CN103356812B - 一种了哥王颗粒 - Google Patents
一种了哥王颗粒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103356812B CN103356812B CN201210094450.2A CN201210094450A CN103356812B CN 103356812 B CN103356812 B CN 103356812B CN 201210094450 A CN201210094450 A CN 201210094450A CN 103356812 B CN103356812 B CN 103356812B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethanol
- granule
- radix wikstroemae
- macroporous resin
- clear paste
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于中药技术领域，具体公开了一种了哥王颗粒，它是了哥王的有效部位制成。本发明通过对现有药材的提取工艺的改进，增强了了哥王颗粒的疗效，降低了潜在的毒性。长期以来，了哥王颗粒有大量的中医临床的应用，但是其深入的机理研究没有明确的研究阐明；发明人对该配方采用不同的提取、分离所得药物采用多种常见病毒和病菌的抑制活性的筛选，确定采用本发明的实现方式。本发明的目的在于通过了哥王药材的提取方法的优化，可以更加有效地达到安全、有效和可控的目的，提供更加安全和有效的临床颗粒剂型。
Description
【技术领域】
本发明属于中药及其制备方法的技术领域，具体涉及一种含有了哥王提取合并所得的了哥王颗粒的制备方法。
【背景技术】
了哥王之名始载于《岭南采药录》，其味苦、辛，性寒，有毒，功能清热解毒，散瘀逐水，消肿止痛。在江西、广东、广西、浙江、福建、湖南等江南地区的民间有良好的应用基础，广泛用于热毒所致的支气管炎、肺炎、腮腺炎、扁桃体炎、淋巴结炎、乳腺炎、疮疖痈疽等病症。
了哥王是常用中草药，学名南岭荛花[wikstroemiaindica(L.)C.A.May.]，为瑞香科荛花属植物，性味苦寒，微辛，有毒。功能清热解毒，化痰散结，通经利水。分布在我国长江以南及东南亚一带，盛产于浙江、江西等地，为半常绿小灌木，全年可采，一般夏季采叶，秋季采根。根系挖后洗净，晒干备用，或剥取根内皮晒干备用，或趁鲜时切片晒干备用，或蒸熟切片晒干备用。了哥王含有南荛素、荛花素、羟基荛花素、西瑞香素、牛蒡酚、南荛酚、罗红松脂酚、松脂醇、β-谷甾醇、7-酮-β-谷甾醇、豆甾烷-3、7-二醇、5-豆甾-3β、7a-二醇、多糖类、酸性树脂、挥发油、皂甙等成分。
通过本项目研究，提高了该药的质量标准水平，将有助于产品质量稳定，临床疗效和安全性的提高。通过改变剂型，将提供一种服用方便、安全、有效的中药抗感染新药。
传统的了哥王胶囊的制备方法为：取了哥王约440g，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水煎煮二次，每次5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的浸膏，喷雾干燥成干浸膏粉；取干浸膏粉220g，加淀粉适量，混匀，制粒，80℃以下干燥，装胶囊，共制成100粒，即得。
目前已经公开了一些了哥王的相关的专利文献：CN102311415A、CN102344454A、CN102000215A、CN1857522、CN1726979、CN1252285、CN1562233、CN101601666。
【发明内容】
本发明的目的在于提供了一种新的哥王颗粒。长期以来，了哥王颗粒有大量的中医临床的应用，但是其深入的机理研究没有明确的研究阐明；发明人对该配方采用不同的提取、分离所得药物采用多种常见病毒和病菌的抑制活性的筛选，确定采用本发明的实现方式。
本发明的目的在于通过了哥王药材的提取方法的优化，可以更加有效地达到安全、有效和可控的目的，提供更加安全和有效的临床颗粒剂型。
本发明具体公开了一种了哥王颗粒，它是了哥王的有效部位制成。本发明通过对现有药材的提取工艺的改进，增强了了哥王颗粒的疗效，降低了潜在的毒性
具体而言，本发明提供的一种新的了哥王颗粒，采用以下方法制备：
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50-80％乙醇回流提取2-7次，每次1-3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂＝1∶1-5)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇各4-10倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，取干浸膏粉加蔗糖粉、糊精及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，分装颗粒，即得。
本发明提供的一种新的了哥王颗粒，还可以采用以下方法制备：
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50-80％乙醇回流提取2-7次，每次1-3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂＝1∶1-5)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇各4-10倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，取干浸膏粉加蔗糖粉、糊精及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，分装颗粒，即得。
本发明提供的一种新的了哥王颗粒，还可以采用以下方法制备：
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50-80％乙醇回流提取2-7次，每次1-3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂＝1∶1-5)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各4-10倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，取干浸膏粉加蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，分装颗粒，即得。
上述的了哥王颗粒，所述步骤(1)5倍量的50-80％乙醇回流提取2-4次，每次1-3小时。
上述了哥王颗粒，所述步骤(1)5倍量的50-80％乙醇回流提取2次，每次2小时。
上述的了哥王颗粒，所述步骤(2)中的清膏∶大孔树脂＝1∶1-3的比例。
上述的了哥王颗粒，所述步骤(2)中的清膏∶大孔树脂＝1∶3的比例。
上述的了哥王颗粒，所述步骤(2)中的以水、30％乙醇、50％乙醇、70％和95％乙醇各4-6倍量柱体积洗脱。
上述的了哥王颗粒，其特征在于所述步骤(2)中的以水、30％乙醇、50％乙醇、70％和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱。
上述的了哥王颗粒在制备治疗感染疾病药物中的应用。
上述的大孔树脂选自HP-10、HP-20、HP--30、HP-40、HP-50、ParapetP-S、ParapetQ、ParapetR、ParapetS、ParapetN、Chromosorb中的一种。
【具体实施方式】
实施例1
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的75％的乙醇回流提取3次，每次2小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-10＝1∶5)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例2
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-10＝1∶4)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例3
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-10＝1∶6)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各6倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例4
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的80％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.10的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-10＝1∶8)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各10倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例5
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的75％的乙醇回流提取2次，每次3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶5)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例6
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次2小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶4)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各6倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例7
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶6)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各8倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例8
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的80％的乙醇回流提取2次，每次3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.10-1.15的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶8)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各10倍量柱体积洗脱；
(3)合并水、30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例9
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的75％的乙醇回流提取3次，每次2小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-30＝1∶5)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照5克/袋分装颗粒，即得。
实施例10
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-30＝1∶4)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例11
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-30＝1∶6)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各6倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例12
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的80％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.10的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-30＝1∶8)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各10倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例13
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的75％的乙醇回流提取2次，每次3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-40＝1∶5)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例14
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次2小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-50＝1∶4)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各6倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例15
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂ParapetP-S＝1∶6)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各8倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例16
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的80％的乙醇回流提取2次，每次3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.10-1.15的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂ParapetQ＝1∶8)，分别以水、30％乙醇和95％乙醇各10倍量柱体积洗脱；
(3)合并水和30％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例17
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的75％的乙醇回流提取3次，每次2小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂ParapetR＝1∶5)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例18
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂ParapetS＝1∶4)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例19
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂ParapetN＝1∶6)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各6倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例20
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的80％的乙醇回流提取3次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.10的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂Chromosorb＝1∶8)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各10倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例21
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的75％的乙醇回流提取2次，每次3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶5)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各5倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例22
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次2小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶4)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各6倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例23
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50％的乙醇回流提取2次，每次1小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.15-1.20的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶6)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各8倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋分装颗粒，即得。
实施例24
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的80％的乙醇回流提取2次，每次3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.10-1.15的清膏，取清膏上已经处理好的大孔树脂(清膏∶大孔树脂HP-20＝1∶8)，分别以水、30％乙醇、50％乙醇和95％乙醇各10倍量柱体积洗脱；
(3)合并30％乙醇和50％乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，加入蔗糖粉、糊精(浸膏∶蔗糖∶糊精＝1∶3∶1)及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50℃干燥，整粒，烘干，按照2克/袋按照2克/袋分装颗粒，即得。
对照例1
取了哥王约440g，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水煎煮二次，每次5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)的浸膏，喷雾干燥成干浸膏粉；取干浸膏粉22g，加淀粉适量，混匀，制粒，80℃以下干燥，装胶囊，共制成100粒，即得。
对照例2
CN102000215A的实施例1
对照例3
CN101601666的实施例1
实验例1-抗病毒活性对比实验
1 材料与方法
1.1材料
美国Waters公司2010系列高效液相色谱(HPLC)；日本岛津SHIMADZU1/10万电子天平；丹麦TL3072超净工作台；日本MODEL304二氧化碳孵箱；日本Olympas显微镜；合胞病毒(RSV)，腺病毒3型(Ad3)，腺病毒7型(Ad7)，柯萨奇B组病毒3型(CB3)，柯萨奇B组病毒5型(CB5)，流感病毒甲3亚型(Fa3)，副流感病毒IV型(PF3)病毒。
1.2方法
1.2.1稀释液制备
取实施例1-4和对照例1-3干浸膏粉的溶液(实施例1-2和对照例1干浸膏粉冷冻干燥，实施例3-4直接用粉针固体粉末，分别配成10％浓度溶液)150μl，分别用细胞维持液由高向低2倍系列稀释成1/20、1/40、1/80、1/160、1/320、1/640、1/1280、1/2560、1/5120、1/10240各浓度液，每组药按不同浓度分装在10支离心管中，第11支管为只有维持液和Hep-2细胞的空白对照。依次向已辅板培养Hep-2细胞的组织培养板中，从低向高放入每个浓度的药物100μl，放入50％CO2孵箱37℃培养1～5天，以对50％的细胞产生毒性时的药物浓度为CC50。
1.2.2病毒的毒力测定
把病毒液用MEM细胞维持液做10倍系列稀释，以上述相同方法测定RSV，Ad3，Ad7，CB3，CB5病毒的毒力，以致培养细胞Hep-2病变达到50％计算TCID50；用红细胞凝集试验测定Fa3，PF3病毒的毒力，以鸡红细胞在V形微量滴定板孔底形成环状，周围有小凝块时的病毒悬液稀释度为1个单位的血凝素。
1.2.3抗RSV，Ad3，Ad7，CB3，CB5病毒实验用中和试验：
取实施例1-4和对照例1干浸膏粉，分别配成10％浓度溶液)，依据每种药物CC50，依次向下倍比稀释，取6个不同浓度，同时设病毒对照、细胞对照、药物对照。采用上述病毒的100TCID50与药物等量稀释后，接种已成单层细胞的96孔培养板，置孵箱培养1～5天，镜下判定结果。
1.2.4抗Fa3，PF3病毒实验用血凝抑制试验：
取实施例1-4和对照例1干浸膏粉，依据每种药物CC50，分别取9个2倍系列稀释的药液，分别与4个单位的Fa3，PF3等量混合，振荡，在37℃作用1.5h后，在微量滴定板依次倍比用生理盐水稀释加入，另设红细胞对照，病毒对照，全部孔中各加1％鸡红细胞悬液0.5ml，45min后记录结果(以上试验均做2次，结果互为参照)。
2 结果
2.1判定结果标准：
①RSV，Ad3，Ad7，CB3，CB5病毒在中和试验中，以能保护50％的培养细胞不产生病变的最高稀释度，为判定药物抗病毒的终点滴度。
②Fa3，PF3病毒采用的血凝抑制试验，以完全能抑制4单位Fa3，PF3所致的红细胞凝集的药物最高稀释度为判定终点滴度。
结果见附表1。
表1抗病毒药物最高稀释浓度结果
“-”是指药物对病毒引起的培养细胞调亡无抑制作用。
2.结论
本实验体现了实施例1-4的抗呼吸道病毒的范围。通过这一实验我们确认，实施例1-4对呼吸道最常见7种病毒都具有明显的抑制作用。而对照例1对RSV、Ad3、CB3和CB5病毒没有抑制作用，照例2对CB5和Fa3病毒没有抑制作用，且它们对其他病毒抑制浓度也高于实施例1-4。由此可以看出，发明的注射剂对于呼吸道最常见的7种病毒都具有很好的体外抑制作用，这进一步说明发明的了哥王颗粒的抗病毒活性是有实验与理论基础的。
实验例2-了哥王颗粒抗菌活性筛选试验
1.材料
标准菌：大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)(中国药品生物制品检定所提供)。临床分离菌株：大肠埃希菌(57、95号)、铜绿假单胞菌(57、66号)、白色念珠菌(44、92、66、97号)(从医院呼吸系统患者痰液标本中分离得到)。
抗生素药敏纸片：中国药品生物制品检定所提供。
筛选药物：实施例11-14干浸膏粉和对照例2-3干浸膏粉。
2 方法与结果
2.1耐药菌药敏测试
耐药菌药敏测试按照抗生素药敏常规测试力方法(纸片法)进行.结果详见表1
表12种临床分离菌株对药物的药敏试验结果
2.2药液的制备
用电子分析天平称取筛选药物(实施例11-14和对照例2干浸膏粉)各1.0g，以无菌蒸馏水(含0.1％DMSO助溶)配成浓度为400mg/ml的溶液作初筛。取上述溶液，采用2倍稀释法，即取10支无菌试管，每支菌试管加入0.5ml蒸馏水，编号，取0.5ml原药液置于第1试管中，均匀混合，继而吸取0.5ml加入第2支试管内，依次推稀释至第9管，弃去0.5m，第10管作为对照管，所得浓度的药液可用于测定最低抑菌浓度(MIC)。
2.3菌液的制备
将菌株接种于普通琼脂平板上，置于35e恒温箱中培养h，用接种环将菌株转移至试管中，加入无菌生理盐水，配成度为15亿个/ml的菌液作初筛用，再稀释成浓度为106个/的菌液用于测定MIC
2.4抑菌试验测定方法为琼脂扩散法。
初筛：用无菌棉签将浓度为1.5亿个/ml的标准菌液均匀布于M-H氏琼脂培养基上，然后用直径为6mm的无菌圆玻璃管打孔，将含有各提取物浓度为100mg/ml的药液加入中，加满为止，不得溢出。再将培养皿置于35℃恒温箱中培养24h(抗白色念珠菌试验用沙氏琼脂培养基，于28℃下培养48h，取出观察，用卡尺测量抑菌圈的直径。
MIC的测定：方法同初筛，选择对标准菌的抑菌圈直径≥10mm的药物，分别将不同浓度的药液加入孔中进行带菌培，抑菌圈直径≥10mm的最低药液浓度即为其MIC值，以筛选药物同法测定耐药菌的MIC值，结果详见表2。
表2药物抗菌实验筛选结果
抑菌圈的计量单位是mm，MIC的计量单位是mg/ml，以上实验数据保留2位有效数字。
3.结论：实施例1-4的抗菌效果优于对照例2干浸膏粉，且实施例11-14的抗菌谱比对照例2-3的浸膏更广，尤其是对耐药菌有更强的抑制作用。
实验例3-了哥王胶囊治疗上呼吸道感染的对比
了哥王胶囊(实施例20)完成观察病例30例，对比例1完成观察病例24例，现将结果总结如下。
1 病例选择
1.1诊断标准
1.1.1西医诊断标准：参照《中药新药治疗感冒的临床研究指导原则》标准制定。根据病史，流行情况，鼻咽部的症状及体征，结合周围血象和X线检查可作出临床诊断，进行病毒血清学检查可确定病因诊断。
临床表现：咽干咽痛，鼻塞喷嚏、流涕、咳嗽、发热、头痛、全身酸痛、乏力纳差等；周围血象白细胞计数正常或偏低；免疫荧光血清病毒分离检查阳性。
1.1.2临床分型
1.1.2.1普通感冒：俗称“伤风”，又称急性鼻炎或上呼吸道卡他，以鼻咽部卡他症状为主要表现。常见病原体鼻病毒，冠状病毒、流感和副流感病毒，还有呼吸道合胞病毒、埃可病毒和柯萨奇病毒等。
1.1.2.2病毒性咽炎和喉炎：急性病毒性咽炎由鼻病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒以及肠病毒、呼吸道合胞病毒等引起。临体特征为：咽部发痒和灼热感、咽痛不明显。
1.1.2.3疱疹性咽峡炎：常由柯萨奇病毒A引起、多于夏季发作、多见于儿童，偶见于成人。
1.1.2.4咽结膜热：主要由腺病毒、柯萨奇病毒等引起，常发生于夏季，通过游泳传播，儿童多见。
1.1.2.5细菌性咽炎和扁桃体炎：多由溶血性链球菌等细菌引起。
1.1.3中医诊断标准
(1)恶寒，发热，鼻塞流涕、喷嚏、咳嗽、头痛，全身不适等症状。
(2)舌淡红或边尖红，苔薄或黄，脉浮。
(3)气候反常或起居不慎引起，突然发病。
1.1.4中医辨症
风热症：身热较著，微恶风，汗泄不畅，头胀痛，咳嗽，痰粘或黄，咽噪，或咽喉红肿热痛，鼻塞，流黄浊涕，口渴欲饮，舌边尖红，舌苔薄白或黄，脉浮数。
1.2试验病例标准
1.2.1纳入病例标准
符合中、西医诊断标准及中医辨证，体温在38℃以上，病程在48小时以内者，可纳入试验病例。
1.2.2排除病例标准
(1)已使用过治疗药物者
(2)年龄在18岁以下或65岁以上，妊娠及哺乳期妇女，过敏体质及对本药过敏者。
(3)合并心血管、脑血管、肝、肾、造血系统等严重原发疾病者，精神病患者。
(4)不符合纳入标准，未按规定服药，或资料不全致无法判断疗效或安全性者。
2、试验方法
按随机法将病人分为观察50例，对照组48例。
2.1试验用药
2.1.1受试药物：实施例20
2.1.2对照药物：对比例1
2.1.3给药方案：
试验组：口服，一次3粒，一日3次。
对照组：口服，一次1袋，一日3次。
2.1.4疗程：3天
3.观测指标
3.1安全性观测
3.1.1一般体格检查项目：试验前检查一次。
3.1.2血、尿、便常规项目：治疗前后各检查一次。
3、1、3心、肝、肾功能检查：治疗前后各检查一次。
3.2疗效性观测
3.2.1症状观察：鼻塞流涕、喷嚏、咳嗽、头痛、恶寒发热，全身不适等。治疗前及治疗后每天各检查一次，直至痊愈。
3.2、2体温测试：每天2-3次。
3.2.3舌象、脉象：治疗前及治疗后每天各检查一次，直到痊愈。
3.2.4白细胞总数加分类：治疗前及治疗后各检查一次。
4、疗效制定标准
4.1痊愈：治疗3天以内体温恢复正常，感冒的症状全部消失。
4.2显效：治疗3天以内体温正常，感冒的大部分症状消失。
4.3有效：治疗3天以内体温较以前降低，感冒的主要症状部分消失
4、4无效：治疗3天以内体温未降或体温升高，感冒的主要症状改善。
5.统计方法
采用SAS软件进行数据分析处理。两组计量资料采用均数±标准差(x±s)进行统计描述，采用配对t检验，比较组内治疗前后治疗差异，两组治疗前后组的变化采用方差分析进行比较。两组计数资料采用构成比进行统计描述，两组治疗前后的变化采用x2检验进行比较。
6、两组间可比性分析
6.1两组间性别比较详见表1
表1、试验组与对照组性别比较
| 组别 | 例数 | 男 | 女 |
| 试验组 | 30 | 15 | 15 |
| 对照组 | 24 | 13 | 11 |
x2＝0.2264p＞0.05
6.2两组间年龄比较详见表2
表2、试验组与对照组年龄比较
| 组别 | 例数 | ＜30岁 | 31-40岁 | 41-50岁 | 51-60岁 |
| 试验组 | 30 | 8 | 8 | 8 | 6 |
| 对照组 | 24 | 6 | 8 | 6 | 4 |
x2＝3.511p＞0.05
分析：由表1、表2中可以看出两组间在性别年龄方面比较、经统计学处理后无显著差异(p＞0.05)，表明两组具有可比性。
7、结果
7.1试验组与对照组症状疗效比较，详见表3
表3、试验组和对照组症状消失情况比较
| 组别 | 例数 | 全部 | 大部分 | 部分 | 无改善 |
| 试验组 | 30 | 20 | 9 | 1 | 0 |
| 对照组 | 24 | 6 | 8 | 7 | 3 |
x＝6.2193，p＜0.05
7.2试验组与对照组治疗前后体温的变化，详见表4
表4两组治疗前后体温的比较
| 组别 | 例数 | 正常 | 降低 | 未降 |
| 试验组 | 30 | 19 | 9 | 2 |
| 对照组 | 24 | 14 | 6 | 4 |
x2＝0.8049，p＞0.05
7.3试验组与对照组治疗前后舌、脉象的对比，详见表5
表5两组治疗前后舌、脉象的变化
x2＝0.0977，p＞0.05；x2＝1.6056p＞0.05
8、结果与讨论：
8.1明显改善症状
治疗前后试验组与对照组上呼吸道感染症状消失有显著差异(p＜0.05)，前者强于后者。
8.2降低体温
两组治疗比较，治疗后体温皆有明显降低或可达正常，两组比较无统计学差异(p＞0.05)。
8.3两组治疗前后比较，舌、脉象皆无统计学意义(p＞0.05)。
8.4试验组治疗前后比较白细胞总数明显升高(p＜0.01)，淋巴细胞总数明显下降(p＜0.05)；对照组治疗前的白细胞总数和淋巴细胞总数分别显示有显著升高(p＜0.01)和下降(p＜0.05)。
8.5经安全性观察，该药对心、肝、肾功能无任何毒副作用。
综上所诉，发明人得出结论：发明的颗粒治疗上呼吸道感染的效果明确，是有效的抗感染药物。
实验例4-注射给药部位刺激性试验
1 受试样品
实施例1-24、对照例1。
2 实验动物
共4组家兔，分别为实验组(实施例1-24)、对照组(对照例1-3)、和空白组(生理盐水)，每组5只。
3 给药方法
药物的给药途径确定为耳缘静脉静脉注射，每日1次，每次1毫升，两耳交替、连续2天，每天采用相同的注射手法，在同一时间注射。
4 结果观察
给药前以及后一次给药后24小时对动物和注射部位是否出现红肿，进行肉眼观察。留下的动物根据受试物的特点和刺激性反应情况，继续观察14天再进行检查，以了解刺激性反应的可逆程度。
5 结果评价
实施例1-24的注射的刺激性比对照例2-3小，这也是发明的优势之一。
Claims (7)
1.一种了哥王颗粒，其特征在于采用以下方法制备：
(1) 了哥王440g 经粉碎得药材粗粉，加5 倍量的50-80％乙醇回流提取2-7 次，每次1-3 小时；
(2) 合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.20 的清膏，清膏与大孔树脂重量比为1:1-5，取清膏上已经处理好的大孔树脂，分别以水、30％乙醇、50％乙醇、95％乙醇各4-10 倍量柱体积洗脱；
(3) 合并水、30%乙醇和50%乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，取干浸膏粉加蔗糖粉、糊精及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50°C干燥，整粒，烘干，分装颗粒，即得。
2.一种了哥王颗粒，其特征在于采用以下方法制备：
(1)了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50-80%乙醇回流提取2-7次，每次1-3小时；
(2)合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.20的清膏，清膏与大孔树脂重量比为1:1-5，取清膏上已经处理好的大孔树脂，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、95%乙醇各4-10倍量柱体积洗脱；
(3)合并30%乙醇和50%乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，取干浸膏粉加蔗糖粉、糊精及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50°C干燥，整粒，烘干，分装颗粒，即得。
3.一种了哥王颗粒，其特征在于采用以下方法制备：
（1）了哥王440g经粉碎得药材粗粉，加5倍量的50-80%乙醇回流提取2-7次，每次1-3小时；
（2）合并乙醇液，回收乙醇至相对密度1.03-1.20的清膏，清膏与大孔树脂重量比为1:1-5，取清膏上已经处理好的大孔树脂，分别以水、30%乙醇和95%乙醇各4-10倍量柱体积洗脱；
（3）合并水和30%乙醇部分，回收乙醇，真空干燥得干浸膏粉，取干浸膏粉加蔗糖粉、糊精及用适量乙醇制软材，挤压过12-16目筛制颗粒，50°C干燥，整粒，烘干，分装颗粒，即得。
4.根据权利要求1-3任一所述的了哥王颗粒，其特征在于所述步骤（1）5倍量的50-80%乙醇回流提取2-4次，每次1-3小时。
5.根据权利要求4所述了哥王颗粒，其特征在于所述步骤（1）5倍量的50-80%乙醇回流提取2次，每次2小时。
6.根据权利要求1-3任一所述的了哥王颗粒，其特征在于所述步骤（2）中的清膏：大孔树脂=1：1-3的比例。
7.根据权利要求6所述的了哥王颗粒，其特征在于所述步骤（2）中的清膏：大孔树脂=1：3的比例。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210094450.2A CN103356812B (zh) | 2012-04-01 | 2012-04-01 | 一种了哥王颗粒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210094450.2A CN103356812B (zh) | 2012-04-01 | 2012-04-01 | 一种了哥王颗粒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103356812A CN103356812A (zh) | 2013-10-23 |
| CN103356812B true CN103356812B (zh) | 2015-08-12 |
Family
ID=49359614
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210094450.2A Active CN103356812B (zh) | 2012-04-01 | 2012-04-01 | 一种了哥王颗粒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103356812B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106668334A (zh) * | 2015-11-06 | 2017-05-17 | 庞锦霞 | 一种了哥王酊 |
| CN105943714A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-09-21 | 符如忠 | 一种治疗毒疮的药物组合物 |
| CN112999287A (zh) * | 2019-12-19 | 2021-06-22 | 康普药业股份有限公司 | 一种了哥王制剂 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101601666A (zh) * | 2009-07-10 | 2009-12-16 | 暨南大学 | 了哥王提取物及其制备方法和用途 |
| CN102000215A (zh) * | 2010-12-03 | 2011-04-06 | 沈阳药科大学 | 一种了哥王总木脂素的制备方法 |
| CN102311415A (zh) * | 2011-09-29 | 2012-01-11 | 广东药学院 | 一种从了哥王中提取西瑞香素的方法 |
| CN102344454A (zh) * | 2011-08-01 | 2012-02-08 | 广东药学院 | 了哥王提取物及其制备方法和应用 |
-
2012
- 2012-04-01 CN CN201210094450.2A patent/CN103356812B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101601666A (zh) * | 2009-07-10 | 2009-12-16 | 暨南大学 | 了哥王提取物及其制备方法和用途 |
| CN102000215A (zh) * | 2010-12-03 | 2011-04-06 | 沈阳药科大学 | 一种了哥王总木脂素的制备方法 |
| CN102344454A (zh) * | 2011-08-01 | 2012-02-08 | 广东药学院 | 了哥王提取物及其制备方法和应用 |
| CN102311415A (zh) * | 2011-09-29 | 2012-01-11 | 广东药学院 | 一种从了哥王中提取西瑞香素的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 了哥王醇提工艺的研究;邹婉婷;《湖南中医药大学学报》;20091231(第6期);46-47，53 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103356812A (zh) | 2013-10-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101919961B (zh) | 一种治疗感冒的药物组合物及其制备方法 | |
| CN103768308B (zh) | 一种用于治疗上呼吸道感染的药物组合物及其制备方法 | |
| CN102961469B (zh) | 一种治疗上呼吸道感染的中药分散片及其制备和检测方法 | |
| CN1872106A (zh) | 山香圆叶在治疗病毒性感冒疾病中的应用 | |
| CN101129455B (zh) | 苦豆子提取物及其生产方法和应用 | |
| CN114053343A (zh) | 一种中药组合物、制备方法及应用 | |
| CN100348258C (zh) | 一种治疗上呼吸道感染的药物及其制备方法 | |
| CN102274314A (zh) | 常青球虫散及其制备方法 | |
| CN101757565B (zh) | 一种治疗小儿急性支气管炎的中药组合物及制备方法 | |
| CN103356812B (zh) | 一种了哥王颗粒 | |
| CN1879688B (zh) | 风热清制剂及其制备方法和检测方法 | |
| CN1957999B (zh) | 一种中药组合物及其制备方法和检测方法 | |
| CN101053600B (zh) | 治疗感冒的药物组合物及其制备方法和用途 | |
| CN115105502B (zh) | 一种含千金藤属植物生物碱的化合物在制备猫传染性腹膜炎药物中的应用 | |
| CN104958419B (zh) | 金草清热解毒胶囊及制作工艺 | |
| CN103356813B (zh) | 一种了哥王胶囊 | |
| CN102973558A (zh) | 苦参碱在制备抗流感病毒药物中的应用 | |
| CN100435817C (zh) | 一种治疗呼吸系统疾患的中药组合物及其制备方法 | |
| CN108186866A (zh) | 金贝口服液在抗病毒中的应用 | |
| CN1919270B (zh) | 组合物，其提取物及它们的药物用途 | |
| CN102240328B (zh) | 一种治疗感冒的中药及其制备方法 | |
| CN103156961B (zh) | 一种用于感冒风寒，肺胃郁热的药物组合物 | |
| US20080102140A1 (en) | Use of solidago virgaurea in the treatment and prevention of viral infections | |
| CN105816583B (zh) | 一种治疗感冒的复方药物及其制备方法 | |
| CN100448450C (zh) | 鸢尾总黄酮提取物的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20131023 Assignee: JIANGXI YAODU RENHE PHARMACEUTICAL CO.,LTD. Assignor: Yang Wenlong Contract record no.: X2023990000192 Denomination of invention: A kind of Gewang granules Granted publication date: 20150812 License type: Common License Record date: 20230210 |