CN1899027A - 葛藤的组培快繁苗木生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了葛藤[美国葛藤(pueraria montanaMerr)、葛藤(pueraria lobata Ohwi)、粉葛(pueraria lobata Ohwi var.thomsoni van der Maesen)]快捷且增殖速度快的无性繁殖和脱毒苗木生产方法，该方法利用葛藤的茎段为外植体，进行组织培养脱毒苗木生产，在MS基本培养的基础上，添加有机营养物质、生长素类物质，来诱导丛生芽分化以达到快速增殖、再诱导丛生芽生根、最后出瓶驯化的整个繁殖过程；其操作流程为：1)外植体的选择；2)培养基的制备；3)外植体预处理，消毒；4)初代培养；5)增殖培养；6)诱导生根；7)练苗及出瓶驯化。其培养条件为：每日光照10h～12h；温度为25℃±2℃。本发明可以使每株葛藤在工厂化育苗条件下，一年内繁育成上百万株成品和脱毒苗木，大大提高葛藤的繁育苗木效率。

Description

葛藤的组培快繁苗木生产方法

一、所属领域

本发明属于农林业领域，涉及葛藤(美国葛藤(pueraria montana Merr)、葛藤(pueraria lobata Ohwi)、粉葛(pueraria lobata Ohwi var.thomsoni van der Maesen))的苗木快繁的生产方法，具体地说是利用葛藤的外植体进行组织培养，在发明的培养基配方基质中，诱导丛生芽和生根，使其达到脱毒和增殖快繁的目的。

二、背景技术

葛藤多采用压条的繁殖方法，其繁育苗木的速度和数量均受到限制，不能满足市场的大量需求，针对该问题，就需要寻找一项新的繁殖技术来迅速扩大其种苗数量，这是业内人士所关注的热点，也是公认的快繁技术。

三、发明内容

本发明的目的在于，提供葛藤的组培快繁苗木生产方法，以此方法来迅速扩大其种苗数量。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是，利用葛藤的带芽茎段为外植体，进行组培快繁苗木生产，其特点是：在MS基本培养的基础上，添加有机营养物质、生长素类物质，来诱导丛生芽分化以达到快速增殖、再诱导丛生芽生根、最后出瓶驯化的整个繁殖过程；

具体操作步骤为：

1)外植体的选择

采集当年生葛藤的幼茎，将其切成带芽小段；

2)培养基的制备

培养基为MS培养基，并分为初代培养基、增殖培养基和生根培养基；其配方分别为：

初代培养基：MS+6-苄基腺嘌呤(BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L；蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8；

增殖培养基：MS+6-苄基腺嘌呤(BA)(0.5-1.0)mg/L+萘乙酸(NAA)(0.1-0.3)mg/L，蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8；

生根培养基：MS+萘乙酸(NAA)0.05mg/L；蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8；

按照上述配方配制后消毒待用；

3)外植体预处理、消毒

先用去污粉清洗5min，后用10％NaClO浸泡10min，用无菌水冲洗2～3次后移到超净工作台上用70％酒精消毒30Sec，后用0.1％Hgcl₂消毒8min，用无菌水冲洗3～4次，浸在蒸馏水中备用。

4)初代培养

在超净工作台上，将消过毒的外植体，即带腋芽茎段切成1cm左右的片段，接种于初代培养基中，置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃条件下培养；

5)增殖培养

将初代培养的丛生芽，在超净工作台上切成小段，接种在增殖培养基上，继续扩大繁殖；

6)生根培养

扩繁后，挑选生长健壮的丛生芽，接种在生根培养基上，置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃条件下培养，培养30天左右生根；

7)练苗及出瓶驯化

将以丛生芽已生根的培养瓶盖打开，继续在培养室练苗3天，然后，取出生根苗，冲洗净根部，移植到装有已消毒土壤的育苗容器中，置在温室或大棚中，开始保持每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃，适应后，逐渐调整光照、温度条件接近室外，经常通风，按时浇水，每2天～3天一次，保持土壤湿润至生长到苗高20cm左右，为组培成品苗出圃移栽。

采用本发明的葛藤组培快繁苗木生产方法，可以使每株葛藤一年内，繁育成上百万株脱毒成品苗木，大大提高了美国克株的繁育苗木效率。

四、具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

按照本发明的技术方案：

4.1用葛藤的外植体进行组织培养快速繁育生产苗木，包括利用葛藤的外植体进行组织培养脱毒苗木生产。

4.2葛藤的组织培养快速繁育生产苗木和组织培养脱毒苗木生产采用(1)外植体的选择；(2)培养基的制备；(3)外植体预处理、消毒；(4)初代培养；(6)增殖培养；(7)生根培养；(8)练苗及出瓶驯化。

培养条件为接种后置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃。

4.3葛藤的组织培养快速繁育生产苗木和组织培养脱毒苗木生产采用的培养基配方为：

初代培养基：MS+BA(6-苄基腺嘌呤)0.5mg/L+NAA(萘乙酸)0.3mg/L；蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8。

增殖培养基：MS+BA(6-苄基腺嘌呤)0.5-1.0mg/L+NAA(萘乙酸)0.1-0.3mg/L；最佳配方为：MS+BA(6-苄基腺嘌呤)1.0mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L，蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8。

生根培养基：MS+NAA(萘乙酸)0.05mg/L；蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8。

4.4实施例：

4.4.1外植体的选择：采集当年生葛藤的幼茎，切成1cm～2cm长带芽的小段。

4.4.2培养基的制备：按照配方配制后消毒。

4.4.3外植体预处理，消毒：先用去污粉清洗5min，后用10％NaClO浸泡10min，用无菌水冲洗2～3次后移到超净工作台上用70％酒精消毒30Sec，后用0.1％Hgcl₂消毒8min，用无菌水冲洗3～4次，浸在蒸馏水中备用。

4.4.4初代培养：在超净工作台上，将消过毒的外植体(带腋芽茎段)切成1cm左右的片段，接种于初代培养基中，置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃条件下培养。

4.4.5增殖培养：将初代培养的丛生芽，在超净工作台上切成1cm左右小段，接种在增殖培养基上，继续扩大繁殖。

4.4.6生根培养：扩繁后，挑选生长健壮、长3cm左右的丛生芽，接种在生根培养基上，置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃条件下培养，培养30天左右生根。

4.4.7练苗及出瓶驯化：将以丛生芽已生根的培养瓶盖打开，继续在培养室练苗3天，然后，取出生根苗，冲洗净根部，移植到装有已消毒土壤的育苗容器中，置在温室或大棚中，开始保持每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃，适应后，逐渐调整光照、温度条件接近室外，经常通风，按时浇水，每2天～3天一次，保持土壤湿润至生长到苗高20cm左右，为组培成品苗出圃移栽。

本实施例可以使每株葛藤在工厂化育苗条件下，一年内繁育成上百万株成品和脱毒苗木，大大提高葛藤的繁育苗木效率。

Claims (1)

1.葛藤(美国葛藤(pueraria montana Merr)、葛藤(pueraria lobata Ohwi)、粉葛(pueraria lobata Ohwi var.thomsoni van der Maesen))的组培快繁苗木生产方法，利用葛藤的外植体进行组培快繁苗木生产，其特征在于，在MS基本培养的基础上，添加有机营养物质、生长素类物质，来诱导丛生芽分化以达到快速增殖、再诱导丛生芽生根、最后出瓶驯化的整个繁殖过程；其具体操作步骤为：

1)外植体的选择

采集当年生葛藤的幼茎，将其切成带芽小段；

2)培养基的制备

培养基为MS培养基，并分为初代培养基、增殖培养基和生根培养基；其配方分别为：

初代培养基：MS+6-苄基腺嘌呤(BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L；蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8；

增殖培养基：MS+6-苄基腺嘌呤(BA)(0.5-1.0)mg/L+萘乙酸(NAA)(0.1-0.3)mg/L，蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8；

生根培养基：MS+萘乙酸(NAA)0.05mg/L；蔗糖浓度为3％，琼脂浓度0.55％，PH值为5.8；

按照上述配方配制后消毒后待用；

3)外植体预处理、消毒

用去污粉清洗后用0.1％的HgCl消毒8分钟，再用无菌水冲洗3～4次，浸在蒸馏水中备用；

4)初代培养

在超净工作台上，将消过毒的外植体，即带腋芽茎段切成1cm左右的片段，接种于初代培养基中，置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃条件下培养；

5)增殖培养

将初代培养的丛生芽，在超净工作台上切成小段，接种在增殖培养基上，继续扩大繁殖；

6)生根培养

扩繁后，挑选生长健壮的丛生芽，接种在生根培养基上，置于光照培养室培养，每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃条件下培养，培养30天左右生根；

7)练苗及出瓶驯化

将以丛生芽已生根的培养瓶盖打开，继续在培养室练苗3天，然后，取出生根苗，冲洗净根部，移植到装有已消毒土壤的育苗容器中，置在温室或大棚中，开始保持每日光照10h～12h，温度为25℃±2℃，适应后，逐渐调整光照、温度条件接近室外，经常通风，按时浇水，每2～3天一次，保持土壤湿润至生长到苗高20cm左右，为组培成品苗出圃移栽。