CN1872883A - 一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法,该方法以蕨麻为原料,经过提取、脱蛋白、分离等步骤,制得一种天然、能显著增强动物抗辐射能力的多糖;本发明具有收率高、工艺简单等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然多糖的制备方法,尤其是涉及一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法。
背景技术
辐射是指能量以电磁波形式由发射源发射到空间的现象,或解释为能量以电磁波形式在空间传播,电磁辐射由电磁发射引起的。辐射的来源有:天然辐射和人工辐射。天然辐射是指辐射来自于地球的热辐射、太阳热辐射、宇宙射线、雷电等发出的射线。人工辐射是指辐射来自于广播、电视、雷达、通信基站及电磁能等在工业、科学、医疗和生活中的应用设备发出的射线队。现在发达的现代化城市中,越来越多的射线在辐射着人类,由于辐射引起的疾病也在不断地增长,严重危害着人体的健康。放射性物质可通过呼吸吸入,皮肤伤口及消化道吸收进入体内,引起内辐射,辐射可穿透一定距离被机体吸收,使人员受到外照射伤害。内外照射形成放射病的症状有:疲劳、头昏、失眠、皮肤发红、溃疡、出血、脱发、白血病、呕吐、腹泻等。有时还会增加癌症、畸变、遗传性病变发生率,影响几代人的健康。一般来说,身体接受的辐射能量越多,其放射病症状越严重,致癌、致畸风险越大。
在我国的中药宝库中,蕨麻具有益胃,生津,止渴,益气补血,滋阴养肾,提高免疫力,抗疲劳,耐缺氧和止泻的作用。能治肿瘤,病后贫血,营养不良,肾虚气亏等症。
根据蕨麻的特性和入药所具有的功能,制备的一种天然的、能显著增强动物抗辐射能力的多糖成为有益选择。
现在人们通常使用的提取蕨麻多糖的方法是用水和/或乙醇提取蕨麻多糖,但按现有的方法,其收率低、工艺复杂。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种收率高、工艺简单的抗辐射蕨麻多糖制备方法。该方法以蕨麻为原料,经过提取、脱蛋白、分离等步骤,制得一种天然、能显著增强动物抗辐射能力的多糖。
为解决上述技术问题,本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤:
1)将蕨麻粉碎后过30~50目筛,加入到95%乙醇中,所述蕨麻与95%乙醇的配比关系是:1千克蕨麻加入到8~15升95%乙醇中;在75~85℃下搅拌提取2~4小时,进行脱脂;过滤,将残渣在70~90℃烘干得脱脂的蕨麻粉末;将已脱脂的蕨麻,在80~100℃温度下,加入到4~5倍体积的水中水浴提取2~4小时,重复2~4次,合并提取液;在转速为2000~4000转/分的条件下,离心8~15分钟,留取上清液,得到物质A;
2)在温度为70~80℃,压力0.06~0.1MPa的条件下,将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4~1/2;在转速3500~4500转/分的条件下,离心2~5分钟;在得到的上清液中加入3~5倍体积的无水乙醇,放置5~7小时;然后在转速3500~4500转/分的条件下,离心4~6分钟,弃去上清液,留取沉淀物,得到物质B;
3)将物质B加入到12~20倍重量的水中溶解,在转速3000~5000转/分的条件下,离心2~4分钟,弃去不溶物;所得上清液中加入3~5倍体积的无水乙醇,放置5~7小时;在转速3500~4500转/分的条件下,离心4~6分钟,弃去上清液,留取沉淀物,重复本步骤的过程,直至沉淀物中检测不出淀粉为止;在温度为30~50℃,压力0.06~0.1MPa的条件下,将沉淀物真空干燥,制得物质C;经过1、2、3步骤后物质C得率可达13.67%;
4)将物质C加入到7~10倍重量的水中溶解,在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白;所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是:100毫升物质C溶解液中加入5~7个活力单位木瓜蛋白酶;在45~55℃,放置8~15小时,离心除去部分蛋白;用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液,所述上清液与萃取液的体积比为3~5∶1,脱去残留蛋白,收集水层溶液,得到物质D;
5)在60℃的条件下,物质D中加入20%的H2O2,所述物质D与H2O2体积比为80~130∶1,振荡脱色,至溶液颜色为乳白色为止,得到物质E;
6)将物质E放入透析袋中透析30~40小时,所述透析袋截留分子量超过12000的分子;往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到75~85%,静置8~12小时,在3000~5000转/分转速下,离心4~6分钟,收集沉淀;35~45℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
用苯酚一硫酸法测定蕨麻多糖含量,经过步骤1~6后蕨麻多糖收率可达6.32%。
使用不同浓度乙醇沉淀的多糖,在20℃时具有不同的旋光度,表明该多糖非均一组分。
蕨麻多糖抗辐射实验如下:
机体受到辐射后,射线作用于骨髓造血干细胞,使骨髓幼稚造血细胞受损,细胞增殖功能受到抑制。白细胞会明显下降。因此,白细胞是反映辐射损伤的经典指标。本次实验结果表明经X-射线直线加速器照射后,多糖实验组除高剂量外,中、低剂量组的白细胞明显高于辐射对照组,同时从一定程度上抑制了辐射损伤引起的体重的下降。促进了机体的生长发育。
实验用小白鼠小鼠适应喂养7天后,随机分组,每组8只,分别为正常对照组,辐射对照组,多糖组(高,中,低三个剂量)和多糖对照组。正常对照组和辐射对照组以蒸馏水灌胃,多糖组和多糖对照组以蕨麻多糖灌胃,均为中午灌胃,每日一次,每次0.5ml,低、中、高剂量分别为50、100和200mg/kg。各组连续灌胃7天后,进行x-射线直线加速器照射(正常对照组和多糖对照组不辐射),总吸收量为3.0Gy,照射距离为98cm,剂量率为1.0Gy/min,照射后继续灌胃5天,辐射后第2天灌胃后1小时后剪尾尖采血20微毫升左右,用白细胞稀释液稀释后,放置血细胞计数器上,测定白细胞数目。蕨麻多糖对辐射小鼠外周血白细胞数目的影响。见下表:
蕨麻多糖对辐射小鼠外周血白细胞数目的影响
NO. | 组别 | 剂量(mg/kg) | 白细胞数(103个/mm3) | ||
第2d | 第4d | 第7d | |||
1 | 高剂量多糖组 | 200 | 5.58 | 7.11 | 7.35 |
2 | 中剂量多糖组 | 100 | 7.94 | 8.13 | 8.20 |
3 | 低剂量多糖组 | 50 | 7.22 | 7.80 | 8.25 |
4 | 多糖对照组 | 0 | 17.11 | 23.5 | 25.6 |
5 | 辐射对照组 | 0 | 6.44 | 7.00 | 7.33 |
6 | 正常对照组 | 0 | 8.14 | 8.29 | 8.08 |
由实验结果可以看出,小鼠辐射后第2天白细胞严重受损(表1),数量急剧下降,辐射对照组照后第2天外周血白细胞数量下降为正常对照组的20.8%。蕨麻多糖高、中、低3个剂量的白细胞数目也有所下降,除高剂量组外,中、低剂量组均高于辐射对照组,其中中剂量组的效果最为明显。(表3)中剂量组小鼠的白细胞较辐射对照组升高了18.9%。低剂量组较辐射对照组白细胞数升高了10.8%。表明蕨麻多糖对辐射引发的白细胞数目减少有防护作用。
体重变化:高、中、低剂量三个组的小鼠体重在辐射后第5天明显下降,但下降程度均低于辐射对照组(高、中、低多糖组小鼠体重下降百分比分别为:5.51%、7.31%、2.29%,辐射对照组小鼠体重下降百分比为8.14%)。在第7天小鼠的体重有所回升。(高、中、低多糖组小鼠第7天体重比第5天小鼠体重回升百分比分别为:4%、1.97%、5.84%。辐射对照组小鼠体重回升百分比为:4.1%)。实验结果表明,蕨麻多糖从一定程度上抑制了辐射损伤引起的体重的下降,并能促进机体的生长发育。实验结果见下表:
蕨麻多糖对小鼠体重的影响
NO. | 动物(只) | 剂量(mg/kg) | 体重(g) | ||
辐射前 | 辐射后5d | 辐射后7d | |||
正常对照组 | 8 | 0 | 38.8 | 38.6 | 38.4 |
高剂量多糖组 | 8 | 200 | 38.1 | 36 | 37.5 |
中剂量多糖组 | 8 | 100 | 39.4 | 37.25 | 38 |
低剂量多糖组 | 8 | 50 | 37.1 | 36.25 | 38.5 |
辐射对照组 | 8 | 0 | 38.1 | 35 | 36.5 |
本发明的特点是:
本发明在国内外众多的抗辐射制剂中,另辟蹊径,以蕨麻为原料,经过提取、脱蛋白、分离等制备的一种天然、能显著增强动物抗辐射能力的多糖,与其它抗辐射制剂相比抗辐射效果好、无毒副作用。
其次,原料充足,本制备方法提高了蕨麻的附加值,为蕨麻商业化动作开拓了一条新的渠道。
本发明具有收率高、工艺简单等优点。
附图说明
图1为蕨麻多糖对小鼠外周血白细胞的影响;
其中,横坐标为:时间(天);纵坐标为:白细胞数目;A为正常对照组,B为高剂量多糖组,C为中剂量多糖组,D为低剂量多糖组,E为辐射对照组。
图2为各组外周血白细胞数目的变化的比较;
其中,横坐标为组别:1为正常对照组,2为高剂量多糖组,3为中剂量多糖组,4为低剂量多糖组,5为辐射对照组;每个组中从左至右的三个长方体分别代表:辐射后第2天;辐射后第5天;辐射后第7天;纵坐标为:白细胞数目。
图3为蕨麻多糖对小鼠体重的影响;
其中,横坐标为:时间,a为辐射前,b为辐射后第5天,c为辐射后第7天。;纵坐标为:体重(克)。
具体实施方式
实施例1
本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤:
1)将蕨麻粉碎后过30目筛,加入到95%乙醇中,所述蕨麻与95%乙醇的配比关系是:1千克蕨麻加入到8升95%乙醇中;在75℃下搅拌提取2小时,进行脱脂;过滤,将残渣在70℃烘干得脱脂的蕨麻粉末;将已脱脂的蕨麻,在80℃温度下,加入到4倍体积的水中水浴提取2小时,重复2次,合并提取液;在转速为2000转/分的条件下,离心8分钟,留取上清液,得到物质A;
2)在温度为70℃,压力0.06MPa的条件下,将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4;在转速3500转/分的条件下,离心2分钟;在得到的上清液中加入3倍体积的无水乙醇,放置5小时;然后在转速3500转/分的条件下,离心4分钟,弃去上清液,留取沉淀物,得到物质B;
3)将物质B加入到12倍重量的水中溶解,在转速3000转/分的条件下,离心2分钟,弃去不溶物;所得上清液中加入3倍体积的无水乙醇,放置5小时;在转速3500转/分的条件下,离心4分钟,弃去上清液,留取沉淀物,重复本步骤的过程,直至沉淀物中检测不出淀粉为止;在温度为30℃,压力0.06MPa的条件下,将沉淀物真空干燥,制得物质C;
4)将物质C加入到7倍重量的水中溶解,在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白;所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是:100毫升物质C溶解液中加入5个活力单位木瓜蛋白酶;在45℃的条件下,放置8小时,离心除去部分蛋白;用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液,所述上清液与萃取液的体积比为3∶1,脱去残留蛋白,收集水层溶液,得到物质D;
5)在60℃的条件下,物质D中加入20%的H2O2,所述物质D与H2O2体积比为80∶1,振荡脱色,至溶液颜色为乳白色为止,得到物质E;
6)将物质E放入透析袋中透析30小时,所述透析袋截留分子量超过12000的分子;往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到75%,静置8小时,在3000转/分转速下,离心4分钟,收集沉淀;35℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
实施例2
本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤:
1)将蕨麻粉碎后过50目筛,加入到95%乙醇中,所述蕨麻与95%乙醇的配比关系是:1千克蕨麻加入到15升95%乙醇中;在85℃下搅拌提取4小时,进行脱脂;过滤,将残渣在90℃烘干得脱脂的蕨麻粉末;将已脱脂的蕨麻,在100℃温度下,加入到5倍体积的水中水浴提取4小时,重复4次,合并提取液;在转速为4000转/分的条件下,离心15分钟,留取上清液,得到物质A;
2)在温度为80℃,压力0.1MPa的条件下,将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/2;在转速4500转/分的条件下,离心5分钟;在得到的上清液中加入5倍体积的无水乙醇,放置7小时;然后在转速4500转/分的条件下,离心6分钟,弃去上清液,留取沉淀物,得到物质B;
3)将物质B加入到20倍重量的水中溶解,在转速5000转/分的条件下,离心4分钟,弃去不溶物;所得上清液中加入5倍体积的无水乙醇,放置7小时;在转速4500转/分的条件下,离心6分钟,弃去上清液,留取沉淀物,重复本步骤的过程,直至沉淀物中检测不出淀粉为止;在温度为50℃,压力0.1MPa的条件下,将沉淀物真空干燥,制得物质C;
4)将物质C加入到10倍重量的水中溶解,在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白;所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是:100毫升物质C溶解液中加入7个活力单位木瓜蛋白酶;在55℃,放置15小时,离心除去部分蛋白;用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液,所述上清液与萃取液的体积比为5∶1,脱去残留蛋白,收集水层溶液,得到物质D;
5)在60℃的条件下,物质D中加入20%的H2O2,所述物质D与H2O2体积比为130∶1,振荡脱色,至溶液颜色为乳白色为止,得到物质E;
6)将物质E放入透析袋中透析40小时,所述透析袋截留分子量超过12000的分子;往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到85%,静置12小时,在5000转/分转速下,离心6分钟,收集沉淀;45℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
实施例3
本发明一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法包括以下步骤:
1)将蕨麻粉碎后过40目筛,加入到95%乙醇中,所述蕨麻与95%乙醇的配比关系是:1千克蕨麻加入到10升95%乙醇中;在80℃下搅拌提取3小时,进行脱脂;过滤,将残渣在80℃烘干得脱脂的蕨麻粉末;将已脱脂的蕨麻,在90℃温度下,加入到4.5倍体积的水中水浴提取3小时,重复3次,合并提取液;在转速为3000转/分的条件下,离心10分钟,留取上清液,得到物质A;
2)在温度为75℃,压力0.08MPa的条件下,将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/3;在转速4000转/分的条件下,离心3.5分钟;在得到的上清液中加入4倍体积的无水乙醇,放置6小时;然后在转速4000转/分的条件下,离心5分钟,弃去上清液,留取沉淀物,得到物质B;
3)将物质B加入到15倍重量的水中溶解,在转速4000转/分的条件下,离心3分钟,弃去不溶物;所得上清液中加入4倍体积的无水乙醇,放置6小时;在转速4000转/分的条件下,离心5分钟,弃去上清液,留取沉淀物,重复本步骤的过程,直至沉淀物中检测不出淀粉为止;在温度为40℃,压力0.08MPa的条件下,将沉淀物真空干燥,制得物质C;
4)将物质C加入到8.5倍重量的水中溶解,在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白;所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是:100毫升物质C溶解液中加入6个活力单位木瓜蛋白酶;在50℃,放置10小时,离心除去部分蛋白;用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液,所述上清液与萃取液的体积比为4∶1,脱去残留蛋白,收集水层溶液,得到物质D;
5)在60℃的条件下,物质D中加入20%的H2O2,所述物质D与H2O2体积比为100∶1,振荡脱色,至溶液颜色为乳白色为止,得到物质E;
6)将物质E放入透析袋中透析36小时,所述透析袋截留分子量超过12000的分子;往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到80%,静置10小时,在4000转/分转速下,离心5分钟,收集沉淀;40℃真空干燥得纯天然蕨麻多糖。
用苯酚-硫酸法测定蕨麻多糖含量,经过步骤1~6后蕨麻多糖收率可达6.32%。
Claims (1)
1、一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
1)将蕨麻粉碎后过30~50目筛,加入到95%乙醇中,所述蕨麻与95%乙醇的配比关系是:1千克蕨麻加入到8~15升95%乙醇中;在75~85℃下搅拌提取2~4小时,进行脱脂;过滤,将残渣在70~90℃烘干得脱脂的蕨麻粉末;将已脱脂的蕨麻,在80~100℃温度下,加入到4~5倍体积的水中水浴提取2~4小时,重复2~4次,合并提取液;在转速为2000~4000转/分的条件下,离心8~15分钟,留取上清液,得到物质A;
2)在温度为70~80℃,压力0.06~0.1MPa的条件下,将物质A置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4~1/2;在转速3500~4500转/分的条件下,离心2~5分钟;在得到的上清液中加入3~5倍体积的无水乙醇,放置5~7小时;然后在转速3500~4500转/分的条件下,离心4~6分钟,弃去上清液,留取沉淀物,得到物质B;
3)将物质B加入到12~20倍重量的水中溶解,在转速3000~5000转/分的条件下,离心2~4分钟,弃去不溶物;所得上清液中加入3~5倍体积的无水乙醇,放置5~7小时;在转速3500~4500转/分的条件下,离心4~6分钟,弃去上清液,留取沉淀物,重复本步骤的过程,直至沉淀物中检测不出淀粉为止;在温度为30~50℃,压力0.06~0.1MPa的条件下,将沉淀物真空干燥,制得物质C;经过1、2、3步骤后物质C得率可达13.67%;
4)将物质C加入到7~10倍重量的水中溶解,在溶解液中加入木瓜蛋白酶进行脱蛋白;所述物质C溶解液与木瓜蛋白酶的配比关系是:100毫升物质C溶解液中加入5~7个活力单位木瓜蛋白酶;在45~55℃,放置8~15小时,离心除去部分蛋白;用体积比为4∶1的氯仿与正丁醇混合液萃取上清液,所述上清液与萃取液的体积比为3~5∶1,脱去残留蛋白,收集水层溶液,得到物质D;
5)在60℃的条件下,物质D中加入20%的H2O2,所述物质D与H2O2体积比为80~130∶1,振荡脱色,至溶液颜色为乳白色为止,得到物质E;
6)将物质E放入透析袋中透析30~40小时,所述透析袋截留分子量超过12000的分子;往透析袋中加入乙醇使乙醇体积含量达到75~85%,静置8~12小时,在3000~5000转/分转速下,离心4~6分钟,收集沉淀;35~45℃真空干燥,得纯天然蕨麻多糖。
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