CN106069746B - 一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法 - Google Patents
一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法，属于农业技术领域。该育苗方法包括（1）外植体选择及消毒、（2）诱导培养、（3）增殖组培快繁培养、（4）生根培养以及（5）驯化及移栽。本发明系统的进行了平欧杂种榛组培快繁育苗研究工作，并实现由实验室规模向产业化规模的转变；降低了育苗成本，丰富了榛子繁育理论，实现了高质量快速繁育；使平欧杂种榛的生根率达到98%，移栽成活率可达到95%左右，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及农业繁育技术领域，尤其涉及一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法。
背景技术
榛子是重要的木本油料树种，是世界四大干坚果之一，世界主要栽培品种来自欧洲榛。榛子因营养价值丰富、经济价值高被称为“坚果之王”。目前，中国推广的榛子为平榛与欧洲榛的杂交品种，称为平欧杂种榛。平欧杂种榛具有果大、丰产、抗寒、耐旱等特点的优良榛子品种。
据统计，我国榛子市场需求量有100多万吨的缺口，大力发展榛子产业是解决供需矛盾的突破点，有着广阔的市场前景。优质苗木的供给是平欧杂种榛大规模推广的基础。目前，我国榛子苗木生产以传统的根蘖繁殖为主，苗木价格高，制约了榛子产业的发展。而组培快繁育苗技术可以快速高效地繁育出适合当地气候特点的优良新品种，提升我国榛子繁育技术能力，促进我国榛子产业发展，对当地经济社会发展以及农民脱贫致富具有重要意义。以组培快繁技术取代传统繁殖是一种必然的发展趋势。但是由于榛子树体内含有较多单宁物，其组织培养很困难，培养过程中容易出现污染率高、易玻璃化、繁殖效率低、试管苗生长慢等限制限制试管苗工厂化生产的问题，因而国内外对榛子组织培养成功的报道较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法。
本发明采用以下技术方案：
一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法，其特征在于，它主要包括以下步骤：
（1）外植体选择及消毒：选取大田一年生无病虫害、无机械损伤的平欧杂种榛嫩枝条，修剪成带有1-2个腋芽的茎段，用流水冲洗干净，然后在无菌条件下置于70%的酒精溶液中浸泡30s，再用 0.1%升汞灭菌8min，最后用无菌水浸洗 6～7次，每次1min，作为外植体待用；
（2）诱导培养：将外植体接种到诱导培养基上进行培养，诱导培养基的配方组份为：MS+6-BA1.5mg/L、NAA0.15mg/L、AC1.0g/L、麦芽糖 12g/L、琼脂 3g/L，pH为5.8，置于恒温生化培养箱中培养；
（3）增殖组培快繁培养：将步骤（2）诱导得到的丛生茎尖转接到增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基的配方组分为：WPM+ 6-BA 4.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、500mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8；
（4）生根培养：将增殖培养基中长到5cm的芽苗转入生根培养基中进行生根培养，生根培养基的配方组分为：1/2MS+BA0.5mg/L、NAA0.12mg/L、IAA 0.3mg/L，pH 5.8；
（5）驯化及移栽：经过生根培养的健壮大苗，待根系生长发达后，进行出瓶移栽；出瓶前，将试管苗转移到温室大棚内炼苗10-15天，初搬到大棚的第一天不能让阳光直射幼苗，2-3天后瓶盖打开，每天保持光照时间不少于8小时，光照强度为1500LX，湿度保持在85%；待10-15天后将试管苗从瓶中取出，小心地将根部附着的培养基洗净，待植株表面水分稍干移栽进种植基质中进行种植，移栽后保持温度为 22~28℃，湿度为 75% ~80%，成活率达到98%以上。
所述步骤（2）中诱导培养条件为：温度25±2℃，湿度60%-70%，光照时间12h/d，光照强度1000LX培养15-25天。
所述步骤（3）中增殖培养条件为：温度23±2℃，湿度60%-70%，光照时间10-13 h/d，光照强度1500 ~2000LX 培养20-30天。
所述步骤（4）中生根培养条件为：温度25±2℃，湿度为70%~75%，光照时间12～14h/d，光照强度 2000～3000 LX培养30天。
所述步骤（5）中种植基质为泥炭土：腐殖土：花生壳粉按照重量比1：1：2的比例制成。
本发明的有益效果是：本发明以平欧杂种榛“玉坠”、“达维”、“辽榛1号”等品种为材料系统的进行了平欧杂种榛组培快繁育苗研究工作，并实现由实验室规模向产业化规模的转变；本发明所用组培快繁技术缩短了平欧杂种榛育苗周期，降低了育苗成本，丰富了榛子繁育理论，实现了高质量快速繁育；组培步骤采用了适合平欧杂种榛快速繁殖的增殖培养基和生根培养基，增殖和生根效果好，使平欧杂种榛的生根率达到98%，且根系粗壮整齐，同时组培苗生长健壮，叶色浓绿，移栽成活率可达到95%左右，为工厂化生产奠定了基础，本发明方法简便易行，生产效率高，可用于平欧杂种榛的快速繁殖，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
实施例1
平欧杂种榛组培快繁育苗的外植体选择及消毒处理、诱导培养
选取大田一年生无病虫害、无机械损伤的平欧杂种榛嫩枝条，修剪成带有1-2个腋芽的茎段，用流水冲洗干净，然后在无菌条件下置于70%的酒精溶液中浸泡30s，再用 0.1%升汞灭菌8min，最后用无菌水浸洗 6～7次，每次1min，作为外植体待用；
将外植体接种到诱导培养基上置于恒温生化培养箱中进行培养；培养的具体条件为：温度25±2℃，湿度60%-70%，光照时间12h/d，光照强度1000LX培养15-25天。将选自同一品种的平欧杂种榛外植体置于不同诱导培养基条件下对培养过程中的污染率和玻璃化率情况进行了研究，具体结果如表1所示。
表1 不同诱导培养基条件对同一平欧杂种榛的组织诱导培养的影响
| 品种 | 培养基组成 | 外植体数 | 污染率% | 玻璃化率% |
| 玉坠 | MS+6-BA1.5mg/L+NAA0mg/L+AC1.0g/L+麦芽糖 12g/L+琼脂3g/L，pH为5.8 | 100 | 76.5 | 40.2 |
| 玉坠 | MS+6-BA0mg/L+NAA0.15mg/L+AC1.0g/L+麦芽糖12g/L+琼脂3g/L，pH为5.8 | 100 | 80.3 | 34.6 |
| 玉坠 | DKW+6-BA0mg/L+NAA0.15mg/L+AC1.0g/L+麦芽糖12g/L+琼脂 3g/L，pH为5.8 | 100 | 81.9 | 28.9 |
| 玉坠 | MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.15mg/L+AC1.0g/L+麦芽糖12g/L+琼脂 3g/L，pH为5.8 | 100 | 3.25 | 5 |
| 玉坠 | NRM+6-BA0mg/L+NAA0.15mg/L+AC1.0g/L+麦芽糖12g/L+琼脂 3g/L，pH为5.8 | 100 | 66.9 | 26.7 |
从表1的数据中可以看出，在本发明的培养条件下，诱导培养基选用配方为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.15mg/L+AC1.0g/L+麦芽糖 12g/L+琼脂 3g/L，pH为5.8时，平欧杂种榛外植体诱导培养中污染率较低，玻璃化率低，成活率较高，培育的平欧杂种榛子长势良好，可为后续的增殖培养阶段提供良好的苗木。此外，本发明还将优选出的培养基配方用于“达维”、“辽榛1号”两个品种的诱导培养过程，其污染率、玻璃化率和成活率也均取得了较满意的结果。
实施例2
增殖培养
将从实施例1中优化条件下诱导得到的丛生茎尖转接到不同增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养条件为：温度23±2℃，湿度60%-70%，光照时间10-13 h/d，光照强度1500~2000LX 培养20-30天。具体培养情况如表2所示。
表2 不同增殖培养基配方对芽苗增殖生长情况的影响
| 品种 | 培养基组成 | 扩繁系数 |
| 玉坠 | WPM+ 6-BA 4.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、0 mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8 | 1.3 |
| 玉坠 | WPM+ 6-BA 4.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、500 mg/L水解酪蛋白、0mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8 | 2.1 |
| 玉坠 | WPM+ 6-BA 1.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、500 mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8 | 2.3 |
| 玉坠 | WPM+ 6-BA 2.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、500 mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8 | 3.0 |
| 玉坠 | WPM+ 6-BA 4.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、500 mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8 | 6.5 |
从表2可以看出，平欧杂种榛子组培增值培养基配方为WPM+ 6-BA 4.0mg/L、2,4-D0.7mg/L、AC 1.0g/L、500 mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂6.0g/L， pH 5.8时，其扩繁系数达到6.5，而其他培养基配方中扩繁系数均较低，这是由于本发明优选的增殖培养基配方中各不同浓度的植物生长调节剂与基本培养基协同作用，对平欧杂种榛达到较好的增殖扩繁效果。此外，本发明还将优选出的培养基配方用于“达维”、“辽榛1号”两个品种增殖培养，其扩繁系数也较高。
实施例3
生根培养
将经过实施例2优选出的增殖培养基中长到5cm的芽苗转入不同生根培养基中进行生根培养，生根培养条件为：温度25±2℃，湿度为70%~75%，光照时间12～14 h/d，光照强度 2000～3000 LX培养30天。具体结果如表3所示。
表3 不同生根培养基配方对试管苗生根情况的影响
| 品种 | 培养基组成 | 接种芽苗数 | 生根率% | 每苗平均根数 |
| 玉坠 | 1/2MS+BA0.3 mg/L、NAA0.12mg/L、IAA 0.3mg/L，pH 5.8 | 100 | 55.6 | 4.2 |
| 玉坠 | 1/2MS+BA1.0 mg/L、NAA0.12mg/L、IAA 0.3mg/L，pH 5.8 | 100 | 82.9 | 3.6 |
| 玉坠 | 1/2MS+BA0.5mg/L、NAA0.12mg/L、IAA 0.3mg/L，pH 5.8 | 100 | 98 | 8.9 |
| 玉坠 | 1/2MS+BA0.5mg/L、NAA0.08mg/L、IAA 0.3mg/L，pH 5.8 | 100 | 79.6 | 2.1 |
| 玉坠 | 1/2MS+BA0.5mg/L、NAA0.15mg/L、IAA 0.5mg/L，pH 5.8 | 100 | 63.1 | 3.8 |
| 玉坠 | 1/2MS+BA0.5mg/L、NAA0.12mg/L、IAA 0.1mg/L，pH 5.8 | 100 | 71.5 | 4.6 |
从表3中的数据可以看出，在基本培养基相同的情况下，加入的植物生长调节剂过高或过低均不利于芽苗生根，因而本发明芽苗生根培养基最佳配方组成为：1/2MS+BA0.5mg/L+NAA0.12mg/L+IAA 0.3mg/L，pH 5.8。此外，本发明还将优选出的培养基配方用于“达维”、“辽榛1号”两个品种生根培养过程，其生根率也均达到95%以上，具有较好的生根效果。
实施例4
驯化及移栽
将经过实施例3所述优选培养基配方生根培养的健壮大苗，待根系生长发达后，进行出瓶移栽；出瓶前，将试管苗转移到温室大棚内炼苗10-15天，初搬到大棚的第一天不能让阳光直射幼苗，2-3天后瓶盖打开，每天保持光照时间不少于8小时，光照强度为1500LX，湿度保持在85%；待10-15天后将试管苗从瓶中取出，小心地将根部附着的培养基洗净，待植株表面水分稍干移栽进种植基质中进行种植，移栽后保持温度为 22~28℃，湿度为 75% ~80%，成活率达到95%以上。本发明还研究了驯化后的幼苗移栽入不同种植基质中的成活率，具体结果如下表4所示。
表4不同种植基质移栽幼苗的成活率结果
| 基质类型 | 移栽株数/株 | 成活株数/株 | 成活率% |
| 泥炭土：腐殖土：花生壳粉=1:1:1 | 300 | 225 | 75% |
| 泥炭土：腐殖土：花生壳粉=1:1:2 | 300 | 285 | 95 |
| 泥炭土：腐殖土：花生壳粉=1:2:1 | 300 | 198 | 66 |
| 泥炭土 | 300 | 153 | 51 |
| 腐殖土 | 300 | 169 | 56.3 |
| 花生壳粉 | 300 | 102 | 34 |
从上表数据中可以看出，移栽基质的配方比例选择对幼苗移栽成活率具有重要影响，这是由于不同基质配方所含营养元素、保水性、耐寒性及酸碱性等均有较大差异，且还可能对病虫害具有一定的拮抗作用，因而经过本实验证明最适宜平欧杂种榛组培移栽的种植基质为泥炭土：腐殖土：花生壳粉=1:1:2组成的。
总之，经过上述一系列具体实施方式的研究，本发明系统的进行了平欧杂种榛组培快繁育苗研究工作，并实现由实验室规模向产业化规模的转变，移栽成活率可达到95%左右，为工厂化生产奠定了基础，具有广泛的应用前景。
Claims (1)
1.一种平欧杂种榛组培快繁育苗的方法，其特征在于，它主要包括以下步骤：
（1）外植体选择及消毒：选取大田一年生无病虫害、无机械损伤的平欧杂种榛嫩枝条，修剪成带有1-2个腋芽的茎段，用流水冲洗干净，然后在无菌条件下置于70%的酒精溶液中浸泡30s，再用 0.1%升汞灭菌8min，最后用无菌水浸洗 6～7次，每次1min，作为外植体待用；
（2）诱导培养：将外植体接种到诱导培养基上进行培养，诱导培养基的配方组份为：MS+6-BA1.5mg/L、NAA0.15mg/L、AC1.0g/L、麦芽糖 12g/L、琼脂 3g/L，pH为5.8，置于恒温生化培养箱中培养；所述诱导培养条件为：温度25±2℃，湿度60%-70%，光照时间12h/d，光照强度1000LX培养15-25天；
（3）增殖组培快繁培养：将步骤（2）诱导得到的丛生茎尖转接到增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养基的配方组分为：WPM+ 6-BA 4.0mg/L、2,4-D 0.7mg/L、AC 1.0g/L、500 mg/L水解酪蛋白、300mg/L氨基酸螯合铁、蔗糖 30 g/L、琼脂 6.0g/L， pH 5.8；所述增殖培养条件为：温度23±2℃，湿度60%-70%，光照时间10-13 h/d，光照强度1500 ~2000LX 培养20-30天；
（4）生根培养：将增殖培养基中长到5cm的芽苗转入生根培养基中进行生根培养，生根培养基的配方组分为：1/2MS+BA0.5mg/L、NAA0.12mg/L、IAA 0.3mg/L，pH 5.8；所述生根培养条件为：温度25±2℃，湿度为70%~75%，光照时间12～14 h/d，光照强度 2000～3000 LX培养30天；
（5）驯化及移栽：经过生根培养的健壮大苗，待根系生长发达后，进行出瓶移栽；出瓶前，将试管苗转移到温室大棚内炼苗10-15天，初搬到大棚的第一天不能让阳光直射幼苗，2-3天后瓶盖打开，每天保持光照时间不少于8小时，光照强度为1500LX，湿度保持在85%；待10-15天后将试管苗从瓶中取出，小心地将根部附着的培养基洗净，待植株表面水分稍干移栽进种植基质中进行种植，移栽后保持温度为 22~28℃，湿度为 75% ~80%，成活率达到98%以上；所述种植基质为泥炭土：腐殖土：花生壳粉按照重量比1：1：2的比例制成。
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