CN1960707A - 用于治疗和/或诊断用途的脂质集合体 - Google Patents

Abstract

用于诊断或治疗用途的包括一种含有活性剂的集合体的组合物。该集合体包括脂质体和与之缔合的大量胶粒组分，所述胶粒组分与所述脂质体包膜的外表面通过充分的静电相互作用而缔合，当活性化合物被混入胶粒时，大量的所述活性化合物能与单一脂质体结合。此外，胶粒外层的存在使得所述脂质体在血流中的存留时间增长。

Description

用于治疗和/或诊断用途的脂质集合体

发明领域

本发明涉及一种包含用于治疗和/或诊断用途的活性剂的新的脂质体组合物，及其制备方法和包含所述组合物的药盒。本发明进一步涉及一种增加与脂质体缔合的活性剂含量的方法以及增加脂质体载体在血液循环中的存留时间的方法。特别地，本发明发现了在核磁共振成像(MRI)领域的有益应用。

发明背景

已知在治疗或诊断领域脂质体是活性剂的适宜载体，如治疗和/或诊断化合物的适宜载体。各种含有活性剂的以脂质体为基质的组合物已经被提出，尤其是那些在血流中显示具有减少的半衰期的制剂。例如，美国专利6,143,321公开了包含内部裹有胶粒制品的脂质体，所述胶粒制品含有由活性剂与脂类表面活性剂聚合而成的胶粒。

诊断造影学上采用的能增强不同造影技术成影性的制剂(称作“造影剂”或“影像增强剂”)也成为相当广泛地被采用的实践应用。

例如，碘化物，如Iopamidol或Iomeprol(Bracco Imaging S.p.A.)，被广泛用于X射线对比分析中，尤其是计算机X线断层造影术(CT)中，同时，含有顺磁离子的化合物如ProHance或MultiHance(Bracco Imaging)被广泛用于MRI分析中。

在影像增强剂的各种特性中，可能更让人合意的是那些高度的影像增强能力以及在待可视化的相关系统、组织或器官中的存留时间足够长。从而在过去的时间里，许多努力被付诸于改进造影剂的这两种特性。

例如，美国专利6,217,849公开了在血液循环中的存留能力被改善的用于X射线或NMR造影的脂质体水悬浮液。

美国专利5,387,410建议使用脂质体在其外表面的里面或外面搭载顺磁离子螯合物，以获得增强的选定组织的NMR影像。

美国专利5,833,948教导了将顺磁离子螯合物混入含有非离子表面活性剂的胶粒结构，以改进它们的血集中特性。

美国专利5,756,069涉及增强载体，例如脂质体，上的MRI反应剂浓度的问题，以提供有用的影像。聚螯合物被揭示能够结合大量顺磁离子并且含有使得化合物与脂质体或胶粒结合的脂溶性锚点。

更进一步地，影像增强化合物还可与靶向性化合物(能使影像增强剂与特异性靶部位—如组织、器官或特异细胞结合的化合物—以选择性地增强它们的影像)和/或与治疗剂(举例而言，在可视化过程中可以从相应的部位、组织或器官释放的治疗剂)组合。

发明概述

现在申请人发现一种用于诊断和/或治疗用途的新集合体，其中大量胶粒能与脂质体的外表面缔合。该缔合通过充分的静电相互作用而实现。采用这个新的集合体，有可能将足量的活性化合物与一个单独的脂质体缔合，以增加所述脂质体在血流中的时间，或者，根据本发明的优选，能获得具有增强的造影特性和增长的血液循环的造影剂。

从而本发明一方面涉及一种用于诊断或治疗用途的包含带有活性剂集合体的组合物，其中所述集合体包括：

-在单独内核和外表面之间具有分界包膜的脂质体，所述分界包膜定义了该脂质体的内部；以及

-与所述脂质体包膜的外表面缔合的大量的胶粒组分，

其中所述胶粒组分与所述脂质体通过充分的静电作用缔合。

根据一个优选实例，所述脂质体带有第一种总体净电荷并且所述胶粒组分带有与所述第一种净电荷符号相反的第二种总体净电荷。

根据本发明，术语“活性剂”的含义包括下述定义的任何治疗剂或诊断剂。所述活性剂可与脂质体缔合(例如，溶解或分散在内部的水相中和/或混入分界包膜中)，与胶粒缔合(例如，作为由胶粒形成的化合物)或与两者均缔合。

当提及本发明的集合体，术语“充分的静电作用”意为能稳定地缔合脂质体和胶粒的主要相互作用是由相应两种组分上相反的负电荷和正电荷决定的静电(或离子)相互作用。

申请人特别地发现胶粒组分中特异性化合物的存在可能会大量增加与所述胶粒缔合的脂质体在血流中的存留时间。根据一种优选实施方式，所述胶粒组分包含两亲聚合物。所述两亲聚合物优选是聚合类表面活性剂或者是带有亲水聚合体的磷脂。选择性地，或除此之外，所述胶粒组分可包含胆汁酸或其衍生物，或溶血磷脂。

本发明另一方面涉及一种能使包含脂质膜的脂质体的血液循环特性加长的方法，所述方法包括将所述脂质膜的外部与含有两亲聚合物的胶粒组分缔合。

申请人进一步观察到当含有活性剂的胶粒组分与本发明集合体中的脂质体缔合能大量增加所述活性剂的含量。尤其值得注意的是当该集合体与靶部位结合时，可能会由此在局部引起活性剂含量的增长。

本发现的一个有益应用是增加影像增强化合物(例如，MRI反应化合物，如钆螯合物)的造影效果，通过采用其中包括所述影像增强物的胶粒的集合体，尤其是当针对特异的生理或病理部位的影像增强组分与靶向性配体结合时。例如，含有脂质钆复合物的胶粒被测定为通常含有大约500个钆原子。从而，含有靶向剂的胶粒在与各个靶部位结合时能提供最多500个用于影像增强的钆原子。另一方面，申请人观察到至少大约5000胶粒能与直径为1μm的脂质体的外表面缔合以形成集合体；从而，当所述集合体与同一靶部位结合时，将使大约2′500′000(500×5000)钆原子与一个靶部位结合，与一个胶粒在同一靶部位能缔合的钆原子数量比较，这显然是更高的数量。

因此本发明的一个优选的方面是涉及上述定义的组合物，其中活性剂被包含在胶粒组分中。

优选地，所述活性剂是影像增强化合物，更优选地是MRI反应化合物，尤其是顺磁性金属离子。

在一个优选的实施方式中，所述集合体进一步含有靶向性配体，优选地被包含在胶粒组分中。另一个优选实施方式中，活性剂还被包含在脂质体中。

附图

图1，1a和1b是本发明集合体和它们各个组分的图示；

图2-4是阐明本发明集合体的血液循环的稳定性的图表；

图5-7是本发明集合体的关于脂质体的血液循环的比较图。

图8a和8b是体外射线的影像。

发明详述

图1显示按照本发明集合体的横断面图示。所述集合体包含具有大量与胶粒(12)缔合的球体的脂质体(11)，并浸在适当的生理学上可接受的液体载体(例如，生理盐水)中。脂质体包含定义其内部充满液体的部分(14)的脂质膜(13)，可选择性地包含活性剂(10)。图1a显示脂质膜的一部分，在该特定的实施方式中，它是由一个脂质双层形成。在所述实施方式中，由脂类形成的包膜是中性磷脂(15)、带正电的磷脂(16)和胆固醇(17)。图1b的特定实施方式中阐述的胶粒包括一个具有顺磁性离子(18)，例如钆，以及与聚乙二醇部分(19b)结合的带负电荷的两亲金属(19)，例如磷脂酰乙醇胺(19a)，的两亲复合体。

脂质体

术语脂质体的意思是指大量包括脂质化合物的两亲化合物的球体聚集体，典型地是以一层或若干同心层的形式存在。根据本技术领域已知的，两亲化合物是那些具有一个亲水极性头部(例如极性基团或离子基团)和一个疏水有机尾部(例如烃链)的分子。在本技术领域中这些化合物通常也被归类为表面活性剂、乳化剂或分散剂。

典型地，脂质体以水制混悬液的形式存在并含有至少一个两亲化合物的双层。两亲化合物中形成双分子层外部的亲水头部朝向球体结构的外面，而两亲分子中形成双分子层内层的亲水头部朝向球体结构的内部。脂质体球体结构内部的液体大体上与水制混悬液中的相同，任选包含不存在(或少量存在)于外层水制混悬液的另外的化合物，例如活性剂。脂质体内部充满足够体积量的液体，所述体积是，即，大于90％，优选大于95％并且通常，是大约100％。

制备脂质体的优选材料是磷脂，任选混以其它两亲化合物。通常，磷脂是含有至少一个磷酸基团和至少一个或优选两个的亲脂性长烃链基团的两亲化合物。

适合的磷脂的例子包括具有一个或优选两个(相同或不同的)脂肪酸残基以及具有磷酸残基的甘油酯，其中磷酸残基依次与亲水基团结合，例如，胆碱(磷脂酰胆碱-PC)，丝氨酸(磷脂酰丝氨酸-PS)，甘油(磷脂酰甘油-PG)，乙醇胺(磷脂酰乙醇胺-PE)，肌醇(磷脂酰肌醇)。仅具有一个脂肪酸残基的磷脂类酯在本技术领域中通常是指“溶解-”形式的磷脂或“溶血磷脂”。存在于磷脂中的脂肪酸残基一般是长链脂肪酸，通常含有12至24碳原子，优选14至22个；脂肪酸链可有一处或多处是不饱和的或优选全部饱和的。磷脂中适合的脂肪酸的例子包括，例如，十二烷酸，十四烷酸，十六烷酸，十八烷酸，二十烷酸，正二十二烷酸，十八烯酸，十八碳二烯-9，12-酸，以及十八碳-9，12，15-三烯酸。优选地，饱和脂肪酸采用例如十四烷酸，十六烷酸，十八烷酸以及二十烷酸。

其它的磷脂的例子是磷脂酸，即具有脂肪酸的甘油磷酸二酯；鞘类磷脂如鞘磷脂，即那些磷脂酰胆碱类似物，其中具有脂肪酸的甘油二酯残基被神经酰胺链取代；心肌磷脂，如具有脂肪酸的1，3-双磷脂酰甘油酯；配糖脂如神经节苷脂GM1(或GM2)或脑苷脂类；糖脂类；硫脂类以及糖鞘脂类。

此处使用的术语磷脂包括天然的、半合成的或合成制备的可单独使用或以混合物形式使用的产品。

天然磷脂的例子是天然卵磷脂(磷脂酰胆碱(PC)衍生物)例如，具有代表性地，大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂。

半合成磷脂的例子是天然卵磷脂形成的部分氢化或全氢化衍生物。优选的磷脂是脂肪酸二酯磷脂酰胆碱、乙基磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或鞘磷脂。

优选的磷脂的例子是，例如，二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)，二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)，二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)，二花生酰磷脂酰胆碱(DAPC)，二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)，二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)，1，2二硬脂酰-sn-甘油-3-乙基磷脂酰胆碱(Ethyl-DSPC)，双十五酰磷酯酰胆碱(DPDPC)，1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰-磷酯酰胆碱(MPPC)，1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰-磷脂酰胆碱(PMPC)，1-棕榈酰-硬脂酰-磷脂酰胆碱(PSPC)，1-硬脂酰-2-棕榈酰-磷脂酰胆碱(SPPC)，1-棕榈酰-2-油基磷脂酰胆碱(POPC)，1-油基-2-棕榈酰-磷脂酰胆碱(OPPC)，二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)及其碱金属盐，二花生酰磷脂酰甘油(DAPG)及其碱金属盐，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)及其碱金属盐，二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)及其碱金属盐，二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)及其碱金属盐，二油酰磷脂酰甘油(DOPG)及其碱金属盐，二肉豆蔻酰磷脂酸(DMPA)及其碱金属盐，二棕榈酰磷脂酸(DPPA)及其碱金属盐，二硬脂酰磷脂酸(DSPA)，二花生酰磷脂酸(DAPA)及其碱金属盐，二肉豆蔻磷脂酰乙醇胺(DMPE)，二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)，二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)，二花生酰磷脂酰乙醇胺(DAPE)，二亚油酰磷脂酰乙醇胺(DLPE)，二肉豆蔻磷脂酰丝氨酸(DMPS)，二花生酰磷脂酰丝氨酸(DAPS)，二棕榈酰磷脂酰丝氨酸(DPPS)，二硬脂酰磷脂酰丝氨酸(DSPS)，二油酰磷脂酰丝氨酸(DOPS)，二棕榈酰鞘磷脂(DPSP)，以及二硬脂酰鞘磷脂(DSSP)，二月桂酰磷脂酰肌醇(DLPI)，二花生酰磷脂酰肌醇(DAPI)，二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇(DMPI)，二棕榈酰磷脂酰肌醇(DPPI)、二硬酯酰磷脂酰肌醇(DSPI)，二油酰磷脂酰肌醇(DOPI)。

术语磷脂还包括经修饰的磷脂，例如，其亲水基团依次与另一个亲水基团相连的磷脂。经修饰的磷脂的例子是经聚乙二醇(PEG)修饰的磷脂酰乙醇胺，即，其亲水性乙醇胺部分连有分子量可变(例如从300至5000道尔顿)的聚乙二醇分子的磷脂酰乙醇胺，例如DPPE-PEG(或DSPE-PEG)，即，附有聚乙二醇聚合体的DPPE(或DSPE)。举例而言，DPPE-PEG2000是指附有平均分子量大约为2000的聚乙二醇聚合体的DPPE.

还可以使用磷脂混合物，例如，举例而言，DPPC、DSPC和/或DAPC与DSPS、DPPS、DSPA、DPPA、DSPG、DPPG、乙基-DSPC和/或乙基-DPPC的混合物，

典型地，磷脂是脂质体包膜的主要成分，其含量总计至少占形成包膜的组分总量的50％(w/w)。在一些优选实施方式中，大体上全部的包膜(即至少90％及高至100重量％)可以由磷脂形成。

磷脂可以方便地与其它两亲化合物混合使用，例如，举例而言，脂肪酸，如棕榈酸，硬脂酸，花生四烯酸或油酸；带有聚合物的类脂，如，带有壳多糖，透明质酸，聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇，也被称作″聚乙二醇化的脂类″；带有磺酸化的单糖、二糖、寡糖或多糖的脂类；胆固醇，胆固醇硫酸盐或胆固醇半琥珀酸盐；生育酚半琥珀酸盐；具有醚或与酯相连的脂肪酸的类脂；聚合脂类；磷酸二乙酰酯；磷酸二鲸蜡酯；神经酰胺；聚氧乙烯脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脂肪酸硬脂酸酯)，聚氧乙烯脂肪醇，聚氧乙烯脂肪醇醚，聚氧乙烯化脱水山梨醇脂肪酸酯，甘油聚乙二醇蓖麻酸盐，乙氧基大豆固醇，乙氧基蓖麻油或环氧乙烷(EO)和环氧丙烷(PO)嵌段共聚物；固醇脂肪酸酯包括，胆固醇丁酸盐，胆固醇异丁酸盐，胆固醇棕榈酸盐，胆固醇硬脂酸盐，羊毛甾醇醋酸盐，麦角固醇棕榈酸盐，或植物甾醇正丁酸盐；糖酸固醇酯，包括胆固醇葡萄糖苷酸、羊毛甾醇葡萄糖苷酸、7-去氢胆甾醇葡萄糖苷酸、麦角固醇葡萄糖苷酸、胆固醇葡萄糖酸盐、羊毛脂醇葡萄糖酸盐、或麦角固醇葡萄糖酸盐；糖酸和醇的酯，包括月桂酰葡萄糖苷酸、硬脂酰葡萄糖苷酸、肉豆蔻酰葡萄糖苷酸、月桂酰葡萄糖酸盐、肉豆蔻酰葡萄糖酸盐、或硬脂酰葡萄糖酸盐；带有脂肪酸的糖酯，包括蔗糖月桂酸盐，果糖月桂酸酯，蔗糖棕榈酸酯，蔗糖硬脂酸酯，葡萄糖醛酸，葡萄糖酸或聚糖醛酸；皂苷，包括萨洒皂草配基、菝葜配基、常春藤配基、石竹素、或毛地黄毒苷配基；甘油或甘油酯，包括甘油三棕榈酸酯、甘油二硬脂酸酯、甘油三硬脂酸酯、甘油二豆蔻酸酯、甘油三肉豆蔻酸酯、甘油二月桂酸酯、甘油三月桂酸酯、甘油二棕榈酸酯，；长链醇，包括n-癸基醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鲸蜡醇、或n-十八烷基醇；6-(5-胆甾烯-3β-基氧)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷；双半乳糖甘油二酯；6-(5-胆甾烯-3β-基氧)己基-6-氨基-6-去氧-1-硫代β-D-吡喃半乳糖苷；6-(5-胆甾烯-3β-基氧)己基-6-氨基-6-去氧-1-硫代-β-D-甘露-吡喃糖苷；12-(((7’-二乙基氨基香豆素-3-基)羰基)甲氨基)十八酸；N-[12-(((7’-二乙基氨基香豆素-3-基)羰基)甲氨基)十八烷酰基]-2-氨基棕榈酸；N-琥珀酰二油基磷脂酰乙醇胺；1，2-二油基-sn-甘油；1，2-二棕榈酰-sn-3-琥珀酰甘油；1，3-二棕榈酰-2-琥珀酰甘油；1-十六烷基-2-棕榈酰甘油磷脂酰乙醇胺或棕榈酰高半胱氨酸；烷基胺或烷基铵盐，包含至少一个(C₁₀-C₂₀)的烷基链，优选(C₁₄-C₁₈)的烷基链，例如，举例而言，N-硬脂酰胺，N，N’-二硬脂酰胺，N-十六烷基胺，N，N’-双十六烷基胺，N-硬脂酰氯化铵，N，N’-二硬脂酰氯化铵，N-十六烷基氯化铵，N，N’-双十六烷基氯化铵，溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)，溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)；包括一个或优选两个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)酰基链的叔铵盐或季铵盐，所述酰基链通过一个(C₃-C₆)的烯烃桥接在N-原子上，例如，举例而言，1，2-二硬脂酰-3-三甲基铵-丙烷(DSTAP)，1，2-二棕榈酰-3-三甲基铵-丙烷(DPTAP)，1，2-油酰-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)，1，2-二硬脂酰-3-二甲基铵-丙胺(DSDAP)；以及它们的混合物或组合。

优选的另外的化合物是脂类，包括胆甾醇、麦角固醇、植物甾醇、谷甾醇、羊毛甾醇、生育酚、没食子酸丙酯或抗坏血酸棕榈酸酯；脂肪酸，例如肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸及其盐和它们的衍生物；丁化羟基甲苯；或它们的混合物。尤其优选胆甾醇。这些化合物可以总量为全部组合物60％的摩尔量加入脂质体形成组合物，优选地总计大约25％。

为了达到脂质体被渴望负有的总体净电荷，单独的包膜至少包含一种带有总体净电荷的组分，尤其是一种带电的两亲材料，优选脂类或磷脂。

带有净负电荷的磷脂的例子是磷脂酰丝氨酸衍生物，尤其是脂肪酸二酯衍生物，例如DMPS、DPPS、DSPS；磷脂酸衍生物，例如DMPA、DPPA、DSPA；磷脂酰甘油衍生物，例如DMPG、DPPG和DSPG，或磷脂酰肌醇衍生物，例如DMPI、DPPI或DPPI。经修饰的磷脂也可用作负电荷分子，尤其是经聚乙二醇修饰的磷脂酰乙醇胺，例如DMPE-PEG2000、DMPE-PEG3000、DMPE-PEG4000、DPPE-PEG5000、DPPE-PEG2000、DPPE-PEG3000、DPPE-PEG4000、DPPE-PEG5000、DSPE-PEG2000、DSPE-PEG3000、DSPE-PEG4000、DSPE-PEG5000、DAPE-PEG2000、DAPE-PEG3000、DAPE-PEG4000或DAPE-PEG5000。上述引用的磷脂的溶解-形式也可以被方便地用作负电荷化合物，例如溶血磷脂酰丝氨酸衍生物(例如，lyso-DMPS，-DPPS或-DSPS)、溶血磷脂酸衍生物(例如，lyso-DMPA，-DPPA或-DSPA)以及溶血磷脂酰甘油衍生物(例如，lyso-DMPG，-DPPG或-DSPG)。带有负电荷的脂类的例子是胆汁酸盐例如胆酸盐，去氧胆酸盐或甘氨胆酸盐；以及(C₁₂-C₂₄)、优选(C₁₄-C₂₂)的脂肪酸盐，如，举例而言，棕榈酸盐、硬脂酸盐、1，2-二棕榈酰-sn-3-琥珀酰甘油盐或1，3-二棕榈酰-2-琥珀酰甘油盐。

优选地，带负电的化合物选自DPPA，DPPS，DSPG，DSPE-PEG2000，DSPE-PEG5000或它们的混合物。

带负电的组分典型地与相应的带相反的正电荷的离子缔合，可以是单价-(例如碱金属或铵)、二价-(例如碱土金属)或三价的(例如铝)。优选的带相反电荷的离子选自碱金属阳离子，例如Li⁺，Na⁺或^K，更优选Na⁺。

带有总体正电荷的磷脂的例子是乙基磷脂酰胆碱衍生物，尤其是乙基磷脂酰胆碱的脂肪酸二酯，例如1，2-二硬脂酸-sn-甘油-3-乙基磷脂酰胆碱(Ethyl-DSPC或DSEPC)，1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-乙基磷酯酰胆碱(Ethyl-DPPC或DPEPC)。带相反的负电荷的离子优选卤素离子，尤其是氯或溴。带正电的脂类的例子是带有相反电荷的卤素(如氯或溴)的烷铵盐，包括至少一个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)的烷基链，如，举例而言，单或二-氯化硬脂酰铵，单或二-氯化十六烷基铵，溴化二甲基双十八烷基铵(DDAB)，溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)。带正电的脂类的例子还有带相反电荷的卤素离子(例如氯或溴)的叔铵盐或季铵盐，所述盐包含一个或优选两个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)的通过(C₃-C₆)烯基桥接在N-原子上的酰基链，例如，举例而言，1，2-二硬脂酰-3-三甲基铵-丙烷(DSTAP)，1，2-二棕榈酰-3-三甲基铵-丙铵(DPTAP)，1，2-油酰-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)，1，2-二硬脂酰-3-二甲基铵-丙烷(DSDAP)。

DSEPC，DPEPC和/或DSTAP被优选用作脂质体包膜中带正电的化合物。

带正电的组分典型地与相应地带相反的负电荷的离子缔合，所述带负电的离子可以是一价-(如卤素)，二价-(如硫酸根)或三价的(如磷酸根)。优选的带相反电荷的离子选自卤素离子，例如F^-(氟)，Cl^-(氯)或Br^-(溴)。

为了使胶粒获得有效的的静电作用，脂质体包膜中带电化合物的总量按摩尔数计至少是形成所述包膜的材料的总量的1％，优选按摩尔数计至少5％并且更优选至少10％。按摩尔数计含量低于80％的带电化合物被观察到足以获得有效的脂质体-胶粒的相互作用；所述含量按重量计优选不高于大约75％并且更优选按摩尔数计不高于大约60％。

中性和带电磷脂和/或带电脂类的混合物可令人满意地用于形成本发明集合体的脂质体，任选地与其它两亲化合物混合。优选地，采用两种或更多脂类或磷脂的混合物，至少一种具有中性电荷并且至少一种具有总体净电荷。更优选地，采用两种或更多种脂类或磷脂的混合物，至少一种是中性且至少一种具有正电荷，以使脂质体总体带正电。特别优选的是DSPC和/或DPPC与ethyl-DSPC、ethyl-DPPC和/或DSTAP的混合物。

其它辅料和添加剂可以存在于脂质体形成的组合物中，不必包括(或仅部分包括)在脂质体包膜的形成中。这些包括pH调节剂，渗透压调节剂，增稠剂，乳化剂，填充剂，等等，并可按常规量使用。例如，可以使用像聚氧基丙二醇和聚氧基乙二醇的化合物以及它们的共聚物。增稠剂或稳定剂的例子是选自直链的或交联的聚-和寡-糖，糖，以及亲水聚合物：如聚乙二醇。

本发明集合体的脂质体可进一步含有活性剂，如治疗剂或诊断剂。这些化合物可以与脂质体的脂质包膜缔合(如，与其混合和/或结合)和/或溶解或分散(例如，以胶粒分散相)于它的内部水空间中。虽然靶向性配体也可以与脂质体的脂质包膜缔合，但是所述化合物最好与集合体的胶粒缔合，以使其在靶部位的作用最大化，这在下文将有详细解释。

术语“治疗剂”的意思包括任何可用于任何治疗应用中的物质、组合物或粒子，如治疗患者体内疾病的方法，以及任何在体外/在体内能够发挥或导致发挥生物效应的物质。治疗剂因而包括可在患者体内任何病理阶段(包括疾病、痛苦、疾病损害或伤害)的治疗中(包括诊断，预防，缓解，减轻痛苦或治愈)使用的任何化合物或材料。治疗剂的例子有药物，医药品，生物活性剂，细胞毒素剂，化疗剂，放疗剂，蛋白质，天然或合成的肽，包括低聚肽和多肽，维生素，类固醇和遗传物质，包括核苷，核苷酸，低聚核苷酸，聚核苷酸和质粒。其中，优选药物或医药品。

治疗剂的例子包括抗溃疡药物如西咪替丁，法莫替丁，雷尼替丁，乙酸罗沙替丁，泮托拉唑，奥美拉唑，兰索拉唑或硫糖铝；肠松弛剂或促动力剂如溴丙胺太林，卡米罗芬(acamylophenine)，双环胺，丁溴东莨菪碱，美贝维林，西沙必利，奥昔布宁，甲溴哌苯偶酯，屈他维林，甲氧氯普胺，克利溴铵，异丙胺或奥芬溴铵；酶类或排气药，如胰酶，木瓜酶，胃蛋白酶，或淀粉酶；肝胆药剂如鹅去氧胆酸，熊去氧胆酸，L-鸟氨酸或水飞蓟素；抗高血压药如可乐定，甲基多巴，硝普纳，特拉唑嗪，多沙唑嗪，(DI)肼酞嗪或哌唑嗪；β阻断剂如艾司洛尔，塞利洛尔，阿替洛尔，labetolol，普萘洛尔，美托洛尔，卡维地洛，索他洛尔，oxyprenolol或比索洛尔；钙通道阻断剂如非洛地平，尼群地平，硝苯地平，贝尼地平，维拉帕米，氨氯地平或拉西地平；血管紧张素转化酶抑制剂如依那普利，赖诺普利，雷米普利，哌林多普利，贝那普利或卡托普利；血管紧张素II抑制剂如洛沙坦钾；钾通道激活剂，如硝烟酯；利尿药和抗利尿药如氢氯噻嗪，氯磺水杨胺，布美他尼，阿米洛利，螺内酯，吲达帕胺，氨苯蝶啶，氯帕胺，呋塞米或氯噻酮；抗心绞痛药如二硝酸异山梨酯，丙烯氧心得安，5-单硝酸异山梨酯，地尔硫卓，丁四硝酯，曲美他嗪，利多氟嗪，硝酸戊四醇酯，硝酸甘油或地拉卓；促凝剂如结合型雌激素，地奥司明，menaphthone甲萘醌，menadione甲萘醌，蝮蛇血凝酶，酚磺乙胺(cydanamine)，芸香苷-黄酮类或肾上腺色素单缩氨基脲；抗凝血剂抗血栓剂或抗血小板剂如噻氯匹定，华法林，链激酶，苯茚二酮，重组组织型纤溶酶原激活剂，尿激酶，加压素，醋硝香豆素，肝素，低分子量肝素，粘多糖聚硫酸酯或双嘧达莫；抗心律不齐药如奎尼丁，丙吡胺，普鲁卡因胺，利多卡因，美西律，胺碘酮，腺苷，普罗帕酮；用于心力衰竭或休克的药如美芬丁胺，地高辛，多巴胺，多巴酚丁胺或去甲肾上腺素，血管扩张剂如苯氧丙酚胺，烟胺羟丙茶碱，盐酸苄丙酚胺，己酮可可碱或环扁桃酯；强心甙类如去乙酰毛花甙，洋地黄毒甙，地高辛或洋地黄甙；青霉素类如苄青霉素G，普鲁卡因青霉素(G)，苄星青霉素(G)，苯氧甲基青霉素，青霉素G/V，氨苄青霉素甲戊酯，羧苄青霉素，氧哌嗪青霉素，氨苄西林(选择性地与舒巴坦或丙磺舒合用)，氯唑西林，或阿莫西林(选择性地与溴己新，氯唑西林，羧甲半胱氨酸或克拉维酸合用)；喹诺酮类或氟喹诺酮类如萘啶酸，培氟沙星，氧氟沙星，司帕沙星，诺氟沙星，环丙沙星，洛美沙星，头孢菌素类如头孢唑肟，头孢呋辛，头孢克肟，头孢噻肟，头孢克洛，头孢曲松钠，头孢羟氨苄，头孢氨苄，(选择性地与盐酸溴己新或丙磺舒合用)头孢唑林，头孢噻啶，头孢他啶或ceforperazone；磺胺类药如硫胺，磺胺二甲唑，磺胺间二甲氧嘧啶，cotrifamole，磺胺甲基异_唑，甲氧苄啶，氨基糖甙类如庆大霉素，妥布霉素，新霉素，阿米卡星，西苏霉素，卡那霉素，奈替霉素，多粘菌素类如多粘菌素B，多粘菌素E硫酸酯；氯霉素；四环素类如四环素，脱氧土霉素，米诺环素，地美环素，土霉素；大环内酯类如红霉素，(选择性地与溴己新合用)，克拉霉素，万古霉素，林可霉素，阿奇霉素，螺旋霉素，罗红霉素，克林霉素，头孢匹罗，替考拉宁(teichomycin a2)，抗病毒药，如阿巴卡韦，拉米夫定，阿昔洛韦，金刚烷胺，干扰素，利巴韦林，stavurdine，拉米夫定或齐多夫定(azt)；抗疟药，如奎宁，氯胍，氯喹，伯氨喹，阿莫地喹，蒿甲醚，青蒿琥酯，甲氟喹，乙胺嘧啶，arteether蒿甲醚，米帕林；抗结核药如环丝氨酸，卷曲霉素，乙硫异烟胺，丙硫异烟胺，异烟肼(inh)，利福平，利福平任选与异烟肼、帕司烟肼、异烟酰胺和/或乙胺丁醇合用；乙胺丁醇(任选与异烟肼合用)，链霉素或异烟酰胺；驱虫药&抗寄生虫药如哌嗪，氯硝柳胺，噻酚嘧啶，左旋咪唑，乙胺嗪，四咪唑，丙硫咪唑，吡喹酮，葡萄糖酸锑钠或甲苯达唑；抗麻风药如氨苯砜或氯法齐明；抗厌氧菌药，抗原生虫药或抗阿米巴药如替硝唑，甲硝唑(任选与呋喃唑酮或诺氟沙星合用)，二氯尼特，塞克硝唑，羟喹诺酮，去氢依米丁，氯硝丙唑或呋喃唑酮；抗真菌药如氟康唑，酮康唑，哈霉素，特比萘芬，益康唑，两亲霉素B，制霉菌素，克霉唑，灰黄霉素，咪康唑或伊曲康唑；维生素类；呼吸兴奋剂如盐酸多沙普仑；平喘药如异丙肾上腺素，沙丁胺醇(albuterol)，间羟异丙肾上腺素，麻黄碱，特布他林硫酸酯，沙美特罗，氨茶碱，茶碱，倍氯美松双丙酸酯或氟替卡松丙酸酯；抗变态反应药如特非那定，阿司咪唑，氯雷他定，氯马斯汀，马来酸二甲茚定，盐酸非索非那定，羟嗪，氯苯那敏，马来酸哌吡庚啶，甲地嗪，马来酸非尼拉敏，苯海拉明或塞替利嗪；骨骼肌松驰药如替扎尼定，美索巴莫，卡立普多，戊沙溴铵，巴氯芬，氯美扎酮或氯唑沙宗；平滑肌松弛剂如奥芬溴铵，溴丙胺太林，盐酸双环胺，丁溴东莨菪碱，美贝维林，屈他维林，克利溴铵，异丙胺或二盐酸卡米罗芬；非甾体抗炎药如萘普生，甲芬那酸，尼美舒利，双氯芬酸，替诺昔康，布洛芬(任选与对乙酰氨基酚合用)，美洛昔康，阿司匹林，氟比洛芬，酮洛芬，ketoprolac，保泰松，羟基保泰松，消炎痛或吡罗昔康；抗肿瘤剂，如氮芥化合物(如环磷酰胺，曲磷胺，甲酰溶肉瘤素，苯丙氨酸氮芥或苯丁酸氮芥)，氮丙啶(如thioepa)，N-亚硝基脲衍生物(如卡莫司汀，洛莫司汀，尼莫司汀)，铂化合物(如螺铂，顺铂，以及卡铂)，丙卡巴肼，达卡巴嗪，甲氨蝶呤，阿霉素，丝裂霉素，柄型菌素，阿糖胞苷，阿糖腺苷，巯基聚赖氨酸，长春新碱，白消安，苯丁酸氮芥，美法仑(如PAM，L-PAM或苯丙氨酸氮芥)，巯嘌呤，米托坦，盐酸丙卡巴肼，放线霉素(放线霉素D)，盐酸柔红霉素，盐酸阿霉素，表柔比星，普卡霉素(mithramycin)，米托蒽醌，博来霉素，博来霉素硫酸酯，氨鲁米特，雌氮芥磷酸钠，氟他胺，亮丙瑞林醋酸酯，甲地孕酮醋酸酯，枸橼酸他莫昔芬，睾内酯，曲洛司坦，安吖啶(m-AMSA)，门冬酰胺酶(L-asparaginase)Erwina asparaginase，依托泊苷(VP-16)，干扰素a-2a，干扰素a-2b，替尼泊苷(VM-26)，硫酸长春碱(VLB)，硫酸长春新碱，长春地辛，紫杉醇(Taxol)，甲氨蝶呤，阿霉素，arabinosyl，羟基脲；叶酸拮抗剂(如氨基蝶呤，甲氨蝶呤)，嘌呤或嘧啶碱基拮抗剂(如巯嘌呤，硫鸟嘌呤，氟尿嘧啶或阿糖胞苷)；麻醉药，阿片制剂或镇静剂如鸦片樟脑酊，可待因，吗啡，阿片，异戊巴比妥，异戊巴比妥钠，阿普比妥，丁巴比妥钠，水合氯醛，乙氯维诺，炔己蚁胺，盐酸氟西泮，格鲁米特，盐酸甲氧异丁嗪，甲乙哌酮，盐酸咪达唑，副醛，戊巴比妥，司可巴比妥钠，他布比妥，替马西泮或三唑仑；局部或全身性麻醉药如布比卡因，氯普鲁卡因，依替卡因，利多卡因，甲哌卡因，普鲁卡因或丁卡因，氟哌利多，依托咪酯，含有氟哌利多的枸橼酸芬太尼，盐酸氯胺酮，甲己炔巴比妥钠或硫喷妥钠；神经肌肉阻断剂如甲磺酸阿曲库铵，戈拉碘铵，己芴溴铵，碘甲筒箭毒，泮库溴铵，氯琥珀胆碱，氯筒箭毒碱或维库溴铵；或激素系统的治疗剂，如生长激素，促黑激素，雌二醇，倍氯美松双丙酸酯，倍他米松，醋酸可的松，地塞米松，氟尼缩松，氢化可的松，甲基氢化泼尼松，醋酸对氟米松，泼尼松龙，泼尼松，曲安西龙或醋酸氟氢可的松。

术语“诊断剂”的意思是包括可用于与病人的体内部位造影方法和/或诊断病人体内有无疾病的方法相关的任何化合物、组合物或粒子。可混入本发明集合体脂质体内或与其缔合(如，连在其包膜上，尤其是其亲脂性部分)的诊断剂因而是任何可使与诊断技术相关的造影增强的化合物、组合物或粒子，所述诊断技术包括磁共振造影术、X-射线，尤其是计算机X线断层造影术、光学造影、核造影或分子造影。合适的混入脂质体或与脂质体缔合的诊断剂的例子是，举例而言，磁铁纳米粒；碘化物，如Iomeprol_或Iopamidol_(Bracco Imaging)；亲水的或亲脂的螯合顺磁性粒子络合物例如，举例而言，铬(III)复合物，锰(II)复合物，锰(III)复合物，铁(II)复合物，铁(III)复合物，钴(II)复合物，镍(II)复合物，铜(II)复合物，镨(III)复合物，钕(III)复合物，钐(III)复合物，钆(III)复合物，铽(III)复合物，镝(III)复合物，钬(III)复合物，铒(III)复合物，铕(III)复合物以及镱(III)复合物；包含超极化原子的化合物，例如¹³C，¹⁵N，¹⁹F，²³Na，³¹P或^35.5Cl，包括例如[¹³C]尿素(见，如“Molecular imaging of endogenoussubstatnces”，Golman et al.PNAS(proceedings of the NationalAcademy of sciences of the USA)，2003年9月，第100卷，第18期，10435-10439页)或双-1，1-羟甲基-1-¹³C-环丙烷-D₈(见，如“Cerebral perfusion assessment by bolus tracking usinghyperpolarized C”Johansson et al.Magnetic Resonance inMedicine，2004，vol.51，pp.464-472)；或放射性药物制剂，例如，举例而言，锝(^99mTc)、镓(⁶⁷Ga或⁶⁸Ga)、铟(¹¹¹In)、铊(²⁰¹TI)。

有关本发明脂质体混悬液的制备，可以使用本技术领域已知的常规方法。所述制备方法典型地包括在有机溶剂中溶解化合物形成脂质体(如磷脂)，在真空中蒸发有机溶剂以获得由脂质体形成的化合物的薄膜并最后将所述薄膜进行水合反应。典型地，当由脂质体形成的化合物是磷脂时，水合反应在高于磷脂转变温度的温度下进行。优选地，如此获得的脂质体随后通过将囊泡尺寸分布缩小在适当界限内而被校准成渴望获得的尺寸，例如，通过常规等级的过滤膜。有关脂质体内部活性化合物(如诊断剂或治疗剂)的包封，例如所述活性化合物是水溶液或混悬液的形式，一种优选的方法包括采用所述活性化合物的溶液或混悬液在脂类转化温度或高于脂类转化温度对脂类进行水合，随后洗涤(如，通过透析)获得的脂质体，以去除剩余的未包封的溶液或混悬液。或者，先将脂类在未负载水载体中水合，然后活性化合物通过被跨膜渗透转运入脂质体内部，在活性化合物浓缩液中温孵所得的脂质体(见，如WO-A-92/10166在此被并入作为参考)，最后洗涤脂质体。

所希望的尺寸减小的脂质体按照常规方法获得，包括超声降解、挤压或微流化起始的脂质体混悬液。从而，上述得到的水合脂质体可暴露在超声波辐射中以适当地减少脂质体的尺寸。或者，水合脂质体可以被挤压通过多层孔径减小(如，2.0，1.0，0.8，0.6，0.4，以及0.2μm)的膜(如，聚碳酸酯)，以减少脂质体尺寸至最终所希望的大小。作为进一步的选择，根据微流化器中脂质体的流通数量，大囊泡可以在高压下在微流化器(如，出自Microfluidics Corporation)中混匀，以逐步减少脂质体尺寸至所希望的大小。这些或其它的制备方法在参考书中有教导，如“Liposomes，a practical approach”，Roger R.C.New编著，牛津大学出版社，1989。

优选地，在尺寸减小后，大约80％的囊泡与选自0.2-1.0μm的任一数值相差±10％。任何其它在前述界限以内的宽一些或窄一些的分布仍然是允许的。在减少尺寸的处理之后，混悬液优选地被检查以保证脂质体混悬液中脂类的浓度是足够的，任选地，该浓度被调整至与所希望的一致。调整可以通过用更多量的液体载体稀释来获得，如果脂类浓度超过了所希望的界限；另一方面，浓度可以通过惯用方法增加，例如通过能留住囊泡但载体液体能通过的适当的多孔膜微过滤或超过滤。

脂质体及其制备方法的综述还可以在参考书″Surfactants andPolymers in Drug Delivery″中找到，M.Malmsten编写，第4章第87-131页，Marcel Dekker Inc.Ed.，2002。

胶粒

作为本领域己知的，胶粒由分散在水中的两亲分子在其浓度超过预先已知的CMC(临界胶粒浓度)时形成。当浓度在CMC以下，分子通常以单个分子的形式分散在水溶液中。高于CMC时，两亲分子趋向于组成超分子结构，与溶液中的游离分子达到平衡，所述结构以分子的疏水性(脂质)尾部朝向结构内部而分子的亲水性(极性的或离子的)头部朝向结构外部的情形为特征。两亲分子的CMC可以用实验方法通过本领域标准的技术测得。例如，表面活性剂CMC可通过以表面活性剂的浓度函数为参数绘图测得。表面活性剂浓度的增长直至CMC，参数通常是呈线性变化的，到达这个浓度之后，曲线(或参数)变成非线性的。可用于测定CMC的适当参数包括折射率、光散射度、表面张力、导电率、渗透压等等。根据本发明的目的，优选的形成胶粒的材料是那些具有相对低CMC的材料，如大约10mM或更低的。胶粒典型地具有从大约0.1nm至大约100nm的尺寸，优选从大约1nm至大约50nm。平均直径的数值(Dn)是大约50nm或更小，优选大约20nm或更小并且更优选10nm或更小，直至，例如1nm，优选至少大约2nm。此处使用的术语“胶粒”包括由两种或更多不同化合物(“混合胶粒”)形成的胶粒结构，其中至少一种是能形成胶粒结构的两亲化合物。术语混合胶粒的意思从而也包括由至少一种分散在水载体中通常不能形成胶粒结构的化合物，但它与适当量的能形成胶粒的两亲化合物缔合使用时却能形成所述结构，优选两亲化合物。混合胶粒的例子是，举例而言，由未经修饰的磷脂(独自分散在水载体中通常不能形成胶粒)和能形成胶粒的化合物(如，经PEG修饰的磷脂或脂肪酸盐)形成的胶粒。

胶粒、胶粒系统及其制备方法的综述可以在参考书中找到，例如，″Surfactants and Polymers in Drug Delivery″，M.Malmsten编写，第2章，第19-50页，Marcel Dekker Inc.Ed.，2002.根据本发明的一个方面，MRI反应物缔合胶粒，优选以能包括在胶粒结构中的两亲化合物的形式存在(如，顺磁性离子和两亲螯合剂的络合物，例如聚氨基羧酸酯)。

用于在本发明集合体中形成胶粒以与脂质体缔合的合适的材料可以选自前面列出的脂类和磷脂类材料。

能形成胶粒的化合物的例子是经PEG修饰的磷脂，尤其包括经PEG修饰的磷脂酰乙醇胺如DMPE-PEG，DPPE-PEG，DSPE-PEG，DAPE-PEG1；脂肪酸盐，优选碱盐，尤其是钠盐，如棕榈酸钠，硬脂酸钠，油酸钠，亚油酸钠，十二烷酸钠，1，2-二棕榈酰-sn-3-琥珀酰甘油酸钠盐或1，3-二棕榈酰-2-琥珀酰甘油酸钠盐；糖的衍生物如(C6-C10)烷基-β-D-吡喃葡萄糖苷，(C8-C12)烷基-β-D-麦芽糖苷；(C8-C16)烷基二甲基铵丙烷-磺酸酯；以及胆汁酸及其衍生物，如胆酸钠或去氧胆酸钠。带有疏水和亲水部分的聚合物(也称作“聚合类表面活性剂”)也可以用于制备胶粒混悬液。合适的聚合类表面活性剂包括，非限制性地，聚氧乙烯(PEO)，如(C8-C16)n-烷基聚氧乙烯单醚，(C8-C10)n-烷基苯基聚氧乙烯，四甲基丁基苯基聚氧乙烯，聚氧乙烯聚山梨醇酯，这些市售名为Brij_，Mirj_，Lubrol_，Triton_，Nonidet_或Tween_的聚氧乙烯；嵌段共聚物如环氧乙烷/环氧丙烷嵌段共聚物(如Pluronic_或Synperonic_)，优选分子量从3000至20000道尔顿的，优选从5000至15000道尔顿的。有利地，其它能形成胶粒的化合物也能被使用，优选与其它任何前面所列的能形成胶粒的化合物混合以形成混合胶粒。这些化合物的例子是包含至少一个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)的烷基链的烷基铵盐，如，举例而言，硬脂酰氯铵，十八烷氯铵，二甲基双十八烷溴铵(DDAB)，十六烷三甲基溴铵(CTAB)；包括一个或优选两个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)的酰基链的季铵或叔铵盐，所述酰基链通过(C₃-C₆)的烯链桥接在N-原子上，如1，2-二硬脂酰-3-三甲基铵-丙烷(DSTAP)，1，2-二棕榈酰-3-三甲基铵-丙烷(DPTAP)，1，2-油酰-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)，1，2-二硬脂酰-3-二甲基铵-丙烷(DSDAP)。未经修饰的磷脂也可用于形成胶粒，如前文提及的磷脂酰胆碱、乙基磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或鞘磷脂的脂肪酸二酯。然而由于这些未经修饰的磷脂分散在水载体中时通常不能形成胶粒结构(由于当分散在水溶液中这些化合物趋向于与脂质体缔合)，所述未经修饰的磷脂的含量应优选低于大约80％，更优选占形成胶粒结构化合物的混合物的全部重量的大约70％或更低。按照优选的实施方式，胶粒组分从包含按重量计大约30％至70％、优选从大约40％至60％的未经修饰的磷脂混合物中形成。混合物的其它成分可以是上文列出的任何能形成胶粒的表面活性剂。

通过任何上文列出的带负电或带正电的化合物可以使胶粒具有总体净电荷，尤其是脂类或磷脂，包括经修饰的磷脂。

适合于赋予胶粒净负电荷的磷脂的例子是磷脂酰丝氨酸衍生物，如DMPS，DPPS，DSPS；磷脂酸衍生物，如DMPA，DPPA，DSPA；磷脂酰甘油衍生物如DMPG，DPPG和DSPG。经修饰的磷脂，尤其是经PEG修饰的磷脂酰乙醇胺，能有效地用于赋予胶粒所希望的净负电荷，例如，举例而言，DMPE-PEG750，-PEG1000，-PEG2000，-PEG3000，-PEG4000或-PEG5000；DPPE-PEG750，-PEG1000，-PEG2000，PEG3000，-PEG4000或PEG5000；DSPE-PEG750，-PEG1000，-PEG2000，PEG3000，-PEG4000或PEG5000；DAPE-PEG750，-PEG1000，-PEG2000，PEG3000，-PEG4000或PEG5000。另外，还有上述引用的磷脂的单独的溶解形式，例如溶血磷脂酰丝氨酸衍生物，溶血磷脂酸衍生物(如lyso-DMPA，-DPPA或-DSPA)以及溶血磷脂酰甘油衍生物(如lyso-DMPG，-DPPG或-DSPG)。带负电的脂类的例子是胆汁酸盐如胆酸盐，去氧胆酸盐或甘胆酸盐；以及脂肪酸盐如棕榈酸盐，硬脂酸盐，1，2-二棕榈酰-sn-3-琥珀酰甘油盐或1，3-二棕榈酰-2-琥珀酰甘油盐。

优选地，带负电的化合物选自上述引用的经PEG修饰的磷脂。带负电的组分典型地与相应的带相反的正电荷的离子缔合，所述带正电的离子可以是一价(如，碱金属)，二价(如碱土金属)或三价的(如，铝)。优选的带相反电荷的离子选自碱金属阳离子，例如Li⁺，Na⁺，或K⁺，更优选Na⁺。

合适的用于赋予胶粒净正电荷的磷脂的例子有磷脂酰胆碱酯类，例如1，2-二硬脂酸-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(Ethyl-DSPC)，1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-乙基磷酸胆碱(Ethyl-DPPC)。带相反的负电荷的离子优选卤素离子，尤其是氯或溴。带正电的脂类的例子是烷铵盐，包括至少一个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)的烷基链，或包含至少一个或优选两个(C₁₀-C₂₀)、优选(C₁₄-C₁₈)的通过(C₃-C₆)烯基桥接在N-原子上的酰基链的叔铵或季铵盐，例如那些前文列出的。

Ethyl-DPPC，Ethyl-DSPC，DSTAP或它们的混合物被优选用作带正电的化合物。

带正电的组分典型地与相应的带相反的负电荷的离子缔合，所述带负电的离子可以是一价-(如卤素)，二价-(如硫酸根)或三价的(如磷酸根)。优选的带相反电荷的离子选自卤素离子，例如F^-(氟)，Cl^-(氯)或Br^-(溴)。

如上所述，在一些实施方式中，带电分子可以有效地与中性两亲化合物混合物，例如那些前文列出的化合物(包括中性磷脂)，以形成所希望的胶粒结构。上文列出的待混合的中性化合物优选聚合类表面活性剂，例如环氧乙烷-环氧丙烷嵌段共聚物(如Pluronic F68，Pluronic F108或Pluronic F-127，出自SigmaAldrich，Missouri，USA)，聚氧乙烯烷乙醚(如Brij_78，SigmaAldrich)，聚氧乙烯脂肪酸酯(如e.g.Myrj_53 or Myrj_59，SigmaAldrich)；聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(如Tween_60，Sigma Aldrich)或聚乙二醇烷基醚如聚乙二醇叔辛基苯基醚(如Triton_X-100，SigmaAldrich)。按照本发明的一个实施方式，胶粒由带电的两亲化合物与中性磷脂以及一种或多种上文列出的中性化合物混合而成。

优选地，带电的形成胶粒的表面活性剂的摩尔含量是占形成胶粒的组分的摩尔总量的大约5％至80％，更优选从大约10％至大约70％。

按照本发明的一个方面，混合胶粒优选包含经PEG修饰的磷脂、聚合类表面活性剂或它们的混合物，它们的存在充分增加了集合体在血流中存留时间。或者，或除此之外，还有胆汁酸，溶血磷脂或它们的混合物也可用于增加集合体的存留时间。能增加集合体在血流中的存留时间的化合物的含量按摩尔计优选占形成胶粒的化合物的总量的大约10％至80％，更优选按摩尔计从大约25％至70％。

根据本发明的所述集合体的存留时间增加是指，注射30分钟后，血流中集合体的含量至少是集合体注射剂量的50％，优选至少60％。相反地，血流中相应的脂质体制品的含量，在注射30分钟后，典型地低于脂质体注射剂量的50％，尤其低于40％。类似地，注射1小时后血流中集合体的含量至少有50％，并且大部分情况至少是集合体注射剂量的60％，而血流中相应的脂质体制品的含量低于脂质体注射剂量的40％，大部分情况下低于30％。特别地，对于具有平均直径大约是1μm的脂质体而言，1小时后的脂质体含量典型地是低于脂质体注射剂量地10％。

活性剂例如那些在前面列出的治疗剂或诊断剂，可有效地与胶粒组分缔合，尤其是那些包含合适的两亲结构的与能形成胶粒的化合物具有亲和力的活性剂或这那些可以在胶粒组分中被包封的活性剂。活性剂可以占胶粒总量的大约10％至大约80％，优选大约25％至大约70％。

优选地，影像增强剂与胶粒化合物缔合，尤其是MRI反应化合物。与胶粒缔合的MRI反应物优选地以能被包含在胶粒结构中的两亲化合物的形式存在，例如通过所述化合物的亲脂部分与能形成胶粒的组分的亲脂部分之间的疏水性相互作用。

根据一个优选的实施方案，MRI两亲反应化合物是被螯合分子络合的包含亲脂基团的顺磁性金属离子，即下文所指的顺磁性螯合离子。优选的顺磁性金属离子具有21-29，42，44或57-58的原子序数。这包括过渡金属离子或镧系稀土元素，所述稀土元素具有至少一个、更优选五个或更多的未成对电子并且磁力矩至少是1.7博尔磁子。优选的顺磁性金属包括，但不限于，铬(III)，锰(II)，锰(III)，铁(II)，铁(III)，钴(II)，镍(II)，铜(II)，镨(III)，钕(III)，钐(III)，钆(III)，铽(III)，镝(III)，钬(III)，铒(III)，铕(III)以及镱(III)；另外，本发明的杂聚物还可与一个或多个超顺磁性颗粒共轭。

本领域技术人员将根据检测包括组织在内的目标物所需要的剂量以及其它因素例如金属对主体的毒性来选择金属。通常，每一种金属所希望的用量与其驰豫是相称的，通过金属的生物分布，药动学和代谢来修正。三价阳离子，Gd3⁺尤其首选用作MRI造影剂，因为它高度的驰豫和低毒性，更进一步的优点是它在生物学上仅以易氧化的状态存在，这使患者体内不希望出现的金属代谢减到最少。另一种有用的金属是Cr3⁺，它相对而言较便宜。

螯合分子优选两亲螯合剂。特别地，所述分子优选包含螯合的亲水部分，包括一个或多个极性基团(作为顺磁性金属的配体并与其络合)和能与其它可形成胶粒的化合物的亲脂部分相互作用的亲脂部分，以使络合物整合到胶粒结构中。螯合部分优选本技术领域常用的螯合酸，更优选螯合的聚羧酸或聚氨基羧酸。本技术领域已知的合适的螯合剂包括具有亚甲基磷酸基团的酸，具有亚甲基糖胺酸基团的酸，具有羧基亚乙基基团的酸，或者是具有羧基亚甲基基团的酸。螯合剂的例子包括，但不限于，二亚乙三胺五乙酸(DTPA)，1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四醋酸(DOTA)，1，4，7-三羧甲基1，4，7，10四氮杂环十二烷三醋酸(DO3A)，乙二胺四乙酸(EDTA)，和1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-四醋酸(TETA)。其它的螯合剂有乙烯二-(2-羟基-苯基甘氨酸)(EHPG)，及其衍生物，包括5-C1-EHPG，5Br-EHPG，5-Me-EHPG，5t-Bu-EHPG，and 5sec-Bu-EHPG；苯并二亚乙基三胺五醋酸(benzo-DTPA)及其衍生物，包括二苯并-DTPA，苯-DTPA，联苯-DTPA，苄-DTPA，以及二苄DTPA；双-2(羟苯基)-乙烯-二胺二乙酸(HBED)及其衍生物；含有至少3个碳原子的大环化合物类，更优选至少6个碳原子，并且至少两个杂原子(O和/或N)，该大环化合物可包含一个环，或两个或三个杂环原子处相连的环，例如苯并-DOTA，二苯并-DOTA，苯并-NOTA，其中NOTA是1，4，7-三氮杂环壬烷N，N’，N”-三醋酸，苯并-TETA，苯并-DOTMA，其中DOTMA是1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四(甲基四醋酸)，或苯并-TETMA，其中TETMA是1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-(甲基四醋酸)；1，3-丙二胺四醋酸(PDTA)的衍生物和三亚乙基四胺六醋酸(TTHA)的衍生物；1，5，10-N，N′，N″-三(2，3-二羟苯甲酰基)-三儿茶酯(LICAM)的衍生物；1，3，5-N，N′，N″-三(2，3-二羟苯甲酰基)氨甲苯(MECAM)的衍生物；或DO3A的衍生物，如HP-D03A(1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-(2-羟丙基)-4，7，10-三醋酸)。本发明考虑的具有代表性的螯合剂和螯合基团如WO98/18496、WO 86/06605、WO91/03200、WO95/28179、WO96/23526、WO97/36619、PCT/US98/01473、PCT/US98/20182、以及美国专利Nos.4,899,755、5,474,756、5,846,519和6,143,274中所述，在此作为参考被整体并入。优选的用于本发明的螯合剂是DO3A，HP-D03A，DTPA或DOTA。尤其优选使用DO3A或HP-DO3A的螯合部分。

亲脂性基团可按照已知的技术与螯合分子的螯合部分分别相连(例如，上述任何螯合剂)。例如，疏水性基团可通过酯键或胺键与羧酸残基相连。可通过酯键与螯合基团相连的合适的亲脂性基团的实例包括(C₁-C₂₄)醇基，优选(C₈-C₂₄)，更优选(C₁₀-C₂₀)，直链脂肪醇，例如，举例而言，n-癸醇，月桂醇，肉豆蔻醇，鲸蜡醇，或者n-十八烷醇；芳香族醇，如，举例而言，苄基醇，单-、二-或三-(C₁-C₄)烷基-苯基醇；以及它们的混合物。类似地，优选的通过胺键与螯合酸的羧酸基团相连的胺包括(C₁-C₂₄)烷基，优选(C₈-C₂₄)烷基，更优选(C₁₀-C₂₀)烷基的直链脂肪胺，例如，举例而言，n-癸胺，n-十二烷胺，n-十四烷胺，n-十六烷胺或n-十八烷胺；芳香族胺，例如，举例而言，苄基胺，单-、二-或三-(C₁-C₄)烷基-苯基胺；以及它们的混合物。

优选的两亲螯合物以及它们与顺磁性金属的复合物的例子和制备已被公开，例如，在美国专利6,342,598或6,652,834中，在此处均作为参考被并入。

或者，前面所列的任何polyaminocarboylic acids的氮原子可以由(C₈-C₂₄)、更优选(C₁₀-C₂₀)的直链烷基或羟烷基基团提供，如上文引用的美国专利6,342,598中所述。

或者，聚羧基螯合剂可以由亲脂疏水性基团提供，当存在于螯合剂中时，所述基团与分子骨架的亚烷基片断、或与羧酸酯官能团的alpha-碳或与羟基基团相连，如US6,652,834所述。

尤其优选的是那些在N-10位置具有亲脂基团的1，4，7-三羧甲基1，4，7，10四氮杂环十二烷三醋酸(D03A)衍生物，例如[10-[2-(双十八烷胺)-2-氧乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三醋酸，它形成相应的[10-[2-(双十八烷胺)-2-氧乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三醋酸(3-)]钆络合物。

顺磁性螯合金属离子的制备可以按照已知的方法进行，如，举例而言，G.W.Kabalka et al.，Magnetic Resonance in Medicine 8(1988)，89-95中教导的。

根据另一个实施方式，MRI反应物可以是纳米磁铁微粒。纳米磁铁微粒可以是，例如，与带负电的两亲材料(以及，任选地，一种中性材料)混合，例如那些在前面提到的，以稳定所述微粒并保持它们以胶粒形式分散在水溶液中。美国专利No.5,545,395，在此处作为参考被并入，给出了一些制备所述稳定的磁铁微粒的方法，例如通过使用DPPA与Pluronic_的混合物来稳定所述微粒。

除上述指出的那些之外，可以使用任何其它能与胶粒结构稳定缔合的MRI反应物。例如，任何包含超极化原子的两亲化合物，例如那些前面已经提到的，优选¹³C，可以适合于加入按照本发明集合体的与脂质体缔合的胶粒中去。胶粒组分中MRI反应物的摩尔含量，尤其是顺磁性金属离子的，应是足够高的以获得渴望达到的诊断造影增强作用。优选地，MRI反应物地摩尔含量优选占可形成胶粒的材料的总摩尔数的至少25％，更优选至少50％并且最优选至少70％。代表性地，通常不希望高于大约99％的量，由于这将使胶粒中带电组分的含量过度降低。更优选地，MRI反应物的摩尔量不高于大约95％。

靶向性配体

有利地，根据本发明集合体的胶粒可以进一步包含具有靶向活性的化合物，即，靶向性配体，使得集合体与特异的靶部位结合。

包含在胶粒中的靶向性配体可以是合成的、半合成的、或天然的。可用作靶向性配体的材料或物质包括，例如，但不限于蛋白质，包括抗体、抗体片断、受体分子、受体结合分子、糖蛋白类和血凝素类；肽类，包括寡肽和多肽；假肽；糖类，包括单糖和多糖；维生素类；类固醇类，类固醇类似物，荷尔蒙，辅助因子，治疗剂和遗传物质，包括核苷、核苷酸以及多聚核苷酸。

术语“靶”或“靶分子”是指任何靶向性配体可以结合的物质，如蛋白质或多肽，细胞，受体，糖，脂，等等。

合适的靶以及靶向性配体的例子已经公开了，例如，在美国专利No.6,139,819中，作为参考被并入本文。

靶向性配体可以是与胶粒组合物的其它组分混合的两亲化合物本身或者是与用来形成胶粒的两亲分子结合的化合物。

在一个优选实施方式中，靶向性配体可以与胶粒的两亲分子通过共价键结合。在这种情况下，需要存在于两亲分子上的特殊的反应部位将依靠特异性靶向性配体来与其结合。举个例子，如果靶向性配体可以与两亲分子通过氨基基团结合，两亲分子上合适的反应部位可以是异硫氰酸酯基团(将形成一个硫脲键)，羧酸或起作用的酯(以形成一个胺键)，醛基团(以将亚胺键还原成烷胺键)，等等；如果靶向性配体可与两亲分子通过硫醇基团结合，合适的附属于两亲分子的反应部位包括卤化乙酰基衍生物或马来酰亚胺(以形成硫醚键)；以及如果靶向性配体可以通过羧基基团与两亲分子结合，两亲分子上合适的反应部位可以是胺和酰肼(以形成胺键或烷胺键)。为了与所希望的靶向性配体共价结合，从而形成胶粒的两亲化合物的至少部分含有合适的反应部位并且包含附属官能团的靶向性配体将根据已知技术与其结合，例如通过将其加入包含胶粒的两亲组分的水分散体中。在制备胶粒前，两亲化合物可以与所希望的靶向性配体混合，并且所得的混合物可用于胶粒的制备过程中。或者，靶向性配体可在胶粒制备过程中与各个两亲化合物结合或者直接与包含在胶粒结构中的两亲化合物结合。

根据另一个实施方式，靶向性配体还适合与胶粒通过物理和/或静电作用缔合。举个例子，对附属部位具有高亲和力和选择性的功能部位可被引入两亲分子中，而附属部位将与靶向性配体结合。例如，抗生物素蛋白(or streptavidin)部位(对生物素具有高亲和力)可与磷脂共价结合而附属的生物素部位可以被引入到适当的靶向性配体中，如肽或抗体中。生物素标记的靶向性配体从而通过抗生物素蛋白-生物素偶合系统与胶粒中被抗生物素蛋白标记的磷脂缔合。或者，磷脂和靶向性配体都由具有生物素部位提供并且足以通过抗生物素蛋白(能桥接两个生物素部位的双功能组分)相互偶合。磷脂和多肽的生物素/抗生物素蛋白偶合的例子还在上文引用的US6,139,819中公开。或者，范德华作用，静电作用以及其它缔合方法可以使磷脂分子与靶向性配体缔合或结合。

按照另一个实施方式，靶向性配体可以是与形成胶粒的组分混合的化合物，例如，举个例子，如国际专利申请WO98/18501或99/55383中公开的脂肽，作为参开均被并入本文。或者，可以首先制备胶粒，其包含具有能与相应的靶向性配体的附属部位相互作用的合适基团的化合物；然而，所希望的靶向性配体被加入胶粒混悬液中，与胶粒上相应的附属部位结合。此外的另一个选择，制备集合体，其含有包括具有能与靶向性配体的相应附属部位相互作用的合适的基团的化合物的胶粒；然后，所希望的靶向性配体被加入集合体混悬液，与胶粒上相应的基团结合。集合体可以被导向的合适的特异性靶的例子，例如，纤维蛋白和被激活的血小板上的GPIIbIIIa结合受体。纤维蛋白和血小板实际上通常存在于“血栓”中，即，在血流中形成的血凝块并且可导致血管堵塞。合适的结合肽已被公开，例如，在上文引用的US6,139,819中。其它的靶向纤维蛋白的特异性结合肽已被公开，例如，在国际专利申请WO02/055544，在此处作为参考被并入。其它的重要的靶的例子包括vulnerable plaques中的受体以及肿瘤特异性受体，例如kinase domain region(KDR)以及VEGF(血管上皮生长因子)/KDR复合物。适合于KDR或VEGF/KDR复合物的结合肽已被公开，例如，在国际申请WO03/74005以及WO03/084574中，在此处均作为参考被并入。

包含所希望的两亲组分、顺磁性螯合离子以及、任选地，靶向剂的混合胶粒，可以按照本领域已知的技术制备，例如按照欧洲专利EP804251中公开的制备方法，在这里作为参考被并入。

例如，组分在搅拌下被分散于液态水载体中。合适的液态载体的例子是水，生理盐水(0.9％氯化钠)，磷酸盐缓冲液(10mM，pH7.4)，HEPES缓冲液(20mM，pH7.4)，5％w/w葡萄糖水。例如，上述化合物可以大约1至100mg/ml的浓度分散于液态水中并通过温和的机械搅拌或超声波溶解。

胶粒在与含有脂质体的混悬液混合之前可以水分散物的形式(例如，在用于其制备的水载体中)储存。或者，胶粒混悬液可以按照常规方法被冻干，以除去液体并将最终的干燥产物储存待用。

集合体

根据本发明的集合体的制备可以按照常规方法获得，例如通过将包含脂质体的水混悬液(根据上文引用的任一制备方法获得)与含有按上述方法获得的胶粒的水混悬液混合。

任选地，所得的混合物可以经过一次或多次洗涤步骤，以去除剩余的未缔合的组分。针对本发明的目的，术语“洗涤步骤”的意思包括任何用于从所希望化合物的混悬液中分离和/或至少部分去除剩余未缔合材料、组分、微粒等等的方法或步骤。合适的分离方法包括，例如，透析，倾注，离心，超滤或微滤，通常优选离心。合适的常规洗涤溶液可用于洗涤步骤中，例如蒸馏水，磷酸盐缓冲液，Tris/甘油缓冲液，生理盐水或5％葡萄糖液。本发明的包含集合体的混合物的洗涤相从而被分离和收集；任选地，新获得的含有集合体的混悬液最后在使用前被稀释，例如，用任何上述引用的生理上可接受的载体。

本发明的包含集合体的混悬液可被储存以待随后的施用或者可以直接被患者服用。如果需要，混悬液的液态载体可以被去除(例如，通过冷冻干燥)以获得集合体的干燥粉末，该粉末可以在重新制备之前被相对长时间的保存。

或者，集合体的两种组分可以作为单独的组合物以干燥的形式(例如，冷冻干燥)被储并在施用前重新制成混悬液。采用液态水载体的重新制备可以分别针对两种干燥的包含集合体不同组分的组合物进行，如此获得的两个单独的混悬液随后被混合以获得所希望的集合体混悬液。或者，两种干燥的组合物可以混合在一起然后被重新制成一种带有液态水载体的混悬液。根据优选的实施方式，首先用生理学可接受的水载体重新制备干燥的胶粒组合物并且所得的混悬液随之用于干燥的脂质体组合物的重新制备，最终获得集合体的混悬液。

对于集合体的制备，最好加入比所希望的胶粒的量更多的胶粒以获得最终的集合体，尤其是因为一定量的所述胶粒在选择性的集合体混悬液的洗涤步骤中被除去。过量的胶粒是有利的，由于胶粒制品中负电荷(或正电荷)的量多于脂质体混悬液中的正电荷(或负电荷)，该电和被称作“电荷等价”。术语“电荷等价”(EC)是指每摩尔化合物的电荷数；因而，每摩尔的一价离子化合物含有一个电荷等价，一摩尔的二价离子化合物含有两个电荷等价，以此类推。总体而言，胶粒组合物的EC量优选与脂质体组合物中的EC量相当(即，EC比大约是1∶1)。胶粒制品的EC与脂质体制品的EC之间的比例因而可以变化，例如，从大约1∶2至大约3∶1，优选从2∶3至3∶2。为了获得集合体有效性的实用指示，申请人发现使用脂质体混悬液和集合体混悬液的ζ-电势(zeta-potential)是有用的。ζ-电势，也称作动电电势，是胶质颗粒表面电势相对于远距离的本体介质的电势。它可以根据常规的显微电泳分析方法测定，例如通过使用激光-多普勒-风力测定仪在强烈的电场中测定粒子速率。例如，ZetaSizer 3000Has(MalvemInstrument GmbH)可以有效地被使用。实践中，首先测量脂质体混悬液的初始ζ-电势，相对地，根据脂质体是否含有正电荷或负电荷化合物，会有一个正的或负的值。然而，测量包含集合体的最终的混悬液(即，在必要的除去可能的未结合的胶粒的洗涤步骤之后)的ζ-电势。通常，相对于脂质体，混悬液中剩余的带相反符号的胶粒或多或少具有显著减小的ζ-电势的绝对值。尤其，带有正电荷的脂质体混悬液相对于剩余的带负电荷的胶粒混悬液显示出减小的ζ-电势，而包含负电荷的脂质体混悬液相对于剩余的带正电荷的胶粒混悬液显示出相对增大的(即，绝对值减小)ζ-电势。根据申请人的观察，优选的集合体是那些相对于脂质体混悬液初始ζ-电势显示有绝对值大量减少的混悬液，即，减少所述初始值的至少50％，优选至少75％并且更优选至少90％。特别优选的集合体混悬液是那些显示具有大量中性ζ-电势(即，0±15mV，对比脂质体混悬液初始电势，相应于大约100％的绝对减小)或者对比于脂质体混悬液的初始ζ-电势具有相反的ζ-电势符号。根据申请人的观察，当集合体混悬液的ζ-电势对比于脂质体混悬液初始ζ-电势在符号上保持相当于低于50％的绝对减小时，这可能是与脂质体缔合的胶粒数量不够的表征。

根据优选的实施方式，集合体中带电胶粒的含量是例如使得所述集合体实质上具有中性ζ-电势或者对比于脂质体混悬液的ζ-电势具有相反的符号。根据申请人的观察，集合体并不需要为获得所述中性或相反符号的ζ-电势而包含超过胶粒的等价电荷。事实上，观察到由带正电的脂质体和带负电的胶粒按胶粒的EC与脂质体的相反的EC比例大约是1∶5(即超出脂质体上正电荷的5倍)组成的集合体即可显示实质上为中性或负的ζ-电势。不愿其它特殊的学说相结合，但可以假设胶粒中含有的(负)电荷是排列在集合体的外表面的；如果与脂质体缔合的胶粒数量足够高，脂质体上过量的相反的(正)电荷可以被所述胶粒屏蔽，至少部分地被屏蔽。从而，由于微粒上测量到的ζ-电势受所述微粒外表面上存在的电荷的强烈影响，如果胶粒的(负)电荷量足以部分屏蔽脂质体的(正)电荷，那么即使集合体从脂质体获得了多余的(正)电荷，其仍然可显示出负的ζ-电势。当然上述情况也适用于由带负电的脂质体荷带正电的胶粒组成的集合体。

冷冻干燥后的造影剂经过重新制备后形成的可注射的组合物应当尽可能的与血液等渗。因此，在注射前，还可以在包含本发明集合体的混悬液中加入少量的等渗剂。等渗剂是通常用于医学上的生理溶液如，举例而言，生理盐水(0.9％NaCl)，2.6％甘油溶液或5％葡萄糖溶液。水混悬液的重新制备通常通过将干燥后的组分简单溶解并温和搅拌而获得。

重新制备的液体的体积和浓度最好是平衡的以使将被使用的制剂大体上等渗。因此重新制备的液体的体积和浓度的选择由存在于冷冻干燥产品中稳定剂(以及其它填充剂)的种类和用量决定。

本发明集合体可以放入包含本发明集合体或其各自单独组分的诊断盒中，任选地进一步包含液态水载体。

根据第一个实施方式，所述诊断盒是包含本发明集合体和液态水载体的双组分诊断盒。所述双组分诊断盒包括两个单独的容器或双室容器。

在前述情况下，第一个容器优选常规的隔膜密封的玻璃瓶，其中含有冷冻干燥后的(按照上述任一方法获得的)集合体的玻璃瓶用隔膜密封，液态载体可以从该隔膜中注入以重新制备集合体混悬液。液态载体被装入第二个容器中，第二个容器优选是注射管。注射管优选预先用重新制备的混悬液充满并随后通过注射用于施用造影剂。与前面的集合体不同，第一个容器或者可以含有分别冷冻干燥的胶粒和脂质体组合物的混合物，该混合物通过用水载体重新制备后能形成所希望的集合体。虽然通常用手摇晃容器即可提供得到所需要的重新制造后的混悬液的效力，但是可以对容器采用具有充足效力的直接的或认可的方法(如，旋涡搅拌器)，以确保适当的集合体混悬液的重新制备。双室容器优选双室注射筒，其中组分被分开储存，例如通过可去除的隔膜，并且一旦冻干物通过温和摇晃被重新制造后，即可直接注射到造影剂中。和前面一样，可以采用具有充足效力的直接的或认可的方法。

本领域普通技术人员应当能理解，其它能够将干燥粉末与水溶液以搅拌方式混合的双室的重新制备系统也可用于本发明范围中。根据另一个实施方式，根据本发明的诊断盒至少是包含胶粒组合物、脂质体组合物以及，任选地，水载体的双组分盒。该盒优选具有至少两个独立容器，一个含有冻干的脂质体组合物而另一个含有所需的冻干的胶粒组合物(例如，其胶粒含有适当的靶向性配体)。第三个选择性的容器，含有用于重新制备的水载体，最好放入盒中。如果需要的话，进一步含有冻干胶粒(例如，含有第二种靶向性配体)或脂质体组合物的额外的容器可以放入盒中。关于给药方法，胶粒混悬液首先在水载体中被重新制备，所得的混悬液接下来用于脂质体组合物的重新制备，从而获得所需要的集合体混悬液。

无需专门的容器玻璃瓶或连接系统；本发明可以使用常规容器、玻璃瓶以及适配器。唯一的要求是填充器与容器之间要有很好的密封。密封的质量，因此，成为主要考虑的因素；任何密封体的脱落可能使得物质不被希望地进入玻璃瓶。此外为确保无菌，必须保持产品填充器周围的真空状态或减压以确保安全且适当的重新制备。用气体密封的容器中的填充器的材料优选弹性体化合物或基于弹性体的多组分制剂，例如聚异丁烯或丁基橡胶。可使用从Daiko Seiko ltd.能方便获得的丁基橡胶填充器。

本发明组合物可以常规治疗或诊断组合物的方式使用。例如，当组合物包含MRI反应物，对于目标组织，例如血管生成部位，进行造影时，优选特定的MR技术和脉冲程序以增强该部位与其背景血管和组织的对比度。这些技术包括(但不限于)，例如，企图让血管变黑的黑血管造影术程序，如，自旋回波饱和程序(如，Alexander等，MagneticResonance in Medicine，40(2)：298-310(1998))和流速梯度变化程序(见，如Edelman等，Radiology，177(1)：45-50(1990))。这些方法还包括增强对比度区别的流速独立技术，例如将增加含有靶部位的组织，如血管源性肿瘤，与背景组织之间的对比度的翻转复原或饱和恢复程序。最后，磁化传递程序还可以通过这些制剂改善对比度(见，如Goodrich等，Investigative Radiology，31(6)：323-32(1996))。

本发明集合体优选以可注射组合物的形式给患者施用。给药方法优选非肠道注射，即静脉地、动脉地、鞘内地、间质地、皮内地或腔内地。针对活跃血管生成的造影，优选静脉或动脉给药。

当集合体含有MRI反应物和靶向性配体时，要考虑到患者将接受至少10％剂量的足以增强靶部位(如，血管翳部位)MR信号的造影剂。在注射包含MRI反应物的集合体之后，患者在MRI机器中被扫描以测定包含靶部位的位置。在治疗方法中，靶部位被定位后，立即给予患者治疗剂，如果需要，患者可随后被扫描以观察治疗效果。

提供下列实施例以详细阐述本发明。

实施例

实施例中采用了下列材料：

SPC3	天然大豆磷酸胆碱(脂类)的氢化衍生物∶平均组合物：4∶1(w/w)二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)以及二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)
		Ethyl-SPC3	SPC3的乙基衍生物(按照R.C.McDonald等描述的方法制备，Journal of Pharmaceutical sciences，第88卷，第9期，第896-900页，1999年9月))
DSPE-PEG2000	经PEG2000修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，钠盐(Genzyme)
		生物素标记的DPPE-PEG2000	具有生物素标记了的末端的DSPE-PEG2000(AvantiPolar Lipids)
DSPG-Na	二硬脂酰磷脂酰甘油钠盐(Genzyme)IUPAC：1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-[磷-rac-(1-丙三醇)]
		Pluronic F108	环氧乙烷/环氧丙烷嵌段共聚物(Fluka)
Gd-复合物	([10-[2-(双十八烷氨基)-2-氧乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三乙酸酯(3-)]钆复合物，按照US6,652,834实施例5制备
		14C-甘油三棕榈酸酯	放射性14C标记的甘油三棕榈酸酯(Amersham)
Tween 20	聚氧乙烯20脱水山梨醇单月桂酯(Sigma)
		PBS	磷酸盐缓冲液：10mM磷酸钠，NaCl0.9％w/w，pH＝7.4

脂质体和集合体混悬液的ζ-电势在0.4M葡萄糖中采用MalvernZetasizer 3000Has测定。

实施例1

直径1.0μm带正电荷的脂质体的制备

将1037.7mg(1，332mmol)SPC 3，74.9mg(0.089mmol)Ethyl-SPC3，和137.4mg(0.355mmol)胆固醇(Fluka)溶解于17ml甲醇和33ml氯仿的混合液中。在0.2μm无菌过滤器(Macherey Nagel)上过滤该溶液并加入痕量的作为标记物的¹⁴C-甘油三棕榈酸酯(10μl，于氯仿中；特异性50μCi/ml)。40℃减压条件下在旋转蒸发器(Rotavapor)中蒸发去除有机溶剂，并在同样温度和1托压力下隔夜干燥残余物。

50ml碘美普尔溶液(Bracco Imaging)，相应于每毫升280mg碘，被加入干燥脂类中，使所得溶液含有大约25.3mg脂/ml(Clip)。然后在80℃和轻微搅拌下加热溶液大约半个小时以使脂与脂质体囊泡结构进行水合作用。随后脂质体混悬液连续五次挤压通过2.0μm孔径的聚碳酸脂过滤器(Nucleopore^TM)。

为测定脂质体结构中碘的装胶囊率，1ml整的经过滤的制品用1LPBS缓冲液透析(透析袋购自Serva；截断分子量≈10.000-15.000)大约10-12小时。重复一次透析操作以确保所有游离的、未包封的碘被去除了。在透析了的溶液(0.9ml)中加入10％十二烷基硫酸钠(0.1ml)并在40℃下加热混合物5分钟以破坏脂质体并释放被包裹了的碘。最终制品中的碘含量通过测量260nm下溶液的吸光度来测定。特别地，最终制品含有230mg/ml碘美普尔(相应于每毫升混悬液中有113mg被脂质体包裹的碘)。

有效存在于制品中的脂含量通过液体闪烁分析仪(Packard2200-CA，TRI-CARB_)测量样品的放射性来测定。特别地，测得脂浓度(CUp)是25mg/ml。

过滤后的全部脂质体混悬液通过透析(透析袋购自Serva；截断分子量≈10.000-15.000)来去除混悬液中游离的未包封的碘并且随后超滤(Amicon cell membrane)浓缩以使脂浓度增加大约两倍(大约30mg/ml)。

脂质体囊泡的平均直径以及囊泡的尺寸分布采用MalvernMasterSizer MS20(Malvem Instruments)通过动态光散射法(DLS)(也称作“相关光谱学”-PCS)测定。有效测定表明本制品的囊泡平均尺寸是大约1.05μm。

实施例1a

采用与实施例1相同的方法，但有机溶剂被蒸发后所得的干燥脂类用50ml0.4M葡萄糖液(代替50ml碘美普尔_溶液)进行水合。在实施例1的挤压过程之后，得到平均直径大约是1μm的脂质体。

实施例2

直径0.4μm带正电荷的脂质体的制备

跟从实施例1同样的方法，额外的步骤是在5次挤压通过2.0μm聚碳酸脂过滤器后，脂质体混悬液进一步用1.0μm孔径的聚碳酸脂过滤器过滤5次并再用0.6μm孔径的聚碳酸脂过滤器过滤5次。

被包封的碘：67.7mg/ml；脂质体平均直径：0.42μm

实施例3

直径0.2μm带正电荷的脂质体的制备

跟从实施例2同样的方法，额外的步骤是在5次挤压通过0.6μm聚碳酸脂过滤器后，脂质体混悬液进一步用0.4μm聚碳酸脂过滤器过滤5次并用0.2μm聚碳酸脂过滤器过滤5次。

被包封的碘：33.6mg/ml；脂质体平均直径：0.22μm

实施例1-3的脂质体制品显示具有大约+45mV±2的ζ-电势。

实施例4

具有Gd-络合物的带负电荷的胶粒的制备

200mgGd-络合物和200mgDSPE-PEG2000溶解在10ml蒸馏水中并且在70℃将混合液用超声法(Branson Sonifier，output 40)混匀大约30分钟。

胶粒混悬液的质子自旋驰豫relaxivities在0.47Tesla(20MHz)条件下通过操作Minispec PC-120(Bruker)集合体测量。通过“翻转复原”法EDM 510A(EDM＝Experiment Definition Module)被用于测量自旋-晶格的驰豫时间T1。通过Carr-Purce11-Meiboom-Gill技术(GPMG)EDM610A被用于测量自旋-自旋驰豫时间T2。测量到的1mM上述混悬液制品的纵向(r1)和横向(r2)驰豫(以s^-1mM^-1＝1/T表示)如下：

(r1)＝22.6；(r2)＝26.3

实施例5

包括带正电荷的脂质体和具有Gd-络合物的带负电荷的胶粒的集合体的制备

三种集合体的制备通过将4ml根据实施例4制备的胶粒混悬液与根据实施例1至3制备的三种脂质体混悬液各16ml混合而实现，以分别获得集合体混悬液A1、A2、和A 3。轻微搅拌混合物4小时然后在4℃隔夜放置。接下来，将混悬液在室温下放置并以30’000g(HeraeusSupratech 22)离心一小时。脂质体-胶粒集合体随后从离心了的混悬液的片状沉淀(弃去上浮物)中重新获得并被悬浮在0.4M葡萄糖液中，至总体积为16ml并轻微搅拌一整夜。

对于每一个制品，碘含量以及T1和T2驰豫时间分别如实施例1和4中阐述的通过将0.4ml各个制品与3ml血液(兔)混合而测定。然后分别从T1和T2值计算出驰豫r1和r2。测得的制品A1，A2和A3的驰豫值r1和r2(以s^-1mM^-1表示)如下：

A1：r1＝21.1，r2＝25.2；

A2：r1＝19.6，r2＝23.5；

A3：r1＝22.7，r2＝25.6。

对于三个制品，测得的ζ-电势是大约+5mV±1。

实施例5a

跟从与实施例5相同的方法，但是4ml实施例4的胶粒混悬液是与16ml实施例1a的脂质体混悬液混合。轻微搅拌混合液4小时然后在4℃隔夜放置。接下来，混悬液被放置在室温下并且通过尺寸排阻色谱法将形成的集合体与剩余的未结合的胶粒分离，用0.4M葡萄糖液洗涤。

实施例6

包括带负电荷的脂质体和带正电荷的具有Gd-络合物的胶粒的集合体的制备

根据实施例1描述的方法制备带负电荷的脂质体混悬液，所述混悬液包括溶解在20ml碘美普尔溶液中的840.5mg(1.079mmoles)SPC3，58.1mg(0.073mmoles)DSPG.Na以及113.7mg(0.294mmoles)胆固醇。囊泡平均尺寸是大约0.95μm。

根据实施例4描述的方法制备带正电荷的胶粒的混悬液，其包括溶解在20ml蒸馏水中的200mgGd-复合物，300mgPluronic F108和61.6mg乙基-SPC3。胶粒平均直径为约0.80nm。

将1ml脂质体混悬液与1ml胶粒混悬液按照实施例5的方法混合。重新获得的集合体显示下列驰豫值：r1＝21.6s^-1mM^-1，r2＝24.2s^-1mM^-1。

脂质体制品的初始ζ-电势是大约32mV，而最终集合体制品的ζ-电势是大约-3mY。

实施例7

包括带正电荷的脂质体和具有磁铁微粒的带负电荷的胶粒的集合体的制备

带正电荷的脂质体混悬液按照实施例1描述的方法制备。

用DPPA/Pluronic F108(FE/DPPA/Pluronic F108比例是3/15/15，以mg/ml为单位)包衣的磁铁微粒按照美国专利5,545,395制备。溶液用10ml 5％葡萄糖稀释。

将5ml脂质体混悬液与4.5ml磁铁胶粒混悬液混合，在旋转搅拌下放置3小时，然后以3500g离心30分钟。弃去上清液并且用50ml 5％葡萄糖稀释含有胶粒的溶液。测得的所得集合体混悬液的驰豫值r2是366.6s^-1mM^-1。

实施例8

包括含有Gd-络合物的带正电荷的脂质体和具有Gd-复合物的带负电荷的胶粒的集合体的制备

将1156.5mgSPC3，163.5mg胆固醇，178.5mg乙基-SPC3和375.0mgGd-复合物溶解于100mlCHCl₃中。在50℃的旋转蒸发器上蒸发溶剂并且在真空烤炉中干燥残余物一整夜。干燥的脂质体膜通过在65℃轻微搅拌下于45分钟内加150ml碘美普尔(280mg碘/ml)而被重新水合。所得的脂质体混悬液随后5次通过2μm聚碳酸酯过滤器(Nucleopore)并最后用0.4M葡萄糖透析，以除去未被包裹的碘美普尔。

测得的脂质体的驰豫值如下：

r1 9,3s^-1mM^-1

r2 12,6s^-1mM^-1

将5ml含有26.02mg/mlGd-复合物和20.04mg/mlPE-PEG200的在水里的胶粒混悬液加入20ml上述脂质体混悬液中。将混合夜在室温放置大约三小时然后以35’000离心45分钟。弃去上浮物并让重新获得的集合体在0.4M的葡萄糖中重新被混悬。

测得的集合体混悬液的驰豫值如下：

r1 16.9s^-1mM^-1

r2 21.6s^-1mM^-1

实施例9

集合体制品的血液循环评估

评估根据实施例5获得的集合体制品的各项血液循环特性并且与相应的根据实施例1至3获得脂质体制品做比较。

接下来，实施例1，2和3的脂质体制品分别被确定为L1(平均尺寸1.05μm)，L2(平均尺寸0.42μm)和L3(平均尺寸0.22μm)，而相应的如实施例5(即，通过各所述脂质体制品与根据实施例4得到的胶粒制品混合)所述得到的集合体制品被分别确定为A1，A2和A3。脂质体和集合体制品随后被静脉注射到六组(三组注射脂质体，三组注射集合体制品)，每组7只大鼠(从尾静脉，8ml混悬液每kg大鼠)，并且不同时间测量每个注射的制品中碘和钆(血液清除)的浓度，通过在时间间隔为5，10，15，30，60，90和120分钟时处死每组的七只大鼠中的一只。每次钆浓度的测定如实施例4所述并且以注射剂量的初始T1和T2值的百分数表示。碘浓度在经过用100μlSDS(65℃搅动10分钟)和100μl35％的HClO₄(离心10分钟)处理500μl被抽取的血液等分液后通过HPLC测定，然后，上清液通过HPLC柱(LiChrospher 10RP-18，Merck；A相：10mM磷酸钾缓冲液，pH 6.0；B相30％MeOH，70％A相；1ml/min；检测UV：240nm)；碘浓度以注射剂量中初始碘浓度的百分数表示。图2-4分别显示了集合体制品A1，A2，和A3中，碘(有菱形的线)从血液中的消除以及钆从血液中的消除(T1，有方块的线；T2，有三角的线)。

从所述图中推得，集合体制品A1，A2和A3的碘和钆的浓度-时间变化大体相似，表明制品具有大体相似的血液消除动力学并且当注射到血液循环后(不存在含碘脂质体与含钆胶粒的分离)集合体是稳定的。另一方面，如图5-7所示(分别阐明了制品A1-L1，A2-L2和A3-L3中碘的时间变化)，与各集合体A1，A2和A3(有三角的高一些的线)比较，脂质体制品L1，L2和L3(有方块的低一些的线)显示出较快的血液清除动力学，从而暗示脂质体周围的胶粒层是脂质体的某种“秘密”屏障，使得它们在血液循环中的存留时间增长。

实施例10

体外靶向性集合体的MR造影

a.具有生物素标记胶粒的集合体的制备

脂质体混悬液根据实施例1的方法制备。

胶粒混悬液根据实施例4的方法制备，通过将200mgGd-复合物，150mgDSPE-PEG2000和50mg生物素标记DSPE-PEG2000分散在10ml蒸馏水中。

在搅拌下(磁力搅拌)向5.25ml胶粒混悬液中加入40ml脂质体制品并且持续搅拌3小时。然后，将混悬液以25’000g离心30分钟，脂质体-胶粒集合体从离心后混悬液的小球中重新获得(弃去上清液)，然后用一定体积的PBS将其重新混悬在35ml的总体积中。

从弃去的上清液中测得的较高的驰豫时间T1(1800ms)和T2(2000ms)可以估算到钆基本不存在于这个相中从而大体上全部的胶粒都与脂质体结合了。

b.Neutravidin_底物的制备

为评估本发明集合体的造影效果，使用了两个中空的光纤盒(Minikros M11 260 01 P，polysulfonic membrane，来自SpectrumLaboratories Inc.)，以模拟可视的肿瘤结构。光纤盒的具体情况如下：

光纤长度：12.2cm；总长度：18.5cm；盒管的直径：1.88cm；总有效面积：615cm²；光纤直径：0.05cm；光纤内体积：0.024cm³；光纤内表面积：1.92cm²。

造影射线

第一个盒子(A，对照)内充入25ml碳酸盐缓冲液(pH9.8)。

第二个盒子(B)充入4ml 1mg/mlNeutravidin_溶液与20ml碳酸盐缓冲液(pH9.8)的混合物。该盒子在4℃下隔夜放置，然后用Tween_20的0.1％(w/w)PBS缓冲液洗涤3次。洗涤后，将22ml上述集合体混悬液充入盒内，室温下温孵24小时后用25mlPBS洗涤10次，直至洗涤后的液体澄清。

通过Philips Intera 1.5T设备分析两个盒子，用两种不同的回音程序，如下面表1和2详述的。在表格中，给出了测得的两个盒子的相对信号强度(以相对任意单位表示)。

表1：相对信号强度

自旋回波程序：TR＝400ms；TE＝20ms

盒	平均信号强度
		A	512.68
B	1225.24

    表2：相对信号强度强度梯度程序：TR＝116ms；TE＝29ms；翻转角：80°

盒	平均信号强度
		A	339.92
B	1158.58

图8a和8b显示了相应于表2中各个值的影像。从这些图中，可以理解在B盒中由根据本发明的含有靶向性集合体的混悬液提供的实质影像增强作用，而A盒之获得了很差的影像。

实施例11

靶向性集合体的体内MR造影

根据实施例8的方法制备脂质体混悬液，所述混悬液包含摩尔比为12.5/60/17.5/10的Gd-复合物，SPC3，胆固醇和乙基-SPC3。

根据实施例4的方法制备胶粒混悬液，通过200mg Gd-复合物，150mg DSPE-PEG2000和50mg生物素标记的DSPE-PEG2000分散在10ml水中。

在搅拌下(磁力搅拌)向5.25ml胶粒混悬液中加入40ml脂质体制品并持续搅拌3小时。接下来，将混悬液以25’000g离心30分钟，脂质体-胶粒集合体从离心后混悬液的底部重新获得(弃去上清液)，然后被悬浮在0.4M的葡萄糖中，使最终脂质浓度是25g/l。然后用neutravidin在室温隔夜温孵集合体混悬液(biotin/neutravidin的比例：20/1)。

造影射线

两个并列的(右边和左边)VX2肿瘤被移植到兔的后背。移植后十五天，静脉注射150μg的在上皮细胞表达的识别αVβ3受体的Blot-p3人抗体(Chemicon International Inc.)。24小时之后，注射集合体制品(3ml/kg兔)并且在八小时后对兔进行MRI。观察到两个清晰的肿瘤影像。

Claims (33)

1、包含具有活性剂集合体的用于诊断或治疗用途的组合物，所述集合体包含：

-具有带内和外表面的边界包膜的脂质体，所述包膜定义了脂质体的内部；以及

-与所述脂质体的包膜外表面缔合的大量胶粒组分，

其中所述胶粒组分与所述脂质体通过充分的静电相互作用缔合。

2、根据权利要求1的组合物，其中所述脂质体带有第一种总体净电荷并且所述大量胶粒组分带有与第一种净电荷符号相反的第二种总体净电荷。

3、根据权利要求1或2任一项的组合物，其中所述活性剂包含在胶粒组分中。

4、根据权利要求1-3中任一项的组合物，其中所述胶粒组分包含两亲聚合物化合物。

5、根据权利要求3的组合物，其中所述活性剂是影像增强化合物。

6、根据权利要求5的组合物，其中所述影像增强化合物是MRI反应化合物。

7、根据权利要求6的组合物，其中所述MRI反应化合物是与包括亲脂部分的螯合分子复合了的顺磁性金属离子。

8、根据权利要求7的组合物，其中所述顺磁性离子选自铬(III)，锰(II)，锰(III)，铁(II)，铁(III)，钴(II)，镍(II)，铜(II)，镨(III)，钕(III)，钐(III)，钆(III)，铽(III)，镝(III)，钬(III)，铒(III)，铕(III)以及镱(III)。

9、根据权利要求7的组合物，其中所述螯合分子是包含螯合亲水部分和亲脂部分的两亲螯合剂。

10、根据权利要求9的组合物，其中所述螯合亲水部分是螯合酸残基，螯合酸选自二亚乙三胺五乙酸(DTPA)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四醋酸(DOTA)、苯并-DOTA、二苯并-DOTA、1，4，7-三羧甲基1，4，7，10四氮杂环十二烷三醋酸(DO3A)、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1-(2-羟丙基)-4，7，10-三醋酸(HP-DO3A)、亚乙二胺四乙酸(EDTA)、1，4，8，11-四氮杂环十二烷-1，4，8，11-四醋酸(TETA)、苯并-TETA、亚乙基二-(2-羟基-苯基甘氨酸)(EHPG)、5-Cl-EHPG、5Br-EHPG、5-Me-EHPG、5t-Bu-EHPG、和5sec-Bu-EHPG、苯并二亚乙基三胺五醋酸(苯并-DTPA)、二苯并-DTPA、苯-DTPA、联苯-DTPA、苄-DTPA、二苄DTPA、双-2(羟苄基)-亚乙基-二胺二乙酸(HBED)、1，4，7-三氮杂环壬烷N，N’，N”-三醋酸(NOTA)、苯并-NOTA、1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四(甲基四醋酸)(DOTMA)、苯并-DOTMA、1，4，8，11-四氮杂环十四烷-1，4，8，11-(甲基四醋酸)(TETMA)、苯并-TETMA、1，3-亚丙基二胺四醋酸(PDTA)的衍生物、三亚乙基四胺六醋酸(TTHA)的衍生物、1，5，10-N，N′，N″-三(2，3-二羟苯甲酰基)-三儿茶酚酯(LICAM)的衍生物、1，3，5-N，N′，N″-三(2，3-二羟苯甲酰基)氨甲苯(MECAM)的衍生物。

11、根据权利要求7的组合物，其中所述MRI反应化合物是[10-[2-(双十八烷氨基)-2-氧代乙基]-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7-三醋酸(3-)]钆。

12、根据权利要求9的组合物，其中所述亲脂部分是(C₁-C₂₄)醇残基，芳族醇残基，(C₁-C₂₄)烷基直链脂肪胺残基，芳胺残基，或它们的混合物。

13、根据权利要求12的组合物，其中所述亲脂部分是n-癸醇，月桂醇，肉豆蔻醇，鲸蜡醇，n-十八烷醇，苯甲醇，单-、双-或三-(C₁-C₄)烷基-苯醇，n-癸胺，n-十二烷胺，n-十四烷胺，n-十六烷胺，n-十八烷胺，苯甲胺，单-、双-或三-(C₁-C₄)烷基-苯胺，或它们的混合物的残基。

14、根据前述任一权利要求的组合物，其中所述集合体进一步包含靶向性配体。

15、根据权利要求14的组合物，其中所述靶向性配体包含在胶粒组分中。

16、根据权利要求1至3中任一项的组合物，其中所述集合体在脂质体中包含活性剂。

17、根据权利要求16的组合物，其中所述活性剂是治疗剂。

18、根据权利要求4的组合物，其中所述聚合化合物是聚合类表面活性剂或带有亲水聚合部分的磷脂。

19、根据前述任一权利要求的组合物，其中所述脂质体或所述胶粒组分包含带正电荷的两亲化合物。

20、根据权利要求19的组合物，其中所述带正电荷的两亲化合物选自乙基磷脂酰胆碱与一个或两个脂肪酸的单或二-酯；至少包含一个(C₁₀-C₂₀)烷链的烷胺盐；包含一个或两个通过(C₃-C₆)亚烷基桥接在N-原子上的(C₁₀-C₂₀)酰基链的叔铵或季铵盐；或它们的混合物。

21、根据前述权利要求1至18任一项的组合物，其中所述脂质体或所述胶粒组分包含带负电荷的两亲化合物。

22、根据权利要求21的组合物，其中所述带负电荷的化合物选自磷脂酰丝氨酸脂肪酸二酯，磷脂酸脂肪酸二酯，磷脂酰甘油脂肪酸二酯，磷脂酰肌醇脂肪酸二酯，经聚乙烯二醇修饰的磷脂酰乙醇胺脂肪酸二酯，胆汁酸盐，(C₁₂-C₂₄)脂肪酸盐，或它们的混合物。

23、根据前述任一权利要求的集合体，其中在药学上可接受载体中的所述集合体的水混悬液显示出至少减少50％的ζ-电势绝对值，对比于在同样载体中的形成所述集合体的脂质体水混悬液的ζ-电势。

24、根据权利要求23的集合体，其中所述ζ-电势的绝对值减少至少75％。

25、一种诊断和/或治疗工具盒包含：

a)脂质体，或其前体，带有第一种总体净电荷作为第一种组分；

b)胶粒组分，或其前体，与所述脂质体缔合或可缔合的并带有与所述第一种净电荷符号相反的第二种总体净电荷。

26、根据权利要求25的工具盒，其包含冻干的脂质体。

27、根据权利要求25或26的工具盒，其包含冻干的胶粒组分。

28、根据权利要求25的工具盒，其包括含有与所胶粒组分缔合的脂质体的冻干集合体。

29、根据权利要求25-28任一项的工具盒，进一步包含药学上可接受的液态载体。

30、根据前述权利要求1-24任一项的集合体的制备方法，包括将含有脂质体或其前体的制品与含有和所述脂质体缔和的胶粒组分或其前体的制品混合。

31、用于增加与具有脂质包膜的脂质体缔合的活性剂的含量的方法，所述方法包括将含有所述活性剂的胶粒组分与所述脂质包膜的外部缔合。

32、使包含脂质包膜的脂质体的血液循环特性增长的方法，所述方法包括将含有两亲聚合化合物的胶粒组分与所述脂质包膜的外部缔合。

33、根据权利要求32的方法，其中所述脂质体栽有活性剂。

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