CN1778807A - 胡黄连苷ii单体的制备方法及其治疗乙型肝炎的药物剂型 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药新药研究开发领域，具体而言，涉及一种治疗乙型肝炎的单体化合物胡黄连苷Ⅱ的制备方法，并提供胡黄连苷Ⅱ用于治疗乙型肝炎的药物剂型。本发明提供的胡黄连苷Ⅱ的制备方法成本低廉、操作简便、极有利于工业化大生产。

Description

胡黄连苷II单体的制备方法及其治疗乙型肝炎的药物剂型

发明领域

本发明属于中药新药研究开发领域，具体而言，涉及一种治疗乙型肝炎的单体化合物胡黄连苷II的制备方法，并提供胡黄连苷II用于治疗乙型肝炎的药物剂型。

背景技术

胡黄连是玄参科植物胡黄连Picrorhiza scrophulariifloraPennell干燥根茎，是多年生草本植物，生长于高寒地区的岩石上及土堆中，或者浅土层的向阳处，分布于四川西部，云南西北部、西藏南部。据文献记载，胡黄连中含有环烯醚萜苷类、葫芦素类、酚苷类，另外还含有少量的芳香酸和D-甘露醇，其中胡黄连苷II(Picroside II，Amphicoside)是属于环烯醚萜苷类化合物。

胡黄连苷II具有多种医疗用途，包括可用于治疗、预防过敏性炎性疾病，可用于治疗乙型肝炎疾病，对神经细胞有保护作用等。

关于胡黄连苷II的制备方法也有报道。1971年S.K.Kapoor等首次从植物Amphicome emodi Lindl中分离得到胡黄连苷II，以后相继从印度胡黄连(Picrorhiza kukrroa Royle ex Benth)的根茎和西藏胡黄连(Picrorhiza scrophulariifolra Pennell)的根茎中分离得到胡黄连苷II。所用的方法有醋酸铅沉淀法、硅胶柱层析法和反相硅胶柱层析法等。

发明内容

本发明人经过多年不懈努力，终于研制出治疗乙型肝炎的纯中药药物，该药物的主要成分是从胡黄连中提取的有效单体成分胡黄连苷II。胡黄连苷II药理作用清楚，具有明显的抑制乙型肝炎病毒复制、保肝、调节免疫功能的效果，且该药物毒副作用极低，可长期服用，使用安全性较高，克服了西药毒副作用较强，易产生耐药性等缺点，充分体现了中药的优势。该药物所治疾病乙型肝炎是我国常见病，多发病，其病程长，反复难愈易传染，需长期服药。其研究成果必将为胡黄连及其制剂走向国际市场提供重要的科学理论依据。对胡黄连苷II化合物的研制开发为我国众多的乙型肝炎疾病患者提供了新型高效低毒的治疗乙肝中药，其意义重大，市场前景非常广阔。

本发明的目的在于提供一种能治疗乙型肝炎的单体化合物胡黄连苷II的制备方法。

本发明的另一个目的在于提供该乙型肝炎治疗药物的制剂及其相应的药物剂型，其中以胡黄连苷II为主要活性成分，含量在90％以上。

本发明的特点在于提供了一种成本低廉、操作简便、极有利于工业化大生产的胡黄连苷II的制备方法。

胡黄连苷II是一种植物成分，主要存在于玄参科植物胡黄连属植物中，其化学结构式如下：

分子式：C₂₃H₂₈O₁₃

分子量：512

熔  点：214℃-215℃

溶解性：水、甲醇、乙醇易溶，丙酮溶解，乙酸乙酯稍溶。

胡黄连苷II具体制备方法：取胡黄连药材的根茎，粉碎后用乙醇浸泡，用50％-70％乙醇提取，提取液低温减压浓缩成浸膏A后，加水至合适的体积，除沉淀，滤液上树脂柱吸附，水除杂后用10％-30％乙醇洗脱，洗脱液低温减压浓缩成浸膏B后备用。将上述浸膏B用无水乙醇溶解后，除沉淀，滤液中拌入硅胶，水浴挥干溶剂，干法上硅胶柱吸附，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液低温减压浓缩成浸膏C，干燥粉碎成细粉即得胡黄连苷II，其含量在90％以上。

其中：

1.药材粉碎粒度可以是10-30目；

2.上述从原药材到得到浸膏A的提取过程中采用方法可以是回流、渗漉或其它可行的操作方法；

3.上述所用的树脂柱可以是非极性或弱极性的树脂，如苯乙烯型或者丙烯腈型树脂，树脂型号可为D101型。

4.上述所述的方法中所提到的低温减压是指温度在40℃-60℃范围，压力在0.05Mpa-0.15Mpa范围；

5.树脂柱中样品洗脱速度为0.8-1.6L/kg·h，其中1.2L/kg·h的洗脱速度较好，得到的胡黄连苷II含量较高，转移率较高。

6.上述所述的干法上硅胶柱中，所用的硅胶重量为药材重量的0.25倍-4倍；

7.上述所述的浸膏B粉碎成细粉的粒度在80-100目之间。

本发明得到的胡黄连苷II样品，含量在90％以上，可以在制备治疗肝炎药物中的应用。经动物实验结果证明，该药物具有明显的抑制乙型肝炎病毒复制、保护肝功、调节免疫系统等功效。

为保证化合物的纯度，在制备过程中需要对最终提取物中的有效成分含量随时进行检测。用于检测所述该苷类化合物的方法可以借助任何可行的检测手段和公知的方法，本发明在此提出了一套可行的鉴别检测方法。具体如下：

[名称]  胡黄连苷II

[制法]  同前所述

[性状]  本品为白色粉末，气微，味极苦。

[鉴别]  (1)取本品粉末20mg，加甲醇10mL，超声处理使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。取胡黄连对照药材1g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇40mL，密塞，超声提取30分钟，滤过，滤液置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照药材溶液。取胡黄连苷II对照品，分别加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10μL，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以水饱和乙酸乙酯(7∶3∶5)为展开剂，展于，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)分别吸取[含量测定]项下的供试品溶液与胡黄连苷II对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，供试品应呈现与对照品保留时间相同的。

(3)仪器

   JASCO      1580型       高效液相色谱仪

   岛津       UV-2501PC    紫外/可见分光光度仪

   METTLER    AE100        电子分析天平

   SARTARIUS  BP211D       电子分析天平

(4)试剂：

   甲醇       分析纯       北京化工厂

   36％乙醇   分析纯       北京化工厂

(5)对照品纯度检查  由发明者提供胡黄连苷II对照品，经高效液相色谱仪(归一化法)测定纯度为99.60％。

(6)方法与结果

①色谱分析条件：

固定相：十八烷基硅烷键合硅胶柱  250mm×4.6mm  5μm

流动相：甲醇-水-36％乙酸(40∶60∶1)

流速：1mL/min

柱温：室温

进样量：10μL

检测波长：265nm

②系统适用性试验：根据上述仪器条件得到胡黄连苷II对照品、样品色谱图，其理论板数n大于1500。样品中胡黄连苷II峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5，阴性无干扰。

②测定波长的选择：经紫外扫描，胡黄连苷II在265nm波长处为其最大吸收，杂质干扰少，故选定265nm为检测波长，阴性无干扰。

③线性关系的考察：精密称取胡黄连苷II对照品11.90mg，置10mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL，分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别精密吸取10μL，注入液相色谱仪，近上述色谱条件测定。以峰面积为纵坐标，胡黄连苷II量(ug)为横坐标作图，绘制标准曲线。

       回归方程Y＝1301847.27X-71228.10r＝0.9999

       胡黄连苷II在0.472～2.380ug范围内线性良好。

本发明研究出了治疗乙型肝炎的纯中药药物制剂，该中药药物以胡黄连苷II为有效活性成分，并包括了药剂学上可接受的辅料组分。

本发明的药物制剂包括口服制剂和注射剂，其中口服剂包括片剂、胶囊剂、口服液、软胶囊、颗粒剂、滴丸等，注射剂包括注射液和冻干粉针等。在制备口服制剂时，选用的辅型剂可以是淀粉、糊精或环糊精、蔗糖、硬脂酸盐等常规充填剂，注射剂制剂选用的辅型剂也为常规用注射剂赋形剂。制剂后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。

本发明的优选剂型为片剂和注射用冻干粉针剂。这两种剂型在治疗乙型肝炎包括急慢性乙型肝炎均有较好的治疗效果。

具体实施方式

用以下的实施例对本发明作进一步阐述，包括治疗乙型肝炎的胡黄连苷II的制备方法及其相应的药物制剂的制备方法，但本发明并不限于下列

实施例包含的内容。

[实施例1]胡黄连苷II的优选制备方法

取胡黄连(Picrorhiza scrophulariifolra Pennell)药材500g，粉碎成过10目筛的药粉。用10倍体积的70％乙醇渗漉提取，得渗漉液5000mL，减压浓缩至60℃时相对密度为1.18～1.20的浓缩液500mL，加2倍药材重量的去离子水溶解，滤过，滤液通过D-101大孔吸附树脂柱(柱直径∶柱高＝1∶10，树脂用量为药材重量的4.5倍)，待药液完全流入树脂后，用18倍药材重量的去离子水洗脱未吸附的杂质，再用30倍药材重量的15％乙醇洗脱苷II收集洗脱液，洗脱速度为1.2L/kg·h，减压浓缩收集的洗脱液干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，再用1.67倍药材重量的无水乙醇将药粉溶解，滤过，滤液拌入0.25倍药材重量的硅胶，水浴(60℃)挥干溶剂，均匀装入硅胶柱顶端(柱直径∶柱高＝1∶10，硅胶用量为药材重量的2倍)，用30倍药材重量的醋酸乙酯以3L/kg·h的速度洗脱，收集流出液，减压干燥(60℃，-0.09Mpa)，粉碎得胡黄连苷II，含量为96.52％。

[实施例2]胡黄连苷II的优选制备方法

取胡黄连(Picrorhiza scrophulariifolra Pennell)药材3000g，药材中胡黄连苷II含量为6.46％，将其粉碎成过30目筛的药粉。用10倍体积的50％乙醇渗漉提取，减压浓缩至60℃时相对密度为1.18～1.20的浓缩液，加2倍药材重量的去离子水溶解，滤过，滤液通过D-101大孔吸附树脂柱(柱直径∶柱高＝1∶10，树脂用量为药材重量的4.5倍)，待药液完全流入树脂后，用18倍药材重量的去离子水洗脱未吸附的杂质，再用30倍药材重量的20％乙醇洗脱苷II收集洗脱液，洗脱速度为1.6L/kg·h，减压浓缩收集的洗脱液干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，再用1.67倍药材重量的无水乙醇将药粉溶解，滤过，滤液拌入0.4倍药材重量的硅胶，水浴(60℃)挥干溶剂，均匀装入硅胶柱顶端(柱直径∶柱高＝1∶10，硅胶用量为药材重量的2倍)，用30倍药材重量的醋酸乙酯以3L/kg·h的速度洗脱，收集流出液，减压干燥(60℃，-0.09Mpa)，粉碎得胡黄连苷II样品，重量为107.91g，其中胡黄连苷II含量为97.34％，胡黄连苷II的收率为54.20％。

[实施例3]胡黄连苷II片剂即胡苷片的优选制备方法

处方：共制成1000片，各组分及含量如下：

黄连苷II          30g

淀粉              180g

微晶纤维素        60g

乳糖              30g

硬脂酸镁          1.5g

制法：取胡黄连苷II样品，其中胡黄连苷II含量超过90％，将其粉碎过80目筛，与淀粉、微晶纤维素、乳糖等混合均匀，用8％淀粉浆制软材，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，质检，包装，即得。

[实施例4]注射用胡黄连苷II粉针剂的优选制备方法

处方：共制成1000支，胡黄连苷II为60.0g。

制法：取胡黄连苷II样品60.0g，其中胡黄连苷II含量超过90％，加入注射用水约2800mL，65℃水浴使溶解，加入总配制量2.0‰活性炭(6.0g)，搅拌半小时，过滤，于滤器上加水至3000mL，继以0.45μm、0.22μm微孔滤膜分级过滤，滤液以每瓶3mL定量分装于10mL西林瓶中，冷冻干燥，回充高纯度氮气，加塞，轧盖，包装，即得。

Claims (12)

1.一种治疗乙型肝炎的有效单体胡黄连苷II，其特征在于可通过下列制备方法得到：

(1)胡黄连药材的根茎粉碎后用50％-70％乙醇提取，提取液低温减压浓缩成浸膏A后，加水至合适的体积，除沉淀，滤液上树脂柱吸附，用10％-30％乙醇洗脱，洗脱液低温减压浓缩成浸膏B后备用；

(2)将上述浸膏B用无水乙醇溶解后，除沉淀，滤液中拌入硅胶，水浴挥干溶剂，干法上硅胶柱吸附，用乙酸乙酯洗脱，洗脱液低温减压浓缩成浸膏C，干燥粉碎成细粉即得胡黄连苷II。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于得到的胡黄连苷II单体含量在90％以上。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于得到浸膏A的提取方法为回流提取法或渗漉提取法。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于提取方法为渗漉提取法。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所用的树脂可以是非极性或弱极性树脂，可以为苯乙烯型或者丙烯腈型树脂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所用的树脂为D-101型大孔树脂。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于树脂的洗脱速度为0.8-1.6L/kg·h。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于树脂的洗脱速度为1.2L/kg·h。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的干法上硅胶柱中，所用的硅胶重量为药材重量的0.25倍-4倍。

10.一种治疗乙型肝炎的纯中药药物制剂，主要成分为采用上述制备方法制得的胡黄连苷II，其特征在于胡黄连苷II可以和药用辅料组合成口服制剂和注射剂。

11.根据权利要求10所述的药物制剂，其特征在于口服制剂为片剂、胶囊、口服液、颗粒、软胶囊、滴丸。

12.根据权利要求10所述的药物制剂，其特征在于注射剂为注射液剂型和注射用冻干粉针剂型。