CN112480278A - 一种白及多糖及其提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种白及多糖的提取方法。所述提取方法通过先将白及药材进行切片,再在酸中浸泡,干燥粉碎后制得白及粗粉,再利用混合溶剂对白及粗粉进行提取,提取后的药渣加水浸提,得到提取也加入淀粉酶酶解后经离子交换树脂洗脱,洗脱液经醇沉、洗涤、干燥后,制得白及多糖,纯度高,品质高,药效好;本发明所述方法,提取率高,提取率高达88%以上,提取得到白及多糖含量高达95%以上,方法合理,生产周期短,适合工业化大规模生产。
Description
技术领域
本发明属于药品技术领域,具体涉及一种白及多糖及其提取方法。
背景技术
白及(Bletilla striata)为兰科白及属多年生草本植物,是一种用药历史久远的中药。以干燥块茎入药,具有止血收敛、清热利湿和消肿生肌的功效,中国《本草纲目》有记载:“白及别名连及草,甘草,白给,其根白色,连及而生,故曰白及。白及含有大量的黏胶质,性苦、涩、甘,微寒,入归肺、肝、胃经,有收敛止血、清热湿、消肿生肌之功效。临床上广泛用于治疗咳血、吐血、疮疡肿毒、外伤出血、皮肤皴裂、肺结核咳血和溃疡病出血等,疗效显著。
白及的主要化学成分是联苄类、菲类及其衍生物,此外,还含有少量挥发油、黏液质、白及甘露聚糖以及淀粉和葡萄糖。现代研究分析表明,白及中含有大量的植物性多糖,在干燥的鳞茎组织中含量约为40-50%,这些多糖主要由β-1,4-甘露糖、β-1,4-葡萄糖和β-1,6-葡萄糖残基组成,属中性杂多糖,其主要成分为葡甘聚糖,其甘露糖和葡萄糖两种糖基的比例约为4:1。白及多糖作为天然高分子材料,具有较高的黏度,是一种优良的天然增稠剂和乳化稳定剂,白及多糖具有功能缓释、局部滞留性、自身可降解性、无刺激、无毒副作用,因其良好的生物相容性和可降解性,在药用制备过程中越来越受到重视,可用作各种形式的载药敷料及生物修复材料。主要有作为药物载体,白及多糖属天然小分子聚合物,可作为微囊的囊材,栓剂的基质、片剂的粘合剂、糖衣片的隔离层材料、膜剂成膜材料,也可以作为医用耦合剂,此外还开发了以白及多糖为主要原料的代血浆制品。白及多糖因其独特的性能,又具有较高的安全性,可作为食品添加剂,在食品工业中有广泛的应用,利用白及多糖优良的成膜性,可制备水果涂膜的保鲜剂,可以减少水果水分挥发,抑制采摘后呼吸,以达到延长保险的目的。
然而,现有技术中白及多糖的提取方法,提取率比较低,提取得到白及多糖的纯度低,品质低。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题,本发明提供了一种白及多糖及其提取方法。本发明所述方法,提取率高,提取率高达88%以上,提取得到白及多糖含量高达95%以上,制得白及多糖的纯度高,品质高,药效好。
本发明所采用的技术方案为:
一种白及多糖的提取方法,包括以下步骤:
(1)取白及药材进行切片,得到白及切片;将所述白及切片在酸液中浸泡后,取出进行干燥,粉碎,制得白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入混合溶剂,加热条件下进行回流提取,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂除去,向药渣中加水进行加热浸提,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入淀粉酶,进行酶解处理后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液进行超滤,得到滤液,将所述滤液通过离子交换树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩后,加入乙醇进行醇沉后,收集沉淀,所述沉淀依次经过滤、洗涤、干燥后,即得所述白及多糖。
步骤(1)中,所述白及药材为白及块茎;进行切片时,沿着所述白及块茎生长的高度方向进行纵切。
步骤(1)中,所述酸液为摩尔浓度为6-12mol/L的盐酸溶液;
所述浸泡处理的时间为2-4h;
所述干燥为冷冻干燥,所述白及粗粉的粒径为0.5-2mm。
步骤(2)中,所述混合溶剂为乙醇和石油醚按照体积比1-4:1-4组成的混合溶剂;
所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为2:1-8:1;
进行加热回流提取时的加热温度为60-80℃,进行回流提取的时间为2-6h。
步骤(3)中,所述药渣中的溶剂采用旋蒸除去;
所述药渣与加入水的质量之比为1:8-1:16,进行所述浸提的温度为80-100℃,进行所述浸提的时间为4-8h。
步骤(4)中,所述淀粉酶的添加质量占所述提取液质量的3-8%。
步骤(4)中,酶解处理的温度为30-50℃,酶解处理的时间为2-8h。
步骤(5)中,所述超滤采用的超滤膜的孔径为0.001-0.02μm;
所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂进行洗脱。
步骤(6)中,所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.1-1.5;
进行醇沉时,加入所述乙醇的体积浓度为90-95%,加入乙醇至含醇量为35-65%,所述醇沉的时间为8-12h。
步骤(6)中,采用乙醇对沉淀进行洗涤,所述干燥为冷冻干燥。
所述方法提取得到的白及多糖。
本发明所述白及多糖的提取方法,通过先将白及切片浸入酸液,再经粉碎后,采用混合溶剂进行提取,能有效提高白及多糖的提取率;之后先加入淀粉酶进行酶解,再进行超滤和离子交换,洗脱后,经洗涤、干燥制得白及多糖纯度高,品质高。
进一步,本申请发明人在长期研究中发现,对白及块茎进行切片时,切片方式会对白及多糖的提取率产生影响。沿着白及块茎生长的高度方向进行纵切,有利于获得较高的白及多糖提取率,而如果是沿垂直白及块茎生长的方向进行横切,则获得的白及多糖提取率会有所降低。原因在于,纵切能够最大程度保留白及多糖的三维结构不被破坏,确保提取效果,而横切更容易破坏白及多糖的三维结构,影响提取效果。
本发明的有益效果为:
本发明提供的白及多糖的提取方法,通过先将白及药材进行切片,再在酸中浸泡,干燥粉碎后制得白及粗粉,再利用混合溶剂对白及粗粉进行提取,提取后的药渣加水浸提,得到提取也加入淀粉酶酶解后经离子交换树脂洗脱,洗脱液经醇沉、洗涤、干燥后,制得白及多糖,纯度高,品质高,药效好;本发明所述方法,提取率高,提取率高达88%以上,提取得到白及多糖含量高达95%以上,方法合理,生产周期短,适合工业化大规模生产。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式,都属于本发明所保护的范围。
下面实施例中以1重量份代表100g。下述实施例和对比例中采用的原料,除特定说明之外,其他原料均为市售产品。
实施例1
本实施例提供一种白及多糖的提取方法,包括以下步骤:
(1)取白及块茎,沿着垂直于白及块茎生长高度的方向进行横切(切割方向与块茎高度生长方向垂直),得到白及切片;将所述白及切片在摩尔浓度6mol/L的盐酸溶液中浸泡处理4h后,取出进行冷冻干燥,粉碎,制得粒径为0.5mm的白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入乙醇和石油醚按照体积比1:4组成的混合溶剂,所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为2:1,之后在60℃加热条件下进行回流提取6h,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂采用旋转蒸发仪进行旋蒸除去,向药渣中加8-16倍质量水在80℃进行加热浸提8h,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入占提取液质量3%的淀粉酶,在30℃进行酶解处理8h后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液采用孔径为0.001μm的超滤膜进行超滤,得到滤液,将所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.1,加入体积浓度90%乙醇至含醇量为35wt%,进行醇沉12h后,收集沉淀,所述沉淀经过滤后,采用乙醇对沉淀进行洗涤,之后冷冻干燥,即得所述白及多糖。
实施例2
本实施例提供一种白及多糖的提取方法,包括以下步骤:
(1)取白及块茎,沿着所述白及块茎生长的高度方向进行纵切(切割方向与块茎高度生长方向相同),得到白及切片;将所述白及切片在摩尔浓度为12mol/L的盐酸溶液中浸泡处理2h后,取出进行冷冻干燥,粉碎,制得粒径为2mm的白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入乙醇和石油醚按照体积比4:1组成的混合溶剂,所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为8:1,之后在80℃加热条件下进行回流提取2h,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂采用旋转蒸发仪进行旋蒸除去,向药渣中加16倍质量水在100℃进行加热浸提4h,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入占提取液质量8%的淀粉酶,在50℃进行酶解处理2h后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液采用孔径为0.02μm的超滤膜进行超滤,得到滤液,将所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.5,加入体积浓度95%乙醇至含醇量为65wt%,进行醇沉8h后,收集沉淀,所述沉淀经过滤后,采用乙醇对沉淀进行洗涤,之后冷冻干燥,即得所述白及多糖。
实施例3
本实施例提供一种白及多糖的提取方法,包括以下步骤:
(1)取白及块茎,沿着所述白及块茎生长的高度方向进行纵切(切割方向与块茎高度生长方向相同),得到白及切片;将所述白及切片在摩尔浓度为9mol/L的盐酸溶液中浸泡处理3h后,取出进行冷冻干燥,粉碎,制得粒径为1.2mm的白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入乙醇和石油醚按照体积比1:1组成的混合溶剂,所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为5:1,之后在70℃加热条件下进行回流提取4h,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂采用旋转蒸发仪进行旋蒸除去,向药渣中加12倍质量水在90℃进行加热浸提6h,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入占提取液质量5%的淀粉酶,在40℃进行酶解处理2-8h后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液采用孔径为0.01μm的超滤膜进行超滤,得到滤液,将所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.3,加入体积浓度92%乙醇至含醇量为48wt%,进行醇沉10h后,收集沉淀,所述沉淀经过滤后,采用乙醇对沉淀进行洗涤,之后冷冻干燥,即得所述白及多糖。
实施例4
本实施例提供一种白及多糖的提取方法,包括以下步骤:
(1)取白及块茎,沿着所述白及块茎生长的高度方向进行纵切(切割方向与块茎高度生长方向相同),得到白及切片;将所述白及切片在摩尔浓度为8mol/L的盐酸溶液中浸泡处理4h后,取出进行冷冻干燥,粉碎,制得粒径为1mm的白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入乙醇和石油醚按照体积比1:2组成的混合溶剂,所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为4:1,之后在65℃加热条件下进行回流提取5h,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂采用旋转蒸发仪进行旋蒸除去,向药渣中加10倍质量水在85℃进行加热浸提7h,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入占提取液质量4%的淀粉酶,在35℃进行酶解处理6h后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液采用孔径为0.005μm的超滤膜进行超滤,得到滤液,将所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.2,加入体积浓度92%乙醇至含醇量为45wt%,进行醇沉9h后,收集沉淀,所述沉淀经过滤后,采用乙醇对沉淀进行洗涤,之后冷冻干燥,即得所述白及多糖。
实施例5
本实施例提供一种白及多糖的提取方法,包括以下步骤:
(1)取白及块茎,沿着所述白及块茎生长的高度方向进行纵切(切割方向与块茎高度生长方向相同),得到白及切片;将所述白及切片在摩尔浓度为10mol/L的盐酸溶液中浸泡处理2h后,取出进行冷冻干燥,粉碎,制得粒径为1.5mm的白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入乙醇和石油醚按照体积比2:1组成的混合溶剂,所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为6:1,之后在75℃加热条件下进行回流提取3h,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂采用旋转蒸发仪进行旋蒸除去,向药渣中加14倍质量水在95℃进行加热浸提5h,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入占提取液质量6%的淀粉酶,在45℃进行酶解处理4h后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液采用孔径为0.012μm的超滤膜进行超滤,得到滤液,将所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.4,加入体积浓度94%乙醇至含醇量为55wt%,进行醇沉9h后,收集沉淀,所述沉淀经过滤后,采用乙醇对沉淀进行洗涤,之后冷冻干燥,即得所述白及多糖。
对比例1
本对比例提供的白及多糖的提取方法,与实施例3的区别仅在于,步骤(1)中,白及药材不在酸液中浸泡,就直接进行干燥后粉碎,制得白及粗粉;其他操作均与实施例3相同。
对比例2
本对比例提供的白及多糖的提取方法,与实施例3的区别仅在于,步骤(2)中,向白及粗粉中加入乙醇(与混合溶剂用量相同)进行回流提取,其他操作均与实施例3相同。
对比例3
本对比例提供的白及多糖的提取方法,与实施例3的区别仅在于,不包括步骤(4)的酶解处理过程,将步骤(3)得到的提取液直接进行步骤(5)中的超滤以及后续操作,其他操作均与实施例3相同。
对比例4
本对比例提供的白及多糖的提取方法,与实施例3的区别仅在于,不包括步骤(5)的处理过程,将步骤(4)得到的酶解液直接进行步骤(6)的浓缩,以及醇沉等后续操作,其他操作均与实施例3相同。
实验例
1、纯度和收率比较
对实施例1-5和对比例1-4所述方法提取得到的白及多糖的纯度和提取率进行比较,结果如表1所示。
表1-不同方法提取白及多糖的纯度和提取率的比较结果
样品 | 提取率(%) | 纯度(%) | 颜色 |
实施例1 | 88 | 95.2 | 白色 |
实施例2 | 89 | 95.8 | 白色 |
实施例3 | 92 | 97.6 | 白色 |
实施例4 | 89 | 96.2 | 白色 |
实施例5 | 90 | 96.1 | 白色 |
对比例1 | 83 | 65.4 | 浅黄 |
对比例2 | 82 | 63.5 | 浅黄 |
对比例3 | 81 | 64.3 | 浅黄 |
对比例4 | 84 | 62.8 | 浅黄 |
从表1可以看出,本发明实施例1-5所述方法提取白及多糖的提取率高,纯度高,尤其是以实施例3所述方法提取白及多糖的提取率和纯度最好,而对比例1-4方法提取白及多糖的效果并不理想,从而说明本发明所述提取方法,通过各步骤的条件参数的控制才能发挥理性效果。
2、粘度和止血性能进行检测
对实施例1-5和对比例1-4所述方法提取得到的白及多糖的粘度和止血性能进行检测,结果如表2所示。
具体操作为:
称取灭菌后的实施例1-5和对比例1-4所述方法制得的白及多糖各20g,分别加入50-60℃灭菌注射用水40ml,搅拌使其充分溶解,放置50ml,超声除去其中气泡,即得凝胶状的白及多糖。
粘度:将上述各凝胶状的白及多糖使用布鲁克菲尔德(Brookfield)粘度计进行粘度试验。
止血性能:使用活化部分凝血活酶时间测定试剂盒对白及多糖的血液凝固时间进行检测。具体为:将0.1ml的血浆放入测试管,并在37℃条件下培养2分钟之后,添加0.1ml的活化部分凝血酶原时间试剂(aPPT),在37℃条件下培养3分钟。放入0.1ml的实施例1-5、对比例1-4所得的白及多糖的凝胶,在10分钟内测定凝固时间,结果如表2所示。
表2-不同方法制得白及多糖的粘度和止血性能检测结果
样品 | 粘度(cP) | 止血反应时间(min) |
实施例1 | 27448 | 2.1 |
实施例2 | 27456 | 2.0 |
实施例3 | 29663 | 1.6 |
实施例4 | 28536 | 1.9 |
实施例5 | 28496 | 1.8 |
对比例1 | 24829 | 3.5 |
对比例2 | 24435 | 3.8 |
对比例3 | 24528 | 3.6 |
对比例4 | 24182 | 3.9 |
从表2可以看出,本发明实施例1-5所述白及多糖的粘度和止血性能比较好,尤其是以实施例3所述方法提取得到白及多糖的粘度和止血性能最好,而对比例1-4的方法提取得到白及多糖的粘度和止血性能比较差,从而说明本发明方法提取得到白及多糖的粘度和止血性能更好。
本发明不局限于上述最佳实施方式,任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品,但不论在其形状或结构上作任何变化,凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案,均落在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种白及多糖的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取白及药材进行切片,得到白及切片;将所述白及切片在酸液中浸泡后,取出进行干燥,粉碎,制得白及粗粉;
(2)向所述白及粗粉中加入混合溶剂,加热条件下进行回流提取,提取完成后,过滤,收集药渣;
(3)将药渣中的溶剂除去,向药渣中加水进行加热浸提,得到提取液;
(4)向所述提取液中加入淀粉酶,进行酶解处理后,得到酶解液;
(5)将所述酶解液进行超滤,得到滤液,将所述滤液通过离子交换树脂,并用去离子水洗脱,收集洗脱液;
(6)将所述洗脱液进行浓缩后,加入乙醇进行醇沉后,收集沉淀,所述沉淀依次经过滤、洗涤、干燥后,即得所述白及多糖。
2.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(1)中,所述白及药材为白及块茎;进行切片时,沿着所述白及块茎生长的高度方向进行纵切。
3.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(1)中,所述酸液为摩尔浓度为6-12mol/L的盐酸溶液;
所述浸泡处理的时间为2-4h;
所述干燥为冷冻干燥,所述白及粗粉的粒径为0.5-2mm。
4.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(2)中,所述混合溶剂为乙醇和石油醚按照体积比1-4:1-4组成的混合溶剂;
所述混合溶剂与所述白及粗粉的质量比为2:1-8:1;
进行加热回流提取时的加热温度为60-80℃,进行回流提取的时间为2-6h。
5.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(3)中,所述药渣中的溶剂采用旋蒸除去;
所述药渣与加入水的质量之比为1:8-1:16,进行所述浸提的温度为80-100℃,进行所述浸提的时间为4-8h。
6.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(4)中,所述淀粉酶的添加质量占所述提取液质量的3-8%;
步骤(4)中,酶解处理的温度为30-50℃,酶解处理的时间为2-8h。
7.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(5)中,所述超滤采用的超滤膜的孔径为0.001-0.02μm;
所述滤液先后通过大孔型弱碱性阴离子树脂和大孔型弱酸性阳离子树脂进行洗脱。
8.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(6)中,所述洗脱液进行浓缩至相对密度为1.1-1.5;
进行醇沉时,加入所述乙醇的体积浓度为90-95%,加入乙醇至含醇量为35-65%,所述醇沉的时间为8-12h。
9.根据权利要求1所述的白及多糖的提取方法,其特征在于,步骤(6)中,采用乙醇对沉淀进行洗涤,所述干燥为冷冻干燥。
10.权利要求1-9任一项所述方法提取得到的白及多糖。
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