理此分散体系。

上述任何一种情况下，饲料的投喂量均为2毫升/升/天，液体所含的细胞浓度为1.5×10¹⁰细胞/毫升，养殖结果用图2表示。

下列各实验分别在图2中以不同的图形说明：

④…Tetraselmis的活细胞

⑤…④的酶处理;及

⑥…喷雾干燥处理+黄豆卵磷脂+胆固醇→高压匀浆。

（评价）

卤虫的存活率是高的;在常规市售饲料投喂的情况下，卤虫的存活率在养殖到第七天时下降到百分之五十或更低;而投喂本发明的饲料，其第七天时的存活率尚达百分之七十或更高些。

实施例三：

将卤虫胞体（干产品）在天然海水中放置24小时使其孵化，收集刚孵出的幼虫进行下述饲料的养殖试验。海洋小球藻细胞按离心分离法从培养液里收集，漂洗三次后，将其按下列A、B、C或D步骤进行处理：

A：按喷雾干燥法将细胞壁干燥并破碎。

B：将上述A之喷雾干燥产物与大约十五倍重的水相混合，再用高压匀浆器处理此混合物（500公斤/平方厘米），以使混合物重新分散。

C：用超声波细胞粉碎机处理，在冷却条件下间歇进行，时间总计为十五分钟。

D：将洗过的细胞（细胞湿重：20克）与海砂（100克）混合，用匀浆混合器（homoblender）粉碎此混合物，在冷却条件下处理十分钟。

另外，作为同时进行的对照实验，还要采用下述饲料;①活酵母，②黄豆粉，③米糠（在任何情况下，其颗粒大小要调制成50至200微米）和④一种市售细颗粒饲料〔“Marine Mate”，用于喂养孵化期鱼苗（egg fish）的基础饲料，Nihon Nosan公司生产，直径为200至300微米〕。

刚孵出的卤虫体长为500微米，当这种小卤虫在每毫升培养液中的数量达到30个时，即开始喂养。

另外，关于投喂的饲料量，应事先检查后再喂，以便喂以充足的饲料（即充足到这种程度，以致于一定量的残食在投喂后24小时，即次日再次喂食时还能观察到）。在本发明采用破碎了细胞壁的海洋小球藻的情况下，饲料的投喂量为2毫升/升/天，其细胞浓度为1.5×10¹⁰细胞/毫升。

另一方面，百分之五的活酵母液体投料为3毫升/升/天，百分之五的市售细颗粒饲料，黄豆粉和米糠溶液，其投料量均为0.4毫升/升/天。

卤虫的养殖结果在图3和图4中表示。下列实验分别用不同的图形说明。

（试验分组）

①…活酵母

②…米糠

③…黄豆粉

④…市售细颗粒饲料

⑤…本发明中细胞壁被破碎了的海洋小球藻。

A…喷雾干燥处理

B…对A之产物进行高压匀浆处理

C…超声波处理

D…海砂处理

表1则进一步说明养殖卤虫总脂肪酸中EPA和DHA共有的百分含量。

表1

饲料 EPA+DHA 观察天数

的含量（%）

孵出后立即观察 8.7 -

①活酵母 6.3 养殖开始后的第五天

（死于第六天）

②黄豆粉 5.8 养殖开始后的第二天

（死于第三天）

③B：经喷雾干

燥和高压匀浆 24.9 养殖后的第七天

处理的海洋小

球藻

实施例四

采用与实施例三相同的方法孵化囟虫幼虫，用其进行下述饲料的养殖试验：

⑥小球藻活细胞按离心分离法从海洋小球藻培养液中收集，然后洗三次;

⑦在⑥之小球藻活细胞（浓度：1.5×10¹⁰细胞/毫升）液体中加入重量为百分之三的木瓜蛋白酶（Amano Seiyaku公司生产的蛋白酶）和百分之零点五的Onozuka纤维素酶（R10）（Yakult Yakuhin公司生产）及百分之一的半纤维素酶（Tokyo kasei公司生产），将它们混匀后，在pH6，30℃条件下处理2小时，以使其细胞壁破碎。

⑧一种混合产物，由下述几种成分配制而成：按例三方法获得的喷雾干燥产物，加上黄豆卵磷脂溶剂和溶于己烷-乙醇（2∶1）的胆固醇，三者先混匀，再混入水中使其分散，这四者之间的重量比为100∶5∶5∶150，而胆固醇溶入己烷-乙醇（2∶1）试剂时的重量比为5∶20。最后用高压匀浆器处理此分散体系。

在上述任何一种情况下，投喂的饲料量为2毫升/升/天，液体浓度为1.5×10¹⁰细胞/毫升，养殖结果在图5和图6中表示，图中各种图形分别表示下述不同实验：

⑥…小球藻活细胞;

⑦…将⑥之细胞用酶处理;及

⑧…喷雾干燥处理+黄豆卵磷脂+胆固醇→高压匀浆。

进一步就养殖卤虫体内脂肪总量中EPA和DHA所占的百分含量来说，养殖开始后的第七天两者的含量分别为百分之二十五点一和百分之二十八点三。

（评价）

（1）按照本发明的饲料的养殖情况来看，卤虫的存活率是高的，也就是说，在养殖后第七天，常规市售饲料使存活率降低到百分之五十或更低，而采用本发明之饲料可使存活率保持在百分之七十甚至更高。

（2）按照本发明的饲料的使用情况来看，体长约为2.5～3毫米的卤虫容易获得。

（3）用常规饲料时，卤虫体内的EPA和DHA在总脂肪酸中的含量共为百分之三至百分之十二;而用本发明之饲料，则其含量增加至百分之二十五到百分之三十。

Claims

1、一种饲喂卤虫的饲料，该饲料是通过破碎单细胞藻类的细胞壁而获得。

2、按权利要求1所述的饲料，其涉及的单细胞藻类是海洋小球藻。

3、按权利要求2所述的饲料，其涉及的海洋小球藻至少是选自一组藻类中的一种，该组藻类由微细小球藻（chlorella minut issima）和小球（绿）藻（chlorella vulgaris）所组成。

4、按权利要求1所述的饲料，其单细胞水藻细胞壁的破碎处理至少要通过下述几种方法中的一种方法来进行，这些方法包括：喷雾干燥处理，超声波处理，匀浆处理，电磁波处理或细胞壁溶解酶的处理。

5、据权利要求1所述的饲料，其单细胞水藻细胞壁的破碎处理要通过喷雾干燥来进行，且在继此处理之后，还要将产物进行水合处理，然后经分散处理使水藻成为单个细胞或几个细胞的聚合体。

6、按权利要求5所述的饲料，其分散处理要通过高压匀浆器来进行。

7、按权利要求5所述的饲料，其分散处理要通过多回旋匀浆器（polytron homogenizer）来进行。

8、按权利要求1所述的饲料，其单细胞水藻的细胞壁经破碎处理之后，至少要从下述一组物质中选出一种来与其混合，该组物质包括磷脂，甾醇，糖脂和卅二烷基磷酸（dicetyl phosphate），然后将此混合物进行均匀分散处理。