CN107793492A - 一种火麻仁多糖的提取方法 - Google Patents
一种火麻仁多糖的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107793492A CN107793492A CN201711148224.7A CN201711148224A CN107793492A CN 107793492 A CN107793492 A CN 107793492A CN 201711148224 A CN201711148224 A CN 201711148224A CN 107793492 A CN107793492 A CN 107793492A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fructus cannabis
- polysaccharide
- parts
- extracting method
- degreasing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种火麻仁多糖的提取方法，通过先将火麻仁粉碎使用有机溶剂进行脱脂、用蒸馏水抽提火麻仁多糖、使用sevage法脱除火麻仁多糖中的蛋白质、再使用活性炭作为吸附剂脱色以及最终提纯等五个步骤，将火麻仁中的火麻仁多糖高效的提取。本发明中使用的提取方法，根据可溶性多糖溶于水，微溶于乙醇的特性，采用水提醇沉的方法对火麻仁进行多糖提取，大大简化了提取火麻仁多糖的步骤。因此，本发明具有如下有益效果：（1）火麻仁多糖提取过程简单；（2）提取效率高；（3）火麻仁多糖终产物纯度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种多糖的提取方法，尤其是涉及一种火麻仁多糖的提取方法。
背景技术
火麻仁是桑科中一年生草本植物大麻的成熟去壳的种子或干燥成熟果实，又名线麻子、麻子仁、大麻仁、大麻子等，主产于西南、华中等地，火麻仁具有利水通淋、活血之功以及润燥滑肠之功效，同时也是一味药食同源的中药原材料,在临床上广泛应用，常用于治疗高血压、疮癣、热淋、胃癌、风痹、便秘、痢疾、脚气、月经不调等等，但在其成分研究中，由于火麻仁的脂肪酸以及蛋白质含量相较于其他成分丰富所以目前研究主要局限于油脂类，蛋白类的研究。此外火麻仁中还含有火麻仁多糖，但由于其含量较少，提取相对困难，因此未发现对火麻仁多糖成分的研究相对较少，因此急需建立一种对火麻仁多糖提取方法尤为重要，为开发研究其降血压、降血脂、抗氧化、抗衰老、改善记忆力和养生保健等功效奠定基础。
例如一篇发表在《食品科技》上的文章《火麻种子中水溶性多糖的提取、分离和纯化》，其通过将火麻仁种子粉碎后用80%乙醇脱脂后用冷水抽提，然后经过胃蛋白酶酶解后，通过透析和冷冻干燥得到粗多糖，最终使用离子交换柱、琼脂糖凝胶以及葡糖糖凝胶对粗多糖进行分离纯化，得到精制多糖。但其介绍的方法也存在其不足之处，例如其脱脂过程中使用的是80%的乙醇，其脱脂效果较差。其除去多糖中的的蛋白质通过蛋白酶将其分解成小分子氨基酸，然后再通过透析出去小分子，再经过冷冻干燥等过程得到粗多糖，其过程繁琐，耗时时间久，效率低，无法有效的大规模提取火麻仁多糖。
发明内容
本发明是为了克服现有提取火麻仁多糖技术中脱脂效果差，提取过程繁琐，提取时间长效率低的问题，提供一种脱脂效果好，火麻仁多糖提取过程简单，提取时间短，提取效率高的一种火麻仁多糖的提取方法。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种火麻仁多糖的提取方法，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至200-400目，然后加入200-300份有机溶剂搅拌0.5-2小时进行脱脂，重复4-6次，离心过滤将滤渣用50-80份乙醇清洗3-4次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末 10份，加入200-600份蒸馏水，抽提2-5小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的5-15%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与20-30份Sevage试剂混合，充分震荡30-60分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）3-8次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入5-10份活性炭，置于摇床振摇2-5小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入100-200份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
本发明中采用的是水提醇沉的方法提取火麻仁多糖，无需使用透析等方式对火麻仁多糖，整体过程较为简单，减短了提取的时间，提高了提取效率。在脱蛋白工序中使用了sevage方法来对火麻仁多糖中的蛋白质进行脱除，条件简单，时间较短。
作为优选，所述的步骤（a）中的有机溶剂为乙醇和乙醚的混合液。乙醇乙醚混合液为极性有机溶剂，能够有效的对火麻仁中的油脂进行溶解，能够有效的将火麻仁中的油脂提除干净。
作为优选，所述的乙醇和乙醚的混合液中乙醇与乙醚的质量比为0.8-1.2：1-1.6。
作为优选，所述的步骤（b）中抽提温度为40-70℃。抽提过程中火麻仁多糖溶解到水中，升高抽提温度能够有效的加快火麻仁多糖的溶解速度，但由于火麻仁多糖在高温条件下容易变性，因此温度不宜过高，抽提温度为40-70℃时最为合适。
作为优选，所述的步骤（c）中Sevage试剂为氯仿正丁醇混合液，氯仿与正丁醇的体积比为3.5-5.5:1。
因此，本发明具有如下有益效果：（1）火麻仁多糖提取过程简单；（2）提取效率高；（3）火麻仁多糖终产物纯度高。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作以进一步描述说明。
如果无特殊说明，本发明的实施例中说采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1
一种火麻仁多糖的提取方法，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至200目，然后加入200份体积比为乙醇和乙醚0.8：1混合液搅拌0.5小时进行脱脂，重复4次，离心过滤将滤渣用50份乙醇清洗3次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末 10份，加入200份蒸馏水， 40℃下，抽提2小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的5%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与20份Sevage试剂混合，Sevage试剂中为氯仿与正丁醇的体积比为3.5:1，充分震荡30分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）3次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入5份活性炭，置于摇床振摇2小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入100份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
实施例2
一种火麻仁多糖的提取方法，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至400目，然后加入300份体积比为乙醇和乙醚的1.2： 1.6混合液搅拌2小时进行脱脂，重复6次，离心过滤将滤渣用80份乙醇清洗4次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末 10份，加入600份蒸馏水， 70℃下，抽提5小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的15%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与30份Sevage试剂混合，Sevage试剂中为氯仿与正丁醇的体积比为5.5:1，充分震荡60分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）8次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入10份活性炭，置于摇床振摇5小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入200份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
实施例3
一种火麻仁多糖的提取方法，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至300目，然后加入250份乙醇和乙醚体积比为1:1的混合液搅拌1小时进行脱脂，重复5次，离心过滤将滤渣用60份乙醇清洗4次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末 10份，加入500份蒸馏水，60℃下，抽提3小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的10%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与25份Sevage试剂混合，Sevage试剂中为氯仿与正丁醇的体积比为5:1，充分震荡45分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）7次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入8份活性炭，置于摇床振摇3小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入150份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
实施例4
一种火麻仁多糖的提取方法，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至400目，然后加入300份乙醇和乙醚体积比为1：1的混合液搅拌2小时进行脱脂，重复5次，离心过滤将滤渣用50份乙醇清洗3次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末 10份，加入300份蒸馏水，50℃下，抽提3小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的10%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与20-30份Sevage试剂混合，Sevage试剂中为氯仿与正丁醇的体积比为5.5:1，充分震荡30-60分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）6次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入8份活性炭，置于摇床振摇2小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入100份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
实施例5
一种火麻仁多糖的提取方法，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至400目，然后加入250份乙醇和乙醚体积比为1.2:1的混合液，搅拌1.5小时进行脱脂，重复4次，离心过滤将滤渣用70份乙醇清洗3次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末 10份，加入350份蒸馏水，60℃下，抽提4小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的8%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与25 份Sevage试剂混合，Sevage试剂中为氯仿与正丁醇的体积比为4:1，充分震荡45分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）6次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入9份活性炭，置于摇床振摇4小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入150份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
实施例1-5中所制得的火麻仁多糖经过GPC测试、红外测试以及产率测定，其结果附于表1
| 相对分子量 | 分子量分布 | 红外特征峰 | 产率 | |
| 实施例1 | 43562 | 1.52 | 559.6、1078.1、1127.1、1407.2、1558.4、1652.9、 2928.5、3423.5 | 20.6% |
| 实施例2 | 44525 | 1.48 | 562.3、1078.1、1127.1、1407.2、1560.5、1652.9、 2933.8、3423.8 | 22.3% |
| 实施例3 | 38692 | 1.29 | 559.6、1081.1、1127.1、1411.2、1563.4、1648.9、 2928.5、3422.3 | 21.1% |
| 实施例4 | 42382 | 1.45 | 564.6、1081.2、1127.1、1417.2、1558.4、1651.6、 2928.5、3420.5 | 19.2% |
| 实施例5 | 45632 | 1.50 | 563.5、1079.1、1127.1、1407.2、1561.3、1652.9、 2931.5、3423.5 | 20.2% |
Claims (5)
1.一种火麻仁多糖的提取方法，其特征是，所述提取方法如下：
（a）脱脂：取100份火麻仁去皮、破碎，研磨至200-400目，然后加入200-300份有机溶剂搅拌0.5-2小时进行脱脂，重复4-6次，离心过滤将滤渣用50-80份乙醇清洗3-4次，得到脱脂火麻仁粉末；
（b）抽提：取步骤（a）中得到的脱脂火麻仁粉末10份，加入200-600份蒸馏水，抽提2-5小时，离心过滤得到含火麻仁多糖的滤液，将滤液减压浓缩至原体积的5-15%，得到火麻仁多糖的浓缩液；
（c）脱蛋白：将100份步骤（b）中含火麻仁多糖的浓缩液与20-30份Sevage试剂混合，充分震荡30-60分钟，离心除去有机溶剂层与蛋白层，得到上层清液并重复步骤（c）3-8次，最终得到火麻仁多糖粗产品水溶液；
（d）脱色：在步骤（c）中得到的火麻仁多糖粗产品水溶液100份中加入5-10份活性炭，置于摇床振摇2-5小时，过滤得到无色滤液，然后一边搅拌一边向滤液中加入100-200份无水乙醇，过滤，滤饼用无水乙醇洗涤3次，真空干燥后得到火麻仁多糖粗产品；
（e）提纯：将步骤（d）中的火麻仁多糖粗产品经过Q-sepharose-F-F层析柱和凝胶柱对得到的粗多糖进行分离纯化，得到纯火麻仁多糖。
2.根据权利要求1所述的一种火麻仁多糖的提取方法，其特征是，所述的步骤（a）中的有机溶剂为乙醇和乙醚的混合液。
3.根据权利要求2所述的一种火麻仁多糖的提取方法，其特征是，所述的乙醇和乙醚的混合液中乙醇与乙醚的体积比为0.8-1.2：1-1.6。
4.根据权利要求1所述的一种火麻仁多糖的提取方法，其特征是，所述的步骤（b）中抽提温度为40-70℃。
5.根据权利要求1所述的一种火麻仁多糖的提取方法，其特征是，所述的步骤（c）中Sevage试剂为氯仿正丁醇混合液，氯仿与正丁醇的体积比为3.5-5.5:1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711148224.7A CN107793492A (zh) | 2017-11-17 | 2017-11-17 | 一种火麻仁多糖的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201711148224.7A CN107793492A (zh) | 2017-11-17 | 2017-11-17 | 一种火麻仁多糖的提取方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107793492A true CN107793492A (zh) | 2018-03-13 |
Family
ID=61536231
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201711148224.7A Pending CN107793492A (zh) | 2017-11-17 | 2017-11-17 | 一种火麻仁多糖的提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107793492A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110638018A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-03 | 黑龙江黑科科技有限责任公司 | 一种火麻蜂蜜粉的制备方法 |
| CN112568341A (zh) * | 2019-12-30 | 2021-03-30 | 河北华朗生物科技有限公司 | 一种双孢菇燕窝益生元复合饮料配方及其生产工艺 |
| CN114099570A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-01 | 南京晓庄学院 | 一种低损耗的火麻仁小分子提取物的制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1872883A (zh) * | 2006-06-27 | 2006-12-06 | 西北师范大学 | 一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法 |
| CN102838682A (zh) * | 2011-06-22 | 2012-12-26 | 吴梦云 | 马齿苋中多糖的提取工艺 |
| CN103040917A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-04-17 | 浙江农林大学 | 大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法及其用途 |
-
2017
- 2017-11-17 CN CN201711148224.7A patent/CN107793492A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1872883A (zh) * | 2006-06-27 | 2006-12-06 | 西北师范大学 | 一种抗辐射蕨麻多糖的制备方法 |
| CN102838682A (zh) * | 2011-06-22 | 2012-12-26 | 吴梦云 | 马齿苋中多糖的提取工艺 |
| CN103040917A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-04-17 | 浙江农林大学 | 大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法及其用途 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110638018A (zh) * | 2019-10-10 | 2020-01-03 | 黑龙江黑科科技有限责任公司 | 一种火麻蜂蜜粉的制备方法 |
| CN112568341A (zh) * | 2019-12-30 | 2021-03-30 | 河北华朗生物科技有限公司 | 一种双孢菇燕窝益生元复合饮料配方及其生产工艺 |
| CN114099570A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-01 | 南京晓庄学院 | 一种低损耗的火麻仁小分子提取物的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100503626C (zh) | 应用膜分离技术从肉苁蓉中生产含有苯乙醇苷的原料及其制备方法 | |
| CN108703989B (zh) | 一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法 | |
| CN108653417B (zh) | 一种黑果花楸的提取方法及其提取物 | |
| CN108047343B (zh) | 伊贝母总多糖的制备方法及其应用 | |
| CN104311676B (zh) | 一种从橡籽仁中提取食用淀粉并副产单宁酸的方法 | |
| CN102746412B (zh) | 一种苦瓜多糖的提取方法 | |
| CN102417546B (zh) | 一种玫瑰花粗多糖的提取方法 | |
| CN107793492A (zh) | 一种火麻仁多糖的提取方法 | |
| CN102106928B (zh) | 一种高纯度油茶皂苷的制备方法 | |
| WO2017005134A1 (zh) | 一种具有抗病毒和免疫活性的亚麻籽多糖的制备及其应用 | |
| WO2020093510A1 (zh) | 一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法 | |
| CN102746410A (zh) | 一种制备高含量葫芦巴胶的方法 | |
| CN1313479C (zh) | 利用海参加工废液制备海参皂甙的工艺方法 | |
| CN112480278A (zh) | 一种白及多糖及其提取方法 | |
| CN106748923B (zh) | 一种从黑蒜中提取蒜氨酸的方法 | |
| CN110066350A (zh) | 青钱柳多糖提取及青钱柳多糖固体饮料制备的方法 | |
| CN102070411A (zh) | 一种精制和厚朴酚的方法 | |
| CN101041675A (zh) | 一种地黄提取地黄寡糖、地黄多糖的方法 | |
| CN103923050A (zh) | 利用芦丁制备槲皮素的方法 | |
| WO2019184025A1 (zh) | 一种利用陈皮制备聚阿拉伯半乳糖醛酸的方法 | |
| CN108840961B (zh) | 一种桃胶多糖及其制备方法 | |
| CN112442136A (zh) | 一种银耳功能性成分的提取方法 | |
| CN106923350B (zh) | 一种用玉米须制备水溶性膳食纤维的方法 | |
| CN116023521A (zh) | 一种低分子量桑黄多糖及制备方法、应用 | |
| CN113694152B (zh) | 一种高稳定性酶解法获取薏苡仁提取液的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180313 |