CN109394692B - 达沙替尼接枝型聚合物胶束、其冻干粉针剂及制备方法和应用 - Google Patents

达沙替尼接枝型聚合物胶束、其冻干粉针剂及制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种达沙替尼接枝型聚合物胶束，该达沙替尼接枝型聚合物胶束包括两亲性接枝型聚合物和由所述两亲性接枝型聚合物包载的达沙替尼。本发明还提供上述达沙替尼接枝型聚合物胶束的制备方法、上述达沙替尼接枝型聚合物胶束的冻干粉针剂、该冻干粉针剂的制备方法以及上述达沙替尼接枝型聚合物胶束和冻干粉针剂的应用。本发明的达沙替尼接枝型聚合物胶束载药量高，稳定性好，生物相容性好，而且用于实体瘤治疗时可通过主动靶向和/或被动靶向高效蓄积于肿瘤组织，增加肿瘤组织中的药物浓度，实现增效减毒的目的。

Description

达沙替尼接枝型聚合物胶束、其冻干粉针剂及制备方法和 应用
技术领域
本发明属于药物制剂领域，特别是一种达沙替尼接枝型聚合物胶束、其冻干粉针剂及制备方法和应用。
背景技术
达沙替尼(Dasatinib)是一种小分子多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，对BCR-ABL、Src、Lck、YES、EPH receptor A2(EPHA2)、PDGFR等激酶均具有抑制作用，属于第二代信号传导抑制剂。达沙替尼由美国百时美-施贵宝公司(Bristol-Myers Squibb)开发研制，并于2006年以片剂形式在美国获批上市，其商品名为Sprycel。该药在临床上主要用于治疗对甲磺酸伊马替尼耐药或不耐受的费城染色体阳性慢性髓细胞白血病(CML)成年患者以及对其他疗法耐药或不能耐受的费城染色体阳性的急性淋巴细胞性白血病(ALL)成人患者。近年来临床试验研究表明达沙替尼在用于其它多种实体肿瘤如非小细胞肺癌、前列腺癌、神经胶质瘤、卵巢癌以及乳腺癌的治疗中也显示出了不同的抗肿瘤活性和抑制肿瘤细胞转移潜力，而且达沙替尼与多种其他药物(包括细胞毒性药物和靶向药物)联合使用时具有加和或协同作用(Araujo J，Logothetis C.Dasatinib：A potent SRC inhibitor in clinicaldevelopment for the treatment of solid tumors[J].Cancer Treatment Reviews，2010，36(6)：492-500.)，故达沙替尼是一种具有良好运用前景的药物。达沙替尼的化学名称为N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[[6-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基]氨基]-5-噻唑甲酰胺，其化学结构式如下：
Figure BDA0001902136530000011
目前已上市的达沙替尼剂型只有口服片剂，但达沙替尼溶解度低，水溶性差，溶出速率低，临床使用中生物利用度有限(临床100mg口服剂量治疗AUC0-t值为397ng*h/mL，Amax为82.2ng/mL)。此外，尽管达沙替尼的临床研究显示具有抑制多种实体瘤的增殖、防止肿瘤转移的作用，但其进入机体后不能特异性蓄积于肿瘤组织而分布于全身，因此在抗肿瘤的同时不可避免产生毒副作用(如胃肠道、造血系统和淋巴系统等亦存在分子靶标，达沙替尼分布于此处时产生毒副作用；达沙替尼分布于肝脏中被CYP3A4底物代谢引起肝毒性)。达沙替尼最常见的毒副作用是血液学毒性(如黑色素瘤治疗中3级和4级毒副作用发生率达50％)，包括中性粒细胞减少、血小板减少和贫血等；非血液学毒性主要表现在疲劳、头痛、胸腔积液、骨髓抑制、胃肠道反应、心脏毒性以及肝脏毒副作用等(如脑胶质瘤治疗中胸腔积液发生率达51％；肺癌治疗中包括肠气囊肿症在内的3级毒副作用发生率达68.3％)。临床中患者出现严重的毒副作用时，一般采取暂时中断药物或降低药物剂量联合支持对症治疗，因此严重限制了达沙替尼的运用。
由此，达沙替尼的注射型纳米制剂逐渐被开发，研究者期望通过提高达沙替尼的体内生物利用度或增强实体瘤内药物的靶向蓄积，达到增效减毒的目的。目前已报导的达沙替尼纳米制剂包括脂质体、纳米粒、聚合物前药、嵌段聚合物胶束制剂，相关专利和文献较少。例如公开号为CN107260680A的中国发明专利申请中，公开了达沙替尼脂质体制剂及其制备方法，该发明通过将磷脂、胆固醇、聚乙二醇化磷脂三者按照一定比例混合制成含铵盐水溶液的空白脂质体，采用主动载药法将达沙替尼以不溶性盐形式稳定包封于脂质体的水相中。虽然在一定程度上改善了脂质体的稳定性难题，但制备过程耗时长，质量工作要求高，且该制剂进入机体后存在达沙替尼的释放与吸收缓慢问题。另外文献报导的达沙替尼白蛋白纳米粒(Malarvizhi G L，Chandran P，Retnakumari A P，et al.A rationallydesigned photo-chemo core-shell nanomedicine for inhibiting the migration ofmetastatic breast cancer cells followed by photodynamic killing[J].Nanomedicine，2014，10(3)：579-587.)、达沙替尼前药(Sun J，Liu Y，Chen Y，etal.Doxorubicin delivered by a redox-responsive dasatinib-containing polymericprodrug carrier for combination therapy[J].Journal of Controlled ReleaseOfficial Journal of the Controlled Release Society，2017，258：43-55.)、达沙替尼嵌段聚合物胶束(Yao Q，Choi J H，Dai Z，et al.Improving Tumor Specificity anndAnticanncer Activity of Dasatinib by Dual-Targeted Polymeric Micelles[J].ACSApplied Materials &Interfaces，2017，9(42)：36642-36654.)均存在制剂药物载药量低(均低于9％)、生物利用度改善有限、制备工艺复杂等问题，限制了达沙替尼高效纳米制剂的研发进程。
发明内容
本发明的首要目的是提供一种载药量高、稳定性好，在体内具有较高的生物利用度，用于实体瘤治疗时更易聚集于肿瘤组织释放药物的达沙替尼接枝型聚合物胶束。
本发明的另一目的是提供上述达沙替尼接枝型聚合物胶束的冻干粉针剂。
本发明又一目的是提供上述达沙替尼接枝型聚合物胶束的制备方法和在抗肿瘤中的应用。
技术方案：本发明提供一种达沙替尼接枝型聚合物胶束，包括两亲性接枝型聚合物和由所述两亲性接枝型聚合物包载的达沙替尼。
本领域技术人员可通过已知的方法合成上述两亲性接枝型聚合物；上述两亲性接枝型聚合物包含亲水片段和疏水片段，亲水片段优选为软骨素、多硫酸化肝素、透明质酸、低分子量肝素、未分级肝素、真菌多糖、海藻酸、壳聚糖、葡聚糖及其衍生物中的一种或多种，疏水片段优选为胆酸、熊去氧胆酸、石胆酸、鹅去氧胆酸、胆固醇、琥珀酸胆固醇单酯、氨基酸糖苷、聚己内酯、中长链脂肪酸(含8～20个碳原子的)及以上亲水片段的衍生物中的一种或多种；达沙替尼接枝型聚合物胶束的粒径为10-1000nm，进一步优选为100-200nm；达沙替尼接枝型聚合物胶束中，达沙替尼的载药量为10～30wt％，进一步优选为14～20wt％。
上述达沙替尼接枝型聚合物胶束中，利用疏水作用或氢键作用将达沙替尼包裹于胶束的疏水内核中。上述达沙替尼接枝型聚合物胶束可以制成注射剂，该注射剂可通过将胶束溶液按注射液或注射用剂常用工艺，直接分散于西林瓶中制得；或者，上述达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液可通过常用的冻干粉针剂制备工艺制成冻干粉针剂，临床中可用葡萄糖注射液或生理盐水复溶后即使用。本发明的冻干粉针剂再溶解时具有迅速溶解，溶液澄清，粒径均一的特征。
本发明另一方面提供上述的达沙替尼接枝型聚合物胶束的制备方法，包括以下步骤：
1)将两亲性接枝型聚合物溶解或分散于水中，得到接枝型聚合物胶束溶液，将达沙替尼用药学上可接受的有机溶剂溶解，与接枝型聚合物胶束溶液混合，得到预制溶液；或者，
将两亲性接枝型聚合物和达沙替尼共同溶解或分散于药学上可接受的有机溶剂中得到溶液A，将溶液A滴加至水中得到预制溶液；
2)对步骤1)制得的预制溶液进行超声或高压均质法处理后，除去有机溶剂，制得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液；或者，
将步骤1)制得的预制溶液中除去水和有机溶剂，然后以水复溶或分散并进行超声或高压均质法处理，制得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。
本发明中，“药学上可接受的有机溶剂”是指无基因毒性，无强烈致癌性的药学中常用有机溶剂。
步骤1)中，两亲性接枝型聚合物与达沙替尼的投料质量比为1∶0.1-1∶1，优选为1∶0.3-1∶0.5；接枝型聚合物胶束中，两亲性接枝型聚合物的浓度为3-15mg/ml；两亲性接枝型聚合物包含亲水片段和疏水片段，亲水片段与疏水片段的摩尔比为1∶0.5-1∶5；药学上可接受的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中的一种或两种以上的混合溶剂。
步骤2)中，所述超声频率为10W-1000W，超声时间为5min-2h；所述均质处理是通过高压均质机实施的，所述均质压力为200Pa-950Pa，所述均质循环次数为2-20次；除去有机溶剂的方法为透析、超滤或蒸发；除去预制溶液中的水和有机溶剂的方法为对预制溶液进行旋转蒸发，从而在旋转蒸发的瓶壁上形成薄膜。
本发明另一方面提供一种达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂，该冻干粉针剂由上述达沙替尼接枝型聚合物胶束添加冻干保护剂，采用冷冻干燥法制成。
本发明中，上述冻干保护剂应为药学上可接受的冻干保护剂，“药学上可接受的冻干保护剂”是指安全无毒，生物相容性好，为保证冻干过程顺利进行和调节渗透压的一类物质。优选地，上述药学上可接受的冻干保护剂为葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、甘露醇、氯化钠、氨基酸、枸橼酸盐、醋酸盐和磷酸盐中的一种或多种；药学上可接受的冻干保护剂的添加体积为所述达沙替尼接枝型聚合物胶束体积的1％-20％；上述冷冻干燥可采用已知的条件进行，本发明中不再赘述。
本发明另一方面提供上述的达沙替尼接枝型聚合物胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。
有益效果：本发明的达沙替尼接枝型聚合物胶束采用两亲性接枝型聚合物作为载体材料，通过疏水作用或氢键作用以物理包埋的方式将抗肿瘤药物达沙替尼包裹于疏水内核中，并在水中自发形成具有亲水外壳、疏水内核结构的纳米制剂，水合粒径均一(可控制在10～1000nm)，载药量高，稳定性好，生物相容性好的特征，具有良好的应用价值。本发明的达沙替尼接枝型聚合物胶束利用独特的壳-核结构包裹达沙替尼，且由于壳-核结构、粒子小尺寸和界面效应等不仅能够有效增溶达沙替尼，提高其体内生物利用度，而且用于实体瘤治疗时可通过主动靶向和/或被动靶向高效蓄积于肿瘤组织，增加肿瘤组织中的药物浓度，实现增效减毒的目的。另外，本发明的达沙替尼接枝型聚合物胶束制备工艺简单经济，避免了表面活性剂、交联剂或加热条件的使用，可操作性和重复性强。
附图说明
图1为实施例1达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液制剂的稳定性考察结果；
图2为实施例1达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液制剂给药后肿瘤体积-时间曲线；
图3为实施例1达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液制剂给药后肝功能评价结果；
图4为实施例1达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液制剂给药后血液学毒性评价结果。
具体实施方案
实施例1
(1)制备透明质酸-熊去氧胆酸两亲性接枝型聚合物
取1g熊去氧胆酸溶于N-N，二甲基甲酰胺中，加入500mgN，N′-二环己基碳二亚胺、250mg N-羟基琥珀酰亚胺活化4h后，加入5ml乙二胺，氮气保护下反应12h，反应结束后过滤除去不溶性副产物，向上清液加入水沉淀产物，收集沉淀即得一端含游离氨基的熊去氧胆酸。取1g透明质酸溶于甲酰胺中，加入403mg1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、200mg N-羟基琥珀酰亚胺活化30min后，加入100mg一端含游离氨基的熊去氧胆酸，室温下搅拌反应20h，反应结束后，将反应液转入透析袋中透析48h。透析结束后，将溶液冷冻干燥即得透明质酸-熊去氧胆酸两亲性接枝型聚合物。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取步骤(1)制备的透明质酸-熊去氧胆酸两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于N，N-二甲基甲酰胺中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，200W探头超声20min后，去离子水透析过夜，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为161.7±2.2nm，Zeta电位为-20.61±×1.71mV。达沙替尼的载药量为15.2％。
(3)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(2)制备的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂。达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例2
(1)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取实施例1步骤(1)制备的透明质酸-熊去氧胆酸两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于N，N-二甲基甲酰胺中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，200W探头超声20min后，去离子水透析过夜，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。鉴于该胶束表面含有游离羧基，在搅拌过程中分别依次缓慢滴加CaCl2溶液、Na2HPO4溶液，通过电荷作用在胶束表面形成一层不溶性Ca3(PO4)2矿化层制备成矿化达沙替尼接枝型聚合物胶束，实现了进一步提升胶束稳定性的目的。该矿化胶束平均粒径为168.4±1.3nm，Zeta电位为-8.32±1.24mV。达沙替尼的载药量为15.6％。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(1)制得的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得冻干粉针剂。使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例3
(1)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取实施例1步骤(1)制备的透明质酸-熊去氧胆酸两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml得到接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于N，N-二甲基甲酰胺中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，采用高压均质机均质(均质压力：750Pa；均质循环次数：5次)后，去离子水透析过夜，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为166.4±2.5nm，Zeta电位为-20.31±1.12mV。达沙替尼的载药量为14.9％。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(1)制得的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得达沙替尼纳米胶束粉针剂。使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例4
(1)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取实施例1步骤(1)制备的透明质酸-熊去氧胆酸两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml得到接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于无水乙醇中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，45℃旋转蒸发除去溶剂，将形成的混合物薄膜重新分散于水中，200W探头超声20min后，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为202.1±3.5nm，Zeta电位为-20.12±0.41mV。达沙替尼的载药量为10.3％。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(1)制得的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得达沙替尼纳米胶束粉针剂。使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例5
(1)制备琥珀酰化壳聚糖-石胆酸两亲性接枝型聚合物
取1.3g石胆酸溶于四氢呋喃中，加入650mgl-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、325mg N-羟基琥珀酰亚胺活化0.5h后，加入5ml乙二胺，氮气保护下反应12h，反应结束后加入水沉淀产物，收集沉淀即得一端含游离氨基的石胆酸。取2g琥珀酰化壳聚糖溶于二甲基亚砜中，加入806mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、400mg N-羟基琥珀酰亚胺活化0.5h后，加入230mg一端含游离氨基的石胆酸，室温下搅拌反应20h，反应结束后，将反应液转入透析袋中透析48h。透析结束后，将溶液冷冻干燥，即得琥珀酰化壳聚糖-石胆酸两亲性接枝型聚合物。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取步骤(1)制得的琥珀酰化壳聚糖-石胆酸两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于N，N-二甲基甲酰胺中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，200W探头超声20min后，去离子水透析过夜，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为165.3±3.2nm，Zeta电位为-19.31±1.13mV。达沙替尼的载药量为14.7％。
(3)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向该溶液制剂中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得达沙替尼纳米胶束粉针剂，使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例6
(1)制备软骨素-胆固醇两亲性接枝型聚合物
取0.5g软骨素溶于二甲基亚砜中，加入201mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、100mg N-羟基琥珀酰亚胺和51mg 4-二甲氨基吡啶活化2h后，加入70mg胆固醇，室温搅拌反应20h，反应结束后，将反应液转入透析袋中透析48h。透析结束后，将溶液冷冻干燥即得软骨素-胆固醇两亲性接枝型聚合物。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取步骤(1)制得的软骨素-胆固醇两亲性接枝型聚合物30mg和达沙替尼9mg，加入6ml甲酰胺搅拌进行溶解，将溶解得到的溶液滴加至24ml水中，高速搅拌10min后，200W探头超声20min后，去离子水透析过夜，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为163.6±2.7nm，Zeta电位为-21.22±0.75mV。达沙替尼的载药量为14.2％。
(3)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(2)制得的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得达沙替尼纳米胶束粉针剂。使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例7
(1)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取实施例6制备的软骨素-胆固醇两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml得到接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于N-N，二甲基甲酰胺中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，200W探头超声20min后，去离子水透析过夜，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为158.3±1.3nm，Zeta电位为-19.81±0.25mV。达沙替尼的载药量为15.5％。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(1)制得的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得达沙替尼纳米胶束粉针剂。使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例8
(1)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束
称取实施例6制备的软骨素-胆固醇两亲性接枝型聚合物25mg，加入5ml去离子水，搅拌得到5mg/ml得到接枝型聚合物胶束溶液；取达沙替尼9mg溶于丙酮中，得到达沙替尼溶液。在高速搅拌下，将达沙替尼溶液加入至上述接枝型聚合物胶束溶液中，200W探头超声20min后，室温敞口搅拌过夜以使丙酮挥发，过0.45μm滤膜，即得达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。该胶束平均粒径为165.3±3.2nm，Zeta电位为-19.31±1.13mV。达沙替尼的载药量为14.9％。
(2)制备达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂
向步骤(1)制得的达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液中加入1.0％的甘露醇冷冻干燥即得达沙替尼纳米胶束粉针剂。使用前用0.9％的生理盐水或5％的葡萄糖复溶，复溶得到的胶束可用于静脉注射。
实施例9
达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液制剂稳定性考察
以粒径变化为指标考察达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液制剂(实施例1制备)分别在含有10％血清的磷酸缓冲液(A组)和水性介质(B组)中室温储存稳定性，结果如图1所示。结果表明该胶束溶液制剂在两种介质中48h内粒径仍无明显变化，稳定性好。
实施例10
达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂稳定性考察
以冻干粉针剂的外观、再分散性以及复溶后的粒径、药物含量为考察指标，测定达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂(实施例1制备)于-20℃放置1个月的稳定性，结果如表1。结果表明，在此条件下该冻干粉针剂放置一个月后，外观、再分散性、粒径及药物含量与0月相比均未出现显著性变化，符合临床用药需求。
表1达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂的稳定性
Figure BDA0001902136530000101
实施例11
达沙替尼接枝型聚合物胶束的体内安全性评价
(1)实验方法：取肿瘤体积为100mm3左右的乳腺癌荷瘤小鼠30只随机分为3组，分别为生理盐水组、游离达沙替尼组(A组)、达沙替尼接枝型聚合物胶束组(B组)(实施例1制备)，每组10只。按5mg/kg给药剂量，分别于0、2、4、6、8、10、12天尾静脉注射各组制剂。每次给药后用游标卡尺测量肿瘤的长径(a)和短径(b)，按照公式(1)计算肿瘤体积，根据计算结果绘制肿瘤体积-时间曲线，以评价各组制剂的抗肿瘤效果。停药后第二天将各组小鼠进行眼眶取血，并进行血常规和肝脏指标测定，以评价各组制剂的血液毒性和肝毒性。
Vtumor＝(a2×b)/2 (公式1)
(2)实验结果：肿瘤体积-时间曲线如图2所示，达沙替尼接枝型聚合物胶束组治疗后的肿瘤体积明显小于游离达沙替尼组，这是由于达沙替尼接枝型聚合物胶束具有主动以及被动靶向性，大大提高了肿瘤组织中的药物蓄积量，因此表现出更强的抗肿瘤活性。通过测定血清中肝功能相关指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和高密度脂蛋白(HDL-L)，由图3可知，与生理盐水组(Saline)相比，达沙替尼接枝型聚合物胶束组的ALT、AST变化幅度较小，而游离达沙替尼溶液组的三种肝功能指标显著升高，表现出了明显的肝功能损伤。通过测定血液中的血常规指标，由图4可知，与生理盐水组相比，游离达沙替尼组的平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白(MCHC)指标低于正常范围，表明具有贫血发生，此外中性粒细胞(Granulocyte)细胞，血小板(PLT)低于正常范围，表明用药过程中出现了中性粒细胞减少和血小板减少毒性作用的发生；而达沙替尼接枝型聚合物胶束组的各项指标未发生明显变化，显著提高了达沙替尼的安全性。综上所述，本专利的达沙替尼接枝型聚合物胶束不仅表现出增强的抗肿瘤活性，而且能降低达沙替尼的毒副作用，提高临床用药的安全性。

Claims (10)

1.一种达沙替尼接枝型聚合物胶束，其特征在于，该达沙替尼接枝型聚合物胶束包括两亲性接枝型聚合物和由所述两亲性接枝型聚合物包载的达沙替尼，其中，所述两亲性接枝型聚合物包含亲水片段和疏水片段，所述亲水片段为软骨素、软骨素衍生物、多硫酸化肝素、多硫酸化肝素衍生物、透明质酸、透明质酸衍生物、低分子量肝素、低分子量肝素衍生物、未分级肝素、未分级肝素衍生物、真菌多糖、真菌多糖衍生物、海藻酸、海藻酸衍生物、壳聚糖、壳聚糖衍生物、葡聚糖和葡聚糖衍生物中的一种或多种，所述疏水片段为胆酸、熊去氧胆酸、石胆酸、鹅去氧胆酸、胆固醇、琥珀酸胆固醇单酯、氨基酸糖苷、聚己内酯和中长链脂肪酸中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的达沙替尼接枝型聚合物胶束，其特征在于，所述达沙替尼接枝型聚合物胶束的粒径为10-1000nm。
3.根据权利要求1所述的达沙替尼接枝型聚合物胶束，其特征在于，所述达沙替尼接枝型聚合物胶束的粒径为100-200nm；所述达沙替尼接枝型聚合物胶束中，所述达沙替尼的载药量为10～30wt％。
4.权利要求1～3中任意一项所述的达沙替尼接枝型聚合物胶束的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：1)将两亲性接枝型聚合物溶解或分散于水中得到接枝型聚合物胶束溶液，将达沙替尼用药学上可接受的有机溶剂溶解，与所述接枝型聚合物胶束溶液混合，得到预制溶液；或者，将两亲性接枝型聚合物和达沙替尼共同溶解或分散于药学上可接受的有机溶剂中得到溶液A，将溶液A滴加至水中得到预制溶液；2)对所述预制溶液进行超声或高压均质法处理后，除去所述有机溶剂，制得所述达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液；或者，将所述预制溶液除去水和有机溶剂，然后以水复溶或分散并进行超声或高压均质法处理，制得所述达沙替尼接枝型聚合物胶束溶液。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述两亲性接枝型聚合物与所述达沙替尼的投料质量比为1∶0.1-1∶1；所述接枝型聚合物胶束中，所述两亲性接枝型聚合物的浓度为3-15mg/ml；所述两亲性接枝型聚合物包含亲水片段和疏水片段，所述亲水片段与疏水片段的摩尔比为1∶0.5-1∶5。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述药学上可接受的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺和二甲基亚砜中的一种或两种以上的混合溶剂。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述超声频率为10W-1000W，超声时间为5min-2h；所述高压均质法处理是通过高压均质机实施的，所述高压均质压力为200Pa-950Pa，所述高压均质循环次数为2-20次；所述除去所述有机溶剂的方法为透析、超滤或蒸发；所述除去所述预制溶液中的水和有机溶剂的方法为对所述预制溶液进行旋转蒸发，在旋转蒸发的容器壁上形成薄膜。
8.一种达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂，其特征在于，该冻干粉针剂由权利要求1～3中任意一项所述的达沙替尼接枝型聚合物胶束添加冻干保护剂，采用冷冻干燥法制成。
9.根据权利要求8所述的达沙替尼接枝型聚合物胶束冻干粉针剂，其特征在于，所述冻干保护剂选自葡萄糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、甘露醇、氯化钠、氨基酸、枸橼酸盐、醋酸盐和磷酸盐中的一种或多种；所述冻干保护剂的添加体积为所述达沙替尼接枝型聚合物胶束体积的1％-20％。
10.权利要求1～3中任意一项所述的达沙替尼接枝型聚合物胶束在制备抗肿瘤药物中的应用。
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