CN106334018B - 一种治疗肝细胞性肝癌的中药组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种治疗肝癌的中药组合物及其应用。本发明的中药组合物，包括：白花蛇舌草、三七、灵芝菌丝体、灵芝子实体、泥鳅和地龙。以本发明的中药组合物为原料配制的中药制剂，经动物药效、毒理研究结果表明，具有明显的抗肝癌作用，且安全无明显毒副作用，临床显效率高。

Description

一种治疗肝细胞性肝癌的中药组合物及其应用

技术领域

本发明属于中药和天然药物技术领域，具体涉及一种治疗肝癌的中药组合物及其应用。

背景技术

肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。

根据肝癌的不同阶段酌情进行个体化综合治疗，是提高疗效的关键；治疗方法包括手术、肝动脉结扎、肝动脉化疗栓塞、射频、冷冻、激光、微波以及化疗和放射治疗等方法。生物治疗，中医中药治疗肝癌也多有应用。

1.手术治疗

手术是治疗肝癌的首选，也是最有效的方法。手术方法有：根治性肝切除，姑息性肝切除等。

对不能切除的肝癌可根据具体情况，采用术中肝动脉结扎、肝动脉化疗栓塞、射频、冷冻、激光、微波等治疗有一定的疗效。原发性肝癌也是行肝移植手术的指征之一。手术的问题是复发和转移的危险。

2.化学药物治疗

经剖腹探查发现癌肿不能切除，或作为肿瘤姑息切除的后续治疗者，可采用肝动脉和 (或)门静脉置泵(皮下埋藏灌注装置)作区域化疗栓塞；对估计手术不能切除者，也可行放射介入治疗，经股动脉作选择性插管至肝动脉，注入栓塞剂(常用如碘化油)和抗癌药行化疗栓塞，部分患者可因此获得手术切除的机会。化疗药物的最大付作用是对健康人体的损害，造成癌症患者的免疫力的急剧下降。

3.放射治疗

对一般情况较好，肝功能尚好，不伴有肝硬化，无黄疸、腹水、无脾功能亢进和食管静脉曲张，癌肿较局限，尚无远处转移而又不适于手术切除或手术后复发者，可采用放射为主的综合治疗。放疗的改进已经能够针对病灶进行放射线治疗，但是仍然对人体的健康细胞产生大量的杀灭，对人体的损害还是很大的。特别是转移患者，辐射部位的增加，损害更大。

4.生物治疗

常用的有免疫核糖核酸、干扰素、白细胞介素-2、胸腺肽等，可与化疗联合应用。这种方法的缺陷还是副作用和毒性比较大，在治疗期，会对人体产生很大的损害。

5.中医中药治疗

采取辨证施治、攻补兼施的方法，常与其他疗法配合应用。以提高机体抗病力，改善全身状况和症状，减轻化疗、放疗不良反应。本发明的治疗肝癌的药物，主要是没有毒副作用，抑制肿瘤生产显著。能够改善患者的生存质量和生存期。综合治疗是最好的方法。特别是中医药的应用。

发明内容

本发明的目的是提供对肝癌有明显治疗作用的中药组合物及其制备和应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明以肝癌的病机为理论基础，以白花蛇舌草、三七为君药，灵芝菌丝体、灵芝子实体为臣药与其它几位药物配伍制得。

本发明的第一方面，提供了一种中药组合物，包括：白花蛇舌草(Hedyotisdiffusa Willd)、三七(Radix Notoginseng)、灵芝菌丝体(GanodermaLucidum)、灵芝子实体(Ganoderma Lucidum)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)、地龙(Geosaurus)，各组分的重量份数为：白花蛇舌草：24-36；三七：15-25；灵芝菌丝体：16-24；灵芝子实体11-19；泥鳅：8-12 地龙：4-6。

优选地，各组分的重量份数为：白花蛇舌草：30；三七：20；灵芝菌丝体：20；灵芝子实体：15；泥鳅：10；地龙：5。

进一步的，本发明的第二方面，还公开了一种中药提取物，为以上述中药组合物为原料提取有效成分制得。

本发明中，生药的配方最为关键，在获知生药配方后，本技术领域的技术人员可采用各种常规的中药有效成分提取方法来提取其有效成分，如常规的煎煮、水提醇沉法、醇提水沉法、盐析法等，由于上述提取方法均能获得前述中药配方中的主要药效成分，因此均能对肝癌具有一定的疗效。

其中，水提醇沉法为：先以水为溶剂提取药材有效成分，再用不同浓度的乙醇沉淀去除提取液中杂质的方法。一般含乙醇量达到50％～60％(重量体积比即g/100ml)时，可去除淀粉等杂质，当含醇量达75％以上，除鞣质、水溶性色素等少数无效成分外，其余大部分杂质均可沉淀去除。

醇提水沉法为：先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，再用水除去提取液中杂质的方法。

所述中药组合物提取有效成分后可再经常规的步骤浓缩、纯化或干燥获得中药提取物。其中浓缩的方法包括但不限于：常压蒸发、减压蒸发、薄膜蒸发、多效蒸发，纯化的方法包括但不限于：盐析纯化、大孔树脂吸附纯化、乙醇沉淀纯化、离子交换树脂纯化、絮凝沉淀纯化、膜分离纯化、聚酰胺吸附纯化、硅胶吸附层析纯化等，干燥的方法包括但不限于：烘干法、鼓式干燥法、带式干燥法、吸湿干燥法、沸腾干燥法、喷雾干燥法、减压干燥法、冷冻干燥法、红外线干燥法、微波干燥法等。

根据所述中药组合物中不同生药有效成分的特性，可采用不同的提取工艺。

进一步地，本发明还提供了一种中药提取物的制备方法，所述方法包括步骤：将白花蛇舌草和三七一起提取有效成分，获得白花蛇舌草和三七中药提取物；将灵芝菌丝体和灵芝子实体一起提取有效成分，获得灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物；将泥鳅和地龙中药提取物一起提取有效成分，获得泥鳅和地龙中药提取物；将获得的三七和白花蛇舌草中药提取物、灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物、泥鳅和地龙中药提取物混合，即得中药提取物。

白花蛇舌草和三七都是植物类中药，一起提取有利于白花蛇舌草的有效成分的溶出，白花蛇舌草素是一种脂溶性成分，通过三七皂苷的乳化作用，能够极大地提取出三七和白花蛇舌草中的脂溶性成分，同时不影响水溶性成分的提取，工艺简单成本低，效果好。灵芝菌丝体和灵芝子实体，都是药用真菌，有效成分都是多糖类和三萜类，可以按照同一工艺一起提取，利用食用乙醇溶液提取脂溶性的三萜类成分，用水为溶媒提取多糖类成分。泥鳅和地龙同属于动物类中药材，蛋白和小分子肽类成分都有相似之处，采用相同的工艺处理，可以极大地保留有效成分，从而达到良好的效果。

进一步优选地，白花蛇舌草和三七中药提取物的制备方法，包括步骤：

(1)分别将三七和白花蛇舌草粉碎成颗粒状，按处方量分别称量两种药材颗粒，混合提取，用食用乙醇，回流提取，过滤，得乙醇提取液和残渣；

(2)将步骤(1)所得残渣加去离子水煮沸提取，过滤，得水提取液；

(3)将步骤(1)所得乙醇提取液回收乙醇得乙醇提取浓缩液；将步骤(2)所得水提取液减压浓缩得水提取浓缩液；混合两种提取浓缩液，喷雾干燥，得到处方量白花蛇舌草和三七中药提取物。

优选地，步骤(1)中，颗粒状的直径大小为0.5～1.5cm。更优选，1cm。

优选地，步骤(1)中，用10倍量60％食用乙醇，回流提取两次，每次2小时，100 目过滤，得乙醇提取液和残渣。

优选地，步骤(2)中，残渣加8倍量去离子水煮沸提取两次，每次1.5小时，100目过滤，得水提取液。

优选地，步骤(3)中，乙醇提取液回收乙醇浓缩到比重1.05±0.05，水提取液减压浓缩至相同比重，混合两种提取浓缩液，喷雾干燥。

优选地，灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物的制备方法，包括步骤：

(1)分别将灵芝菌丝体和灵芝子实体粉碎成颗粒状，按处方量分别称量两种药材颗粒，混合提取，用食用乙醇，回流提取，过滤，得乙醇提取液和残渣；

(2)将步骤(1)所得残渣加去离子水煮沸提取两次，过滤，得水提取液；

(3)将步骤(1)所得乙醇提取液回收乙醇得乙醇提取浓缩液；将步骤(2)所得水提取液减压浓缩得水提取浓缩液；混合两种提取浓缩液，喷雾干燥，得到处方量灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物。

优选地，步骤(1)中，颗粒状的直径大小为1.～3cm。更优选，1.5cm。

优选地，步骤(1)中，用10倍量80％食用乙醇，回流提取两次，每次2小时，100 目过滤，得乙醇提取液和残渣。

优选地，步骤(2)中，加去离子水提取两次，第一次加10倍量，煎煮提取2小时， 100目过滤，得提取液。

优选地，步骤(2)中，残渣加8倍量去离子水，煎煮提取1.5小时，过滤分离，得提取液。

优选地，步骤(3)中，乙醇提取液回收乙醇浓缩到比重1.05±0.05，水提取液减压浓缩至相同比重，混合两种提取浓缩液，喷雾干燥。

优选地，泥鳅和地龙中药提取物的制备方法，包括步骤：

(1)按处方中干品折算泥鳅和地龙鲜品所需投料，分别将泥鳅和地龙鲜品用清水冲洗，除去泥沙杂物，加水，用磨浆机制备成肉浆；

(2)将步骤(1)所得肉浆冰冻，取出加水融化，超声提取，过滤，加压真空浓缩，冷冻干燥，得泥鳅和地龙中药提取物。

优选地，步骤(1)中，按鲜品计算，加一倍量的水，用磨浆机制备成肉浆。

优选地，步骤(2)中，将步骤(1)所得肉浆置于零下10度冰冻，取出加入5倍量水融化，放入超声波提取罐中，在加5倍量的水保持室温，超声波提取50分钟，过滤提取液，加压真空浓缩成含固量为30％，冷冻干燥。

采用上述方法获得的三七和白花蛇舌草中药提取物、灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物、泥鳅和地龙中药提取物混合，即得本发明的所述中药提取物。

本发明的中药组合物或中药提取物可用于制备治疗肝癌的药物。

本发明的第三方面，还进一步提供了一种中药制剂，包括治疗有效量的前述中药提取物及一种或多种常规的药学上可接受的辅料。

药学上可接受的辅料包括(但并不限于)：药物可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羚基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。诸如颗粒剂和膏剂之类的中药制剂，可通过常规方法进行制备。本发明的药物组合物还可与其他治疗剂一起使用。

优选的，所述的中药制剂为口服制剂，包括但不限于颗粒剂、丸剂、片剂、胶囊剂、糖浆剂、喷雾剂等。

在提取出中药组合物中的有效成分后，可采用常规的药用辅料及添加剂制备前述药物组合物。

本发明的药物组合物的有效治疗剂量为，以原料药材的总重量计，口服安全有效量通常为1.00-2.65克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明的中药组合物经动物药效、毒理研究结果表明，具有明显的抗肝癌作用，对肝癌的抑制率达到70％以上且安全无明显毒副作用。根据该方的作用机理和药理作用，有望开发成新型的肝癌的防治药。

附图说明

图1：第一批试验，10KDS对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的生长抑制作用。

图2：第一批试验，10KDS对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的生长抑制作用。

图3：第一批试验，10KDS对裸鼠体重的影响。

图4：第二批试验，10KDS对人肝癌HePG2裸鼠移植瘤的生长抑制作用。

图5：第二批试验，10KDS对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的生长抑制作用。

图6：第二批试验，10KDS对裸鼠体重的影响。

图7：第三批试验，10KDS对人肝瘤HePG2裸鼠移植瘤的生长抑制作用。

图8：第三批试验，10KDs对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的生长抑制作用。

图9：第三批试验，10KDS对裸鼠体重的影响。

具体实施方式

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

实施例1中药提取物的制备

制备方法：

1.按表1的配方称取生药；

2.原料提取：本处方根据处方中不同药物有效成分的特性，采用不同的提取工艺，白花蛇舌草和三七都是植物类中药，一起提取有利于白花蛇舌草的有效成分的溶出，白花蛇舌草素是一种脂溶性成分，通过三七皂苷的乳化作用，能够极大的提取出三七和白花蛇舌草中的脂溶性成分，同时不影响水溶性成分的提取，工艺简单成本低，效果好。灵芝菌丝体和灵芝子实体，都是药用真菌，有效成分都是多糖类和三萜类，可以按照同一工艺一起提取。泥鳅和地龙同属于动物类中药材，含有蛋白质和小分子肽成分都有相似之处，采用相同的工艺处理，可以极大的保留有效成分，从而达到良好的效果。

(1)白花蛇舌草和三七，分别粉碎成颗粒状1cm左右，按处方量分别称量两种药材颗粒，混合提取，用10倍量60％食用乙醇，回流提取两次，每次2小时，100 目过滤乙醇提取液。残渣加8倍量去离子水煮沸提取两次，每次1.5小时，100 目过滤水提取液。乙醇提取液回收乙醇浓缩到比重1.05左右，水提取液减压浓缩至相同比重，混合两种提取浓缩液，喷雾干燥。得到处方量三七和白花蛇舌草混合提取物。

(2)灵芝菌丝体和灵芝子实体分别粉碎成颗粒状，颗粒大小为1.5cm左右，按处方量分别称量混合，加8倍量80％食用乙醇溶液提取两次，过滤，减压回收乙醇，得比重为1.05的醇提取浓缩液。残渣加去离子水提取两次，第一次加10倍量，煎煮提取2小时，过滤提取液。残渣加8倍量去离子水，煎煮提取1.5小时，过滤分离提取液，混合两次提取液，减压浓缩至比重1.05左右，得到水提取浓缩液，混合醇提取浓缩液和水提取浓缩液，喷雾干燥。得到处方量灵芝菌丝体和灵芝子实体混合提取物。

(3)泥鳅和地龙加工使用鲜品，按处方中干品折算投料，分别将泥鳅和地龙用清水冲洗，除去泥沙等杂物，加一倍量的水(按鲜品计算)，用磨浆机制备成肉浆，放入冷冻机中零下10度以下冻成冰状，取出加入5倍量水融化，放入超声波提取罐中，在加5倍量的水保持室温，超声波提取50分钟，过滤提取液，加压真空浓缩成固溶物达到30％，送冷冻干燥。得泥鳅和地龙冷冻干燥粉。

3.制造颗粒剂：将上述三种提取物，混合，制造颗粒，颗粒为10-20目左右，按质量标准检测合格，送内包装岗位，可以填充小袋做成颗粒剂，装填胶囊，做成胶囊剂，也可以直接压片制造片剂。

表1中，所有材料的取量单位均为kg。

表1

配方	1	2	3	4	5	6	7	8	9
										白花蛇舌草	30	36	34	33	32	31	28	26	24
三七	20	15	16	17	18	19	22	23	25
										灵芝菌丝体	20	16	17	18	19	21	21	23	24
灵芝子实体	15	19	18	17	16	14	13	12	11
										泥鳅	10	8	9	9	10	10	11	12	12
地龙	5	6	6	6	5	5	5	4	4

实施例2药效学研究：对肝癌HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用

一、实验目的

考察按照实施例1所述的方法制备的药物对人肝癌HepG2裸鼠移植瘤的抑制作用。

二、实验动物

Balb/c/nu裸鼠(雄性,体重18-20g；雌性,体重15-18g)，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供,合格证号:SCXK(京)2014-0004。

三、实验药物与试剂

l.药物：实施例1所述的方法制备，记为：10KDS；Sorafenib：阳性对照药，由中国医学科学院药物研究所提供，纯度98.0％。

2.药物配制方法：

10KDS：用无菌蒸馏水配制成0.l875g/m1，0.375g/m1和0.75g/m1药液，给药剂量为3.75g/kg、7.5g/kg、15.0g/kg，给药体积20m1/kg。

Sorafenib：以聚氧乙烯蓖麻油：95％乙醇：无菌蒸馏水(1:1:6)为溶剂，配制成浓度为1.5 mg/m1溶液，给药剂量30.0mg/kg，给药体积20ml/kg。

3.给药剂量：

10KDS剂量为3.75g/kg,7.5g/kg,15.0g/kg，每日1次，每周给药6次。Sorafenib剂量为 30.0mg/kg，每日1次，每周给药6次。模型组灌胃无菌蒸馏水，给药次数同药物。.

4.给药途径：灌胃给药，给药体积20m1/kg。

5.HepG2细胞：购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。

6.其它试剂：聚氧乙烯蓖麻油(阿拉丁试剂有限公司CAS6179l-l2-6)、DMEM培养液(Gibco公司)；胎牛血清(Gibco公司)。

四、实验步骤

无菌条件下收集HepG2肿瘤细胞，用灭菌生理盐水调整细胞密度至2×l0⁷个/ml，取 0.lml接种于裸鼠腋窝皮下，待肿瘤生长至l00-l50mm³后，剔除肿瘤生长不良的动物，分组给药，每组8只，对照组口服无菌蒸馏水；sorafenb30.0mg/kg剂量组，每日灌胃给药1次，每周6次。lOKDS设3个剂量组，分别为3.75g/kg,7.5gfkg和l5.0g/kg,每日灌胃给药1次，每周6次。每周称量体重2次,并用游标卡尺测量肿瘤的长度和宽度，按照公式v＝a×b2/2 计算出肿瘤的体积，其中a为肿瘤的长度，b为肿瘤的宽度。根据肿瘤的生长情况，口服给药28-32天，将裸鼠脱臼处死并拍照，然后剥离肿瘤，称重并拍照。计算肿瘤RTV(相对肿瘤体积)及抑制率。同时取脾脏,称重、计算脾脏指数。取裸鼠外周血，行血细胞计数。

五、数据处理

采用EXCEL软件处理，数据以Mean±SD表示,组间分析用t检验进行统计学处理。

六、结果

第一批试验结果显示，10KDS在剂量3.75g/kg时对HepG2裸鼠移植瘤的生长无抑制作用，在7.5g/kg,l5.0g/kg剂量下10KDs对肿瘤的生长显示出一定的抑制作用，按相对肿瘤体积计算T/C分别为73.57％和56.92％，肿瘤抑制率分别为22.99％和43.33％，结果如图1和图2所示。各给药组体重与溶剂对照组比较，略有降低，如图3所示。与对照组比较， 1OKDSl5.0g/kg给药组的外周血中，RBC、HGB、HCT的计数有所升高，且具有统计学意义(表2-1)。10KDS各给药组对裸鼠脾脏指数均没有显著的影响(表3-1)。

表2-1 10KDS对裸鼠外周血计数影响(第一批)(动物数n＝8)

表3-1 10KDS对裸鼠脾脏指数的影响(第一批)

第二批试验结果显示，1OKDS在3.75g/kg、7.5g/kg、15.0g/kg剂量下每日给药两次对肿瘤的生长具有显著的抑制作用，按相对肿瘤体积计算T/C分别为59.75％，35.l6％和24.30％，肿瘤抑制率分别为45.51％、65.90％和72.70％，呈现出一定的量效关系，结果见图 4、图5。各给药组体重与溶剂对照组比较，略有降低(图6)。与对照组比较，1OKDS 15.0g/kg 给药组的外周血中，白细胞、红细胞、红细胞比容、血小板等均有不同程度的影响，且具有统计学意义(表2-2)。10KDS各给药组均可降低裸鼠脾脏指数，且具有一定的剂量依赖关系(表3-2)。

表2-2 10KDS对裸鼠外周血计数影响(第二批)(动物数n＝8)

表3-2 10KDS对裸鼠脾脏指数的影响(第二批)

第三批试验结果显示，1OKDS在3.75g/kg,7.5g/kg,l5.0g/kg剂量下每日给药两次对肿瘤的生长具有显著的抑制作用，按相对肿瘤体积计算T/C分别为57.77％、42.47％和24.65％；按肿瘤重量计算，肿瘤抑制率分别为40.86％、53.73％和75.62％，呈现一定的量效关系，结果见图7、图8。各给药组体重与溶剂对照组比较，略有降低(图9)。与对照组比较，1OKDS各给药组的外周血中，白细胞、红细胞、红细胞比容、血小板等均无显著性改变(表 2-3)。1OKDS l5.0g/kg剂量组可略微升高裸鼠脾脏指数，且具有统计学意义(表3-3)。

表2-3 10KDS对裸鼠外周血计数影响(第三批)(动物数n＝8)

表3-3 10KDS对裸鼠脾脏指数的影响(第三批)

七、讨论

从本次的三批试验结果看,1OKDS对于裸鼠接种的人肝癌HepG2具有较明显的抑制作用，第一批试验,高剂量组(l5g/kg)具有明显的抑瘤作用,中剂量组(7.5g/kg)有一定的抑制趋势；第二、三批试验给药次数增加一次,相当于给药剂量提高一倍,结果lOKDS高、中、低剂量组(30、15、7.5g/kg)都有明显的抑瘤作用，且体现一定的量效关系,抑瘤率在40％-75％之间。三批试验相应剂量的抑瘤率较接近，说明重复性较好。三批试验各给药组小鼠体重均较模型组有一定程度降低。对于外周血中白细胞、红细胞、红细胞比容、血小板等均有不同程度的影响，对于脾指数具有一定的的影响。

八、结论

10KDS在7.5g/kg、l5.0g/kg、30.0g/kg剂量范围内对裸鼠接种的人肝癌HepG2具有较明显的抑制作用。

实施例3处方的毒性研究

将按照实施例1所述的方法制备的药物，进行急性毒性试验。采用的方法是，最大给药量试验，试验选用拟推荐临床试验的给药途径，以动物耐受的最大浓度，最大体积的给药量1次或1日内2-3次给与动物。以小鼠口服为例：动物数不得少于20只，雌雄各半，容量一次不超过0.4ml/g体重，多次给药间隔不低于4h，观察14日，记录毒性反应和体重变化。如仍未见毒性反应或体重正常增加，则可认为该药物未见毒性反应，或LD50大于最大给药量。

本试验中，小鼠口服10KDS13最大给药量为53.6g/kg。

表4-1：口服10KDS最大量对小鼠体重(g)的影响(

n＝10)

*P<0.05，**P0.01以下同

表4-2：口服10KDS最大量对小鼠食量(g/只)的影响(

n＝10)

由上述结果可知，口服实施例1制备的药物，小鼠口服10KDS13最大给药量为53.6g/kg，除雄性小鼠个别一天体重和食量下降外，未见死亡及其他急性毒性反应。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种治疗肝细胞性肝癌的中药组合物，由白花蛇舌草、三七、灵芝菌丝体、灵芝子实体、泥鳅、地龙组成，各组分的重量份数为：白花蛇舌草：24-36；三七：15-25；灵芝菌丝体：16-24；灵芝子实体11-19；泥鳅：8-12地龙：4-6。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物中，各组分的重量份数为：白花蛇舌草：30；三七：20；灵芝菌丝体：20；灵芝子实体：15；泥鳅：10；地龙：5。

3.一种中药提取物，为以权利要求1-2中任一权利要求所述中药组合物为原料提取有效成分制得。

4.根据权利要求3所述的中药提取物，其特征在于，所述中药组合物提取有效成分的方法选自煎煮、水提醇沉法、醇提水沉法、透析法、盐析法、升华法或双酶法中的任一种。

5.根据权利要求3所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将白花蛇舌草和三七一起提取有效成分，获得白花蛇舌草和三七中药提取物；将灵芝菌丝体和灵芝子实体一起提取有效成分，获得灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物；将泥鳅和地龙中药提取物一起提取有效成分，获得泥鳅和地龙中药提取物；将获得的三七和白花蛇舌草中药提取物、灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物、泥鳅和地龙中药提取物混合，即得中药提取物。

6.根据权利要求5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，白花蛇舌草和三七中药提取物的制备方法，包括步骤：

(1)分别将三七和白花蛇舌草粉碎成颗粒状，按处方量分别称量两种药材颗粒，混合提取，用食用乙醇，回流提取，过滤，得乙醇提取液和残渣；

(2)将步骤(1)所得残渣加去离子水煮沸提取，过滤，得水提取液；

(3)将步骤(1)所得乙醇提取液回收乙醇得乙醇提取浓缩液；将步骤(2)所得水提取液减压浓缩得水提取浓缩液；混合两种提取浓缩液，喷雾干燥，得到处方量白花蛇舌草和三七中药提取物。

7.根据权利要求5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物的制备方法，包括步骤：

(1)分别将灵芝菌丝体和灵芝子实体粉碎成颗粒状，按处方量分别称量两种药材颗粒，混合提取，用食用乙醇，回流提取，过滤，得乙醇提取液和残渣；

(2)将步骤(1)所得残渣加去离子水煮沸提取两次，过滤，得水提取液；

(3)将步骤(1)所得乙醇提取液回收乙醇得乙醇提取浓缩液；将步骤(2)所得水提取液减压浓缩得水提取浓缩液；混合两种提取浓缩液，喷雾干燥，得到处方量灵芝菌丝体和灵芝子实体中药提取物。

8.根据权利要求5所述的中药提取物的制备方法，其特征在于，泥鳅和地龙中药提取物的制备方法，包括步骤：

(1)按处方中干品折算泥鳅和地龙鲜品所需投料，分别将泥鳅和地龙鲜品用清水冲洗，除去泥沙杂物，加水，用磨浆机制备成肉浆；

(2)将步骤(1)中肉浆冰冻，取出加水融化，超声提取，过滤，加压真空浓缩，冷冻干燥，得泥鳅和地龙中药提取物。

9.一种中药提取物，其特征在于，由权利要求5～8任一权利要求所述的制备方法制备获得。

10.一种中药制剂，包括治疗有效量的权利要求3或4或9所述中药提取物及一种或多种药学上可接受的辅料。

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