CN101810651B - 具有抑制肿瘤作用的猕猴桃冷冻干燥果素制品的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有抑制肿瘤作用的猕猴桃冷冻干燥果素制品的制备方法，包括：(1)将中华猕猴桃果或秦美猕猴桃果去皮，打成浆，果汁浆经冷冻、升华、干燥后，制得冻干粉；(2)猕猴桃果皮水煎二次，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.15-1.8，加乙醇至含醇量75--80％，滤取沉淀，抽干，洗涤，真空干燥，粉碎，即得猕猴桃多糖；(3)将猕猴桃果汁冻干粉和多糖填充胶囊制得胶囊剂或加入可溶性麦芽糊精制成颗粒剂即可。该制备方法在低温真空下操作，保留了猕猴桃果汁内的全面营养和活性成分，制成颗粒和胶囊，浓缩了猕猴桃的应用活性成分，服用剂量小，抑制肿瘤细胞作用明显，为广大肿瘤患者提供优良便利的抗癌辅助治疗保健品。
Description
技术领域
本发明属猕猴桃冷冻干燥果素制剂的制备领域，特别是涉及一种具有抑制肿瘤作用的猕猴桃冷冻干燥果素制品的制备方法。
背景技术
猕猴桃(中华猕猴桃、秦美猕猴桃等)，是公认的保健佳果，猕猴桃是一种藤本果树，别名有刺梨、毛梨、奇异果等，种类繁多。猕猴桃原产于中国，常用的是中华猕猴桃和秦美猕猴桃等品种，明代药学家李时珍认为它“其形如梨，其色如桃，而猕猴喜食”。猕猴桃，其味甘甜，清香多汁，是营养颇高的保健水果。猕猴桃中含有较强的抗体内自由基氧化物质，能阻断致癌物N-亚硝基码啉的形成，还能增强NK细胞和促进巨噬细胞吞噬的功能。
直至目前，对猕猴桃作为保健食品的加工研究，已有很多的方法和产品。如：CN02129262.0的专利“一种猕猴桃抗衰老口服液”、CN96120910.0的专利“防癌野生猕猴桃维他命饮品及其制备工艺方法”等，都是将猕猴桃果汁与其他的营养物质维生素等调配而成，但对猕猴桃本身的营养活性物质保鲜及功能的研究不足，不便于保存、携带和服用，难以达到更好的保健功能。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有抑制肿瘤作用的猕猴桃冷冻干燥果素制品的制备方法，该制备方法采用先进的技术，在低温真空下，将果汁内的水分升华干燥，保留了猕猴桃果汁内的全面营养和活性成分，同时将猕猴桃果皮提取活性的多糖成分，制成颗粒和胶囊，浓缩了猕猴桃的应用活性成分，服用剂量小，抑制肿瘤细胞作用明显，为广大肿瘤患者提供优良便利的抗癌辅助治疗保健品。
本发明的一种具有抑制肿瘤作用的猕猴桃冷冻干燥果素制品的制备方法，包括：
(1)猕猴桃果汁冻干粉
将中华猕猴桃果或秦美猕猴桃果去皮，打成浆，果汁浆预冻至-40～-45℃，2-3小时，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，升华干燥时保持真空，干燥升温至-20～-15℃，控制时间为18-24小时，再干燥升温至20～25℃，保持2～3小时，即得冻干粉；
(2)猕猴桃多糖
猕猴桃果皮水煎二次，第一次2-3小时，第二次1-2小时，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.15-1.8，加乙醇至含醇量75--80％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤一次，真空干燥，粉碎，即得；
(3)制剂
颗粒剂：
猕猴桃果汁冻干粉 600-1000g
猕猴桃多糖 400-600g
可溶性麦芽糊精 1400-2000g
用法：3g/袋，每次一包，40℃的温开水冲服，一日二次；
胶囊剂：
猕猴桃果汁冻干粉 300g
猕猴桃多糖 200g
混匀，填充1000粒胶囊，每粒500mg；
用法：每次3粒，口服，一日二次。
有益效果
本发明的制备方法采用先进的技术，在低温真空下，将果汁内的水分升华干燥，保留了猕猴桃果汁内的全面营养和活性成分，同时将猕猴桃果皮提取活性的多糖成分，制成颗粒和胶囊，浓缩了猕猴桃的应用活性成分，服用剂量小，抑制肿瘤细胞作用明显，为广大肿瘤患者提供优良便利的抗癌辅助治疗保健品。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
(1)猕猴桃果汁冻干粉
将50kg的中华猕猴桃果(市售)去皮，打成浆，果汁浆预冻至-40℃，2小时，开启真空泵，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，升华干燥时保持真空，干燥室缓缓升温至-20℃，约24小时；再干燥时升温至25℃，保持2小时，冷冻干燥物，粉碎，即得。
(2)猕猴桃多糖
猕猴桃果皮水煎二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.15，加乙醇至含醇量75％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤一次，真空干燥，粉碎，即得。
实施例2
(1)猕猴桃果汁冻干粉
将50kg的秦美猕猴桃果(市售)去皮，打成浆，果汁浆预冻至-45℃，3小时，开启真空泵，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，升华干燥时保持真空，干燥室缓缓升温至-15℃，约18小时；再干燥时升温至20℃，保持3小时，冷冻干燥物，粉碎，即得。
(2)猕猴桃多糖
猕猴桃果皮水煎二次，第一次3小时，第二次2小时，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.8，加乙醇至含醇量80％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤一次，真空干燥，粉碎，即得。
实施例3
颗粒剂制法
配方：
猕猴桃果汁冻干粉 1000g(实施例1制备)
猕猴桃皮多糖 600g(实施例1制备)
可溶性麦芽糊精 1400g
取可溶性麦芽糊精20g，制成糊浆，余下糊精和其他物料充分混匀，用糊浆制粒，真空干燥(低于40℃)，整粒，分装3g/袋。
用法：每次一包，温开水(40℃左右)冲服，一日二次。
胶囊剂制法
猕猴桃果汁冻干粉 300g(实施例1制备)
猕猴桃皮多糖 200g(实施例1制备)
以上物料充分混匀，填充1000粒胶囊，每粒500mg。
用法：每次3粒，口服，一日二次。
实施例4
颗粒剂制法
配方：
猕猴桃果汁冻干粉 600g(实施例2制备)
猕猴桃皮多糖 400g(实施例2制备)
可溶性麦芽糊精 2000g
取可溶性麦芽糊精20g，制成糊浆，余下糊精和其他物料充分混匀，用糊浆制粒，真空干燥(低于40℃)，整粒，分装3g/袋。
用法：每次一包，温开水(40℃左右)冲服，一日二次。
胶囊剂制法
猕猴桃果汁冻干粉 300g(实施例2制备)
猕猴桃皮多糖 200g(实施例2制备)
以上物料充分混匀，填充1000粒胶囊，每粒500mg。
用法：每次3粒，口服，一日二次。
实施例5
猕猴桃果素样品对淋转、NK自然杀伤细胞的影响
1.实验目的：体外测定猕猴桃果素对淋转、NK细胞的影响
2.实验动物：C57BL/6小鼠
3.实验样品：(1)猕猴桃果冻干粉(2)猕猴桃皮多糖(3)猕猴桃冻干粉3份+猕猴桃皮多糖2份的混合物
4.实验指标：(1)小鼠淋巴细胞增殖(淋转)，(2)NK自然杀伤
5.样品浓度：0.001mg/ml，0.01mg/ml，0.1mg/ml，1mg/ml用培养基稀释
6.实验结果：见表1，表2。
表1猕猴桃果素对淋巴细胞增殖的影响——(X±sd)
| 果汁冻干粉 | 0.001mg/ml | 0.01mg/ml | 0.1mg/ml | 1mg/ml |
| CPM值SI | 2518±4800.95 | 3127±5681.18 | 4012±557*1.52 | 4145±670*1.57 |
| 皮多糖 | 0.001mg/ml | 0.01mg/ml | 0.1mg/ml | 1mg/ml |
| CPM值SI | 2406±1420.91 | 2804±1481.07 | 2705±771.02 | 3535±74**1.33 |
| 混合粉 | 0.001mg/ml | 0.01mg/ml | 0.1mg/ml | 1mg/ml |
| CPM值SI | 2616±1240.99 | 2839±5011.07 | 3357±9661.27 | 3523±205**1.33 |
| 对照组CPM值 | 2648±170 |
与对照组比较：*P＜0.05；**P＜0.01
表2猕猴桃果素对NK活性的影响——(X±sd)
| 果汁粉 | 0.001mg/ml | 0.01mg/ml | 0.1mg/ml | 1mg/ml |
| CPM值PI(％) | 11730±343 | 11980±1313 | 10646±425 | 9522±6750.99 |
| 多糖 | 0.001mg/ml | 0.01mg/ml | 0.1mg/ml | 1mg/ml |
| CPM值PI(％) | 9936±703 | 8086±103315.92 | 7541±1161*21.57 | 8650±105610.06 |
| 混合物 | 0.001mg/ml | 0.01mg/ml | 0.1mg/ml | 1mg/ml |
| CPM值PI(％) | 9975±994 | 9524±1222 | 8555±247**11.04 | 8810±5928.39 |
注：(1)SI＝样品CPM值/对照组CPM值，SI 值＞1表明对小鼠淋巴细胞增殖为指标的细胞免疫有促进作用，SI值＜1为抑制作用；
(2)PI表示NK细胞活性，PI(％)＝(对照组掺入CPM值-样品掺入CPM值)/对照组掺入CPM值。
实施例5
猕猴桃果素对C57BL/6小鼠抗Lewis肺癌的作用研究
1.实验目的：观察猕猴桃果素不同剂量对小鼠C57BL/6Lewis肺癌抗肿瘤作用。
2.受试药物：猕猴桃果素
3.实验动物：
来源和种属：C57BL/6，由上海斯莱克动物责任有限公司提供。
合格证号：SCXK(沪)2003-003
体重：18-20克
性别：雌性
4.临床剂量设计：
(1)猕猴桃果素低剂量为50mg/kg，高剂量为150mg/kg。
5.给药途径及容量：口服，0.5ml/20g。
6.移植性肿瘤：Lewis肺癌操作规范传代维持
7.实验步骤和方法
在超净实验条件下取生长良好的Lewis肺癌，用生理盐水按1∶6稀释，制备成细胞匀浆悬液，每只小鼠右侧腋皮下接种0.2ml，随机分组，每组10只，设猕猴桃果素高、低二个剂量组，环磷酰胺(CTX，ip×2)对照组，次日起给予不同药物，连续灌胃7天，停药后第二天脱颈处死动物，解剖取瘤块，比较各剂量组瘤重。肿瘤抑制率公式如下：
肿瘤抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/给药组平均瘤重×100％
8.实验结果：
猕猴桃果素：低剂量抑瘤率为37.20％；高剂量为51.22％。
表3藤梨根提取物对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用
| 组别 | 剂量(g/kg) | 动物数始终 | 瘤重(g)(X±SD) | 抑瘤率(％) |
| 空白对照 | 10 10 | 1.64±0.53 | ||
| 猕猴桃果素L | 0.05 | 10 10 | 1.03±0.43* | 37.20 |
| 猕猴桃果素H | 0.15 | 10 10 | 0.80±0.49** | 51.22 |
| CTX | 0.1 | 10 10 | 0.18±0.07** | 89.02 |
实施例6
猕猴桃果素体外抗肿瘤研究
表4对各细胞株的体外增殖抑制作用
Claims (1)
1.一种具有抑制肿瘤作用的猕猴桃冷冻干燥果素制品的制备方法，包括：
(1)猕猴桃果汁冻干粉
将中华猕猴桃果或秦美猕猴桃果去皮，打成浆，果汁浆预冻至-40～-45℃，2-3小时，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，升华干燥时保持真空，干燥升温至-20～-15℃，控制时间为18-24小时，再干燥升温至20～25℃，保持2～3小时，即得冻干粉；
(2)猕猴桃多糖
猕猴桃果皮水煎二次，第一次2-3小时，第二次1-2小时，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.15-1.8，加乙醇至含醇量75--80％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤一次，真空干燥，粉碎，即得；
(3)制剂
颗粒剂：
猕猴桃果汁冻干粉 600-1000g
猕猴桃多糖 400-600g
可溶性麦芽糊精 1400-2000g
用法：3g/袋，每次一包，40℃的温开水冲服，一日二次；
胶囊剂：
猕猴桃果汁冻干粉 300g
猕猴桃多糖 200g
混匀，填充1000粒胶囊，每粒500mg；
用法：每次3粒，口服，一日二次。
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