CN115594773A - 一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用 - Google Patents
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115594773A CN115594773A CN202211160659.4A CN202211160659A CN115594773A CN 115594773 A CN115594773 A CN 115594773A CN 202211160659 A CN202211160659 A CN 202211160659A CN 115594773 A CN115594773 A CN 115594773A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- solution
- eucommia ulmoides
- leaves
- precipitate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 91
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 91
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 91
- 241000208689 Eucommia ulmoides Species 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 93
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 70
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 46
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 38
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 229960001231 choline Drugs 0.000 claims abstract description 35
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 claims abstract description 33
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004821 distillation Methods 0.000 claims abstract description 10
- QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K potassium citrate (anhydrous) Chemical class [K+].[K+].[K+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O QEEAPRPFLLJWCF-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000208688 Eucommia Species 0.000 claims description 35
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- NAVWVHRQSDHCHD-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;potassium Chemical class [K].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O NAVWVHRQSDHCHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 claims description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 13
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 8
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Substances OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 3
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 3
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 2
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 239000012296 anti-solvent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 1
- 238000011034 membrane dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000008560 physiological behavior Effects 0.000 description 1
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000007614 solvation Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/46—Eucommiaceae (Eucommia family), e.g. hardy rubber tree
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及中药提取技术领域，公开了一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用，包括以下步骤：1)将干杜仲叶粉碎过筛，加入胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡得到浸泡液；2)对1)的制得的浸泡液超声，离心，取上清液，加入饱和柠檬酸钾溶液，静置至分层，取上层液稀释，冰箱冷藏过夜，二次离心，收集沉淀并用乙醇洗涤；3)用水溶解2)制备的沉淀，透析得到透析滞留液；4)将3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩，加入乙醇沉淀出多糖，真空干燥。本发明通过超声释放多糖，并用胆碱水杨酸离子液体溶液配合透析提升多糖纯度，多糖得率为2.28％～4.11％，多糖纯度为45.16％～59.46％。
Description
技术领域
本发明涉及中药提取技术领域，尤其涉及一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用。
背景技术
多糖是一种广泛存在的生物大分子，由相同或不同的单糖和糖醛酸通过糖苷键凝聚而成，是所有生物的基本成分。多糖广泛分布于植物、动物和真菌中，不仅用于储存能量，而且也是作为生命活动的重要因素，与生命的许多生理行为密切相关；含有丰富多糖的杜仲叶提取物由于其抗氧化活性和免疫调节作用，近年来作为一种药物成分被广泛研究；传统的多糖提取分离方法主要采用热水技术和碱液提法，但前者提取时间较长，效率较低、能耗较高，温度过高还会引起生物活性的降低，后者在pH较高的条件下使多糖降解，同时还会降低产品品质，比如色泽加深等；因此，探索一种能耗低、时间短、工艺简单、生物兼容性好的杜仲叶多糖提取分离方法对杜仲叶资源的增值利用尤为重要。
中国现有专利CN107970270A公开了一种从杜仲叶中分步提取总黄酮和多糖的方法，将杜仲叶干燥、粉碎、过筛，以乙醇水溶液为溶剂，磁力搅拌、加热回流或微波加热提取总黄酮，采用离心或抽滤进行液-固分离，得到杜仲叶一次固体残渣和总黄酮初提液；取干燥后的杜仲叶一次固体残渣，以水为溶剂，预浸泡后，采用超声波或微波方式提取多糖，将提取液离心或抽滤进行液-固分离，得到杜仲叶二次固体残渣和多糖上清液；二次固体残渣用来做饲料或肥料；所得多糖纯度2.01％，得率0.07％，多糖还可以进一步提纯并且得率进一步提高。
发明内容
根据现有技术从杜仲叶中提取多糖的工艺经过改良后还能进一步提升得率的情况，本发明提供一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，提取出来的多糖得率高达3.93％，相较现有技术翻倍；本发明还提供一种由多糖得率高的杜仲叶提取方法提取的杜仲叶提取物，具有多糖纯度高、得率高的优点；本发明还提供一种由多糖得率高的杜仲叶提取方法提取的杜仲叶提取物制备的食品、保健品、药品和饲料中的一种，所含多糖含量高，效果好。
本发明以以下技术方案实现：
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过筛，加入胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡得到浸泡液；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，离心，取上清液，加入饱和柠檬酸钾溶液，静置至分层，取上层液稀释，冰箱冷藏过夜，二次离心，收集沉淀并用乙醇洗涤；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，加入乙醇沉淀出多糖，真空干燥。
超声辅助胆碱水杨酸离子液体溶液提取是超声波在液体溶剂中的空化效应、机械效应和热效应可以加速扩散并增强传质，能将已粉碎的干杜仲叶进一步破碎释放多糖，同时胆碱水杨酸离子液体溶液作为一种新型溶剂具有挥发性低、高溶剂化的特点，对细胞壁中的木质素、纤维素都有一定的溶解能力，因此可以促进活性物质的溶出，同时又因酸性较弱，不易与多糖反应；胆碱水杨酸离子液体溶液-柠檬酸鉀盐双水相体系具有分相迅速、操作简便，体系绿色、具有很好的生物兼容性，因此能很好地保持多糖产品的抗氧化活性，且分离后的离子液体溶液和盐溶液都可以重复使用；透析纯化技术通过半透膜的孔径大小截留大分子、去除小分子杂质而达到纯化多糖的目的，透析袋可以重复使用，绿色环保。
优选的，所述步骤1)中干杜仲叶粉碎后过80～150目筛；胆碱水杨酸离子液体溶液的质量浓度为40％。
优选的，所述干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为 1g:10～30mL，浸泡时间为45min～1.5h。
优选的，所述步骤2)中超声带有恒温循环控制仪，超声功率为 200～600W，时间为30～120min，温度设为30-60℃；离心时间为 8～15min，速度为4000rpm。
优选的，步骤2)中所述上清液与饱和柠檬酸鉀溶液的体积比为 1:1～3，静置时间为3～4h；上层液浓度稀释一倍，冷藏温度为4℃。
优选的所述二次离心时间为18～25min，速度为12000rpm；沉淀洗涤2～3次。
优选的，所述步骤3)中的透析所用的透析袋的截留分子量为 8000～12000。
优选的，所述步骤4)中所述透析滞留液浓缩后的体积为未浓缩时的10～15％。
优选的，所述乙醇体积为所述浓缩液的2.5～3.5倍；真空干燥温度为45～55℃，时间为2d。
一种由上述提取方法制备的杜仲叶提取物。
一种由上述提取方法制备的杜仲叶提取物制备的食品、保健品、药品和饲料中的一种。
从杜仲叶中提取的多糖有较好的提升免疫力，护肝护肾的作用，并能有效抵抗氧自由基，有一定的抗衰老作用，因而做成食品、保健品、药品或动物饲料，对人和动物的基础身体素质有促进作用。
本发明的有益效果：
(1)利用超声辅助胆碱水杨酸离子液体溶液从杜仲叶中提取多糖，降低提取温度至30-60℃，保持了多糖的抗氧化活性；单次提取时间缩短为60～90min，单次提取多糖得率在3％-5％，大大改善了提取效率。
(2)以胆碱水杨酸离子液体溶液-柠檬酸鉀盐双水相体系分离多糖，多糖大部分分配在上层液中，用水作为抗溶剂稀释后的上层液借助降温和高速离心沉淀出多糖；胆碱水杨酸离子液体溶液-柠檬酸鉀盐双水相体系比较温和、选择性强，分相迅速，操作简便，分离出的粗多糖纯度和抗氧化活性能稳定保持在较高的程度。
(3)透析袋纯化技术通过半透膜的孔径大小截留大分子、去除小分子杂质而达到纯化多糖的目的，因此本发明方法最后得到的杜仲叶提取物中的多糖有较高的纯度。
(4)本发明方法对工艺设备及操作环境无过严要求，工艺相对简单，投资成本相对较低。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液本溶液的固液比为1g:15mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为200W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
实施例2
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:15mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为400W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
实施例3
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:15mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为600W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
实施例4
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:10mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为600W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
实施例5
一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:20mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为600W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
对比例1
一种杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:15mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
对比例2
一种杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:15mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为600W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，将所得溶剂装入截留分子量8000-12000的透析袋，浸入蒸馏水中透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，浓缩液体积为浓缩之前的10％，加入浓缩液体积3倍的乙醇沉淀出多糖，50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
对比例3
一种杜仲叶提取方法，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过100目筛，取10g加入质量浓度为40％的胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡1h得到浸泡液，干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:15mL；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，超声功率为600W，时间为90min，温度设为50℃，4000rpm离心10min，取上清液，加入上清液体积2倍的饱和柠檬酸钾溶液，静置4h，取上层液稀释一倍，冰箱4℃冷藏过夜，二次离心，12000rpm，20min，收集沉淀并用乙醇洗涤2～3次；
步骤3)将步骤2)制备的沉淀用50℃真空干燥48h，取出称重，并进行多糖纯度和得率的测定。
各实施例和对比例的多糖得率和纯度的检测，并总结数据成表1 所示：
1)葡萄糖标准曲线的制定：精确称取葡萄糖标准品10.3mg置于 50ml的容量瓶中，用水定容。精密吸取上述标准液0、325、650、975、 1300、1625μL置于比色管中(相当于质量为0、65、130、195、260、 325μg)，分别补加水至2.0mL，再加入5％苯酚溶液1.0mL，混匀，然后于冰浴上加入浓硫酸10.0mL，混匀后置沸水浴中加热20min，取出冷却至室温，于波长485nm处用紫外可见分光光度计测定吸光度。以吸光值为纵坐标,葡萄糖含量为横坐标绘制标准曲线；根据上述点绘制葡萄糖浓度标准曲线，吸光值和标准溶液浓度的拟合方程为y＝0.0632x+0.1013(R2＝0.9981)，说明在该葡萄糖浓度标准曲线的浓度范围内线性拟合良好；
2)多糖的测定：称取0.1060g多糖样品经蒸馏水溶解后定容至10 ml。精密吸取上述多糖样品溶液500ul置于比色管中，补加水至2.0mL，再加入5％苯酚溶液1.0mL，混匀，然后于冰浴上加入浓硫酸10.0mL，混匀后置沸水浴中加热20min，取出冷却至室温，于波长485nm处用紫外可见分光光度计测定吸光度。其中待测样品溶液多糖的浓度为C (mg/mL)；V为待测样品液的体积(mL)；n为样品液的稀释倍数；m为杜仲叶粉的质量(g)多糖得率的计算公式如下：
表1多糖的纯度和得率数据
由表1可见实施例1～5都有较好的得率和纯度，其中效果最好的是胆碱水杨酸离子液体溶液加入量最高的实施例5，同时有优秀的多糖纯度和得率，而实施例3由于超声功率为600W，降低了多糖得率和纯度，而超声功率为200W的实施例1的得率较实施例5明显下降，纯度比实施例5稍高，可见超声功率影响到多糖从杜仲叶中的释放；实施例2与实施例4比较，胆碱水杨酸加入量较高，多糖得率也明显提升，可见胆碱水杨酸也促进了多糖从杜仲叶中释放的作用；对比例 1省去了超声，虽然多糖纯度不受影响，但由于杜仲叶破坏程度不够，多糖释放明显降低，减少了多糖得率；对比例2未采用饱和柠檬酸鉀与胆碱水杨酸形成双水相体系，虽然杜仲叶经过超声充分破碎后多糖得率不受影响，但纯度却严重下降；对比例3未采用的膜透析，同样造成多糖纯度的严重下降，混入的杂质过多。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1)将干杜仲叶粉碎过筛，加入胆碱水杨酸离子液体溶液中浸泡得到浸泡液；
步骤2)对步骤1)的制得的浸泡液超声，离心，取上清液，加入饱和柠檬酸钾溶液，静置至分层，取上层液稀释，冰箱冷藏过夜，二次离心，收集沉淀并用乙醇洗涤；
步骤3)用水溶解步骤2)制备的沉淀，透析得到透析滞留液；
步骤4)将步骤3)制备的透析滞留液通过减压蒸馏浓缩得到浓缩液，加入乙醇沉淀出多糖，真空干燥。
2.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，所述步骤1)中干杜仲叶粉碎后过80～150目筛；胆碱水杨酸离子液体溶液的质量浓度为40％。
3.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，步骤1)中所述干杜仲叶与胆碱水杨酸离子液体溶液的固液比为1g:10～30mL，浸泡时间为45min～1.5h。
4.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，所述步骤2)中超声带有恒温循环控制仪，超声功率为200～600W，时间为30～120min，温度设为30-60℃；离心时间为8～15min，速度为4000rpm。
5.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，步骤2)中所述上清液与饱和柠檬酸鉀溶液的体积比为1:1～3，静置时间为3～4h；上层液浓度稀释一倍，冷藏温度为4℃。
6.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，步骤2)中所述二次离心时间为18～25min，速度为12000rpm；沉淀洗涤2～3次。
7.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，所述步骤3)中的透析所用的透析袋的截留分子量为8000～12000。
8.根据权利要求1所述的一种多糖得率高的杜仲叶提取方法，其特征在于，所述步骤4)中所述透析滞留液浓缩后的体积为未浓缩时的10～15％；所述乙醇体积为所述浓缩液的2.5～3.5倍；真空干燥温度为45～55℃，时间为2d。
9.一种由权利要求1～8任一所述的提取方法提取的杜仲叶提取物。
10.一种由权利要求9所述的杜仲叶提取物在制备食品、保健品、药品和饲料上的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211160659.4A CN115594773A (zh) | 2022-09-22 | 2022-09-22 | 一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211160659.4A CN115594773A (zh) | 2022-09-22 | 2022-09-22 | 一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115594773A true CN115594773A (zh) | 2023-01-13 |
Family
ID=84845518
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211160659.4A Pending CN115594773A (zh) | 2022-09-22 | 2022-09-22 | 一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115594773A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116284483A (zh) * | 2023-03-24 | 2023-06-23 | 中国药科大学 | 一种低频极化电场辅助提取杜仲叶多糖的方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101260051A (zh) * | 2008-04-24 | 2008-09-10 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种可生物降解的胆碱类离子液体 |
| CN104861082A (zh) * | 2015-06-03 | 2015-08-26 | 江苏大学 | 一种利用胆碱离子液双水相体系分离多糖和蛋白质的方法 |
| CN105384665A (zh) * | 2015-10-13 | 2016-03-09 | 华南理工大学 | 胆碱离子液体及其在小麦秸秆预处理中的应用 |
| CN107629140A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-01-26 | 李辉 | 一种离子液体双水相体系提取商陆多糖的方法 |
| CN108102003A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-06-01 | 浦江县美泽生物科技有限公司 | 具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法 |
| CN110483651A (zh) * | 2018-03-09 | 2019-11-22 | 浦江县昂宝生物技术有限公司 | 美洲帘蛤多糖的制备方法 |
| CN110664863A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-10 | 黔南民族师范学院 | 一种基于杜仲叶活性物提取与分离于一体的三相分配方法 |
| CN111281928A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-06-16 | 中科萱嘉医养(珠海)健康科技有限公司 | 一种胆碱类低共熔溶剂的制备方法及其在提取黄酮类化合物中的应用 |
-
2022
- 2022-09-22 CN CN202211160659.4A patent/CN115594773A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101260051A (zh) * | 2008-04-24 | 2008-09-10 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种可生物降解的胆碱类离子液体 |
| CN104861082A (zh) * | 2015-06-03 | 2015-08-26 | 江苏大学 | 一种利用胆碱离子液双水相体系分离多糖和蛋白质的方法 |
| CN105384665A (zh) * | 2015-10-13 | 2016-03-09 | 华南理工大学 | 胆碱离子液体及其在小麦秸秆预处理中的应用 |
| CN107629140A (zh) * | 2017-11-13 | 2018-01-26 | 李辉 | 一种离子液体双水相体系提取商陆多糖的方法 |
| CN108102003A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-06-01 | 浦江县美泽生物科技有限公司 | 具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法 |
| CN110483651A (zh) * | 2018-03-09 | 2019-11-22 | 浦江县昂宝生物技术有限公司 | 美洲帘蛤多糖的制备方法 |
| CN110664863A (zh) * | 2019-11-12 | 2020-01-10 | 黔南民族师范学院 | 一种基于杜仲叶活性物提取与分离于一体的三相分配方法 |
| CN111281928A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-06-16 | 中科萱嘉医养(珠海)健康科技有限公司 | 一种胆碱类低共熔溶剂的制备方法及其在提取黄酮类化合物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 林志銮 等: "离子液体超声波辅助提取白花葛茎多糖工艺优化", 江苏农业学报，, vol. 36, no. 1, pages 187 - 193 * |
| 田宏哲 等: "基于离子液体的双水相体系的分离机理及应用", 分析测试学报, vol. 39, no. 6, pages 804 - 813 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116284483A (zh) * | 2023-03-24 | 2023-06-23 | 中国药科大学 | 一种低频极化电场辅助提取杜仲叶多糖的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108503719B (zh) | 一种提取铁皮石斛多糖的方法 | |
| CN107857806B (zh) | 一种鲟鱼精蛋白及鲟鱼精蛋白多肽的制备方法 | |
| CN106220693B (zh) | 一种提取多穗石柯根皮苷的方法 | |
| CN102838686B (zh) | 一种制备高纯度姬松茸多糖的方法 | |
| CN102212144B (zh) | 一种从紫花苜蓿干草中制备纯多糖的方法 | |
| CN106955250B (zh) | 一种利用葡萄酒糟制备面膜的方法及根据此方法得到的一种面膜 | |
| CN101497906A (zh) | 一种茶多糖的分离纯化制备方法及降血糖活性 | |
| CN102268101A (zh) | 一种高纯度紫菜多糖的酶辅助提取方法 | |
| CN115260334B (zh) | 一种桑叶多糖的复合提取工艺 | |
| CN112480278A (zh) | 一种白及多糖及其提取方法 | |
| CN103342668B (zh) | 一种从鲍鱼内脏中提取天然牛磺酸的简易方法 | |
| CN115594773A (zh) | 一种多糖得率高的杜仲叶提取方法及其应用 | |
| CN112300058A (zh) | 一种从鲜桑叶中提取1-脱氧野尻霉素的方法 | |
| CN104844721B (zh) | 一种茶树菇多糖的提取分离方法 | |
| CN108467345B (zh) | 一种从蒜头果中提取神经酸的方法及神经酸包合物 | |
| CN104744601B (zh) | 一种阿魏菇多糖提取与纯化的方法 | |
| CN105037571A (zh) | 一种酶法制备低黏度车前子多糖的方法 | |
| CN105566512B (zh) | 一种柿果果胶的提取方法 | |
| CN112442136A (zh) | 一种银耳功能性成分的提取方法 | |
| CN108252143B (zh) | 一种从盐地碱蓬中提取植物盐和纤维素的方法 | |
| CN106923350B (zh) | 一种用玉米须制备水溶性膳食纤维的方法 | |
| CN102327324B (zh) | 一种桑叶总碱提取物及其制备方法和其用途 | |
| CN112210022B (zh) | 一种低甲氧基山楂果胶的制备方法 | |
| CN1583686A (zh) | 植物单宁降解为低聚体、单体化合物的催化氢解制备方法 | |
| CN114904294A (zh) | 一种高得率茶黄酮的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |