CN1883708A - 表面修饰疏水改性壳寡糖聚合物载药胶团及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供表面修饰疏水改性壳寡糖聚合物载药胶团，胶团的组成为：平均分子量1.5kD～51kD的壳聚糖与C₁₀～C₂₂的脂肪酸嫁接得到。本发明在疏水改性壳寡糖聚合物胶团的基础上，以双功能性有机小分子对聚合物表面壳寡糖分子上的氨基或羟基进行表面修饰，通过对聚合物胶团表面分子间的化学键架桥，改善聚合物胶团经稀释后的不稳定性；同时通过对聚合物胶团表面分子间的化学键架桥，改变聚合物胶团表面原有的松散结构，形成较为致密的网状结构，来减少聚合物胶团特有的药物突释，并达到对药物的缓控释目的。本发明设计合理，提供的载药胶团是一种具有优良细胞器靶向的纳米载体，可应用于生命科学领域与制药领域。

Description

表面修饰疏水改性壳寡糖聚合物载药胶团及其制备方法

技术领域

本发明属聚合物胶团的表面修饰，涉及双功能性有机小分子对疏水改性壳寡糖聚合物胶团的表面修饰，以及通过对聚合物胶团的表面修饰程度的控制，达到聚合物载药胶团的缓控释性能。

背景技术

聚合物胶团(polymeric micelles，PMs)是近几年正在发展的一类新型的纳米载体，具有增溶、靶向、低毒和长循环的优点。它是由两亲性的聚合物在水性环境中自发形成，具有独特的核—膜(壳)结构。其内部的核可为难溶性药物、多肽和蛋白类药物及基因提供储库，亲水性外膜则可进行理化性质修饰，达到体内靶向分布、逃避单核巨噬细胞的吞噬、提高生物膜转运等作用。聚合物胶团自身可通过“增强的透过及滞留效应”(enhanced permeability andretention effect)聚集到肿瘤组织。

聚合物胶团是当两亲性的聚合物在溶液中的浓度高于其临界聚集浓度时，所自发形成的具有动态平衡特征的纳米胶团。在体研究发现，聚合物给药胶团经体液稀释后，存在着稳定性的问题；而提高聚合物的浓度，会导致载体自身的高毒性。同时聚合物胶团是通过两亲性聚合物的疏水性链段间的疏水性相互作用力所形成的，聚合物胶团对亲脂性药物的增溶也是由于药物与两亲性聚合物的疏水性链段间的疏水性相互作用力的结果，疏水性相互作用力属于一种物理力(范德华力)，因此聚合物载药胶团的药物释放普遍存在着突释和药物释放快速的问题。虽然聚合物胶团能够具有靶向和长循环的功能，但它的突释和药物快速释放特征，大大减低了聚合物胶团中药物对组织、细胞及细胞器的靶向。因此聚合物载药胶团的临床应用仍为空白。

壳聚糖是一类由氨基葡萄糖组成的阳离子聚合物，具有很好的生物相容性、低毒性和可生物降解性。壳聚糖被广泛应用于药物辅料、止血材料、组织工程支架等。大分子量壳聚糖在生理pH条件下(7.2-7.4)不溶于水，而通过酶降解的低分子量壳聚糖(壳寡糖，Chitosan oligosaccharide，CSO)具有良好的水溶性，壳寡糖经长链脂肪酸嫁接改性后，可自发在水溶液中形成5～1000nm的聚合物胶团，并具有细胞核转运功能。该聚合物胶团已应用于亲脂性和蛋白质、DNA等生物大分子药物的载体。

发明内容

本发明的第一个目的是提供表面修饰疏水改性壳寡糖聚合物载药胶团，胶团的组成为：平均分子量1.5kD～51kD的壳聚糖与C₁₀～C₂₂的脂肪酸嫁接得到，嫁接物中壳聚糖的氨基取代度为1％～50％，临界胶团浓度为0.01～0.1mg/ml。本发明在疏水改性壳寡糖聚合物胶团的基础上，以双功能性有机小分子对聚合物表面壳寡糖分子上的氨基或羟基进行表面化学修饰，通过对聚合物胶团表面分子间的化学键架桥，改善聚合物胶团经稀释后的不稳定性；同时通过对聚合物胶团表面分子间的化学键架桥，改变聚合物胶团表面原有的松散结构，形成较为致密的网状结构，来减少聚合物胶团特有的药物突释，并达到对药物的缓控释目的。作为表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的药物为亲脂性药物，如紫杉醇等。

本发明的第二个目的是提供表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的制备方法，通过以下方案实现：

(1)壳寡糖制备：取市售分子量为450kDa的高分子量的壳聚糖(90～95％脱乙酰度)，在55～60℃和pH5.0条件下搅拌溶解，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5∶100(w/w)加入纤维素酶降解，过滤除去杂质。按照使用要求，分别从1kDa、10kDa、50kDa、100kDa、200kDa的超滤膜中，选择合适的超滤分子量膜超滤分级，超滤液冷冻干燥，得分子量小于200kDa(优选壳寡糖为1～50kDa)、脱乙酰度大于80％的低分子量壳寡糖，凝胶渗透色谱法测定分子量。

(2)疏水改性壳寡糖制备：取上述壳寡糖水溶液，按照壳寡糖、脂肪酸、交联偶合剂碳二亚胺摩尔比1∶1～50∶1～50，控制50℃～90℃，反应5～48小时。终反应液透析纯化，冷冻干燥得到疏水改性壳寡糖；脂肪酸选自、癸酸豆蔻酸、软脂酸、油酸、硬脂酸、山萮酸等中任一种。

(3)载亲脂性药物疏水改性壳寡糖胶团的制备：取疏水改性壳寡糖，加入蒸馏水适量，水浴超声分散，得胶团溶液，取胶团溶液，加入亲脂性药物或其溶液，探头超声，得疏水改性壳寡糖载药胶团。

(4)载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液，加入定量(控制疏水改性壳寡糖与双功能性有机小分子的摩尔比1∶1～100)双功能性有机小分子，溶液常温下磁力搅拌一定时间，得表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团。

所述的双功能性有机小分子包括可与壳寡糖上的氨基进行反应的双功能有机小分子表面修饰剂：戊二醛、京尼平、二元脂肪酸、乙二醇缩水甘油醚等；以及可与壳寡糖上的羟基进行反应的双功能有机小分子表面修饰剂：异佛尔酮-二异氰酸酯。

所述戊二醛的结构式为：

所述京尼平的结构式为：

所述乙二醇缩水甘油醚的结构式为：

所述二元脂肪酸：如月桂二酸的结构式为：

所述异佛尔酮-二异氰酸酯的结构式为：

本发明所用表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的材料为专利申请号200510050798.1和200610050516.2中所公开的胶团材料。胶团的组成为：平均分子量1.5kD～51kD的壳聚糖与C₁₀～C₂₂的脂肪酸嫁接得到，嫁接物中壳聚糖的氨基取代度为1％～50％，临界胶团浓度为0.01～0.1mg/ml。通过以下方案实现：

(1)壳寡糖制备：取市售分子量为450kDa的高分子量的壳聚糖(90～95％脱乙酰度)，在55～60℃和pH5.0条件下搅拌溶解，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5∶100(w/w)加入纤维素酶降解，过滤除去杂质。按照使用要求，分别从分子量1kDa、10kDa、50kDa、100kDa、200kDa的超滤膜中，选择合适的超滤膜超滤分级，超滤液冷冻干燥，得分子量小于200kDa(优选壳寡糖为1～50kDa)、脱乙酰度大于80％的低分子量壳寡糖，凝胶渗透色谱法测定分子量。

(2)疏水改性壳寡糖制备：取上述壳寡糖水溶液，按照壳寡糖、脂肪酸、交联偶合剂碳二亚胺摩尔比1∶1～50∶1～50，控制50℃～90℃，反应5～48小时。终反应液透析纯化，冷冻干燥得到疏水改性壳寡糖；脂肪酸选自、癸酸豆蔻酸、软脂酸、油酸、硬脂酸、山萮酸等中任一种。

(3)载亲脂性药物疏水改性壳寡糖胶团的制备：取疏水改性壳寡糖，加入蒸馏水适量，水浴超声分散，得胶团溶液。

本发明的有益之处是：

(1)提供的功能性有机小分子修饰疏水改性壳寡糖载药胶团，是一种具有优良细胞器靶向的纳米载体，可应用于生命科学领域与制药领域。利用这种载体，可用于药物的靶向治疗，提高药物的疗效。

(2)本发明中，采用的胶团表面修饰技术，通过对聚合物胶团表面分子间的化学键架桥，改善聚合物胶团经稀释后的不稳定性；同时通过对聚合物胶团表面分子间的化学键架桥，改变聚合物胶团表面原有的松散结构，形成较为致密的网状结构，可减少聚合物胶团特有的药物突释，并达到缓控释目的。

(3)本发明提供的双功能性有机小分子修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的制备方法，方法简单。所选取的主要原材料为壳寡糖，源于自然界甲壳类动物，具有低毒、可生物降解的特性。

附图说明

图1为不同表面修饰程度的载紫杉醇疏水改性壳寡糖胶团的体外释放曲线。

图2为不同表面修饰程度的载紫杉醇疏水改性壳寡糖胶团的体外释放曲线。

图3为不同表面修饰程度的载紫杉醇疏水改性壳寡糖胶团的体外释放曲线。

图4为不同表面修饰程度的载紫杉醇疏水改性壳寡糖胶团的体外释放曲线。

具体实施方式

本发明结合实施例和附图作进一步的说明。

实施例一

1、壳寡糖的制备

壳聚糖(平均分子量450kDa)6g加至200mL 1.25％(v/v)的盐酸水溶液中，55～60℃条件下搅拌溶解，用稀氨水或稀盐酸调pH至5.0，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5∶100(w/w)加入纤维素酶，控制反应时间8小时后，将反应产物4000r×min^-1离心10分钟，上清液用0.45μm微孔滤膜预处理，以不同分子量的超滤膜超滤分级，超滤液冷冻干燥，得到一定分子量的壳寡糖。并由凝胶渗透色谱法测定平均分子量为50.6kDa。

2、疏水改性壳寡糖的制备

取上述壳寡糖5.0g，精密称定。加40ml双蒸水搅拌溶解后，加入碳二亚胺30mg，搅拌溶解。将0.35g的硬脂酸，加至10ml甲醇溶液中，超声溶解后，加至上述壳寡糖溶液中，在400r·min^-1磁力搅拌条件下，控制温度60℃，反应时间24h以上。终反应液置透析袋，双蒸水透析24h，除去反应副产物。透析液冷冻干燥制备得到疏水改性壳寡糖。

疏水改性后壳寡糖的氨基取代度，采用三硝基苯磺酸法测定。取不同量的壳寡糖(0.5～9mg)，精密称定，分别溶于2ml的重蒸水中，加入4％(w/v)的碳酸氢钠溶液2ml和0.1％(w/v)的三硝基苯磺酸2ml，37℃孵育2h。加入2N盐酸2ml，摇匀，在344nm波长处测定吸收值，制备标准曲线。取上述的壳寡糖4mg溶于2ml重蒸水，同法操作，测定344nm波长处的吸收值，按标准曲线计算其取代度为5％。

3、疏水改性壳寡糖载药胶团制备

取疏水改性壳寡糖10mg，精密称定。加适量双蒸水水浴超声10min分散，定容至100ml，得疏水改性壳寡糖胶团溶液。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖胶团的平均粒径为74.6nm；表面电位为53.2±0.1mV。

取胶团溶液5ml，加入定量体积的紫杉醇标准甲醇溶液(浓度1mg/ml)。减压抽滤除去甲醇后，在冰浴条件下探头超声50次(400W，工作2s，停3s)，得载药胶团。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为175.1nm；表面电位为58.7±0.1mV。药物的包封率为94.82％。

4.载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，加入定量的戊二醛，使聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶10和1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶10的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为131.6nm；表面电位为55.6±0.1mV；药物的包封率为97.49％。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶20的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为112.6nm表面电位为44.6±0.1mV；药物的包封率为97.27％。

5.载药胶团的体外释放：取载药胶团或表面修饰载药胶团溶液2ml，密闭于透析袋(分子量7000)中，置于30ml的2M水杨酸钠PBS(7.4)释放介质中进行体外释放，定时取样，样品过0.22μm微孔滤膜，HPLC测定滤液药物浓度(色谱柱：C18柱，流动相：乙腈∶水＝50∶50，检测波长：227nm，进样量：20μl，流速：1ml/min。)。取样后补加或更换释放介质，维持释放介质体积恒定。其结果参见图1。结果显示，随着聚合物胶团的表面修饰程度的增加，药物的释放速率明显减缓。

实施例二

1、壳寡糖的制备

壳聚糖(平均分子量450kDa)6g加至200mL 1.25％(v/v)的盐酸水溶液中，55～60℃条件下搅拌溶解，用稀氨水或稀盐酸调pH至5.0，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5∶100(w/w)加入纤维素酶，控制反应时间8小时后，将反应产物4000r×min^-1离心10分钟，上清液用0.45μm微孔滤膜预处理，以不同分子量的超滤膜超滤分级，超滤液冷冻干燥，得到一定分子量的壳寡糖。并由凝胶渗透色谱法测定平均分子量为50.6kDa。

2、疏水改性壳寡糖的制备

取上述壳寡糖5.0g，精密称定。加40ml双蒸水搅拌溶解后，加入碳二亚胺120mg，搅拌溶解。将1.4g的硬脂酸，加至10ml甲醇溶液中，超声溶解后，加至上述壳寡糖溶液中，在400r·min^-1磁力搅拌条件下，控制温度60℃，反应时间24h以上。终反应液置透析袋，双蒸水透析24h，除去反应副产物。透析液冷冻干燥制备得到疏水改性壳寡糖。

疏水改性后壳寡糖的氨基取代度，采用三硝基苯磺酸法测定。取不同量的壳寡糖(0.5～9mg)，精密称定，分别溶于2ml的重蒸水中，加入4％(w/v)的碳酸氢钠溶液2ml和0.1％(w/v)的三硝基苯磺酸2ml，37℃孵育2h。加入2N盐酸2ml，摇匀，在344nm波长处测定吸收值，制备标准曲线。取上述的壳寡糖4mg溶于2ml重蒸水，同法操作，测定344nm波长处的吸收值，按标准曲线计算其取代度为12％。

3、疏水改性壳寡糖载药胶团制备

取疏水改性壳寡糖10mg，精密称定。加适量双蒸水水浴超声10min分散，定容至100ml，得疏水改性壳寡糖胶团溶液。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖胶团的平均粒径为67.7nm；表面电位为52.1±0.1mV。

取胶团溶液5ml，加入定量体积的紫杉醇标准甲醇溶液(浓度1mg/ml)。减压抽滤除去甲醇后，在冰浴条件下探头超声50次(400W，工作2s，停3s)，得载药胶团。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为117.8nm；表面电位为56.8±0.1mV。药物的包封率为97.11％。

4.载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入定量的戊二醛，使聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶10和1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶10的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为126.5nm；表面电位为56.8±0.1mV；药物的包封率为96.8％。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶20的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为77.7nm；表面电位为46.7±0.1mV；药物的包封率为97％。

5.载药胶团的体外释放：取载药胶团或表面修饰载药胶团溶液2ml，密闭于透析袋(分子量7000)中，置于30ml的2M水杨酸钠PBS(7.4)释放介质中进行体外释放，定时取样，样品过0.22μm微孔滤膜，HPLC测定滤液药物浓度。取样后补加或更换释放介质，维持释放介质体积恒定。其结果参见图2。结果同样显示，随着聚合物胶团的表面修饰程度的增加，药物的释放速率明显减缓。

实施例三

1、壳寡糖的制备

壳聚糖(平均分子量450kDa)6g加至200mL 1.25％(v/v)的盐酸水溶液中，55～60℃条件下搅拌溶解，用稀氨水或稀盐酸调pH至5.0，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5∶100(w/w)加入纤维素酶，控制反应时间8小时后，将反应产物4000r×min^-1离心10分钟，上清液用0.45μm微孔滤膜预处理，以不同分子量的超滤膜超滤分级，超滤液冷冻干燥，得到一定分子量的壳寡糖。并由凝胶渗透色谱法测定平均分子量为50.6kDa。

2、疏水改性壳寡糖的制备

取上述壳寡糖5.0g，精密称定。加40ml双蒸水搅拌溶解后，加入碳二亚胺300mg，搅拌溶解。将3.5g的硬脂酸，加至10ml甲醇溶液中，超声溶解后，加至上述壳寡糖溶液中，在400r·min^-1磁力搅拌条件下，控制温度60℃，反应时间24h以上。终反应液置透析袋，双蒸水透析24h，除去反应副产物。透析液冷冻干燥制备得到疏水改性壳寡糖。

疏水改性后壳寡糖的氨基取代度，采用三硝基苯磺酸法测定。取不同量的壳寡糖(0.5～9mg)，精密称定，分别溶于2ml的重蒸水中，加入4％(w/v)的碳酸氢钠溶液2ml和0.1％(w/v)的三硝基苯磺酸2ml，37℃孵育2h。加入2N盐酸2ml，摇匀，在344nm波长处测定吸收值，制备标准曲线。取上述的壳寡糖4mg溶于2ml重蒸水，同法操作，测定344nm波长处的吸收值，按标准曲线计算其取代度为40％。

3、疏水改性壳寡糖载药胶团制备

取疏水改性壳寡糖10mg，精密称定。加适量双蒸水水浴超声10min分散，定容至100ml，得疏水改性壳寡糖胶团溶液。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖胶团的平均粒径为31.4nm；表面电位为39.0±0.1mV。

取胶团溶液5ml，加入定量体积的紫杉醇标准甲醇溶液(浓度1mg/ml)。减压抽滤除去甲醇后，在冰浴条件下探头超声50次(400W，工作2s，停3s)，得载药胶团。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为57.3nm；表面电位为53.2±0.1mV。药物的包封率为97.04％。4.载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入定量的戊二醛，使聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶1和1∶100，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。不同的固化比例对所形成的固化载药胶团的粒径、电位和药物包封率的影响见表1。

表1.固化比例对固化载药胶团的粒径、电位和药物包封率的影响

戊二醛/嫁接物(mol/mol)	粒径(nm)	电位(mV)	药物包封率(％)
				1∶11∶101∶201∶401∶80	35.762.735.833.230.6	38.0±0.149.8±0.144.0±0.136.5±0.128.5±0.1	97.8398.7799.1499.3299.46
1∶100	27.5	18.0±0.1	99.36

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶1的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为35.7nm；表面电位为38.0±0.1mV。药物的包封率为97.83％。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶10的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为67.2nm；表面电位为49.8±0.1mV；药物的包封率为98.77％。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶20的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为35.8nm；表面电位为44.0±0.1mV；药物的包封率为99.14％。使用聚合物与戊二醛的摩尔比为1∶100的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为27.5nm；表面电位为18.0±0.1mV；药物的包封率为99.36％。

5.载药胶团的体外释放：取载药胶团或表面修饰载药胶团溶液2ml，密闭于透析袋(分子量7000)中，置于30ml的2M水杨酸钠PBS(7.4)释放介质中进行体外释放，定时取样，样品过0.22μm微孔滤膜，HPLC测定滤液药物浓度。取样后补加或更换释放介质，维持释放介质体积恒定。其结果参见图3。结果同样显示，随着聚合物胶团的表面修饰程度的增加，药物的释放速率明显减缓。

实施例四

1、壳寡糖的制备

壳聚糖(平均分子量450kDa)6g加至200mL 1.25％(v/v)的盐酸水溶液中，55～60℃条件下搅拌溶解，用稀氨水或稀盐酸调pH至5.0，按纤维素酶与壳聚糖比例0.5∶100(w/w)加入纤维素酶，控制反应时间8小时后，将反应产物4000r×min^-1离心10分钟，上清液用0.45μm微孔滤膜预处理，以不同分子量的超滤膜超滤分级，超滤液冷冻干燥，得到一定分子量的壳寡糖。并由凝胶渗透色谱法测定平均分子量为50.6kDa。

2、疏水改性壳寡糖的制备

取上述壳寡糖5.0g，精密称定。加40ml双蒸水搅拌溶解后，加入碳二亚胺300mg，搅拌溶解。将3.5g的硬脂酸，加至10ml甲醇溶液中，超声溶解后，加至上述壳寡糖溶液中，在400r·min^-1磁力搅拌条件下，控制温度60℃，反应时间24h以上。终反应液置透析袋，双蒸水透析24h，除去反应副产物。透析液冷冻干燥制备得到疏水改性壳寡糖。

疏水改性后壳寡糖的氨基取代度，采用三硝基苯磺酸法测定。取不同量的壳寡糖(0.5～9mg)，精密称定，分别溶于2ml的重蒸水中，加入4％(w/v)的碳酸氢钠溶液2ml和0.1％(w/v)的三硝基苯磺酸2ml，37℃孵育2h。加入2N盐酸2ml，摇匀，在344nm波长处测定吸收值，制备标准曲线。取上述的壳寡糖4mg溶于2ml重蒸水，同法操作，测定344nm波长处的吸收值，按标准曲线计算其取代度为40％。

3、疏水改性壳寡糖载药胶团制备

取疏水改性壳寡糖10mg，精密称定。加适量双蒸水水浴超声10min分散，定容至100ml，得疏水改性壳寡糖胶团溶液。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖胶团的平均粒径为31.4nm；表面电位为39.0±0.1mV。

取胶团溶液5ml，加入定量体积的紫杉醇标准甲醇溶液(浓度1mg/ml)。减压抽滤除去甲醇后，在冰浴条件下探头超声50次(400W，工作2s，停3s)，得载药胶团。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为57.3nm；表面电位为53.2±0.1mV。药物的包封率为97.04％。

4.载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入定量的异佛尔酮-二异氰酸酯，使聚合物与异佛尔酮-二异氰酸酯的摩尔比为1∶10和1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。使用聚合物与异佛尔酮-二异氰酸酯的摩尔比为1∶10的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为53.4nm；表面电位为34.7±0.1mV；药物的包封率为96.75％。使用聚合物与异佛尔酮-二异氰酸酯的摩尔比为1∶20的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为43.1nm；表面电位为35.2±0.1mV；药物的包封率为98.34％。

5.载药胶团的体外释放：取载药胶团或表面修饰载药胶团溶液2ml，密闭于透析袋(分子量7000)中，置于30ml的2M水杨酸钠PBS(7.4)释放介质中进行体外释放，定时取样，样品过0.22μm微孔滤膜，HPLC测定滤液药物浓度。取样后补加或更换释放介质，维持释放介质体积恒定。其结果参见图4。结果同样显示，随着聚合物胶团的表面修饰程度的增加，药物的释放速率明显减缓。

实施例五

1、壳寡糖、疏水改性壳寡糖、疏水改性壳寡糖载药胶团制备与实施例一～四相同。

2、载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入1ml的京尼平乙醇溶液，使聚合物与京尼平的摩尔比为1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为41.8nm；表面电位为43.2±0.1mV；药物的包封率为98.15％。

实施例六

1、壳寡糖、疏水改性壳寡糖、疏水改性壳寡糖载药胶团制备与实施例一～四相同。

2、载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入1ml月桂二酸的乙醇溶液，使聚合物与月桂二酸的摩尔比为1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为37.6nm；表面电位为45.2±0.1mV；药物的包封率为98.97％。

实施例七

1、壳寡糖、疏水改性壳寡糖、疏水改性壳寡糖载药胶团制备与实施例一～四相同。

2、载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入1ml乙二醇缩水甘油醚的乙醇溶液，使聚合物与乙二醇缩水甘油醚的摩尔比为1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为45.3nm；表面电位为34.5±0.1mV；药物的包封率为99.23％。

实施例八

1、壳寡糖、疏水改性壳寡糖、疏水改性壳寡糖载药胶团制备与实施例一～四相同。

2、载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液5ml，中加入1ml异佛尔酮-二异氰酸酯的乙醇溶液，使聚合物与异佛尔酮-二异氰酸酯的摩尔比为1∶20，在常温下磁力搅拌4小时，对载药胶团进行表面修饰。

Zetasizer 3000HS分析仪测定粒径及表面电位。表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的平均粒径为56.4nm；表面电位为31.4±0.1mV；药物的包封率为98.67％。

无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的优选具体实施方案应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。

Claims (6)

1、表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团，胶团的组成为：平均分子量1.5kD～51kD的壳寡糖与C₁₀～C₂₂的脂肪酸嫁接得到，嫁接物中壳寡糖的氨基取代度为1％～50％，临界胶团浓度为0.01～0.1mg/ml，其特征是：以双功能性有机小分子对聚合物表面壳寡糖分子上的氨基或羟基进行化学修饰。

2、根据权利要求1所述的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团，其特征是：所述的双功能性有机小分子选用戊二醛、京尼平、二元脂肪酸、乙二醇缩水甘油醚、异佛尔酮-二异氰酸酯中任一种。

3、根据权利要求1所述的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团，其特征是：作为表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的药物为亲脂性药物。

4、根据权利要求3所述的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团，其特征是：作为表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的药物选用紫杉醇。

5、根据权利要求1-4任一所述的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的制备方法，其特征是通过以下步骤实现：

(1)壳寡糖制备：取分子量为450kDa，90～95％脱乙酰度90～95％脱乙酰度的高分子量的壳聚糖，在55～60℃和pH5.0条件下搅拌溶解，按纤维素酶与壳聚糖重量比为0.5∶100加入纤维素酶降解，过滤除去杂质，以超滤膜超滤分级，滤液冷冻干燥，得分子量小于200kDa、脱乙酰度大于80％的低分子量壳寡糖，凝胶渗透色谱法测定分子量；

(2)疏水改性壳寡糖制备：取上述壳寡糖水溶液，按照壳寡糖、脂肪酸、交联偶合剂碳二亚胺摩尔比1∶1～50∶1～50，控制50℃～90℃，反应5～48小时，终反应液透析纯化，冷冻干燥得到疏水改性壳寡糖；

(3)载亲脂性药物疏水改性壳寡糖胶团的制备：取疏水改性壳寡糖，加入蒸馏水适量，水浴超声分散，得胶团溶液，取胶团溶液，加入亲脂性药物或其溶液，探头超声，得疏水改性壳寡糖载药胶团。

(4)载药胶团的表面修饰：取载药胶团溶液，加入双功能性有机小分子溶液，控制疏水改性壳寡糖与双功能性有机小分子的摩尔比为1∶1～100，15～50℃下磁力搅拌2～24小时，得表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团。

6、根据权利要求5所述的表面修饰疏水改性壳寡糖载药胶团的制备方法，其特征是：步骤(2)所述的壳寡糖水溶液选用分子量为1～50kDa制备疏水改性壳寡糖。

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