CN111149704A - 一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；S4.组培苗移栽成活：将株高3‑4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。
Description
【技术领域】
本发明属于植物组织离体培养繁殖技术领域，具体涉及一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法。
【背景技术】
粉葛(Pueraria thomsoniiBenth)为豆科葛属(Pueraria DC.)植物中资源较为丰富的一类，是国家农业部和卫计委共同认定的药食两用植物，素有“北参南葛”、“亚洲人参”之美誉。粉葛富含淀粉，鲜葛根中淀粉含量约为15％-32％，是重要的淀粉工业原料，可作为非粮生物质新能源来源。同时，粉葛块根中含有葛根素、大豆苷等异黄酮类物质和10多种人体所必需的微量元素，不仅具有清热解毒、生津透疹、升阳止泻的作用，而且在心血管系统、抗癌、降血糖等方面显示了多种药理活性，是新兴的绿色保健食品和出口紧销产品。随着大健康理念的产生及产业发展，药食同源的粉葛越来越受到人们的重视。
粉葛主要分布在长江以南地区，广西粉葛种质资源丰富，分布面积广，年种植葛根面积超过近20万亩，居全国首位。其中，广西梧州市藤县和平镇是中国著名的“葛根之乡”，从20世纪90年代以来就大规模发展粉葛种植。因此，开展野葛规模化育苗技术，对葛根产业的健康发展意义重大。
现有研究中，粉葛育苗主要采用扦插和组织离体培养繁殖两种方式。例如：
中国专利CN102144555B一种葛根的快速繁殖方法，是将葛根幼芽消毒后接种到配制好的培养基上萌动后转接到配制好的分化培养基上培养，见有幼叶抽出，茎节拉长，剪断接入上述配制好的分化培养基上进行扩繁；
中国专利申请CN106172004A葛根的快速繁殖方法，是选用葛根茎尖作为外植体，芽诱导培养基以MS培养基为基本培养基，添加0.25-0.35毫克/升2，4-二氯苯氧醋酸，生根培养基以1/2MS培养基为基本培养基，添加0.25-0.3毫克/升萘乙酸以及0.1-0.2毫克/升赤霉素，壮苗培养基以2/3MS培养基为基本培养基，添加0.3-0.5毫克/升萘乙酸；茎尖的萌发率均达92％以上，生根率可达91％以上；
中国专利申请CN108064699A一种葛根植物的组织离体培养繁殖方法，利用葛根植物茎段的薄切片为外植体，通过愈伤组织诱导、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养和可选的壮苗培养步骤完成。以上研究公开了葛根植物的组织离体培养繁殖方法，但是有一个共同特点，其种苗增殖方式都是通过丛生芽增殖，再经过不定芽生根培养、壮苗并移栽成活环节，这一技术路线存在苗长势弱，需要通过更换培养基进行壮苗培养或者单独进行壮苗、生根培养等技术环节来提高组培苗的质量。
【发明内容】
针对上述问题。为了克服以上缺点，本发明目的在于提供一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，既提高粉葛组培苗质量和缩短培养周期，又能够为粉葛多倍体育种和毛状根遗传转化技术提供良好的受体材料。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；
初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；
继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA 0.02-0.05mg/L+IBA 0.01-0.02mg/L+PVP0.02％-0.05％+1-氨基环丙烷羧酸2-4mg/L+蔗糖30g/L；
S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。
本发明S1所述的浸泡消毒然后用无菌水冲洗，是先用0.1％升汞浸泡消毒6-10min，然后用无菌水冲洗4-5次。
S2所述的将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d，培养周期为25-30天。
S3所述的继代增殖生根培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d；所述的间歇浸没培养条件为每4小时培养2分钟。
S3所述的继代增殖生根培养得到葛根组培苗也可直接生根，其生根率为99％以上。
S4所述的从培养室移入温室大棚炼苗，是从培养室移入温室大棚炼苗5-7d；所述的营养钵，其中的混合基质是泥炭土：珍珠岩＝3:1的体积比。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、现有技术中粉葛组培方法一般包括外植体的处理和消毒、愈伤组织诱导、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养和可选的壮苗培养等步骤，其种苗增殖方式都是通过丛生芽增殖，再经过不定芽生根培养、壮苗并移栽成活环节，这一技术路线存在苗长势弱，需要通过更换培养基进行壮苗培养或者单独进行壮苗、生根培养等技术环节来提高组培苗的质量；而本发明通过单芽茎段增殖及一步成苗方法，既提高了粉葛组培苗质量和缩短了培养周期，又能够为粉葛多倍体育种和毛状根遗传转化技术提供良好的受体材料。
2、本发明方法是一种高效、简易的粉葛离体繁育技术方法，采用单芽继代增殖及一步成苗的方法，不仅操作简单，所获得的组培苗健壮生根率高，生根率为99.6-100％，植株根系旺盛，移栽成活率高，本发明方法的移栽成活率高达99％以上。
3、本发明所述继代增殖生根培养的培养方式为间歇式浸没培养，与现有的粉葛组培培养方式相比，可以显著提高生根率，且根系发达，提高了组培苗的移栽成活率，同时避免了移栽时清洗培养基的步骤，减轻工作量，提高工作效率。
4、本发明方法中1-氨基环丙烷羧酸(ACC)为含于梨及苹果果汁中的非蛋白性质的氨基酸，为环状氨基酸的一种，植物组织一般都具有在有氧的条件下使ACC分解生成乙烯的活性。本实验通过添加适宜浓度的ACC可显著提高葛根组培苗的生根率，同时达到了壮苗的效果，提高了移栽成活率；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可有效抑制粉葛组培苗在培养过程中因褐化导致植株生长缓慢、降低生长势等不利因素。
【具体实施方式】
以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明。
实施例1
一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒10min，然后用无菌水冲洗5次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500lx，光照时间16h/d，培养周期为25天，获得无菌苗；
初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；培养条件为：温度25±1℃，光照2000lx，光照时间16h/d；间歇浸没培养条件为每4小时培养2分钟；
继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA 0.03mg/L+IBA 0.01mg/L+PVP 0.02％+1-氨基环丙烷羧酸3mg/L+蔗糖30g/L；
S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗5d，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入混合基质是泥炭土：珍珠岩＝3:1的体积比的营养钵中。
实施例2
一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒6min，然后用无菌水冲洗4次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照2000lx，光照时间16h/d，培养周期为30天，获得无菌苗；
初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；培养条件为：温度25±1℃，光照1800lx，光照时间16h/d；间歇浸没培养条件为每4小时培养2分钟；
继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA 0.05mg/L+IBA 0.02mg/L+PVP 0.05％+1-氨基环丙烷羧酸4mg/L+蔗糖30g/L；
S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗7d，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入混合基质是泥炭土：珍珠岩＝3:1的体积比的营养钵中。
实施例3
一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，具体包括如下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，先用0.1％升汞浸泡消毒8min，然后用无菌水冲洗4次，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1800lx，光照时间16h/d，培养周期为28天，获得无菌苗；
初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；培养条件为：温度25±1℃，光照1500lx，光照时间16h/d；间歇浸没培养条件为每4小时培养2分钟；
继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA 0.02mg/L+IBA 0.02mg/L+PVP 0.03％+1-氨基环丙烷羧酸2mg/L+蔗糖30g/L；
S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗6d，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入混合基质是泥炭土：珍珠岩＝3:1的体积比的营养钵中。
实验例1：
在步骤S3中，不同继代增殖生根培养基配方对粉葛生根率的影响：
实验结果表明：
通过添加适应浓度的1-氨基环丙烷羧酸(ACC)和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可有效抑制粉葛组培苗在培养过程中因褐化等原因导致植株生长缓慢，降低生长势等不利因素，显著提高了粉葛组培苗的生根率，同时达到了壮苗的效果，显著提高了移栽成活率。
实验例2：
在步骤S3中，不同诱导方法对葛根组培苗再生周期及移栽成活率的影响：
实验结果表明：
本发明方法通过培养方式和培养方法的创新，大大缩短了培养周期，由常规方法的120-160天缩短为50-55天；且操作简单，成本低廉。同时获得的组培苗健壮、生根率高，最高可达100％。植株根系旺盛，移栽成活率高。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (6)
1.一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
S1.外植体处理：选取生长健壮、无病虫害的幼嫩藤蔓，浸泡消毒然后用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸干茎段表面水分备用；
S2.无菌苗培养：在无菌条件下，将经过S1处理的藤蔓切成带芽的茎段，将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，获得无菌苗；
初代培养基为：MS基本培养基+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
S3.单芽茎段增殖生根诱导：在无菌条件下，将上步骤所获得无菌苗切成带一个腋芽的单芽茎段转接到间歇式浸没培养装置进行继代增殖生根培养；
继代增殖生根培养基配方为：改良MS+NAA 0.02-0.05mg/L+IBA 0.01-0.02mg/L+PVP0.02％-0.05％+1-氨基环丙烷羧酸2-4mg/L+蔗糖30g/L；
S4.组培苗移栽成活：将株高3-4cm、生长健壮、根系发达的无菌瓶苗从培养室移入温室大棚炼苗，然后取出幼苗，洗净附着的液体培养基，栽入营养钵中。
2.根据权利要求1所述的一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：S1所述的浸泡消毒然后用无菌水冲洗，是先用0.1％升汞浸泡消毒6-10min，然后用无菌水冲洗4-5次。
3.根据权利要求1所述的一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：S2所述的将生物学下端垂直竖插于初代培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d，培养周期为25-30天。
4.根据权利要求1所述的一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：S3所述的继代增殖生根培养，培养条件为：温度25±1℃，光照1500-2000lx，光照时间16h/d；所述的间歇浸没培养条件为每4小时培养2分钟。
5.根据权利要求1所述的一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：S3所述的继代增殖生根培养得到葛根组培苗能直接生根。
6.根据权利要求1所述的一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法，其特征在于：S4所述的从培养室移入温室大棚炼苗，是从培养室移入温室大棚炼苗5-7d；所述的营养钵，其中的混合基质是泥炭土：珍珠岩＝3:1的体积比。
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111990255A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-11-27 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种葛根组培苗叶片愈伤组织诱导及再生方法 |
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Families Citing this family (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN115176706B (zh) * | 2022-08-04 | 2023-03-21 | 云南中医药大学 | 珍珠半夏叶片一步成苗高效育种方法 |
| CN115777536B (zh) * | 2022-11-30 | 2023-08-18 | 中南民族大学 | 一种利用白花前胡的茎建立高效再生体系的方法 |
Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000057690A2 (en) * | 1999-03-25 | 2000-10-05 | University Of Guelph | Micropropagation and production of phytopharmaceutical plants |
| CN1899027A (zh) * | 2002-11-04 | 2007-01-24 | 杨凌润地生态科技有限公司 | 葛藤的组培快繁苗木生产方法 |
| CN101892250A (zh) * | 2010-04-08 | 2010-11-24 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种高产油酸的浅白隐球酵母工程菌株的构建方法 |
| CN102144555A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-08-10 | 中国科学院武汉植物园 | 一种葛根的快速繁殖方法 |
| CN103598098A (zh) * | 2013-11-19 | 2014-02-26 | 四川农业大学 | 粉葛组织培养快速育苗方法 |
| CN104302165A (zh) * | 2011-12-21 | 2015-01-21 | 纳幕尔杜邦公司 | 具有多层的植物人工种子及其制备方法 |
| CN105325149A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-02-17 | 佛山市高明区生产力促进中心 | 一种木质化粉葛的扦插种植法 |
| CN106212025A (zh) * | 2016-08-25 | 2016-12-14 | 绵阳市韵圣农业开发有限公司 | 一种葛根苗的培育方法 |
| CN107155552A (zh) * | 2017-04-25 | 2017-09-15 | 马山县盛世农业发展有限责任公司 | 使用组培苗的野葛的种植方法 |
| CN108849532A (zh) * | 2018-09-07 | 2018-11-23 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种葛根试管薯离体诱导方法 |
| CN109258477A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-01-25 | 怀化学院 | 粉葛组织培养方法 |
| CN110731266A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-01-31 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种简易高效的葛根多倍体诱导方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101331850A (zh) * | 2007-11-09 | 2008-12-31 | 福州市仓山区珍奇生物工程研究所 | 白花葛种苗组织培养技术工厂化生产的工艺 |
| CN101720668B (zh) * | 2009-09-18 | 2012-07-04 | 广西壮族自治区农业科学院 | 利用间歇浸没式生物反应器进行甘蔗组织培养快繁 |
| CN103120126B (zh) * | 2013-02-04 | 2014-05-07 | 南京工业大学 | 利用间歇浸没生物反应器进行金线莲组织培养扩繁方法 |
| CN108064699B (zh) * | 2018-02-09 | 2021-06-08 | 江苏雨霏农业科技发展有限公司 | 一种葛根植物的组织离体培养繁殖方法 |
| CN110583483B (zh) * | 2019-09-30 | 2022-05-17 | 贵州大学 | 一种诱导粉葛丛生芽的方法 |
| CN111149704B (zh) * | 2020-03-13 | 2023-04-14 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法 |
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Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000057690A2 (en) * | 1999-03-25 | 2000-10-05 | University Of Guelph | Micropropagation and production of phytopharmaceutical plants |
| CN1899027A (zh) * | 2002-11-04 | 2007-01-24 | 杨凌润地生态科技有限公司 | 葛藤的组培快繁苗木生产方法 |
| CN101892250A (zh) * | 2010-04-08 | 2010-11-24 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种高产油酸的浅白隐球酵母工程菌株的构建方法 |
| CN102144555A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-08-10 | 中国科学院武汉植物园 | 一种葛根的快速繁殖方法 |
| CN104302165A (zh) * | 2011-12-21 | 2015-01-21 | 纳幕尔杜邦公司 | 具有多层的植物人工种子及其制备方法 |
| CN103598098A (zh) * | 2013-11-19 | 2014-02-26 | 四川农业大学 | 粉葛组织培养快速育苗方法 |
| CN105325149A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-02-17 | 佛山市高明区生产力促进中心 | 一种木质化粉葛的扦插种植法 |
| CN106212025A (zh) * | 2016-08-25 | 2016-12-14 | 绵阳市韵圣农业开发有限公司 | 一种葛根苗的培育方法 |
| CN107155552A (zh) * | 2017-04-25 | 2017-09-15 | 马山县盛世农业发展有限责任公司 | 使用组培苗的野葛的种植方法 |
| CN108849532A (zh) * | 2018-09-07 | 2018-11-23 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种葛根试管薯离体诱导方法 |
| CN109258477A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-01-25 | 怀化学院 | 粉葛组织培养方法 |
| CN110731266A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-01-31 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种简易高效的葛根多倍体诱导方法 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| M. RATHORE等: "Micropropagation of Pueraria tuberosa (Roxb. Ex Willd.) and determination of puerarin content in different tissues", 《PLANT CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE》 * |
| 仇雪梅主编: "《遗传学实验》", 31 March 2015, 华中科技大学出版社 * |
| 王大平编: "《园林苗圃学》", 30 January 2014, 上海交通大学出版社 * |
| 王胜利等: "葛根的组织培养研究" * |
| 王艳等: "广西藤县粉葛组培快繁技术研究", 《南方园艺》 * |
| 袁鹏: "粉葛组织培养及其铜、铅、镉含量研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021179527A1 (zh) * | 2020-03-13 | 2021-09-16 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法 |
| CN111990255A (zh) * | 2020-08-31 | 2020-11-27 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种葛根组培苗叶片愈伤组织诱导及再生方法 |
| CN111990255B (zh) * | 2020-08-31 | 2021-11-02 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种葛根组培苗叶片愈伤组织诱导及再生方法 |
| CN115005101A (zh) * | 2022-06-15 | 2022-09-06 | 广西壮族自治区农业科学院 | 一种促进葛根组培苗茎节伸长的方法 |
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| Publication number | Publication date |
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