CN101396384B

CN101396384B - 一种积雪草提取物及其制备方法

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Publication number: CN101396384B
Application number: CN2007100612173A
Authority: CN
Inventors: 刘顺航; 闫立萍; 马素珍; 王平; 刘岩; 周福军
Original assignee: TIANJIN TASLY MODERN CHINESE MEDICINE RESOURCE CO Ltd
Current assignee: TIANJIN TASLY MODERN CHINESE MEDICINE RESOURCE CO Ltd
Priority date: 2007-09-28
Filing date: 2007-09-28
Publication date: 2012-11-21
Anticipated expiration: 2027-09-28
Also published as: CN101396384A

Abstract

本发明公开了一种积雪草提取物以及提取物制备方法，取积雪草药材粗粉，用含水乙醇回流提取，滤过，脱色，浓缩得浸膏；浸膏加水溶解，得药液；药液上树脂柱，用含水乙醇依次梯度洗脱，分别收集不同浓度洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得提取物。该方法操作简单，成本低，提取物含量稳定，适合工业化生产。

Description

一种积雪草提取物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药提取物，具体涉及一种积雪草的提取物及其制备方法。

背景技术

积雪草Centella asiatica(L.)Urb.(Hydrocotyle asiatica L.)，伞形科植物，别名大叶金钱草、崩大碗、缺碗草、马蹄草、雷公根、蛐壳草、铜钱草、落得打、十八缺。全草入药，具有清热利湿，解毒消肿之功效。用于湿热黄疸，中暑腹泻，砂淋血淋，痈肿疮毒，跌扑损伤。积雪草的化学成分主要以三萜类为主，如积雪草苷，羟基积雪草苷、波热模苷、波热米苷、参枯尼苷、异参枯尼苷等五环三萜型酯苷。积雪草中还含有一些三萜酸类，如积雪草酸、羟基积雪草酸、波热米酸、马达积雪草酸等。此外积雪草中还含有维拉林果胶、维生素C、中肌醇及积雪草糖、挥发油等。积雪草记载多种医学古书中，如《本经》中“主大热，恶疮，痈疽，浸淫，赤熛，皮肤赤，身热”。《药性论》：“治瘰疬鼠漏，寒热时节来往”。《唐本草》：“捣敷热肿丹毒”等。

药理和临床试验证明，积雪草总苷是积雪草的主要活性成分，其包括积雪草苷、羟基积雪草苷两部分。

主要药理作用：

(1)抗菌：体外抗菌试验表明，积雪草对金黄色葡萄菌、溶血型链球菌、各种痢疾杆菌、伤寒杆菌均有抑制作用。

(2)抗溃疡：治疗胃溃疡。

(3)对皮肤组织作用：能够有效激活上皮细胞，促进正常肉芽组织形成，促进表皮角质化或表皮再生，用于治疗各种皮肤溃疡，如顽固性创伤、皮肤结核、麻风等，同时通过抑制成纤维细胞增值和胶原蛋白的合成，抑制瘢痕形成。

(4)对中枢作用：抑制中枢神经系统，改善记忆和抗疲劳作用，就有镇静、解痉、安定的作用，此作用主要是对中枢神经系统中的胆碱能系统的影响，可用于抑郁症的治疗。

积雪草具有多种功效，必将产生良好的社会效益和经济效益。因此，国内外对积雪草的研究越来越多，也越来越深入。

目前，国内外对积雪草提取工艺方法大概分以下几种

(1)溶剂法：用水或乙醇等极性溶剂作热提取。此方法提取物成分比较复杂，水溶性杂质多糖，胶质成分多，提取物中积雪草总苷含量低，同时溶剂消耗大，不适于大生产。

(2)柱层析法：常采用的有聚酰胺、硅胶、氧化铝、葡萄糖凝胶、大孔树脂柱层析法。将溶剂法或沉淀法获得物，以上填充剂吸附，后以溶剂系统洗脱，浓缩干燥后获得积雪草总苷。以单一浓度的溶剂洗脱，提取不完全，有效组分仍然吸附在树脂柱上，重新回收再利用比较困难，造成树脂柱的浪费，成本提高。同时洗脱不完全，造成提取物有效成分含量不稳定，质量难以控制。

(3)制备型高效液相色谱法：将柱层析获得的粗品通过制备高效液相色谱仪以制备某一有效单体。积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷性质相似，同时作为药物的有效组成，不需要将其进行分离。也不适合工业大生产。

发明内容

为了克服上述问题，本发明的目的是提供一种积雪草的提取物。

本发明另一个目的是提供了一种工艺简单、质量稳定，收率高、成本低，污染小的，合适工业化生产的积雪草提取物制备方法。

本发明还有一个目的是提供了含有提取物的制剂。

本发明是这样实现的：

本发明的一种积雪草提取物，是由以下步骤制备得到的：

步骤1：取积雪草药材粗粉，用含水低级醇提取，滤过，脱色，浓缩得浸膏；

步骤2：浸膏加水溶解，得药液；

步骤3：药液上树脂柱，用含水低级醇作为流动相依次梯度洗脱，分别收集相应浓度洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得提取物。

步骤1中所述的提取方法包括但不限于水浸提、水煎提、醇浸提、醇回流提取、醇渗漉等。所述的浓缩方法包括但不限于常压浓缩、减压浓缩、反渗透浓缩等。

所述的脱色步骤包括但不限于活性炭脱色、脱色树脂等，可以是在流动相洗脱步骤前，也可以在洗脱后进行脱色。

所述的树脂柱型号包括但不限于AB-8柱、D101柱、D201柱、D301柱、HPD100柱、HPD300柱、HPD600柱、NKA-9柱、DA201型、D-型、SIP系列、X-5型、GDX104型、LD605型、LD601型、CAD-40型、DM-130型、R-A型、CHA-111型、WLD型(混合型)、H107型等。

本发明的步骤(3)中还可以用聚酰胺柱、硅胶柱、氧化铝等进行吸附。

所述的低级醇指C₁～C₃含水醇溶液，包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇，优选乙醇。

所述的低级醇的浓度为10～95％，优选30～75％乙醇，最佳60％乙醇。

所述的步骤(3)中含水低级醇浓度依次增加。

所述的步骤(3)中还可以先用水或含水低级醇冲洗树脂柱，然后再用含水低级醇作为流动相冲洗树脂柱，收集洗脱液，浓缩干燥得提取物。

进一步，将药液上树脂柱，用10～20％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用20～30％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥即得本发明的提取物a。

上述步骤中还可以先用水冲洗，具体为：将药液上树脂柱，先用水洗脱，洗脱液弃去，再用10～20％的乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用20～30％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥即得本发明的提取物a。

再进一步，残留在树脂柱上的药渣再用30～40％的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩干燥即得本发明的提取物b。

更进一步，将上述经过30～40％乙醇洗脱后残留在树脂柱上的药渣，用40～50％乙醇再洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥即得本发明的提取物c。

所述的残留在树脂柱上的药渣还可以继续用更高浓度的乙醇进行洗脱，直到将树脂柱上的有效成分完全洗脱下来。凡利用本发明的梯度洗脱而得的提取物，都在本发明的保护范围内。

本发明中的积雪草提取物粉末中积雪草总苷包括积雪草苷和羟基积雪草苷。上述优选的积雪草提取物a、b、c中任意一种中积雪草总苷含量均不低于20％。

提取物a中积雪草总苷含量不低于30％，最优选为30～50％；提取物b中积雪草总苷含量不低于45％，最优选45～60％；提取物c中积雪草总苷含量不低于20％，最优选20～40％。

本发明的积雪草提取物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：取积雪草药材粗粉，用含水乙醇回流提取，滤过，脱色，浓缩得浸膏；

步骤2：浸膏加水溶解，得药液；

步骤3：药液上树脂柱，用含水乙醇依次梯度洗脱，分别收集相应浓度洗脱液，洗脱液浓缩干燥即得提取物。

本发明优选的积雪草提取物的制备方法，包括下列步骤：

(1)取积雪草粗粉，用6～12倍量，10～95％乙醇回流提取1～3次，每次1～3小时，合并滤液，滤液加0.05～0.5％的活性炭回流30～60分钟脱色，减压回收得稠浸膏；

(2)稠浸膏加水调至2∶1～5∶1的药液，过滤，得滤液；

(3)滤液上树脂柱，然后分别依次用2～8倍量的10～90％乙醇洗脱，分别收集相应的洗脱液；洗脱液浓缩干燥得提取物粉末。

本发明最优选的积雪草提取物的制备方法，包括下列步骤：

(1)取积雪草药材粉碎成粗粉，用60％乙醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％乙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏；

(2)稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，得滤液；

(3)滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％乙醇、30％乙醇洗脱，6倍柱体积的40％乙醇洗脱，4倍柱体积50％乙醇洗脱，分别收集30％、40％、50％乙醇洗脱部分，将相应的三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末。

本发明还提供了用本发明的提取物作为药物活性制备而成的药物组合物，可以选用本发明的提取物粉末a、b、c中一种或一种以上作为药物活性成分。本发明的药物组合物，包括提取物和根据需要该组合物还可以加入药物可接受的载体，还可以包括其他活性成分。

本发明的组合物，是单位剂量的药物制剂形式。所述的单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂的每袋等。

本发明的组合物，其中的提取物作为有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1～99.9％，其余为药物可接受的载体，按照制剂常规方法制备。

本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何口服制剂或注射剂。其中口服制剂包括但不限于：片剂，糖衣片剂，薄膜衣片剂，肠溶衣片剂，胶囊剂，硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含片、口崩片、颗粒剂。冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、滴丸剂，微丸剂、栓剂、霜剂、喷雾剂等；注射剂包括但不限于：静脉注射剂，粉针剂、皮下注射剂等。

本发明的组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的有益效果

1、本发明采用依次梯度洗脱，能够完全将有效组分洗脱下来，收率高，提取物含量稳定，产品质量可控。

2、现有技术中，都是用树脂柱提取一次，提取率不高，植物的有效组分并没有完全提取完全，残渣被弃去，应用到工业化生产中需要药材较多，破坏植物自然环境。采用本发明的制备方法，提取率高，避免能源上的浪费。

3、本发明的不同浓度乙醇提取物粉末，即用同一方法制备出不同含量的提取物，根据制剂的工艺要求可单独使用也可以合并使用，降低了成本，更有利于工业化生产。

4、本发明的不同极性溶剂对树脂柱多次洗脱，杂质污染少，树脂易于恢复回收，重复利用，降低成本，有利于环保。

5、本发明中避免大量如石油醚，乙酸乙酯，正己烷等有机溶剂的使用，减少环境污染，减少了化学溶剂对工作人员的身心的侵害。本发明中仅仅是使用了水和不同浓度的乙醇，将毒性和危害性降到最低，同时生产成本低，适合大规模的工业化生产。

6、本发明的制备方法，制备步骤简单，可操作性好，容易掌握，重现性好。

实验例

积雪草总苷含量测定方法

实施例一制备的积雪草提取物进行含量测定

色谱条件与系统适用性试验：

色谱柱迪马-C18柱(4.6mm×200mm，5μm)；流动相：乙腈∶水为流动相进行梯度洗脱；检测波长为205nm，柱温30℃。

表1 流动相梯度洗脱

对照品溶液的制备精密称取积雪草苷对照品适量，加甲醇制成每1mL中约含200μg对照品的溶液，精密称取羟基积雪草苷对照品适量，加甲醇制成每1mL中约含300μg对照品的溶液即得。

供试品溶液的制备取三批积雪草提取物各50mg，精密称定，置50mL容量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，定容，滤过，即得。

测定法分别取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定，即得。

结果见表2

表2 积雪草提取物中积雪草总苷含量

具体实施例

实施例1 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用60％乙醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％乙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％乙醇、30％乙醇洗脱，6倍柱体积的40％乙醇洗脱，4倍柱体积50％乙醇洗脱，分别收集30％、40％、50％乙醇洗脱部分，将三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末a、b、c。提取物a、b、c中积雪草总苷的含量分别为50％、55％、30％。

实施例2 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用10％乙醇提取回流两次，每次3小时，第一次10％乙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流20分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至2∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％乙醇、30％乙醇洗脱，6倍柱体积的40％乙醇洗脱，4倍柱体积50％乙醇洗脱，分别收集30％、40％、50％乙醇洗脱部分，将三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末a、b、c。1提取物a、b、c中积雪草总苷的含量分别为41％、57％、22％。

实施例3 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用95％乙醇提取回流1次，每次3小时，第一次95％乙醇用量为药材的6倍，第二次为12倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流40分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、10％乙醇、20％、30％乙醇洗脱，6倍柱体积的40％乙醇洗脱，4倍柱体积50％乙醇洗脱、2倍量90％乙醇洗脱，分别收集10％、20％、30％、40％、50％、90％乙醇洗脱部分，将五部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末。相应浓度乙醇提取物中各含积雪草总苷分别为3％、5％、30％、45％、40％、2％。

实施例4 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用80％乙醇提取回流3次，每次1小时，第一次80％乙醇用量为药材的6倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流60分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至5∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％乙醇、30％乙醇洗脱，6倍柱体积的40％乙醇洗脱，8倍柱体积50％乙醇洗脱，4倍体积70％乙醇洗脱，分别收集30％、40％、50％、70％乙醇洗脱部分，将三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末。相应浓度乙醇提取物中各含积雪草总苷分别为30％、60％、25％、5％。

实施例5 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用60％乙醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％乙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，用4倍柱体积的水，弃去、用4倍体积的20％乙醇洗脱，弃去、再用4倍体积30％乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末，其中含积雪草总苷含量为40％。

实施例6 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用60％乙醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％乙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，别用4倍柱体积的水洗脱，弃去、4倍体积20％乙醇洗脱，弃去、4倍体积30％乙醇洗脱后，弃去，再用6倍柱体积的40％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物，其中含积雪草总苷含量为55％。

实施例7 提取物的制备方法

积雪草药材粉碎成粗粉，用60％乙醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％乙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收乙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％乙醇、30％乙醇洗脱，弃去；用6倍柱体积的40％乙醇洗脱，弃去；再用4倍柱体积50％乙醇洗脱，收集洗脱液并减压浓缩干燥得到提取物粉末，其中含积雪草总苷的20％。

实施例8 提取物的制剂

取实施例1的提取物，提取物粉末a40g，提取物粉末b40g，提取物粉末c10g，混合均匀后，加入1.5倍量糊精，0.5％蔗糖，1.5％的微晶纤维素，用适量乙醇溶解制成软材，制粒，60℃鼓风干燥，制粒，整粒，即得颗粒剂。

实施例9 提取物制剂

取实施例1的提取物，提取物粉末a50g，提取物粉末b30.9g，提取物粉末c15g，均匀混合后，加入5％交联聚维酮，0.1％的硬脂酸镁，50％的微晶纤维素，用适量乙醇溶液制成软材，制粒，60℃鼓风干燥，制粒，整粒，压制成片，即得口腔崩解片。

实施例10 提取物的制剂

取实施例5的提取物粉末100g，加入100mgPEG，混合均匀，熔融，上滴丸机，制成滴丸。

实施例11 提取物制剂

取实施例7的提取物粉末100g，加入100mgPEG，混合均匀，熔融，上滴丸机，制成滴丸。

实施例12 提取物制剂

取实施例6的提取物粉末或实施例5的提取物粉末0.5g，葡萄糖4.5g、硫代硫酸钠0.9g和蒸馏水1ml，上述组分混合均匀后，冷冻干燥，分装500支，即得。

实施例13 提取物的制备

积雪草药材粉碎成粗粉，用60％甲醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％甲醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收甲醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％甲醇、30％甲醇洗脱，6倍柱体积的40％甲醇洗脱，4倍柱体积50％甲醇洗脱，分别收集30％、40％、50％甲醇洗脱部分，将三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末a、b、c。

实施例14 提取物的制备

积雪草药材粉碎成粗粉，用60％丙醇提取回流两次，每次2小时，第一次60％丙醇用量为药材的10倍，第二次为8倍，滤过，合并滤液，加入0.2％的活性炭回流30分钟脱色，趁热过滤，减压浓缩回收丙醇至无醇味的稠浸膏，稠浸膏加水调至3∶1(体积与药材量)的药液，过滤，滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％丙醇、30％丙醇洗脱，6倍柱体积的40％丙醇洗脱，4倍柱体积50％丙醇洗脱，分别收集30％、40％、50％丙醇洗脱部分，将三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末a、b、c。

Claims

1.一种积雪草提取物的制备方法，包括下列步骤：

(2)稠浸膏加水调至体积与药材量3∶1的药液，过滤，得滤液；

(3)滤液上AB-8树脂吸附，分别用4倍柱体积的水、20％乙醇、30％乙醇洗脱，6倍柱体积的40％乙醇洗脱，4倍柱体积50％乙醇洗脱，分别收集30％、40％、50％乙醇洗脱部分，将相应的三部分洗脱液减压浓缩至比重为1.10-1.15，减压干燥得到提取物粉末a、b、c，提取物a、b、c中积雪草总苷的含量分别为50％、55％、30％。