CN104592325A - 一种水重结晶胡黄连苷ⅱ后母液中胡黄连苷ⅱ的回收方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种水重结晶胡黄连苷Ⅱ后母液中的胡黄连苷Ⅱ回收方法，以胡黄连苷Ⅱ水重结晶后的母液为原料，湿法上样于大孔吸附树脂柱，先后用水、低浓度乙醇溶液、高浓度乙醇溶液为流动相进行洗脱。收集并回收胡黄连苷Ⅱ集中部分，转为适当体积水溶液，进行结晶纯化。

Description

一种水重结晶胡黄连苷Ⅱ后母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法

技术领域

本发明涉及一种水重结晶胡黄连苷Ⅱ后母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法。

背景技术

胡黄连为我国的传统中药，具有退虚热，除疮热，清湿热的功效，用于骨蒸潮热，小儿疮热，湿热泻痢，黄疽尿赤，痔疮肿痛等。药材中化学成分主要有环烯醚萜苷类、葫芦素类、苯乙醇糖苷类和酚苷类。胡黄连苷Ⅱ（picrosideⅡ）是环烯醚萜苷类中的主要有效成分。据报道，胡黄连苷Ⅱ具有保肝利胆、抗炎平喘、保护神经、免疫调节等药理作用。

关于胡黄连苷Ⅱ的纯化方法已有研究人员申报专利,其中技术水平最好的是：一种胡黄连苷Ⅱ结晶的工艺（申请号：2014101264011）,在专利中对胡黄连苷Ⅱ进行重结晶的工艺已详细介绍，然而在整个分离、纯化过程中对其母液的回收利用未提到（其结晶前溶液浓度为10%，结晶后母液含苷Ⅱ量为1%左右），若其工艺直接应用于工业生产，将造成胡黄连苷Ⅱ大量损失。不仅造成资源浪费、环境污染，而且也使得胡黄连苷Ⅱ的单位生产成本提高。本发明即由此入手，旨在分离回收多次结晶母液中含量较低、但总量很大的胡黄连苷Ⅱ，此方法应用于工业生产，将减少胡黄连苷Ⅱ的损失，提高胡黄连苷Ⅱ产量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种胡黄连苷Ⅱ的再回收方法，此方法可用于充分分离纯化多次水重结晶母液中未被结晶出来的胡黄连苷Ⅱ。尤其适合工业化水重结晶胡黄连苷Ⅱ母液的处理。

本发明以胡黄连苷Ⅱ重结晶后的母液为原料，本发明中的胡黄连苷Ⅱ重结晶母液为已申请专利（申请号：2014101264011，一种胡黄连苷Ⅱ结晶工艺）中介绍的重结晶方式所得到的母液。

本发明的一种胡黄连苷Ⅱ结晶母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法具体实施步骤为：

1、以多次胡黄连苷Ⅱ水重结晶母液为原料，加热浓缩其体积至原体积1/4后，湿法上样于大孔吸附树脂柱（大孔吸附树脂柱为：取8公斤大孔树脂装柱，其柱床为8500mL），将液面降至柱床面，静置30分钟。此操作目的是使待分离物质充分吸附到大孔树脂上。

2、以水为流动相进行洗脱，洗脱量为3个柱床后，将流动相的液面降至大孔吸附树脂柱的柱床面，洗脱过程中所接收的洗脱液弃去。此操作目的是洗脱下大孔吸附树脂中所吸附的水溶性杂质。

3、将流动相改为低浓度的乙醇溶液进行洗脱，其中低浓度乙醇溶液浓度范围为15%~35%，洗脱过程中收集的第一个柱床液（被低浓度乙醇液置换下来的水）弃去，第二个柱床开始由高效液相色谱进行跟踪检测，测试显示对应的收集液中为杂质的，将其收集液弃去。在检测过程中随时比较连续收集液的对应图谱，若杂质量开始明显减少时，停止加流动相，并将流动相的液面降至大孔吸附树脂柱的柱床面。此操作目的是洗脱极性大的脂溶性杂质。

4、将流动相改为高浓度的乙醇溶液进行洗脱，其中高浓度乙醇液浓度范围为75%~95%，洗脱过程中由高效液相色谱进行跟踪检测，当测试显示对应的收集液中出现胡黄连苷Ⅱ且极性大的脂溶性杂质极少时开始回收收集液。待测试显示胡黄连苷Ⅱ含量开始大量减少时，停止加高浓度乙醇溶液，并将流动相的液面降至大孔吸附树脂柱的柱床面。此操作目的是将吸附在大孔树脂上的胡黄连苷Ⅱ洗脱下来。

5、将流动相改为水进行洗脱，此时开始收集并回收一个柱床的洗脱液，此后洗脱液弃去，并用水连续洗脱3个柱床。此操作目的为将吸附在大孔吸附树脂上乙醇完全洗脱掉，以便下次使用。

6、最后混合含有苷Ⅱ的洗脱液，浓缩至适当体积使苷Ⅱ浓度为10%，再进行重结晶操作。

其中湿法上样的原料中胡黄连苷Ⅱ与杂质的总量控制在在80g~120g。分段收集为850mL/瓶，分段收集10瓶为一个柱床。

本发明含量测定用HPLC检测方法为:

标准样品液的配制：

精密称取5mg胡黄连苷Ⅱ对照品置于25m1的容量瓶中，加水，超声溶解稀释至刻度，作为标准样品液，浓度为0. 2mg/ml 。

测试样品液的配制：

精密称取胡黄连苷Ⅱ样品置于25m1的容量瓶中，加水，超声溶解稀释至刻度，作为测试样品液，浓度为0. 2mg/ml 。

检测条件:

流动相:乙腈—水—冰醋酸（25:75:0.5）经混合，过滤，脱气后使用;色谱柱:ODS-C18柱4. 6×250mm，流速:0.8ml/min，进样体积:20ul，检测波长:265nm，胡黄连苷Ⅱ保留时间:为7-8min。

具体实施方式

以下实施例对本发明做具体说明，但本发明保护范围并不限于下列实施例包含的内容。

收集以水为溶剂重结晶胡黄连苷Ⅱ后的母液36000mL，浓缩至9000mL即得原料。测定原料中含有胡黄连苷Ⅱ为180g，纯度为34%，原料呈黑色、粘稠状液体。将原料混匀平均分为9份，分次湿法上样于大孔吸附树脂柱，按发明内容中所述操作进行洗脱。分别收集各次的液体，回收浓缩体积均为250mL。最后进行重结晶。

低浓度乙醇溶液的浓度分别取15%、25%、35%三个不同的量，高浓度乙醇溶液的浓度分别取70%、80%、90%三个不同的量，所得结果见表一：

表1. 大孔树脂柱层析时不同浓度乙醇洗脱液与洗脱物中苷Ⅱ纯度的对应关系

实验次数	洗脱杂质所用乙醇溶液的浓度	洗脱胡黄连苷Ⅱ所用乙醇溶液的浓度	回收浓缩所得物中胡黄连苷Ⅱ的纯度	是否可以结晶
					1	15%	70%	54%	否
2	15%	80%	65%	否
					3	15%	90%	65%	否
4	25%	70%	70%	否
					5	25%	80%	78%	是
6	25%	90%	79%	是
					7	35%	70%	72%	否
8	35%	80%	90%	是
					9	35%	90%	89%	是

由表1可知：洗脱杂质时所用的低浓度乙醇溶液的浓度范围是15%~35%，洗脱胡黄连苷Ⅱ时所用的高浓度乙醇溶液的浓度范围是75%~95%。

Claims (5)

1.胡黄连苷Ⅱ在进行以水为溶剂重结晶后母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法，其特征在于，以水为溶剂重结晶胡黄连苷Ⅱ后的母液为原料，湿法上样于大孔吸附树脂柱，先用水和低浓度乙醇溶液洗脱杂质，后用高浓度乙醇溶液洗脱胡黄连苷Ⅱ，收集胡黄连苷Ⅱ集中部分，减压回收并浓缩至适当体积。

2.按照权利要求1所述的胡黄连苷Ⅱ重结晶母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法，其特征在于，其中母液浓度低于1%，胡黄连苷Ⅱ的纯度低于50%、母液呈棕黑色、粘稠状（挂壁严重）不能进行结晶析出。

3.按照权利要求1所述的胡黄连苷Ⅱ重结晶母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法，其特征在于，其中的大孔吸附树脂为苯乙烯型或聚苯乙烯—丙烯酸酯型。

4.按照权利要求1所述的胡黄连苷Ⅱ重结晶母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法，其特征在于，其中洗脱杂质所需要的乙醇溶液浓度范围是15%~35%，洗脱胡黄连苷Ⅱ所需要的乙醇溶液浓度范围是75%~95%。

5.按照权利要求1所述的胡黄连苷Ⅱ重结晶母液中胡黄连苷Ⅱ的回收方法，其特征在于，所得回收物胡黄连苷Ⅱ的纯度在75%以上、回收溶液浅棕色、粘性低（无挂壁），能够析出胡黄连苷Ⅱ结晶。