CN1830989A

CN1830989A - 新型腺嘌呤多肽化合物的合成和99Tcm、186Re标记及标记物在肿瘤、乏氧显像中的应用

Info

Publication number: CN1830989A
Application number: CN 200510053430
Authority: CN
Inventors: 齐传民; 赵云岭; 冯淑娟; 孙绪霞; 吴爱琴; 黄海波
Original assignee: Beijing Normal University
Current assignee: Beijing Normal University
Priority date: 2005-03-10
Filing date: 2005-03-10
Publication date: 2006-09-13

Abstract

本发明涉及具有优良肿瘤显像和乏氧显像效果的⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re的标记的腺嘌呤肽分子；因标记物(2)不稳定等特性难以通过波谱学测定其结构，因此本发明还涉及腺嘌呤肽分子的合成。¹⁸⁶Re标记的腺嘌呤肽分子为肿瘤治疗剂，¹⁹⁹Tc^m标记的腺嘌呤肽分子为肿瘤显像剂和乏氧显像剂。其中R¹、R²、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0，1，2，……20。其中R¹、R²、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re，n为0，1，2，……20。

Description

新型腺嘌呤多肽化合物的合成和99Tcm、186Re标记及标记物在肿瘤、乏氧显像中的应用

技术领域：

本发明涉及具有优良肿瘤显像和乏氧显像效果的⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re的标记的腺嘌呤肽化合物；因标记物(2)不稳定等特性难以通过波谱学测定其结构，因此本发明还涉及腺嘌呤肽分子(1)的合成。¹⁸⁶Re标记的腺嘌呤肽分子为肿瘤治疗剂，¹⁹⁹Tc^m标记的腺嘌呤肽分子为肿瘤显像剂和乏氧显像剂。

背景技术：

腺嘌呤是人体内主要的生物碱之一，是腺苷和核苷酸(而核苷酸又是DNA和RNA的重要成份)的重要组成成份，许多含有生物碱的地物质(如叶酸衍生物等)具有较强的亲肿瘤活性，尤其是腺嘌呤在肿瘤药物的研究中已经成为热点修饰官能团之一，在放射药物研究中也有不少效果较好的研究，虽然放射性药物中与肽的结合研究很少，但在心肿瘤药中与肽的结合也是很关注的研究；分子肽不仅是四配位配体的双功能连接剂，也是目前肿瘤显像剂研究的热点。

发明内容：

本发明还提供含有本发明化合物作为配体，该配体可以通过波谱学确定结构，且与结构式(2)[结构式(2)因含放射性核素而不稳定，难以通过谱图测定]紧密相连的重要部分。

其中R¹、R²、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0，1，2，……20。

其中R¹、R²、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为H时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H，Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为甲基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为乙基时，R²，R³为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，苯基，苄基，R⁴为Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为丙基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为异丙基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为丁基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为苯基时，R¹，R³为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，苯基，苄基，R⁴为Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(1)是如下化合物，其中R²为苄基时，R¹，R³为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，苯基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中R²为H时，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1，2、……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为甲基时，R¹，R³为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，苯基，苄基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为乙基时，R¹，R³为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，苯基，苄基，R⁴为Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为炳基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为异丙基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为丁基时，R¹，R³为H，甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，苯基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为苯基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，苄基，R⁴为Tr，n为0，1，2，……20。

本发明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝⁹⁹Tc^m，¹⁸⁶Re，R²为苄基时，R¹，R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H，n为0，1，2，……20。

本发明还提供制备式(1)、(2)化合物或其药学上可接受的盐，络合物，和相应药理作用的应用。包括以下步骤：

(I)按下列路线合成小肽配体

(反应式1)

上述反应(a)，通过先将化合物(a1)的-SH实施保护，再将羟基活化成活泼酯(a2)，再在碱性条件下与氨基酸反应形成肽链(a3)，最后在与甘氨酸二肽反应形成小肽配体(a4)

制备化合物(a2)的反应通常在有机溶剂(如：二氯甲烷，氯仿)中，先将化合物(a1)与等摩尔的三苯基氯化物反应生成TrSCH₂COOH，此反应优选在室温进行一个小时。

生成TrSCH₂COOH在常规的有机溶剂(如：二氯甲烷，氯仿，四氢呋喃)及缩合剂(如：DCC)中，与等摩尔的NHS反应得化合物(a2)。

此反应优选在无水四氢呋喃，于零度到室温反应18个小时。

所得化合物(a2)在碱性条件下(如：氢氧化钠，碳酸钾，碳酸钠)，与氨基酸反应得化合物(a3)。

此反应优选在氢氧化钠水溶液中，控制反应温度50-60度之间，回流两个小时。

重复操作将化合物(a3)经羧基活化，最后与甘氨酸二肽反应形成小肽配体(a4)。

(II)按下列路线合成叠氮化物

(反应式2)

(III)按反应式1的路线合成小肽分子

(反应式3)

上述反应(b1)为在弱碱条件下，引进叠氮基得化合物b2，再还原为化合物b3。

制备化合物b2得反应利用嘌呤环氮上H的酸性，用弱碱(如：无水碳酸钾，碳酸钠)脱氢，1摩尔化合物b1与2摩尔叠氮化物反应。

反应优选在弱碱无水碳酸钠条件下，温度在50-60度之间进行。

所得化合物b2还原为化合物b3。

还原包括：Pd/C，Ph₃P/H₂

反应优选在有机溶剂(如THF)，在氢气存在下，用Ph₃P作还原剂，室温下反应。

上述反应(c)为在肽缩合剂存在下，形成小肽分子。肽缩合剂包括：BOP和DIPEA、DCC和DMA，P反应优选用缩合剂BOP和DIPEA，反应5个小时。

具体实施方式：

以下通过实施具体实例进一步说明本发明，但并不限制本发明。

实施例7-N-(三苯基硫代乙酰三甘氨酰乙基)硫唑嘌呤

7-N-(三苯基硫代乙酰丙氨酸二甘氨酰乙基)硫唑嘌呤

7-N-(三苯基硫代乙酰颉氨酸二甘氨酰乙基)硫唑嘌呤

7-N-(三苯基硫代乙酰二甘氨酰乙基)硫唑嘌呤

下列小肽配体简称为：

(反应式4)

(反应式5)

1)小肽配体的制备：

(1)羧基的活化

在20mL三口烧瓶，装上配有干燥管的冷凝管和温度计，搅拌下加入TrCH₂COOH(3mmol)和NHS(3mmol)的无水THF溶液(4mL)，冰盐浴冷却至-5～0℃，10min以后，逐渐加入DCC(3mL)的无水THF溶液，然后维持-5-0℃反应2小时，有大量白色沉淀生成。继续在室温下搅拌16小时，停止反应。滤掉沉淀，用冷CH₂Cl₂充分洗涤，旋蒸掉溶剂，得粗产品。在乙酸乙酯中重结晶，得无色棱状晶体1.10g，产率91％。m.p.177.5-178.3℃

IR(KBr，cm^-1)：3070(w)，1790，1745(活泼酯特征峰)；1630，1580，1495，1445。

(2)化合物Tr-MAG的合成(参考文献：Synthesis of novel N3S pseudo-peptide andbiodistribution of Tc-99(m)-pseudo-peptide complexes in mice，齐传民、杨凌春、张华北等，MEDICINAL CHEMISTRY RESEARCH 11(6)：345-359，2002)

在装有冷凝管和搅拌装置的500mL烧瓶中，加入活泼酯(0.012mol)和250mL乙腈，搅拌溶解后缓慢升高温度。控制在50-60℃间，缓慢加入氨基酸1)和60mL(0.012mol)的0.2MNaOH水溶液，然后回流2h。TLC跟踪反应，原料消失。停止反应，溶液成中性。冰浴后用稀H₂SO₄调节PH值约为1，得到白色沉淀。

(3)羧基的再次活化

在配备有温度计，冷凝管(加干燥管)和搅拌器的25mL三口烧瓶中，加入上一步产物0.002mol，NHS(0.002mol)和无水THF(7.0mL)，室温下搅拌10min。冰浴降温至0-5℃，加入DCC(0.002mol)的无水THF(4mL)溶液，出现白色沉淀，然后维持温度0～5℃继续反应2h，搅拌过夜，终止反应。过滤旋干，用乙醚研制后，用大量水洗涤。然后烘干。IR显示1820cm^-1，1780cm^-1和1740cm^-1有活泼酯的特征酯吸收峰。

(4)四齿配体的合成

在配备冷凝管和搅拌器的100mL烧瓶中，加入Tr-MAV的活泼酯(0.028mo乙腈，然后升温至50℃左右，缓慢加入等摩尔的甘氨酸二肽的0.2MNaOH水溶液，加热回流2h，TLC跟踪反应。原料消失，溶液呈碱性，加入水稀释，再用稀硫酸调节PH值至1左右，有大量白色沉淀产生，收集固体，产率70～92％。(如Tr-MAVG₂：三苯基硫代乙酰-缬氨酰-双甘氨酸，产率70％，Tr-MAVG₂：C₃₀H₃₃N₃O₅S FW：547 m.p.：129.0-131℃，IR(KBr，cm^-1)：3250(br)，1720(COO)，1640(CONH)，1540，1500)。(化合物Tr-MAG₃：产率91.0％，IR(KBr，cm^-1：3350(s)，3100-2500(w)，1740，1640，¹HNMR(500MHz，DMSO)δ(ppm)：12.15(1H，br，COOH)，8.27(1H，NH)，7.37-7.26(15H，m，Ar)，3.67(2H，d，J＝4.7Hz，CH₂)，2.82(2H，s，CH₂))。(化合物Tr-MAAG₂：三苯基硫代乙酰-丙氨酰-双甘氨酸，产率70％。分子式：C₂₈H₂₉N₃O₅S，FW：519；m.p.：133.0-135.5℃，IR(KBr，cm^-1)：3302.9(br)，1737.3(COO)，1651.2(CONH)，1527.4；¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)d：8.21-8.15(2H，NH)，8.10-8.08(1H，NH)，7.37-7.25(m，15H，Ar)，4.21-4.17(1H，m，CH)，3.81-3.70(4H，CH₂)，2.86(1H，s，SCH₂)，1.15-1.14(d，J＝7.0Hz，3H，CH₃)；¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)：173.5-168.4(4C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，66.4(CPh₃)，48.9(CH(NH))，42.3(2NCH₂)，36.3(SCH₂)，18.3(CH₃)。

2)嘌呤环乙胺基的引入：

(1)7-N-叠氮乙基腺嘌呤

AdeN₃：7-N-ethylazidoAdenine

腺嘌呤(0.5g，3.7mmol)溶于5mL DMF中，向其中加入2g无水Na₂CO₃，室温下搅拌反应过夜，加入MsOCH₂CH₂N₃(1.22g，7.4mmol)，升温至50～60℃，搅拌反应，TLC跟踪反应三四天后原料亦无明显减少，终止反应。滤除Na₂CO₃，减压蒸馏除掉DMF浓缩，柱层析(乙酸乙酯∶甲醇＝20∶1)，产率：30％。

C₇H₈N₈ F.W.：204 m.p.：174～175℃ IR(KBr，cm^-1)：3269.7，3103.5，2928.7，2875.0(CH₂)，2100.4(-N₃)，1677.5，1603.7

AdeNH₂：7-N-ethylaminoAdenine

取AdeN₃(0.15g，0.88mmol)溶解在5mL甲醇中，向其中加入Pd/c(10％Pd)(0.1g，0.096mmol)。抽出反应体系的空气，向其中充入氢气在25℃下反应。TLC示踪，大约2h后反应原料消失。结束反应，将催化剂滤掉，用甲醇清洗催化剂，旋掉甲醇，尽量除去甲醇得到白色固体约0.12g。产滤为92％。C₇H₁₀N₆ F.W.：178；m.p.：202-203℃ IR(KBr，cm^-1)：3355.0(NH₂)，1674.8(C＝N)

3)目标化合物的制备：

如：2-N-三苯甲基硫代乙酰三甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAG₃-ADE)(7-N-(triphenylthioacetyl triglycylethyl)Adenine)

取AdeNH₂(0.22g，1.15mmol)溶于5mL DMF中，向其中加入Tr-MAG₃(0.58g，1.15mmol)，室温下向其中加入DCC(0.50g，2.4mmol)，DMAP(0.3g，2.4mmol)，搅拌反应，白色沉淀生成。搅拌反应三至四天后补加DCC(0.25g)，DMAP(0.15g)，继续搅拌反应三天。终止反应，滤除沉淀，减压蒸馏除去大部分DMF，冰浴冷却后，加入稀盐酸有大量白色固体析出，冰浴条件下搅拌，滤集固体，用饱和NaHCO₃溶液清洗，最后用蒸馏水洗两次。抽干固体。通过柱层析(丙酮∶甲醇＝20∶1(含1％三乙胺))得到约0.43g白色固体。产率约为62％。2-N-三苯甲基硫代乙酰三甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAG₃-ADE)：C₃₄H₃₅N₉O₄S F.W.：665MS(m/z，％)：666(M+H⁺，18)m.p.：165℃开始熔化，变黄。IR(KBr，cm^-1)：3325(NH)，2928.3，2851.6(CH₂)，1652.7，1532.9(C＝ONH)

¹H NMR(500MHz，DMSO)，δ(ppm)：8.14(1H，s)；8.02(1H，s)，(上面2H位杂环上的两个氢原子)；8.22(1H，NH)，8.17(1H，NH)，8.13(1H，NH)，7.97(1H，t，J＝5.56Hz，NH)，7.35-7.19(15H，Ar)，4.18(2H，t，J＝5.4Hz，CH₂)，3.71(2H，s，CH₂)，3.66(2H，s，CH₂)，3.61(2H，s，CH₂)，3.46(2H，t，J＝5.27Hz，CH₂)，3.38(2H，NH₂)，2.86(2H，s，SCH₂)

¹³C NMR(125MHz，DMSO)，δ(ppm)：169.05(2C＝O)，167.70(C＝O)，155.749C＝O)，152.29，149.29，140.99(2C)，118.61(以上5个C为，腺嘌呤环上的五个碳原子)；143.96(3C，Ar)，129.49(6C，Ar)，129.03(6C，Ar)，126.79(3C，Ar)，65.89(CPh₃)，42.48(CH₂)，42.13(CH₂)，41.93(CH₂)，38.42(CH₂)，38.31(CH₂)，35.83(CH₂)

2-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨酸二甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAVG₂Ade)*(7-N-(triphenylthioacetyl valyldiglycylethyl)Adenine)

取AdeNH₂(0.10g，0.5mmol)溶于2mL DMF中，向其中加入Tr-MAVG₂(0.3g，0.56mmol)，室温下向其中加入DCC(0.232g，1.12mmol)，DMAP(0.0343g，0.28mmol)，搅拌反应，白色沉淀生成。搅拌反应三至四天后补加DCC(0.12g)，DMAP(0.015g)，继续搅拌反应三天。终止反应。滤除沉淀，减压蒸馏除去大部分DMF，冰浴冷却后，加入稀盐酸有大量白色固体析出，冰浴条件下搅拌，滤集固体，用饱和NaHCO₃溶液清洗，最后用蒸馏水洗两次。抽干固体。通过梯度柱层析(先用：丙酮(含1％三乙胺)后用：丙酮∶甲醇＝10∶1(含1％三乙胺))得到约0.25g白色固体。产率约为62％。

2-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨酸二甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAVG₂ADE)：C₃₇H₄₁N₄SO₄ F.W：707.7，MS(m/z，％)：707(M⁺，4)m.p.：180℃开始熔化，后变焦黄状。IR(cm^-1)：3324.6(NH)，2928.28，2850.79-CH3，CH2)，1646.4(酰胺I带)；1539.1(酰胺II带)

¹H NMR(500MHz，DMSO)δ(ppm)：8.14(1H，s)，8.02(1H，s)(上面2H为杂环上的两个氢原子)；8.29(1H，NH)，8.12(1H，NH)，8.10(1H，NH)，8.00(1H，NH)，7.35～7.24(15H，Ar)，4.18(2H，t，J＝5.65Hz，CH₂)，4.11(1H，t，J＝7.0Hz，CH)，3.73(2H，d，J＝5.24Hz，CH₂)，3.62(2H，d，J＝5.42Hz，CH₂)，3.45(2H，t，J＝5.40Hz，CH₂)，3.39(2H，br，NH₂)(重水交换氢谱中消失)，2.92(1H，d，J＝13.86Hz，SCH₂)，2.84(1H，d，J＝13.5Hz，SCH₂)，1.72(1H，m，CH)，0.84(3H，d，J＝6.7Hz，CH₃)，0.81(3H，d，J＝6.7Hz，CH₃)

¹³C NMR(125MHz，DMSO)δ(ppm)：172.15(C＝O)，169.92(C＝O)，168.59(C＝O)，156.66(C＝O)，153.18，150.43，141.85(2C)，119.55，(上面五个碳为腺嘌呤环上碳原子)；145.01(3C，Ar)，129.96(6C，Ar)，128.93(6C，Ar)，127.67(3C，Ar)，66.85(CPh₃)，48.25(CH₂)，43.39(CH₂)，42.92(CH₂)，39.33(CH₂)，36.79，34.17，31.11(CH)，20.02(CH₃)，18.93(CH₃)

同样方法得到：2-N-三苯甲基硫代乙酰二甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAG₂ADE)

m.p.：158.2～158.9℃；收率53.2％

MS：m/z 631[M+H]⁺632 found 632.0

IR(cm^-1)：3413.8(NH)，3058.1(Ar-H)，2937.6(CH₂)，1642.3(酰胺I带)，1529.7(酰胺II带)，

¹H NMR(500MHz，DMSO)，δ(ppm)：8.14(1H，s)；8.03(1H，s)，(上面2H为杂环上的两个氢原子)；8.23(1H，NH)，8.16(1H，NH)，7.97(1H，t，NH)，7.36-7.19(15H，m，Ar)，4.21-4.19(2H，t，J＝5.68Hz，CH₂)，3.64-3.63(2H，s，CH₂)，3.60-3.59(2H，s，CH₂)，，3.46-3.44(2H，t，J＝5.66Hz，CH₂)，3.38(2H，s，NH₂)，2.87(2H，s，SCH₂)。

¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)d：169.6-169.5(2C＝O)，168.4(1C＝O)，156.3，152.7，150.0，141.5(2C)，119.1(以上5个C为腺嘌呤环上的5个碳原子)，144.5(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.6(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，66.45(CPh₃)，42.97(CH₂)，42.92(CH₂)，42.5(CH₂)，38.9(CH₂)，36.3(CH₂)。

同样方法得到：2-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨酸甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAVGAde)

m.p.：137.5～138.5℃；收率42.3％

MS：m/z 664[M+H]⁺665 found 665

IR(cm^-1)：3392.5(NH)，3058.8(Ar-H)2930.1(CH₂)，1647.1(酰胺I带)，1528.4(酰胺II带)

¹H NMR(500MHz，DMSO)，δ(ppm)：8.15(1H，s)，8.04(1H，s)，(上面2H为杂环两个氢原子)；8.23(1H，NH)，8.16(1H，NH)，7.98-7.96(1H，t，J＝5.67Hz，NH)，7.36-7.19(15H，m，Ar)，4.21-4.19(2H，t，J＝5.74Hz，CH₂)，3.64-3.62(2H，s，CH₂)，3.62-3.60(2H，s，CH₂)，3.46-3.45(2H，s，NH₂)，3.35(1H，d，J＝5.74Hz，CH)，2.87(2H，s，SCH₂)

¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)d：169.6-169.5(2C＝O)，168.4(1C＝O)，156.2，152.6，150.0，141.5(2C)，119.1(以上5个C为腺嘌呤环上的5个碳原子)，144.5(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.6(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，66.43(CPh₃)，42.9(CH₂)，40.5(CH₂)，39.5-39.4(2CH₂)，36.3(SCH₂)，

同样方法得到：2-N-三苯甲基硫代乙酰二丙氨酰基腺嘌呤(Tr-MAA₂Ade)，m.p.：144.2～145.1℃；收率57.6％。

MS：m/z 636[M+H]⁺637 found 637.1

IR(cm^-1)：3259.8(NH)，3058.8(Ar-H)，2928.7(CH)，1629.5(酰胺I带)，1525.6(酰胺II带)，

¹H NMR(500MHz，，DMSO)，δ(ppm)：8.12(1H，s)；8.01(1H，s)，(上面2H为杂环两个氢原子)；8.23(1H，NH)，8.16(1H，NH)，7.98-7.96(1H，t，J＝5.67Hz，NH)，7.35-7.23(15H，m，Ar)，4.20-4.18(2H，t，J＝5.5Hz，CH₂)，4.10-4.07(2H，t，J＝7.1Hz，CH₂)，3.49-3.48(2H，s，NH₂)，1.27-1.23(2H，dd，J＝7.0，7.3Hz，2CH)，2.83(2H，s，SCH₂)，1.11-1.06(6H，d，J＝6.9Hz，2CH₃)

¹³C NMR(125MHz，DMSO-d₆)d：172.8(C＝O)，167.7(2C＝O)，167.7，156.2，152.7，141.6(2C)，119.0(以上5个C为腺嘌呤环上的5个碳原子)，144.5(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.2(3C，Ar)，66.43(CPh₃)，48.9-48.6(2CH)，42.9-40.5(2CH₂)，38.9(SCH₂)，18.4(2CH₃)

利用上述合成方法可以合成其余的目标化合物

如结构(1)中的所有目标物：

脱保护、标记及放化纯度的检验

脱保护：在10mL烧瓶中加入样品5.11×10^-5mol和TFA(3mL)，搅拌5min后。再加入HSiEt₃(1mL)，溶液立即澄清。继续搅拌5min，旋蒸溶剂，加入4mL0.1MNaOH水溶液，用CH₂Cl₂萃取除去三苯甲烷，抛去有机相，水相充氮气保护。

配体的标记：采用直接标记法制备。10mg葡萄糖酸钙加入小青霉素瓶中，用100μL配体溶液(浓度：10g.L^-1)，然后加入50μL醋酸-醋酸钠缓冲溶液，调节溶液的PH值为4～5，加入25μL酒石酸-SnCl₂溶液(酒石酸∶SnCl₂＝0.8mg/mL∶0.4mg/mL)，加入适量新鲜的⁹⁹Tc^mO₄ ^-淋洗液，室温下反应30min。反应即可完成。

标记物的层析鉴定及放化纯度的检验：用新华1号滤纸作为支持体，用生理盐水作展开剂，鉴定测得标记物的放化纯度均大于95％。

生物活性

1)荷肉瘤S₁₈₀小鼠体内γ显像和体内分布实验

荷肉瘤S₁₈₀小鼠体内γ显像：按上述方法制备的不同配合物溶液作为尾静脉注射液。每只荷肉瘤S₁₈₀小鼠尾静脉注射100μL标记液(0.56-0.74MBq)，昆明鼠体重为20-24g，分别在注射后不同时间利用GE MPRγcamera进行全身显像。

体内分布：荷肉瘤S₁₈₀小鼠尾静脉注射不同配合物溶液的标记液后不同时间断颈处死，取血液和脏器进行放射性测量，血液的重量以体重的7％计，分别计算各组织的摄取率(ID/％·g^-1)以及T与NT的比。

2)生物活性

2-N-三苯甲基硫代乙酰三甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAG₃-ADE)和2-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨酸二甘氨酰基腺嘌呤(Tr-MAVG₂Ade)两种^99mTc标记目标物在小鼠器官、血液及其肿瘤S180的分布实验显示，在肿瘤中有较好的吸收；在小鼠的肿瘤和肌肉剂和血液中的分布比显示与^99mTc-ECDG相近。

Claims

1.具有式(1)结构的化合物是标记⁹⁹Tc^m和¹⁸⁶Re的关键配体部分[是能够全面确定结构，且是与结构式(2)[标记物结构式(2)因放射性不稳定难以通过谱图测定]紧密相连的重要部分。

其中R¹、R²、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

2.权利要求(1)的化合物

R²为H时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

R²为CH₃时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

R²为CH₂CH₃时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

R²为CH₂CH₂CH₃时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

R²为丁基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

R²为苯基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

R²为苄基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，R⁴为H、Tr，n为0、1、2、……20。

3.权利要求具有结构(2)的化合物，是由结构(1)的化合物经与⁹⁹Tc^m或¹⁸⁶Re标记而得到的不稳定、难以通过波谱等确定其结构的标记物，它们具有优良肿瘤显像和乏氧显像能力。

其中R¹、R²、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

4.权利要求(2)的化合物

R²为H时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为CH₃时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为CH₂CH₃时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为CH₂CH₂CH₃时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为异丙基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为丁基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为苯基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

R²为苄基时，R¹、R³为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、苯基、苄基，n为0、1、2、……20，M＝⁹⁹Tc^m、¹⁸⁶Re。

5.权利要求(2)的化合物M＝⁹⁹Tc^m标记物作为肿瘤显像剂和乏氧显像剂；M＝¹⁸⁶Re标记物作为肿瘤治疗剂。