CN102274314A - 常青球虫散及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了常青球虫散及其制备方法，按重量份数计为，原料组成如下：青蒿300～400份、常山600～800份、白头翁600～800份、仙鹤草340～480份、苦参600～800份、马齿苋340～480份、地锦草340～480份、墨旱莲300～400份。本发明制作常青球虫散的工艺控制简单，生物利用度高，药效好，疗效快，成本低。

Description

常青球虫散及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗鸡球虫病的常青球虫散及其制备方法。

背景技术

鸡球虫病是病原为艾美耳科的原虫寄生虫病，鸡球虫主要寄生于鸡肠道，部分球虫寄生于鸡肝脏。球虫发病以多种类型的球虫乱囊混合感染，及与其他疾病混合感染，诱发其他疾病为特征；球虫乱囊具有高浓度耐药性，交叉耐药性、多重耐药性等特点（参看2009年第03期《中国禽业导刊》中的“鸡球虫病难控制的原因及对策”)。球虫病的发生导致肠道出血，肠粘膜损伤，轻者导致鸡营养不良，生长缓慢，重者导致鸡的死亡，给养殖业带来严重的损失。

目前鸡球虫病主要以预防为主，其中主要以化学药物为主，但化学药物

长期添加具有肝脏和肠毒性，并且容易产生耐药性，也给食品业带来严重的药残，毒素残留等食品安全隐患；由于球虫的生活史比较复杂，不同时期具有不同的抗原，因此没有球虫亚单位疫苗，其弱毒苗容易反强，有潜在的危害（参看2006年第11期《家禽科学》中的“鸡球虫病药物防治存在的问题及对策”)。

    中草药往往含有多种有效成分，由多种中草药原料制作的中药的成分更加复杂，是名符其实的联合用药，可以解决使用化学药物易产生耐药性的缺陷，又中草药为纯天然物质，经精选组方的中药抗球虫红物的安全性高。目前含有青蒿素(青蒿中的主要成分青蒿素有强力抗原虫作用)的用于抗鸡球虫的中药，存在以下局限性：产品质量不稳定、高温下不不稳定(青蒿素具有热不稳定性，60℃以上就分解)，而饲料制粒时的温度在90℃左右，所以导致该类产品中的青蒿素含量大大降低，用药量大(在饲料中的添加比例为1～2%)，用药成本高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种毒性小、抗球虫指数高、用药成本低的治疗鸡球虫病的常青球虫散及其制备方法。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

1.常青球虫散的组成，按重量份数计为，原料组成如下：青蒿300～400份、常山600～800份、白头翁600～800份、仙鹤草340～480份、苦参600～800份、马齿苋340～480份、地锦草340～480份、墨旱莲300～400份； 

2.按下述工艺步骤及工艺参数制备：

（1）将青蒿300～400份粉碎，备用；

（2）将常山600～800份、白头翁600～800份、仙鹤草340～480份、苦参600～800份、马齿苋340～480份、地锦草340～480份、墨旱莲300～400份，7味药混合均匀，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮2小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30（温度为60℃）的稠膏，干燥，粉碎；

（3）将（1）、（2）所得粉末混合，混匀，过筛，即得。

在本发明中，最佳重量配比如下 ：青蒿350份、常山700份、白头翁700份、仙鹤草400份、苦参700份、马齿苋400份、地锦草400份、墨旱莲350份。

本发明为灰棕色至深棕色粉末；气微香，有清热燥湿，凉血止痢，用于鸡球虫病的治疗，每1kg饲料混合1～2g本发明。

本发明的鉴定方法如下：

（1）取本品2g，加70%乙醇20ml，超声处理1小时，滤过，滤液加三氯甲烷10ml萃取，取三氯甲烷层，浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取常山对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录××页)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-氨水（8∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（2）取本品3g，加三氯甲烷25ml，浓氨试液调pH至9.5，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取氧化苦参碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录××页)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨（2∶3∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（3）取本品2g，加80%甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水-乙醚（1∶1）60ml使溶解，静置分层，弃去乙醚液，加乙醚提取二次，每次20ml，弃去乙醚液，加盐酸5ml，置水浴中水解1小时，取出，迅速冷却，用乙醚提取二次，每次20ml，合并乙醚液，用水30ml洗涤，弃去水液，乙醚液挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取槲皮素对照品，加乙醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录××页)试验，吸取以上两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶4.5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（4）取本品3g，加乙醇20ml，浸泡2小时，超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取墨旱莲对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录××页)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明临床试验及结果如下：

实验实例一：人工发病治疗试验及结果

（1）选取30日龄的健康雏鸡180只，平均体重0.85Kg左右，随机分为6组，每组30只，分别为常青球虫散大剂量组（5g/kg混食）、常青球虫散中剂量组（2g/kg混食）、常青球虫散小剂量组（1g/kg混食）、盐霉素药物对照组（60mg/kg混食）、感染不给药组（阳性对照组）、不感染不给药组（阴性对照组），各组雏鸡自由进食饮水，除阴性对照组外，其余各组均素囊接种孢子化卵囊，给药途径及治疗量制成表1：

表1

组别	鸡数/只	处理方法
			常青球虫散（大剂量组）	30	感染，5g/kg混食
常青球虫散（中剂量组）	30	感染，2g/kg混食
			常青球虫散（小剂量组）	30	感染，1g/kg混食
盐霉素（药物对照组）	30	感染，60mg/kg混食
			阳性对照组	30	感染，不治疗
阴性对照组	30	不感染

   （2）实验指标

①临床症状：实验期间观察和记录各组试验鸡的精神、食欲及粪便排出情况。

②存活率：存活率=存活鸡数/开始鸡数×100%。

③增重率：感染后第8天，全部试验鸡单只称重，计算各组增重率。增重率=（试验结束后平均体重-实验开始时平均体重）/试验开始时平均体重×100%；相对增重率=用药组或感染不用药组的增重率/不感染不用药组的增重率×100%。

④粪便记分：接种卵囊后第4、5、6、7、8天，参考Morehouse的方法，观察试验鸡状况和粪便变化情况。按照以下标准记分：正常0分；少量血便1分；中等血便2分；许多血便3分；无正常粪便4分。0分不作记录次数计。平均分辨记分=每组鸡粪便记分之和/记录次数。

⑤病变值：参照Reid＆Johnson（1970）方法，做鸡的盲肠及小肠病变记分。以下全部病变者记3分，有其中二项者记2分，有其中一项者记1分，无病变者记0分。

a.    两侧盲肠明显肿大，肠内充满凝固血液；

b.    盲肠上皮变厚并被浸蚀，如为恢复期的病鸡，盲肠萎缩，无血，内部充满干酪样物质，变硬；

c.    小肠肠壁扩张、松弛、增厚，有严重的坏死，肠黏膜上有许多小出血点，裂殖体繁殖处有淡白色斑点中。

    病变值=每组鸡的平均病变记分×10。

    ⑥卵囊值：感染后第8天将鸡全部剖杀，取盲肠内容物，算克卵囊数（OPG）。并按角田清的标准换算成卵囊值，即感染后第8天鸡的（OPG）值与感染不给药组鸡的（OPG）值的比值小于1%，卵囊值为0；在1%～23%时，卵囊值为5；在25%～75%时，卵囊值为20；在70%～100%时，卵囊值为40。

    ⑦抗球虫指数（ACI）：按美国默克（Merck）公司的计算公式，ACI≤120为无效，ACI=120～160为中等到有效，ACI=160～180为良好，ACI>180为优秀。ACI=（相对增重率+存活率）-（卵囊值+病变值）。

   （3）试验结果及分析

    ①临床症状：试验组攻毒18小时后，大多数病鸡萎缩、羽毛松乱、食欲减退或废绝，常离群呆立、翅膀下垂、行动迟缓、生长发育停滞、贫血、鸡冠和黏膜苍白、拉水样恶臭血便、肛门周围毛羽被粪便沾污、喜饮水、后期极度消瘦。不感染不给药组鸡精神、食欲、粪便均正常。感染不给药组从感染后第3.5d开始排出血便，一直保持到试验结束，感染给药组以第4.5d开始出现少量血便，第7.5d均停止血便，精神基本恢复，食欲趋于正常，其中药物对照组第6d死亡1只，药物试验组小剂量组死亡1只。

    ②成活率：见表2，感染不用药出现因球虫感染而死亡的鸡只，成活率是66.7%，死亡率较大，达到33.3%。药物对照组的成活率为96.7%，药物试验组大剂量、中剂量的成活率为100%，小剂量的成活率为96.7%。

表2

组别	鸡数（只）	死亡数量（只）	成活率（%）
				阴性对照组	30	0	100.0
阳性对照组	30	10	66.7
				药物对照组	30	1	96.7
大剂量组	30	0	100.0
				中剂量组	30	0	100.0
小剂量组	30	1	96.7

    ③增重率：见表3，各试验组的初始平均体重为0.84～0.86kg，试验后阳性对照组在没有给药的情况下，受球虫影响较大，相对增重率为68.5%；各给药组相对增重率在83.0%～91.2%，相对增重率高于80%。

表3

    ④粪便计分：各组除不感染不用药组外，鸡都在感染球虫4～6天出现严重的血便。6天后出血便逐渐停止。粪便记分除健康为0外，感染不用药、盐霉素和常青球虫散小剂量组为4分，常青球虫散大、中剂量组为3分。

    ⑤病变值：见表4，感染不用药组平均病变记分为23.0，盐霉素组为22.3，常青球虫散大剂量组为13.3，中剂量组为15.3，小剂量组为20.3。

    ⑥卵囊值：见表4，各组卵囊值，最多的是感染不用药组卵囊为40，其余各组卵囊值为10，低于感染不用药组卵囊数。

    ⑦抗球虫指数（ACI）：见表4，本试验中，常青球虫散大、中剂量组抗球虫指数高于160，低于180，属于中等抗球虫效力；常青球虫散小剂量组和盐霉素组的抗球虫指数低于160，高于120，属于抗球虫低效。

表4

组别	鸡数	病变值	卵囊值	ACI
					阴性对照组	30	0.0	0	——
阳性对照组	30	23.0	40	——
					药物对照组	30	22.3	10	147.4
大剂量组	30	13.3	10	167.9
					中剂量组	30	15.3	10	164.3
小剂量组	30	20.3	10	155.3

实验实例二：自然发病治疗试验及结果

（1）自然发病病例选用经微生物鉴定确定为球虫病的30日龄的发病雏鸡150只，随机分成5组。分别喂常青球虫散大、中、小剂量3个组（药物试验组），剂量分别为5g、2g、1g 常青球虫散拌料1kg的剂量混饲；1个盐霉素组（药物对照组），剂量60mg盐霉素拌料1kg混饲；1个不给药组（阳性对照组）；另选30只健康雏鸡作为一组（阴性对照组），试验前2天观察鸡群的采食、粪便情况，临床观察正常后方准许参与试验。实验过程中，如果有动物继发其他传染病，或者不明原因的死亡则该动物退出试验，另选符合试验要求的动物补上。给药剂量及方法见表5：

表5

组别	鸡数/只	处理方法
			常青球虫散（大剂量组）	30	治疗，5g/kg混食
常青球虫散（中剂量组）	30	治疗，2g/kg混食
			常青球虫散（小剂量组）	30	治疗，1g/kg混食
盐霉素（药物对照药）	30	治疗，60mg/kg混食
			阳性对照组	30	不治疗
阴性对照组	30	健康，不处理

（2）实验结果表明，常青球虫散大、中剂量组对鸡球虫病的总有效率达90%以上，且常青球虫散治愈后观察病情无复发，无明显不良反应。自然发病治疗试验结果见表6：

表6

组别	数量	治愈	显效	有效	无效	总显效率	总有效率
								大剂量组	30	13	11	5	1	80.0%	96.7%
中剂量组	30	8	15	6	1	76.7%	96.7%
								小剂量组	30	5	14	8	3	62.3%	90.0%
药物对照组	30	4	10	9	7	46.7%	83.3%
								阳性对照组	30	/	/	/	/	/	/
阴性对照组	30	/	/	/	/	/	/

由以上实验结果可知，本发明常青球虫散对人工感染球虫病和自然发病均具有明显的效果，该药具有明显的抑杀球虫、抑菌止痢、收敛止血作用，对禽类的球虫病及其所致的血便等病症有显著疗效，试验结果符合该药原功能主治，与对照药物相比，优于同类药物盐霉素，治疗未出现不良反应。

    有益效果：

本发明制作常青球虫散的工艺控制简单，生物利用度高，药效好，疗效快，成本低。

具体实施方式

本发明的最好实施方式是按照整体的，分别的方案，分别实施，下面通过实施例对本发明进行具体描述： 

青蒿350g、常山700g、白头翁700g、仙鹤草400g、苦参700g、马齿苋400g、地锦草400g、墨旱莲350g。制备步骤如下： 

（1）将青蒿350g粉碎，备用；

（2）将常山700g、白头翁700g、仙鹤草400g、苦参700g、马齿苋400g、地锦草400g、墨旱莲350g，7味药混合均匀，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮2小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30（温度为60℃）的稠膏，干燥，粉碎；

（3）将（1）、（2）所得粉末混合，混匀，过筛，即得。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (3)

1.常青球虫散的组成，按重量份数计为，其特征在于，原料组成如下：青蒿300～400份、常山600～800份、白头翁600～800份、仙鹤草340～480份、苦参600～800份、马齿苋340～480份、地锦草340～480份、墨旱莲300～400份。

2.根据权利要求1所述的常青球虫散，其特征在于，最佳重量配比如下：青蒿350份、常山700份、白头翁700份、仙鹤草400份、苦参700份、马齿苋400份、地锦草400份、墨旱莲350份。

3.常青球虫散的制备方法，其特征在于，按重量份数计为，按下述工艺步骤：

将青蒿300～400份粉碎，备用；

   （2）将常山600～800份、白头翁600～800份、仙鹤草340～480份、苦参600～800份、马齿苋340～480份、地锦草340～480份、墨旱莲300～400份，7味药混合均匀，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮2小时，第二次加8倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25～1.30（温度为60℃）的稠膏，干燥，粉碎；

   （3）将（1）、（2）所得粉末混合，混匀，过筛，即得。