CN102225970B - 翻白草多糖提取方法 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及翻白草多糖提取方法。该方法利用生物酶解技术从翻白草中提取多糖，再加上超声波处理、超滤、醇沉、季铵盐沉淀、盐洗、醇沉精制或大孔树脂柱精制，获得纯度较高的翻白草多糖。获得的翻白草多糖的纯度在86.28～96.27％，多糖分子量为56308～68720D。获得的翻白草多糖在动物药效试验中，能够显著降低血糖含量，具有降血糖作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及翻白草多糖提取方法。
背景技术
翻白草，又名白头翁，为蔷薇科委陵菜属植物(Potentilladiscolor Bunge)的带根全草，全国各地均有分布，生于丘陵山地、路旁及洼埂上，为我国传统中药。《本草纲目》记载，翻白草有清热、凉血、解毒、止血消肿的功能，多用于治疗痢疾、疟疾、痈肿及各种出血。现代医学表明，翻白草具有止血、止痢、解毒、降血糖、降血脂的作用，是一种重要的中草药植物。
翻白草富含有多糖，石竹造甙元、D-儿茶素，可水解鞣质、没食子酸、原儿茶酸、槲皮黄素、熊果酸及其它黄酮类物质，坡模酸，3-O-乙酰坡模醇，齐墩果酸，2-羟基白桦酯酸，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖，山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖等三萜类化合物，延胡索酸、苹果酸等9个单体化合物及Mg、Ca等微量元素。目前，从翻白草中提取多糖多采用水提醇沉法，多糖纯度较低。
发明内容
有鉴于此，提出一种翻白草多糖的提取方法。该方法利用生物酶解技术从翻白草中提取多糖，获得纯度较高的翻白草多糖。获得的翻白草多糖的纯度在86.28～96.27％。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种翻白草多糖提取方法，包括：
步骤1：将翻白草干燥、粉碎后，以kg/L计，加入质量体积比为1∶10～20的蒸馏水，浸泡30min，得到翻白草第一浸提液；
步骤2：向所述翻白草第一浸提液中加入酸调节pH值为3.0～4.0，将温度加热至45～55℃，每kg翻白草中分别加入1～15万IU的纤维素酶和1～15万IU的果胶酶，酶解1～4h后，酶灭活，超声波处理后，在温度为75～80℃的条件下提取3～6h，离心、过滤后，收集滤液，得到第一滤液；收集滤渣，以kg/L计，加入质量体积比为1∶5～10的蒸馏水，得到翻白草第二浸提液；
步骤3：向所述翻白草第二浸提液中加入酸调节pH值为4.5～5.5，室温下微波处理(10min)后，加热至45～55℃，每kg翻白草中分别加入1～15万IU的纤维素酶、1～15万IU的果胶酶和1～15万IU的木聚糖酶，酶解60～90min后，酶灭活，超声波处理后，离心、过滤后，收集滤液，得到第二滤液；
步骤4：混合所述第一滤液和所述第二滤液，过截留分子量为10万的中空纤维膜，收集透过液经减压浓缩，离心、过滤后，收集滤液，得到翻白草提取液；
步骤5：将所述翻白草提取液经醇沉、加入碱后调节pH值为9.0～14.0后经季胺盐沉淀、醇沉精制或大孔树脂柱精制后，获得所述翻白草多糖。
本发明提供的提取方法中，超滤可以除去第一滤液和第二滤液中的小分子杂质，醇沉可以使翻遍草多糖沉淀，从而与其他杂质分离。作为优选，醇沉后的最终体积浓度为30～90％。
作为优选，酸选自磷酸、柠檬酸、盐酸、硫酸中的一种或两种以上的混合酸。
为了控制酶的持续降解作用，会在酶解后作酶灭活处理。作为优选，本发明提供的提取方法中，酶灭活的条件为在温度为95～100℃的条件下处理5～20min。
超声波是频率高于20000赫兹的声波，它方向性好，穿透能力强，有助于破细胞壁，加速溶剂穿透组织作用。本发明提供的提取方法中，超声波处理条件优选为在500～5000W的条件下处理20～90min。
减压浓缩，可以通过抽真空的方式降低水的沸点，使水蒸发干燥。作为优选，本发明提供的提取方法中，减压浓缩的条件为40～80℃，0.04～0.10MPa。
作为优选，碱选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠、氨水中的一种或两种以上的混合碱。
作为优选，季铵盐选自十六烷基三甲铵溴化物或其氢氧化物、十六烷基吡啶、碘化N-三甲基壳聚糖季铵盐、壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵中的一种或两种以上的混合物。
作为优选，醇沉精制或大孔树脂柱精制前，还包括盐洗的步骤。
优选地，盐洗为加入氯化物后，调节pH值为3.0～7.0，离心、抽滤、收集滤液。
优选地，氯化物为氯化钠或氯化钾。
作为优选，大孔树脂选自AB-8型、X-5型、H107型、S-8型、D3520型、D4006型、D4020型、NKA-9型、XAD-2型、XAD-3型、HP型、SIP1300型、SIP1400型、HPD100型、HPD300型、HPD600型、M3型、ABD-4型、DM-130型、D101型、D201型、D301型、1300-66型、100型、500型、600型大孔树脂。其中，树脂的预处理过程可以为：以水或乙醇溶胀过夜，湿法装柱，以乙醇或丙酮洗脱，至回收后无色沉淀或浑浊即可，然后用水洗至无乙醇味，交替洗脱2～3次。也可用酸、碱浸泡，然后再水洗至中性；树脂再生方法可以为：非吸附性杂质一般用水洗除去；吸附性杂质可用一定浓度的酸或碱液除去(氢氧化钠或盐酸)。保存时加入一定量的乙醇。
本发明还提供了按照上述提取方法获得的翻白草多糖。
此外，本发明还提供了按照上述提取方法获得的翻白草多糖在制备降血糖药物中的应用。
本发明提供的翻白草多糖提取方法，利用生物酶解技术从翻白草中提取多糖，再加上超声波处理、超滤、醇沉、季铵盐沉淀、盐洗、醇沉精制或大孔树脂柱精制，获得纯度较高的翻白草多糖。获得的翻白草多糖的纯度在86.28～96.27％，多糖分子量为56308～68720D。获得的翻白草多糖在动物药效试验中，能够显著降低血糖含量，具有降血糖作用。
具体实施方式
本发明公开了一种翻白草多糖提取方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1本发明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草药材，粉碎，得到翻白草粉。准确称取翻白草粉1.0kg，加入10.0L的水搅拌均匀，浸泡30min后，滴加质量浓度为4.5％盐酸调节pH值为3.8，加热至55℃，维持pH至3.8，按每kg翻白草药材加入4万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入4万IU的果胶酶的比例加入4万IU的纤维素酶和4万IU的果胶酶，搅匀后，维持pH至3.8，55℃的条件下水解3h。酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，然后降温至室温，在2000w的条件下超声波处理50min。超声波处理后加热至75℃提取3h后降至室温，离心，过滤，得第一滤液8.0L；收集滤渣，加入5.0L的水，搅拌均匀，用质量浓度为4.5％的盐酸调节pH值至3.8，按每kg翻白草药材加入4万IU的木聚糖酶、每kg翻白草药材加入4万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入4万IU的果胶酶的比例加入4万IU的木聚糖酶、4万IU的纤维素酶和4万IU的果胶酶进行酶解，维持pH至3.8，55℃的条件下水解90min，酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，降至室温，在2000w的条件下超声波处理50min，离心，过滤，得第二滤液4.0L。
合并第一滤液和第二滤液，得滤液12.0L，过截留分子量为10万的中空纤维膜，得透过液11L，置于真空浓缩仪中，在60℃，0.05Mpa的条件下减压浓缩至体积为2.8L，离心，过滤，收集滤液得2.5L，即为翻白草提取液。
取2.5L翻白草提取液，加入体积浓度为95％的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70％，静置4h，离心，收集沉淀，用体积浓度为95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得翻白草粗多糖212.31g。
将200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，过滤，滤液用10.0mol/L的NaOH溶液调节pH值至12.5，然后再向滤液加入质量浓度为5％的十六烷基三甲基溴化铵溶液，使溶液中的十六烷基三甲基溴化铵的浓度达到1.5％，静置，离心，得滤液2.2L。向滤液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置，离心，取沉淀，沉淀用1.0L质量浓度为5％的NaCl溶液溶解，再用质量浓度为38％的盐酸溶液调节pH值至5.5，静置，离心，过滤，得滤液0.8L。将滤液上D301型大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液4.5L，浓缩至1.0L，过滤，得滤液0.8L。滤液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70％，静置，离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤两次，真空干燥，得翻白草多糖4.25g。
检验结果：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)
性状：类白色粉末
多糖含量：90.12％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：65022D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例2本发明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草药材，粉碎，得到翻白草粉。准确称取翻白草粉1.0kg，加入10.0L的水搅拌均匀，浸泡30min后，滴加质量浓度为4.5％柠檬酸调节pH值为3.5，加热至45℃，维持pH至3.5，按每kg翻白草药材加入4万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入4万IU的果胶酶的比例加入4万IU的纤维素酶和4万IU的果胶酶，搅匀后，维持pH至3.5，45℃的条件下水解4h。酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，然后降温至室温，在5000w的条件下超声波处理20min后加热至80℃提取4h后降至室温，离心，过滤，得第一滤液8.0L；收集滤渣，加入5.0L的水，搅拌均匀，用质量浓度为4.5％的柠檬酸调节pH值至3.5，按每kg翻白草药材加入4万IU的木聚糖酶、每kg翻白草药材加入4万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入4万IU的果胶酶的比例加入4万IU的木聚糖酶、4万IU的纤维素酶和4万IU的果胶酶进行酶解，维持pH至3.5，45℃的条件下水解80min，酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，降至室温，在5000w的条件下超声波处理20min，离心，过滤，得第二滤液4.2L。
合并第一滤液和第二滤液，得滤液12.2L，过截留分子量为10万的中空纤维膜，得透过液11.1L，置于真空浓缩仪中，在65℃，0.04Mpa的条件下减压浓缩至体积为3.5L，离心，过滤，收集滤液得3.0L，即为翻白草提取液。
取3.0L翻白草提取液，加入体积浓度为95％的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置4h，离心，收集沉淀，用体积浓度为95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得翻白草粗多糖231.05g。
将200.00g的翻白草粗多糖溶于3.0L的水，过滤，滤液用10.0mol/L的Ca(OH)2溶液调节pH值至14.0，然后再向滤液加入质量浓度为5％的十六烷基三甲基氢氧化铵溶液，使溶液中的十六烷基三甲基氢氧化铵的浓度达到1.5％，静置，离心，得滤液2.7L。向滤液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置，离心，取沉淀，沉淀用1.3L质量浓度为5％的NaCl溶液溶解，再用质量浓度为38％的柠檬酸溶液调节pH值至3.0，静置，离心，过滤，得滤液1.0L。将滤液上SIP1400型大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液5.4L，浓缩至1.3L，过滤，得滤液1.0L。滤液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置，离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤两次，真空干燥，得翻白草多糖4.42g。
检验结果：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)
性状：类白色粉末
多糖含量：91.23％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：62154D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例3本发明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草药材，粉碎，得到翻白草粉。准确称取翻白草粉1.0kg，加入20.0L的水搅拌均匀，浸泡30min后，滴加质量浓度为4.5％磷酸调节pH值为3.4，加热至50℃，维持pH至3.4，按每kg翻白草药材加入2万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入2万IU的果胶酶的比例加入2万IU的纤维素酶和2万IU的果胶酶，搅匀后，维持pH至3.4，50℃的条件下水解4h。酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，然后降温至室温，在500w的条件下超声波处理90min。超声波处理后加热至78℃提取5h后降至室温，离心，过滤，得第一滤液16.0L；收集滤渣，加入10.0L的水，搅拌均匀，用质量浓度为4.5％的磷酸调节pH值至3.4，按每kg翻白草药材加入2万IU的木聚糖酶、每kg翻白草药材加入2万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入2万IU的果胶酶的比例加入2万IU的木聚糖酶、2万IU的纤维素酶和2万IU的果胶酶进行酶解，维持pH至3.4，50℃的条件下水解60min，酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，降至室温，在500w的条件下超声波处理90min，离心，过滤，得第二滤液8.0L。
合并第一滤液和第二滤液，得滤液24.0L，过截留分子量为10万的中空纤维膜，得透过液22.5L，置于真空浓缩仪中，在70℃，0.10Mpa的条件下减压浓缩至体积为6.5L，离心，过滤，收集滤液得6.0L，即为翻白草提取液。
取6.0L翻白草提取液，加入体积浓度为95％的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置4h，离心，收集沉淀，用体积浓度为95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得翻白草粗多糖215.45g。
将200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，过滤，滤液用10.0mol/L的KOH溶液调节pH值至14.0，然后再向滤液加入质量浓度为5％的十六烷基吡啶溶液，使溶液中的十六烷基吡啶的浓度达到1.5％，静置，离心，得滤液1.7L。向滤液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置，离心，取沉淀，沉淀用1.0L质量浓度为5％的NaCl溶液溶解，再用质量浓度为38％的磷酸溶液调节pH值至4.2，静置，离心，过滤，得滤液0.8L。将滤液上D4020型大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液5.0L，浓缩至1.0L，过滤，得滤液0.85L。滤液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到60％，静置，离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤两次，真空干燥，得翻白草多糖4.37g。
检验结果：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)
性状：类白色粉末
多糖含量：90.87％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：63586D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例4本发明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草药材，粉碎，得到翻白草粉。准确称取翻白草粉1.0kg，加入15.0L的水搅拌均匀，浸泡30min后，滴加质量浓度为4.5％硫酸调节pH值为3.0，加热至48℃，维持pH至3.0，按每kg翻白草药材加入15万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入15万IU的果胶酶的比例加入15万IU的纤维素酶和15万IU的果胶酶，搅匀后，维持pH至3.0，48℃的条件下水解1h。酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，然后降温至室温，在2000w的条件下超声波处理50min。超声波处理后加热至75℃±5℃提取3h后降至室温，离心，过滤，得第一滤液12.0L；收集滤渣，加入8.0L的水，搅拌均匀，用质量浓度为4.5％的硫酸调节pH值至3.0，按每kg翻白草药材加入15万IU的木聚糖酶、每kg翻白草药材加入15万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入15万IU的果胶酶的比例加入15万IU的木聚糖酶、15万IU的纤维素酶和15万IU的果胶酶进行酶解，维持pH至3.0，48℃的条件下水解90min，酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，降至室温，在3000w的条件下超声波处理40min，离心，过滤，得第二滤液6.0L。
合并第一滤液和第二滤液，得滤液18.0L，过截留分子量为10万的中空纤维膜，得透过液16.5L，置于真空浓缩仪中，在40℃，0.08Mpa的条件下减压浓缩至体积为5.7L，离心，过滤，收集滤液得5.5L，即为翻白草提取液。
取5.5L翻白草提取液，加入体积浓度为95％的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到50％，静置4h，离心，收集沉淀，用体积浓度为95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得翻白草粗多糖221.5g。
将200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，过滤，滤液用10.0mol/L的Na2CO3溶液调节pH值至10.0，然后再向滤液加入质量浓度为5％的碘化N-三甲基壳聚糖季铵盐溶液，使溶液中的碘化N-三甲基壳聚糖季铵盐的浓度达到1.5％，静置，离心，得滤液2.3L。向滤液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到30％，静置，离心，取沉淀，沉淀用1.0L质量浓度为5％的NaCl溶液溶解，再用质量浓度为38％的硫酸溶液调节pH值至6.0，静置，离心，过滤，得滤液0.8L。将滤液上AB-8型大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液4.5L，浓缩至1.0L，过滤，得滤液0.8L。滤液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70％，静置，离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤两次，真空干燥，得翻白草多糖4.31g。
检验结果：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)
性状：类白色粉末
多糖含量：96.27％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：68720D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例5本发明提供的翻白草多糖提取方法
取干燥后的翻白草药材，粉碎，得到翻白草粉。准确称取翻白草粉1.0kg，加入10.0L的水搅拌均匀，浸泡30min后，滴加质量浓度为4.5％盐酸调节pH值为3.2，加热至52℃，维持pH至3.2，按每kg翻白草药材加入8万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入8万IU的果胶酶的比例加入8万IU的纤维素酶和8万IU的果胶酶，搅匀后，维持pH至3.2，52℃的条件下水解2h。酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，然后降温至室温，在1000w的条件下超声波处理70min。超声波处理后加热至78℃提取3h后降至室温，离心，过滤，得第一滤液8.0L；收集滤渣，加入5.0L的水，搅拌均匀，用质量浓度为4.5％的盐酸调节pH值至3.2，按每kg翻白草药材加入8万IU的木聚糖酶、每kg翻白草药材加入8万IU的纤维素酶和每kg翻白草药材加入8万IU的果胶酶的比例加入8万IU的木聚糖酶、8万IU的纤维素酶和8万IU的果胶酶进行酶解，维持pH至3.2，52℃的条件下水解90min，酶解结束后加热至100℃，加热时间为10min进行酶灭活，降至室温，在1000w的条件下超声波处理70min，离心，过滤，得第二滤液4.0L。
合并第一滤液和第二滤液，得滤液12.0L，过截留分子量为10万的中空纤维膜，得透过液11L，置于真空浓缩仪中，在80℃，0.09Mpa的条件下减压浓缩至体积为2.8L，离心，过滤，收集滤液得2.5L，即为翻白草提取液。
取2.5L翻白草提取液，加入体积浓度为95％的乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到90％，静置4h，离心，收集沉淀，用体积浓度为95％的乙醇和丙酮各洗两次，真空干燥，得翻白草粗多糖210.85g。
将200.00g的翻白草粗多糖溶于2.0L的水，过滤，滤液用1.0mol/L的氨水溶液调节pH值至9.0，然后再向滤液加入质量浓度为5％的壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵溶液，使溶液中的壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵的浓度达到1.5％，静置，离心，得滤液2.3L。向滤液中加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到80％，静置，离心，取沉淀，沉淀用1.0L质量浓度为5％的KCl溶液溶解，再用质量浓度为10％的盐酸溶液调节pH值至7.0，静置，离心，过滤，得滤液0.8L。将滤液上S-8型大孔树脂柱床，并用水洗脱至流出液无色透明，得流出液4.5L，浓缩至1.0L，过滤，得滤液0.8L。滤液加入95％乙醇，使溶液中的乙醇浓度达到70％，静置，离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇和丙酮各洗涤两次，真空干燥，得翻白草多糖4.16g。
检验结果：
多糖鉴别：苯酚-硫酸试剂反应(阳性)
性状：类白色粉末
多糖含量：86.28％(用苯酚-硫酸法测定)
多糖分子量测定：56308D(参考2005年药典二部附录VH)。
实施例6本发明提供的提取方法获得的翻白草多糖药效试验
实验动物：昆明种小白鼠，50只，雌雄各25只，健康，体重18～22g。取上述小鼠按体重随机分5组(空白对照组、模型组、阳性药物对照组、翻白草多糖试验组)，每组10只，雌雄各5只，各组动物均在同样环境下饮水、摄食、保持自然光照(温度25℃，湿度60～70％)。
实验药品：
翻白草多糖：本发明实施例1获得的翻白草多糖；
阳性药物对照：优降糖，北京双桥制药厂生产；
模型制剂：葡萄糖氧化酶试剂盒，北京北化康泰临床试剂有限公司生产。
实验方法：试验前，将上述小鼠禁食14h后给药。翻白草多糖分别按50、100mg/Kg剂量灌胃给药，优降糖按50mg/Kg的剂量灌服。除空白对照组外，各组在给药30min后，按0.2ml/Kg灌服20％葡萄糖溶液，并分别在给药后30min、90min，从眶静脉窦取血，以葡萄糖氧化酶法测定血糖。以血糖浓度为指标，给药各组与模型组间进行t检验。结果见表1。
表1翻白草多糖降低小鼠血糖的作用
*P＜0.05，#P＜0.01
由表1试验结果表明，小鼠口服葡萄糖溶液后，相同剂量的翻白草多糖组与模型组相比，在给药30min后，血糖浓度由357.06±29.85mg·d/L降低至256.31±41.35mg·d/L，具有极显著性差异(P＜0.01)，与阳性药物优降糖组相比，差异不显著(P＞0.05)；给药90min后，血糖浓度由304.36±75.98mg·d/L降低至247.11±54.36mg·d/L，具有极显著性差异(P＜0.01)，与阳性药物优降糖组相比，差异不显著(P＞0.05)。
小鼠口服葡萄糖溶液后，剂量为100mg/kg的翻白草多糖组与剂量为50mg/kg的模型组相比，在给药30min后，血糖浓度由357.06±29.85mg·d/L降低至226.24±26.34mg·d/L，具有极显著性差异(P＜0.01)；给药90min后，血糖浓度由304.36±75.98mg·d/L降低至228.36±72.15mg·d/L，具有极显著性差异(P＜0.01)。
按照上述试验方法，对本发明实施例2至5提供的翻白草多糖进行降血糖药效试验，结果与实施例1提供的翻白草多糖的降血糖效果相近，与模型组具有极显著性差异(P＜0.01)，与阳性药物优降糖组相比，差异不显著(P＞0.05)。
综合上述试验结果，本发明提供的翻白草多糖能够有效降低血糖，可以用于制备治疗糖尿病的药物。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种翻白草多糖提取方法，其特征在于，包括：
步骤1：将翻白草干燥、粉碎后，获得翻白草粉，加入蒸馏水，以kg/L计，所述翻白草粉与所述蒸馏水的质量体积比为1:10～20，浸泡30min，得到翻白草第一浸提液；
步骤2：向所述翻白草第一浸提液中加入酸调节pH值为3.0～4.0，将温度加热至45～55℃，每kg翻白草中分别加入1～15万IU的纤维素酶和1～15万IU的果胶酶，酶解1～4h后，酶灭活，超声波处理后，在温度为75～80℃的条件下提取3～6h，离心、过滤后，收集滤液，得到第一滤液；收集滤渣，以kg/L计，加入质量体积比为1:5～10的蒸馏水，得到翻白草第二浸提液；
步骤3：向所述翻白草第二浸提液中加入酸调节pH值为4.5～5.5，室温下微波处理10min后，加热至45～55℃，每kg翻白草中分别加入1～15万IU的纤维素酶、1～15万IU的果胶酶和1～15万IU的木聚糖酶，酶解60～90min后，酶灭活，超声波处理后，离心、过滤后，收集滤液，得到第二滤液；
步骤4：混合所述第一滤液和所述第二滤液，过截留分子量为10万的中空纤维膜，收集透过液经减压浓缩，离心、过滤后，收集滤液，得到翻白草提取液；
步骤5：将所述翻白草提取液经醇沉、加入碱后调节pH值为9.0～14.0后经季铵盐沉淀、醇沉精制或大孔树脂柱精制后，获得所述翻白草多糖。
2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤2或所述步骤3中的酸选自磷酸、柠檬酸、盐酸、硫酸中的一种或两种以上的混合酸。
3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述酶灭活为在温度为95～100℃的条件下处理5～20min。
4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述超声波处理为在500～5000W的条件下处理20～90min。
5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述减压浓缩的条件为40～80℃，0.04～0.10MPa。
6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸氢钠、氨水中的一种或两种以上的混合碱。
7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述季铵盐选自十六烷基三甲铵溴化物或其氢氧化物、十六烷基吡啶、碘化N-三甲基壳聚糖季铵盐、壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵中的一种或两种以上的混合物。
8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤5中醇沉精制或大孔树脂柱精制前，还包括盐洗的步骤；
所述盐洗具体为加入氯化物后，调节pH值为3.0～7.0，离心、抽滤、收集滤液；所述氯化物为氯化钠或氯化钾。
9.如权利要求1至8任一项所述的提取方法获得的翻白草多糖。
10.如权利要求9所述的翻白草多糖在制备降血糖药物中的应用。
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