CN1931292A - 一种治疗泌尿系疾病的药物及质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种治疗泌尿系疾病的药物及质量控制方法，涉及一种复方中药制剂，特别是一种对尿结石和泌尿系感染症具有治疗作用的药物组合物以及其质量控制方法。本发明所述的药物是由下述重量配比的原料药制成的胶囊剂：广金钱草94、鸡内金24、泽泻47、沙牛5、琥珀14、黄芪47、石韦94、海金沙53、车前子66、甘草9、醋制延胡索47。本发明所述复方中药制剂，经多次组方实验，符合中医药组方配伍原则，复方制剂中各药物相辅相成而全方生产作用，对淋症、癃闭、尿路感染、尿路结石、前列腺炎、膀胱炎、肾盂肾炎、乳糜尿等有明显治疗作用而又无明显毒副作用。

Description

一种治疗泌尿系疾病的药物及质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种复方中药制剂，特别是一种对尿结石和泌尿系感染症具有治疗作用的药物组合物，以及这种药物组合物的质量控制方法。

背景技术

尿石症和泌尿系感染症是常见病，多发病。尿石症和泌尿系感染症的治疗，特别是尿石症病因不十分清楚，防治效果尚不满意。目前用于治疗尿石症的药物有很多，如：石淋通片、肾石通冲剂等。这些药物多以利尿排石为主，结石一旦直径超过10mm，即不易排出体外，需要手术切开取石，而取石手术后复发率很高。近年来随着体外震波碎石和腔内外科技术的发展，使90％以上的尿路结石患者不需传统的切开取石即可去除结石。但无论经手术或非手术治愈的尿石症患者，结石复发率很高。文献报道国外长期随访的复发率为65％-75％，国内为7-18％。因此，减少或防止尿结石形成，是患者达到终身预防的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有良好的抗炎、止痛、化石排石作用且能防止尿结石形成和复发、对淋球菌有杀灭作用的治疗尿石症和泌尿系统感染症的药物。

本发明的另一目的是提供上述药物的质量控制方法。

本发明所述的治疗泌尿系疾病的药物是由下述重量的原料药制成的胶囊剂：广金钱草94、鸡内金24、泽泻47、沙牛5、琥珀14、黄芪47、石韦94、海金沙53、车前子66、甘草9、醋制延胡索47。

上述组成中，广金钱草、泽泻、车前子利尿、排石；黄芪利尿、抗菌；琥珀利尿通淋、活血祛淤；石韦利尿、清热、止血、抗菌；海金沙清热通淋、利尿；延胡索活血、理气、止痛；沙牛、鸡内金通窍利水、软坚化石。各药合用，具有利尿通淋，化石排石，抗菌消炎，止痛之功效。

本发明所述药物组合物的生产方法如下：以上十一味，取广金钱草加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至膏状；其余鸡内金等十味粉碎成细粉，混匀，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，制成1000粒，即得。醋制延胡索为现有技术。

本发明所述的质量控制方法由以下步骤组成：

一、鉴别

a、取本品内容物，置显微镜下观察；

b、取本品内容物10g，加80％乙醇50ml，回流提取1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加氨试液使呈碱性，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，取上清液作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯—浓氨试液6∶4∶0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c、取本品内容物10g，加甲醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用1％的氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过预先处理的D[6]型大孔吸附树脂柱，用水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置，日光下显相同颜色的斑点；置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

d、取本品内容物15g，加水150ml，煮沸30分钟，离心，取上清液置分液漏斗中，加入乙醚30ml及饱和食盐水2ml，充分振摇，分取乙醚液，水层再照上法重复一次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取泽泻对照药材1g，加水100ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—乙酸乙酯—冰醋酸(10∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

二、检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定

三、含量测定：照高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-0.5％磷酸(11∶89)为流动相；检测波长为326nm；理论板数按绿原酸峰计算，应不低于3000；

对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  取本品装量差异检查项下的内容物约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％的甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，再称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含有石韦以绿原酸计，不得少于0.35mg。

本发明所述复方中药制剂，经多次组方实验，符合中医药组方配伍原则，复方制剂中各药物相辅相成能全方生产作用，对淋症、癃闭、尿路感染、尿路结石、前列腺炎、膀胱炎、肾盂肾炎、乳糜尿等有明显治疗作用而又无明显毒副作用。

本药物组合物的药效学试验如下：

体外试验表明，本品对人体尿路结石有一定的溶石作用，对大肠杆菌、副大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均有一定的抗菌作用，对变形杆菌有明显的抗菌作用；但其溶液及其含药血清、尿液对豚鼠离体膀胱平滑肌张力均无明显影响，亦不能拮抗乙酰胆碱对膀胱平滑肌的兴奋作用。整体试验表明，本品对乙二醇诱发大鼠肾结石及异物诱发大鼠膀胱结跖均有一定的抑制作用；对小鼠热板致痛有一定的镇痛作用，但对醋酸所致扭体反应无明显影响；对醋酸所致小鼠腹膜炎性渗出及角叉胶所致大鼠足跖肿胀均有一定的抑制作用；有增加大鼠排尿量的作用；对变形杆菌感染小鼠似有一定的保护作用趋势，但对大肠杆菌感染小鼠无明显保护作用。

试验目的：

通过动物试验观察本品的通淋利湿、化石止痛等作用，为其临床应用提供动物试验依据。

受试药物：本实施例所制得胶囊剂。

临床用量为每次服5粒，一日3次，疗程4周。试验时以去离子水将受试药物配成适宜浓度的药液供动物灌胃给药，并使各剂量组给药体积相等。

实验材料：

1、动物：Wistal系大白鼠，普通级，本所动物室提供，合格证号“桂医动字第11001号”。NIH小白鼠，普通级，本所动物室提供，合格证号“桂医动字第11002号”。豚鼠，普通级，♀♂兼用，体重400~500g，广西中医药研究所动物室提供。动物♀♂分笼群养，自动供水饲，喂颗粒饲料。实验室温度20~30℃(空调)，相对湿度60~85％。

2、药物及试剂：结石通片，广西梧州制药(集团)股份有限公司，生药2g/Tab，批号990508-1。乙酰胆碱，上海新亚药厂，批号650520。罗通定片，广东省博罗先锋药业集团公司，批号990601。双氢氯噻嗪片(DHCT)，辽宁锦州制药厂，批号960301。复方磺胺甲基异恶唑片(TMP+SMZ)，桂林制药厂，批号980401。诺氟沙星胶囊，广西桂南制药集团公司，批号980310。醋酸泼尼松片，广西桂南制药集团公司，批号960522。乙二醇氯化铵混合饲料。0.7％醋酸溶液、1％角叉菜胶混悬液。钙测定试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司，批号990901。消毒木棒(直径3mm，长5mm，用75％乙醇浸泡24h)。人体尿路结石，广西中医学院第一附属医院病理科提供。

3、菌株及培养基：大肠杆菌[CMCC(B)44102]、变形杆菌[CMCC(B)49102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、绿脓杆菌[CMCC(B)10104]，中国药品生物制品检定所提供。副大肠杆菌(临床株)，广西卫生干部管理学院微生物教研室提供。营养肉汤培养基、血清肉汤培养基、营养琼脂培养基、血液琼脂培养基，本所抗生素室制备。

4、仪器：A120S型电子分析天平(1/10000g)，德国SARTORIUS公司产。MS-302多媒体化生物信号记录分析系统，广东药学院产。JZ100型肌肉张力换能器，高碑店市新航机电设备有限公司。恒温热板致痛装置，本所药理室组装。鼠足容积毛细管放大测量装置，本所药理室组装。CHEM-5型半自动化测定仪，日本ERBA公司产。

实验方法及结果：

1、对大鼠乙醇性肾结石的影响

取♂性大鼠60只，体重150~200g，随机分成6组，除正常对照组外，其它5组均作乙二醇性肾结石造型：以乙二醇氯化铵混合饲料喂养，连续37天。在造型的同时ig给药：三个组给受试药物，阳性对照组给结石通，模型对照组及正常对照组给常水，每天1次，剂量见表1，给药体积均为10ml/kg，连续37天。末次给药后次日处死大鼠，剖取双肾作肉眼观察；并固定后做病理组织学检查，按下述“标准”记录各鼠肾结石的程度。与模型对照组比较，作组间Ridit检验，结果见表1。

病理检查分级标准：“一”肾皮质及髓质均未见结石和结晶沉积物。“+”肾皮质及髓质可见少量散在的结石结晶沉积物，每低倍(10倍)视野1~3个结晶灶。“++”肾皮质及髓质可见结石结晶沉积物或小的游离结晶，每低倍(10倍)视野4~6个结晶灶。“+++”肾皮质及髓质可见较多结石结晶沉积物，并有结石形成，每低倍(10倍)视野7~9结晶灶。

      表1  对大鼠乙二醇性肾结石的影响结果(n＝10)

组别	剂量	病理检查肾结石程度					肉眼检查肾脏外观
											(/kg)	-	+	++	+++	P值	正常	灰褐色	灰白色及水肿	P值

受试药物	1.60g	2	3	3	2	＞0.05	4	5	1	＜0.05
											受试药物	0.80g	0	1	9	0	＞0.05	3	4	3	＞0.05
受试药物	0.40g	0	0	9	1	＞0.05	3	3	4	＞0.05
											结石通	10g	1	2	2	5	＞0.05	3	4	3	＜0.05
模型对照	20ml	0	0	5	5		0	2	8
											正常对照	20ml	10	0	0	0	＜0.01	10	0	0	＜0.01

结果可见，受试药物三个剂量组的肉眼及病理组织学病变程度均小于模型组，大剂量组肉眼病变与模型组差异有显著意义。提示本品对乙二醇诱发大鼠肾结石的形成有一定的抑制作用。

2、对大鼠异性膀胱结石的影响试验]

取♂性大鼠50只，体重200~270g，随机分成5组，每鼠均作异物性膀胱结石造型：ip戊巴比妥钠麻醉，剖腹将电子天平上称重后的消毒木棒置入膀胱内并荷包缝合膀胱切口，关腹时腹腔注射后青霉素钠8万U抗感染，术后正常喂养。造型4周后开始ig给药：三个组给受试药物，阳性对照组给结石通，模型对照组给常水，每天1次，剂量见表1，给药体积均为10ml/kg，连续30天。末次给药后次日处死大鼠，取出置入膀胱的木棒，经60℃24h烘干后于电子天平上称重，减去原来棒重即为膀胱异物性结石重量，与常水组比较，作组间t检验。结果见表2。

      表2  对大鼠异性膀胱结石的影响结果

组别	剂量(/kg)	N	结石重量(mg， X±S)
				受试药物	1.60g	9	1.69±0.51*
受试药物	0.80g	10	2.01±1.30
				受试药物	0.40g	10	1.97±0.65
结石通	10g	10	1.72±0.73

常水

10ml

10

2.41±0.62

注：*p＜0.05，**p＜0.01，其余p＞0.05，下同

结果可见，受试药物大量剂组的结石重量小于常水组，差异有显著意义。提示本品对异物诱发大鼠膀胱结石有一定的抑制作用。

3、体外溶石(人体尿路结石)试验]

将已于电子天平称重、大小基本一致的人体尿路结石1粒分装具塞试管，共45管。将受试药物配成三种浓度的药液，另配制结石通片对照液，并设去离子水对照。每种浓度的药液各设9管，药液浓度见表3，每管按结石重量加入一定量的药液(g∶ml＝1∶30)，置于37℃恒温水浴中，每次振摇1次(颠倒5回)。浸泡7天后取出结石，经60℃5h烘干后于电子天平称重，计算溶石率；浸泡液经离心后取上清液于半自动生化测定仪630nm波长下测定钙含量；与去离子水组比较，作组间t检验。结果见表3。

表3  体外溶石(人体尿路结石)试验结果( X±S，n＝9)

组别	浓度(生药g％)	结石浸泡前重量(mg)	溶石率(％)	浸泡液钙含量(mmol/L)
					受试药物	78.6	83.6±44.7	2.4±3.2	1.081±0.404*
受试药物	20.6	84.8±41.8	2.0±2.6	0.323±0.156
					结石通	100	83.9±41.2	1.7±2.2	1.176±0.743
去离子水	-	82.8±38.9	5.6±8.3	0.612±0.418

表3可见，受试药物三个浓度药液的溶石率均与去离子水相近，差异无显著意义；但高浓度浸泡液的钙含量大于去离子水，差异有显著意义。提示本品体外在高浓度时对人体尿路结石有一定的溶石作用。

4、对豚鼠离体膀胱平滑张力的影响试验

将豚鼠离击头处死，立即剖取膀胱，置于Tyrods’s液中，常规制备膀胱肌条标本。浴槽温度37±0.5℃，容积50ml，常规供氧。将标本一端固定于槽内“L”形支持杆上，另一端连接张力换能器，给予一定负荷(1g)，以MS-302多媒体化生物信号记录分析系统记录其张力变化。待标本张力稳定后，依次加入各试验药液，观察药物对标本张力的影响。每次观察作用5min，并冲洗浴槽三次，待标本张力恢复、稳定后再做下一药液试验。

受试药液的制备：①受试药物水溶液—取受试药物药材干膏粉5g，加去离子水溶解，配至50ml(原药材768.7mg/ml)。②大鼠含药(受试药物)血清—以4g干膏粉/kg的剂量给大鼠灌胃，2h后经过腹主动脉采血所分离的血清。③大鼠含药(受试药物)尿液—以4g干膏粉/kg的剂量给大鼠灌胃，2h后经膀胱采集的尿液。

经4只豚鼠离体膀胱肌条标本的试验表明，上述三种受试药液对标本张力均无明显影响，亦不能拮抗乙酰胆碱对标本的兴奋作用，提示本品对豚鼠膀胱平滑肌张力无明显影响，故试验不再继续进行。

5、对醋酸所致小鼠腹痛的影响试验(扭体法)

取小鼠50只，♀♂各半，体重18~22g，随机均分为5组。三个组给受试药物，阳性对照组给罗通定，空白对照组给常水，剂量见表5，每日ig给药1次，给药体积均为20ml/kg，连续给药3日。末次给药后1h，各鼠均ip0.7％醋酸10ml/kg，并记录各鼠均ip醋酸后15min内的扭体次数，与常水组比较，作组间t检验。结果见表4。

        表4  对小鼠醋酸致痛的影响结果

组别	n	剂量(/kg)	15分钟扭体次数(X±S)	抑制率(％)
					受试药物	10	2.60g	18.6±9.86	18.6
受试药物	10	1.30g	19.7±9.08	17.5
					受试药物	10	0.65g	19.2±10.1	16.2
罗通定	10	80mg	5.6±3.09**	76.5
					常水	10	20ml	22.9±15.5

结果可见，受试药物大、中、小剂量组的扭体次数与常水差异均无显著意义。提示本品对醋酸所致小鼠腹痛无明显影响。

6、对小鼠热板块致痛的影响试验

取♀性小鼠50只，体重18~21g，以底板温度55±0.5℃的热板致痛仪测定基础痛阀增值后，随机分成5组，随即ig给药：三个组给受试药物原药材干膏粉，阳性对照组给罗通定，空白对照组给常水，剂量见表5，给药体积均为20ml/kg。分别于给药后1、2、3小时同法测定各鼠的痛阀值，以药后值减去基础值之差作为药后痛阈增值，与常水组比较，做组间t检验。结果见表5。

表5  对小鼠热板块致痛的影响结果(秒， X±S，n＝10)

组别	剂量(/kg)	基础痛阈	药后痛阈值
						1小时	2小时	3小时
			受试药物	2.60g	18.6±3.38				0.76±5.40	-1.12±8.63	3.50±9.86*
受试药物	1.30g	18.5±3.32				-3.76±4.67	-2.78±3.46	-2.65±2.68
			受试药物	0.65g	18.7±3.33				-4.35±4.86	-1.96±6.75	-4.52±4.75
罗通定	80mg	18.5±3.05				21.09±8.72**	31.71±10.8**	33.01±10.1**
			常水	20ml	18.9±3.01				-2.67±5.78	-2.98±5.96	-6.57±6.23

结果可见，受试药物大量剂量组的药后3小时痛阈增值大于常水组，差异有显著意义。提示本品对小鼠热板致痛有一定的镇痛阈作用。

7、对醋酸所致小鼠腹膜炎性渗出的影响试验

取小鼠60只，♀♂各半，体重20~22g，随机均为5组并ig给药：三个组给受试药物原药材干膏粉，阳性对照组给泼尼松，空白对照组给常水，剂量见表7，给药体积为20ml/kg，每日给药1次，连续3天。末次给药后1小时，各鼠均iv0.5％伊文思蓝生理盐水溶液10ml/kg，并立即ip 0.7％醋酸10ml/kg。于ip醋酸后15min处死小鼠，用生理盐水冲洗腹腔，收集全部冲洗液至10ml，离心后取上清液于半自动化测定仪630nm波长处测定其OD值，以OD值表示冲洗液中伊文思蓝的浓度，间接反映腹膜炎性渗出的程度，与常水组比较，做组间t检验。结果见表6。

表6  对醋酸所致小鼠腹膜炎性渗出的影响结果

组别

n

剂量(/kg)

OD( X±S)

抑制率(％)

受试药物	10	2.60g	0.081±0.030**	49.8
					受试药物	10	1.30g	0.111±0.045*	31.9
受试药物	10	0.65g	0.131±0.056	23.4
					泼尼松	10	20mg	0.103±0.041*	34.1
常水	10	20ml	0.161±0.054

结果可见，受试药物三个剂量组的OD值均小于常水组，大、中剂量组与常水组差异有非常显著及显著意义。提示本品对醋酸所致小鼠腹膜炎性渗出有一定的抑制作用。

8、对角叉菜胶所致大鼠足石肿胀的影响试验

取♂性大鼠50只，体重230~260g，随机均为5组并ig给药：三个组给受试药物原药材干膏粉，阳性对照组给泼尼松，空白对照组给常水，剂量见表8，给药体积均为10ml/kg，每日ig给药一次，连续4日。第4日以容积测量法测定个鼠右后足的体积作正常值，随即ig给药，并以1％角叉菜胶按50ul注入各鼠右后足跖皮下以致炎。于致炎后2、4、6小时分别同法测定各鼠右后足体积作为致炎后值，以致炎后值与正常值之差作为致炎后肿胀值，与常水组比较，做组间t检验。结果见表7。

表7  对角叉菜胶致大鼠组肿的影响结果( X±S，n＝10)

组别	剂量(/kg)	正常值(ml)	致炎后肿胀值(ml)
						2h	4h	6h
			受试药物	1.60g	1.43±0.14				0.20±0.04	0.31±0.05*	0.49±0.08
受试药物	0.80g	1.41±0.16				0.22±0.03	0.32±0.05	0.52±0.13
			受试药物	0.40g	1.45±0.09				0.23±0.09	0.31±0.15	0.53±0.11
泼尼松	10mg	1.46±0.08				0.15±0.08	0.28±0.06*	0.35±0.08**
			常水	10ml	1.45±0.10				0.24±0.14	0.45±0.12	0.59±0.18

结果可见，受试药物大个剂量组的致炎后4h的肿胀值与常水组差异有显著意义。提示本品对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀有一定的抑制作用。

9.对大鼠排尿量的影响试验

取大鼠40只，♀♂各半，体重220～260g，随机分5组，三个组给受试药物原药材干膏粉，阳性对照组给DHCT，空白对照组合给常水，剂量见表8，给药体积为10ml/kg，连续给药3日。末次给药前1小时(已禁饲15小时)灌胃给予生理盐水50ml/kg，并轻压大鼠下腹部使膀胱排空，禁饲禁水，末次给药后即置代谢笼中，收集6小时的尿量，并求出每100g体重的尿量，与常水组比，作组间t检验。结果见表8。

表8  对大鼠排尿量的影响结果( X±S)

组别	N	剂量(/kg)	6小时排尿量(ml)
					实际尿量	尿量/100g体重
			受试药物	8			1.60g	8.01±1.23*	3.57±0.49*
受试药物	8	0.80g			7.43±1.26	3.18±0.58
			受试药物	8			0.40g	7.25±1.86	3.08±0.78
DHCT	8	25mg			9.18±1.78*	3.89±0.68*
			常水	8			10ml	5.98±1.87	2.67±0.78

结果可见，受试药物大剂量组的6小时排尿量大于常水组，差异有显著意义。提示本品有增加大鼠排尿量的作用。

10.体内抗大肠杆菌感染试验

取大鼠50只，体重18～22g，♀♂各半，随机分5组并ig给药；三个组给受试药物原药材干膏粉，阳性对照组给诺氟沙星，空白对照组给常水，给药体积为20ml/kg，剂量见表10。于给药1小时后均作体内染菌：ip 10⁷CFU/ml的大肠杆菌(菌号44102，含2％干酵母)菌液25ml/kg。记录各组小鼠染菌后7天内的死亡数，与常水组比较，作简化直接概率法分析。结果见表9。

表9  体内抗大肠感染试验结果

组别

剂量(/kg)

n

7天内死亡数

受试药物	1.60g	10	9
				受试药物	0.80g	10	10
受试药物	0.40g	10	10
				诺氟沙星	600mg	10	1
常水	20ml	10	9

结果可见，受试药物三个剂量组的7天内死亡数与常水组相近，差异无显著意义。提示本品对大肠杆菌感染小鼠无明显保护作用。

11.体内抗变形杆菌感染试验

取小鼠50只，体重21～25g，♀♂各半，随机分5组并ig给药：三个组给受试药物原药材干膏粉，阳性对照组给TMP+SMZ，空白对照组给常水，给药体积均为20ml/kg，剂量见表11。给药后即作体内染菌：每鼠ip 3×10⁸CFU/ml的变形杆菌(菌号49102，含2％干酵母)菌液23ml/kg。5小时后再同量给药1次。记录各组小鼠染菌后7天内的死亡数及死亡时间，与常水组比较，作简化直接概率法及t值法分析。结果见表10。

       表10  体内抗变形杆菌感染试验结果

组别	剂量(/kg)	n	7天内死亡数
				受试药物	1.60g	10	6
受试药物	0.80g	10	9
				受试药物	0.40g	10	10
TMP+SMZ	768mg	10	0**
				常水	20ml	10	9

结果可见，受试药物三个剂量的7天内死亡数与常水组差异均无显著意义，但大剂量组的死亡数比常水组减小33.3％。似提示本品对变形杆菌感染小鼠有一定的保护作用趋势。

12.体外抗菌试验(二倍稀释法)

用各液体培养基分别将受试药物原药材干膏粉作系列对倍稀释，制成不同浓度的系列含药培养基，分装灭菌小试管，每管1ml。将新鲜制备的各供试菌液(10⁵CFU/ml)0.1ml分别接种于相应的系列含药培养基中，另设阴性和阳性对照管，置36±1℃培养24h。取各管培养物分别划线接种于相应的不含药固体培养基上，再按上述条件培养24h，观察有无细菌生长。以菌落数不超过5个的最高药物稀释度作为该药的最小抑菌浓度(MIC)，结果见表11。

表11  体外抗菌试验结果

菌种	菌号	MIC(原药材g/L)
			大肠杆菌	CMCC(B)44102	60.2
副大肠杆菌	临床株	60.3
			变形杆菌	CMCC(B)49102	13.9
金黄色葡萄球菌	CMCC(B)26003	60.2
			绿脓杆菌	CMCC(B)10104	60.0

结果可见，采用液体试管二倍稀释法作体外抗菌试验，受试药物对大肠杆菌、副大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均有一定的抗菌作用，对变形杆菌有明显的抗菌作用。

结语：

综上试验结果表明，受试药物原药材干膏粉在高浓度溶液时对人体尿路结石有一定的溶石作用，对大肠杆菌、副大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均有一定的抗菌作用，对变形杆菌有明显的抗菌作用；用其溶液及其含药血清、尿液对豚鼠离体膀胱平滑肌张力均无明显影响，亦不能拮抗乙酰胆碱对膀胱平滑肌的兴奋作用。以受试药物原药材干膏粉溶液灌胃给药，对乙二醇诱发大鼠肾结石及异物诱发大鼠膀胱结石均有一定的抑制作用；对小鼠热板致痛有一定的镇痛作用，但对醋酸所致小鼠腹痛无明显影响；对醋酸所致小鼠腹膜炎性渗出及角叉莱胶所致大鼠足跖肿胀均有一定的抑制作用；有增加大鼠排尿量的作用；对变形杆菌感染小鼠似有一定的保护作用趋势，但对大肠杆菌感染小鼠无明显保护作用。以上作用给本品的临床应用提供了一定的动物试验依据。

本药物组合物的临床试验：

经临床试验证明疗效较好，总有效率91.78％，其中：显效60.34％，有效31.44％，临床实验结果如下表：

病种	例数	显效	有效	无效	总有效率
							例数	％
					尿石症	250			148	78	24	226	90.40
肾盂肾炎	10	8	1	1			9	90.00
					下尿路感染	40			28	11	1	39	97.5
前列腺炎	50	28	20	2			48	96.0
					乳糜血尿	3			1	1	1	2	66.67
合计	353	213	111	29			324	91.78

治疗方案：单纯内服本发明丸剂，每次5粒，每日3次，急性泌尿系感染者，7天为一个疗程，慢性泌尿系感染，尿石症，28天为一个疗程。

疗效标准：

(一)显效

1、尿石症者，结石排出，或结石影消失，或明显缩小，或结石明显下降，临床症状消除，肾积水消除，尿常规正常。

2、泌尿系感染者，临床症状及体征消除，有关实验室各项阳性指数阴转。

(二)有效

1、尿石症者，未达显效标准，但临床症状消失或减轻。

2、泌尿系感染者，临床症状及体征改善，有关实验室各项阳性指数未完全阴转。

(三)无效

结石无变化，临床症状、体征，有关实验室各项阳性指数无改善。

本发明的中药制备容易，具有抗感染、消炎、解痉、利尿、消石、排石效应，能较快地消除临床症状，疗效显著。

具体实施方式

取广金钱草94克、鸡内金24克、泽泻47克、沙牛5克、琥珀14克、黄芪47克、石韦94克、海金沙53克、车前子66克、甘草9克、醋制延胡索47克。

取广金钱草加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，滤过，合并滤液，浓缩至膏状；其余鸡内金等十味粉碎成细粉，混匀，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，制成1000粒，即得。

按照下述方法进行质量控制：

一、鉴别

a、取本品内容物，置显微镜下观察：石细胞淡黄色，类圆形或长方形，直径60~100μm。孢子类圆形或类三角形，直径60~85μm。外壁具颗粒状雕纹。星状毛由披针形或梭形细胞组成，细胞长120~390μm。

b、取本品内容物10g，加80％乙醇50ml，回流提取1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加氨试液使呈碱性，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，取上清液作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯—浓氨试液(6∶4∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

c、取本品内容物10g，加甲醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用1％的氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过预先处理的D[6]型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置，日光下显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

d、取本品内容物15g，加水150ml，煮沸30分钟，离心，取上清液置分液漏斗中，加入乙醚30ml及饱和食盐水2ml，充分振摇，分取乙醚液，水层再照上法重复一次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材1g，加水100ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—乙酸乙酯—冰醋酸(10∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

二、检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录I L)。

三、含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-0.5％磷酸(11∶89)为流动相；检测波长为326nm。理论板数按绿原酸峰计算，应不低于3000。

对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得(10℃以下保存)。

供试品溶液的制备  取本品装量差异检查项下的内容物约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％的甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，再称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含有石韦以绿原酸(C16H18O9)计，不得少于0.35mg。

Claims (2)

1、一种治疗泌尿系疾病的药物，其特征在于是由下述重量的原料药制成的胶囊剂：广金钱草94、鸡内金24、泽泻47、沙牛5、琥珀14、黄芪47、石韦94、海金沙53、车前子66、甘草9、醋制延胡索47。

2、如权利要求1所述的治疗泌尿系疾病的药物的质量控制方法，其特征在于由以下步骤组成：

一、鉴别

a、取本品内容物，置显微镜下观察；

b、取本品内容物10g，加80％乙醇50ml，回流提取1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加氨试液使呈碱性，用乙醚提取2次，每次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml溶解，取上清液作为供试品溶液；另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯—浓氨试液6∶4∶0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c、取本品内容物10g，加甲醇50ml，回流提取1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解并转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用1％的氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过预先处理的D[6]型大孔吸附树脂柱，用水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇50ml洗脱，弃去40％乙醇液，继用70％乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶6∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置，日光下显相同颜色的斑点；置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

d、取本品内容物15g，加水150ml，煮沸30分钟，离心，取上清液置分液漏斗中，加入乙醚30ml及饱和食盐水2ml，充分振摇，分取乙醚液，水层再照上法重复一次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取泽泻对照药材1g，加水100ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—乙酸乙酯—冰醋酸(10∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

二、检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定

三、含量测定：照高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-0.5％磷酸(11∶89)为流动相；检测波长为326nm；理论板数按绿原酸峰计算，应不低于3000；

对照品溶液的制备  精密称取绿原酸对照品适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备  取本品装量差异检查项下的内容物约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％的甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理30min，取出放冷，再称定重量，用50％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜滤过，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含有石韦以绿原酸计，不得少于0.35mg。