CN102145030B - 具有调节免疫抑制肿瘤作用的奇异果软胶囊的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有调节免疫抑制肿瘤作用的奇异果软胶囊的制备方法，包括：(1)将奇异果去皮，切片，预冻，逐步升温，干燥后粉碎，即得奇异果冻干粉；(2)将奇异果果皮水煎后过滤，滤液浓缩，加乙醇，滤取沉淀，抽干，洗涤，干燥，粉碎，即得奇异果多糖；(3)将奇异果冻干粉、奇异果多糖与橄榄油在40-50℃下混匀制成软胶囊。本发明采用先进的技术，在低温真空下，保留了奇异果内的全面营养和活性成分，软胶囊具有优良的隔离光、氧功能和良好的视觉效果，以及生物利用度高、含量准确、均匀性好、外形美观等特点服用剂量小，奇异果软胶囊显示能调节免疫功能及显著提高具有杀伤癌细胞的NK细胞作用，为广大肿瘤患者提供优良便利的抗癌辅助治疗保健品。

Description

具有调节免疫抑制肿瘤作用的奇异果软胶囊的制备方法

技术领域

本发明属奇异果软胶囊的制备领域，特别是涉及一种具有调节免疫抑制肿瘤作用的奇异果软胶囊的制备方法。

背景技术

在美国食品科研中心排列的27种最受欢迎的水果中，奇异果位居榜首，营养价值名列第一：奇异果富含的营养成分包括：维生素C(抗坏血酸)、β-胡萝卜素、维生素E、谷胱甘肽、叶绿素、精氨酸、多糖多酚类、猕猴桃碱等，营养最高，每100克水果所占每日营养建议摄取量Daily Value的百分比，为27种水果之冠；每单位营养素所含的热量最低；是维生素C的最佳来源，堪称“果中之王，维C之冠”。奇异果中含有较强的抗体内自由基氧化物质，能阻断致癌物N-亚硝基码啉的形成，还能增强NK细胞和促进巨噬细胞吞噬的功能。具有提高免疫力、抑制致癌物质的作用，抗辐射、抗氧化、抗自由基作用，降血糖、降血脂作用，保肝作用及提高性功能作用，促进肠胃蠕动，增强消化能力。

奇异果的书面表达就是猕猴桃，奇异果即猕猴桃，奇异果源自中国，本名“鹅莓”或“猕猴桃”。100年前，新西兰女校长伊莎贝尔来中国旅游，并把中国的“鹅莓”(猕猴桃)种子长途跋涉带回了新西兰，开始了“奇异果”的移民生涯。回新西兰后，伊莎贝尔将种子转送给当地的果树专家，之后辗转送到当地知名的园艺专家手中，培植出新西兰第一株奇异果树。

直至目前，对奇异果作为保健食品的加工研究，还不多见；而猕猴桃作为保健食品的加工研究，已有很多的方法和产品。如：专利号：CN1107308“猕猴桃天然营养口服液”及CN1413525A，公开日2003.4.30的专利“一种猕猴桃抗衰老口服液”、CN1184612A，公开日为1998.6.17的专利“防癌野生猕猴桃维他命饮品及其制备工艺方法”等，都是将猕猴桃果汁与其他的营养物质维生素等调配而成，但对猕猴桃本身的营养活性物质保鲜、便于使用的制剂及功能应用的研究不足，不便于保存、携带和服用，难以达到更好的保健功能。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有调节免疫抑制肿瘤作用的奇异果软胶囊的制备方法，该方法采用先进的技术，在低温真空下，保留了奇异果内的全面营养和活性成分，本发明的软胶囊比硬胶囊具有生物利用度高、含量准确、均匀性好、外形美观、服用剂量小等优特点，奇异果软胶囊试验显示能调节免疫功能及显著提高具有杀伤癌细胞的NK细胞作用，为广大肿瘤患者提供优良便利的抗癌辅助治疗保健品。

本发明的一种具有调节免疫抑制肿瘤作用的奇异果软胶囊的制备方法，包括：

(1)奇异果冻干粉

将奇异果(猕猴桃)(市售)去皮，切片，预冻至-20～-25℃，2-3小时，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，逐步升温至20～25℃，控制时间为18-24小时，干燥后，低温(≤25℃)粉碎，即得；

(2)奇异果多糖

将奇异果果皮水煎后过滤，滤液浓缩至比重1.15-1.8，加乙醇至含醇量70--90％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤，真空干燥，低温(≤25℃)粉碎，即得；

(3)软胶囊

奇异果冻干粉      200-1000g

奇异果多糖        100-600g

橄榄油            500-2000g

制法：将奇异果冻干粉、奇异果多糖混合超细粉碎过200-300目筛，与橄榄油在40-50℃下混匀；基质用明胶、甘油、水配制；然后制成软胶囊。

所述步骤(2)水煎以2次为宜，第一次2-3小时，第二次1-2小时，合并二次煎液。

有益效果

本发明的制备方法采用先进的技术，在低温真空下，保留了奇异果内的全面营养和活性成分，同时将奇异果皮提取活性的多糖成分，浓缩了奇异果的应用活性成分，软胶囊具有优良的隔离光、抗氧功能和良好的视觉效果，以及生物利用度高、含量准确、均匀性好、外形美观等特点服用剂量小，奇异果软胶囊试验显示能调节免疫功能及显著提高具有杀伤癌细胞的NK细胞作用，为广大肿瘤患者提供优良便利的抗癌辅助治疗保健品。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

(1)奇异果冻干粉

将50kg的奇异果(市售)去皮，切片，预冻至-20℃，2小时，开启真空泵，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，升华干燥时保持真空，干燥室缓缓升温至20℃，约24小时；再干燥时升温至25℃，保持2小时，冷冻干燥物，在≤25℃温度下超细粉碎过200目筛，即得。

(2)奇异果多糖

奇异果果皮水煎二次，第一次2小时，第二次1.5小时，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.15，加乙醇至含醇量70％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤一次，真空干燥，超细粉碎过200目筛，即得。

(3)软胶囊配制

奇异果冻干粉      3000g

奇异果多糖        1500g

橄榄油            5500g

明胶1000g、甘油750g、水1200g；采用自动旋转轧囊机制成软胶囊。制成含奇异果450mg/粒，每粒内容物1000mg。共10000粒。

实施例2

(1)奇异果冻干粉

将50kg的奇异果(市售)去皮，切片，预冻至-25℃，3小时，开启真空泵，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，升华干燥时保持真空，干燥室缓缓升温至25℃，约18小时；再干燥时升温至30℃，保持4小时，冷冻干燥物，超细粉碎过250目筛，即得。

(2)奇异果多糖

中华猕猴桃果皮水煎二次，第一次3小时，第二次2小时，合并二次煎液，过滤，滤液浓缩至比重1.8，加乙醇至含醇量90％(v/v)，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤一次，真空干燥，超细粉碎过250目筛，即得。

(3)软胶囊配制

奇异果冻干粉      2000g

奇异果多糖        1500g

橄榄油            4500g

明胶1000g、甘油750g、水1200g。制成含奇异果350mg/粒，每粒内容物800mg。共10000粒。

实施例3

奇异果软胶囊对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能的影响

1实验目的：观察奇异果软胶囊对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能的影响。

2受试药物：

药物名称：奇异果软胶囊(实施例1样品)

3实验动物

昆明种小鼠，♂性，18-20g，由上海斯莱克动物责任有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003

4实验剂量

设计实验剂量为：0.5g/kg；1.5g/kg

5阳性药

名称：云芝糖肽胶囊(市售)

规格：0.34g/粒

用法用量：一次3粒，一日3次。

实验剂量：1g/kg

6给药途径及容量

灌胃给药，0.5ml/20g。

7实验方法

小鼠随机分组，每组10只。奇异果软胶囊2个剂量组，阳性药、空白对照各一组。分组后第二天开始给药，连续一个月，每星期称重一次，根据体重调正用药量。连续给药一个月，在最后一次给药后一小时小鼠腹腔内注射2％鸡红细胞(经去除纤维蛋白，生理盐水多次洗涤)0.2ml/只，4小时后处死小鼠，用生理盐水冲洗腹腔，收集冲洗液、离心，倾去上清液，收集细胞涂片，凉干后用瑞氏染色液染色，油镜下观察。计数100个巨嗜细胞吞噬鸡红细胞数，按下公式计算。(1)吞噬百分率＝吞噬鸡红细胞的巨嗜细胞数/100个巨嗜细胞数，(2)吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞数/100巨嗜细胞数。

8实验结果

由表1可知：奇异果软胶囊具有促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用，表明该药对非特异性免疫也有促进作用。

表1：奇异果软胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

各组与模型组比较^*P＜0.05；^**P＜0.01。

实施例4

奇异果软胶囊对C₅₇小鼠NK细胞活性的研究

1实验目的：观察奇异果软胶囊对小鼠腹腔巨嗜细胞吞噬功能的影响。

2受试药物：

药物名称：奇异果软胶囊(实施例1样品)

3实验动物

近交系小鼠C₅₇BL/6，♂性，18-20g，由上海斯莱克动物责任有限公司提供。合格证号：SCXK(沪)2003-0003

4实验剂量

设计实验剂量为：0.5g/kg；1.5g/kg

5阳性药

名称：云芝糖肽胶囊

规格：0.34g/粒

用法用量：一次3粒，一日3次。

实验剂量：1g/kg

6给药途径及容量

灌胃给药，0.5ml/20g。

7³H-TdR

上海原子核研究所，放射浓度20muci/ml

8实验方法

小鼠随机分组，每组6只。奇异果软胶囊2个剂量组，阳性药、空白对照各一组。分组后第二天开始给药，连续一个月，每星期称重一次，根据体重调正用药量。最后一次给药后1小时断颈处死小鼠，无菌取脾，用手术剪刀将脾脏剪碎、制成悬液，离心去上清液，用1640培养剂调整细胞浓度为1×10⁶/ml细胞，进行NK活性测定及淋转实验。(1)NK活性测定：在96孔培养板中加入1×10⁶/ml浓度脾细胞100ul作为效应细胞，另取已培养24小时处于旺盛生长期的YAC-1、浓度1×10⁴/ml细胞100ul作为靶细胞加入培养板中，同时加³H-TdR 0.4uci/孔在37℃、CO₂培养箱中培养24小时，收集细胞在液闪仪上测定CPM值，各组设6复管，自然掺入组不加脾细胞。(2)淋巴细胞转化测定：在96孔培养板中加入1×10⁷/ml浓度脾细胞100ul，ConA(50ug/ml)50ul，在5％CO₂、37℃培养箱中培养48小时，加入20u1³H-TdR培养24小时，各组设6复管，对照管用培养剂代替，培养结束后在多孔细胞收集器上收集细胞，5％TCA固定，无水乙醇脱水，液闪仪上测定CPM值。

NK活性＝(对照组CPM值-实验组CPM值)/(对照组CPM值-自然掺入组CPM值)×100％

淋转指数＝实验组CPM值/对照组CPM值

9实验结果

奇异果软胶囊对小鼠NK细胞活性具有促进作用，表明该药对细胞免疫也有作用。

表1奇异果软胶囊对小鼠NK活性的影响

实施例5

奇异果软胶囊对血管生成作用的影响

1.实验目的

观察样品对鸡胚新生血管生成是否有抑制作用。

2.仪器设备：

2.1CO₂培养箱(Forma scientific Inc，Marietta，OH)；

2.2相差显微镜、荧光显微镜均为Olympus(Olympus，Tokyo)产品；

2.3受精鸡胚

来源：由上海市家禽育种有限公司提供；

2.4Whatman滤纸(Whatman International Ltd.)产品；

3.受试药物：

3.1受试样品：奇异果软胶囊

配制方法：样品溶于DMSO，并用PBS稀释至MHT-2∶10μg/10μl、MHT-11-1610μg/10μl。

保存条件：避光冷藏

3.2阴性对照样品：PBS

4实验方法：

将使用的手术器械以及滤纸灭菌。取新鲜种蛋，在37℃、50％湿度的条件下连续孵育6天。在第6天，鉴定鸡胚是否存活，取出存活的鸡蛋进行开窗。先用光照定位尿囊膜所在位置，做好标记，然后将鸡蛋气囊所在一端扎一个小孔，将鸡蛋的尿囊膜朝上放置，用吸耳球轻吸气囊，使尿囊膜塌陷与蛋壳分开，然后用刀片在尿囊膜上方开一个1cm²的小窗。将浓度为奇异果果汁10μg/10μl、奇异果软胶囊10μg/10μl的样品滴在滤纸上，风干，避开大血管，轻轻地将滤纸放置在尿囊膜上。用透明胶布封好小窗，继续孵育48小时，揭开透明胶带，将窗口扩大在解剖显微镜下拍照。新生血管根据每张照片的血管的分枝点来计数。

抑制率＝(1-药物作用组新生血管数/阴性对照组血管数)×100％

结果如下(表1)。

表1：样品对鸡胚新生血管生成的抑制作用

Claims (2)

1.一种具有调节免疫作用的奇异果软胶囊的制备方法，包括：

(1)将奇异果去皮，切片，预冻至-20～-25℃，2-3小时，真空度达0.1mmHg，关闭冷冻机，逐步升温至20～25℃，控制时间为18-24小时，干燥后粉碎，即得奇异果冻干粉；

(2)将奇异果果皮水煎后过滤，滤液浓缩至比重1.15-1.8，加乙醇至含醇量70--90％v/v，滤取沉淀，抽干，用乙醇洗涤，真空干燥，粉碎，即得奇异果多糖；

(3)将上述质量比为2-10∶1-6∶5-20的奇异果冻干粉、奇异果多糖与橄榄油在40-50℃下混匀；基质用明胶、甘油、水配制；然后制成软胶囊。

2.根据权利要求1所述的一种具有调节免疫作用的奇异果软胶囊的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)水煎分为2次，第一次2-3小时，第二次1-2小时，合并二次煎液。