CN105343229A - 一种防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法。所述的防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物含有活性成分，所述活性成分由刺梨根、石榴皮、酢浆草、飞扬草、天胡荽、蛇疙瘩、溪黄草制成。本发明制备防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物的工艺控制简单，给药途径简单快捷，生物利用度高，见效快，疗效显著，原料来源广泛，安全，环保，生产成本低等诸多优点。

Description

一种防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于中兽药技术领域，具体为一种防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法。

背景技术

大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所引起的一组疾病，各种家畜和家禽都会患此病，特别是幼畜十分易感，常发生严重腹泻和败血症。严重者甚至常导致死亡，给养殖业带来了极大的经济损失，严重阻碍了畜禽业的发展。本病主要通过污染的粪便传播，经干燥的粪便随尘土漂浮空气中，可将病菌通过呼吸道传给健康鸡，同其他病原体混合感染时，可引发各种疾病。目前用于治疗大肠杆菌病的药物主要是抗生素，但由于环境污染严重,药物使用不当造成很多致病性大肠杆菌对多种抗生素产生耐药性，防治效果不是很理想。由于中草药抑菌成分相对较多，可作用于细菌繁殖的不同阶段和细菌的不同部位。它与抗生素迥然不同的抑菌机制受到了医务人员和广大人群的喜爱，绝大多数研究表明中药材在防治畜禽疾病的同时还具有提高动物机体免疫功能，营养动物机体的作用。因此，要找到一种抗菌疗效好，见效快，低毒副作用的中药组合物是从事医疗事业人员不可推卸的责任。将中草药替代化学药物来防治畜禽大肠杆菌病就具有非常重要的现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是在于提供一种低成本、环保、疗效好、无药物残留或低药物残留，用于防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法。

本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

本发明提供一种防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物，含有活性成分，其活性成分由刺梨根、石榴皮、酢浆草、飞扬草、天胡荽、蛇疙瘩、溪黄草制成。

进一步地，所述活性成分由刺梨根450-650份、石榴皮300-500份、酢浆草200-300份、飞扬草200-350份、天胡荽250-300份、蛇疙瘩300-500份、200-350份溪黄草组成。

进一步，所述活性成分为刺梨根420-630份、石榴皮340-480份、酢浆草200-280份、飞扬草220-320份、天胡荽260-300份、蛇疙瘩320-490份、溪黄草220-330份组成。

更进一步，所述活性成分由刺梨根600份、石榴皮400份、酢浆草260份、飞扬草300份、天胡荽280份、蛇疙瘩400份、溪黄草300份组成。

本发明还提供了所述的防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物的制备方法，它包括如下步骤：

（1）按重量配比称取各药物原料；

（2）将称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。

本发明的复方刺梨根颗粒为棕黄色至棕褐色颗粒，气香，味苦，有清热解毒，健胃，消食，止泻的功效。用于治疗和预防畜禽的大肠杆菌病。

本发明的鉴定方法如下：

（1）取本品1.0g，加入具塞锥形瓶中，加人甲醇10ml，超声处理30min，过滤，滤液作为供试品溶液，再取芦丁对照品，加甲醇制成2mg/ml溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（8:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液。待乙醇挥干后，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（2）取本品1.0g，加入具塞锥形瓶中，加蒸馏水10ml，超声处理30min，滤过，滤液用石油醚（60-90℃）振摇提取2次，每次10ml,弃去石油醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。再取石榴皮对照药材0.5g，同法制成石榴皮对照药材溶液，另取没食子酸对照品，加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10:1:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（3）取本品1g，加蒸馏水10ml，超声处理30min，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取飞扬草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取槲皮苷对照品、没食子酸对照品，分别加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6:10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，晾干。置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（4）取本品1g，加蒸馏水10ml，超声处理30min，滤过，滤液移至分液漏斗中，加醋酸乙酯萃取3次，每次10ml,合并醋酸乙酯萃取液，减压回收醋酸乙酯至干，残渣加甲醇2ml使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取槲皮素对照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5:4:1）为展开剂，置盐酸蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（5）取本品1.0g，加入具塞锥形瓶中，加人甲醇10ml，超声处理30min，过滤，滤液作为供试品溶液，再取迷迭香酸对照品加甲醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-甲酸（3：3：1）为展开剂,展开后取出晾干，于干燥器内放置过夜后于紫外灯（365nm）下检视;供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明的优点和有益效果在于：

（1）本发明药物发挥中兽药整体观念和辩证施治理论，疗效好，见效快，标本兼治，可有效用于防治畜禽大肠杆菌病。

（2）本发明中药采用现代制药技术进行制备，并运用现代科技手段对中药有效成分进行定性定量检测，产品质量稳定、可控，具有较强的市场竞争力。

（3）本发明药物原料来源广泛，生产工艺简单，成本低廉，给药途径简单方便，符合现代的集约化养殖模式。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量的原料：

刺梨根450份、石榴皮300份、酢浆草200份、飞扬草200份、天胡荽250份、蛇疙瘩300份、溪黄草200份。

（2）将步骤（1）中称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。

（3）本发明药物使用方法:用于畜禽大肠杆菌病的预防和治疗，混饮：家禽每1L水添加本发明中药3-5g，家畜每1L水添加本发明中药2-4g，连用5-7天。

实施例2本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量的原料：

刺梨根650份、石榴皮500份、酢浆草300份、飞扬草350份、天胡荽300份、蛇疙瘩500份、溪黄草350份

（2）将步骤（1）中称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。

（3）本发明药物使用方法：用于畜禽大肠杆菌病的预防和治疗，混饮：家禽每1L水添加本发明中药3-5g，家畜每1L水添加本发明中药2-4g，连用5-7天。

实施例3本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量的原料：

刺梨根420份、石榴皮340份、酢浆草200份、飞扬草220份、天胡荽260份、蛇疙瘩320份、溪黄草220份

（2）将步骤（1）中称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。

（3）本发明药物使用方法:用于畜禽大肠杆菌病的预防和治疗，混饮：家禽每1L水添加本发明中药3-5g，家畜每1L水添加本发明中药2-4g，连用5-7天。

实施例4本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量的原料：

刺梨根630份、石榴皮480份、酢浆草280份、飞扬草320份、天胡荽300份、蛇疙瘩490份、溪黄草330份

（2）将步骤（1）中称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。

（3）本发明药物使用方法:用于畜禽大肠杆菌病的预防和治疗，混饮：家禽每1L水添加本发明中药3-5g，家畜每1L水添加本发明中药2-4g，连用5-7天。

实施例5本发明药物制备及使用

（1）称取含有下述重量的原料：

刺梨根600份、石榴皮400份、酢浆草260份、飞扬草300份、天胡荽280份、蛇疙瘩400份、溪黄草300份

（2）将步骤（1）中称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。

（3）本发明药物使用方法:用于畜禽大肠杆菌病的预防和治疗，混饮：家禽每1L水添加本发明中药3-5g，家畜每1L水添加本发明中药2-4g，连用5-7天。

为表明本发明药物对畜禽大肠杆菌病的防治效果，对本发明药物进行临床疗效观察试验，以下通过试验例来进一步阐述本发明药物的有益效果。

试验例1

2013年7月，四川宜宾市某猪场购进仔猪300头，体重20千克左右，饲养10天后，部分猪只出现精神沉郁、食欲不振、拉白色稀便，脱水、消瘦等症状，先后有100头猪发病，死亡4头。经过病理检查诊断为猪大肠杆菌病。对病猪进行隔离饲养，将96头病猪随机分为7组供试。试验1组采用实施例1制备，混饮给药，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用，连用7日；试验2组采用实施例2制备，自由饮用，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用；试验3组采用实施例3制备，自由饮用，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用连用7日；试验4组采用实施例4制备，混饮给药，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用；试验5组采用实施例5制备，混饮给药，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用；恩诺沙星组采用2％恩诺沙星颗粒(自配)，混饮，每1L水添加2g；空白对照组不给药；其余各组连用7日。试验结束后继续观察15日，统计试验结果，

见表1。

表1本发明颗粒剂对大肠杆菌疗效统计

试验结果表明：与空白对照组比较，6个试验组对猪大肠杆菌病均有显著疗效；与恩诺沙星组相比较，本发明药物5个组对畜禽大肠杆菌病防治效果要好，见效快；本发明药物以试验5组给药疗效最好。

试验例2

为了进一步说明本发明颗粒剂的开发和应用，2013年6月在大北农技术研究中心实验动物房进行了本发明颗粒剂对人工感染鸡大肠杆菌病的疗效试验，现将结果报告如下。

1材料与方法

1.1试验材料

复方刺梨根颗粒剂，自制；

2％恩诺沙星颗粒，自配；

致病性大肠杆菌cvcc249，购自中国兽医药品监察所；

试验动物：10日龄雏鸡，购自北京某种鸡孵化场。

1.2试验方法

1.2.1动物分组：将180只9日龄蛋鸡分为6个试验组，每组30只。本发明颗粒试验1组：按实施例1制备，混饮给药，剂量3g/L；本发明颗粒试验2组：按实施例3制备，混饮给药，剂量3g/L；本发明颗粒试验3组：按实施例5制备，混饮给药，剂量3g/L；药物对照组：2％恩诺沙星颗粒，接种大肠杆菌后，混饮给药，剂量2.0g/L；阳性对照组：感染后不给药；阴性对照组：不感染不给药。试验组与其它各组饲养条件均一致。

1.2.2人工感染：除阴性对照组外，其余各组每只鸡皮下注射大肠杆菌0.4ml，感染菌液为5×10⁷个/mL。

1.2.3试验时间：攻毒6小时后，各感染组即出现发病症状，按1.2.1中各组设计剂量及途径给药，连续用药5天。停药5天后，活鸡全部剖检观察病变。

1.2.4疗效观察：感染大肠杆菌后及给药治疗期间，每日观察各组临床症状，记录各组死亡鸡数，剖检确定死因，试验结束后，各组全部剖检，记录病变情况。

1.2.5疗效判定

死亡：凡在试验期间出现大肠杆菌病典型症状并死亡，剖检有明显的心包炎，肝周炎病变，并从肝及心分离出大肠杆菌病菌，判为感染该菌死亡。根据死亡鸡数计算各组死亡率。

保护：凡在试验期间出现未死亡的鸡判为保护，保护指数＝(感染对照组死亡数-试验组死亡数)/感染对照组死亡数×100％。

治愈：凡在试验期间经用药治疗，大肠杆菌病症状消失，饮食欲及精神恢复正常，试验结束时剖检无任何病变，体重较试验时增加，即判为治愈。根据治愈鸡占试验组的比率计算治愈率。

1.2.6数据的分析和处理

用spss18.0软件进行数据的显著性检验，对死亡率、保护率、治愈率进行各组间X2检验。

2结果与分析

2.1临床诊断

各阶段死亡鸡剖检病变，大致相同：肝脏有出血点、肾脏有出血点、心包腔积液，随着病程延长，胸肌有纤维素性渗出，肝包膜、心包膜增厚。对各阶段死亡鸡，对病料无菌分离培养，可出现典型的大肠杆菌菌落。由以上病变可以确定，死亡鸡为鸡大肠杆菌感染致死。

2.2疗效分析

攻毒6小时后，鸡群开始出现发病症状，各感染组雏鸡畏寒聚堆怕冷、精神沉郁、食欲饮欲下降、排白色稀便。给药后的第2天，给药组病情迅速得到控制，症状减轻。药物对照组病情恢复较试验组缓慢。阳性对照组病情进一步发展，怕冷、挤堆、不食，严重者死亡。阴性对照组精神较好，饮食欲旺盛、无聚堆现象、无稀便。停药5天后结束试验，各组鸡全部剖检，其结果及疗效统计见表2、表3。

表2试验期间及死亡结束时剖检结果

表3疗效统计

由表2、3可见，本发明颗粒剂试验1组、试验2组和试验3组死亡率比恩诺沙星组低，更低于阳性对照组，而保护率及治愈率比药物对照组明显提高。经过X²检验，本发明颗粒剂试验1组、试验2组、试验3组疗效无显著差异(P＞0.05)，本发明颗粒剂3个试验组与恩诺沙星组相比疗效差异显著(P＜0.05)，与阳性对照组相比差异极显著(P＜0.01)。本发明颗粒剂饮水给药对鸡大肠杆菌病有很好的疗效，其见效快，保护率、治愈率高，疗效比2％恩诺沙星要好。

试验例3

2013年10月，北京密云区某猪场，断奶仔猪，出现拉白色或黄白色稀粪，脱水、呼吸加快等症状，先后有62头猪发病，死亡4头。经过病理检查诊断为大肠杆菌病。将58头病猪分为3组供试。试验1组采用实施例1制备，混饮给药，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用，连用7日；试验2组采用实施例5制备，混饮给药，每1L水添加本发明颗粒剂3g，自由饮用；空白对照组不给药；试验组连用7日。试验结束后继续观察2日，统计试验结果，见表4。

表4本发明颗粒剂对仔猪黄痢疗效统计

组次	试验动物头数	治愈头数	死亡头数	治愈率
					试验1组	25	23	0	92.00%
试验2组	25	24	0	96.00%
					空白对照组	8	2	1	33.33%

试验结果表明：与空白对照组比较，本发明颗粒剂2个试验组对仔猪大肠杆菌病疗效显著。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物，含有活性成分，其特征在于，其活性成分由刺梨根、石榴皮、酢浆草、飞扬草、天胡荽、蛇疙瘩、溪黄草制成。

2.根据权利要求1所述的防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于，所述活性成分由刺梨根450-650份、石榴皮300-500份、酢浆草200-300份、飞扬草200-350份、天胡荽250-300份、蛇疙瘩300-500份、溪黄草200-350份制成。

3.根据权利要求2所述的防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于所述活性成分由刺梨根420-630份、石榴皮340-480份、酢浆草200-280份、飞扬草220-320份、天胡荽260-300份、蛇疙瘩320-490份、溪黄草220-330份制成。

4.根据权利要求3所述的防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物，其特征在于，所述活性成分由刺梨根600份、石榴皮400份、酢浆草260份、飞扬草300份、天胡荽280份、蛇疙瘩400份、溪黄草300份制成。

5.一种权利要求1-4任一项所述的防治畜禽大肠杆菌病的中药组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）按重量配比称取各药物原料；

（2）将称得的各药物原料，混合均匀，加10倍量75%的乙醇，浸泡20min，真空回流提取三次，第一次煎煮2h，第二次、第三次分别煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩成相对密度为1.30-1.35（60℃）的稠膏，加入适量的药用糊精或者药用淀粉，搅拌均匀，减压真空干燥，粉碎成细粉，制备成颗粒，即得。