CN1895302A - 一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物药及其制备方法和应用领域，特别涉及一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法和应用。猕猴桃素是一种复合蒽醌苷类等的总有效部位，硅胶G薄层层析板上具有0.00到0.100、0.167到0.300、0.400到0.533、0.700到0.833或0.900到0.967范围内的Rf值的斑点，特征离子峰谱为245、289、357、577、865amu。其制备方法包括1)藤梨根用水煎，浓缩，过滤；2)经大孔吸附树脂层析，洗脱有机溶剂层析，浓缩；3)聚酰胺吸附，洗脱浓缩，干燥；4)将猕猴桃素添加适当辅料和添加剂后，制成薄膜包衣片、硬胶囊剂、合剂、软胶囊剂、颗粒剂、注射剂、脂质体等药剂。
Description
技术领域
本发明涉及植物药及其制备方法和应用领域，特别涉及一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法和应用。
背景技术
“中药鉴定学”所述的藤梨根是猕猴桃《中华猕猴桃Actinidia chinensisPlanch.》或猕猴梨《软枣猕猴桃Actinidia arguta(Sieb.et Zucc)Planch.》的根，藤梨根和猕猴桃或猕猴梨均作药用，中医具有解毒活血、清热利湿之功效，临床上常用于抗肿瘤。陕西中医学院学报(VOL：28.NO：3 2005.5)，卫培峰等人的“藤梨根提取物诱导胃癌细胞凋亡的实验研究”的报道：采用软枣猕猴桃的乙醇提取物对胃癌细胞有明显的杀伤作用。陕西中医(2005年第26卷第8期)：“藤梨根对实验性大鼠胃癌抑制作用的实验研究”：采用软枣猕猴桃的乙醇提取物，对大鼠胃癌有显著的抑制，并有抗胃癌转移的作用。湖南医药(1985年第二卷第5期)，阚克清等“藤梨根抗肿瘤作用及其对免疫功能的影响”，采用软枣猕猴桃根的水提液具有抗小鼠U14实体瘤的作用，并增强细胞免疫和抑制体液免疫的作用。河北中医杂志(2004年4月第26卷第4期)，李昊等人“藤梨根对胃癌细胞抑制作用的实验研究”报道，采用市售的藤梨根，水提液，乙酸乙酯萃取的水溶液；1.3mg/ml的浓度，24小时时，抑制胃癌细胞达87.61％。但未对其抗肿瘤有效部位和成分分离方法作进一步的研究。
在CN200410022919、CN02114318、CN03156252、CN02129513、CN01128730、CN1478495A、CN1093594A等中国专利中都涉及了制备具有抗癌作用的复方中成药中使用了藤梨根或猕猴桃根，这些专利大多涉及复方中成药的配方组成、制备和应用，而不是强调单方藤梨根提取有效部位和成分分离的新药制备。
申请号2005100326666涉及治疗或预防大肠癌、胃癌等含藤梨根及虎杖根、水杨梅根的复方制剂及制备方法和应用，制备片剂、胶囊剂、滴丸剂、及冻干粉针等制剂。但该专利未使用聚酰胺精致，对大孔树脂没有定量，藤梨根有效部位没有定性检查确定；缺乏分散片剂、软胶囊、颗粒剂、脂质体等剂型。
申请号2005100326685公开了藤梨根抗肿瘤提取物及其制备方法和用途，该藤梨根抗肿瘤提取物可通过水或有机溶剂在70∽100℃温度下浸提、然后减压浓缩、调酸、乙酸乙酯萃取、聚酰胺层析、溶剂洗脱、浓缩干燥制得。但上述专利中未使用大孔树脂分离，而用乙酸乙酯萃取，此方法在大工业生产时带来设备、劳防、环保等问题，此方法未解决提取物制备新药的制剂。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷和不足，提供一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法和应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：猕猴桃素是一种复合蒽醌苷类等的总有效部位，用75％乙醇溶解，使成为1-10mg/ml醇液，点样在高效硅胶G簿层层析板上(110℃活化1小时)，配置氯仿∶甲醇∶水∶甲酸＝3∶2∶0.2∶0.04比例作展开剂，展开展距17cm，取出晾干，荧光下或硫酸香兰素液喷雾显色。具有0.00到0.100、0.167到0.300、0.400到0.533、0.700到0.833或0.900到0.967范围内的Rf值的斑点(图1)，与甲醇负离子扫描显示猕猴桃素的特征离子峰谱为245、289、357、577、865amu(图2)。
猕猴桃素制备方法和应用包括下述步骤：
1)藤梨根用水煎，煎液取上清液浓缩，加入壳聚糖澄清后过滤，得清膏液；
2)清膏液经大孔吸附树脂层析，用水洗脱至无色，再用有机溶剂层析，流份收集浓缩，得浓缩液；
3)将浓缩液用聚酰胺吸附，用水洗脱至无色，再用有机溶剂洗脱，洗脱液浓缩，干燥，得猕猴桃素。
4)将猕猴桃素添加适当辅料和添加剂后，制成薄膜包衣片、硬胶囊剂、合剂、软胶囊剂、颗粒剂、注射剂、脂质体等药剂。
步骤1)中的水为去离子水或蒸馏水，加水为药材重量的6-12倍量，煎煮1-3次，每次1-3小时；浓缩至药材量的1∶1或相对密度1.06-1.10；所用壳聚糖是甲壳素的脱乙酰产物，用量为药材的0.05-5％；过滤用滤布、滤纸、滤膜。
步骤2)中的大孔吸附树脂为D型或HPD型系列；粒度20-60目或0.3mm-1.2mm；孔径50-300；用量为药材量的0.5-2倍；流速0.5-10ml/g/分钟；洗脱水是去离子水或蒸馏水，层析采用有机溶剂：15％-30％乙醇、丙酮或50-85％乙醇、丙酮；收集50-85％乙醇或丙酮的洗脱液，浓缩至相对密度为1.100-1.350。
步骤3)中吸附的聚酰胺用量为浓缩液的0.5-50倍；粒度100-120目；洗脱用有机溶剂为50-85％的乙醇或丙酮，优选50-75％；浓缩液相对密度为1.15-1.35；干燥可用真空烘干，真空度-0.06-0.1Mpa，温度≤80℃；或离心喷雾干燥，离心度α＝20000-50000；进风温度120-220℃，药液流速10-200ml/分；或真空冷冻干燥，真空度-0.06-0.1Mpa，温度-40℃-25℃，时间5-30小时。
步骤3)和步骤4)中的猕猴桃素添加的辅料和添加剂包括纤维素类、硬脂酸脂类、苯甲酸钠、蔗糖、淀粉、糊精、环糊精、乳糖、欧巴代薄膜包衣预制粉、甘乳醇、甘油、亚硫酸氢钠、PVP、PEG200-5000、二棕榈酰磷脂酰碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、胆固醇，卵磷脂。制成薄膜包衣片、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、注射剂、脂质体等药剂。
薄膜包衣片：
猕猴桃素 30-80％
糊精 1-20％
乳糖 1-20％
欧巴代薄膜包衣预制粉 0.5-5％
PVP乙醇液 0.5-40％
硬胶囊剂：
猕猴桃素 30-90％
糊精 1-20％
乳糖 1-20％
PVP乙醇液 0.5-40％
颗粒剂：
猕猴桃素 30-90％
糊精 1-20％
乳糖 1-20％
PVP乙醇液 0.5-40％
合剂：
猕猴桃素 30-90％
蔗糖 1-20％
PEG400 1-10％
防腐剂 0.5-1
软胶囊：
猕猴桃素 30-90％
PEG4000 1-20％
乳糖 1-20％
明胶 1-20％
甘油 1-5％
注射剂：
猕猴桃素 1-30％
亚硫酸氢钠 0.1-2％
丙二醇 0.1-10％
注射用水 65-98％
脂质体：
猕猴桃素 1-30％
PEG200-5000 1-20％
二棕榈酰磷脂酰碱 1-30％
胆固醇 1-5％
注射用水 0-96％
本发明的猕猴桃素，采用质谱分析，确定了离子特征图谱，为进一步分离纯化提供了明确的目标。猕猴桃素可以用于防治食道癌、胃癌、大肠癌、胰腺癌、肝癌等消化道肿瘤。
本发明提供了从藤梨根提取猕猴桃素的方法，用去离子水或蒸馏水使用本煎煮方法，杂质少，有效成分转移率高；壳聚糖澄清药液简便、经济、高效，有效成分损失少；而且壳聚糖无毒无害，对提取物不会引起任何不良副反应；最大的优点在处理药液时能吸附除去重金属等有害杂质。
因为大孔吸附树脂分离效果好，成本低，易生产，本发明制备猕猴桃素的方法中主要根据D、DA系列、HPD系列树脂吸附量的计算，确定大孔吸附树脂用量为药材量的0.5-2倍的最佳用量，充分确保吸附有效成分，减少树脂的浪费；
聚酰胺精制方法是将市售的聚酰胺碾磨成100-120目的细颗粒，更合理地使用聚酰胺用量，提高原料猕猴桃素的纯度，使生产操作简便，工艺稳定。
说明书附图
图1猕猴桃素猕猴桃素薄层层析图
图2、图3、图4、图5猕猴桃素质谱分析图谱。
具体实施方法
本发明的具体制备方法，由下例实施实例举例说明，但本发明的保护范围，不局限于此。
实施例1
取藤梨根100kg，加1200L去离子水，浸泡30分钟，加热煮沸，保持沸腾3小时，滤取药液；第二次煎煮加1000L去离子水，煎煮2小时；第三次煎煮加800L去离子水，煎煮1小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清夜，真空浓缩至相对密度1.08，；澄清剂壳聚糖200g(用1％醋酸溶液20L溶解)，加入水提浓缩液中，搅拌静置12小时，滤取上清夜，通过D101-I型大孔吸附树脂200kg的柱子，流速1L/分钟，用去离子水洗脱至无色，再用15％乙醇200L洗脱，及用75％乙醇500L洗脱，收取75％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.25(70℃)，拌入25kg聚酰胺，装入聚酰胺柱，用水及15％乙醇洗脱后，用75％乙醇50L洗脱，收集75％的洗脱液，回收乙醇，浓缩至相对密度1.35，在真空度-0.06--0.1Mpa，温度60℃下真空烘干，粉碎，得到3.1kg的猕猴桃素。
实施例2
取藤梨根100kg，加1000L去离子水，浸泡45分钟，加热煮沸，保持沸腾3小时，滤取药液；第二次煎煮加800L去离子水，煎煮2小时；第三次煎煮加800L去离子水，煎煮1小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清夜，真空浓缩至相对密度1.06，；澄清剂壳聚糖500g(用1％醋酸溶液50L溶解)，加入水提浓缩液中，搅拌静置12小时，滤取上清夜，通过HPD300-型大孔吸附树脂200kg的柱子，流速1.2L/分钟，用去离子水洗脱至无色，再用15％丙酮200L洗脱，及用75％丙酮500L洗脱，收取75％丙酮洗脱液，回收丙酮，浓缩至相对密度1.30(70℃)，拌入30kg聚酰胺，装入聚酰胺柱，用水及15％丙酮洗脱后，用75％丙酮50L洗脱，收集75％的洗脱液，回收丙酮，浓缩至相对密度1.15，离心喷雾干燥，离心度α＝20000-50000；进风温度120-220℃，药液流速10-200ml/分；得到2.8kg的猕猴桃素。
实施例3
取藤梨根100kg，加1000L去离子水，浸泡45分钟，加热煮沸，保持沸腾3小时，滤取药液；第二次煎煮加800L去离子水，煎煮2小时；第三次煎煮加800L去离子水，煎煮1小时；合并三次煎液，静置过夜，滤取上清夜，真空浓缩至相对密度1.06，；澄清剂壳聚糖750g(用1％醋酸溶液75L溶解)，加入水提浓缩液中，搅拌静置24小时，滤取上清夜，通过DA201-型大孔吸附树脂200kg的柱子，流速1.0L/分钟，用去离子水洗脱至无色，再用15％丙酮200L洗脱，及用75％丙酮500L洗脱，收取75％丙酮洗脱液，回收丙酮，浓缩至相对密度1.30(70℃)，拌入25kg聚酰胺，装入聚酰胺柱，用水及15％丙酮洗脱后，用75％丙酮50L洗脱，收集75％的洗脱液，回收丙酮，浓缩至相对密度1.15，真空冷冻干燥，真空度-0.1Mpa，温度-40℃升至25℃，时间25小时。得到3.8kg的猕猴桃素。
实施例4
猕猴桃素，用70％乙醇溶解，使成为1-10mg/ml醇液，点样在高效硅胶G簿层层析板上(110℃活化1小时)，配置氯仿∶甲醇∶水∶甲酸＝3∶2∶0.2∶0.04比例作展开剂，展开展距17cm，取出晾干，荧光下或硫酸香兰素液喷雾显色。具有0.00到0.100、0.167到0.300、0.400到0.533、0.700到0.833或0.900到0.967范围内的Rf值的斑点。
实施例5
猕猴桃素 400g
糊精 40g
乳糖 60g
欧巴代薄膜包衣预制粉 10g
PVP乙醇液 0.5-40％
制成1000片
实施例6
猕猴桃素 400g
糊精 40g
乳糖 60g
PVP乙醇液 0.5-40％
制成1000粒胶囊
实施例7
猕猴桃素 800g
糊精 1000g
乳糖 1200g
PVP乙醇液 0.5-40％
制成3g/1000包
实施例8
猕猴桃素 100g
蔗糖 200g
PEG400 20g
防腐剂 0.5-1％
蒸馏水 加至全量
制成1000ml
实施例9
猕猴桃素 400g
PEG4000 200g
乳糖 100g
明胶 100g
甘油 50g
制成1000粒
实施例10
猕猴桃素 10g
亚硫酸氢钠 2g
丙二醇 100ml
注射用水 加至全量
制成1000ml
实施例11
猕猴桃素 50g
PEG200-5000 50g
二棕榈酰磷脂酰碱 100g
胆固醇 5g
制成前体脂质体
实施例12
将前体脂质体，加注射用水，过0.22μ微孔滤膜灭菌，充N2，灌封，得脂质体注射液。
实施例13
将前体脂质体，加注射用水及10％的甘露醇，过0.22μ微孔滤膜灭菌，分装，冷冻干燥，得粉针剂。
实施例14
小鼠口服猕猴桃素浸膏后活动正常，末见动物有明显毒性反应及死亡情况，生长发育正常(见后体重增长表)。试验结束解剖巨检，主要脏器末见明显病理变化。
实验结论：
当小鼠一次性口服猕猴桃素相当于藤梨根750g生药/kg时，未见该药有任何毒性反应，根据人一天临床用量折算猕猴桃素370倍以上剂量内服食是安全的。
实施例15
猕猴桃素的体外抗肿瘤作用
1、受试药物
猕猴桃素样品配制：用DMSO溶解后，加入PBS配成100μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用PBS稀释。
2、细胞株
人乳腺癌(Bcap-37)、人慢性髓原白血病(K562)、人乳腺癌(MCF-7)、人结肠癌(HT-29)、小鼠黑色素瘤(K111)、成人肺纤维母细胞(WI38)、中国仓鼠肺细胞(CHL)、小鼠成纤维细胞(3T3)、人肝癌(SMMC7721)、人白血病细胞(W256)、人黑色素瘤(SKMEL28)上述细胞株由本实验室冻存和传代。
3、培养基
(1)RPMI(1640)细胞培养基(GIBCO)：含10％灭活新生小牛血清(上海赛达生物药业有限公司)；L-谷氨酰氨(进口分装，SANGON)；丙酮酸钠；1×105U.L-1青霉素，100mg.L-1链霉素；无菌过滤，4℃保存。
(2)0.25％胰蛋白酶溶液(Trypsin)：购自Invitrogen公司，-20℃保存。
(3)磷酸缓冲液(PBS)：NaCl8g，KCl0.2g，Na2HPO41.15g，KH2PO40.2g，溶于1L双蒸水，121℃高压消毒20min，4℃保存。
(4)MTT(AMRESCO)溶液：用PBS配成5mg/ml溶液。
(5)溶解液：每100ml去离子双蒸水含SDS10g，异丁醇5ml，浓硫酸0.12ml。
4、实验方法
对上述肿瘤细胞株的细胞毒性通过MTT法测得。具体步骤如下：
(1)样品制备：将样品用PBS作梯度稀释，得到浓度分别为100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml的稀释样品。
(2)将稀释好的样品加入平底96孔板中，每孔10μl，每点作两个平行测试。将DMSO相应作梯度稀释后加入板中，作为对照。
(3)取处于对数生长期的细胞，细胞经胰酶消化并洗涤后悬浮于含10％小牛血清的RPMI-1640培养基中，经胎盘蓝染色排除法计活细胞数，并调节细胞悬浮液密度至2×105细胞/ml。
(4)在平底96孔板中，每孔加入90微升细胞，于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养过夜。
(5)将加入细胞的平底96孔板在37℃、5％CO2细胞培养箱中保温48小时。
(6)每孔中加入20μl 5mg/mlMTT溶液，继续在培养箱中保温3～4小时。
(7)每孔加入100μl DMSO，继续在培养箱中保温过夜，次日，以A570波长测各孔的光密度(可采用DG3022酶联免疫检测仪)。各档试液孔均值与阴性对照值比较得各档浓度的百分抑制率(同时设一定浓度的标准抗肿瘤药作为阳性对照)。计算公式为：
IC％＝(C-T)/C×100％
T为试液组OD值 C为阴性对照组OD值
然后根据各个检测液各档浓度的IC％，以回归曲线求得IC50值。
5、实验结果
结果见下表1，猕猴桃素对人慢性髓原白血病(K562)、人结肠癌(HT-29)、人肝癌(SMMC7721)、人黑色素瘤(SKMEL28)、小鼠黑色素瘤(K111)、人乳腺癌(MCF-7)、小鼠黑色素瘤(K111)、人结肠癌(HT-29)细胞株具有较好的抗肿瘤作用。
表.1样品水提、醇提物对各细胞株的体外增殖抑制作用：
| 细胞株 | IC50(μg/ml) |
| 猕猴桃素 | |
| CHL | 0.62 |
| SMC7721 | 0.16 |
| 3T3 | 0.89 |
| W256 | 0.28 |
| Bcap37 | 0.56 |
| K562 | 0.32 |
| MCF-7 | 0.22 |
| SKMEL28 | 0.35 |
| HT-29 | 0.21 |
| K111 | 0.25 |
| WI38 | 0.60 |
实施例16
猕猴桃素抑制肿瘤的动物实验见表2
方法：
1、实验动物：昆明种小鼠、♀性、19-21g，由上海斯莱克动物责任有限公司。
合格证号：SCXK(沪)2003-003
2、瘤源来源：S180瘤源有本实验室传代保种
3、实验方法：
将生长旺盛的小鼠S180腹水细胞用生理盐水按1∶5稀释，在小鼠一侧腋下接种0.2ml稀释液，随机分组，每组10只小鼠。不同提取物用药组、空白对照组，接种第2天给药，连续7天，第9天处死小鼠，取下瘤块称重，计算抑瘤率。
4.实验结果：表2
| 组别 | 性别 | 数量 | 剂量(生药g/kg) | 抑瘤率(％) |
| 1L | ♀ | 10 | 4 | 16.36 |
| 1H | ♀ | 10 | 12 | 34.71 |
| 2L | ♀ | 10 | 8 | 16.48 |
| 2H | ♀ | 10 | 24 | 30.87 |
| 3L | ♀ | 10 | 20 | 34.71 |
| 3H | ♀ | 10 | 50 | 44.61 |
| 4L | ♀ | 10 | 20 | 52.80 |
| 4H | ♀ | 10 | 50 | 60.98 |
注：(1)水提物10g生药/ml；(2)乙醇提取物10g生药/g；(3)大孔树脂洗脱物15g生药/g；(4)猕猴桃素。
实施例17
1.试验目的
测试猕猴桃素对小鼠肝癌(HAC)实体瘤的初步疗效(表3)
2.受试药物
猕猴桃素；配制方法：用生理盐水稀释(0.1g/ml)，现配现用。
3.动物
来源和种属：昆明种小鼠，由本院动物房提供
合格证号：沪动合证字第107号
体重：19-21克
性别：雌性
各组动物数：10只
4.移植性肿瘤
小鼠肝癌(HAC细胞)，系上海医药工业研究院药理室传代维持
5.试验的主要步骤和方法
取生长良好的小鼠肝癌(HAC细胞)，用生理盐水1∶4稀释后，每只小鼠腋皮下接种0.2ml，随机分组，设生理盐水对照组和环磷酰胺阳性对照组(100mg/kg，ip×3(1，3，5，))，批号980401，样品组(6.25、12.5、25ml/kg)。次日起给予不同药物，0.5ml/鼠，连续灌胃7天。接种后10日脱颈处死动物，解剖取瘤块，比较各剂量组瘤重之大小。结果判定根据以下公式：
6.结果
表3猕猴桃素对小鼠肝癌(HAC)的抑瘤作用
| 样品 | 剂量(ml/kg) | 给药方案 | 动物数始 终 | 瘤重(g)x±SD | 抑瘤率％ |
| 空白对照(生理盐水) | 25 | po×7 | 10 10 | 3.18±0.77 | |
| 猕猴桃素 | 6.2512.525 | po×7po×7po×7 | 10 1010 1010 10 | 2.13±0.331.93±0.731.50±0.32 | 33.02**39.31**52.83** |
| CTX | 100mg/kg | ip×3 | 10 10 | 0.17±0.07 | 94.66** |
与空白对照组比较：**P＜0.01。
从上表3可见，猕猴桃素在25ml/kg剂量时对小鼠肝癌(HAC)有一定的抑制作用，抑瘤率为52.83％，与空白对照组相比有显著性差异(P＜0.01＝。
附： 测试报告
一.试验仪器：
ABI 3200Q Trap串联四级杆质谱仪(美国应用生物系统公司)
二.试验步骤：
1.样品配置：称取样品1.0mg，溶于1mL甲醇，配成1mg/mL溶液；用甲醇稀释成浓度为5ug/mL溶液。
2.取甲醇分别做正、负离子扫描，扫描范围：100～1000amu；
3.取上述5ug/mL样品溶液分别做正、负离子扫描，扫描范围：100～1000amu。
三.试验结果与分析：
1.试验结果见附图2-5。
2.结果分析
与甲醇正离子扫描图比较，样品正离子扫描未见有强特征离子峰。
与甲醇负离子扫描图比较，在样品负离子扫描出现中出现289、577amu强离子峰，具有特征性。同时，由于289＝(577+1)/2，因此推测289与577结构可能有一定的相关性。另外在245、357、865amu也有特征离子峰
猕猴桃素的特征离子峰谱为245、289、357、577、865amu。
为进一步对猕猴桃素分离纯化提供了明确的目标。
3.填补藤梨根的有效部位的药物制剂的缺乏，开发出单味药的新剂型，达到申报新药剂型的目的。
Claims (15)
1.一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”，其特征在于：
猕猴桃素是一种复合蒽醌苷类，用75％乙醇溶解，使成为1-10mg/ml醇液，高效硅胶G簿层层析板上，具有0.00到0.100、0.167到0.300、0.400到0.533、0.700到0.833或0.900到0.967范围内的Rf值的斑点(图1)，特征离子峰谱为245、289、357、577、865amu(图2-5)。
2.一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：猕猴桃素制备方法包括下述步骤：
1)藤梨根用水煎，煎液取上清液浓缩，加入壳聚糖澄清后过滤，得清膏液；
2)清膏液经大孔吸附树脂层析，用水洗脱至无色，再用有机溶剂层析，流份收集浓缩，得浓缩液；
3)将浓缩液用聚酰胺吸附，用水洗脱至无色，再用有机溶剂洗脱，洗脱液浓缩，干燥，得猕猴桃素。
3.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：所述的水为去离子水或蒸馏水，加水为药材重量的6-12倍量，煎煮1-3次，每次1-3小时；浓缩至药材量的1∶1或相对密度1.06-1.10；所用壳聚糖是甲壳素的脱乙酰产物，用量为药材的0.05-5％；过滤用滤布、纸、膜。
4.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂是D型或HPD型系列；粒度20-60目或0.3mm-1.2mm；孔径50-300；流速0.5-10ml/g/分钟。
5.如权利要求4所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：所述的层析采用有机溶剂是15％-30％乙醇、丙酮或50-85％乙醇、丙酮。
6.如权利要求4所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂用量是药材量的0.5-2倍，层析采用有机溶剂是75％乙醇或75％丙酮。
7.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：所述的聚酰胺用量为浓缩液的0.5-50倍，层析用有机溶剂是50-75％的乙醇或50-75％丙酮，真空冷冻干燥，真空度-0.06-0.1Mpa，温度-40℃-25℃，时间5-30小时。
8.如权利要求7所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其制备方法，其特征在于：所述的聚酰胺粒度100-120目，层析用有机溶剂是75％乙醇或75％丙酮。
9.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是薄膜包衣片，包括：
猕猴桃素 30-80％
糊精 1-20％
乳糖 1-20％
欧巴代薄膜包衣预制粉 0.5-5％
PVP乙醇液 0.5-40％
10.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是硬胶囊剂，包括：
猕猴桃素 30-90％
糊精 1-20％
乳糖 1-20％
PVP乙醇液 0.5-40％
11.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是颗粒剂，包括：
猕猴桃素 30-90％
糊精 1-20％
乳糖 1-20％
PVP乙醇液 0.5-40％
12.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是脂质体，包括：
猕猴桃素 1-30％
PEG200-5000 1-20％
二棕榈酰磷脂酰碱 1-30％
胆固醇 1-5％
注射用水 0-96％
13.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是注射剂，包括：
猕猴桃素 1-30％
亚硫酸氢钠 0.1-2％
丙二醇 0.1-10％
注射用水 65-98％
14.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是合剂：
猕猴桃素 30-90％
蔗糖 1-20％
PEG400 1-10％
防腐剂 0.5-1％
15.如权利要求1所述的一种具有抗肿瘤作用的“猕猴桃素”及其应用，其特征在于：所述的药物制剂是软胶囊，包括：
猕猴桃素 30-90％
PEG4000 1-20％
乳糖 1-20％
明胶 1-20％
甘油 1-5％
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